JPH044033A - マイクロカプセルの製造方法 - Google Patents
マイクロカプセルの製造方法Info
- Publication number
- JPH044033A JPH044033A JP2104432A JP10443290A JPH044033A JP H044033 A JPH044033 A JP H044033A JP 2104432 A JP2104432 A JP 2104432A JP 10443290 A JP10443290 A JP 10443290A JP H044033 A JPH044033 A JP H044033A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- yeast
- components
- elution
- microcapsules
- hydrophobic liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
- B01J13/02—Making microcapsules or microballoons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/70—Fixation, conservation, or encapsulation of flavouring agents
- A23L27/72—Encapsulation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5063—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
- A61K9/5068—Cell membranes or bacterial membranes enclosing drugs
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B41—PRINTING; LINING MACHINES; TYPEWRITERS; STAMPS
- B41M—PRINTING, DUPLICATING, MARKING, OR COPYING PROCESSES; COLOUR PRINTING
- B41M5/00—Duplicating or marking methods; Sheet materials for use therein
- B41M5/124—Duplicating or marking methods; Sheet materials for use therein using pressure to make a masked colour visible, e.g. to make a coloured support visible, to create an opaque or transparent pattern, or to form colour by uniting colour-forming components
- B41M5/165—Duplicating or marking methods; Sheet materials for use therein using pressure to make a masked colour visible, e.g. to make a coloured support visible, to create an opaque or transparent pattern, or to form colour by uniting colour-forming components characterised by the use of microcapsules; Special solvents for incorporating the ingredients
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Color Printing (AREA)
- Formation And Processing Of Food Products (AREA)
- Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（Ａ）産業上の利用分野
本発明は酵母菌をマイクロカプセル皮膜として有するマ
イクロカプセルの製造方法に関するものである。
イクロカプセルの製造方法に関するものである。
（Ｂ）従来の技術
マイクロカプセルは１μｍ〜数百μｍまでの大きさの微
粒子として液体、固体、気体を内包し、そのまわりを薄
い皮膜で均一に覆ったものであり、具体的には、無色及
び有色染料、医薬品、農薬、香料、飼料素材及び食品素
材等を内包させたマイクロカプセルが工業的に製品化さ
れている。
粒子として液体、固体、気体を内包し、そのまわりを薄
い皮膜で均一に覆ったものであり、具体的には、無色及
び有色染料、医薬品、農薬、香料、飼料素材及び食品素
材等を内包させたマイクロカプセルが工業的に製品化さ
れている。
マイクロカプセルは、ある特性をもった物質の外側に薄
膜を形成させることでその特性も同時に封じ込めてしま
うことが可能で、必要時に皮膜を破壊すれば内包された
物質を取り出すことができるものである。
膜を形成させることでその特性も同時に封じ込めてしま
うことが可能で、必要時に皮膜を破壊すれば内包された
物質を取り出すことができるものである。
従来より知られているマイクロカプセルの製造方法とし
ては、 （１）ゼラチンによるコアセルベーション法（米国特許
第２，８００．４５７号、同２． ８００゜４５８号明
細書など） （２）外相（水相）より皮膜を形成するｉｎ ５ｉｌｕ
法（特公昭３６−９１６８号、同４７−２３１６５号、
特開昭４８−５７８９２号、同５１−９０７９号、同５
４−２５２７７号公報等）（３）内相と外相間の皮膜形
成反応を利用した界面重合法 か有力な方法として知られている。
ては、 （１）ゼラチンによるコアセルベーション法（米国特許
第２，８００．４５７号、同２． ８００゜４５８号明
細書など） （２）外相（水相）より皮膜を形成するｉｎ ５ｉｌｕ
法（特公昭３６−９１６８号、同４７−２３１６５号、
特開昭４８−５７８９２号、同５１−９０７９号、同５
４−２５２７７号公報等）（３）内相と外相間の皮膜形
成反応を利用した界面重合法 か有力な方法として知られている。
また、米国特許第４００１４８０号明細書においては脂
