JPH0592A - 光学活性メチルコハク酸の製造方法 - Google Patents
光学活性メチルコハク酸の製造方法Info
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- JPH0592A JPH0592A JP3221614A JP22161491A JPH0592A JP H0592 A JPH0592 A JP H0592A JP 3221614 A JP3221614 A JP 3221614A JP 22161491 A JP22161491 A JP 22161491A JP H0592 A JPH0592 A JP H0592A
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- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
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- Y10S435/923—Candida lipolytica
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 極めて光学純度の高い光学活性メチルコハク
酸の製造方法を提供することを目的とする。 【構成】 キャンディダ（Candida ) 属に属しスクアレ
ンを次の式（Ｉ）： 【化１】 （式中、＊印は不斉炭素原子であることを示す）で表わ
される光学活性メチルコハク酸に変換することができる
微生物を用いてスクアレンを光学活性メチルコハク酸に
転換し、そして該光学活性メチルコハク酸を採取するこ
とを特徴とする光学活性メチルコハク酸の製造方法。 【効果】 本発明によれば、特定の微生物を用いてスク
アレンから高純度の光学活性メチルコハク酸を製造する
ことができる。
酸の製造方法を提供することを目的とする。 【構成】 キャンディダ（Candida ) 属に属しスクアレ
ンを次の式（Ｉ）： 【化１】 （式中、＊印は不斉炭素原子であることを示す）で表わ
される光学活性メチルコハク酸に変換することができる
微生物を用いてスクアレンを光学活性メチルコハク酸に
転換し、そして該光学活性メチルコハク酸を採取するこ
とを特徴とする光学活性メチルコハク酸の製造方法。 【効果】 本発明によれば、特定の微生物を用いてスク
アレンから高純度の光学活性メチルコハク酸を製造する
ことができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は光学活性ジカルボン酸で
ある光学活性メチルコハク酸の製造方法に関する。本発
明の方法により製造される光学活性ジカルボン酸は不斉
炭素上にメチル基を有するキラル化合物として医薬、農
薬、その他の生理活性物質の合成原料として、また液晶
ポリマーの原料としても有用である。
ある光学活性メチルコハク酸の製造方法に関する。本発
明の方法により製造される光学活性ジカルボン酸は不斉
炭素上にメチル基を有するキラル化合物として医薬、農
薬、その他の生理活性物質の合成原料として、また液晶
ポリマーの原料としても有用である。
【０００２】
【従来の技術】従来、光学活性なメチルコハク酸を製造
する方法としては、例えばイタコン酸をキラルなホスフ
ィンを配位子とするロジウム錯体により不斉還元を行う
方法が知られているが光学純度は５０％程度と低く、最
近の改良により純度が向上しているが最高でも９０％程
度である。また使用するロジウムのコストが高いことも
工業生産において不利である。
する方法としては、例えばイタコン酸をキラルなホスフ
ィンを配位子とするロジウム錯体により不斉還元を行う
方法が知られているが光学純度は５０％程度と低く、最
近の改良により純度が向上しているが最高でも９０％程
度である。また使用するロジウムのコストが高いことも
工業生産において不利である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は極めて光学純
度の高い光学活性メチルコハク酸の製造方法を提供する
ものである。
度の高い光学活性メチルコハク酸の製造方法を提供する
ものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは光学活性メ
チルコハク酸を微生物的に製造する方法を開発すべく種
々検討した結果、キャンディダ（Candida ) 属に属する
微生物を用いることによりスクアレンから光学活性メチ
ルコハク酸を通常光学純度９５％、好ましくは９８％、
最も好ましくは１００％の高純度で生産することができ
ることを見いだし、本発明を完成した。
チルコハク酸を微生物的に製造する方法を開発すべく種
々検討した結果、キャンディダ（Candida ) 属に属する
微生物を用いることによりスクアレンから光学活性メチ
ルコハク酸を通常光学純度９５％、好ましくは９８％、
最も好ましくは１００％の高純度で生産することができ
ることを見いだし、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、キャンディダ（Cand
ida ) 属に属しスクアレンを次の式（Ｉ）：
ida ) 属に属しスクアレンを次の式（Ｉ）：
【化２】 （式中、＊印は不斉炭素原子であることを示す）で表わ
される光学活性メチルコハク酸に変換することができる
微生物を用いてスクアレンを光学活性メチルコハク酸に
転換し、そして該光学活性メチルコハク酸を採取するこ
とを特徴とする光学活性メチルコハク酸の製造方法に関
する。
される光学活性メチルコハク酸に変換することができる
微生物を用いてスクアレンを光学活性メチルコハク酸に
転換し、そして該光学活性メチルコハク酸を採取するこ
とを特徴とする光学活性メチルコハク酸の製造方法に関
する。
【０００６】
【具体的な説明】本発明において使用するキャンディダ
（Candida ) 属に属する微生物は例えば次のような方法
により得ることができる。すなわちスクアレンを唯一の
炭素源とした培地に自然界に存在する分離源を添加して
培養を行い、その培養液よりスクアレンを炭素源として
