JPH045434B2 - - Google Patents
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- JPH045434B2 JPH045434B2 JP7146083A JP7146083A JPH045434B2 JP H045434 B2 JPH045434 B2 JP H045434B2 JP 7146083 A JP7146083 A JP 7146083A JP 7146083 A JP7146083 A JP 7146083A JP H045434 B2 JPH045434 B2 JP H045434B2
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- chelating agent
- tryptophan
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明は、トリプトフアン・シンセターゼ（イ
ンドールとＬ−セリンとからＬ−トリプトフアン
を合成する反応を触媒する酵素）を含有するエツ
シエリヒア・コリに属する微生物菌体懸濁液に、
エチレンアミン系のキレート剤を添加することに
より、菌体内のトリプトフアン・シンセターゼの
失活を防止する方法に関するものである。 近年、Ｌ−トリプトフアンは医薬用のみならず
飼料添加剤としての効果が世の注目を集めるに至
り、工業的規模による安価な本物質生産の期待が
高まつている。Ｌ−トリプトフアンを製造する方
法の中で非常に有望視されている方法の一つにイ
ンドールとＬ−セリンとからＬ−トリプトフアン
を製造する酵素的生産方法がある。該反応を触媒
する酵素がトリプトフアン・シンセターゼであ
り、主として遺伝的に改良されたエツシエリヒア
属に属する微生物の菌体内に大量に生産される。
本酵素は菌体内に生産されるので菌体そのものを
酵素源として利用するのが工業的には有利である
が、この酵素を商業的規模で使用するためには、
例えば、単位時間、単位菌体当りのＬ−トリプト
フアン合成能で示される酵素活性が水溶液中で低
下しないように保たれる必要がある。 従来、菌体内のトリプトフアン・シンセターゼ
失活を防止する方法については全く知られておら
ず、本発明者らの試験によれば、例えば本酵素を
35℃の水溶液中に45時間放置するとその残存活性
は殆んど認められず実用上問題が多かつた。 本発明者らは、菌体内トリプトフアン・シンセ
ターゼの失活を防止する方法について種々検討し
た結果、該菌体懸濁液中に0.001〜0.25モルの濃
度になるようにエチレンアミン系キレート剤を添
加することにより本酵素が著しく安定化されて失
活が防止されることを見出し、本発明を完成し
た。 本発明に使用するトリプトフアン・シンセター
ゼを菌体内に大量に生産する微生物としてはエツ
シエリヒア・コリに属する微生物、例えばエツシ
エリヒア・コリMT−10232（FERM BP−19）、
エツシエリヒア・コリMT−10242（FERM BP−
20）などが用いられる。 エチレンアミン系のキレート剤としては、エチ
レンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢
酸、エチレングリコール（２−アミノエチルエー
テル）四酢酸、エチレンジアミン二酢酸、２−ヒ
ドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸など、好
ましくはエチレンジアミン四酢酸、ジエチレント
リアミン五酢酸などが用いられる。 懸濁液中の乾燥菌体濃度は１〜50ｇ／、好ま
しくは５〜30ｇ／の範囲で使用され、またキレ
ート剤の濃度には懸濁液中の乾燥菌体濃度に比例
して用いるの最適であり、通常１ｇの乾燥菌体量
に対して約0.005モルのキレート剤を使用するこ
とが好ましい。従つて菌体懸濁液中の乾燥菌体濃
度が１〜50ｇ／の場合、キレート剤の濃度はそ
れに対応して0.005〜0.25モル／の範囲で使用
される。さらに、懸濁液のPHは７〜９の範囲に調
整するのが望ましく、温度については特に制限は
ないが通常10〜50℃の範囲で操作される。 本発明の酵素の失活を防止する方法によれば、
菌体内トリプトフアン・シンセターゼを水溶液中
で安定に保つことができるので、本発明はトリプ
トフアン・シンセターゼの工業的使用に大いに貢
献するものである。 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。 実施例 １ トリプトフアン・シンセターゼ生産菌であるエ
ツシエリヒア・コリMT−10242（FERM BP−
