JPH04230400A - Ｖｉｐ様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 - Google Patents
Ｖｉｐ様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途Info
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- JPH04230400A JPH04230400A JP2408425A JP40842590A JPH04230400A JP H04230400 A JPH04230400 A JP H04230400A JP 2408425 A JP2408425 A JP 2408425A JP 40842590 A JP40842590 A JP 40842590A JP H04230400 A JPH04230400 A JP H04230400A
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＶＩＰ様活性を有する
新規なポリペプチド誘導体及びその用途に係わる。本発
明物質は医薬品成分として殊に喘息及びインポテンツの
治療に用いることができる。
新規なポリペプチド誘導体及びその用途に係わる。本発
明物質は医薬品成分として殊に喘息及びインポテンツの
治療に用いることができる。
【０００２】
【従来技術】ＶＩＰ（Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ Ｉｎｔ
ｅｓｔｉｎａｌ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）は、Ｓａ
ｉｄ ＆ Ｍｕｔｔにより１９７０年にブタ十二指
腸よりセクレチンを精製抽出する段階の副分画から精製
された、２８個のアミノ酸からなるペプチドホルモンで
ある。１９７４年にアミノ酸の一次構造が明らかになり
、セクレチン、グルカゴン等と類似していることからグ
ルカゴン−セクレチンファミリ−に属するペプチドホル
モンであるとされるに至っている。ＶＩＰは消化管以外
に神経系にも広く存在が認められており、その生理作用
も多彩で、強い血管拡張・血圧降下作用、平滑筋弛緩作
用、腸液分泌促進、膵液・胆汁分泌促進、胃酸分泌抑制
、グリコ−ゲン分解、種々の下垂体ホルモン分泌促進や
生殖器の血流調節、気管支拡張作用等を有することが明
らかになっている。
ｅｓｔｉｎａｌ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）は、Ｓａ
ｉｄ ＆ Ｍｕｔｔにより１９７０年にブタ十二指
腸よりセクレチンを精製抽出する段階の副分画から精製
された、２８個のアミノ酸からなるペプチドホルモンで
ある。１９７４年にアミノ酸の一次構造が明らかになり
、セクレチン、グルカゴン等と類似していることからグ
ルカゴン−セクレチンファミリ−に属するペプチドホル
モンであるとされるに至っている。ＶＩＰは消化管以外
に神経系にも広く存在が認められており、その生理作用
も多彩で、強い血管拡張・血圧降下作用、平滑筋弛緩作
用、腸液分泌促進、膵液・胆汁分泌促進、胃酸分泌抑制
、グリコ−ゲン分解、種々の下垂体ホルモン分泌促進や
生殖器の血流調節、気管支拡張作用等を有することが明
らかになっている。
【０００３】これらの種々多様な薬理作用の中でも、Ｖ
ＩＰは気管支並びに海面体小柱の平滑筋弛緩作用を利用
して喘息やインポテンツの治療に用いる薬物として期待
されている。このＶＩＰの構造的な特徴として、Ｃ末端
がアミド化されておりこれが生理活性の発現に重要な役
割を果たしているとされてきた。このため大腸菌を用い
てポリペプチドを作製すると、Ｃ末端がアミド型のペプ
チドを作製するためには、発現したペプチドを精製しＣ
末端アミド化酵素等の特殊な技術を用いなければならな
かった。しかしながら、この反応は、収率も悪く酵素も
高価で工業化には適していなかった。一方、本発明者等
はＣ末端がアミド化されているモチリン等においてはＣ
末端がホモセリンの形でも十分活性を有することを発見
し、これを廉価に大量生産する方法を見いだした（特願
昭６４−２８６号）。
ＩＰは気管支並びに海面体小柱の平滑筋弛緩作用を利用
して喘息やインポテンツの治療に用いる薬物として期待
されている。このＶＩＰの構造的な特徴として、Ｃ末端
がアミド化されておりこれが生理活性の発現に重要な役