利用可能な菌株を分離する。
（Candida ) 属に属する微生物は例えば次のような方法
により得ることができる。すなわちスクアレンを唯一の
炭素源とした培地に自然界に存在する分離源を添加して
培養を行い、その培養液よりスクアレンを炭素源として
利用可能な菌株を分離する。
【０００７】ここで用いられる培地はスクアレンを唯一
の炭素源とする他は、通常使用されているいずれの培地
を使用することができ、菌株が生育に必要とする窒素
源、無機塩、および必要に応じ特殊な要求物質（例えば
ビタミン、アミノ酸、核酸塩基等）を含む。炭素源はス
クアレンを唯一の炭素源として培地１Ｌに対し０．１〜
１００ｇ、好ましくは１〜１０ｇ添加する。
の炭素源とする他は、通常使用されているいずれの培地
を使用することができ、菌株が生育に必要とする窒素
源、無機塩、および必要に応じ特殊な要求物質（例えば
ビタミン、アミノ酸、核酸塩基等）を含む。炭素源はス
クアレンを唯一の炭素源として培地１Ｌに対し０．１〜
１００ｇ、好ましくは１〜１０ｇ添加する。
【０００８】窒素源としては、例えば硝酸カリウム、硝
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素等の１種ま
たは２種以上が用いられる。添加割合は窒素源の種類に
より異なるが、通常培地１Ｌに対し、０．１〜１０ｇ、
好ましくは１〜３ｇである。無機塩としてはリン酸カリ
ウム、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、
塩化鉄、塩化カルシウム等の１種または２種以上が用い
られる。添加割合は無機塩の種類により異なるが、通常
培地１Ｌに対し０．００１〜１０ｇ、好ましくは０．０
１〜５ｇである。
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素等の１種ま
たは２種以上が用いられる。添加割合は窒素源の種類に
より異なるが、通常培地１Ｌに対し、０．１〜１０ｇ、
好ましくは１〜３ｇである。無機塩としてはリン酸カリ
ウム、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、
塩化鉄、塩化カルシウム等の１種または２種以上が用い
られる。添加割合は無機塩の種類により異なるが、通常
培地１Ｌに対し０．００１〜１０ｇ、好ましくは０．０
１〜５ｇである。
【０００９】必要に応じて特殊な要求物質としてビタミ
ン類、酵母エキス、ペプトン、コーンスチープリカー等
の１種または２種以上が用いることができる。添加割合
は物質の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し１０
ｇ以下、例えば０．０５〜１０ｇ、好ましくは０．１〜
５ｇである。培地のpHは通常、２〜１１、好ましくは３
〜６に調整する。
ン類、酵母エキス、ペプトン、コーンスチープリカー等
の１種または２種以上が用いることができる。添加割合
は物質の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し１０
ｇ以下、例えば０．０５〜１０ｇ、好ましくは０．１〜
５ｇである。培地のpHは通常、２〜１１、好ましくは３
〜６に調整する。
【００１０】また特定の菌株を選択的に増殖させるため
に抗生物質、殺菌剤等を添加するのが好ましい。例を挙
げると酵母を選択的に増殖させるために細菌の増殖を抑
える目的でストレプトマイシンを０．１〜１００mg／
Ｌ、好ましくは１０〜５０mg／Ｌ添加することができ
る。
に抗生物質、殺菌剤等を添加するのが好ましい。例を挙
げると酵母を選択的に増殖させるために細菌の増殖を抑
える目的でストレプトマイシンを０．１〜１００mg／
Ｌ、好ましくは１０〜５０mg／Ｌ添加することができ
る。
【００１１】分離源は微生物が存在していると思われる
環境の物質、例えば土壌、排水、腐った果実等を用いる
ことができる。分離源は培地１Ｌに対して１〜１００
ｇ、好ましくは３０〜５０ｇ添加する。培養温度は１５
〜８０℃、好ましくは２０〜３５℃で行う。培養時間は
通常１日〜３０日間、好ましくは４〜７日間培養を行
い、次いで新鮮な培地に植え継ぎ、同様に１〜３０日
間、好ましくは４〜７日間培養を行い、これを２〜５回
繰り返す。通気条件は通常の好気性条件下で培養を行
う。
環境の物質、例えば土壌、排水、腐った果実等を用いる
ことができる。分離源は培地１Ｌに対して１〜１００
ｇ、好ましくは３０〜５０ｇ添加する。培養温度は１５
〜８０℃、好ましくは２０〜３５℃で行う。培養時間は
通常１日〜３０日間、好ましくは４〜７日間培養を行
い、次いで新鮮な培地に植え継ぎ、同様に１〜３０日
間、好ましくは４〜７日間培養を行い、これを２〜５回
繰り返す。通気条件は通常の好気性条件下で培養を行
う。
【００１２】菌株の増殖は培地の濁度の測定、および顕
微鏡観察により行う。ＯＤ610 ０．１〜１０、好ましく
は０．２〜１になったら分離操作を行うのが好ましい。
すなわち培養液中より当該菌株を純粋分離する。方法は
通常の純粋分離法である平板培養法を用いるのが好まし
い。平板培地としては寒天が０．１〜１０％含有した培
地であればいずれの培地でもよく、例えば寒天２％含有
の酵母エキス麦芽エキス寒天培地（ＹＭ寒天培地）等が
用いられる。
微鏡観察により行う。ＯＤ610 ０．１〜１０、好ましく
は０．２〜１になったら分離操作を行うのが好ましい。
すなわち培養液中より当該菌株を純粋分離する。方法は
通常の純粋分離法である平板培養法を用いるのが好まし
い。平板培地としては寒天が０．１〜１０％含有した培
地であればいずれの培地でもよく、例えば寒天２％含有
の酵母エキス麦芽エキス寒天培地（ＹＭ寒天培地）等が
用いられる。
【００１３】上記の方法により得られた、本発明の化合
物の製造に使用することができる微生物の１例として、
酵母ＳＱＬ３４９株を挙げることができる。この微生物
株ＳＱＬ３４９は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第１１６５３号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１６５３）