20）を500mlの坂口フラスコ中の第１表に示す組
成の培地100mlに接種し、30℃で24時間培養した。
培養終了後、フラスコ20本分をまとめて均一に混
合した後遠心して集菌し、10ｇの湿菌体（乾燥菌
体で２ｇ）を得た。この菌体とキレート剤である
エチレンジアミン四酢酸（以下EDTAと略す）
を第３表の濃度になるように試験管内の0.05Mト
リス塩酸緩衡液（PH8.5）10mlに添加した後35℃
で振盪し、24時間および45時間後の残存活性を測
定した。活性の測定は第２表に示した組成の反応
液９mlと上記菌体懸濁液１mlとを用いて35℃で１
時間反応させ、生成されたＬ−トリプトフアンの
量を液体クロマトグラフイーで測定し、酵素活性
は単位時間、単位菌体量当りのＬ−トリプトフア
ン生成量で表示した。得られた結果を第３表に示
した。 第１表 エールリツヒ肉エキス 10ｇ ポリペプトン 10ｇ Nacl ５ｇ 蒸留水で１に希釈して使用 （PH6.8） 第２表 インドール 2.0％ Ｌ−セリン 1.8％ トリトンＸ−100 5.0％ （NH）SO 2.5％ PH8.5
ンドールとＬ−セリンとからＬ−トリプトフアン
を合成する反応を触媒する酵素）を含有するエツ
シエリヒア・コリに属する微生物菌体懸濁液に、
エチレンアミン系のキレート剤を添加することに
より、菌体内のトリプトフアン・シンセターゼの
失活を防止する方法に関するものである。 近年、Ｌ−トリプトフアンは医薬用のみならず
飼料添加剤としての効果が世の注目を集めるに至
り、工業的規模による安価な本物質生産の期待が
高まつている。Ｌ−トリプトフアンを製造する方
法の中で非常に有望視されている方法の一つにイ
ンドールとＬ−セリンとからＬ−トリプトフアン
を製造する酵素的生産方法がある。該反応を触媒
する酵素がトリプトフアン・シンセターゼであ
り、主として遺伝的に改良されたエツシエリヒア
属に属する微生物の菌体内に大量に生産される。
本酵素は菌体内に生産されるので菌体そのものを
酵素源として利用するのが工業的には有利である
が、この酵素を商業的規模で使用するためには、
例えば、単位時間、単位菌体当りのＬ−トリプト
フアン合成能で示される酵素活性が水溶液中で低
下しないように保たれる必要がある。 従来、菌体内のトリプトフアン・シンセターゼ
失活を防止する方法については全く知られておら
ず、本発明者らの試験によれば、例えば本酵素を
35℃の水溶液中に45時間放置するとその残存活性
は殆んど認められず実用上問題が多かつた。 本発明者らは、菌体内トリプトフアン・シンセ
ターゼの失活を防止する方法について種々検討し
た結果、該菌体懸濁液中に0.001〜0.25モルの濃
度になるようにエチレンアミン系キレート剤を添
加することにより本酵素が著しく安定化されて失
活が防止されることを見出し、本発明を完成し
た。 本発明に使用するトリプトフアン・シンセター
ゼを菌体内に大量に生産する微生物としてはエツ
シエリヒア・コリに属する微生物、例えばエツシ
エリヒア・コリMT−10232（FERM BP−19）、
エツシエリヒア・コリMT−10242（FERM BP−
20）などが用いられる。 エチレンアミン系のキレート剤としては、エチ
レンジアミン四酢酸、ジエチレントリアミン五酢
酸、エチレングリコール（２−アミノエチルエー
テル）四酢酸、エチレンジアミン二酢酸、２−ヒ
ドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸など、好
ましくはエチレンジアミン四酢酸、ジエチレント
リアミン五酢酸などが用いられる。 懸濁液中の乾燥菌体濃度は１〜50ｇ／、好ま
しくは５〜30ｇ／の範囲で使用され、またキレ
ート剤の濃度には懸濁液中の乾燥菌体濃度に比例
して用いるの最適であり、通常１ｇの乾燥菌体量
に対して約0.005モルのキレート剤を使用するこ
とが好ましい。従つて菌体懸濁液中の乾燥菌体濃
度が１〜50ｇ／の場合、キレート剤の濃度はそ
れに対応して0.005〜0.25モル／の範囲で使用
される。さらに、懸濁液のPHは７〜９の範囲に調
整するのが望ましく、温度については特に制限は
ないが通常10〜50℃の範囲で操作される。 本発明の酵素の失活を防止する方法によれば、
菌体内トリプトフアン・シンセターゼを水溶液中
で安定に保つことができるので、本発明はトリプ
トフアン・シンセターゼの工業的使用に大いに貢
献するものである。 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明す
る。 実施例 １ トリプトフアン・シンセターゼ生産菌であるエ
ツシエリヒア・コリMT−10242（FERM BP−