割を果たしているとされてきた。このため大腸菌を用い
てポリペプチドを作製すると、Ｃ末端がアミド型のペプ
チドを作製するためには、発現したペプチドを精製しＣ
末端アミド化酵素等の特殊な技術を用いなければならな
かった。しかしながら、この反応は、収率も悪く酵素も
高価で工業化には適していなかった。一方、本発明者等
はＣ末端がアミド化されているモチリン等においてはＣ
末端がホモセリンの形でも十分活性を有することを発見
し、これを廉価に大量生産する方法を見いだした（特願
昭６４−２８６号）。
【０００４】更にＶＩＰの１７位はメチオニンであるが
、これをロイシン又はノルロイシンに変換したアミノ酸
構造を有するポリペプチドもＶＩＰと同様な生理活性を
示すことが報告されており（特開昭６２−２４６５９５
号）、１７位のメチオニンは活性に及ぼす影響はほとん
どないものと考えられている。
、これをロイシン又はノルロイシンに変換したアミノ酸
構造を有するポリペプチドもＶＩＰと同様な生理活性を
示すことが報告されており（特開昭６２−２４６５９５
号）、１７位のメチオニンは活性に及ぼす影響はほとん
どないものと考えられている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題及び発明の目的】慣用技
術によれば、ＶＩＰを得るには合成法または、生物試料
からの抽出に依らざるを得ず、安価で大量な精製は極め
て困難であった。また、バイオテクノロジ−による技術
を用いてもＣ末端のアミド化または塩基性アミノ酸の付
加が活性に重要であると言われているために工業的に有
利なＶＩＰの製法をもたらすには至らなかった。
術によれば、ＶＩＰを得るには合成法または、生物試料
からの抽出に依らざるを得ず、安価で大量な精製は極め
て困難であった。また、バイオテクノロジ−による技術
を用いてもＣ末端のアミド化または塩基性アミノ酸の付
加が活性に重要であると言われているために工業的に有
利なＶＩＰの製法をもたらすには至らなかった。
【０００６】本発明は従来技術におけるこのような困難
をふまえてなされたものであり、ブロムシアンによる切
断によってＣ末端にホモセリンを有するＶＩＰ様ポリペ
プチドを作成し、アミド化処理等の煩雑な操作を行わな
くてもＶＩＰと同等以上の活性を有するポリペプチドを
提供することにある。本発明の附随的な、但し重要な目
的は非常に効率的にしかも廉価に提供できる上記のＶＩ
Ｐ様活性を有するポリペプチドを有効成分とする医薬品
、殊に気管支拡張剤およびインポテンツ治療剤を提供す
ることにある。
をふまえてなされたものであり、ブロムシアンによる切
断によってＣ末端にホモセリンを有するＶＩＰ様ポリペ
プチドを作成し、アミド化処理等の煩雑な操作を行わな
くてもＶＩＰと同等以上の活性を有するポリペプチドを
提供することにある。本発明の附随的な、但し重要な目
的は非常に効率的にしかも廉価に提供できる上記のＶＩ
Ｐ様活性を有するポリペプチドを有効成分とする医薬品
、殊に気管支拡張剤およびインポテンツ治療剤を提供す
ることにある。
【０００７】
【課題を解決し、目的を達成する手段及び作用】本発明
者等は鋭意検討を重ねた結果、発酵法又は合成法により
得られ、且つ１７位がメチオニン（Ｍｅｔ）以外のアミ
ノ酸残基であるポリペプチドに関して、ブロムシアンに
より切断した後に、得られるポリペプチドはＣ末端がホ
モセリン（ラクトンも含む）になっているポリペプチド
自体が、もとのＶＩＰと同等又はそれ以上の活性を有す
ることを見いだし、これによって本発明を基本的には完
成するに至った。 従って、本発明は、一般式（１） Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ− Ｘ −Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅ
ｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ− Ｙ ［式中 ＸはＭｅｔ以外のアミノ酸残基を意味し、Ｙ
はホモセリン（ホモセリンラクトンも含む、Ｈｓｅで示
される）を意味する。］によって示されるＶＩＰ様活性
を有する新規ポリペプチドにて解決されるとともに、本
発明による既述の主目的が達成される。
者等は鋭意検討を重ねた結果、発酵法又は合成法により
得られ、且つ１７位がメチオニン（Ｍｅｔ）以外のアミ
ノ酸残基であるポリペプチドに関して、ブロムシアンに
より切断した後に、得られるポリペプチドはＣ末端がホ
