JPH0643343B2 - 免疫調節剤 - Google Patents
免疫調節剤Info
- Publication number
- JPH0643343B2 JPH0643343B2 JP59276758A JP27675884A JPH0643343B2 JP H0643343 B2 JPH0643343 B2 JP H0643343B2 JP 59276758 A JP59276758 A JP 59276758A JP 27675884 A JP27675884 A JP 27675884A JP H0643343 B2 JPH0643343 B2 JP H0643343B2
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ヒトＩｇＧのブロック化Ｆｃ断片（以下、ブ
ロック化Ｆｃ断片ともいう）、ヒトＩｇＧのブロック化
Ｆａｂ断片（以下、ブロック化Ｆａｂ断片ともいう）、
ヒトＩｇＧのブロック化Ｌ鎖（以下、ブロック化Ｌ鎖と
もいう）、ヒトＩｇＧのブロック化Ｈ鎖（以下、ブロッ
ク化Ｈ鎖ともいう）を主成分とする免疫調節剤に係る。
ロック化Ｆｃ断片ともいう）、ヒトＩｇＧのブロック化
Ｆａｂ断片（以下、ブロック化Ｆａｂ断片ともいう）、
ヒトＩｇＧのブロック化Ｌ鎖（以下、ブロック化Ｌ鎖と
もいう）、ヒトＩｇＧのブロック化Ｈ鎖（以下、ブロッ
ク化Ｈ鎖ともいう）を主成分とする免疫調節剤に係る。
これら一連のブロック化物は、当該Ｆｃ断片、Ｆａｂ断
片、Ｌ鎖およびＨ鎖の−ＳＨ基を適当な基でブロックし
たものである。
片、Ｌ鎖およびＨ鎖の−ＳＨ基を適当な基でブロックし
たものである。
上述の一連のブロック化物、就中、アルキル化Ｆｃ断
片、アルキル化Ｆａｂ断片、アルキル化Ｌ鎖およびアル
キル化Ｈ鎖に関する現在知られている薬理作用として
は、抗消化器潰瘍作用〔ミムラ，ティー．，ジャーナル
オブ ファーマコバイオ ダイナミクス(Mimura，
Ｔ．，Ｊ．Pharm.Dyn.，）6，397(1983)〕があるが、こ
れらが宿主免疫系に及ぼす影響については全く知られて
いない。
片、アルキル化Ｆａｂ断片、アルキル化Ｌ鎖およびアル
キル化Ｈ鎖に関する現在知られている薬理作用として
は、抗消化器潰瘍作用〔ミムラ，ティー．，ジャーナル
オブ ファーマコバイオ ダイナミクス(Mimura，
Ｔ．，Ｊ．Pharm.Dyn.，）6，397(1983)〕があるが、こ
れらが宿主免疫系に及ぼす影響については全く知られて
いない。
本発明はブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ断片、
ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖のヒトＩｇＧ由来
物質の新規用途を提供することである。
ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖のヒトＩｇＧ由来
物質の新規用途を提供することである。
今回、本発明者らは、ヒトＩｇＧより調製したブロック
化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ断片、ブロック化Ｌ鎖お
よびブロック化Ｈ鎖が宿主の免疫応答状態により、免疫
増強的にあるいは免疫抑制的に作用する、いわゆる免疫
調節作用を有することを見い出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、ブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａ
ｂ断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖から選ば
れる少なくとも一種を有効成分とする免疫調節剤に関す
る。
化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ断片、ブロック化Ｌ鎖お
よびブロック化Ｈ鎖が宿主の免疫応答状態により、免疫
増強的にあるいは免疫抑制的に作用する、いわゆる免疫
調節作用を有することを見い出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、ブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａ
ｂ断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖から選ば