20）を500mlの坂口フラスコ中の第１表に示す組
成の培地100mlに接種し、30℃で24時間培養した。
培養終了後、フラスコ20本分をまとめて均一に混
合した後遠心して集菌し、10ｇの湿菌体（乾燥菌
体で２ｇ）を得た。この菌体とキレート剤である
エチレンジアミン四酢酸（以下EDTAと略す）
を第３表の濃度になるように試験管内の0.05Mト
リス塩酸緩衡液（PH8.5）10mlに添加した後35℃
で振盪し、24時間および45時間後の残存活性を測
定した。活性の測定は第２表に示した組成の反応
液９mlと上記菌体懸濁液１mlとを用いて35℃で１
時間反応させ、生成されたＬ−トリプトフアンの
量を液体クロマトグラフイーで測定し、酵素活性
は単位時間、単位菌体量当りのＬ−トリプトフア
ン生成量で表示した。得られた結果を第３表に示
した。 第１表 エールリツヒ肉エキス 10ｇ ポリペプトン 10ｇ Nacl ５ｇ 蒸留水で１に希釈して使用 （PH6.8） 第２表 インドール 2.0％ Ｌ−セリン 1.8％ トリトンＸ−100 5.0％ （NH）SO 2.5％ PH8.5
【表】
した。
実施例 ２ キレート剤としてジエチレントリアミン五酢酸
（以下DTPAと略す）を用いた以外は実施例１と
同様の操作を行ない、結果を第４表に示した。
実施例 ２ キレート剤としてジエチレントリアミン五酢酸
（以下DTPAと略す）を用いた以外は実施例１と
同様の操作を行ない、結果を第４表に示した。
【表】
【表】
した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ トリプトフアン・シンセターゼを含有するエ
ツシエリヒア・コリ（Escherichia coli）に属す
る微生物菌体懸濁液にエチレンアミン系のキレー
ト剤を添加することを特徴とする菌体内トリプト
フアン・シンセターゼの失活を防止する方法。 ２ キレート剤がエチレンジアミン四酢酸または
ジエチレントリアミン五酢酸である特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ３ 菌体懸濁液中の乾燥菌体度が１〜50ｇ／、
キレート剤濃度が0.005〜0.25モル／である特
許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7146083A JPS59196089A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | 菌体内トリプトフアン・シンセタ−ゼの失活を防止する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7146083A JPS59196089A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | 菌体内トリプトフアン・シンセタ−ゼの失活を防止する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59196089A JPS59196089A (ja) | 1984-11-07 |
| JPH045434B2 true JPH045434B2 (ja) | 1992-01-31 |
Family
ID=13461212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7146083A Granted JPS59196089A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | 菌体内トリプトフアン・シンセタ−ゼの失活を防止する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59196089A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010178667A (ja) * | 2009-02-05 | 2010-08-19 | Nissin Frozen Foods Co Ltd | 凍結調味液パック並びに凍結調味液パックを含む冷凍麺及びその製造方法 |
-
1983
- 1983-04-25 JP JP7146083A patent/JPS59196089A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59196089A (ja) | 1984-11-07 |
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