JPH0541946B2

JPH0541946B2 -

Info

Publication number: JPH0541946B2
Application number: JP58144201A
Authority: JP
Inventors: Yoshitsugu Sakata; Yoshitaka Hamaguchi; Motoo Goto; Shinzo Obata
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 1983-08-05
Filing date: 1983-08-05
Publication date: 1993-06-25
Also published as: EP0140489B1; EP0140489A1; DE3477844D1; ATE42410T1; JPS6035263A

Description

【発明の詳細な説明】

〔発明の利用分野〕本発明は担体上に固定保持された免疫活性物質
の安定化法に関するものである。〔発明の背景〕抗原抗体反応は特異性と感度が非常に高いこと
から過去において種々の生理活性物質の測定や検
定に応用されてきた。中でもラジオイムノアツセ
イ（Radioimmunoassay、以下RIAと略す）は
特に高感度の測定が可能なことから生体試料（血
清、尿、組織液等）など被検試料中の微量物質
（例えばインスリン、グリカゴン、サイロキシン
等のホルモンやIgE、α−フエトプロテイン、
CEA等の高分子生理活性物質）の測定に応用さ
れてきた。しかしながら、RIAは試薬が高価で安
定性が悪く、結果の読みとりに複雑な装置を要
し、また試薬の取扱いや廃棄に特別の安全基準を
設けなければならない、などアイソトープを使用
することに伴なう種々の制約からその普及も一部
に限られていたが、1971年にRIAに代る酵素免疫
測定法（Enzyme immunoassay、EIAと略す）
が考案されるに至つた。EIAはアイソトープの代
りに酵素を標識物質として用いているが、酵素標
識試薬は安価で長期間にわたつて安定であり、
RIAと同等の測定感度を有し、その結果は肉眼又
は簡単な装置で測定できるといつた利点を有して
いる為、その普及が近年急速に進んでいる。RIA
とEIAとはこのように標識物質が異なるだけで、
その測定原理は同一のものである。更にその測定
システムについても各種各様のものが報告される
に至つているがその種類はＢ／Ｆ分離法〔抗原抗
体反応の結果、抗原と抗体が結合して生じた結合
型の部分（Bound型、Ｂ）と結合していない遊離
型の部分（Free型、Ｆ）とを物理的に分離して
測定する方法〕を採用するヘテロジニアス
（Heterogeneous）測定系とその必要性のないホ
モジニアス（Homogeneous）測定系の２種に大
別される。ホモジニアス測定系は免疫成分の１つ
（主として抗体）により酵素活性が相応して制御
あるいは活性化される酵素−ハプテン複合体が僅
かに発見されているのみなので非常に限られた範
囲で応用可能であるにすぎない。従つて、現在に
おいて採用されているRIA及びEIAの大部分がヘ
テロジニアス測定系である。かかるヘテロジニア
ス測定系においてそのＢ／Ｆ分離法は抗原あるい
は抗体を水不溶性の担体上に固定保持せしめた固
相法が最もよく利用されている方法である。更に
水不溶性の担体として従来、セルロース、セフア
ロース、アガロース、デキストラン等の天然高分
子化合物を用いる方法が採用されていたが、これ
らは洗浄操作に時間を要し、遠心分離操作を必要
とすることが測定値のバラツキを生む大きな原因
となつていた。このため最近ではガラス等の無機
物質やポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化
ビニール等の合成高分子化合物をチユーブ、ビー
ズ、デイスク片、微粒子（ラテツクス粒子）、マ
イクロプレート等の形態にして担体として用いら
れるようになり、前述の問題点を克服している。
即ち、これらを担体として使用すれば遠心分離操
