JPH04288078A - 新規物質ｐｆ１０７０ａ物質、ｐｆ１０７０ｂ物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗腫瘍活性を有する新
規物質ＰＦ１０７０Ａ物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質な
らびにその製造法に関する。なお、以後ＰＦ１０７０Ａ
物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質をＰＦ１０７０物質と総
称することがある。

【０００２】

【従来の技術】本発明による抗腫瘍性物質ＰＦ１０７０
Ａ物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質と類似する化合物とし
ては、ＴｒａｐｏｘｉｎＡ，Ｂ［Ｊ．　Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ　４３：　１５２４〜１５３２，　１９９０］
、ＷＦ３１６１［Ｊ．　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３６
：　４７８〜４８３，　１９８３］、ＨＣ−ｔｏｘｉｎ
［Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　３８：　４５〜４８，　１
９８２］、Ｃｈｌａｍｙｄｏｃｉｎ［Ｈｅｌｖ．　Ｃｈ
ｉｍ．　Ａｃｔａ．　５７：　５３３〜５４５，　１９
７４］、Ｃｙｌ−１［Ａｇｒｉｃ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈ
ｅｍ．　４８：　８３９〜８４２，　１９８４］、Ｃｙ
ｌ−２［Ａｇｒｉｃ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　３７
：　９５５〜９５６，１９７３］等の環状ペプチド系抗
腫瘍性物質が知られているが、ＰＦ１０７０Ａ物質およ
びＰＦ１０７０Ｂ物質はこれらの既知物質とは構成アミ
ノ酸が異なり明確に区別される。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来、微生物が生産す
る種々の抗腫瘍性物質が知られているが、これら公知の
化合物よりも優れた、医薬として有用な抗腫瘍活性を有
する新規物質の出現が常に要望されている。本発明者ら
は以上のような点に着目し、新規な抗腫瘍性物質を提供
するとともに、その製造法を確立することによって、こ
れを解決しようとするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の期
待にこたえるべく抗腫瘍活性を有する物質の探索を続け
ていたところ、フミコラ属に属する１菌株の培養物中に
マウス白血病（Ｐ−３８８）に対する細胞障害性その他
の抗腫瘍活性および抗真菌活性を有する物質が生産され
ていることを見いだし、有効物質ＰＦ１０７０Ａ物質お
よびＰＦ１０７０Ｂ物質を単離し、本発明を完成させた
。さらに本発明の目的は、新規抗腫瘍活性物質ＰＦ１０
７０Ａ物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質ならびにその製造
法を提供することにある。第１の本発明の要旨とすると
ころは、下記の式（Ｉ）で表されるＰＦ１０７０Ａ物質
を提供するものであり、

【化３】 第２の本発明の要旨とするところは、下記の式（ＩＩ）
で表わされるＰＦ１０７０Ｂ物質を提供するものであり
、

【化４】 さらに第３の発明は、糸状菌に属するＰＦ１０７０物質
生産菌を培養し、その培養物からＰＦ１０７０Ａ物質お
よびＰＦ１０７０Ｂ物質を採取するＰＦ１０７０物質の
製造法にある。本発明に使用されるＰＦ１０７０生産菌
の一例としては、１９８９年、長野県大町市の土壌から
分離されたＰＦ１０７０株がある。

【０００５】１．１０７０株の菌学的性状Ｉ．培養の特
徴 ポテト・デキストロース寒天培地、ポテト・キャロット
寒天培地、麦芽エキス寒天培地、オートミール寒天培地
にて、２５℃で　１０日間培養したところ、どの培地で
も同様の性状を示した。コロニーの大きさは２０〜３０
ｍｍ程度となり、暗灰色から黒色で平坦なコロニーを形
成した。何れの培地においても裏面の色調は表面と同系
色で、可溶性色素は生成せず、３７℃では生育しなかっ
た。 ＩＩ．形態学的特徴 分生子は滑面、暗色、単細胞で、菌糸の側面に直接形成
されるか、もしくは菌糸から垂直に延びた小柄上に形成
された。単生で連鎖することはほとんどなかった。その
形は、楕円形から倒卵形もしくは洋なし形、その大きさ
は　５．５〜７．５　ｘ２．５〜４．０μｍであった。

【０００６】以上の菌学的性状より、ＰＦ１０７０株は
フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ　ｓｐ．）に属すると考
えられる。従って、本菌株をＨｕｍｉｃｏｌａ　ｓｐ．
　ＰＦ１０７０株と呼称することにした。尚、本菌株は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第１１９
９９号（ＦＥＲＭＰ−１１９９９）として寄託されてい
る。ＰＦ１０７０株は、他のカビに見られるようにその
性状が変化し易い。ＰＦ１０７０株に由来する突然変異
株（自然発生または誘発性）、形質接合体または遺伝子
組換え体であっても、ＰＦ１０７０物質を生産するもの
は全て本発明に使用できる。

