JPH06184158A - Ｆｏ−１２８９物質およびその製造法 - Google Patents

Ｆｏ−１２８９物質およびその製造法

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JPH06184158A JP5035261A JP3526193A JPH06184158A JP H06184158 A JPH06184158 A JP H06184158A JP 5035261 A JP5035261 A JP 5035261A JP 3526193 A JP3526193 A JP 3526193A JP H06184158 A JPH06184158 A JP H06184158A
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 アスペルギルス エスピー ＦＯ−１２８９
により生産され、アシルコエンザイムＡコレステロール
アシル転位酵素阻害活性を有するＦＯ−１２８９物質お
よびその製造法を得る。この物質はコレステロール蓄積
に起因する疾病の予防および治療に有用である。 【構成】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８９物
質を生産する能力を有する微生物を培地に培養して培養
中にＦＯ−１２８９物質を蓄積せしめ、該培養物から採
取した式 【化１】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 およびＲ4 は水素またはアシ
ル基）で表されるＦＯ−１２８９物質である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アシルコエンザイムＡ
コレステロールアシル転位酵素阻害を有する新規物質Ｆ
Ｏ−１２８９物質およびその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、いくつかの高脂血症治療のための
薬物が知られている。高脂血症の治療薬としては、
（１）コレステロール、（２）コレステロールの吸収阻
害、（３）コレステロールの異化促進、（４）リポ蛋白
リパーゼの活性化（リポ蛋白の合成の抑制）などの作用
を有する薬物が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】近年、食生活の向上に
伴い成人の高脂血症や動脈硬化などコレステロール蓄積
に起因する症状が現代病として問題視されている。高脂
血症は、動脈硬化の進行を促進する因子のひとつとして
知られており、血中コレステロールを低下させることで
虚血性心疾患の減少をもたらすことができる。又、高脂
血症になると心筋硬塞の発症率も高くなるなど高脂血
症、特に高コレステロール血症のより有効で安全な治療
薬の出現が望まれている。
【０００４】コレステロールはアシルコエンザイムＡか
らアシル基転位によりコレステロールエステルとなり、
細胞内および血中リポ蛋白に蓄積される。このアシル基
転位反応を触媒する酵素がアシルコエンザイムＡコレス
テロールアシル転位酵素であり、コレステロールの腸管
からの吸収および冠動脈における泡沫細胞の形成に深く
係わっている。したがって、アシルコエンザイムＡコレ
ステロールアシル転位酵素を阻害する物質は、かかる疾
病に有効であることが推察される。かかる実情におい
て、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵
素阻害活性を有する物質を提供することは、高脂血症や
それに基く動脈硬化などの成人病の治療上有用なことで
ある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物の
生産する代謝産物について研究を続けた結果、新たな土
壌から分離したＦＯ−１２８９菌株の培養物中にアシル
コエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素阻害活性
を有する物質が産生されることを見出した。次いで、該
培養物からアシルコエンザイムＡコレステロールアシル
転位酵素阻害活物質を分離、精製した結果、後記の理化
学的性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全
く知られていないことから、本物質をＦＯ−１２８９物
質と称することにした。
【０００６】本発明は、係る知見に基いて完成されたも
のであって、分子式Ｃ31Ｈ37ＮＯ10で表されるＦＯ−１
２８９Ａ物質、分子式Ｃ32Ｈ39ＮＯ10で表されるＦＯ−
１２８９Ｂ物質、ＦＯ−１２８９Ｃ物質およびＦＯ−１
２８９Ｄ物質を提供するものである。更に、本発明は、
アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８９物質を生産す
る能力を有する微生物を培地に培養して培養物にＦＯ−
１２８９物質を蓄積せしめ、該培養物からＦＯ−１２８
９物質を採取することを特徴とするＦＯ−１２８９物質
の製造法を提供するものである。
【０００７】本発明のＦＯ−１２８９物質を生産する能
力を有する微生物（以下、ＦＯ−１２８９物質生産菌と
称する）はアスペルギルス属に属するが、例えば本発明