作が不要となり、洗浄操作も極めて簡便化され測
定値の再現性についても良好な結果が得られ、自
動化システムも可能となり一部実用化も行なわれ
ている。かかる理由により、固相法によるヘテロ
ジニアス測定系において有用な測定システムを確
立するためには担体の性能がその成否を握る。即
ち、担体の好ましい条件としては、(1)免疫活性物
質を結合せしめた際にその免疫活性を保持しうる
ものであること、(2)試料検体中に含有する成分に
よる非特異的吸着がないこと、(3)免疫活性物質を
強固に結合しうる性質を有していること、(4)充分
量の免疫活性物質を結合しうる表面構造等の性質
を有すること、(5)Ｂ／Ｆ分離操作に伴なう洗浄操
作など取扱いが簡便であること、などが挙げられ
る。上記の諸条件を満たすような免疫活性物質の固
定保持された担体を得るためには担体の種類の選
択のみならず免疫活性物質の結合方法や保存方法
なども開発の課題となつている。固相法を採用し
たRIAやEIAでは、従来、ガラスビーズやポリス
チレンビーズ等に免疫活性物質を共有結合あるい
は物理的な吸着法で担体上に固定保持した後、血
清アルブミン等を含有する緩衝液中に浸漬して保
存している。しかし、これは(1)使用時に紙等を用いて緩衝
液の水切りが必要であり、手間がかかるうえ測定
値のバラツキを生む原因となる。(2)乾燥させると
免疫活性物質の免疫活性が低下し固相の劣化が生
じる、(3)自動化システムを指向するうえで技術的
な課題を残す、など問題点が多い。〔発明の構成〕本発明者らは、かかる技術的な背景をもとに、
前述の問題点に鑑み、担体上に固定保持された免
疫活性物質を安定化させる方法について鋭意研究
の結果、担体上に固定保持された免疫活性物質を
糖類と、蛋白質とを含む溶液に浸漬処理した後に
これを自然乾燥することによつて、所期の目的が
達成されることを見出し、本発明を完成するに到
つた。即ち、本発明は、担体上に固定保持された免疫
活性物質を、糖類と蛋白質とを含む溶液に浸漬
し、次いでこれを自然乾燥することを特徴とする
固定化免疫活性物質の安定化方法である。本発明において用いられる担体は通常のRIA及
びEIAで用いられる不溶性担体は例外なく用いら
れるが、中でも遠心分離を行わなくても固液分離
が容易な不溶性担体、例えば、ポリスチレン、ポ
リプロピレン、ポリ塩化ビニール、ポリエチレ
ン、ポリクロロカーボネート、シリコーン樹脂、
シリコーンラバー等の合成高分子化合物、多孔性
ガラス、スリガラス、アルミナ、シリカゲル、活
性炭、金属酸化物等の無機物質が特に好ましい
が、これらに限定されるものではなく、又その形
態もチユーブ、ビーズ、デイスク片、微粒子（ラ
テツクス粒子）、マイクロプレート等多種多様の
形態のものが用いられる得る。免疫活性物質を担体に固定保持させる方法とし
ては通常共有結合法あるいは物理的吸着法が挙げ
られる。共有結合法は水不溶性の担体と免疫活性
物質を共有結合によつて結合させて固定化する方
法であつて、担体結合法の中では最も多くの報告
が見られる。この方法によつて免疫活性物質を担
体に結合させる際に関与する官能基はα−または
ε−アミノ基、α−、β−、またはγ−カルボキ
シル基、スルフヒドリル基、水酸基、イミダゾー
ル基、フエノール基などである。これらの官能基
はジアゾニウム基、酸アジド、イソシアナート、
あるいは活性型のハロゲン化アルキルなどと反応
する。従つてこのような反応性に富んだ官能基を
利用することによつて、免疫活性物質と水不溶性
の担体とを共有結合させることが可能となる。
（代謝、第８巻、696頁、1971年）。更に担体がガ
ラス等の無機物の場合には反応性に富んだ官能基
を入れるためにγ−アミノプロピルトリエトキシ
シランのような官能基をもつたトリアルコキシシ
ラン誘導体で処理する。得られたアミノ基含有ア
ルキル化ガラスはアミノ基含有免疫活性物質と同
様に処理して免疫活性物質を共有結合させること
ができる。一般にはグルタルアルデヒドで処理し
て反応性に富んだアルデヒド基を導入して免疫活
性物質と結合させる方法が用いられる（J.