れる少なくとも一種を有効成分とする免疫調節剤に関す
る。
膠原病、リュウマチ性疾患には宿主免疫応答に異常があ
り、自己成分を認識して自己抗体を産生することがその
病態形成に重要な役割を果たすと考えられている。従っ
て、その治療には異常な免疫反応を是正することが必要
である。免疫調節剤の対象は宿主の免疫機能不全によっ
てもたらされる疾患と言える。
り、自己成分を認識して自己抗体を産生することがその
病態形成に重要な役割を果たすと考えられている。従っ
て、その治療には異常な免疫反応を是正することが必要
である。免疫調節剤の対象は宿主の免疫機能不全によっ
てもたらされる疾患と言える。
さて、ヒトＩｇＧのＦｃ断片およびＦａｂ断片は、公知
のＩｇＧ断片としてすでに報告されており、例えばポー
ターらの報告〔Biochem．Ｊ．，73,119(1959)〕があ
る。このヒト１ｇＧのＦｃ断片あるいはＦａｂ断片は、
ヒト由来のＩｇＧをパパイン、又はプラスミンで分解し
て得られる分子量45,000〜50,000のポリペプチド鎖であ
り、その回収法は前記ポーターらによって確立されてい
る。
のＩｇＧ断片としてすでに報告されており、例えばポー
ターらの報告〔Biochem．Ｊ．，73,119(1959)〕があ
る。このヒト１ｇＧのＦｃ断片あるいはＦａｂ断片は、
ヒト由来のＩｇＧをパパイン、又はプラスミンで分解し
て得られる分子量45,000〜50,000のポリペプチド鎖であ
り、その回収法は前記ポーターらによって確立されてい
る。
本発明において有効成分として特定されるブロック化Ｆ
ｃ断片およびブロック化Ｆａｂ断片は、ヒトＩｇＧのＦ
ｃ断片およびＦａｂ断片のジスルフィド結合を切断し、
生成した各断片の−ＳＨ基をブロック化処理することに
よって得られる。
ｃ断片およびブロック化Ｆａｂ断片は、ヒトＩｇＧのＦ
ｃ断片およびＦａｂ断片のジスルフィド結合を切断し、
生成した各断片の−ＳＨ基をブロック化処理することに
よって得られる。
本発明にかかるブロック化Ｆｃ断片およびブロック化Ｆ
ａｂ断片の代表的回収法の概要は次の通りである。
ａｂ断片の代表的回収法の概要は次の通りである。
ＩｇＧを含有する溶液（タンパク濃度２〜１０％）をpH
６〜９に調整し、これにプラスミン又はパパインを添加
して２０〜４０℃において１０〜３０時間処理する。つ
いで、この処理液から不溶物を除去し、ゲル濾過処理に
よって未消化のＩｇＧと消化産物とを分離する。消化産
物は、イオン交換体（ＣＭ−セルロースおよびＤＥＡＥ
−セルロース）によってクロマトグラフィーを行い、ヒ
トＩｇＧのＦｃ断片およびＦａｂ断片を選択的に吸着さ
せ溶出、回収する。
６〜９に調整し、これにプラスミン又はパパインを添加
して２０〜４０℃において１０〜３０時間処理する。つ
いで、この処理液から不溶物を除去し、ゲル濾過処理に
よって未消化のＩｇＧと消化産物とを分離する。消化産
物は、イオン交換体（ＣＭ−セルロースおよびＤＥＡＥ
−セルロース）によってクロマトグラフィーを行い、ヒ
トＩｇＧのＦｃ断片およびＦａｂ断片を選択的に吸着さ
せ溶出、回収する。
ヒトＩｇＧのＦｃ断片およびＦａｂ断片を回収後、還元
剤で処理を行い、ジスルフィド結合を切断し、ブロック
化（たとえば、アルキル化）処理を行って、ブロック化
（アルキル化）Ｆｃ断片およびブロック化（アルキル
化）Ｆａｂ断片を得る。
剤で処理を行い、ジスルフィド結合を切断し、ブロック
化（たとえば、アルキル化）処理を行って、ブロック化
（アルキル化）Ｆｃ断片およびブロック化（アルキル
化）Ｆａｂ断片を得る。
還元剤としては、２−メチルカプトエタノール（終濃度
0.75〜5.25Ｍ）、ジチオスレイトール、ジチオエリスリ
トール（終濃度0.01〜0.068M）等が用いられる。
0.75〜5.25Ｍ）、ジチオスレイトール、ジチオエリスリ
トール（終濃度0.01〜0.068M）等が用いられる。
ブロック化Ｆｃ断片あるいはブロック化Ｆａｂ断片は、
ＳＨ基を通常の方法に従ってブロックすることによって
製造される〔Biochemistry，７，1950(1968)〕。当該ブ
ロック化は、たとえば次のごとき薬理的に許容される
基、特にアルキル基、置換アルキル基を、既知の手段に
よって導入することによって行われる。なお、本明細書
において低級とは、通常、炭素数１〜４のものをいう。
ＳＨ基を通常の方法に従ってブロックすることによって
製造される〔Biochemistry，７，1950(1968)〕。当該ブ