者らが分離したアスペルギルス属に属するＦＯ−１２８
９菌株は、本発明の最も有効に使用される菌株の一例で
あって、本菌株の菌学的性状を示すと次のとおりであ
る。本発明のＦＯ−１２８９物質を生産するために使用
される菌株としては、例えば本発明者らによって土壌か
ら分離されたアスペルギルス エスピー（Ａｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｓｐ．）ＦＯ−１２８９株が挙げられる。
【０００８】Ｉ．本菌株は、マルトエキストラクト寒天
培地、ツアペツク・イーストエキストラクト寒天培地、
２０％シュークロース・ツアペツク・イーストエキスト
ラクト寒天培地で良好に生育し、分生子の着生も良好で
ある。ツアペツク・イーストエキストラクト寒天培地に
生育したコロニーを顕微鏡で観察すると、菌糸は透明で
隔壁を有しており、分生子柄は主に基底菌糸より直生
し、その表面は滑面である。分生子柄の先端は、ふくら
み、フラスコ形の頂のう（直径１０〜２５μｍ）を形成
する。メトレは形成されず、フイアライドは頂のう上に
直生する。分生子は直径２〜３μｍで、その形は球形、
亜球形である。
【０００９】II. 培養上の諸性状 （１）本菌株の培養所見を表１に示す。本所見は各種培
地上で２５℃、７日間培養した場合の肉眼的に観察した
結果である。
【００１０】
【表１】
【００１１】（２）ツアペツク・イーストエキストラク
ト寒天培地における３７℃、７日間培養した場合の生育
状態は、非常に旺盛（８０ｍｍ以上）である。一方、５
℃、７日間培養した場合、生育しなかった。前記のすべ
ての培地には、菌の生育に伴う分泌液および菌核の形成
は観察されなかった。
【００１２】III.生理学的性状 （１）生育温度範囲：１５〜４７℃ （２）至適生育温度範囲：２７〜４０℃ （３）生育ｐＨ範囲：３〜１１ （４）至適生育ｐＨ範囲：５〜８ （５）好気性、嫌気性の区別：好気性
【００１３】上記のＦＯ−１２８９株の形態的特徴、培
養上の諸性状、生理学的性状に基づき、既知菌種との比
較を試みた結果、本菌株をアスペルギルス（Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ）属に属する一菌株と同定し、アスペルギ
ルス エスピー ＦＯ−１２８９と命名した。本菌株
は、アスペルギルス エスピー ＦＯ−１２８９（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＦＯ−１２８９）として工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている．（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１２１９４）。
【００１４】以上、ＦＯ−１２８９生産菌について説明
したが、菌の一般的性状として菌学上の性状はきわめて
変異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは
通常行われる紫外線照射または変異誘導体、例えばＮ−
メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチル
メタンスルホネートなどを用いる人工的変異手段により
変異することは周知の事実であり、このような人工的変
異株は勿論、自然変異株も含め、アスペルギルス属に属
し、ＦＯ−１２８９物質を生産する能力を有する菌株
は、すべて本発明に使用することができる。また、細胞
融合、遺伝子操作などの細胞工学的に変異させた菌株も
物質ＦＯ−１２８９物質生産菌として包含される。
【００１５】本発明においては、先ずアスペルギルス属
に属するＦＯ−１２８９物質生産菌が培地に培養され
る。本菌の培養においては、通常真菌の培養法が一般に
用いられる。培地としては微生物が同化し得る炭素源、
資化し得る窒素源、さらには必要に応じて無機酸塩など
を含有させた栄養培地が使用される。同化し得る炭素源
としては、ブドウ糖、ショ糖、糖密、デキストリン、セ
ルロースなどが単独または組み合わせて用いられる。
【００１６】資化し得る窒素源としては、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・ステ
イープ・リカー、綿実粕、カゼイン、大豆蛋白加水分解
物、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、硝酸塩、アンモ
ニウム塩などの無機窒素化合物が単独または組み合わせ
て用いられる。その他、必要に応じてナトリウム塩、カ
リウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩な
どの無機塩、重金属塩類が添加される。さらに、培地に
は、必要に応じて、本菌の生育やＦＯ−１２８９物質の
生産を促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質な
どを適当に添加してもよい。
【００１７】培養は通常振とうまたは通気攪拌培養など
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培養のｐＨは中性付近で培養を行う