Biochemd.、第80巻、895頁、1976年）。この他、
免疫活性物質の種類によつて種々の架橋試薬が用
いられる。例えば、アミノ基とアミノ基とを結合
するものとして前述のグルタルアルデヒドの他、
サクシンアルデヒド、マロンアルデヒドなど、ア
ミノ基とスルフヒドリル基とを結合するものとし
てｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロサクシ
ンイミドエステル、４−（マレイミドメチル）シ
クロヘキサン−１−カルボキシル−Ｎ−ヒドロサ
クシンイミドエステルなど、スルフヒドリル基と
スルフヒドリル基との結合にはｏ−フエニレンビ
スマレイミドなどが挙げられる。物理的吸着法は水不溶性の担体に免疫活性物質
を物理的に吸着させて固定保持させる方法であつ
て、活性炭、多孔性ガラス、ガラスビーズ、アル
ミナ、金属酸化物、シリカゲル、ヒドロキシアパ
タイトのような無機物質の他、ポリスチレン、ポ
リエチレン、ポリ塩化ビニール、ポリプロピレ
ン、ポリクロロカーボネイトのような合成高分子
化合物の担体の場合に用いられる。中でも、ガラ
ス、ポリスチレン、ポリ塩化ビニールをチユー
ブ、ビーズ、デイスク片、微粒子（ラテツクス粒
子）、マイクロプレート等の形態にして用いられ
た場合に好ましく採用される固定化方法である。本発明において担体上に固定保持される免疫活
性物質としては抗原、抗体およびハプテン（薬物
等）が挙げられる。抗原としてはインスリン、グ
ルカゴン、成長ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロ
ピン、副腎皮質ホルモン、甲状腺刺激ホルモン等
のホルモン、IgG、IgM、IgA、IgE、IgD、α−
フエトプロテイン、フエリチン、β₂−ミクログロ
ブリン、CEAなどの蛋白質、およびHBs抗原、
風疹ウイルス抗原などのウイルス抗原が挙げられ
る。抗体としては、周知の方法でウサギ、モルモ
ツト、マウス、ヤギ、ヒツジ等の哺乳動物やニワ
トリ、アヒル等の鳥類に抗原や次に述べるハプテ
ン等を免疫して得られる抗体（抗インスリン抗
体、抗グルカゴン抗体、抗IgG抗体、抗α−フエ
トプロテイン抗体、抗β₂−ミクログロブリン抗体
等）が挙げられる。ハプテンとしてはステロイド
ホルモン、カテコールアミン、ビタミン等が挙げ
られる。本発明において用いられる糖類としては、例え
ばリボーズ、グルコース、フラクトース、マンノ
ース、ガラクトース、マルトース、乳糖、シヨ糖
等の単糖類や少糖類、更にデキストフン、デキス
トリン等の多糖類が挙げられ、中でも乳糖、シヨ
糖、デキストリンが好ましく用いられる。また、
本発明において用いられる蛋白質としては、例え
ばウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、ヒ
ツジ血清アルブミン等の血清アルブミンの他、水
溶性ゼラチンが挙げられ、好ましくはウシ血清ア
ルブミンや水溶性ゼラチンが用いられる。本発明に依る糖類及び蛋白質を含む溶液におい
て、糖類及び蛋白質の含有量は通常、該水性物中
の濃度がそれぞれ0.1〜10W／Ｖ％、0.1〜2W／
Ｖ％となる量、好ましくは2.5〜5W／Ｖ％、0.5
〜1.5W／Ｖ％である。糖類及び蛋白質を溶解せしめる溶媒としては精
製水あるいは緩衝液が挙げられ、特に緩衝液につ