ロック化は、たとえば次のごとき薬理的に許容される
基、特にアルキル基、置換アルキル基を、既知の手段に
よって導入することによって行われる。なお、本明細書
において低級とは、通常、炭素数１〜４のものをいう。
低級アルキル基：メチル、エチル、ｎ−プロピルな
ど Ｎ，Ｎ−ジ低級アルキルカルバミドー低級アルキル
基：Ｎ，Ｎ−ジエチル−カルバミドメチル 低級アルコキシカルボニル基−低級アルキル：エト
キシカルボニルメチル、エトキシカルボニルエチルなど カルボキシ−低級アルキル基：カルボキシメチル、
カルボキシエチルなど シアノ−低級アルキル基：シアノメチルなど β−アミノ−低級アルキル基：-CH2CH2NH2など ベンゾイル−低級アルキル基：-CH2COC6H5など カルバモイル−低級アルキル基：-CH2CONH2など スルホ基 一方、ヒトＩｇＧ由来のＬ鎖およびＨ鎖は、公知のＩｇ
Ｇの構成断片としてすでに報告されており、例えばフラ
イシマンらの報告がある〔Arch.Biochem.Biophys.,Supp
le.(1).174(1962)〕。本発明において有効成分として特
定されるＬ鎖およびＨ鎖はヒト由来のＩｇＧからＩｇＧ
のジスルフィド結合を切断して得られる分子量23,000±
1,000および50,000±1,500のポリペプチド鎖であり、そ
の回収法は、前記フライシマンらによって確立されてい
る。本発明に係るＬ鎖およびＨ鎖の代表的回収法の概要
は次の通りである。
ど Ｎ，Ｎ−ジ低級アルキルカルバミドー低級アルキル
基：Ｎ，Ｎ−ジエチル−カルバミドメチル 低級アルコキシカルボニル基−低級アルキル：エト
キシカルボニルメチル、エトキシカルボニルエチルなど カルボキシ−低級アルキル基：カルボキシメチル、
カルボキシエチルなど シアノ−低級アルキル基：シアノメチルなど β−アミノ−低級アルキル基：-CH2CH2NH2など ベンゾイル−低級アルキル基：-CH2COC6H5など カルバモイル−低級アルキル基：-CH2CONH2など スルホ基 一方、ヒトＩｇＧ由来のＬ鎖およびＨ鎖は、公知のＩｇ
Ｇの構成断片としてすでに報告されており、例えばフラ
イシマンらの報告がある〔Arch.Biochem.Biophys.,Supp
le.(1).174(1962)〕。本発明において有効成分として特
定されるＬ鎖およびＨ鎖はヒト由来のＩｇＧからＩｇＧ
のジスルフィド結合を切断して得られる分子量23,000±
1,000および50,000±1,500のポリペプチド鎖であり、そ
の回収法は、前記フライシマンらによって確立されてい
る。本発明に係るＬ鎖およびＨ鎖の代表的回収法の概要
は次の通りである。
ＩｇＧを0.55Ｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液、pH8.2に約２
％の濃度に溶かす。静かに窒素ガスを通じてから、２−
メルカプトエタノールを終濃度0.75Ｍになる様に加え、
室温に１時間放置して還元を行う。次に、氷水浴で冷却
し、これに２−メルカプトエタノールと同量の0.75Ｍモ
ノヨードアセトアミドを加え、溶液のpHをトリメチルア
ミンなどの添加により8.0に保ちながら１時間程度反応
させたのち冷食塩水に透析して余剰の試薬を除く。この
反応で、Ｌ鎖あるいはＨ鎖中の遊離のＳＨ基がブロック
される。次に、冷却した１Ｍプロピオン酸に透析してＬ
鎖とＨ鎖を解離させ、１Ｍプロピオン酸で平衡化したセ
フアデックスＧ−７５のカラムを通過させるとＬ鎖とＨ
鎖が分離した２つのピークとして溶出される。Ｌ鎖およ
びＨ鎖画分をそれぞれ回収後、透析、除菌濾過、加熱処
理、凍結乾燥等の医薬品として提供されうる所望の公知
の処理を施す。
％の濃度に溶かす。静かに窒素ガスを通じてから、２−
メルカプトエタノールを終濃度0.75Ｍになる様に加え、
室温に１時間放置して還元を行う。次に、氷水浴で冷却
し、これに２−メルカプトエタノールと同量の0.75Ｍモ
ノヨードアセトアミドを加え、溶液のpHをトリメチルア
ミンなどの添加により8.0に保ちながら１時間程度反応
させたのち冷食塩水に透析して余剰の試薬を除く。この
反応で、Ｌ鎖あるいはＨ鎖中の遊離のＳＨ基がブロック
される。次に、冷却した１Ｍプロピオン酸に透析してＬ
鎖とＨ鎖を解離させ、１Ｍプロピオン酸で平衡化したセ
フアデックスＧ−７５のカラムを通過させるとＬ鎖とＨ
鎖が分離した２つのピークとして溶出される。Ｌ鎖およ
びＨ鎖画分をそれぞれ回収後、透析、除菌濾過、加熱処
理、凍結乾燥等の医薬品として提供されうる所望の公知
