JPH06256338A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−３４７７６ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】本発明は式［Ｉ］ 【化１】 で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６、その薬学的
に許容されうる塩、その製法およびその用途ならびに抗
腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の生産性を有する微生物に
関するものである。 【効果】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６は、ヒ
トおよびマウス等の哺乳動物の腫瘍細胞の増殖を強く抑
制することから、抗腫瘍剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、更に詳細には腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍作用
を有する新規化合物、その製法およびその用途ならびに
該化合物の生産性を有する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】悪性腫瘍の化学療法の分野においては、
すでに多数の化合物が医薬として実用化されている。し
かしながら、様々な種類の腫瘍に対してその効果は必ず
しも十分ではなく、またこれらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性の問題も、臨床上の使用法を複雑にしている｛第
４７回日本癌学会総会記事、１２〜１５頁（１９８８
年）参照｝。

【０００３】このような状況下、悪性腫瘍の治療の分野
においては、常に新規抗腫瘍性物質の開発が求められて
いる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、抗腫瘍作用
を有し、更には既存の抗腫瘍性物質が十分に効果を発揮
できない種々の腫瘍に対しても優れた抗腫瘍作用を有す
る化合物を提供しようとするものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決すべく、抗腫瘍作用を有する物質について微生物代
謝産物を広くスクリーニングした結果、式［Ｉ］

【０００６】

【化２】 で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６が優れた抗腫
瘍作用を有すること、またミクロモノスポーラ（Ｍｉｃ
ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物であるミク
ロモノスポーラ エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏ
ｒａ ｓｐ．）Ａ３４７７６が抗腫瘍性物質ＢＥ−３４
７７６の生産性を有することを見いだし、本発明を完成
した。

【０００７】即ち、本発明は式［Ｉ］で表される抗腫瘍
性物質ＢＥ−３４７７６、その薬学的に許容されうる
塩、その製法およびその用途ならびに抗腫瘍性物質ＢＥ
−３４７７６の生産性を有する微生物に関するものであ
る。

【０００８】本明細書で言及される各種の用語および定
義について説明する。

【０００９】式［Ｉ］で表される化合物は、その抗腫瘍
性効果および産生菌株（Ａ ３４７７６株）に因んで、
抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６と命名された。

【００１０】以下に抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の理
化学的性状を示す。 性状：黄色粉末、固体または結晶 分子式：Ｃ₁₃Ｈ₁₀Ｏ₄ マススペクトル：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ２３１．０６
４３［ＭＨ］⁺ ＵＶスペクトル：λ_max（ＭｅＯＨ）：２０３，２４
５，３１８，３８５ｎｍ ＩＲスペクトル：（ＫＢｒ）：３４００，１６０５，１
５６４，１４７０，１１４７，８６６，８１８，７３７
ｃｍ^{-1 １} Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆，δｐｐｍ）：２．６６（３Ｈ，ｓ），３．８４
（２Ｈ，ｓ），６．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈ
ｚ），７．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．６
７（１Ｈ，ｓ），９．７３（１Ｈ，ｓ），１２．５０
（１Ｈ，ｓ）^１３ Ｃ−ＮＭＲ：（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，δ
ｐｐｍ）：１３．９，１９．１，１１４．９，１１５．
８，１１６．４，１２０．９，１２３．４，１２６．
３，１３６．９，１４６．６，１５５．８，１５７．
６，１８７．９ 溶解性：水に溶けにくく、メタノールにやや溶け、ジメ
チルスルホキシドに可溶酸性、中性、塩基性の区別：中
性物質 Ｒｆ値：０．５６［メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒；クロロホルム／メタノール（１
０：１，ｖ／ｖ）］ 呈色反応：硫酸反応 陽性。

【００１１】次に、抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の製
造法について説明する。

【００１２】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６またはその
薬学的に許容されうる塩はミクロモノスポーラ（Ｍｉｃ
ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）属に属し、抗腫瘍性物質ＢＥ
−３４７７６の生産性を有する微生物を培養し、培養物
から抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６を採取し、要すれば
薬学的に許容されうる塩とすることにより、製造するこ
とができる。

【００１３】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の製造に用
いる生産菌は、抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６を生産す
るものであれば、いずれでも良いが、例えば本発明者ら
が、新たにニューカレドニア、ヌーメアにて分離採取し
たミクロモノスポーラ エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏ
ｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ ３４７７６株を用いることが
できる。

【００１４】Ａ ３４７７６株は下記の菌学的性状を有
する。

【００１５】１． 形態 Ａ ３４７７６株はよく伸長し分岐する基生菌糸を形成
するが気菌糸は形成しない。胞子は基生菌糸上に一個づ
つ着生する。胞子の大きさは０．７〜０．９０．８〜
１．０μｍ位のほぼ球形で、その表面は鈍い刺状であ
り、遊走性は示さない。また、胞子のう、鞭毛胞子およ
び菌核等の特殊な器官は観察されない。