いては、中性付近に緩衝作用を有するもの、例え
ばリン酸緩衝液、トリス緩衝液、グツト緩衝液等
が用いられるがリン酸緩衝液が特に好ましく、そ
のモル濃度は0.01〜0.2Mで、好ましくは0.02〜
0.05Mである。また、PHは6.8〜7.2が好ましい。該水性組成物を調製する場合、各物質の添加順
序については特に限定されるものではない。担体上に固定保持された免疫活性物質を糖類及
び蛋白質を含む溶液に浸漬処理し、自然乾燥する
方法は、例えば担体を室温下にて40〜40分間、該
水性物中に浸漬した後、担体を取り出し、紙等
の上に静置し自然乾燥すれば良く、そのまま試薬
として有用であるが、更に好ましくは窒素ガスシ
ールあるいは減圧密栓して保存する。このように
担体を糖類及び蛋白質を含む溶液中に浸漬処理す
ることによつて担体の自然乾燥操作中並びに該担
体保存中に生じる免疫活性物質の抗原活性や抗体
活性の低下を防ぐことが可能となる。このようにして得られた担体上に固定保持され
た免疫活性物質はRIAあるいはEIAによる生理活
性物質の測定試薬として有用である。RIA及び
EIAの代表的な測定システムには競合法とサンド
イツチ法があり、以下にその測定原理について説
明する。競合法とは未知量の測定対象物を含有する被検
液とアイソトープあるいは酵素で標識した一定量
の免疫活性物質（測定対象物と同一物質）とを、
該測定対象物に対する抗体を担体に固定保持せし
めたものに対して競合的に反応させ、抗体に結合
もしくは非結合の放射能あるいは酵素活性を測定
し、未知量の測定対象物を測定する方法である。サンドイツチ法とは未知量の測定対象物を、該
測定対象物に対する抗体を担体に固定保持せしめ
たものとを結合させ、さらにこれにアイソトープ
あるいは酵素で標識した免疫活性物質（該測定対
象物に対する抗体）を結合反応させ、担体に結合
した免疫活性物質の放射能あるいは酵素活性を測
定し、未知量の測定対象物を測定する方法であ
る。以上、RIAあるいはEIAにおける代表的な測定
システムを挙げ担体上に固定保持した免疫活性物
質の使用法を例示したが、本発明はこれらの例示
に限定されるものではなく種々の変法に対しても
適用されるものであることは云うまでもない。以下に、参考例、実施例を挙げて本発明を更に
具体的に説明するが本発明はこれらに限定される
ものではない。〔実施例〕参考例１ (1) 抗インスリン抗体結合ガラスビーズの調製市販ガラスビーズ（直径６〜７mm）500個を
精製水にて洗浄後、更にアセトンを加えて洗浄
した。次に２％γ−アミノトリエトキシシラン
−アセトン溶液に浸漬し、室温下で３時間反応
させた。反応終了後、ガラスビーズをアセト
ン、引き続いて精製水にて洗浄した。このよう
にして調製されたアミノ基含有ガラスビーズを
25％グルタアルデヒド水溶液に室温下にて２時
間浸漬処理し活性化した。次いで精製水にてガ
ラスビーズを充分に洗浄した後、３mgのモルモ
ツト抗インスリン抗体を含む0.02Mリン酸緩衝
液PH7.3、100mlに浸漬し４℃にて16時間反応し
抗インスリン抗体をガラスビーズに結合させ
た。反応終了後、0.02Mリン酸緩衝液PH7.3に
てビーズを洗浄し更に0.5M NaCl、１％ウシ
血清アルブミン、１ｍＭ EDTA（エチレンジ
アミン四酢酸）、0.05％NaN₃含有リン酸緩衝液