として寄託されている。この微生物は下記の菌学的性質
を有する。
物の製造に使用することができる微生物の１例として、
酵母ＳＱＬ３４９株を挙げることができる。この微生物
株ＳＱＬ３４９は工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌寄第１１６５３号（ＦＥＲＭ Ｐ−１１６５３）
として寄託されている。この微生物は下記の菌学的性質
を有する。
【００１４】（ａ）形態 栄養細胞 球〜楕円形で多極出芽により増殖する。 液体培養 沈澱及び産膜を認める。（２５℃、３日
間） 偽菌糸 形成する。（２５℃、３日間） 真菌糸 形成する。（２５℃、６日間） 子のう胞子 アダムス、ゴロドコバ、麦芽、ＹＭ、Ｖ−
８、ポテトデキストロースの各培地で形成を認めず。
間） 偽菌糸 形成する。（２５℃、３日間） 真菌糸 形成する。（２５℃、６日間） 子のう胞子 アダムス、ゴロドコバ、麦芽、ＹＭ、Ｖ−
８、ポテトデキストロースの各培地で形成を認めず。
【００１５】（ｂ）生理学的性質 糖の発酵性 グルコース − シュークロース − マルトース − ラクトース − ラフィノース − ガラクトース −
【００１６】 資化性 硝酸塩 − イノシトール − エリスリトール ＋ ガラクトース − グルコース ＋ シュークロース − セロビオース − トレハロース − マルトース − ラクトース − ラフィノース −
【００１７】 生育温度 ２５℃ ＋ ３０℃ ＋ ３７℃ − ＤＢＢ呈色反応 − 油脂の分解 ＋
【００１８】以上の結果ＳＱＬ３４９株はキャンディダ
・リポリティカ（Candida lipolytica）と同定され
た。なおキャンディダ・リポリティカ（Candida lipo
lytica）はＩＦＯで分類されているサッカロミコプシス
・リポリティカ（Saccharomycopsis lipolytica）の不
完全世代およびＡＴＣＣで分類されているヤローウィア
・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）の不完全世代
を示しこれらの菌は分類学上全く同一のものである。
・リポリティカ（Candida lipolytica）と同定され
た。なおキャンディダ・リポリティカ（Candida lipo
lytica）はＩＦＯで分類されているサッカロミコプシス
・リポリティカ（Saccharomycopsis lipolytica）の不
完全世代およびＡＴＣＣで分類されているヤローウィア
・リポリティカ（Yarrowia lipolytica）の不完全世代
を示しこれらの菌は分類学上全く同一のものである。
【００１９】本発明の方法においては、前記の微生物の
ほかに、例えばサッカロミコプシス・リポリティカ（Sa
ccharomycopsis lipolytica）IFO 0746(ATCC 20114),I
FO 1209(ATCC 8662),IFO 1542(ATCC 20306),IFO 1632,I
FO 1741,IFO 10073(ATCC 48436),IFO 1742(ATCC 9773),
IFO 1195,IFO 1548(ATCC 18942),IFO 1549(ATCC 1894
5),IFO 1550(18943),IFO 1746,ATCC 20237,ATCC 20255,
ATCC 20362,ATCC 20363,ATCC 20460,ATCC 20461,ATCC 2
0496,ATCC 22421,ATCC 22422,ATCC 22423,ATCC 34922,A
TCC 44601,ATCC 46330,ATCC 46482,ATCC 46483,ATCC 46
484等を使用することができ、これらの菌株はＩＦＯ，
ＡＴＣＣ等から自由に入手することができる。
ほかに、例えばサッカロミコプシス・リポリティカ（Sa
ccharomycopsis lipolytica）IFO 0746(ATCC 20114),I
FO 1209(ATCC 8662),IFO 1542(ATCC 20306),IFO 1632,I
FO 1741,IFO 10073(ATCC 48436),IFO 1742(ATCC 9773),
IFO 1195,IFO 1548(ATCC 18942),IFO 1549(ATCC 1894
5),IFO 1550(18943),IFO 1746,ATCC 20237,ATCC 20255,
ATCC 20362,ATCC 20363,ATCC 20460,ATCC 20461,ATCC 2
0496,ATCC 22421,ATCC 22422,ATCC 22423,ATCC 34922,A
TCC 44601,ATCC 46330,ATCC 46482,ATCC 46483,ATCC 46
484等を使用することができ、これらの菌株はＩＦＯ，
ＡＴＣＣ等から自由に入手することができる。
【００２０】前記化合物を製造するための培地は、例え
ば次の通りである。すなわち、生産菌が生育に必要な炭
素源、窒素源、無機塩、および必要であれば特殊な要求
物質（例えばビタミン、アミノ酸、核酸塩基等）を含
む。唯一の炭素源としてスクアレンを使用することがで
きるが、必要に応じて炭素源としてグルコース、エリス
リトール等の糖類、ｎ−パラフィン等の炭化水素、エタ
ノール、プロパノール等のアルコール類を用いることが
できる。
ば次の通りである。すなわち、生産菌が生育に必要な炭
素源、窒素源、無機塩、および必要であれば特殊な要求
物質（例えばビタミン、アミノ酸、核酸塩基等）を含
む。唯一の炭素源としてスクアレンを使用することがで
きるが、必要に応じて炭素源としてグルコース、エリス
リトール等の糖類、ｎ−パラフィン等の炭化水素、エタ
ノール、プロパノール等のアルコール類を用いることが
できる。
【００２１】添加割合は炭素源の種類により異なるが通
常１００ｇ以下、例えば０．１〜１００ｇ、好ましくは
０．５〜１０ｇである。窒素源としては、例えば硝酸カ
リウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素等