【０００７】２．ＰＦ１０７０物質生産菌の培養法不完
全菌類に属するＰＦ１０７０物質生産菌を通常の微生物
が利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄養源
としては、従来カビの培養に利用されている公知のもの
が使用できる。例えば、炭素源としては、グルコース、
シュクロース、水飴、デキストリン、澱粉、グリセロー
ル、糖蜜、動・植物油等を使用しうる。また、窒素源と
しては、大豆粉、小麦胚芽、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等を使用しうる。そ
の他必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、
マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸およびその
他のイオンを生成することができる無機塩類を添加する
ことは有効である。また、菌の発育を助け、ＰＦ１０７
０物質の生産を促進するような有機および無機物を適当
に添加することができる。培養法としては、好気的条件
での培養法、特に深部培養法が最も適している。培養に
適当な温度は１５〜３０℃であるが、多くの場合２６℃
付近で培養する。ＰＦ１０７０物質の生産は培地や培養
条件により異なるが、振盪培養、タンク培養のいずれに
おいても通常２〜１０日間でその蓄積が最高に達する。 培養中のＰＦ１０７０物質の蓄積量が最高になった時に
培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

【０００８】３．ＰＦ１０７０物質の精製法本発明によ
って得られるＰＦ１０７０物質の培養物からの採取に当
たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例えば
、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着または分配カラ
ムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独で
または適宜組み合わせて抽出精製することができる。例
えば、ＰＦ１０７０物質は、培養菌体中からはアセトン
−水、メタノール−水または酢酸エチル等で抽出される
。また、培養液中に蓄積されたＰＦ１０７０物質は、水
と混ざらない有機溶剤、例えば、ブタノール、酢酸エチ
ル等で抽出すればＰＦ１０７０物質は有機溶剤層に抽出
される。ＰＦ１０７０物質を更に精製するには、シリカ
ゲル（ワコーゲル　Ｃ−３００、和光純薬工業社製等）
、アルミナ等の吸着剤やセファデックス　ＬＨ−２０（
ファルマシア社製）、トヨパールＨＷ−４０（株式会社
東ソー社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うとよ
い。以上のような方法により、あるいはこれらを適宜組
み合わせることにより、高純度のＰＦ１０７０Ａおよび
Ｂ物質が得られる。得られたＰＦ１０７０ＡおよびＢ物
質の物理化学的性状は次の通りである。

【０００９】１．ＰＦ１０７０Ａ物質の物理化学的性状
（１）　　色および形状：無色針状結晶（２）　　分子
式：Ｃ３１Ｈ４４Ｎ４Ｏ６（３）　　マススペクトル　
　（ＥＩ−ＭＳ）：　ｍ／ｚ　５６８　（Ｍ＋）（４）
　　比旋光度：［α］Ｄ２４　＝　−９７．３°（ｃ１
．０，　ＣＨＣｌ３）（５）　　紫外部吸収スペクトル λｍａｘｎｍ（ＭｅＯＨ，ε）：２８０（５１）（６）
　　赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠で測定したスペクトルは図１に示すとお
りである。 νｍａｘ　ｃｍ−１（ＫＢｒ）：３４００，　３２８０
，２９４０，　１７１０，　１６６０，　１６４０，　
１５１０，１４６０，１３７０，１２３０（７）　　１
Ｈ　ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶液中で測定し
たスペクトルは図２に示す通りである。 （８）　　１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
溶液中で測定したスペクトルは図３に示す通りである。 （９）　　溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチ
ル、メタノールに可溶で、水に不溶である。 （１０）　　塩基性、酸性、中性の区別：中性物質

【０
０１０】２．ＰＦ１０７０Ｂ物質の物理化学的性状（１
）　　色および形状：無色針状結晶（２）　　分子式：
Ｃ３０Ｈ４２Ｎ４Ｏ６（３）　　マススペクトル　（Ｅ
Ｉ，ＦＤ−ＭＳ）：ｍ／ｚ　５５４　（Ｍ＋）（４）　
　比旋光度：［α］Ｄ２４　＝　−１１４．９°（ｃ　
１．０，　ＣＨＣｌ３）（５）　　紫外部吸収スペクト
ル λｍａｘｎｍ（ＭｅＯＨ，ε）：２８０（４７）（６）
　　赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠で測定したスペクトルは図４に示すとお
りである。 νｍａｘ　ｃｍ−１（ＫＢｒ）　：３２８０，　２９３
０，　１７１０，　１６６０，　１６４０，　１５２０
，　１４１０，１２３５ （７）　　１Ｈ　ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム溶
液中で測定したスペクトルは図５に示す通りである。 （８）　　１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
溶液中で測定したスペクトルは図６に示す通りである。 （９）　　溶解性：クロロホルムに可溶で、水、アセト
ン、酢酸エチル、メタノールに不溶である。 （１０）　　塩基性、酸性、中性の区別：中性物質さら
に構造研究の結果、ＰＦ１０７０ＡおよびＢ物質の化学
構造を、前記の式（Ｉ）および（ＩＩ）のごとく決定し
た。

