JPH0439997B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0439997B2 JPH0439997B2 JP61269734A JP26973486A JPH0439997B2 JP H0439997 B2 JPH0439997 B2 JP H0439997B2 JP 61269734 A JP61269734 A JP 61269734A JP 26973486 A JP26973486 A JP 26973486A JP H0439997 B2 JPH0439997 B2 JP H0439997B2
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- Japan
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- hyaluronic acid
- present
- streptococcus
- streptococcus equi
- producing
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、醗酵法によるヒアルロン酸の製造法
に関する。さらに詳しくは、栄養要求性が部分的
に解除されたストレプトコツカス・エキを培養
し、ヒアルロン酸を生成蓄積せしめることを特徴
とするヒアルロン酸の製造法に関する。 〔従来の技術〕 従来ヒアルロン酸はニワトリのトサカ、牛の眼
の硝子体又は臍帯等より抽出によつて得られてい
た。しかしながら抽出法によるヒアルロン酸製造
は、分離精製が非常に困難等の欠点等を有してい
た。 その欠点を改良するために、ヒアルロン酸を生
産する能力を有する微生物を培養し、その培養液
から直接ヒアルロン酸を採取する方法が開示され
ている（特開昭58−56692号公報、特開昭61−
63294号公報）。 さらに、微生物を培養し、ヒアルロン酸を採取
する方法について、培養のロツトごと生成量を安
定化させるため、突然変異株を用いる方法が開示
されている（特開昭61−219394号公報）。 本発明者らは、ヒアルロン酸産生能を有するス
トレプトコツカス属の微生物を、培養液のPH7.5
〜9.0にコントロールすることにより、高分子量
のヒアルロン酸を生成蓄積せしめる方法について
すでに提案した（特願昭61−170943号明細書）。 〔発明が解決しようとする問題点〕 微生物を培養して、ヒアルロン酸の生産を行な
うと、ロツトごとの生産量が不安定であり、工業
的に実施する際に、大きな問題となる。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、かかる問題を解決すべく、種々
研究を行なつた結果、栄養要求性が部分的に解除
されたストレプトコツカス・エキが意外にも親株
よりも、高収量で、しかも収量のバラツキが少な
く安定にヒアルロン酸を生成することを見い出し
本発明を完成するに至つた。 すなわち本発明は、ストレプトコツカス・エキ
（Streptococcus equi）の変異株FM−100（微工
研菌寄第9027号）を培養し、ヒアルロン酸を生成
蓄積せしめることを特徴とする醗酵法によるヒア
ルロン酸の製造法である。 以下、本発明について具体的に説明する。 本発明の栄養要求性が部分的に解除されたスト
レプトコツカス・エキは、ヒアルロン酸生成能を
有するストレプトコツカス・エキの突然変異株の
中から取得することが出来る。 例えば、ストレプトコツカス・エキ
ATCC9527を用い、ポリペプトン1.5％、酵母エ
キス0.5％、グルコース２％の培地にて、33℃で
培養し、対数増殖期の菌を、低温で遠心分離によ
り集菌し、生理食塩水を用いて、無菌的に３回洗
浄する。Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジン50μg／mlを含むPH5.0、0.05Mリン
酸緩衝液中、30℃で１時間振盪したのち、氷冷す
る。ついで、生理食塩水を用いて、低温で菌体を
３回洗浄した後、ポリペプトン1.5％、酵母エキ
ス0.5％、グリコース２％の培地で、33℃、３時
間培養し、また生理食塩水を用いて、低温で菌体
を３回洗浄する。表２に示す人工合成培地で、33
℃、７日間液体培養し、増殖してきた培養液をさ
らに、新しい同じ人工合成培地にうえつぎ、この
操作を３回くりかえす。 次に寒天を含む同じ組成の培地上に塗布し、コ
ロニーを分離し、ストレプトコツカス・エキ
FM100を得る。 本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第9027号として受託されている。
ストレプトコツカスFM・100は、部分的に栄養
要求性が解除され、親株であるATCC9527が生育
できない表２に示す培地成分だけからなる人工合
成培地によく生育することができる。
に関する。さらに詳しくは、栄養要求性が部分的
に解除されたストレプトコツカス・エキを培養
し、ヒアルロン酸を生成蓄積せしめることを特徴
とするヒアルロン酸の製造法に関する。 〔従来の技術〕 従来ヒアルロン酸はニワトリのトサカ、牛の眼
の硝子体又は臍帯等より抽出によつて得られてい
た。しかしながら抽出法によるヒアルロン酸製造
は、分離精製が非常に困難等の欠点等を有してい
た。 その欠点を改良するために、ヒアルロン酸を生
産する能力を有する微生物を培養し、その培養液
から直接ヒアルロン酸を採取する方法が開示され
ている（特開昭58−56692号公報、特開昭61−