質含有量が４０〜５Ｑｗ＋％の真菌類中に、その脂質に
可溶性の物質をカプセル化する方法が紹介されている。
質含有量が４０〜５Ｑｗ＋％の真菌類中に、その脂質に
可溶性の物質をカプセル化する方法が紹介されている。
さらに、特開昭５８−１０７１８９号公報では、成長微
生物の脂質含量の増量方法として、培地から回収した脂
質含量１０ ｗ ｔ％以上の成長微生物（例えば油脂形
成性酵母菌、麦酒酵母菌など）に脂質増量用有機物質（
例えば脂肪族アルコール類、エステル類、芳香族炭化水
素類、水添芳香族炭化水素類）から選択される液体を包
含せしめた後、これら脂質増量用有機物質に可溶な芯物
質となるべき液体をカプセル化してなる微生物カプセル
を挙げている。
生物の脂質含量の増量方法として、培地から回収した脂
質含量１０ ｗ ｔ％以上の成長微生物（例えば油脂形
成性酵母菌、麦酒酵母菌など）に脂質増量用有機物質（
例えば脂肪族アルコール類、エステル類、芳香族炭化水
素類、水添芳香族炭化水素類）から選択される液体を包
含せしめた後、これら脂質増量用有機物質に可溶な芯物
質となるべき液体をカプセル化してなる微生物カプセル
を挙げている。
（Ｃ）発明が解決しようとする課題
上記カプセル化法においては、内包物の保護力に優れた
緻密な皮膜を有するマイクロカプセルが得られ、工業的
にも広く応用されているものであるが、製造面について
数々の問題点を有していることも事実である。すなわち
、 （１）のコアセルベーション法については反応に係
わるｐＨ１温度、時間操作が複雑であり、またカプセル
化工程に長時間を要する等の問題点を有する。（２）の
ｉｎ ５ｉｔＵ法及び（３）の界面重合法については、
反応性の高い皮膜基材を比較的高温で反応させるため、
不安定な物質あるいは熱変性しやすい物質のカプセル化
には向かない、等の欠点を有している。
緻密な皮膜を有するマイクロカプセルが得られ、工業的
にも広く応用されているものであるが、製造面について
数々の問題点を有していることも事実である。すなわち
、 （１）のコアセルベーション法については反応に係
わるｐＨ１温度、時間操作が複雑であり、またカプセル
化工程に長時間を要する等の問題点を有する。（２）の
ｉｎ ５ｉｔＵ法及び（３）の界面重合法については、
反応性の高い皮膜基材を比較的高温で反応させるため、
不安定な物質あるいは熱変性しやすい物質のカプセル化
には向かない、等の欠点を有している。
また、微生物を利用したマイクロカプセル化法は天然物
、しかも生物体の一部を素材として用い、カプセル化の
メカニズムも従来の方法とは全く性質を異にした物であ
る。しかし、これらの明細書中の実施例を見るに、初期
添加酵母菌（膜材）が内包し得る疎水性液体の量が従来
から知られている、また現在工業的に用いられている方
法に比べ相対的に少なく、しかも多量に摂取させようと
すればカプセル化に長時間を要するという欠点を有して
いる。
、しかも生物体の一部を素材として用い、カプセル化の
メカニズムも従来の方法とは全く性質を異にした物であ
る。しかし、これらの明細書中の実施例を見るに、初期
添加酵母菌（膜材）が内包し得る疎水性液体の量が従来
から知られている、また現在工業的に用いられている方
法に比べ相対的に少なく、しかも多量に摂取させようと
すればカプセル化に長時間を要するという欠点を有して
いる。
そこで本発明の目的は酵母菌を用いたマイクロカプセル
製造方法において、疎水性液体を多量に内包させること
が可能なマイクロカプセルの製造方法を提供することで
ある。
製造方法において、疎水性液体を多量に内包させること
が可能なマイクロカプセルの製造方法を提供することで
ある。
（Ｄ）課題を解決するための手段
本発明者らは微生物を用いたカプセル化法の前記問題点
を解決すべく、多量の疎水性液体を酵母菌体中に内包せ
しめる方法について検討したところ、次の手法により解
決されることを見いだした。
を解決すべく、多量の疎水性液体を酵母菌体中に内包せ
しめる方法について検討したところ、次の手法により解
決されることを見いだした。
すなわち、酵母菌体内に疎水性液体を内包してなるマイ
クロカプセルの製造方法において、あらかじめ菌体内成
分、具体的には各種タンパク質、アミノ酸、核酸、糖分
等から構成される細胞質成分を溶出させた酵母を用いる
ことにより、疎水性液体の内包量を高めることが可能と
なった。
クロカプセルの製造方法において、あらかじめ菌体内成
分、具体的には各種タンパク質、アミノ酸、核酸、糖分
等から構成される細胞質成分を溶出させた酵母を用いる
ことにより、疎水性液体の内包量を高めることが可能と
なった。
本発明は酵母菌をマイクロカプセル皮膜として、菌体内
に疎水性液体をより多く、かつ迅速に内包せしめるマイ
クロカプセルの製造方法に関するものであり、基本的に
次の３段階より成る。
に疎水性液体をより多く、かつ迅速に内包せしめるマイ
クロカプセルの製造方法に関するものであり、基本的に
次の３段階より成る。
１）酵母菌から菌体内成分を溶出する工程２）予しめ調
整した疎水性液体を酵母菌残渣分散液中と混合し内包さ
せる工程 ３）加熱、撹拌を伴ったカプセル化工程また、必要に応
じ工程中に酵母菌及びその残渣の脱水もしくは乾燥工程
を組み入れることも可能である。
整した疎水性液体を酵母菌残渣分散液中と混合し内包さ
せる工程 ３）加熱、撹拌を伴ったカプセル化工程また、必要に応
じ工程中に酵母菌及びその残渣の脱水もしくは乾燥工程
を組み入れることも可能である。
１）の溶出工程は基本的にカプセル皮膜となる細胞壁を
なるべく変質、損傷せず、かつ溶出率か高くなる方法が
好ましい。ここで言う溶出率とは、初期添加未処理酵母
菌絶乾重量に対する溶出成分の絶対乾燥重量の割合を意
味する。
なるべく変質、損傷せず、かつ溶出率か高くなる方法が
好ましい。ここで言う溶出率とは、初期添加未処理酵母
菌絶乾重量に対する溶出成分の絶対乾燥重量の割合を意
味する。
酵母菌からの菌体内成分の溶出方法としては、酵母懸濁
液を適当な温度及びｐＨて一定時間処理したり、または
溶出促進剤を添加して処理するか、あるいは酵素剤を添
加して処理する方法がある。
液を適当な温度及びｐＨて一定時間処理したり、または
溶出促進剤を添加して処理するか、あるいは酵素剤を添
加して処理する方法がある。
溶出処理中は撹拌を伴うことが効果的である。溶出処理
温度は通常３０〜１００℃の範囲で行われるが、オート
クレーブで加圧処理を施すことにより１３０℃までの温
度を加えても溶出は可能である。処理時間は１分以上施