のが好ましい。培養温度は２０〜３７℃で行い得るが、
通常は２４〜３０℃に保つのがよい。培養時間は通常２
〜３日間培養を行うと、本ＦＯ−１２８９物質が蓄積さ
れるので、培養中の蓄積量が最大に達した時に、培養を
終了すればよい。
【００１８】これらの培地組成、培地の液性、培養温
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液
体培養において、発泡があるときは、シリコン油、植物
油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用できる。このよ
うにして得られた培養物に蓄積されるＦＯ−１２８９物
質は、菌体内および培養濾液中に含有されるので、培養
物を遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、各々から
本ＦＯ−１２８９物質を採取するのが有利である。
【００１９】上記の培養濾液からＦＯ−１２８９物質を
採取するには、先ず培養濾液を酢酸エチル、酢酸ブチ
ル、ベンゼンなどの非親水性有機溶媒で抽出し、抽出液
を減圧濃縮して粗製のＦＯ−１２８９物質が得られる。
この粗製物質はさらに脂溶性物質の精製に通常用いられ
る公知の方法、例えばシリカゲル、アルミナなどの担体
を用いるカラムクロマトグラフイーにより各々ＦＯ−１
２８９物質を分離精製することができる。
【００２０】また、前記の菌体からＦＯ−１２８９物質
を採取するには、菌体を含水アセトン、含水メタノール
などの含水親水性有機溶媒で抽出し、得られた抽出液を
減圧濃縮し、その濃縮物を酢酸エチル、酢酸ブチル、ベ
ンゼンなどの非親水性有機溶媒で抽出、得られた抽出液
は前記の培養濾液から得た抽出液と合わせて分離精製す
るか、あるいは前記と同様の方法によりＦＯ−１２８９
物質を分離精製することができる。
【００２１】次に、本発明のＦＯ−１２８９物質の理化
学的性状について述べる。本発明によるＦＯ−１２８９
Ａ物質、ＦＯ−１２８９Ｂ物質、ＦＯ−１２８９Ｃ物質
およびＦＯ−１２８９Ｄ物質の理化学的性状は表２に示
す通りである。
【００２２】
【表２】
【００２３】溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノ
ール、アセトニトリル、酢酸エチル、ベンゼンに可溶、
水に不溶 塩基性、酸性、中性の区別：中性 物質の性状：黄色粉末 化学構造：ＦＯ−１２８９Ａ物質 Ｒ1 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ2 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ3 ：
−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ4 ：−Ｈ ＦＯ−１２８９Ｂ物質 Ｒ1 ：−ＣＯ−ＣＨ2 −ＣＨ3 、Ｒ2 ：−ＣＯ−Ｃ
Ｈ3 、Ｒ3 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ4 ：−Ｈ ＦＯ−１２８９Ｃ物質 Ｒ1 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ2 ：−ＣＯ−ＣＨ2 −Ｃ
Ｈ3 、Ｒ3 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ4 ：−Ｈ ＦＯ−１２８９Ｄ物質 Ｒ1 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ2 ：−ＣＯ−ＣＨ3 、Ｒ3 ：
−ＣＯ−ＣＨ2 −ＣＨ3 、Ｒ4 ：−Ｈ
【００２４】次に、本発明のＦＯ−１２８９物質の生物
学的性状について述べる。 （１）ラツト由来アシルコエンザイムＡコレステロール
アシル転位酵素に対する阻害作用 アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素活
性に対する影響は供田らの方法（ザ・ジャーナル・オブ
・アンチバイオティックス、４４巻、１３６頁、１９９
１年）に従い、ラツト肝ミクロソーム画分より調製した
粗酵素を用い、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
中３００μＭ牛血清アルブミン、３０μＭ〔１−14Ｃ〕
オレオイル−ＣｏＡ（０．０２μＣｉ）、３０μＭコレ
ステロール（３０分の１重量のトリトンＷＲ−１３３９
で溶解させたもの）を添加して全量２００μl とし、３
７℃で３０分間反応させ、総脂質をクロロホルム：メタ
ノール（２：１）混合液で抽出後、ＴＬＣ（キーゼルゲ
ルＧＦ254 、展開溶媒として石油エーテル：ジエチルエ
ーテル：酢酸＝９０：１０：１）で各脂質を分離後、コ
レステロールエステル画分にとり込まれた放射活性をＲ
Ｉスキャナー（アンビス社製）で分析し、アシルコエン
ザイムＡコレステロールアシル転位酵素活性を測定し
た。本酵素活性を５０％阻害する濃度を算定した結果は
表３に示す。
【００２５】
【表３】
【００２６】
【発明の効果】以上のように、本発明のＦＯ−１２８９
物質は、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転