の処理を施す。
本発明に用いられるＬ鎖およびＨ鎖は、もちろん上記の
回収法より得られたものだけではなく、応用可能な他の
方法に従って製造されたＬ鎖あるいはＨ鎖であってもよ
い。これらＬ鎖およびＨ鎖は、そのＳＨ基がブロック
化、特にアルキル化、スルホ化などの薬理的に許容され
る基により保護されている。ブロック化に際して置換さ
れる基としては、上記と同様の基が例示される。
回収法より得られたものだけではなく、応用可能な他の
方法に従って製造されたＬ鎖あるいはＨ鎖であってもよ
い。これらＬ鎖およびＨ鎖は、そのＳＨ基がブロック
化、特にアルキル化、スルホ化などの薬理的に許容され
る基により保護されている。ブロック化に際して置換さ
れる基としては、上記と同様の基が例示される。
これらブロック化されたものは自体既知の手段、又はこ
れに準ずる手段にて製造することが出来る。
れに準ずる手段にて製造することが出来る。
次に、本発明のブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖の薬理作用
および臨床試験、急性毒性試験、投与量、投与方法等を
確認するために行った実験例を示す。
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖の薬理作用
および臨床試験、急性毒性試験、投与量、投与方法等を
確認するために行った実験例を示す。
実験例１（抗体産生に対する影響） ＣＤＦ１マウス（７〜８週令、雄性）に、２×１０８の
羊赤血球（ＳＲＢＣ）を静脈内投与により免疫し、４日
後に脾臓を摘出して、抗体産生細胞(Hemolytic plaque
forming cell)の数を測定し、抗体産生に対する被検薬
の影響を調べた。抗体産生細胞数の測定は、Cunningham
らの方法〔Immunolgy，14，599 (1968)〕に準じた。な
お、被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カ
ルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化
Ｌ鎖およびカルバモイルメチル化Ｈ鎖の投与は抗原とし
てのＳＲＢの投与後、直ちに静脈内注射した。なお、実
験には一群を４匹とした。その結果を示したものが表１
である。
羊赤血球（ＳＲＢＣ）を静脈内投与により免疫し、４日
後に脾臓を摘出して、抗体産生細胞(Hemolytic plaque
forming cell)の数を測定し、抗体産生に対する被検薬
の影響を調べた。抗体産生細胞数の測定は、Cunningham
らの方法〔Immunolgy，14，599 (1968)〕に準じた。な
お、被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カ
ルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化
Ｌ鎖およびカルバモイルメチル化Ｈ鎖の投与は抗原とし
てのＳＲＢの投与後、直ちに静脈内注射した。なお、実
験には一群を４匹とした。その結果を示したものが表１
である。
対照群の脾臓中の抗ＳＲＢＣ抗体産生細胞数に比べ、カ
ルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆ
ａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモイ
ルメチル化Ｈ鎖を投与した場合、顕著な抗体産生の亢進
が認められた。
ルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆ
ａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモイ
ルメチル化Ｈ鎖を投与した場合、顕著な抗体産生の亢進
が認められた。
実験例２（免疫機能低下宿主に対する作用） ＣＤＦ１マウス（７〜８週令、雄性）に免疫機能低下状
態を作成するにあたり、以下の実験条件で免疫抑制剤を
投与した。アザチオプリン（４０mg/kg）、シクロホス
ファミド（５０mg/kg）、あるいはベタメタゾン（１mg/
kg）は抗原刺激の４日前、３日前、２日前に投与した。
これら薬剤の投与経路はすべて腹腔内注射であった。そ
の後、羊赤血球（ＳＲＢＣ）（２×108）による抗原刺
激と同時に、被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ
断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイル
メチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を投与
し、４日目の脾臓中の抗体産生細胞数を測定し、免疫機
能低下宿主に対する作用を検討した。本実験において
は、対照薬剤として免疫調節治療剤の１つであるレバミ
ゾールを選んだ。レバミゾールは腹腔内注射とし、他の
薬剤は静脈内注射とした。なお、一群を４匹とした。以
上の結果を示したものが表２である。
態を作成するにあたり、以下の実験条件で免疫抑制剤を
投与した。アザチオプリン（４０mg/kg）、シクロホス
ファミド（５０mg/kg）、あるいはベタメタゾン（１mg/
kg）は抗原刺激の４日前、３日前、２日前に投与した。
これら薬剤の投与経路はすべて腹腔内注射であった。そ
の後、羊赤血球（ＳＲＢＣ）（２×108）による抗原刺
激と同時に、被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ
断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイル
メチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を投与
し、４日目の脾臓中の抗体産生細胞数を測定し、免疫機
能低下宿主に対する作用を検討した。本実験において
は、対照薬剤として免疫調節治療剤の１つであるレバミ
ゾールを選んだ。レバミゾールは腹腔内注射とし、他の
薬剤は静脈内注射とした。なお、一群を４匹とした。以
上の結果を示したものが表２である。
無処置群に比べ免疫抑制剤投与群は抗体産生細胞数が減
少しているが、その様な免疫機能低下宿主に対しても、
カルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化
Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモ
イルメチル化Ｈ鎖投与群は、抗体産生細胞数が亢進され
ていることが認められた。
少しているが、その様な免疫機能低下宿主に対しても、
カルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化
Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモ
イルメチル化Ｈ鎖投与群は、抗体産生細胞数が亢進され
ていることが認められた。
実験例３（免疫機能亢進宿主に対する作用） 抗原と共にコルヒチンを投与すると、サプレッサーＴ細
胞が阻害するために抗体産性の亢進することが報告され
ている〔Ｊ．Exp.Med.,147,1213(1977)〕。本実験にお
いては、ハプテン基としてのＴＮＰを幅らの方法〔免疫
実験操作法p.1129(1971)，日本免疫学会〕に順じてキー
ホール リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）へ導入
し、いわゆるＴＮＰ−ＫＬＨを抗原として用いた。ＴＮ
Ｐ−ＫＬＨ（２００μｇ／マウス）をアジュバントとし
てのベントナイトと共にＣＤＦ１マウスの腹腔内へ投与
し、同時にコルヒチン（１mg/kg）腹腔内へ投与し、さ
らに被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カ
ルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化
Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を静脈内へ投与
し、その後６日目に脾臓中の抗ＴＮＰ抗体産生細胞数を
測定し、免疫機能亢進宿主に対する作用を調べた。な
お、実験群は、一群を４匹とした。その結果を示したも
のが表３である。
胞が阻害するために抗体産性の亢進することが報告され
ている〔Ｊ．Exp.Med.,147,1213(1977)〕。本実験にお
いては、ハプテン基としてのＴＮＰを幅らの方法〔免疫
実験操作法p.1129(1971)，日本免疫学会〕に順じてキー
ホール リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）へ導入
し、いわゆるＴＮＰ−ＫＬＨを抗原として用いた。ＴＮ
Ｐ−ＫＬＨ（２００μｇ／マウス）をアジュバントとし