【００１６】

【表１】

【００１７】

【表２】

【００１８】

【表３】

【００１９】

【表４】

【００２０】

【表５】 ７． 菌体成分 細胞壁からはｍｅｓｏージアミノピメリン酸、グリシン
が検出されたが、アラビノース、ガラクトースは認めら
れず細胞壁タイプはＩＩ型と考えられる。全菌体主要糖
成分はアラビノースおよびキシロースであり、糖パター
ンはＤ型、主要メナキノンはＭＫ−１０（Ｈ₄）であっ
た。

【００２１】以上の菌学的諸性質よりＡ ３４７７６株
は放線菌ミクロモノスポーラ属に属すると考えられる。

【００２２】したがって、Ａ ３４７７６株をミクロモ
ノスポーラ エスピーＡ ３４７７６（Ｍｉｃｒｏｍｏ
ｎｏｓｐｏｒａ ｓｐ． Ａ ３４７７６）と命名し
た。また、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓ
ｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏ
ｌ．４，（１９８９）および Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．２１，（１９７
１）など文献検索の結果、Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒ
ａ ｐｕｒｐｕｒｅｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ が近
縁の種と推定された。

【００２３】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１３３９６である。

【００２４】本発明のＢＥ−３４７７６を製造するにあ
たり、ＢＥ−３４７７６の生産菌株を栄養源含有培地に
接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−３４７
７６を含む培養物が得られる。栄養源としては、放線菌
の栄養源として公知のものが使用できる。例えば、炭素
源としては、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デンプ
ン、庶糖、糖蜜またはデキストリンなどが単独または混
合物として用いられる。窒素源としては、市販されてい
る大豆粉、コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エ
キス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、無機アンモ
ニウム塩または硝酸ナトリウムなどが単独または混合物
として用いられる。無機塩としては、市販されている炭
酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マ
グネシウムまたは各種リン酸塩などを使用することがで
きる。その他必要に応じて、鉄、マンガンまたは亜鉛等
の重金属塩を微量添加することもできる。また、発泡の
激しい場合には消泡剤として、例えば大豆油または亜麻
仁油等の植物油、オクタデカノール等の高級アルコール
類、各種シリコン化合物などを適宜添加してもよい。こ
れらのもの以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−３４７
７６の生産に役立つものであれば、いずれも使用するこ
とができる。

【００２５】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養または通気培養等のいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養または深部通気攪拌培養が望ましい。
培養温度は２７〜３７℃が適当であるが、好ましくは２
５〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は２４時間〜１９２時間、好ましくは７２
時間〜１４４時間である。培養物から目的とするＢＥ−
３４７７６を採取するには、微生物の生産する代謝物か
ら採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用され
る。

【００２６】培養により生成したＢＥ−３４７７６は、
通常、培養物中の菌体内および菌体外の両方に蓄積され
ることが多いので、例えば遠心分離、濾過等の手段によ
り培養濾液および菌体に分離し、培養濾液および菌体よ
り通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂
法または吸着もしくは分配クロマトグラフィー法および
ゲル濾過法などを単独または組み合わせて行なうことに
より精製できる。

【００２７】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６を
生産する微生物の変異株は、例えばＸ線もしくは紫外線
等の照射処理、例えばナイトロジェンマスタード、アザ
セリン、亜硝酸、２−メチルアミノプリンもしくはＮ−
メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転
換、形質導入または接合等の通常用いられる菌種変換処
理方法により得ることができ、当該変異株をＢＥ−３４
７７６の製造に用いることもできる。

【００２８】式［Ｉ］で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−３
４７７６は、常法により薬学的に許容されうる塩とする
ことができる。塩としては、例えばナトリウム、カリウ
ム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等の
アルカリ土類金属塩等を挙げることができる。

【００２９】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の抗腫瘍作
用を示すため生物学的試験を行ったので、その結果につ
いて以下に記す。

【００３０】ＢＥ−３４７７６の抗腫瘍活性 抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６のマウス実験腫瘍細胞に
対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
で試験を行なった。Ｐ３８８腫瘍細胞に対するｉｎ ｖ
ｉｔｒｏの抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−３４７７６をジメ
チルスルホキシドに溶解した後、ＣＭＦ−ＰＢＳ（Ｃａ
²⁺，Ｍｇ²⁺ ｆｒｅｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆ
ｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で逐次希釈し、３．０×１０
³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％
含有ＲＰＭＩ−１６４０培地）１００μｌに対し１０μ
ｌを加えた。３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養し
た後、ＭＴＴ測定法により、対照群と比較した。その結
果、ＢＥ−３４７７６はＰ３８８腫瘍細胞に対し、強い
増殖阻止活性を示し、その腫瘍細胞の増殖を５０％阻止
する濃度ＩＣ₅₀は４．１３μＭであった。

【００３１】ＢＥ−３４７７６のヒト癌細胞に対する増
殖阻止作用を決定するため、ｉｎｖｉｔｒｏで試験を行
なった。細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１およびヒト
肺癌細胞ＰＣ１３を使用した。細胞培養用培地は両癌細
胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ−１６４０培地を
用いた。ＢＥ−３４７７６をまずジメチルスルホキシド
に溶解し、次にＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆ
ｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）で逐次希釈して検液とした。
癌細胞増殖阻害の検定は、３×１０³個の癌細胞を含む
細胞培養用の培地１００μｌを９６穴のマイクロプレー
トに分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養し
た後、上記検液１０μｌを加え、３７℃で更に７２時間
培養した後、細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定し、
０．４％スルホローダミンＢで染色した。染色された細
胞から１０ｍＭトリス液を用いて色素を抽出し、４５０
ｎｍを対照波長として５４０ｎｍに於ける吸光度を測定
して対照群と比較した。その結果ＢＥ−３４７７６はＤ
ＬＤ−１に対して２５．２μＭ、ＰＣ１３に対しては１
７．８μＭのＩＣ₅₀を示した。以上の結果を第１表にま
とめた。

【００３２】

【表６】 第１表から明らかなように、本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ
−３４７７６は、マウスおよびヒトの腫瘍細胞に対して
顕著な増殖阻害作用を示す。したがって本発明はヒトを
はじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用である。

【００３３】本発明の化合物ＢＥ−３４７７６は腫瘍細
胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明化
合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては各
種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤もしくは液剤等の経口剤、または例えば溶液もし
くは懸濁液等の殺菌した液状の非経口剤が挙げられる。

【００３４】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤または粉末の形態として製造することもでき
るが、適当な添加物を使用して製造することもできる。
そのような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ
糖等の糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米等の
デンプン類、例えばステアリン酸等の脂肪酸、例えばメ
タケイ酸アルミン酸マグネシウム、重質酸化マグネシウ
ム、沈降性炭酸カルシウムもしくは無水リン酸カルシウ
ム等の無機塩、例えばポリビニルピロリドンもしくはポ
リアルキレングリコール等の合成高分子、例えばステア
リン酸カルシウムもしくはステアリン酸マグネシウム等
の脂肪酸塩、例えばジステアリン酸ポリエチレングリコ
ールもしくはモノオレイン酸ソルビタン等の脂肪酸エス
テル、例えばステアリルアルコール、ポリビニルアルコ
ールもしくはベンジルアルコール等のアルコール類、例
えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、
エチルセルロース、結晶性セルロースもしくはヒドロキ
シプロピルメチルセルロース等の合成セルロース誘導
体、その他、水、ゼラチン、シロップゼラチン、タル
ク、植物油、アラビアゴムなど通常用いられる添加物が
挙げられる。これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤および
粉末等の固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００３５】液状製剤は、水、アルコール類または例え
ば大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油等の植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤もしくは注射剤等の形態と
して製造される。

【００３６】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射ま
たは皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例
えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸およびクエン酸ナトリウ
ム等の水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注および静
脈内注射用）など、またはこれらの混合溶液が挙げられ
る。これらの注射剤はあらかじめ溶解したもののほか、
粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたものを用時溶
解する形態もとり得る。

【００３７】これらの注射液は、通常、０．１〜１０重
量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。

【００３８】また経口投与の懸濁剤またはシロップ剤等
の液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００３９】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度および治療すべき特定部位、宿取および腫
瘍によって変化することに注意すべきである。例えば、
１日あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜
５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の
場合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。尚、投与
回数は投与方法および症状によって異なるが、１回ない
し５回である。

【００４０】

【実施例】実施例および製剤例を挙げて本発明を更に具
体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定さ
れるものではない。

【００４１】実施例１ 斜面軟寒天培地に接種したミクロモノスポーラ エスピ
ー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ ３４
７７６株をグルコース０．２％、デキストリン２％、ミ
ートミール０．５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉
０．１％、乾燥酵母０．０５％、硫酸マグネシウム０．
０２５％、臭化ナトリウム０．０２５％、塩化ナトリウ
ム０．２５％、リン酸水素二カリウム０．０５％、硫酸
第一鉄０．０００２％、塩化第二銅０．００００４％、
塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト０．００
００４％、硫酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウ
ム０．００００８％、およびモリブデン酸ナトリウム
０．０００２４％からなる培地（ｐＨ７．２）１００ｍ
ｌ含む５００ｍｌ容の三角フラスコ２本に接種し、２８
℃で７２時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養
した。この培養液を３ｍｌずつ上記の培地を１００ｍｌ
含む５００ｍｌ容の三角フラスコ５０本に接種し２８℃
で７２時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養し
た。

【００４２】得られた培養液（約５Ｌ）を濾過し、菌体
を得た。この菌体にメタノール２Ｌを加え室温約１時間
で放置し、濾過し、メタノール抽出液を得た。このメタ
ノール抽出液を減圧下で濃縮し、水と酢酸エチルをそれ
ぞれ３００ｍｌずつ加え、溶媒分画を行なった。ＢＥ−
３４７７６は酢酸エチル層に主として存在し、残渣とし
て０．８５ｇを得た。得られた粗物質を少量のクロロホ
ルムに溶かし、シリカゲルクロマトグラフィー（メルク
社製キーゼルゲル６０、１．５ｃｍ×３０ｃｍ）に付
し、クロロホルム１４０ｍｌ、クロロホルム／メタノー
ル（９：１、ｖ／ｖ）１４０ｍｌの順に溶出させ、ＢＥ
−３４７７６を含む画分を得た。本画分を減圧下に濃縮
し、粗物質０．５０ｇを得た。この粗物質を少量のメタ
ノールに溶解し、メタノールを移動相としてゲル濾過
（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製、セファ
デックスＬＨ２０、３．０ ^φｃｍ×４１ｃｍ）を行なっ
た。１フラクション５ｍｌで分画したところ、フラクシ
ョン６４番から７６番の間にＢＥ−３４７７６を含む画
分を得た。ＢＥ−３４７７６を含む画分を減圧下に濃縮
乾固し、得られたＢＥ−３４７７６を一旦クロロホルム
／メタノール（１：１）２ｍｌに懸濁し、濾取すること
によりＢＥ−３４７７６（２２．０ｍｇ）を黄色固体と
して得た。

【００４３】製剤例１ 本発明化合物（ＢＥ−３４７７６）１０部、重質酸化マ
グネシウム１５部および乳糖７５部を均一に混合して３
５０μｍ以下の粉末状または細粒状の散剤とする。この
散在をカプセル容器にいれてカプセル剤とした。

【００４４】製剤例２ 本発明化合物（ＢＥ−３４７７６）４５部、澱粉１５
部、乳糖１６部、結晶性セルロース２１部、ポリビニル
アルコール３部および蒸留水３０部を均一に混合した
後、破砕造粒して乾燥し、篩別して１４１０〜１７７μ
ｍの大きさの顆粒剤とした。

【００４５】製剤例３ 製剤例２と同様な方法で顆粒剤を作った後、この顆粒剤
９６部に対してステアリン酸カルシウム４部を加えて圧
縮成型し、直径１０ｍｍの錠剤とした。

【００４６】製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部およびステアリン酸カルシウム３部を
加えて圧縮成型し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これに
シロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を
加えて糖衣錠を作製した。

【００４７】製剤例５ 本発明化合物（ＢＥ−３４７７６）０．６部、モノオレ
イン酸ソルビタン２．４部および生理食塩水９７部を加
温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注射剤
とした。

【００４８】

【発明の効果】本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６
は、ヒトおよびマウス等の哺乳動物の腫瘍細胞の増殖を
強く抑制することから、抗腫瘍剤として有用である。

【００４９】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:29） (Ｃ１２Ｐ 17/04 Ｃ１２Ｒ 1:29） 7804−4Ｂ (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番 萬有製薬株式 会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式［Ｉ］ 【化１】 で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６またはその薬
   学的に許容されうる塩。
2. 【請求項２】ミクロモノスポーラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏ
   ｓｐｏｒａ）属に属し、抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６
   の生産性を有する微生物を培養し、培養物から抗腫瘍性
   物質ＢＥ−３４７７６を採取し、要すれば薬学的に許容
   されうる塩とすることを特徴とする抗腫瘍性物質ＢＥ−
   ３４７７６またはその薬学的に許容されうる塩の製法。
3. 【請求項３】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の生産性を
   有する微生物がミクロモノスポーラ エスピー（Ｍｉｃ
   ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐ．）Ａ ３４７７６また
   はその変異株である請求項２記載の製法。
4. 【請求項４】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６またはその
   薬学的に許容されうる塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】抗腫瘍性物質ＢＥ−３４７７６の生産性を
   有することを特徴とするミクロモノスポーラ（Ｍｉｃｒ
   ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）属に属する微生物。
6. 【請求項６】ミクロモノスポーラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏ
   ｓｐｏｒａ）属に属する微生物がミクロモノスポーラ
   エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｓｐ．）Ａ
   ３４７７６またはその変異株である請求項５記載の微生
   物。