の１種または２種以上が用いられる。添加割合は窒素源
の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し、０．１〜
１０ｇ、好ましくは１〜３ｇである。
常１００ｇ以下、例えば０．１〜１００ｇ、好ましくは
０．５〜１０ｇである。窒素源としては、例えば硝酸カ
リウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素等
の１種または２種以上が用いられる。添加割合は窒素源
の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し、０．１〜
１０ｇ、好ましくは１〜３ｇである。
【００２２】無機塩としてはリン酸カリウム、リン酸ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、塩化鉄、塩化カ
ルシウム等の１種または２種以上が用いられる。添加割
合は無機塩の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し
０．００１〜１０ｇ、好ましくは０．０１〜５ｇであ
る。必要に応じて特殊な要求物質としてビタミン類、核
酸類、酵母エキス、ペプトン、コーンスチープリカー等
の１種または２種以上が用いることができる。添加割合
は物質の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し１０
ｇ以下、例えば０．０５〜１０ｇ、好ましくは０．１〜
５ｇである。
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、塩化鉄、塩化カ
ルシウム等の１種または２種以上が用いられる。添加割
合は無機塩の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し
０．００１〜１０ｇ、好ましくは０．０１〜５ｇであ
る。必要に応じて特殊な要求物質としてビタミン類、核
酸類、酵母エキス、ペプトン、コーンスチープリカー等
の１種または２種以上が用いることができる。添加割合
は物質の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し１０
ｇ以下、例えば０．０５〜１０ｇ、好ましくは０．１〜
５ｇである。
【００２３】培地のpHは通常、２〜１１、好ましくは３
〜６に調整する。培養時間と共に培養液のpHが低下する
ので必要に応じて例えばＮａＯＨ水溶液などのアルカリ
を添加することによりpHを調整する。上記の培地の他に
公知の細菌用のブイヨン培地、カビ・酵母用の酵母エキ
ス・麦芽エキス培地（ＹＭ培地）等を用いることができ
る。
〜６に調整する。培養時間と共に培養液のpHが低下する
ので必要に応じて例えばＮａＯＨ水溶液などのアルカリ
を添加することによりpHを調整する。上記の培地の他に
公知の細菌用のブイヨン培地、カビ・酵母用の酵母エキ
ス・麦芽エキス培地（ＹＭ培地）等を用いることができ
る。
【００２４】上記の生産培地には出発原料としてのスク
アレンを添加するがこれは培養の開始時から培地中に存
在してもよく、あるいは培養中に間欠的または連続的に
添加してもよい。スクアレンの使用総量は培地１Ｌ当
り、例えば０．１〜１００ｇ、好ましくは２〜２０ｇで
ある。
アレンを添加するがこれは培養の開始時から培地中に存
在してもよく、あるいは培養中に間欠的または連続的に
添加してもよい。スクアレンの使用総量は培地１Ｌ当
り、例えば０．１〜１００ｇ、好ましくは２〜２０ｇで
ある。
【００２５】目的物質を多量に製造するためには、大規
模な培養を行う必要があり、そのためには本培養（生産
培養）の前に前培養を行って生産菌をあらかじめ増殖さ
せておくことが好ましい。このための前培養培地として
は前記の培地を用いることができるが、出発原料として
のスクアレンを含有することは必ずしも必要でない。
模な培養を行う必要があり、そのためには本培養（生産
培養）の前に前培養を行って生産菌をあらかじめ増殖さ
せておくことが好ましい。このための前培養培地として
は前記の培地を用いることができるが、出発原料として
のスクアレンを含有することは必ずしも必要でない。
【００２６】前培養及び本培養（生産培養）のための培
養条件は、１５℃〜８０℃、好ましくは２０〜３５℃の
温度であり、通常１日〜２０日間、好ましくは２〜５日
間、振盪培養あるいは通気かくはん培養を行う。
養条件は、１５℃〜８０℃、好ましくは２０〜３５℃の
温度であり、通常１日〜２０日間、好ましくは２〜５日
間、振盪培養あるいは通気かくはん培養を行う。
【００２７】本発明によればまた、生産菌を一旦培養し
た後、培養菌体を水性媒体中、例えばリン酸バッファー
中で、好気条件下、例えば上記の培養の場合と同様の条
件下で、スクアレンと接触せしめることによっても目的
化合物を製造することができる。
た後、培養菌体を水性媒体中、例えばリン酸バッファー
中で、好気条件下、例えば上記の培養の場合と同様の条
件下で、スクアレンと接触せしめることによっても目的
化合物を製造することができる。
【００２８】培養液または反応液から本化合物を得るた
めの方法は特に限定されないが、例えば以下の通りであ
る。すなわち、まず培養液または反応液から溶剤抽出し
て本発明の化合物が含まれる混合物を得る。その際、培
養液のpHを１〜６、好ましくは１〜３に調整して行うの
が好適である。
めの方法は特に限定されないが、例えば以下の通りであ
る。すなわち、まず培養液または反応液から溶剤抽出し
て本発明の化合物が含まれる混合物を得る。その際、培
養液のpHを１〜６、好ましくは１〜３に調整して行うの
が好適である。
【００２９】ここで用いる溶剤は本発明の化合物が溶解
する化合物であればいずれの溶剤を使用することができ
る。例えば四塩化炭素、トリクロロエチレン、トルエ
ン、ベンゼン、ジクロルメタン、クロロホルム、ジエチ
ルエーテル、酢酸エチル等の有機溶媒が用いられ、好ま
しくはジクロルエタン、クロロホルム、ジエチルエーテ
ル、酢酸エチルが用いられる。