されるが、処理温度３０〜６０°Ｃの範囲ては、好まし
くは１時間以上、さらに好ましくは５時間以上節される
。酵母菌の変質・損傷を最小限にとどめるには当該処理
温度範囲が望ましい。菌体内成分の溶出をより効果的に
、かつ迅速に生じさせるために溶出促進剤添加が望まし
い。溶出促進剤としては低級アルコール、酢酸エチル、
アセトンの如き極性有機溶剤、無機塩類、糖類、パパイ
ン、４級アンモニウム塩、各種防菌・抗菌・殺菌剤及び
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムの如き塩基類等が使
用可能である。
温度は通常３０〜１００℃の範囲で行われるが、オート
クレーブで加圧処理を施すことにより１３０℃までの温
度を加えても溶出は可能である。処理時間は１分以上施
されるが、処理温度３０〜６０°Ｃの範囲ては、好まし
くは１時間以上、さらに好ましくは５時間以上節される
。酵母菌の変質・損傷を最小限にとどめるには当該処理
温度範囲が望ましい。菌体内成分の溶出をより効果的に
、かつ迅速に生じさせるために溶出促進剤添加が望まし
い。溶出促進剤としては低級アルコール、酢酸エチル、
アセトンの如き極性有機溶剤、無機塩類、糖類、パパイ
ン、４級アンモニウム塩、各種防菌・抗菌・殺菌剤及び
水酸化ナトリウム、水酸化カリウムの如き塩基類等が使
用可能である。
これらの溶出促進剤は酵母菌分散液１００ｇに対し４０
ｇ未満、好ましくは１．０〜２０ｇの範囲で添加される
。さらに酵素剤を添加して菌体内成分を強制的に分解し
溶出させることも可能である。
ｇ未満、好ましくは１．０〜２０ｇの範囲で添加される
。さらに酵素剤を添加して菌体内成分を強制的に分解し
溶出させることも可能である。
酵素剤としては種々あるがその中でもプロテアーゼが最
も効果的であり、酵母菌分散液１００ｇに対し１ｇ未満
、好ましくは０，０１〜０．１ｇの範囲で添加される。
も効果的であり、酵母菌分散液１００ｇに対し１ｇ未満
、好ましくは０，０１〜０．１ｇの範囲で添加される。
上記方法により菌体内成分の溶出が成されるが、その溶
出率が高い値であるほど菌体内に内包される疎水性液体
の内包量も多くなる。溶出率の値として、好ましくは１
０〜８Ｑｖｔ％、さらに好ましくは３０〜７０Ｗ１％以
上にすることが望ましい。
出率が高い値であるほど菌体内に内包される疎水性液体
の内包量も多くなる。溶出率の値として、好ましくは１
０〜８Ｑｖｔ％、さらに好ましくは３０〜７０Ｗ１％以
上にすることが望ましい。
これ以上の範囲に溶出を進ませることによりさらに高い
内包量が得られるが、溶出成分の一部がカプセル皮膜に
相当する細胞壁にまで及んでくるため、皮膜の堅牢性が
次第に失われてくる。したがって、過度の溶出は避けた
方が好ましいまた、菌体内成分溶出処理後は遠心分離法
等により、溶出成分と菌体残渣を分離することが好まし
い。すなわち、本発明者らが先に提案した特開昭６３−
８８０３３号公報による手法も菌体内に高い摂取量が得
られるものであるが、菌体内成分の溶出と疎水性液体の
浸透が同時に進行するため必然的に得られたカプセル分
散液中にも菌体内成分が混在する結果、液の着色、増粘
、さらには腐敗、カプセル粒子の凝集を起こし易くなり
、生産工程で支障を来すことも起こりえる。しかし、本
発明による方法であらかじめ溶出した成分を除去してお
けば、このような問題は解消されえるものである。
内包量が得られるが、溶出成分の一部がカプセル皮膜に
相当する細胞壁にまで及んでくるため、皮膜の堅牢性が
次第に失われてくる。したがって、過度の溶出は避けた
方が好ましいまた、菌体内成分溶出処理後は遠心分離法
等により、溶出成分と菌体残渣を分離することが好まし
い。すなわち、本発明者らが先に提案した特開昭６３−
８８０３３号公報による手法も菌体内に高い摂取量が得
られるものであるが、菌体内成分の溶出と疎水性液体の
浸透が同時に進行するため必然的に得られたカプセル分
散液中にも菌体内成分が混在する結果、液の着色、増粘
、さらには腐敗、カプセル粒子の凝集を起こし易くなり
、生産工程で支障を来すことも起こりえる。しかし、本
発明による方法であらかじめ溶出した成分を除去してお
けば、このような問題は解消されえるものである。
酵母菌体を構成する成分を大別すると、■ 主に細胞壁
を構成するグルカン、マンナン質を基材とした水不溶成
分 ■ 主に細胞膜を構成するリン脂質成分、及び他の脂質
成分 ■ 水、もしくは極性溶剤に可溶性の酵素及びタンパク
質、アミノ酸成分、糖質分、核酸成分に分けられ、これ
らは酵母の種類に応じ異なった配分をとる。本発明で述
べる溶出させるべき菌体内成分としては、主として■の
成分が対象となるが、溶出促進剤の種類、酵素剤の種類
及び処理条件によっては■も溶出の対象となる。
を構成するグルカン、マンナン質を基材とした水不溶成
分 ■ 主に細胞膜を構成するリン脂質成分、及び他の脂質
成分 ■ 水、もしくは極性溶剤に可溶性の酵素及びタンパク
質、アミノ酸成分、糖質分、核酸成分に分けられ、これ
らは酵母の種類に応じ異なった配分をとる。本発明で述
べる溶出させるべき菌体内成分としては、主として■の
成分が対象となるが、溶出促進剤の種類、酵素剤の種類
及び処理条件によっては■も溶出の対象となる。
本発明で使用される酵母菌とは、出芽もしくは分裂によ
り増殖する微生物の総称である。具体的には、 サツカロマイセス属の サツカロマイセス・セレビッシエ （Ｓａｃｃｈａ＋ｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）サツカロマイセス・ルーキシ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍ７ｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）サツ
力ロマイセスーカールスバーゲンシス（Ｓａｃｃｈａ＋
ａｍ７ｃｅ＋ ｃａ＋ｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）キャン
ディダ属の キャンディダ・ウティリス （Ｃａｎｄｉｄａ ｕｌｉｌｉｓ） キャンディダ・トロピカリス （Ｃａｎｄｉｄａ ｊ＋ｏｐｉｃａｌｌｉ＋ ）キャン
ディダ・リポリティカ （Ｃａｎｄｉｄａ １ｙｐｏ１７ｊｉｃａ）キャンディ
ダ・フレーベリ （Ｃａｎｄｉｔａ ｆｌａｖｅ＋ｉ ）等が使用できる
。
