JPH0453510B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0453510B2 JPH0453510B2 JP57174854A JP17485482A JPH0453510B2 JP H0453510 B2 JPH0453510 B2 JP H0453510B2 JP 57174854 A JP57174854 A JP 57174854A JP 17485482 A JP17485482 A JP 17485482A JP H0453510 B2 JPH0453510 B2 JP H0453510B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serine
- glycine
- culture
- medium
- carbon source
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は微生物の作用を利用してグリシンより
Ｌ−セリンを製造する発酵法によるＬ−セリンの
製造法に関する。 従来、発酵法によりグリシンからＬ−セリンを
製造する方法としては、ブレビバクテリウム属の
微生物（特公昭45−11114）、アルスロバクター
属、ピヒア属、キヤンデイダ属（特公昭46−
32793）、更にはコリネバクテリウム属（特公昭51
−6232）又はノカルデイア属（特公昭51−9391）
に属しグリシンからＬ−セリンを生成する能力を
有する微生物を利用する方法が知られている。グ
リシンからＬ−セリンを発酵法により工業的有利
に生産するためには、基質のグリシン濃度を高く
して蓄積量を向上させ、かつ発酵収率を高くする
ことが必要であるが、グリシン濃度を高くすると
微生物の増殖が著しく抑制されるため発酵が遅延
し効率的にＬ−セリンを生産することができな
い。一方、発酵収率を高めるために炭素源の濃度
を高くすると微生物の初期の生育が阻害されてし
まい、収率は逆に低下してしまうため発酵収率を
高くすることは困難であつた。かかる事情のもと
に本発明者等はＬ−セリンの蓄積量を高め、更に
発酵収率を向上させてＬ−セリンを工業的有利に
生産する方法を開発することを目的として種々研
究を重ねた結果、炭素源である糖の初期濃度を低
いレベルで培養を開始して微生物の増殖を行い、
Ｌ−セリンの生成が開始された後炭素源を連続的
又は間歇的に供給して培養液中の炭素源濃度を１
〜６ｇ／dlの低いレベルに制御しつつ発酵を行う
いわゆる糖フイード法を導入することにより4.0
ｇ／dl以上の高濃度の基質からＬ−セリンが高収
率で生産されることを発見した。本発明はこの発
見に基づいて完成されたものである。以下、本発
明の方法について説明する。 本発明で使用する微生物はグリシンからＬ−セ
リンを生成する能力を有する微生物であり、例え
ば特公昭45−11114号公報に記載されているブレ
ビバクテリウム属のＬ−セリン生産菌、特公昭46
−32793のアルスロバクター属、キヤンデイダ属
及びピヒア属のＬ−セリン生産菌、更には特公昭
51−6232のコリネバクテリウム属のＬ−セリン生
産菌等が使用される。更に具体的には、例えば、 コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3411 FERM−P1685 コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3412 FERM−P1686 （Ｌ−ロイシン及びＬ−メチオニン要求性） コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3413 FERM−P1687 （Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシン要求性） 等が使用される。 本発明で使用される培地は、炭素源、窒素源、
無機塩類及び必要に応じてビタミン、アミノ酸等
の有機微量栄養素を適宜含有する通常の栄養培地
である。上記炭素源としては、グルコース、フラ
クトース、シユークロース、マルトース等の糖
類、これら糖類を含有する澱粉糖化液、果汁、糖
蜜、その他酢酸、エタノール等の有機酸及びアル
コール類が使用される。炭素源の培地中の濃度は
２〜４ｇ／dl程度が望ましく、10ｇ／dl以上では
微生物の増殖が抑制される。 窒素源としては硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素、ア
ンモニア等が使用され、その他アミノ酸、ペプト
ン等も使用される。 無機塩類としてはカリウム塩、マグネシウム
塩、リン酸塩、硫酸塩、マンガン塩等が使用さ
れ、有機微量栄養素としては各種ビタミン、アミ
ノ酸、核酸、ビオチン等が必要に於て適宜使用さ
れる。 基質のグリシンは、上記培地に4.0ｇ／dl以上
添加する。添加方法は、予め培地に全量添加して
もよく又分割して培養液に添加することもでき
る。 微生物の培養は好気的に行うのがよく、培養温
度は20〜40℃、培養中のPHはアンモニア、尿素、
鉱酸等を用いて5.0〜9.0の範囲に調整される。こ
のようにして培養を行うと、グリシン濃度が高い
にもかかわらず微生物は良好に増殖し、Ｌ−セリ
ンの生成が開始される。Ｌ−セリンの生成が開始
された後は、上記炭素源を連続的又は間歇的に供
給し、培養液中の炭素源の濃度を２〜４ｇ／dl以