63294号公報）。 さらに、微生物を培養し、ヒアルロン酸を採取
する方法について、培養のロツトごと生成量を安
定化させるため、突然変異株を用いる方法が開示
されている（特開昭61−219394号公報）。 本発明者らは、ヒアルロン酸産生能を有するス
トレプトコツカス属の微生物を、培養液のPH7.5
〜9.0にコントロールすることにより、高分子量
のヒアルロン酸を生成蓄積せしめる方法について
すでに提案した（特願昭61−170943号明細書）。 〔発明が解決しようとする問題点〕 微生物を培養して、ヒアルロン酸の生産を行な
うと、ロツトごとの生産量が不安定であり、工業
的に実施する際に、大きな問題となる。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、かかる問題を解決すべく、種々
研究を行なつた結果、栄養要求性が部分的に解除
されたストレプトコツカス・エキが意外にも親株
よりも、高収量で、しかも収量のバラツキが少な
く安定にヒアルロン酸を生成することを見い出し
本発明を完成するに至つた。 すなわち本発明は、ストレプトコツカス・エキ
（Streptococcus equi）の変異株FM−100（微工
研菌寄第9027号）を培養し、ヒアルロン酸を生成
蓄積せしめることを特徴とする醗酵法によるヒア
ルロン酸の製造法である。 以下、本発明について具体的に説明する。 本発明の栄養要求性が部分的に解除されたスト
レプトコツカス・エキは、ヒアルロン酸生成能を
有するストレプトコツカス・エキの突然変異株の
中から取得することが出来る。 例えば、ストレプトコツカス・エキ
ATCC9527を用い、ポリペプトン1.5％、酵母エ
キス0.5％、グルコース２％の培地にて、33℃で
培養し、対数増殖期の菌を、低温で遠心分離によ
り集菌し、生理食塩水を用いて、無菌的に３回洗
浄する。Ｎ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジン50μg／mlを含むPH5.0、0.05Mリン
酸緩衝液中、30℃で１時間振盪したのち、氷冷す
る。ついで、生理食塩水を用いて、低温で菌体を
３回洗浄した後、ポリペプトン1.5％、酵母エキ
ス0.5％、グリコース２％の培地で、33℃、３時
間培養し、また生理食塩水を用いて、低温で菌体
を３回洗浄する。表２に示す人工合成培地で、33
℃、７日間液体培養し、増殖してきた培養液をさ
らに、新しい同じ人工合成培地にうえつぎ、この
操作を３回くりかえす。 次に寒天を含む同じ組成の培地上に塗布し、コ
ロニーを分離し、ストレプトコツカス・エキ
FM100を得る。 本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第9027号として受託されている。
ストレプトコツカスFM・100は、部分的に栄養
要求性が解除され、親株であるATCC9527が生育
できない表２に示す培地成分だけからなる人工合
成培地によく生育することができる。
【表】
【表】
ストレプトコツカス・エキFM・100の栄養要
求性は表３に示すとおりである。
求性は表３に示すとおりである。
次に実施例により、本発明を詳しく説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。 実施例 １ グルコース２％、リン酸第１カリウム0.2％、
硫酸マグネシウム７水塩0.05％、チオ硫酸ソーダ
0.1％、ポリペプトン1.0％酵母エキス0.5％からな
るPH8.5の培養液1lに同一培地からなるストレプ
トコツカス・エキFM−100の前培養液10mlを接
触し、通気量1.5vvm、攪拌200回転／分、温度33
℃でカ性ソーダでpHを8.5にコントロールしなが
ら培養し、15時間後に、グルコース２％を分添
し、グルコースが全部消費された時点で培養を停
止した。 培養液を塩酸でPH４に調整後、蒸留水で２倍希
釈し、遠心分離により除菌した。得られた除菌液
をエチルアルコールを加え、ヒアルロン酸ソーダ
を析出せしめる。これをろ別した後、水に溶解
し、セチルピリジニウムクロライドを加え、生じ
た沈殿をろ取し、２％食塩水に再溶解後、再びエ
チルアルコールによる析出をくり返す。得られた
ヒアルロン酸ソーダを室温で減圧乾燥して、培養
液1lあたり7.2gの白色ヒアルロン酸ソーダを得
た。 得られたヒアルロン酸ソーダは、赤外線吸収ス
ペクトル、Ｃ−13核磁気共鳴スペクトル、ストレ
プトミセスのヒアルロニダーゼによる分解実験で
ヒアルロン酸ソーダであることが確認された。 上記と同様の培養を４回くりかえし、全部で５
バツチ行なつた結果を表３に示す。
が、本発明はこれに限定されるものではない。 実施例 １ グルコース２％、リン酸第１カリウム0.2％、
硫酸マグネシウム７水塩0.05％、チオ硫酸ソーダ
0.1％、ポリペプトン1.0％酵母エキス0.5％からな
るPH8.5の培養液1lに同一培地からなるストレプ
トコツカス・エキFM−100の前培養液10mlを接
触し、通気量1.5vvm、攪拌200回転／分、温度33
℃でカ性ソーダでpHを8.5にコントロールしなが
ら培養し、15時間後に、グルコース２％を分添
し、グルコースが全部消費された時点で培養を停
止した。 培養液を塩酸でPH４に調整後、蒸留水で２倍希
釈し、遠心分離により除菌した。得られた除菌液
をエチルアルコールを加え、ヒアルロン酸ソーダ
を析出せしめる。これをろ別した後、水に溶解
し、セチルピリジニウムクロライドを加え、生じ
た沈殿をろ取し、２％食塩水に再溶解後、再びエ
チルアルコールによる析出をくり返す。得られた