り増殖する微生物の総称である。具体的には、 サツカロマイセス属の サツカロマイセス・セレビッシエ （Ｓａｃｃｈａ＋ｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）サツカロマイセス・ルーキシ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍ７ｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ）サツ
力ロマイセスーカールスバーゲンシス（Ｓａｃｃｈａ＋
ａｍ７ｃｅ＋ ｃａ＋ｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）キャン
ディダ属の キャンディダ・ウティリス （Ｃａｎｄｉｄａ ｕｌｉｌｉｓ） キャンディダ・トロピカリス （Ｃａｎｄｉｄａ ｊ＋ｏｐｉｃａｌｌｉ＋ ）キャン
ディダ・リポリティカ （Ｃａｎｄｉｄａ １ｙｐｏ１７ｊｉｃａ）キャンディ
ダ・フレーベリ （Ｃａｎｄｉｔａ ｆｌａｖｅ＋ｉ ）等が使用できる
。
酵母菌の形状は酵母の種類により卵円形、球形、レモン
形、柱状、楕円形など各種の形態の物があるが、球形、
楕円形、卵円形の如き形態のものが好ましい。また、粒
径は１〜２０μｍが好ましい。
形、柱状、楕円形など各種の形態の物があるが、球形、
楕円形、卵円形の如き形態のものが好ましい。また、粒
径は１〜２０μｍが好ましい。
本発明で用いられるこれら酵母菌は、生のままでも乾燥
した状態でもよく、さらに死滅した状態でもよい。
した状態でもよく、さらに死滅した状態でもよい。
本発明で用いられる、酵母菌中に内包される疎水性液体
は、実質的に水不溶性の液体、もしくは加熱により液体
となるものであれば使用可能であり、綿実油、大豆油、
コーン油、オリーブ油、ヒマシ油、魚油、各種脂肪酸、
各種ステロイド等の動植物から抽出される油性液体、ま
た特にノーカーボン紙用として利用する場合にはパラフ
ィン油、塩素化パラフィン、塩素化ジフェニル、ジブチ
ルフタレート、ジオクチルフタレート、ジブチルマレエ
ート、０−ジクロルベンゼン、ジイソプロピルナフタレ
ンの如きアルキル化ナフタレン、１−フェニル−１−キ
シリルエタン等が挙げられる。
は、実質的に水不溶性の液体、もしくは加熱により液体
となるものであれば使用可能であり、綿実油、大豆油、
コーン油、オリーブ油、ヒマシ油、魚油、各種脂肪酸、
各種ステロイド等の動植物から抽出される油性液体、ま
た特にノーカーボン紙用として利用する場合にはパラフ
ィン油、塩素化パラフィン、塩素化ジフェニル、ジブチ
ルフタレート、ジオクチルフタレート、ジブチルマレエ
ート、０−ジクロルベンゼン、ジイソプロピルナフタレ
ンの如きアルキル化ナフタレン、１−フェニル−１−キ
シリルエタン等が挙げられる。
これらの疎水性液体には必要に応し、染料、香料、薬理
活性物質、食品素材、飼料素材などが溶解もしくは分散
され、得られるマイクロカプセルはノーカーボン紙の他
、化粧品、医薬品、食品、飼料、農薬等に使用される。
活性物質、食品素材、飼料素材などが溶解もしくは分散
され、得られるマイクロカプセルはノーカーボン紙の他
、化粧品、医薬品、食品、飼料、農薬等に使用される。
当該物質はまた、水溶性液体に非混和性の疎水性液体で
あれば単独での使用も可能である。
あれば単独での使用も可能である。
疎水性液体と酵母分散液との混合は、通常酵母分散液中
に疎水性液体を添加することにより行われる。この場合
、疎水性液体の酵母分散液中への添加は、単独でそのま
ま添加しても良いか、より均一な状態で酵母菌吉存在さ
せるためには、適当な乳化剤を含む水溶液で分散させて
乳化状態とした後、添加した方か好ましい。
に疎水性液体を添加することにより行われる。この場合
、疎水性液体の酵母分散液中への添加は、単独でそのま
ま添加しても良いか、より均一な状態で酵母菌吉存在さ
せるためには、適当な乳化剤を含む水溶液で分散させて
乳化状態とした後、添加した方か好ましい。
カプセル化工程における温度は特に限定はされないが、
好ましくは２０〜７０℃である。時間は１時間以上必要
であるが、内包される疎水性液体の量、カプセル化温度
により適宜変えることかできる。
好ましくは２０〜７０℃である。時間は１時間以上必要
であるが、内包される疎水性液体の量、カプセル化温度
により適宜変えることかできる。
カプセル化工程時に必要であれば、前記溶出促進剤、酵
素剤、乳化剤の他、触媒、硬膜剤、ｐＨ調節剤、防腐剤
、各種劣化防止剤等を添加することも可能である。
素剤、乳化剤の他、触媒、硬膜剤、ｐＨ調節剤、防腐剤
、各種劣化防止剤等を添加することも可能である。
本発明は、次の点で特開昭５８−１０７１８９号公報で
示される内容と明らかに異なるものである。第一に、本
発明においては疎水性液体をカプセル化する工程前に、
酵母菌中よりなるべく多くの菌体内成分を抽出する工程
を有する点。第二に、特開昭５８−１０７１８９号公報
で使用される微生物は脂質含有量が１０ｗｔ％以上と規
定されており、この種の酵母はいわゆる油脂形成性酵母
と称される高脂質含有量の酵母を対象としているのに対
し、本発明における酵母の脂質含有量は低い方が好まし
く、具体的には（０ｗｔ％を含む）】０ｗｔ５未満の低
脂質含有量の酵母を対象としている。更に、これら２種
の酵母は前記溶出促進剤の具体例として挙げた低級アル
コール、酢酸エチル、アセトンの如き極性有機溶剤と接
触した場合に本質的な違いが現れる。すなわち、高脂質
含有量の酵母がこれら極性溶剤と接触すると「脂質増量
剤」として菌体内の脂質中に取り込まれるのに対し、本
発明で対象としている低脂質含有量の酵母と接触した場
合には「溶出促進剤」として菌体内成分の溶出のために
作用し、基本的には菌体内に取り込まれることはなく、
全く異なる作用効果を発揮するものである。
示される内容と明らかに異なるものである。第一に、本
発明においては疎水性液体をカプセル化する工程前に、
酵母菌中よりなるべく多くの菌体内成分を抽出する工程
を有する点。第二に、特開昭５８−１０７１８９号公報
で使用される微生物は脂質含有量が１０ｗｔ％以上と規
定されており、この種の酵母はいわゆる油脂形成性酵母
と称される高脂質含有量の酵母を対象としているのに対
し、本発明における酵母の脂質含有量は低い方が好まし
く、具体的には（０ｗｔ％を含む）】０ｗｔ５未満の低
脂質含有量の酵母を対象としている。更に、これら２種
の酵母は前記溶出促進剤の具体例として挙げた低級アル
コール、酢酸エチル、アセトンの如き極性有機溶剤と接