てのベントナイトと共にＣＤＦ１マウスの腹腔内へ投与
し、同時にコルヒチン（１mg/kg）腹腔内へ投与し、さ
らに被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カ
ルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化
Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を静脈内へ投与
し、その後６日目に脾臓中の抗ＴＮＰ抗体産生細胞数を
測定し、免疫機能亢進宿主に対する作用を調べた。な
お、実験群は、一群を４匹とした。その結果を示したも
のが表３である。
無処置に比較して、コルヒチン処置の対照群は、明らか
な抗体産生細胞数が増加しており、いわゆる免疫機能が
亢進していると考えられる状態であるが、カルバモイル
メチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、
カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモイルメチル化
Ｈ鎖投与群の免疫応答は、無処置群（正常マウス）に近
似した値であり、宿主の亢進した免疫機能を抑制する傾
向にあることが判る。
な抗体産生細胞数が増加しており、いわゆる免疫機能が
亢進していると考えられる状態であるが、カルバモイル
メチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、
カルバモイルメチル化Ｌ鎖およびカルバモイルメチル化
Ｈ鎖投与群の免疫応答は、無処置群（正常マウス）に近
似した値であり、宿主の亢進した免疫機能を抑制する傾
向にあることが判る。
実験例４（リュウマチモデルとしてのアジュバント関節
炎に対する作用） 体重２００ｇ前後のウィスター系雄性ラットを用い、エ
ーテル麻酔下に右側後肢足蹠皮下に流動パラフィン懸濁
したMycobacterium butyricum（Difk）、0.5mg／５０μ
lを注入した。被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆ
ｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイ
ルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖をア
ジュバント処置日から２０mg/kg／日の割合で２０日間
静脈内投与した。なお、対照薬剤として、リュウマチ治
療薬の一つであるＤ−ペニシラミンを用い、これを腹腔
内注射した。その後、両後肢の容積を足蹠浮腫容積装置
にて測定した。なお、実験は一群７匹とした。その結果
を示したものが、表４である。
炎に対する作用） 体重２００ｇ前後のウィスター系雄性ラットを用い、エ
ーテル麻酔下に右側後肢足蹠皮下に流動パラフィン懸濁
したMycobacterium butyricum（Difk）、0.5mg／５０μ
lを注入した。被検薬としてのカルバモイルメチル化Ｆ
ｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイ
ルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖をア
ジュバント処置日から２０mg/kg／日の割合で２０日間
静脈内投与した。なお、対照薬剤として、リュウマチ治
療薬の一つであるＤ−ペニシラミンを用い、これを腹腔
内注射した。その後、両後肢の容積を足蹠浮腫容積装置
にて測定した。なお、実験は一群７匹とした。その結果
を示したものが、表４である。
アジュバント処置後肢の浮腫率の推移のうち、１０日目
と２０日目の場合を示しているが、７日目以後の遅発性
浮腫に対しては、対照群に比べ、カルバモイルメチル化
Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモ
イルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖投
与群は明らかなアジュバント関節炎に対する抑制作用を
示した。
と２０日目の場合を示しているが、７日目以後の遅発性
浮腫に対しては、対照群に比べ、カルバモイルメチル化
Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモ
イルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイルメチル化Ｈ鎖投