上に保ちつつ培養を行い、炭素源の消費速度が実
質的に低下した時点で炭素源の供給を停止し、約
70〜90時間で発酵を終了する。このようにして培
養することによりＬ−セリンの蓄積量は高くなり
2.4ｇ／dlまで達し、発酵収率も52％まで向上す
ることができる。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ グルコースを6.0ｇ／dl含む第１表に示す組成
のＡ系列の培地及びグルコースを12.0ｇ／dl含む
Ｂ系列の倍地を調整し、PHを7.0に調節後、1.0
容小型ジヤーフアーメンターに300ml宛分注し、
120℃で10分間加熱、滅菌した。 第１表 培地組成 成 分 1.0当りの含量 グルコース 60又は120ｇ KH2PO4 1.0〃 MgSO4・7H2O 0.5〃 Ｌ−イソロイシン 1.0〃 Ｌ−ロイシン 0.3〃 Ｌ−メチオニン 0.6〃 ビオチン 200μｇ サイアミン塩酸塩 １mg 葉 酸 １〃 ニコチン酸アミド 2.5〃大豆蛋白分解液 0.4ｇ（TN換算） 夫々の培地に、別途加熱殺菌処理したグリシン
水溶液を添加し、各培地中のグリシン濃度を第２
表に示す濃度に調節した。夫々の培地に、予め30
℃で40時間フラスコ振盪したコリネバクテリウ
ム・グリシノフイラムAJ3412の種培養液15mlを
接種し、34℃で通気撹拌培養（1/2V.V.M.，
1200rpm）を開始した。Ａ系列の培地を使用した
場合には、20時間経過後、連続的にグルコースを
供給し、培養液中のグルコース濃度を2.0ｇ／dl
のレベルに制御しつつ、又、アンモニアガスを用
いてPHを6.5〜8.0の範囲に保ちつつ培養を行い65
時間でグルコースの供給を停止し、72時間で培養
を終了した。 一方、Ｂ培地については、グルコースを供給す
ることなくPH制御のみを行い72時間で培養を終了
した。このようにして得られた各培養液について
Ｌ−セリンの蓄積量を測定し、対グリシン当りの
収率を求めた。その結果を第２表に示す。
Ｌ−セリンを製造する発酵法によるＬ−セリンの
製造法に関する。 従来、発酵法によりグリシンからＬ−セリンを
製造する方法としては、ブレビバクテリウム属の
微生物（特公昭45−11114）、アルスロバクター
属、ピヒア属、キヤンデイダ属（特公昭46−
32793）、更にはコリネバクテリウム属（特公昭51
−6232）又はノカルデイア属（特公昭51−9391）
に属しグリシンからＬ−セリンを生成する能力を
有する微生物を利用する方法が知られている。グ
リシンからＬ−セリンを発酵法により工業的有利
に生産するためには、基質のグリシン濃度を高く
して蓄積量を向上させ、かつ発酵収率を高くする
ことが必要であるが、グリシン濃度を高くすると
微生物の増殖が著しく抑制されるため発酵が遅延
し効率的にＬ−セリンを生産することができな
い。一方、発酵収率を高めるために炭素源の濃度
を高くすると微生物の初期の生育が阻害されてし
まい、収率は逆に低下してしまうため発酵収率を
高くすることは困難であつた。かかる事情のもと
に本発明者等はＬ−セリンの蓄積量を高め、更に
発酵収率を向上させてＬ−セリンを工業的有利に
生産する方法を開発することを目的として種々研
究を重ねた結果、炭素源である糖の初期濃度を低
いレベルで培養を開始して微生物の増殖を行い、
Ｌ−セリンの生成が開始された後炭素源を連続的
又は間歇的に供給して培養液中の炭素源濃度を１
〜６ｇ／dlの低いレベルに制御しつつ発酵を行う
いわゆる糖フイード法を導入することにより4.0
ｇ／dl以上の高濃度の基質からＬ−セリンが高収
率で生産されることを発見した。本発明はこの発
見に基づいて完成されたものである。以下、本発
明の方法について説明する。 本発明で使用する微生物はグリシンからＬ−セ
リンを生成する能力を有する微生物であり、例え
ば特公昭45−11114号公報に記載されているブレ
ビバクテリウム属のＬ−セリン生産菌、特公昭46
−32793のアルスロバクター属、キヤンデイダ属
及びピヒア属のＬ−セリン生産菌、更には特公昭
51−6232のコリネバクテリウム属のＬ−セリン生
産菌等が使用される。更に具体的には、例えば、 コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3411 FERM−P1685 コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3412 FERM−P1686 （Ｌ−ロイシン及びＬ−メチオニン要求性） コリネバクテリウム・グリシノフイラム
AJ3413 FERM−P1687 （Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシン要求性） 等が使用される。 本発明で使用される培地は、炭素源、窒素源、
無機塩類及び必要に応じてビタミン、アミノ酸等
の有機微量栄養素を適宜含有する通常の栄養培地
である。上記炭素源としては、グルコース、フラ
クトース、シユークロース、マルトース等の糖
類、これら糖類を含有する澱粉糖化液、果汁、糖
蜜、その他酢酸、エタノール等の有機酸及びアル
コール類が使用される。炭素源の培地中の濃度は
２〜４ｇ／dl程度が望ましく、10ｇ／dl以上では
微生物の増殖が抑制される。 窒素源としては硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩、尿素、ア
ンモニア等が使用され、その他アミノ酸、ペプト