触した場合に本質的な違いが現れる。すなわち、高脂質
含有量の酵母がこれら極性溶剤と接触すると「脂質増量
剤」として菌体内の脂質中に取り込まれるのに対し、本
発明で対象としている低脂質含有量の酵母と接触した場
合には「溶出促進剤」として菌体内成分の溶出のために
作用し、基本的には菌体内に取り込まれることはなく、
全く異なる作用効果を発揮するものである。
このように、本発明と特開昭５８−１０７１８９号公報
とでは極性有機溶剤の添加が成される点ては共通してい
るが、溶出工程の有無、対象となる酵母菌の組成、及び
それに対する極性有機溶剤の作用の点で根本的に異なる
ものである。
とでは極性有機溶剤の添加が成される点ては共通してい
るが、溶出工程の有無、対象となる酵母菌の組成、及び
それに対する極性有機溶剤の作用の点で根本的に異なる
ものである。
（Ｅ）実施例
以下に、本発明を実施例により詳細に説明する。
なお、本発明は実施例に限定されるものではない。
実施例、及び比較例中に示された酵母菌重量は、全て生
酵母の乾燥状態での重量である。
酵母の乾燥状態での重量である。
実施例１
市販のパン酵母（鐘淵化学工業製生酵母［サツカロマイ
セス・セレビッシエ］、脂質含有量２ｗｔ％）１０ｇを
含む分散液１００ｇに、エタノール１０ｇを添加した後
、回転式振盪培養機中で温度４０℃の条件下で２４時間
振盪し、菌体内の水溶性成分を菌体外に溶出させた。遠
心分離操作により溶出液と酵母菌残渣を分離した後、溶
出液の全量を１０５℃の乾燥器中で水分を蒸発させたと
ころ、６．０ｇの不揮発成分か残り、初期添加酵母菌の
６０Ｗ１％が溶出したことが確認できた。
セス・セレビッシエ］、脂質含有量２ｗｔ％）１０ｇを
含む分散液１００ｇに、エタノール１０ｇを添加した後
、回転式振盪培養機中で温度４０℃の条件下で２４時間
振盪し、菌体内の水溶性成分を菌体外に溶出させた。遠
心分離操作により溶出液と酵母菌残渣を分離した後、溶
出液の全量を１０５℃の乾燥器中で水分を蒸発させたと
ころ、６．０ｇの不揮発成分か残り、初期添加酵母菌の
６０Ｗ１％が溶出したことが確認できた。
次に、乳化剤としてＱ、 ５ｗ＋％のノニオン系界部
活性剤（花王アトラス製、商品名Ｔｗｅｅｎ８０）水溶
液２０ｇ中に、疎水性液体として３−Ｎメチルシクロへ
キシルアミノ−６−メチル−７アニリノフルオラン（新
日曹化学製黒色発色染料、商品名ＰＳＩ）−１５０）１
．１ｇを含む高沸点疎水性液体（日本石油化学製、商品
名ハイゾールＳＡＳ ＮＮ−２９６）２２を、激しく
撹拌しながら添加し、平均粒径８μｍの疎水性液体の乳
化液を得た。この乳化液を酵母菌残渣分散液中に添加し
た後、回転式振盪機中で温度５０℃、撹拌スピード２０
Ｏｒｐｍの条件下で３時間振盪を続けた。 その結果、
疎水性液体は全て酵母菌中に内包され、マイクロカプセ
ル化が完了した。このマイクロカプセル分散液をそのま
ま４０ｇ／ｒｄの上質紙に約５ ｇｌｏｆの塗抹量でバ
ーコードを施したところ、発色良好なノーカーボン紙用
上用紙が得られた。
活性剤（花王アトラス製、商品名Ｔｗｅｅｎ８０）水溶
液２０ｇ中に、疎水性液体として３−Ｎメチルシクロへ
キシルアミノ−６−メチル−７アニリノフルオラン（新
日曹化学製黒色発色染料、商品名ＰＳＩ）−１５０）１
．１ｇを含む高沸点疎水性液体（日本石油化学製、商品
名ハイゾールＳＡＳ ＮＮ−２９６）２２を、激しく
撹拌しながら添加し、平均粒径８μｍの疎水性液体の乳
化液を得た。この乳化液を酵母菌残渣分散液中に添加し
た後、回転式振盪機中で温度５０℃、撹拌スピード２０
Ｏｒｐｍの条件下で３時間振盪を続けた。 その結果、
疎水性液体は全て酵母菌中に内包され、マイクロカプセ
ル化が完了した。このマイクロカプセル分散液をそのま
ま４０ｇ／ｒｄの上質紙に約５ ｇｌｏｆの塗抹量でバ
ーコードを施したところ、発色良好なノーカーボン紙用
上用紙が得られた。
実施例２
実施例１と同様の酵母分散液１００ｇにアセトン５ｇを
添加し、４０℃の条件下で２４時間振盪腰菌体内の水溶
性成分を菌体外に溶出させた。
添加し、４０℃の条件下で２４時間振盪腰菌体内の水溶
性成分を菌体外に溶出させた。
実施例１と同様の方法で溶出率を測定したところ、初期
酵母菌の４５Ｗ１％が溶出したことが確認できた。 以
下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様にし
てマイクロカプセルを調製した。
酵母菌の４５Ｗ１％が溶出したことが確認できた。 以
下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様にし
てマイクロカプセルを調製した。
調製したマイクロカプセルを上質紙に塗抹することによ
り、発色良好なノーカーボン紙用上用紙が得られた。
り、発色良好なノーカーボン紙用上用紙が得られた。
実施例３
実施例１と同様の酵母分散液１００ｇを１２０℃で１０
分間オートクレーブ処理して、菌体内成分を溶出させた
。実施例１と同様の方法で溶出率を測定したところ、初
期酵母菌の３Ｑｖｊ％が溶出したことが確認できた。
分間オートクレーブ処理して、菌体内成分を溶出させた
。実施例１と同様の方法で溶出率を測定したところ、初
期酵母菌の３Ｑｖｊ％が溶出したことが確認できた。
以下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様に
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
実施例４
実施例１と同様の酵母分散液１００ｇのｐＨを５．５に
調整し、５１℃の条件下で１６時間振盪を行い、菌体内
成分を溶出させた。実施例１と同様の方法で溶出率を測
定したところ、初期酵母菌の４６ｗｔ％が溶出したこと
が確認できた。
調整し、５１℃の条件下で１６時間振盪を行い、菌体内
成分を溶出させた。実施例１と同様の方法で溶出率を測
定したところ、初期酵母菌の４６ｗｔ％が溶出したこと
が確認できた。
以下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様に
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
実施例５
乾燥ビール酵母（サツカロマイセス・セレビッシエ）１
０ｇに水９０ｇを加えて懸濁し、ｐＨを６．０に調整し
た後プロテアーゼ（大野製薬■製、商品名プロテアーゼ
Ｎ）を０．０３ｇ添加し５０℃の条件下で１６時間振盪
を行い、菌体内成分を溶出させた。実施例１と同様の方