PH7.3に浸漬し用時まで冷所保存した。 (2) 抗β₂−ミクログロブリン抗体結合ポリスチレ
ンビーズの調製市販ポリスチレン製ビーズ（直径6.5mm）500
個を0.02Mリン酸緩衝液PH7.5にて洗浄後、３
mgのウサギ抗β₂−ミクログロブリン抗体を含む
0.02Mリン酸緩衝液PH7.5、100mlに浸漬し、４
℃にて16時間反応し抗β₂−ミクログロブリン抗
体をポリスチレンビーズに結合させた。反応終
了後、0.02Mリン酸緩衝液PH7.3にてビーズを
洗浄し、更に0.15M NaCl、１％ウシ血清アル
ブミン、１ｍＭ EDTA、0.05％NaN₃含有
0.02Mリン酸緩衝液PH7.3に浸漬し、用時まで
冷所保存した。 (3) 抗Ｃ反応性蛋白（CRP）抗体結合ポリ塩化
ビニールプレートの調製市販ポリ塩化ビニール製マイクロプレート
（Ｕ字型、96ウエル）の各ウエルに5μｇのマウ
ス抗CRP抗体を含む0.05M炭酸緩衝液PH9.6、
0.1mlを加え４℃にて21時間静置し抗CRP抗体
をマイクロプレートに結合させた。反応終了
後、0.05％Tween20（ポリオキシエチレンソル
ビタンモノラウリルエーテル、花王アトラス(株)
商品名）含有0.01Mリン酸緩衝液PH7.4にて各
ウエルを洗浄し、次いで１％ウシ血清アルブミ
ン含有0.01Mリン酸緩衝液PH7.4を0.2mlを加え、
４℃、19時間静置、用時まで冷所保存した。 (4) 抗CEA（がん胎児性抗原）抗体結合ポリ塩化
ビニルプレートの調製市販ガラスビーズ（直径６〜７mm）500個を
精製水にて洗浄後、更にアセトンを加えて洗浄
した。次に２％γ−アミノトリエトキシシラン
−アセトン溶液に浸漬し、室温下で３時間反応
させた。反応終了後、ガラスビーズをアセト
ン、引き続いて精製水に洗浄した。このように
して精製されたアミノ基含有ガラスビーズを
2.5％グルタアルデヒド水溶液に室温下にて２
時間浸漬処理し活性化した。次いで精製水にて
ガラスビーズを充分に洗浄した後、３mgのウサ
ギ抗CEA抗体を含む0.02Mリン酸緩衝液PH7.3、
100mlに浸漬し、４℃にて16時間反応し抗CEA
抗体をガラスビーズに結合させた。反応終了
後、0.02Mリン酸緩衝液PH7.3にてビーズを洗
浄し更に0.15M NaCl、１％ウシ血清アルブミ
ン、１ｍＭ EDTA、0.05％NaN₃含有リン酸
緩衝液PH7.3に浸漬し用時まで冷所保存した。参考例２〔1〕抗インスリン抗体結合ガラスビーズを用い
たEIA法によるインスリンの測定インスリンのEIAによる測定試薬 (1) 参考例１で得られた抗インスリン抗体結合ガ
ラスビーズ。 (2) ０〜320μU／mlの標準インスリン。 (3) ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体。 (4) 上記(2)、(3)の試薬の希釈に用いる、0.15M
NaCl、１％ウシ血清アルブミン、１ｍＭ
EDTA、0.1％サリチル酸ナトリウム含有
0.02Mリン酸緩衝液PH6.9。 (5) 60mg ｏ−フエニレンジアミン。 (6) 1.7V／Ｖ％過酸化水素水。 (7) (5)、(6)の酵素基質の溶解に用いる、0.05Mク
エン酸−リン酸緩衝液PH4.8。 (8) 1.5N H₂SO₄。 (9) (5)及び(6)を(7)に溶解したｏ−フエニレンジア