モセリン（ラクトンも含む）になっているポリペプチド
自体が、もとのＶＩＰと同等又はそれ以上の活性を有す
ることを見いだし、これによって本発明を基本的には完
成するに至った。 従って、本発明は、一般式（１） Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ− Ｘ −Ａｌａ−Ｖ
ａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅ
ｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ− Ｙ ［式中 ＸはＭｅｔ以外のアミノ酸残基を意味し、Ｙ
はホモセリン（ホモセリンラクトンも含む、Ｈｓｅで示
される）を意味する。］によって示されるＶＩＰ様活性
を有する新規ポリペプチドにて解決されるとともに、本
発明による既述の主目的が達成される。
【０００８】
【実施例】次に、製造例及び薬理活性試験例に関して本
発明をさらに詳細に説明する。尚、以下においてはＶＩ
Ｐの１７位がロイシンに変換されたＶＩＰ様ポリペプチ
ドの合成法に関して説明するが醗酵法を用いた場合、メ
チオニン以外のアミノ酸残基であれば、同様にして他の
ＶＩＰ様ポリペプチドを製造し得ることに留意されたい
。
発明をさらに詳細に説明する。尚、以下においてはＶＩ
Ｐの１７位がロイシンに変換されたＶＩＰ様ポリペプチ
ドの合成法に関して説明するが醗酵法を用いた場合、メ
チオニン以外のアミノ酸残基であれば、同様にして他の
ＶＩＰ様ポリペプチドを製造し得ることに留意されたい
。
【０００９】製造例
（１）ＶＩＰ様生理活性ポリペプチドの合成Ｌ−ロイシ
ン−１７−ＶＩＰ−Ｈｓｅの合成はペプチド合成機で合
成終了後、通常の脱保護基、脱樹脂によってＣ末端にホ
モセリン（Ｈｓｅ）を与えるＢｏｃ−Ｈｓｅ（Ｂｚｌ）
−４−（ｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉ
ｃ ａｃｉｄを化学合成し、市販のＡｍｉｎｏｍｅｔ
ｈｙｌ樹脂を用いてアプライドバイオシステムズ社のペ
プチドシンセサイザー４３１Ａにて行った。合成したＬ
−ロイシン−１７−ＶＩＰ−Ｈｓｅの配列を以下に示す
。Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ
−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｈｓｅ合成したサンプルは
トリフルオロメタンスルホン酸法にて脱保護基、脱樹脂
を行ない、さらに０．５Ｍアンモニアで氷中３０分処理
した後、ウォーターズ社製のマイクロボンダスフェアの
Ｃ−１８カラム（１９ｍｍ×１５ｃｍ）を用いてＨＰＬ
Ｃにて以下の条件下で精製した。 溶出液：０．１％トリフルオロ酢酸中１５％から５０％
のアセトニトリルの直線勾配、３５分間流速：７．０ｍ
ｌ／ｍｉｎ ＨＰＬＣによるメインピーク部分を回収して凍結乾燥す
る。以上の過程でペプチドサンプルのＣ末端は、ホモセ
リンまたはホモセリンラクトンとなっている。その一部
をアプライドバイオシステムズ社のペプチドシークエン
サーにて調べたところ、サンプルはＣ末端のホモセリン
を含めて正しく化学合成されていることが確認された。
ン−１７−ＶＩＰ−Ｈｓｅの合成はペプチド合成機で合
成終了後、通常の脱保護基、脱樹脂によってＣ末端にホ
モセリン（Ｈｓｅ）を与えるＢｏｃ−Ｈｓｅ（Ｂｚｌ）
−４−（ｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉ
ｃ ａｃｉｄを化学合成し、市販のＡｍｉｎｏｍｅｔ
ｈｙｌ樹脂を用いてアプライドバイオシステムズ社のペ
プチドシンセサイザー４３１Ａにて行った。合成したＬ
−ロイシン−１７−ＶＩＰ−Ｈｓｅの配列を以下に示す
。Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌ
ｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ
−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｈｓｅ合成したサンプルは
トリフルオロメタンスルホン酸法にて脱保護基、脱樹脂
を行ない、さらに０．５Ｍアンモニアで氷中３０分処理
した後、ウォーターズ社製のマイクロボンダスフェアの
Ｃ−１８カラム（１９ｍｍ×１５ｃｍ）を用いてＨＰＬ