【００１１】以下に本発明の実施例を示すが、ＰＦ１０
７０物質の性状が本発明によって明らかにされたので、
それらの性状にもとずきＰＦ１０７０物質の製造法を種
々考案することができる。従って本発明は実施例に限定
されるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明
によって明らかにされたＰＦ１０７０物質の性状にもと
ずいて公知の手段を施してＰＦ１０７０物質を生産、濃
縮、抽出、精製する方法をすべて包括する。

【００１２】

【試験例】１．ＰＦ１０７０物質の抗真菌活性ペーパー
ディスク法により測定したＰＦ１０７０物質の１ｍｇ／
ｍｌの濃度における各種真菌に対する抗真菌活性を第１
表に示した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第
１表───────────────────────
────────　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　阻止円直径（
ｍｍ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　被検菌　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１　　　　　　　　２　　　　　　　
　３　　　　───────────────────
────────────　　　　　　　　　　　　Ｐ
Ｆ１０７０Ａ物質　　　　　　　　　　　０　　　　　
　　　　０　　　　　　　　　１６　　ＰＦ１０７０Ｂ
物質　　　　　　　　　　　０　　　　　　　　　０　
　　　　　　　　１４───────────────
────────────────　　　　　　　　　
　被検菌 １．Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ　ＳＨＹ−３２．Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
　Ｍ９００１３．Ｃａｎｄｉｄａ　ｐｓｅｕｄｏｔｒｏ
ｐｉｃａｌｉｓ　Ｍ９０３５２．ＰＦ１０７０物質の抗
腫瘍活性

【００１３】ＰＦ１０７０ＡおよびＢ物質のマウス白血
病Ｐ−３８８に対する抗腫瘍作用を第２表に示す。試験
は腹腔内にＰ−３８８腫瘍細胞を移植したマウスにＰＦ
１０７０ＡおよびＢ物質を１日１回で４日間、腹腔内投
与して行い、その延命効果をＴ／Ｃ（％）で表 示した。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第
２表───────────────────────
─────────────　　　　　　ＰＦ１０７０
Ａ物質　　　　　　　　　　　　　　　　ＰＦ１０７０
Ｂ物質　　投与量（ｍｇ／ｋｇ）　　Ｔ／Ｃ（％）　　
　　　投与量（ｍｇ／ｋｇ）　　Ｔ／Ｃ（％）────
─────────────────────────
───────　　　　　　４０　　　　　　　　　　
　　１３７．１　　　　　　　　　　　　　　　２０　
　　　　　　　　　　　１３０．９　　　　　　１０　
　　　　　　　　　　　１１６．５　　　　　　　　　
　　　　　　　５　　　　　　　　　　　　１３４．０
　　　　　　　２．５　　　　　　　　　　１１０．３
　　　　　　　　　　　　　　　　１．３　　　　　　
　　　　１１０．３　　　　　　　０．６３　　　　　
　　　　１０３．１　　　　　　　　　　　　　　　　
０．３１　　　　　　　　　　９５．９───────
─────────────────────────
────

【００１４】

【実施例】種培地として、可溶性澱粉　２．０％、グル
コース　１．０％、ポリペプトン　０．５％、小麦胚芽
　０．６％、酵母エキス　０．３％、大豆粕　０．２％
、炭酸カルシウム　０．２％の組成からなる培地を用い
た。また生産培地として、グルコース　２．０％、澱粉
　２．０％、小麦胚芽　１．０％、大豆粕　１．０％、
肉エキス　０．５％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸カ
ルシウム　０．３％の組成からなる培地を用いた。なお
、殺菌前ｐＨはすべてｐＨ　７．０に調整して使用した
。前記の種培地（２０　ｍｌ）を分注した１００　ｍｌ
容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し、これにＨ
ｕｍｉｃｏｌａ　ｓｐ．　ＰＦ１０７０株（ＦＥＲＭ　
Ｐ−１１９９９）の斜面寒天培養の　２〜３白金耳を接
種し、２６℃で７２時間振盪培養して種培養とした。次
いで、前記の生産培地（１００　ｍｌ）を分注した５０
０　ｍｌ容三角フラスコ（２０本）を１２０℃で１５分
間殺菌し、これに前記種培養（各４　ｍｌ）を接種して
、２６℃で　９６時間振盪培養した。培養終了後、濾過
助剤として珪藻土を加えて濾過し、濾液と菌体を得た。