法で溶出率を測定したところ、初期酵母菌の４０Ｗ（％
が溶出したことが確認できた。
０ｇに水９０ｇを加えて懸濁し、ｐＨを６．０に調整し
た後プロテアーゼ（大野製薬■製、商品名プロテアーゼ
Ｎ）を０．０３ｇ添加し５０℃の条件下で１６時間振盪
を行い、菌体内成分を溶出させた。実施例１と同様の方
法で溶出率を測定したところ、初期酵母菌の４０Ｗ（％
が溶出したことが確認できた。
以下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様に
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
実施例６
好気培養で得られたトルラ酵母（キャンディダ・ウティ
リス）１５ｇに６ｗｔ％の塩化ナトリウム溶液９０ｇを
加え、ｐＨを６．０に調整した懸濁液を９０℃の条件下
で４時間保ち、菌体内成分を溶出させた。実施例１と同
様の方法で溶出率を測定したところ、初期酵母菌の３０
Ｗ１％が溶出したことが確認できた。
リス）１５ｇに６ｗｔ％の塩化ナトリウム溶液９０ｇを
加え、ｐＨを６．０に調整した懸濁液を９０℃の条件下
で４時間保ち、菌体内成分を溶出させた。実施例１と同
様の方法で溶出率を測定したところ、初期酵母菌の３０
Ｗ１％が溶出したことが確認できた。
以下、上記酵母残渣分散液を用いて、実施例１と同様に
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
してマイクロカプセルを調製した。調製したマイクロカ
プセルを上質紙に塗抹することにより、発色良好なノー
カーボン紙用上用紙が得られた。
（Ｆ）発明の効果
本発明に示されるように、酵母菌中の成分を溶出させる
工程を取り入れることにより、特開昭５８−１０７１８
９号公報記載のカプセル化法に比べ疎水性液体を多量か
つ迅速に内包させることが可能になった。
工程を取り入れることにより、特開昭５８−１０７１８
９号公報記載のカプセル化法に比べ疎水性液体を多量か
つ迅速に内包させることが可能になった。
また、本発明の効果として、着色、腐敗の原因となるタ
ンパク質成分があらかじめ抽出・除去されるため、カプ
セルの分散性に悪影響を及ぼすことなくしかも腐敗の恐
れもなく、工業的安定生産に大いに寄与するものであっ
た。
ンパク質成分があらかじめ抽出・除去されるため、カプ
セルの分散性に悪影響を及ぼすことなくしかも腐敗の恐
れもなく、工業的安定生産に大いに寄与するものであっ
た。
以上の如く、本発明は微生物を用いたマイクロカプセル
化法として、品質的、工業的に優れた手段である。
化法として、品質的、工業的に優れた手段である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、酵母菌体内に疎水性液体を内包してなるマイクロカ
プセルの製造方法において、あらかじめ菌体内成分を溶
出させた酵母を用いることを特徴とするマイクロカプセ
ルの製造方法。 ２、菌体内成分の溶出率が１０〜８０ｗｔ％であること
を特徴とする請求項１項記載のマイクロカプセル製造方
法。 ３、酵母菌体中の脂質含有量が１０ｗｔ％未満である請
求項１又は２記載のマイクロカプセル製造方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2104432A JPH0732870B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | マイクロカプセルの製造方法 |
| EP91303553A EP0453316B1 (en) | 1990-04-20 | 1991-04-19 | Process for preparation of microcapsules |
| DE69112255T DE69112255T2 (de) | 1990-04-20 | 1991-04-19 | Verfahren zur Herstellung von Mikrokapseln. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2104432A JPH0732870B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | マイクロカプセルの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH044033A true JPH044033A (ja) | 1992-01-08 |
| JPH0732870B2 JPH0732870B2 (ja) | 1995-04-12 |
Family
ID=14380513
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2104432A Expired - Fee Related JPH0732870B2 (ja) | 1990-04-20 | 1990-04-20 | マイクロカプセルの製造方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0453316B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0732870B2 (ja) |
| DE (1) | DE69112255T2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08508204A (ja) * | 1993-03-31 | 1996-09-03 | シー・ピー・シー・インターナショナル・インコーポレイテッド | 物質をバイオカプセルにカプセル封入する方法 |
| WO2003041509A1 (en) | 2001-11-15 | 2003-05-22 | San-Ei Gen F.F.I., Inc. | Microcapsules and oral compositions containing the same |
| JP2003521494A (ja) * | 2000-01-26 | 2003-07-15 | ルビッツ ヴェルナー | 細菌ゴーストの閉鎖 |
| WO2019212050A1 (ja) * | 2018-05-01 | 2019-11-07 | テーブルマーク株式会社 | マイクロカプセル |