ン等も使用される。 無機塩類としてはカリウム塩、マグネシウム
塩、リン酸塩、硫酸塩、マンガン塩等が使用さ
れ、有機微量栄養素としては各種ビタミン、アミ
ノ酸、核酸、ビオチン等が必要に於て適宜使用さ
れる。 基質のグリシンは、上記培地に4.0ｇ／dl以上
添加する。添加方法は、予め培地に全量添加して
もよく又分割して培養液に添加することもでき
る。 微生物の培養は好気的に行うのがよく、培養温
度は20〜40℃、培養中のPHはアンモニア、尿素、
鉱酸等を用いて5.0〜9.0の範囲に調整される。こ
のようにして培養を行うと、グリシン濃度が高い
にもかかわらず微生物は良好に増殖し、Ｌ−セリ
ンの生成が開始される。Ｌ−セリンの生成が開始
された後は、上記炭素源を連続的又は間歇的に供
給し、培養液中の炭素源の濃度を２〜４ｇ／dl以
上に保ちつつ培養を行い、炭素源の消費速度が実
質的に低下した時点で炭素源の供給を停止し、約
70〜90時間で発酵を終了する。このようにして培
養することによりＬ−セリンの蓄積量は高くなり
2.4ｇ／dlまで達し、発酵収率も52％まで向上す
ることができる。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ グルコースを6.0ｇ／dl含む第１表に示す組成
のＡ系列の培地及びグルコースを12.0ｇ／dl含む
Ｂ系列の倍地を調整し、PHを7.0に調節後、1.0
容小型ジヤーフアーメンターに300ml宛分注し、
120℃で10分間加熱、滅菌した。 第１表 培地組成 成 分 1.0当りの含量 グルコース 60又は120ｇ KH2PO4 1.0〃 MgSO4・7H2O 0.5〃 Ｌ−イソロイシン 1.0〃 Ｌ−ロイシン 0.3〃 Ｌ−メチオニン 0.6〃 ビオチン 200μｇ サイアミン塩酸塩 １mg 葉 酸 １〃 ニコチン酸アミド 2.5〃大豆蛋白分解液 0.4ｇ（TN換算） 夫々の培地に、別途加熱殺菌処理したグリシン
水溶液を添加し、各培地中のグリシン濃度を第２
表に示す濃度に調節した。夫々の培地に、予め30
℃で40時間フラスコ振盪したコリネバクテリウ
ム・グリシノフイラムAJ3412の種培養液15mlを
接種し、34℃で通気撹拌培養（1/2V.V.M.，
1200rpm）を開始した。Ａ系列の培地を使用した
場合には、20時間経過後、連続的にグルコースを
供給し、培養液中のグルコース濃度を2.0ｇ／dl
のレベルに制御しつつ、又、アンモニアガスを用
いてPHを6.5〜8.0の範囲に保ちつつ培養を行い65
時間でグルコースの供給を停止し、72時間で培養
を終了した。 一方、Ｂ培地については、グルコースを供給す
ることなくPH制御のみを行い72時間で培養を終了
した。このようにして得られた各培養液について
Ｌ−セリンの蓄積量を測定し、対グリシン当りの
収率を求めた。その結果を第２表に示す。
【表】
〓
(バツチ法)
(バツチ法)
Claims (1)
- １ 4.0ｇ／dl以上のグリシンを含有する栄養培
地にグリシンよりＬ−セリンを生成する能力を有
する微生物を培養し、Ｌ−セリンの生産が開始さ
れた後、炭素源を連続的又は間歇的に供給してＬ
−セリンを生成せしめ、該Ｌ−セリンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−セリンの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17485482A JPS5966890A (ja) | 1982-10-05 | 1982-10-05 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17485482A JPS5966890A (ja) | 1982-10-05 | 1982-10-05 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5966890A JPS5966890A (ja) | 1984-04-16 |
| JPH0453510B2 true JPH0453510B2 (ja) | 1992-08-26 |
Family
ID=15985809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17485482A Granted JPS5966890A (ja) | 1982-10-05 | 1982-10-05 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5966890A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5737320A (en) * | 1980-08-19 | 1982-03-01 | Showa Electric Wire & Cable Co Ltd | Coupling part of light emitting element and optical fiber |
-
1982
- 1982-10-05 JP JP17485482A patent/JPS5966890A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5966890A (ja) | 1984-04-16 |
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