する化合物であればいずれの溶剤を使用することができ
る。例えば四塩化炭素、トリクロロエチレン、トルエ
ン、ベンゼン、ジクロルメタン、クロロホルム、ジエチ
ルエーテル、酢酸エチル等の有機溶媒が用いられ、好ま
しくはジクロルエタン、クロロホルム、ジエチルエーテ
ル、酢酸エチルが用いられる。
【００３０】以上の抽出により得られた混合物より本発
明の化合物を分離精製するには吸着、溶出溶解、蒸留等
の通常の方法を用いることができる。例えば抽出混合物
を含む有機溶剤を留去後、シリカゲル、活性炭、スチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合ポリマー樹脂などを用いた
吸着クロマトグラフィー、強塩基性陰イオン交換樹脂、
弱塩基性陰イオン交換樹脂などを用いたイオン交換クロ
マトグラフィーなどにより精製を行うことができる。
明の化合物を分離精製するには吸着、溶出溶解、蒸留等
の通常の方法を用いることができる。例えば抽出混合物
を含む有機溶剤を留去後、シリカゲル、活性炭、スチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合ポリマー樹脂などを用いた
吸着クロマトグラフィー、強塩基性陰イオン交換樹脂、
弱塩基性陰イオン交換樹脂などを用いたイオン交換クロ
マトグラフィーなどにより精製を行うことができる。
【００３１】また溶剤により抽出した混合物を通常のメ
チルエステル化の方法、例えば酸性触媒下、メタノール
で還流する方法によりメチルエステル化し、そのエステ
ル混合物を蒸留することにより本発明の化合物をメチル
エステル化物として分離精製することができる。
チルエステル化の方法、例えば酸性触媒下、メタノール
で還流する方法によりメチルエステル化し、そのエステ
ル混合物を蒸留することにより本発明の化合物をメチル
エステル化物として分離精製することができる。
【００３２】本発明において、光学活性メチルコハク酸
の同定および光学純度の測定法は以下の方法に従って行
った。すなわち、本化合物がメチルコハク酸であること
の確認は赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共鳴スペク
トル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、及び質量分析法
により行った。
の同定および光学純度の測定法は以下の方法に従って行
った。すなわち、本化合物がメチルコハク酸であること
の確認は赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共鳴スペク
トル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、及び質量分析法
により行った。
【００３３】また本化合物の絶対配置および光学純度は
比旋光度の文献値との比較およびＬ−メントールとのジ
アステレオマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析によ
り行った。すなわち（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
比旋光度の文献値〔α〕20 D ＋１６．８８°（ｃ２．１
ｇ／１００mL、エタノール）(Justus Liebigs Ann. Che
m., ５３８，１（１９３９))より、得られたメチルコハ
ク酸の絶対配置および光学純度を求めた。
比旋光度の文献値との比較およびＬ−メントールとのジ
アステレオマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析によ
り行った。すなわち（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
比旋光度の文献値〔α〕20 D ＋１６．８８°（ｃ２．１
ｇ／１００mL、エタノール）(Justus Liebigs Ann. Che
m., ５３８，１（１９３９))より、得られたメチルコハ
ク酸の絶対配置および光学純度を求めた。
【００３４】また得られた化合物をＬ−メントールとｐ
−トルエンスルホン酸存在下で反応させジアステレオマ
ーを合成し、その13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを測定しメ
チルコハク酸部分のＲ体、Ｓ体それぞれの３位の炭素の
シグナルの面積比より正確な光学純度を測定した。
−トルエンスルホン酸存在下で反応させジアステレオマ
ーを合成し、その13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを測定しメ
チルコハク酸部分のＲ体、Ｓ体それぞれの３位の炭素の
シグナルの面積比より正確な光学純度を測定した。
【００３５】本発明の化合物はカルボキシル基を有し、
従って塩を形成することができる。これらの塩として、
例えば、アルカリ金属塩、例えばリチウム塩、ナトリウ
ム塩、及びカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカ
ルシウム塩およびマグネシウム塩、並びにアンモニウム
塩、等が挙げられる。これらの塩は、遊離化合物から常
法に従って得ることができ、例えば遊離化合物を所望の
塩基で、中和することにより得ることができる。
従って塩を形成することができる。これらの塩として、
例えば、アルカリ金属塩、例えばリチウム塩、ナトリウ
ム塩、及びカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカ
ルシウム塩およびマグネシウム塩、並びにアンモニウム
塩、等が挙げられる。これらの塩は、遊離化合物から常
法に従って得ることができ、例えば遊離化合物を所望の
塩基で、中和することにより得ることができる。
【００３６】また本発明の化合物はカルボキシル基を有
し、従って通常の方法例えば還元剤にリチウムアルミニ
ウムヒドリドなどを用いることによりアルデヒド、アル
コールに変換することができる。
し、従って通常の方法例えば還元剤にリチウムアルミニ