| US10638750B2 (en) | 2004-05-20 | 2020-05-05 | Eden Research Plc | Compositions containing a hollow glucan particle or a cell wall particle encapsulating a terpene component, methods of making and using them |
| US10729130B2 (en) | 2004-01-23 | 2020-08-04 | Eden Research Plc | Nematicidal compositions and methods of using them |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9022560D0 (en) * | 1990-10-17 | 1990-11-28 | G B Biotechnology Limited | Processing of waste |
| IT1294368B1 (it) * | 1997-08-29 | 1999-03-24 | Dox Al Italia Spa | Microorganismi inattivati contenenti enzimi digestivi, processo per la loro preparazione e loro uso in campo alimentare |
| WO2006045404A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Unilever N.V. | Granular cooking aid comprising microbial encapsulates, and cubes and tablets comprising such granular cooking aid |
| JP2009518029A (ja) * | 2005-12-08 | 2009-05-07 | フイルメニツヒ ソシエテ アノニム | フレーバーカプセルを含有するインスタント食品 |
| CN100488618C (zh) * | 2006-09-25 | 2009-05-20 | 上海理工大学 | 用静电喷雾制备液芯微胶囊的方法 |
| EP2022503B1 (de) | 2007-08-07 | 2011-10-19 | Symrise AG | Verkapselte Vacciniumextrakte mit ausgewogener Magen-Darm-Freisetzung |
| RU2654748C2 (ru) * | 2013-02-25 | 2018-05-22 | Фирмениш Са | Инкапсулированные частицы плазмолизированных микроорганизмов |
| WO2016069740A1 (en) * | 2014-10-29 | 2016-05-06 | The Regents Of The University Of California | Bioactive delivery vehicles |
| WO2025039058A1 (pt) * | 2023-08-18 | 2025-02-27 | Chemyunion Ltda | Composição cosmética compreendendo carreadores baseados em micro-organismos para entrega de compostos ativos; processo de produção; usos e métodos relacionados |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4001480A (en) * | 1974-08-16 | 1977-01-04 | Swift & Company | Encapsulation process utilizing microorganisms and products produced thereby |
| DD247570A3 (de) * | 1983-01-14 | 1987-07-15 | Univ Berlin Humboldt | Vesikulaeres trenn-, fuell- und traegermaterial |
| GB2162147A (en) * | 1984-07-26 | 1986-01-29 | Dunlop Ltd | Encapsulation and encapsulated products |
| US4696863A (en) * | 1984-08-28 | 1987-09-29 | Mitsubishi Paper Mills, Ltd. | Biocapsule |
| DD262808A1 (de) * | 1987-08-11 | 1988-12-14 | Univ Berlin Humboldt | Vesikulaere fuellkoerper fuer die chromatographie aus denaturierten mikroorganismen und verfahren zur herstellung |
-
1990
- 1990-04-20 JP JP2104432A patent/JPH0732870B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-04-19 DE DE69112255T patent/DE69112255T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-04-19 EP EP91303553A patent/EP0453316B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08508204A (ja) * | 1993-03-31 | 1996-09-03 | シー・ピー・シー・インターナショナル・インコーポレイテッド | 物質をバイオカプセルにカプセル封入する方法 |
| JP2003521494A (ja) * | 2000-01-26 | 2003-07-15 | ルビッツ ヴェルナー | 細菌ゴーストの閉鎖 |
| WO2003041509A1 (en) | 2001-11-15 | 2003-05-22 | San-Ei Gen F.F.I., Inc. | Microcapsules and oral compositions containing the same |