Ｃにて以下の条件下で精製した。 溶出液：０．１％トリフルオロ酢酸中１５％から５０％
のアセトニトリルの直線勾配、３５分間流速：７．０ｍ
ｌ／ｍｉｎ ＨＰＬＣによるメインピーク部分を回収して凍結乾燥す
る。以上の過程でペプチドサンプルのＣ末端は、ホモセ
リンまたはホモセリンラクトンとなっている。その一部
をアプライドバイオシステムズ社のペプチドシークエン
サーにて調べたところ、サンプルはＣ末端のホモセリン
を含めて正しく化学合成されていることが確認された。
【００１０】生理活性試験例（気管支収縮抑制活性の測
定）上記製造例で得られたＶＩＰアナログを被験物質と
して、（株）ペプチド研究所から購入したＶＩＰを対照
物質とし、モルモット気管支を用いるマグヌス法［”Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ”第６巻、第５９７ー６０１頁（１９８
５年）］に従い気管支収縮抑制活性を測定した結果は第
１図に示される通りであった。この図から明らかなよう
に、本発明により得られたＬ−ロイシン−１７−ＶＩＰ
−Ｈｓｅが示す気管支弛緩作用はもとのＶＩＰ以上のレ
ベルであることが確認された。また第２図の実際の気管
支弛緩作用を示すチャートからももとのＶＩＰより強い
気管支弛緩作用を示すことがわかる。
定）上記製造例で得られたＶＩＰアナログを被験物質と
して、（株）ペプチド研究所から購入したＶＩＰを対照
物質とし、モルモット気管支を用いるマグヌス法［”Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ”第６巻、第５９７ー６０１頁（１９８
５年）］に従い気管支収縮抑制活性を測定した結果は第
１図に示される通りであった。この図から明らかなよう
に、本発明により得られたＬ−ロイシン−１７−ＶＩＰ
−Ｈｓｅが示す気管支弛緩作用はもとのＶＩＰ以上のレ
ベルであることが確認された。また第２図の実際の気管
支弛緩作用を示すチャートからももとのＶＩＰより強い
気管支弛緩作用を示すことがわかる。
【００１１】製剤例
本発明物質１ｍｇを含有するようにバイアルに無菌的に
分配し、凍結乾燥等により水分を除去して密封する。使
用時は注射用生理食塩水等を添加し、溶解して用いる。 尚、本発明物質の安定化剤としてヒト血清アルブミン等
を用いることができる。
分配し、凍結乾燥等により水分を除去して密封する。使
用時は注射用生理食塩水等を添加し、溶解して用いる。 尚、本発明物質の安定化剤としてヒト血清アルブミン等
を用いることができる。
【００１２】
【発明の効果】本発明によるポリペプチド誘導体は、Ｖ
ＩＰと同程度以上の生理活性を示す。本発明によるＣ末
端にホモセリン（ラクトンも含む）を有すＶＩＰ様活性
を有するポリペプチド（ＶＩＰアナログ）は、本発明者
が開発した方法（特願平１−２１６０３４）を応用して
大腸菌等により容易にしかも非常に廉価に作成できる。 従って本発明による上記のポリペプチド調製に際しては
従来行なわれていた収率の悪く、高価であったアミド化
処理法等に比して製造コストが著しく低減し、収率も向
上し、結果として生産効率が高まり、ＶＩＰ様生理活性
物質の廉価な且つ大量の供給が可能となる。
ＩＰと同程度以上の生理活性を示す。本発明によるＣ末
端にホモセリン（ラクトンも含む）を有すＶＩＰ様活性
を有するポリペプチド（ＶＩＰアナログ）は、本発明者
が開発した方法（特願平１−２１６０３４）を応用して
大腸菌等により容易にしかも非常に廉価に作成できる。 従って本発明による上記のポリペプチド調製に際しては
従来行なわれていた収率の悪く、高価であったアミド化
処理法等に比して製造コストが著しく低減し、収率も向
上し、結果として生産効率が高まり、ＶＩＰ様生理活性
物質の廉価な且つ大量の供給が可能となる。
【図１】は本発明によるＶＩＰ様活性を有するポリペプ
チドを被験物質とし、（株）ペプチド研究所から購入し
た純ＶＩＰを対照物質とし、これら物質が示すモルモッ
ト気管支弛緩作用をマグヌス法によって測定した結果を
示すグラフである。
チドを被験物質とし、（株）ペプチド研究所から購入し
た純ＶＩＰを対照物質とし、これら物質が示すモルモッ
ト気管支弛緩作用をマグヌス法によって測定した結果を
示すグラフである。
【図２】はモルモット気管支弛緩作用をマグヌス法によ
って測定したときの実際のチャートを示す図である。 （被検薬物１０−７モル）
って測定したときの実際のチャートを示す図である。 （被検薬物１０−７モル）
【図３】はモルモット気管支弛緩作用をマグヌス法によ