与群は明らかなアジュバント関節炎に対する抑制作用を
示した。
有効成分であるブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖は、前記試
験の結果から成人１日当たり１〜１００mg/kg投与する
ことが好ましい。
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖は、前記試
験の結果から成人１日当たり１〜１００mg/kg投与する
ことが好ましい。
本薬剤は、注射剤及び経口剤のいずれの形態でも投与可
能である。注射剤として使用するときは、例えば用時に
於いて注射用蒸溜水等に溶解して使用される。投与の方
法は、通常静脈内及び筋肉内投与である。経口剤として
使用するときは、カプセル剤、錠剤、散剤、リポソーム
製剤あるいは経口用液体製剤等として投与される。経口
剤の場合は、腸溶性としてもよい。これらは、当業者に
周知の方法、例えば日本薬局方に記載された方法に従っ
て製造される。
能である。注射剤として使用するときは、例えば用時に
於いて注射用蒸溜水等に溶解して使用される。投与の方
法は、通常静脈内及び筋肉内投与である。経口剤として
使用するときは、カプセル剤、錠剤、散剤、リポソーム
製剤あるいは経口用液体製剤等として投与される。経口
剤の場合は、腸溶性としてもよい。これらは、当業者に
周知の方法、例えば日本薬局方に記載された方法に従っ
て製造される。
本発明に関するブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖は、毒性が
きわめて低く、又その免疫調節作用が顕著であるから、
リュウマチ性疾患、膠原病等の免疫不全に起因する疾患
の治療予防剤（即ち、免疫調節剤）として極めて有用と
考えられる。ところで、たとえばアジュバント関節炎に
対する作用から、本発明にいう免疫調節剤は、抗炎症剤
をも含む概念である。
断片、ブロック化Ｌ鎖およびブロック化Ｈ鎖は、毒性が
きわめて低く、又その免疫調節作用が顕著であるから、
リュウマチ性疾患、膠原病等の免疫不全に起因する疾患
の治療予防剤（即ち、免疫調節剤）として極めて有用と
考えられる。ところで、たとえばアジュバント関節炎に
対する作用から、本発明にいう免疫調節剤は、抗炎症剤
をも含む概念である。
次にブロック化Ｆｃ断片、ブロック化Ｆａｂ断片の製造
法についての参考例、および本発明の実施例を示す。
法についての参考例、および本発明の実施例を示す。
参考例１ ＩｇＧの３％溶液（６０ml）にアジ化ナトリウムを６０
mg加え、１ＮＮａＯＨ溶液を用いてpHを7.5に調整す
る。プラスミンを最終濃度４cu/mlになるよう添加し、
３５℃において約１５時間消化処理をおこなう。処理後
pHを6.5に修正し、４℃にて１時間静置した後、遠心分
離によって不溶物を除く。プラスミン消化液（約６０m
l）をセファデックスＧ-200のカラムに注入し、ゲル濾
過処理を行い、未消化グロブリン（７Ｓ）と消化産物
（Ｆａｂ＋Ｆｃ）とに分離する。この消化産物は次いで
ＣＭ−セルロースのカラム（ pH7.0）と接触させ、Ｆ
ａｂ断片およびＦｃ断片を吸着させる。カラムで洗浄し
た後、0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.0）に0.3ＭのＮａＣｌ
を加えた溶媒で展開し、Ｆａｂ断片及びＦｃ断片を別々
に回収する。
mg加え、１ＮＮａＯＨ溶液を用いてpHを7.5に調整す
る。プラスミンを最終濃度４cu/mlになるよう添加し、
３５℃において約１５時間消化処理をおこなう。処理後
pHを6.5に修正し、４℃にて１時間静置した後、遠心分
離によって不溶物を除く。プラスミン消化液（約６０m
l）をセファデックスＧ-200のカラムに注入し、ゲル濾
過処理を行い、未消化グロブリン（７Ｓ）と消化産物
（Ｆａｂ＋Ｆｃ）とに分離する。この消化産物は次いで
ＣＭ−セルロースのカラム（ pH7.0）と接触させ、Ｆ
ａｂ断片およびＦｃ断片を吸着させる。カラムで洗浄し
た後、0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.0）に0.3ＭのＮａＣｌ
を加えた溶媒で展開し、Ｆａｂ断片及びＦｃ断片を別々
に回収する。
得られた両断片を0.05Ｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液（pH8.