ウムヒドリドなどを用いることによりアルデヒド、アル
コールに変換することができる。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば、特定の微生物を用いて
スクアレンから高純度の光学活性メチルコハク酸を製造
することができる。
スクアレンから高純度の光学活性メチルコハク酸を製造
することができる。
【００３８】
【実施例】次に、実施例により、本発明をさらに具体的
に説明する。実施例１． 第１表の組成からなる培地５０mLを、５００
mL容量の坂口フラスコに入れ１２１℃、２０分間蒸気殺
菌した。同培地に土壌（神奈川県三浦地区）を１ｇ添加
し５日間、３０℃で振盪培養を行い増殖の認められた培
養液より寒天２％を含んだ第２表の組成からなるＹＭ平
板培地により菌株ＳＱＬ３４９株（微工研菌寄第１１６
５３号）を分離した。
に説明する。実施例１． 第１表の組成からなる培地５０mLを、５００
mL容量の坂口フラスコに入れ１２１℃、２０分間蒸気殺
菌した。同培地に土壌（神奈川県三浦地区）を１ｇ添加
し５日間、３０℃で振盪培養を行い増殖の認められた培
養液より寒天２％を含んだ第２表の組成からなるＹＭ平
板培地により菌株ＳＱＬ３４９株（微工研菌寄第１１６
５３号）を分離した。
【００３９】この菌株をＹＭ液体培地で２４時間、３０
℃で振盪培養し、その培養液を１容量％の割合で第１表
の組成からなる培地５０mLに植菌し４日間３０℃で振盪
培養を行った。ついで培養液を塩酸でpH２に調整し、ジ
エチルエーテルにより抽出を行い、無水硫酸ナトリウム
で脱水後、溶媒を留去した。ついでこの固形物をシリカ
ゲルカラムに吸着させヘキサン：ジエチルエーテル（１
００：１０）、ヘキサン：ジエチルエーテル（８０：２
０）、ヘキサン：ジエチルエーテル（６０：４０）の順
に溶出した。
℃で振盪培養し、その培養液を１容量％の割合で第１表
の組成からなる培地５０mLに植菌し４日間３０℃で振盪
培養を行った。ついで培養液を塩酸でpH２に調整し、ジ
エチルエーテルにより抽出を行い、無水硫酸ナトリウム
で脱水後、溶媒を留去した。ついでこの固形物をシリカ
ゲルカラムに吸着させヘキサン：ジエチルエーテル（１
００：１０）、ヘキサン：ジエチルエーテル（８０：２
０）、ヘキサン：ジエチルエーテル（６０：４０）の順
に溶出した。
【００４０】ヘキサン：ジエチルエーテル（６０：４
０）の画分を集め溶媒を留去した後、ＨＰ−２ＭＧ（三
菱化成社製）樹脂を担体としたカラムに吸着させ、水で
溶出し、本化合物の（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
画分を得た。本化合物は白色の固体であり収量は培養液
１Ｌ当り１７０mgであった。
０）の画分を集め溶媒を留去した後、ＨＰ−２ＭＧ（三
菱化成社製）樹脂を担体としたカラムに吸着させ、水で
溶出し、本化合物の（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
画分を得た。本化合物は白色の固体であり収量は培養液
１Ｌ当り１７０mgであった。
【００４１】この化合物がメチルコハク酸であることの
確認は赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共鳴スペクト
ル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分析法により
行った。得られたメチルコハク酸の赤外吸収スペクトル
を第１図に、そして13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを第２図
に示す。
確認は赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共鳴スペクト
ル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分析法により
行った。得られたメチルコハク酸の赤外吸収スペクトル
を第１図に、そして13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを第２図
に示す。
【００４２】得られた化合物の絶対配置および光学純度
は比旋光度の文献値との比較およびＬ−メントールとの
ジアステレオマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析に
より行った。すなわち得られた化合物の比旋光度は
〔α〕20 D ＋１６．８０°（ｃ２．１６ｇ／１００ml、
エタノール）であり（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
文献値〔α〕20 D ＋１６．８８°（ｃ２．１６ｇ／１０
０ml、エタノール）(Justus Liebigs Ann. Chem., ５３
８，１（１９３９))から光学純度は９９．５％と計算さ
れた。
は比旋光度の文献値との比較およびＬ−メントールとの
ジアステレオマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析に
より行った。すなわち得られた化合物の比旋光度は
〔α〕20 D ＋１６．８０°（ｃ２．１６ｇ／１００ml、
エタノール）であり（Ｒ）−（＋）−メチルコハク酸の
文献値〔α〕20 D ＋１６．８８°（ｃ２．１６ｇ／１０
０ml、エタノール）(Justus Liebigs Ann. Chem., ５３
８，１（１９３９))から光学純度は９９．５％と計算さ
れた。
【００４３】また得られた化合物をＬ−メントールとｐ
−トルエンスルホン酸存在下で１２０℃、３時間反応さ
せジアステレオマーを合成し13Ｃ核磁気共鳴スペクトル
を測定し、メチルコハク酸のＲ体、Ｓ体各々の３位の炭
素のシグナルの面積比より求めた鏡像異性体過剰率は９
８％e.e.以上と確認された。
−トルエンスルホン酸存在下で１２０℃、３時間反応さ
せジアステレオマーを合成し13Ｃ核磁気共鳴スペクトル
を測定し、メチルコハク酸のＲ体、Ｓ体各々の３位の炭
素のシグナルの面積比より求めた鏡像異性体過剰率は９