【００１５】この菌体に５０％アセトン水（２　Ｌ）を
加え、１時間撹拌後菌体を濾別して菌体抽出液を得た。 菌体抽出液は、減圧下でアセトンを留去して１　Ｌの濃
縮液とした。この濃縮液と濾液を合わせ酢酸エチル（２
　Ｌ）で活性成分を抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固し
油状物質（２６１ｍｇ）を得た。この油状物質をシリカ
ゲルカラム（４０　ｇ）の上部に載せ、クロロホルム　
３００　ｍｌで洗浄した後、クロロホルム−メタノール
（１００：１）を展開溶媒とするクロマトグラフィーを
行い、溶出液を８　ｇずつ分画した。ＰＦ１０７０Ａ物
質を含む画分（フラクション番号１１７〜１３１）、Ｐ
Ｆ１０７０Ｂ物質を含む画分（フラクション番号１３２
〜１５３）を濃縮乾固し、淡黄色粉末をそれぞれ１０．
０　ｍｇ、１２．７　ｍｇ得た。次いでＰＦ１０７０Ａ
物質を含む粉末を分取用ＴＬＣ（展開系：クロロホルム
−メタノール、１５：１）で精製し、ＰＦ１０７０Ａ物
質（７．１　ｍｇ）を無色粉末として得た。同様な方法
でＰＦ１０７０Ｂ物質を含む粉末を精製し、ＰＦ１０７
０Ｂ物質（８．９　ｍｇ）を無色粉末として得た。さら
に、ＰＦ１０７０Ａ物質を含む無色粉末をクロロホルム
−メタノール（３：７）を展開溶媒とするセファデック
ス　ＬＨ−２０（２５０　ｍｌ）カラムクロマトグラフ
ィーで精製した後、メタノール−水の混合溶媒より結晶
化を行い、ＰＦ１０７０Ａの無色針状結晶　５．９　ｍ
ｇを得た。同様にＰＦ１０７０Ｂ物質を含む粉末をクロ
ロホルム−メタノール（３：７）を展開溶媒とするセフ
ァデックス　ＬＨ−２０（２５０　ｍｌ）カラムクロマ
トグラフィーで精製した後、クロロホルム−メタノール
の混合溶媒より結晶化を行い、ＰＦ１０７０Ｂの無色針
状結晶　５．９　ｍｇを得た。本物質は前記の物理化学
的性状を有する。

【００１６】

【発明の効果】本発明のＰＦ１０７０Ａ物質およびＰＦ
１０７０Ｂ物質は、第１表に示したごとく抗真菌作用を
有しており抗真菌剤としての用途が期待される。また第
２表に示したごとく有効な抗腫瘍活性を有していること
から、この性質に基づき本発明のＰＦ１０７０Ａおよび
ＰＦ１０７０Ｂ物質を抗腫瘍剤、あるいはそれへの変換
素材として用いることができる。

【００１７】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＦ１０７０Ａ物質の臭化カリウム錠での赤外
部吸収スペクトル

【図２】ＰＦ１０７０Ａ物質の重クロロホルム溶液中で
の４００　ＭＨｚ１Ｈ　ＮＭＲスペクトル

【図３】ＰＦ１０７０Ａ物質の重クロロホルム溶液中で
の１００　ＭＨｚ１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル

【図４】ＰＦ１０７０Ｂ物質の臭化カリウム錠での赤外
部吸収スペクトル

【図５】ＰＦ１０７０Ｂ物質の重クロロホルム溶液中で
の４００　ＭＨｚ１Ｈ　ＮＭＲスペクトル

【図６】ＰＦ１０７０Ｂ物質の重クロロホルム溶液中で
の１００　ＭＨｚ　１３Ｃ　ＮＭＲスペクトル

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記の式（Ｉ）で表わされるＰＦ１０
   ７０Ａ物質。 【化１】
2. 【請求項２】　　下記の式（ＩＩ）で表わされるＰＦ１
   ０７０Ｂ物質。 【化２】
3. 【請求項３】　　フミコラ属（Ｈｕｍｉｃｏｌａ属）に
   属する、ＰＦ１０７０Ａ物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質
   生産菌を培養し、その培養物からＰＦ１０７０Ａ物質お
   よびＰＦ１０７０Ｂ物質を採取することを特徴とするＰ
   Ｆ１０７０Ａ物質およびＰＦ１０７０Ｂ物質の製造法。