ヒアルロン酸ソーダを室温で減圧乾燥して、培養
液1lあたり7.2gの白色ヒアルロン酸ソーダを得
た。 得られたヒアルロン酸ソーダは、赤外線吸収ス
ペクトル、Ｃ−13核磁気共鳴スペクトル、ストレ
プトミセスのヒアルロニダーゼによる分解実験で
ヒアルロン酸ソーダであることが確認された。 上記と同様の培養を４回くりかえし、全部で５
バツチ行なつた結果を表３に示す。
本発明によれば、ヒアルロン酸を高収率で、し
かも収量にばらつきなく、安定に生産することが
できる。また菌株管理も容易である。 本発明によつて製造されたヒアルロン酸は、化
粧品、医療品に配合して使用できる。
かも収量にばらつきなく、安定に生産することが
できる。また菌株管理も容易である。 本発明によつて製造されたヒアルロン酸は、化
粧品、医療品に配合して使用できる。
Claims (1)
- １ ストレプトコツカス・エキ
（Streptococcusequi）の変異株FM−100（微工研
菌寄第9027号）を培養し、ヒアルロン酸を生成蓄
積せしめることを特徴とする醗酵法によるヒアル
ロン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26973486A JPS63123392A (ja) | 1986-11-14 | 1986-11-14 | ヒアルロン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26973486A JPS63123392A (ja) | 1986-11-14 | 1986-11-14 | ヒアルロン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63123392A JPS63123392A (ja) | 1988-05-27 |
| JPH0439997B2 true JPH0439997B2 (ja) | 1992-07-01 |
Family
ID=17476421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26973486A Granted JPS63123392A (ja) | 1986-11-14 | 1986-11-14 | ヒアルロン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63123392A (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100393322C (zh) | 2002-08-16 | 2008-06-11 | 电气化学工业株式会社 | 分离型医疗材料 |
| EP1681306B1 (en) | 2003-10-29 | 2013-02-20 | Teijin Limited | Hyaluronic acid compound, hydrogel thereof and material for treating joint |
| WO2008041514A1 (ja) | 2006-09-22 | 2008-04-10 | Kochi University | 放射線または抗がん化学療法増感剤 |
| CN102812051B (zh) * | 2010-03-17 | 2015-08-26 | 电气化学工业株式会社 | 透明质酸和/或其盐的溶解方法 |
| KR101834588B1 (ko) | 2010-08-23 | 2018-03-05 | 덴카 주식회사 | 가교 히알루론산 조성물 및 자기 가교 히알루론산 입자 |
| TR201905159T4 (tr) | 2013-02-15 | 2019-05-21 | Kortuc Inc | İntratümöral lokal enjeksiyonda ve taşıyıcı olarak hidrojel ile hidrojen peroksidin kontrollü salımı için kullanılacak radyasyon/kemoterapi sensitizörü. |
| KR20160029818A (ko) | 2013-07-08 | 2016-03-15 | 덴카 주식회사 | 코어 쉘형 가교 히알루론산 겔 입자, 그의 제조 방법 및 의료용 재료 |
| AU2021292668A1 (en) | 2020-06-15 | 2023-02-09 | KORTUC Japan LLC | Sensitiser for cancer treatment |
| JP7684719B2 (ja) | 2023-02-17 | 2025-05-28 | 合同会社Kortuc Japan | 腫瘍に対する免疫を賦活させるための医薬組成物及びその方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5856692A (ja) * | 1981-09-26 | 1983-04-04 | Shiseido Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
-
1986
- 1986-11-14 JP JP26973486A patent/JPS63123392A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63123392A (ja) | 1988-05-27 |
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