８％e.e.以上と確認された。
【００４４】
【００４５】
【００４６】実施例２．菌株ＳＱＬ３４９株（微工研菌
寄第１１６５３）をＹＭ液体培地で１６時間、３０℃で
振盪培養し、その培養液を１容量％の割合で第１の組
成、但し、スクアレンは１０．０ｇ／Ｌおよびグルコー
スを１．０ｇ／Ｌ添加した培地３Ｌが入った５Ｌ容量の
小型発酵槽に植菌し３０℃、５００rpm 、０．８VVM の
好気培養を６４時間行った。本化合物の（Ｒ）−（＋）
−メチルコハク酸の精製は実施例１の方法を反復した。
これにより培養液１Ｌ当り１．７ｇの（Ｒ）−（＋）−
メチルコハク酸を得た。
寄第１１６５３）をＹＭ液体培地で１６時間、３０℃で
振盪培養し、その培養液を１容量％の割合で第１の組
成、但し、スクアレンは１０．０ｇ／Ｌおよびグルコー
スを１．０ｇ／Ｌ添加した培地３Ｌが入った５Ｌ容量の
小型発酵槽に植菌し３０℃、５００rpm 、０．８VVM の
好気培養を６４時間行った。本化合物の（Ｒ）−（＋）
−メチルコハク酸の精製は実施例１の方法を反復した。
これにより培養液１Ｌ当り１．７ｇの（Ｒ）−（＋）−
メチルコハク酸を得た。
【００４７】この化合物が（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸であることは赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共
鳴スペクトル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分
析法、旋光度測定、及びＬ−メントールとのジアステレ
オマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析により確認
し、光学純度は９８％以上であることがわかった。
ク酸であることは赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共
鳴スペクトル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分
析法、旋光度測定、及びＬ−メントールとのジアステレ
オマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析により確認
し、光学純度は９８％以上であることがわかった。
【００４８】実施例３．菌株ＳＱＬ３４９株（微工研菌
寄第１１６５３）をＹＭ液体培地１０mLで７２時間、３
０℃で振とう培養し、培養液を遠心分離することにより
菌体を得た。この菌体を０．１Ｍリン酸バッファー（pH
７）で洗浄した後、同バッファー１０mLに懸濁し、グル
コース１０mg、スクアレンを２０mg加え４８時間、３０
℃で振とうした。本化合物の（Ｒ）−（＋）−メチルコ
ハク酸の精製は実施例１の方法を反復した。これにより
培養液１Ｌ当り２４０mgの（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸を得た。
寄第１１６５３）をＹＭ液体培地１０mLで７２時間、３
０℃で振とう培養し、培養液を遠心分離することにより
菌体を得た。この菌体を０．１Ｍリン酸バッファー（pH
７）で洗浄した後、同バッファー１０mLに懸濁し、グル
コース１０mg、スクアレンを２０mg加え４８時間、３０
℃で振とうした。本化合物の（Ｒ）−（＋）−メチルコ
ハク酸の精製は実施例１の方法を反復した。これにより
培養液１Ｌ当り２４０mgの（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸を得た。
【００４９】この化合物が（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸であることは赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共
鳴スペクトル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分
析法、旋光度測定、及びＬ−メントールとのジアステレ
オマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析により確認
し、光学純度は９８％以上であることがわかった。
ク酸であることは赤外吸収スペクトル法、 1Ｈ核磁気共
鳴スペクトル法、13Ｃ核磁気共鳴スペクトル法、質量分
析法、旋光度測定、及びＬ−メントールとのジアステレ
オマーの13Ｃ核磁気共鳴スペクトルの解析により確認
し、光学純度は９８％以上であることがわかった。
【００５０】実施例４．第３表に示した菌株を実施例２
と同様の方法により培養し第３表のように光学活性メチ
ルコハク酸を生産した。ただし小型発酵槽培養時間は第
３表に示したように菌株ごとに変えた。本化合物の精製
および光学純度の決定は実施例１の方法を反復した。
と同様の方法により培養し第３表のように光学活性メチ
ルコハク酸を生産した。ただし小型発酵槽培養時間は第
３表に示したように菌株ごとに変えた。本化合物の精製
および光学純度の決定は実施例１の方法を反復した。
【００５１】 第３表 ───────────────────────────────── 培養時間 メチルコハク酸 立体配置 光学純度 hr 生産量 ｇ／Ｌ ％ ───────────────────────────────── IFO 10073 72 2.2 Ｒ体 99以上 IFO 1209 99 1.3 Ｒ 99以上 IFO 1741 90 1.4 Ｒ 99以上 IFO 1742 163 0.6 Ｒ 99以上 IFO 0746 100 0.3 Ｒ 99以上 ─────────────────────────────────
【図１】本発明により得た（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸の赤外吸収スペクトルを示す。
ク酸の赤外吸収スペクトルを示す。
【図２】本発明により得た（Ｒ）−（＋）−メチルコハ
ク酸の13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