ミン60mg、過酸化水素水200μを含む発色試
液20ml。操作法試薬(4)で希釈した試薬(3)500μに標準インス
リン50μを添加し、次いで試薬(1)を加えた後、
37℃60分間反応させる。反応後、0.9％NaClにて
ビーズを洗浄し、次いで試薬(9)500μを加えて
酵素反応を開始する。37℃で15分間反応させた
後、試薬(8)3.0mlを添加して反応を停止させ反応
液の492nｍにおける吸光度を測定する。〔2〕抗β₂−ミクログロブリン抗体結合ポリスチ
レンビーズを用いたEIA法によるβ₂−ミクログ
ロブリンの測定 β₂−ミクログロブリンのEIAによる測定試薬 (1) 参考例１で得られた抗β₂−ミクログロブリン
抗体結合ポリスチレンビーズ。 (2) ０〜200μｇ／の標準β₂−ミクログロブリ
ン。 (3) ペルオキシダーゼ標識抗β₂−ミクログロブリ
ン抗体。 (4) 上記(2)、(3)の試薬の希釈に用いる、0.15M
NaCl、１％ウシ血清アルブミン、１ｍＭ
EDTA、0.1％サリチル酸ナトリウム含有
0.02Mリン酸緩衝液PH6.9。 (5) 60mg ｏ−フエニレンジアミン。 (6) 1.7V／Ｖ％過酸化水素水。 (7) (5)、(6)の酵素基質の溶解に用いる、0.05Mク
エン酸−0.1Mリン酸緩衝液PH4.8。 (8) 1.5N H₂SO₄。 (9) (5)及び(6)を(7)に溶解したｏ−フエニレンジア
ミン60mg、過酸化水素水200μを含む発色試
液20ml。操作法試薬(4)で希釈した試薬(3)１mlに標準β₂−ミクロ
グロブリン20μを添加し、次いで試薬(1)を加え
た後、37℃で60分間反応させる。反応後、0.9％
NaClにてビーズを洗浄し、次いで試薬(9)500μ
を加えて酵素反応を開始する。37℃で15分間反応
させた後、試薬(8)3.0mlを添加して反応を停止さ
せ、反応液の492nｍにおける吸光度を測定する。〔3〕抗CRP抗体結合ポリ塩化ビニールプレート
を用いたEIA法によるCRPの測定 CRPのEIAによる測定試薬 (1) 参考例１で得られた抗CRP抗体結合ポリ塩
化ビニルプレート。 (2) ０〜1000nｇ／mlの標準CRP。 (3) ペルオキシターゼ標識抗CRP抗体。 (4) 上記(2)、(3)の試薬の希釈、およびプレートの
洗浄に用いる、１％ウシ血清アルブミン、0.5
％ノニポール300（ポリオキシエチレンノニフエ
ニルエーテル、三洋化成工業(株)商品名）、0.9％
NaCl含有0.02Mリン酸緩衝液PH7.3。 (5) 60mg ｏ−フエニレンジアミン。 (6) 1.7V／Ｖ％過酸化水素水。 (7) (5)、(6)の酵素基質の溶解に用いる、0.05Mク
エン酸−0.1Mリン酸緩衝液PH4.8。 (8) 6N H₂SO₄。 (9) (5)及び(6)を(7)に溶解したｏ−フエニレンジア
ミン60mg、過酸化水素水200μを含む発色試
液20ml。操作法試薬(4)で希釈した標準CRP100μを各ウエル
に添加し、37℃で120分間反応させる。次いで反
応液を吸引除去し、試薬(4)で各ウエルを充分に洗
浄し、更に試薬(3)を100μ添加し、37℃で120分
間反応させた。反応後、ウエルを試薬(4)で洗浄
し、試薬(9)100μを加えて酵素反応を開始する。
室温下にて15分間反応させた後、試薬(8)50μを
添加して反応を停止させ、反応液の490nｍにお