位酵素に対して著しい阻害活性を示すことから、ヒトの
コレステロール蓄積に起因する疾病の予防および治療に
有用である。
【００２７】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明する。
【実施例】５００ｍｌ容三角フラスコにグルコース２．
０％、ポリペプトン０．５％、イーストエキストラクト
０．２％、硫酸マグネシウム０．０５％、リン酸２水素
系カリウム０．１％、寒天０．１％を含む培地（ｐＨ
６．０に調整）１００ｍｌを仕込み、綿栓後、蒸気滅菌
し、寒天培地上に生育させたアスペルギルス エスピ
ー．ＦＯ−１２８９（ＦＥＲＭ Ｐ−１２１９４）を白
金耳にて無菌的に接種し、２７℃で４８時間振とう培養
して種培養液を得た。
【００２８】一方、５０Ｌジャーフアーメンター１基に
グルコース１．０％、トリプトン０．５％、酵母エキス
０．３％、マルトエキス０．３％、寒天０．１％（ｐＨ
６．０に調整）に仕込み、蒸気滅菌冷却後、種培養した
種培養液２００ｍｌを無菌的に移植し、攪拌速度２５０
ｒｐｍ、通気量１０Ｌ／分の培養条件下、２７℃で７２
時間、通気攪拌培養した。培養後、培養液３０Ｌを酢酸
エチル１８Ｌで抽出し、抽出液を減圧濃縮して粗製物を
得た。この粗製物をシリカゲル（２５０ｇ、メルク社
製、Ａｒｔ．９３８５）のカラムにチャージし、クロロ
ホルム−メタノール（９９：１）で溶出するカラムクロ
マトグラフイーを行った。各フラクションは１００ｍｌ
づつ分画し、活性分を含むフラクションを集め、減圧乾
固して粗活性物質１．５ｇを得た。
【００２９】これを５回に分けて高速液体クロマトグラ
フイーにより分離精製した。装置はトリロータＶ（日本
分光社製）を用い、カラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ａ−３
４３（ＯＤＳ系樹脂、山村化学研究所製）を用い、溶媒
系は５５％のアセトニトリル水を用い、検出はＵＶ２８
０ｎｍ、流速は８ｍｌ／分で行った。その結果、ＦＯ−
１２８９Ａ物質５０ｍｇ、ＦＯ−１２８９Ｂ物質５ｍ
ｇ、ＦＯ−１２８９Ｃ物質５ｍｇおよびＦＯ−１２８９
Ｄ物質４．５ｍｇをそれぞれ単離した。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＦＯ−１２８９Ａ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
【図２】ＦＯ−１２８９Ａ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
【図３】ＦＯ−１２８９Ａ物質の1HＮＭＲスペクトルで
ある。
【図４】ＦＯ−１２８９Ａ物質の13ＣＮＭＲスペクトル
である。
【図５】ＦＯ−１２８９Ｂ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
【図６】ＦＯ−１２８９Ｂ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
【図７】ＦＯ−１２８９Ｂ物質の1HＮＭＲスペクトルで
ある。
【図８】ＦＯ−１２８９Ｂ物質の13ＣＮＭＲスペクトル
である。
【図９】ＦＯ−１２８９Ｃ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
【図１０】ＦＯ−１２８９Ｃ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
【図１１】ＦＯ−１２８９Ｃ物質の1HＮＭＲスペクトル
である。
【図１２】ＦＯ−１２８９Ｃ物質の13ＣＮＭＲスペクト
ルである。
【図１３】ＦＯ−１２８９Ｄ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。
【図１４】ＦＯ−１２８９Ｄ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
【図１５】ＦＯ−１２８９Ｄ物質の1HＮＭＲスペクトル
である。
【図１６】ＦＯ−１２８９Ｄ物質の13ＣＮＭＲスペクト
ルである。
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Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式 【化１】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 およびＲ4 は水素またはアシ
    ル基）で表されるＦＯ−１２８９物質。
  2. 【請求項２】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８
    ９物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養して
    培養物中にＦＯ−１２８９物質を蓄積せしめ、該培養物
    からＦＯ−１２８９物質を採取することを特徴とするＦ
    Ｏ−１２８９物質の製造法。
  3. 【請求項３】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８
    ９物質を生産する能力を有する微生物が、アスペルギル