| US10729130B2 (en) | 2004-01-23 | 2020-08-04 | Eden Research Plc | Nematicidal compositions and methods of using them |
| US10638750B2 (en) | 2004-05-20 | 2020-05-05 | Eden Research Plc | Compositions containing a hollow glucan particle or a cell wall particle encapsulating a terpene component, methods of making and using them |
| WO2019212050A1 (ja) * | 2018-05-01 | 2019-11-07 | テーブルマーク株式会社 | マイクロカプセル |
| CN112055611A (zh) * | 2018-05-01 | 2020-12-08 | 泰宝美客株式会社 | 微胶囊 |
| KR20210004970A (ko) * | 2018-05-01 | 2021-01-13 | 테이부루마크 가부시키가이샤 | 마이크로 캡슐 |
| JPWO2019212050A1 (ja) * | 2018-05-01 | 2021-05-27 | テーブルマーク株式会社 | マイクロカプセル |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0453316B1 (en) | 1995-08-23 |
| DE69112255D1 (de) | 1995-09-28 |
| DE69112255T2 (de) | 1996-02-01 |
| EP0453316A1 (en) | 1991-10-23 |
| JPH0732870B2 (ja) | 1995-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100418544B1 (ko) | 캡슐화된생성물 | |
| JPH044033A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| CA1301682C (en) | Microbial encapsulation | |
| US5288632A (en) | Encapsulation of material in microbial cells | |
| CA1060364A (en) | Encapsulation process utilizing microorganisms and products produced thereby | |
| EP0460945B1 (en) | Process for producing microcapsules | |
| EP1454534A1 (en) | Microcapsules and oral compositions containing the same | |
| EP1371410A1 (en) | Complex coacervates containing whey proteins | |
| US3922373A (en) | Solid microglobules containing dispersed materials | |
| JPH0832225B2 (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JPH1076155A (ja) | 非脂溶性物質含有マイクロカプセルおよびその製造方法 | |
| JP3034069B2 (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| DE68915159T2 (de) | Eingekapselte bakterie. | |
| JPH0463127A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JPS6388033A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JPH0549035B2 (ja) | ||
| JPH0515770A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JP2978299B2 (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JPH05138010A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| JP7706887B2 (ja) | 微生物マイクロカプセル及びその製造方法 | |
| JPH0568298B2 (ja) | ||
| HK1018026B (en) | Encapsulated product | |
| JPH05237371A (ja) | マイクロカプセルの製造方法 | |
| Jabeen et al. | Microencapsulation: A potential and promising approach in drug delivery system | |
| JP2024004001A (ja) | 微生物マイクロカプセルの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080412 Year of fee payment: 13 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080412 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090412 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090412 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100412 Year of fee payment: 15 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |