JPH0640823B2

JPH0640823B2 - 精製α−アミラ−ゼ含有液の製造方法

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Publication number: JPH0640823B2
Application number: JP62185460A
Authority: JP
Inventors: 昌彦石田; 良一芳賀
Original assignee: Hitachi Ltd
Current assignee: Hitachi Ltd
Priority date: 1987-07-27
Filing date: 1987-07-27
Publication date: 1994-06-01
Anticipated expiration: 2009-06-01
Also published as: JPS6430583A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、酵素の精製方法に係り、特に、純度の低い、
若しくは希薄なα−アミラーゼ含有溶液から、殿粉の液
化に好適で、純度が高く、かつ保存安定性の高い、精製
α−アミラーゼ含有濃縮液の製造方法に関する。

〔従来の技術〕

現在、ぶどう糖や異性化糖は、殿粉をα−アミラーゼや
グルコアミラーゼを用いて加水分解して工業生産されて
いる。このように、アミラーゼやプロテアーゼをはじめ
とする高分子加水分解酵素は、天然高分子原料から有用
な低分子物質を工業生産するのに極めて有用である。

一般に、酵素は酵素生産菌を液体培養して製造される。
工業用酵素製剤としては、一般には培養液をそのまゝ
濃縮した濃縮液か、培養液若しくは培養液をそのまま
乾燥した粉末、あるいは部分精製して得られる濃縮液、
又はその乾燥粉末が用いられている。しかし、培養液
の濃縮液や粗乾燥品には、培養液中に含まれる有臭成分
及び着臭成分が多量に含まれるため、目的とする反応生
成物を分離精製する際、最終的に除去することが必要と
なつてくる。また、培養液中には、目的酵素を破壊する
プロテアーゼをも含むことが多い。

特に細菌を酵素生産菌として酵素を培養生産する際には
プロテアーゼの副生を伴うことが多い。このため、酵素
反応を利用して、有用物質を生産する際には、これら不
利益となる不純物を除去することが必要となつてくる。

酵素の精製は、一般にモレキユラシーブ、イオン交換ク
ロマト、塩折、pH沈殿等の各種の物理的、化学的方法を
組合せた複雑なプロセスにより行うこととなり極めて多
大な労力、時間、経費を必要とする。

一方、以前より、α−アミラーゼは基質の殿粉に選択的
に吸着することが知られており、殿粉粒子に吸着後、脱
着する方法も報告されている。しかし、脱着に際して
は、塩溶液、酸若しくはアルカリ溶液を脱離液として用
いることとなり、後処理として塩や酸、アルカリの除去
が必要となる。これらの精製した溶液中の酵素は重量濃
度では極めて希薄であるため、通常の工業的な方法では
損失が多く乾燥しにくい。また、精製した酵素の水溶液
は、室温下ではもちろん、冷所保存においても、失活す
るか、微生物の繁殖により失活するため、長期保存に耐
えず、実用的ではない。一方、これらの不安定性を解決
するため、α−アミラーゼを吸着した殿粉ケーキをその
まま乾燥し、これを酵素として用いることも考えられ
る。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかし、このα−アミラーゼ吸着殿粉をα−アミラーゼ
として殿粉糊液の液化反応、すなわち、殿粉を原料とし
てぶどう糖、麦芽糖、異性化糖を製造する際の前工程、
を行おうとすると、原料の殿粉糊液は液化してデキスト
リンになるが、吸着剤として用いた殿粉粉末は液化せ
ず、溶解はしているが未分解の殿粉分子や殿粉の粒子の
状態で残つてしまうことを見出した。α−アミラーゼ吸
着殿粉として乾燥前の湿潤ケーキを用いても同様に分解
されにくいことがわかつた。したがつて、糖化反応に送
る前にこれら未分解の溶解あるいは未溶解の殿粉を分離
除去するか、糖化反応後、目的とする糖製品から分離除
去しなければならない。

本発明の目的は、α−アミラーゼを含む純度の低い若し
くは希薄な溶液から効率良く該酵素を分離・濃縮して安
定な酵素水溶液を製造する方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は精製α−アミラーゼ含有
液の製造方法に関する発明であつて、粗α−アミラーゼ
含有溶液を、氷点を越えるが実質的に殿粉の液化反応が
起らない温度で殿粉粒子と接触させて、α−アミラーゼ
を殿粉粒子に吸着させる工程、該α−アミラーゼを吸着
した殿粉粒子を分離する工程、及び該分離した殿粉粒子
から得られるα−アミラーゼ含有液を、グルコアミラー
ゼ及びβ−アミラーゼの少なくとも一方を含有する酵素
で処理してオリゴ糖以下の分子量をもつ糖まで加水分解
する工程、の各工程を包含することを特徴とする。

以下、本発明について更に詳細に説明する。

本発明方法に用いうるα−アミラーゼは特に限定はな
い。すなわち、細菌、糸状菌等各種の起源のα−アミラ
ーゼが用いられる。それ故、常温性のα−アミラーゼ、
及び耐熱性のα−アミラーゼのいずれでもよいが、特に
耐熱性のα−アミラーゼが有用である。したがつて、本
発明方法の原料である粗α−アミラーゼ含有溶液の例に
は、α−アミラーゼ生産菌の液体培養液から固形物を除
去した液、及び固体培養物若しくは培養菌体から抽出
し、固形物を除去した抽出液が挙げられる。

上記のような原料中のα−アミラーゼを殿粉粒子に吸着
させ、吸着した殿粉粒子を分離するのは、既述の公知の
常法で行うことができる。

こうして得られたα−アミラーゼ・殿粉複合体は、次の
処理を行う前に、実質的に殿粉の液化反応が起らない温
度の水で洗浄してもよく、またそうすることが好適であ
る。

次いで、グルコアミラーゼ又はβ−アミラーゼ含有酵素
を作用させる方法としては、下記に述べるいくつかの方
法がある。

(1) 上記複合体（すなわち、あらかじめ水洗を行つた
もの、又は水洗を行わないもののいずれでもよい。以下
同じ）を、水性スラリーとし、それに酵素を作用させ
る。

(2) 上記(1)の方法において、殿粉の共存下に酵素を作
用させる。

(3) 複合体の水性スラリーに、あらかじめ殿粉を作用
させてヨード殿粉反応を陰性としてから酵素を作用させ
る。

(4) 複合体の水性スラリーを加熱処理して、ヨード殿
粉反応を陰性としてから、殿粉の共存下又は不存在下に
酵素を作用させる。

(5) 複合体の水性スラリーを加熱処理し、ヨード殿粉
反応を陰性としたものに殿粉を作用させてデキストリン
化し、これに酵素を作用させる。いずれの方法において
も、複合体中の殿粉、及び必要に応じて添加した殿粉は
いずれも液化され、更にオリゴ糖以下の分子量をもつ糖
まで加水分解されて、本発明の殿粉及び高分子のデキス
トリンを含まない、精製α−アミラーゼ含有液を生成さ
せる。

使用する酵素は、グルコアミラーゼ及びβ−アミラーゼ
の少なくとも一方を含有していればよい。したがつて、
両酵素を併用して、同時に、又は別工程で経時的に使用
してもよい。更に他の酵素を同時に、又は別工程で経時
的に併用してもよい。

併用してもよい他の酵素の例としては、α−アミラーゼ
はもちろんのこと、ブルラナーゼ及びグルコースイソメ
ラーゼが挙げられる。

また、反応におけるスラリーは、殿粉を３０〜５０重量
％含有するものが好適である。それは、３０重量％未満
では酵素との反応が不充分となりやすく、他方５０重量
％を越えると粘度が高くなつて、操作性が低下するから
である。

なお、原料酵素の起源、その形態については、特に制限
はない。

本発明方法によつて得られるα−アミラーゼ含有液は、
室温に１０日間保存してもα−アミラーゼ活性が低下せ
ず、かつ微生物の繁殖も認められない極めて安定性の高
い溶液である。

本発明による酵素液を用いて、殿粉糊の液化を行い、更
に糖化しても、各糖製品液中に未分解の殿粉や高分子の
デキストリンが混入することはなく、殿粉糊液の処理に
極めて有効である。

また、本発明による酵素液は、好ましくない有臭、着色
成分を含まず、糖製品をこれらの不純物で汚染しないた
め、そのまま、あるいは濃縮して製品とすることができ
る。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、
本発明はこれら実施例に限定されない。

なお、各例中の％は、特に断らない限り、重量／重量で
ある。

実施例１可溶性殿粉１．６％、ポリペプトン０．６％、酵母エキ
ス０．５％、りん酸第１カリウム０．７％、りん酸第２
ナトリウム０．３５％、硫酸マグネシウム・７水和物
０．００１％及び水道水を含む液体倍地（pH 6.0）を、
内容積５の培養槽に１．５２kg分注し、１２０℃で２
０分間殺菌する。これに上記と同組成の培地を用いて嫌
気的に培養した耐熱性α−アミラーゼ生産菌〔クロスツ
リジウム(Clostridium)属細菌RS-0001、微工研条寄第１
０４３号（FERM BP-1043）〕の菌体懸濁液８０ｇを添加
した。次いで、培養槽気相部をアルゴンガスで置換後、
嫌気条件下で培養した。培養槽内のpHを６．０に、温度
を６０℃に自動調整しながら４６時間培養した。この培
養液を６０００rpmで１０分間、遠心分離して菌体を除
去し、α−アミラーゼ活性４．８単位／mlの培養液
１．５を得た。本培養液中には無機塩１．１％、α−
アミラーゼ以外の有機物を２．３％含む。また、本培養
液の固形分当りの比活性は９８．２単位／ｇであつ
た。

特に有機物中には、酢酸、プロピオン酸を主成分とする
揮発性脂肪酸を約０．３％含むため、不快な酸臭と硫化
物臭を有する。

次に、本培養液０．５（α−アミラーゼ2,100単位
含有、pH 6.0）を５℃に冷却し、局方の馬鈴しよ殿粉１
０ｇと水１５ｇを混合した殿粉スラリー２５ｇを添加
し、かくはん下で１分間保持した。上記の液を遠心分離
（３，０００rpm、５分間）してα−アミラーゼ・殿粉
複合体のスラリー２５ｇと清澄液０．５を得た。上記
清澄液について、α−アミラーゼ活性を測定した結果、
α−アミラーゼの９０％をα−アミラーゼ・殿粉複合体
として回収したと推算した。

上記のα−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２５ｇを
６０℃で１時間反応させた。その結果、反応液はヨード
殿粉反応で陰性を示し、液化反応が十分進行したことを
確認した。かつ反応液のα−アミラーゼ総活性を測定し
た結果、１８５６単位であり、培養液中に含まれていた
α−アミラーゼの８８％が残存していることを把握し
た。また、本液はわずかな酸臭を有し、淡黄色を呈して
いる。本液の容積当りの比活性は７４．２単位／mlであ
り、容積当り１５．５倍に濃縮されている。本液は糖以
外の成分の乾物基準の比活性は５．４６×１０³単位／
ｇとなり、培養液に対し５７倍精製されている。

本液５ml（α−アミラーゼ３７１単位含有）を、３０％
馬鈴しよ殿粉スラリー１０００ｇの１００℃、１０分加
熱処理したものに添加し、かくはん下７０℃、１時間加
熱した。その結果、反応液はヨード殿粉反応が陰性を示
し、下記式：で定義されるデキストロース当量（Dextrose Equivale
nt）ＤＥが１２のデキストリン溶液1005ｇを得た。

本デキストリン液は無色で、５０℃以上に加熱すると培
養液由来の酸臭が極くわずか感じられるが、室温では
無色無臭の透明な液体である。

上記のデキストリン液１００ｇにグルコアミラーゼ〔ア
スペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）起源、常
温性〕（ノボインダストリー社製、商品名アミログル
コシダーゼ・ノボAMG-200L、なお、本明細書の下記の実
施例及び比較例で使用しているグルコアミラーゼは、す
べてこのものを意味する）液をセロフアン半透膜チユー
ブに封入し、蒸留水に対して透析後、凍結乾燥して得た
精製粉末２００単位（０．１ｇ）を加えて溶解し、５０
℃で４８時間保温し、デキストリンをぶどう糖に加水分
解した。反応後のぶどう糖濃度は９６．５％に達した。
本液は培養液由来の臭いや色もなく透明な液体である。

本液を精製アミラーゼ溶液として、低温及び室温での保
存性を試験した。本液を２℃及び２５℃に１０日間及び
６か月間保存して、その酵素活性を測定した。その結
果、２℃保存では６か月保存でも９９％以上、２５℃、
６か月保存では９８％以上の活性を保持していることを
確認した。

また、本液１ml（α−アミラーゼ７．４単位を含有）を
精製α−アミラーゼ含有溶液として、３０％馬鈴しよ殿
粉スラリー２００ｇに添加し、７０℃、１時間加熱し
た。その結果、反応液はヨード殿粉反応が陰性を示し、
ＤＥが１２．５のデキストリン溶液を約２００ｇ得た。
本デキストリン液は、培養液由来の不快臭もなく無色透
明の液体である。

実施例２実施例１と同様に培養して、培養液の固形分当り１４
２単位／ｇの比活性をもつ培養液を得た。

次にこの培養液を、馬鈴しよ殿粉と実施例１と同様に
反応させて、α−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２
５ｇと清澄液０．５ｇを得た。

上記スラリー２５ｇに蒸留水１００ml（５℃、pH 6.2）
を添加し、混合した後、遠心分離（3000rpm、５分間）
して、洗浄した複合体スラリー30ｇと、洗浄廃液９５ml
を得た。上記清澄液と洗浄廃液とについて、α−アミラ
ーゼ活性を測定した結果、殿粉に吸着しなかつたα−ア
ミラーゼ活性は１０２単位以下であつた。したがつて、
供試培養液のα−アミラーゼの９５％をα−アミラー
ゼ・殿粉複合体として回収したと推算した。

上記のα−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー３０ｇを
６０℃で１時間反応させた。その結果、反応液はヨード
殿粉反応で陰性を示し、液化反応が十分進行したことを
確認した。かつ反応液のα−アミラーゼ総活性を測定し
た結果、１９９０単位であり、培養液中に含まれてい
たα−アミラーゼの９５％が残存していることを把握し
た。また、本液はほぼ無色透明、無臭であり、無機塩濃
度は０．０１％以下であつた。なお、本液の容積当りの
比活性は７４．２単位／mlであり、容積当り１５．５倍
に濃縮されている。更に本液は糖以外の成分の乾物基準
の比活性は１．９２×１０⁴単位／ｇとなり、培養液
に対し１３５倍に精製されている。

本液５ml（α−アミラーゼ３２２単位含有）を、３０％
馬冷しよ殿粉スラリー１０００ｇに添加し、７０℃で１
時間加熱して、ヨード殿粉反応が陰性を示し、ＤＥが１
２のデキストリン溶液１００５ｇを得た。

本デキストリン液は培養液由来の臭いや色もない透明な
液体である。

上記のデキストリン液１００ｇにグルコアミラーゼ（ア
スペルギルス・ニガー起源、常温性）の精製粉末１８０
単位（０．０９ｇ）を加えて溶解し、５０℃で４８時間
保温し、デキストリンをぶどう糖に加水分解した。反応
後のぶどう糖濃度は96.6％に達した。本ぶどう糖液は培
養液由来の臭いや色もなく透明な液体である。

また、本液１ml（α−アミラーゼ６．４単位含有）を精
製α−アミラーゼ溶液として、３０％馬冷しよ殿粉スラ
リー２００ｇの１００℃、１０分加熱処理したものに添
加し、７０℃、１時間加熱した。その結果、反応液はヨ
ード殿粉反応が陰性を示し、ＤＥが１２．４のデキスト
リン溶液を約２００ｇ得た。本デキストリン液は培養液
由来の不快臭もなく無色透明の液体である。

なお、上記の精製アミラーゼ溶液の保存性を試験した。
本液を２℃及び２５℃に１０日間及び６か月間保存し
て、その酵素活性を測定した。その結果、２℃保存では
６か月保存でも９９％以上、２５℃、６か月保存では９
９％以上の活性を保持していることを確認した。

実施例３実施例２で得られたデキストリン液１００ｇにβ−アミ
ラーゼ（麦芽起源、常温性）の精製粉末５００単位
（０．２ｇ）を加えて溶解し、４５℃で４８時間保温
し、デキストリンを麦芽糖及び少量のマルトトリオース
及びグルコースの混合物に加水分解した。反応後の麦芽
糖濃度は９３％に達した。本麦芽糖液は培養液由来の臭
いや色もなく透明な液体である。

本液を精製アミラーゼ溶液として、低温及び室温での保
存性を試験した。本液を２℃及び２５℃に１０日間及び
６か月間保存して、その酵素活性を測定した。その結
果、２℃及び２５℃下で、６か月保存でも９８％以上の
活性を保持していることを確認した。

また、本液１ml（α−アミラーゼ６．４単位含有）を精
製アミラーゼ溶液として、３０％馬鈴しよ殿粉スラリー
２００ｇの１００℃、１０分加熱処理したものに添加
し、７０℃、１時間加熱した。その結果、反応液はヨー
ド殿粉反応が陰性を示し、ＤＥが１２．２のデキストリ
ン溶液を約２００ｇ得た。本デキストリン液は培養液由
来の不快臭もなく無色透明の液体である。

実施例４実施例１と同様に培養して、培養液の固形分当り８
９．０単位／ｇの比活性をもつ培養液を得た。

次に実施例２と同様に処理して、清澄液、複合体スラリ
ー、及び洗浄廃液を得た。清澄液と洗浄廃液についてα
−アミラーゼ活性を測定した結果、殿粉に吸着しなかつ
たα−アミラーゼ活性は100単位以下であつた。したが
つて、供試培養液中のα−アミラーゼの９５．８％をα
−アミラーゼ・殿粉複合体として回収したと推算した。

上記のα−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２５ｇに
グルコアミラーゼ（アスペルギルス・ニガー起源、常温
性）の精製粉末５０単位（0.05g）を加えて溶解し、５
５℃で４８時間保温し、α−アミラーゼ・殿粉複合体の
殿粉を、複合体に含まれているα−アミラーゼと、添加
したグルコアミラーゼにより、同時に液化及び糖化し
た。その結果、反応液はヨード殿粉反応が陰性を示し、
糖組成においてグルコースが９５％のα−アミラーゼ、
グルコアミラーゼ含有精製酵素溶液を得た。本酵素液は
ほぼ無色透明で、無臭であり、本液の容積当りのα−ア
ミラーゼ比活性は９０単位／mlであり、容積当り１８．
９倍に濃縮された。このときの回収した総活性は２２５
０単位であり、培養液中に含まれていたα−アミラーゼ
活性の９７．８％が残存していることを把握した。更
に、糖及びグルコアミラーゼを除外した成分の乾物当り
の比活性は１．８×１０⁴単位／ｇとなり、本培養液
に対し１８３倍に精製されたことになる。

上記の精製酵素液１ml（α−アミラーゼ９０単位含有）
を精製α−アミラーゼ溶液として、３０％馬鈴しよ殿粉
スラリー２００ｇの１００℃、10分加熱処理したものに
添加し、７０℃、１時間加熱した。その結果、反応液は
ヨード殿粉反応が陰性を示し、ＤＥが１２．６の糖溶液
を約２００ｇ得た。本糖液は培養液由来の不快臭もな
く、無色透明の液体である。

なお、上記の精製アミラーゼ溶液の保存性を試験した。
本液を２℃及び２５℃に６か月間保存して、その酵素活
性を測定した。その結果、２℃保存では６か月保存でも
９８％以上、２５℃では99％以上の活性を保持している
ことを確認した。

実施例５実施例１と同様に培養して、５．１単位／mlのα−アミ
ラーゼ活性、及び培養液の固形分当り１０２単位／ｇ
の比活性をもつ培養液を得た。

次に実施例２と同様に処理した。清澄液と洗浄廃液につ
いてα−アミラーゼ活性を測定した結果、殿粉に吸着し
なかつたα−アミラーゼ活性は102単位以下であつた。
したがつて、供試培養液中のα−アミラーゼの９６％を
α−アミラーゼ・殿粉複合体として回収したと推算し
た。

上記のα−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２５ｇに
グルコアミラーゼ（アスペルギルス・ニガー起源、常温
性）の精製粉末５０単位（０．０５ｇ）とブルラナーゼ
〔バシルス・セレウス(Bacillus cereus)起源〕の精製
粉末１０単位（0.02ｇ）を添加して溶解し、５５℃４８
時間保温し、α−アミラーゼ・殿粉複合体の殿粉を、複
合体に含まれるα−アミラーゼと添加したグルコアミラ
ーゼ及びブルラナーゼにより、同時に液化及び糖化し
た。その結果、反応液はヨード殿粉反応が陰性を示し、
糖組成においてグルコースが９５％の、グルコアミラー
ゼ及びプルラワーゼを含有したα−アミラーゼ精製酵素
溶液を得た。本液はほぼ無色透明で、無臭であり、本液
の容積当りのα−アミラーゼ比活性は９６単位／mlであ
り、容積当り１８．８倍に濃縮された。このときの回収
した液の総活性は２４０１単位であり、培養液中に含ま
れていたα−アミラーゼ活性の９８％が残存しているこ
とを把握した。

更に、糖及びグルコアミラーゼ、プルラナーゼを除外し
た成分の乾物当りの比活性は１．９×10⁴単位／ｇとな
り、本培養液に対し１８６倍に精製されたことにな
る。

上記の精製α−アミラーゼ液１ml（α−アミラーゼ９６
単位含有）を３０％馬鈴しよ殿粉スラリー２００ｇに添
加し、７０℃、１時間加熱した。その結果、反応液はヨ
ード殿粉反応が陰性を示し、ＤＥが１２．６の糖液を約
２００ｇ得た。本液は培養液由来の不快臭もなく、無色
透明の液体である。

実施例６可溶性殿粉１．５％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．５％、りん酸第１カリウム０．７％、りん酸第２
ナトリウム０．３５％、硫酸マグネシウム・７水和物
０．００１％及び水道水を含む液体培地（pH 7.0）を内
容積５００mlの坂口フラスコに100mlずつ１５本に分注
し、１２０℃で１５分間殺菌する。これに、同上培地で
好気的に培養したバシルス・ズブチリス（Bacillus sub
tilis）属に属するα−アミラーゼ生産菌の好気培養液
を１０mlずつ分注し、３７℃で１５時間（１２０ストロ
ーク／分）で振とう培養した。この培養液を5000rpmで
１５分間遠心分離して菌体を除去し、α−アミラーゼ活
性８．１単位／mlの培養液１．５を得た。本培養
液中には無機塩１．１％、α−アミラーゼ以外の有機物
として１．２％を含む。特に有機物中には酢酸、酪酸を
主成分とする揮発性脂肪酸を約０．０５％含む。このた
め不快な酸臭を有する。本培養液の固形分当りの比活
性は３５２単位／ｇであつた。

次に、本培養液０．５を５℃に冷却し、これに馬鈴
しよ殿粉１０ｇを添加し、かくはん下で１分間保持し
た。上記の液を遠心分離（３０００rpm、５分間）し
て、α−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２５ｇと清
澄板０．５を得た。上記スラリー２５ｇに蒸留水１０
０ml（５℃、pH6.2）を添加し、混合した後、遠心分離
（３０００rpm、５分間）して、洗浄したα−アミラー
ゼ・殿粉複合体スラリー２５ｇを洗浄廃液１００mlを得
た。上記清澄液と洗浄廃液について、α−アミラーゼ活
性を測定した結果、殿粉に吸着しなかつたα−アミラー
ゼ活性は、全培養液１．５に換算して２５０単位以
下であることから、供試培養液中のα−アミラーゼの
９８％を、α−アミラーゼ・殿粉複合体として回収した
ことになる。

次いで、局方の馬鈴しよ殿粉１００ｇと５０℃の温水２
３０mlとの混合物に上記のα−アミラーゼ・殿粉複合体
２９ｇ、及びグルコアミラーゼ粉末２００単位（アスペ
ルギルス・ニガー起源、０．１ｇ）を添加し、５０℃で
４８時間反応させた。その後、グルコースイソメラーゼ
粉末３００単位〔ストルペトミセス（Streptomyces）属
起源、０．２ｇ〕を添加し、５０℃で１０時間反応させ
た。反応後の糖化率（液中全固形分に対する果糖とぶど
う糖の合計量の比を％で表示）は９６％であつた。この
異性化糖液は、培養液由来の臭いも色もない透明液で、
無機塩濃度は０．０１％以下である。なお、本液の容積
当りのα−アミラーゼの比活性は３５．３単位／mlであ
り、容積当り４．４倍に濃縮されている。

更に、本液は糖、グルコアミラーゼ、グルコースイソメ
ラーゼ以外の成分の乾物基準のα−アミラーゼ比活性は
１．５×10⁴単位／ｇであり、培養液に対し４２．６
倍に精製されている。

上記精製アミラーゼ溶液の保存性を試験した。本液を２
５℃に１０日間保存して、その酵素活性を測定した。そ
の結果、８５％以上の活性を保持していることを確認し
た。

比較例１実施例１に対応する従来技術として次の実験を行つた。
すなわち、培養液中のα−アミラーゼを吸着させたα
−アミラーゼ・殿粉複合体をグルコアミラーゼで処理し
て複合体の殿粉粒子を糖化して高濃度糖含有精製アミラ
ーゼ液を得、それを殿粉の液化及び糖化に用いる実施例
１に対して、α−アミラーゼ・殿粉複合体をそのままα
−アミラーゼとして殿粉の液化及び糖化に用いた。

実施例１と同じロツトの培養液及び殿粉を用い、同じ
手順でα−アミラーゼ・殿粉複合体のスラリー２５ｇを
調製した。この複合体５ｇ（α−アミラーゼ３７１単位
含有）を３０％馬鈴しよ殿粉スラリーの１００℃、１０
分加熱処理したものに添加し、かくはん下で７０℃に１
時間加熱した。その結果、反応液は未分解の殿粉粒子を
含む、DE９．５のデキストイン溶液１００５ｇを得た。
本デキストリン液には、複合体の殿粉粒子起源の未分解
の殿粉粒子が残存するため、半透明を呈している。

上記のデキストリン液１００ｇにグルコアミラーゼ（ア
スペルギルス・ニガー起源、常温性）の精製粉末２００
単位（０．１ｇ）を加えて溶解し、５０℃で４８時間保
温して糖化反応を行つた。反応後のぶどう糖濃度は８
８．１％で、複合体起源の未分解殿粉粒子を含み半透明
を呈している。本糖液の糖組成を分析した結果、ぶどう
糖のほかにオリゴ糖が９．８％、オリゴ糖より高分子の
グリコースポリマーが２％含有されていることが判明し
た。

〔発明の効果〕

以上説明したように、本発明方法により得られる精製α
−アミラーゼ含有液は、臭いや着色がなく、かつこれを
ぶどう糖や異性化糖製造に用いた場合には、吸着担体と
して用いた殿粉が未分解のまま残留、混入することな
く、糖化、異性化を行うことができるという顕著な効果
を奏するものである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】粗α−アミラーゼ含有溶液を、氷点を越え
るが実質的に殿粉の液化反応が起らない温度で殿粉粒子
と接触させて、α−アミラーゼを殿粉粒子に吸着させる
工程、該α−アミラーゼを吸着した殿粉粒子を分離する
工程、及び該分離した殿粉粒子から得られるα−アミラ
ーゼ含有液を、グルコアミラーゼ及びβ−アミラーゼの
少なくとも一方を含有する酵素で処理してオリゴ糖以下
の分子量をもつ糖まで加水分解する工程、の各工程を包
含することを特徴とする精製α−アミラーゼ含有液の製
造方法。
【請求項２】該分離した殿粉粒子を、実質的に殿粉の液
化反応が起らない温度の水で洗浄したのち、次の工程を
行う特許請求の範囲第１項記載の精製α−アミラーゼ含
有液の製造方法。
【請求項３】該粗α−アミラーゼ含有溶液が、α−アミ
ラーゼ生産菌の液体培養液から固形物を除去した液、又
は固体培養物若しくは培養菌体から抽出し固形物を除去
した抽出液である特許請求の範囲第１項又は第２項記載
の精製α−アミラーゼ含有液の製造方法。