ける吸光度をマイクロプレート用の比色計で測定
した。〔4〕抗CEA抗体結合ガラスビーズを用いたEIA
法によるCEAの測定試薬 (1) 参考例１で得られた抗CEA抗体結合ガラス
ビーズ。 (2) 60μｇ／mlの標準CEA。 (3) ペルオキシターゼ標準抗CEA抗体。 (4) 上記(2)、(3)の試薬の希釈に用いる、0.15M
NaCl、１％ウシ血清アルブミン、１ｍＭ
EDTA、0.1％サリチル酸ナトリウム含有
0.02Mリン酸緩衝液PH7.0。 (5) 60mg ｏ−フエニレンジアミン。 (6) 1.7V／Ｖ％過酸化水素水。 (7) 上記(5)、(6)の酵素基質の溶解に用いる、
0.05Mクエン酸−0.1Mリン酸緩衝液PH4.8。 (8) 1.5N H₂SO₄。 (9) 上記(5)及び(6)を(7)に溶解したｏ−フエニレン
ジアミン60mg、1.7％過酸化水素水200μを含
む発色試液20ml。操作法試薬(4)で希釈した試薬(3)500μに標準CEA溶
液50μを添加し、次いで試薬(1)を加えた後、37
℃で18時間反応させる。反応後、0.9％NaClにて
ビーズを洗浄し、次いで試薬(9)500μを加えて
酵素反応を開始する。37℃で30分間反応させた
後、試薬(8)3.0mlを添加して反応を停止させ、反
応液の492nｍにおける吸光度を測定する。実施例１抗インスリン抗体結合ガラスビーズの安定化参
考例１で調製した抗インスリン抗体結合ガラスビ
ーズを精製水で洗浄後、下記の処理液(a)〜(f)に室
温下、30〜40分間、浸漬処理した。 (a) 5W／Ｖ％シヨ糖及び１％ウシ血清アルブミ
ンを含む0.02Mリン酸緩衝液PH6.9。 (b) 5W／Ｖ％シヨ糖を含む0.02Mリン酸緩衝液
PH6.9。 (c) １％ウシ血清アルブミンを含む0.02Mリン酸
緩衝液PH6.9。 (d) １％水溶性ゼラチンを含む0.02Mリン酸緩衝
液PH6.9。 (e) 50V／Ｖ％グリセロール溶液。 (f) 0.02Mリン酸緩衝液PH6.9。処理後、室温下にてビーズを自然乾燥した。この様にして調製したビーズを40℃の恒温室に
保存し苛酷試験を行なつた。抗体結合ビーズの安
定性の評価については一定量（320μU／ml）のイ
ンスリンを含む試料を参考例２に記載したEIA法
で測定し、対照ビーズ（参考例１で調製した、ビ
ーズを１％ウシ血清アルブミン等を含む0.02Mリ
ン酸緩衝液PH7.3に浸漬した状態で４℃に保存し
たもの）を用いて測定した場合に対する百分比を
活性保持率（％）として第１表に示した。

【表】第１表の結果から、本願発明に係る処理液(a)を
用いて調製された抗体結合ビーズ上の抗体は、そ
の他の処理液(b)〜(e)を用いて調製されたものに比
較して明らかに安定化されていることが判る。実施例２抗β₂−ミクログロブリン抗体結合ポリスチレン
ビーズの安定化参考例１で調製した抗β₂−ミクログロブリン抗
体結合ポリスチレンビーズを精製水に浸し、紙
等を用いて軽く水を切つた後下記の処理液(a)〜(f)
に室温下、30〜40分間、浸漬処理した。 (a) 5W／Ｖ％シヨ糖及び１％ウシ血清アルブミ
ンを含むリン酸緩衝液PH6.9。 (b) 5W／Ｖ％シヨ糖を含む0.02Mリン酸緩衝液
PH6.9。 (c) １％ウシ血清アルブミンを含む0.02Mリン酸
緩衝液PH6.9。 (d) １％水溶性ゼラチンを含む0.02Mリン酸緩衝