ク酸の13Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 キャンディダ（Candida ) 属に属しスク
アレンを次の式（Ｉ）： 【化１】 （式中、＊印は不斉炭素原子であることを示す）で表わ
される光学活性メチルコハク酸に変換することができる
微生物を用いてスクアレンを光学活性メチルコハク酸に
転換し、そして該光学活性メチルコハク酸を採取するこ
とを特徴とする光学活性メチルコハク酸の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3221614A JPH0592A (ja) | 1990-10-19 | 1991-09-02 | 光学活性メチルコハク酸の製造方法 |
| US07/774,457 US5217887A (en) | 1990-10-19 | 1991-10-10 | Process for production of (r) methylsuccinic acid from squalene using candida lipolytica |
| EP91309453A EP0481712B1 (en) | 1990-10-19 | 1991-10-15 | Process for production of optically active methylsuccinic acid |
| DE69119025T DE69119025T2 (de) | 1990-10-19 | 1991-10-15 | Verfahren zur Herstellung von optisch aktiver Methyl-Bernsteinsäure |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2-279099 | 1990-10-19 | ||
| JP27909990 | 1990-10-19 | ||
| JP3221614A JPH0592A (ja) | 1990-10-19 | 1991-09-02 | 光学活性メチルコハク酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0592A true JPH0592A (ja) | 1993-01-08 |
Family
ID=26524408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3221614A Pending JPH0592A (ja) | 1990-10-19 | 1991-09-02 | 光学活性メチルコハク酸の製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5217887A (ja) |
| EP (1) | EP0481712B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0592A (ja) |
| DE (1) | DE69119025T2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100413840C (zh) * | 2004-06-24 | 2008-08-27 | 复旦大学 | 一种甲基丁二酸的催化合成方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3843466A (en) * | 1969-11-10 | 1974-10-22 | Ajinomoto Kk | Method of producing dicarboxylic acids by fermentation |
| DE3226888A1 (de) * | 1982-07-17 | 1984-01-19 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Verfahren zur durchfuehrung elektromikrobieller reduktionen |
| JPS59141191A (ja) * | 1983-02-01 | 1984-08-13 | セイコーエプソン株式会社 | エレクトロ・ルミネツセンス装置 |
| DK40485A (da) * | 1984-03-02 | 1985-09-03 | Hoffmann La Roche | Prostaglandin-mellemprodukter |
| DE3540834A1 (de) * | 1985-11-18 | 1987-05-21 | Henkel Kgaa | Verfahren zur herstellung von dicarbonsaeuren |
-
1991
- 1991-09-02 JP JP3221614A patent/JPH0592A/ja active Pending
- 1991-10-10 US US07/774,457 patent/US5217887A/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-15 EP EP91309453A patent/EP0481712B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-10-15 DE DE69119025T patent/DE69119025T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0481712A3 (en) | 1993-04-21 |
| DE69119025T2 (de) | 1996-12-19 |
| DE69119025D1 (de) | 1996-05-30 |
| US5217887A (en) | 1993-06-08 |
| EP0481712A2 (en) | 1992-04-22 |
| EP0481712B1 (en) | 1996-04-24 |
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