    ス エスピー ＦＯ−１２８９（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
    ｓ ｓｐ．ＦＯ−１２８９ ＦＥＲＭ Ｐ−１２１９
    ４）である請求項２記載の製造法。
  4. 【請求項４】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８
    ９物質を生産する能力を有する微生物。
  5. 【請求項５】 微生物が、アスペルギルス エスピー
    ＦＯ−１２８９である請求項４記載の微生物。
  6. 【請求項６】 式 【化２】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 はアセチル、Ｒ4 は水
    素）で表されるＦＯ−１２８９Ａ物質。
  7. 【請求項７】 式 【化３】 （式中、Ｒ1 はプロピオニル、Ｒ2 およびＲ3 はアセチ
    ル、Ｒ4 は水素）で表されるＦＯ−１２８９Ｂ物質。
  8. 【請求項８】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８
    ９Ｂ物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養し
    て培養物中にＦＯ−１２８９Ｂ物質を蓄積せしめ、該培
    養物からＦＯ−１２８９Ｂ物質を採取することを特徴と
    するＦＯ−１２８９Ｂ物質の製造法。
  9. 【請求項９】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２８
    ９Ｂ物質を生産する能力を有する微生物が、アスペルギ
    ルス エスピー ＦＯ−１２８９（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
    ｕｓ ｓｐ．ＦＯ−１２８９ ＦＥＲＭ Ｐ−１２１９
    ４）である請求項８記載の製造法。
  10. 【請求項１０】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｂ物質を生産する能力を有する微生物。
  11. 【請求項１１】 微生物が、アスペルギルス エスピー
    ＦＯ−１２８９である請求項１０記載の微生物。
  12. 【請求項１２】 式 【化４】 （式中、Ｒ1 およびＲ3 はアセチル、Ｒ2 はプロピオニ
    ル、Ｒ4 は水素）で表されるＦＯ−１２８９Ｃ物質。
  13. 【請求項１３】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｃ物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養
    して培養中にＦＯ−１２８９Ｃ物質を蓄積せしめ、該培
    養物からＦＯ−１２８９Ｃ物質を採取することを特徴と
    するＦＯ−１２８９Ｃ物質の製造法。
  14. 【請求項１４】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｃ物質を生産する能力を有する微生物が、アスペル
    ギルス エスピー ＦＯ−１２８９（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
    ｌｕｓ ｓｐ．ＦＯ−１２８９ ＦＥＲＭ Ｐ−１２１
    ９４）である請求項８記載の製造法。
  15. 【請求項１５】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｃ物質を生産する能力を有する微生物。
  16. 【請求項１６】 微生物が、アスペルギルス エスピー
    ＦＯ−１２８９である請求項１０記載の微生物。
  17. 【請求項１７】 式 【化５】 （式中、Ｒ1 およびＲ2 はアセチル、Ｒ3 はプロピオニ
    ル、Ｒ4 は水素）で表されるＦＯ−１２８９Ｄ物質。
  18. 【請求項１８】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｄ物質を生産する能力を有する微生物を培地に培養
    して培養中にＦＯ−１２８９Ｄ物質を蓄積せしめ、該培
    養物からＦＯ−１２８９Ｄ物質を採取することを特徴と
    するＦＯ−１２８９Ｄ物質の製造法。
  19. 【請求項１９】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｄ物質を生産する能力を有する微生物が、アスペル
    ギルス エスピー ＦＯ−１２８９（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
    ｌｕｓ ｓｐ．ＦＯ−１２８９ ＦＥＲＭ Ｐ−１２１
    ９４）である請求項１３記載の製造法。
  20. 【請求項２０】 アスペルギルス属に属し、ＦＯ−１２
    ８９Ｄ物質を生産する能力を有する微生物。
  21. 【請求項２１】 微生物が、アスペルギルス エスピー
    ＦＯ−１２８９である請求項２０記載の微生物。
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