液PH6.9。 (e) 50V／Ｖ％グリセロール溶液。 (f) 0.02Mリン酸緩衝液PH6.9。処理後、ビーズを取り出し紙等を用いて水を
切り室温下にて自然乾燥した。このようにして得
られたビーズを実施例１と同様、40℃の恒温室に
保存し苛酷試験を行なつた。抗体結合ビーズの安
定性の評価は一定量（200μｇ／）のβ₂−ミクロ
グロブリンを含む試料を参考例２に記載したEIA
法で測定し、対照ビーズ（参考例１で調製した、
ビーズを１％ウシ血清アルブミン等を含む0.02M
リン酸緩衝液PH7.3に浸漬した状態で４℃に保存
したもの）を用いて測定した場合に対する百分比
を活性保持率（％）として第２表に示した。

【表】第２表の結果から、本発明に係る処理液(a)を用
いて調製された抗体結合ポリスチレンビーズ上の
抗体は、その他の処理液(b)〜(e)を用いて調製され
たものに比較して明らかに安定化されていること
が判る。実施例３抗CEA抗体結合ガラスビーズの安定化参考例１で調製した抗CEA抗体結合ガラスビ
ーズを精製水で洗浄後、下記の処理液(a)〜(h)に室
温下、30〜40分間、浸漬処理した。 (a) 5W／Ｖ％シヨ糖及び１％ウシ血清アルブミ
ンを含む0.02Mリン酸緩衝液PH7.0。 (b) 5W／Ｖ％乳糖を含む0.02Mリン酸緩衝液PH
7.0。 (c) 5W／Ｖ％マンノース及び1.5％水溶性ゼラチ
ンを含む0.2Mトリス−塩酸緩衝液PH7.2。 (d) ４％デキストリンを含む0.02Mトリス−塩酸
緩衝液PH7.2。 (e) 5W／Ｖ％シヨ糖を含む0.02Mヘペス緩衝溶
PH7.2。 (f) 0.02Mリン酸緩衝液PH7.0。 (g) 0.02Mトリス−塩酸緩衝液PH7.2。 (h) 0.02Mヘペス緩衝液PH7.2。処理後、室温下にてビーズを自然乾燥した。こ
の様にして調製したビーズを40℃の恒温室に保存
し苛酷試験を行なつた。抗体結合ビーズの安定性
の評価については一定量（60μｇ／ml）のCEAを
含む試料を参考例２に記載したEIA法で測定し、
対照ビーズ（参考例１で調製した、ビーズを１％
ウシ血清アルブミン等を含む0.02Mリン酸緩衝液
PH7.3に浸漬した状態で４℃に保存したもの）を
用いて測定した場合に対する百分比を活性保持率
（％）として第３表に示した。

【表】第３表の結果から、本発明に係る処理液(a)及び
(c)を用いて調製された抗体結合ビーズ上の抗体
は、その他の処理液(b)及び(d)〜(h)を用いて調製さ
れたものに比較して明らかに安定化されているこ
とが判る。

Claims

【特許請求の範囲】１担体上に固定保持された免疫活性物質を、糖
類と蛋白質とを含む溶液中に浸漬し、次いでこれ
を自然乾燥することを特徴とする固定化免疫活性
物質の安定化法。２担体がガラス、シリカゲル、金属酸化物等の
無機物質である特許請求の範囲第１項記載の固定
化免疫活性物質の安定化法。３担体がポリスチレン、ポリ塩化ビニール、ポ
リプロピレン、ポリエチレン等の合成高分子化合
物である特許請求の範囲第１項記載の固定化免疫
活性物質の安定化法。４免疫活性物質が抗原である特許請求の範囲第
１項〜第３項のいずれかに記載の固定化免疫活性
物質の安定化法。５免疫活性物質が抗体である特許請求の範囲第
１項〜第３項のいずれかに記載の固定化免疫活性
物質の安定化法。