って測定したときの実際のチャートを示す図である。 （被検薬物１０−８モル）
って測定したときの実際のチャートを示す図である。 （被検薬物１０−８モル）
Claims (3)
- 【請求項１】 式（Ｉ） Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｇ
ｌｎ− Ｘ −Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−
Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａ
ｓｎ− Ｙ ［式中ＸはＭｅｔ以外のアミノ酸残基を意味し、Ｙはホ
モセリン（ホモセリンラクトンも含む、「Ｈｓｅ」と略
す）］によって示され、且つＶＩＰ様活性を有している
ことを特徴とするポリペプチド。 - 【請求項２】 請求項１記載のポリペプチドを主成分
とする気管支拡張剤。 - 【請求項３】 請求項１記載のポリペプチドを主成分
とするインポテンツ治療剤。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2408425A JPH04230400A (ja) | 1990-12-27 | 1990-12-27 | Ｖｉｐ様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
| EP91109490A EP0463450B1 (en) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vasoactive intestinal polypeptide analogues and use thereof |
| AT91109490T ATE101619T1 (de) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vip-analogen und ihre verwendung. |
| ES91109490T ES2063406T3 (es) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Procedimiento para la preparacion de analogos de polipeptido intestinal vasoactivo. |
| DE69101187T DE69101187T2 (de) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | VIP-Analogen und ihre Verwendung. |
| DK91109490.2T DK0463450T3 (da) | 1990-06-26 | 1991-06-10 | Vasoaktive intestinale polypeptid-analoger og udnyttelsen heraf |
| US08/201,092 US5428015A (en) | 1990-06-26 | 1994-02-24 | Vasoactive intestinal polypeptide analogues and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2408425A JPH04230400A (ja) | 1990-12-27 | 1990-12-27 | Ｖｉｐ様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04230400A true JPH04230400A (ja) | 1992-08-19 |
Family
ID=18517880
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2408425A Pending JPH04230400A (ja) | 1990-06-26 | 1990-12-27 | Ｖｉｐ様活性を有するポリペプチド誘導体及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04230400A (ja) |
-
1990
- 1990-12-27 JP JP2408425A patent/JPH04230400A/ja active Pending
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