2）に約２％の濃度に溶かし、２−メルカプトエタノー
ルを終濃度0.75〜5.25Ｍにまで添加し、ジスルフィド結
合を切断した。ついで0.75〜5.25Ｍヨード酢酸を加え、
pHを8.0に保ち１時間反応させた後、セファデックスＧ
−２５カラムで余剰の試料を除去した。次に、生理食塩
水に対して透析し、さらに除菌濾過を行ったあと、それ
ぞれを凍結乾燥品とした。
2）に約２％の濃度に溶かし、２−メルカプトエタノー
ルを終濃度0.75〜5.25Ｍにまで添加し、ジスルフィド結
合を切断した。ついで0.75〜5.25Ｍヨード酢酸を加え、
pHを8.0に保ち１時間反応させた後、セファデックスＧ
−２５カラムで余剰の試料を除去した。次に、生理食塩
水に対して透析し、さらに除菌濾過を行ったあと、それ
ぞれを凍結乾燥品とした。
参考例２ ＩｇＧの2.5％溶液（２０ml；0.02ＭのＥＤＴＡ−0.05
Ｍリン酸緩衝液pH7.5）にパパイン５mgを添加し、３７
℃、１０〜２０分間消化後、氷水で冷却した。冷却後不
溶物を遠心分離し、上清をセファデックスＧ−150カラ
ムによって分画し７Ｓ画分を得た。これをpH7.5〜8.0で
終濃度0.01Ｍのジチオスレイトールで室温で２時間処理
し、次いでヨードアセトアミドを終濃度0.2Ｍになるよ
う加え、氷冷下１時間反応させた。これをpH８の0.005
Ｍトリス−ＨＣｌに対して透析し、生じた結晶を遠心分
離した。上清は粗ブロック化Ｆａｂ断片であり、沈澱画
分をブロック化Ｆｃ断片として回収した。
Ｍリン酸緩衝液pH7.5）にパパイン５mgを添加し、３７
℃、１０〜２０分間消化後、氷水で冷却した。冷却後不
溶物を遠心分離し、上清をセファデックスＧ−150カラ
ムによって分画し７Ｓ画分を得た。これをpH7.5〜8.0で
終濃度0.01Ｍのジチオスレイトールで室温で２時間処理
し、次いでヨードアセトアミドを終濃度0.2Ｍになるよ
う加え、氷冷下１時間反応させた。これをpH８の0.005
Ｍトリス−ＨＣｌに対して透析し、生じた結晶を遠心分
離した。上清は粗ブロック化Ｆａｂ断片であり、沈澱画
分をブロック化Ｆｃ断片として回収した。
参考例３ ＩｇＧを0.05Ｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液（pH8.2）に約
２％の濃度に溶かし、２−メルカプトエタノールを終濃
度0.75Ｍにまで添加し、ジスルフィド結合を切断した。
次いで0.7Ｍヨード酢酸を加え、pHを8.0に保ち１時間反
応させた後、セフアデックスＧ−２５カラムで余剰の試
薬を除去した。次に、ＳＤＳ（scdium dodecyl sulfat
e）存在下セファデックスＧ−２００カラム（4.0×１２
０cm）〔溶媒：0.04Ｍ ＳＤＳ−0.05Ｍリン酸緩衝液
（pH8.0）〕にかけて、O.D.280mmで測定し、Ｌ鎖および
Ｈ鎖画分を回収した。次にＬ鎖画分あるいはＨ鎖画分か
らＳＤＳを除去し、生理食塩水に対して透析し、さらに
除菌濾過を行った後、凍結乾燥品とした。
２％の濃度に溶かし、２−メルカプトエタノールを終濃
度0.75Ｍにまで添加し、ジスルフィド結合を切断した。
次いで0.7Ｍヨード酢酸を加え、pHを8.0に保ち１時間反
応させた後、セフアデックスＧ−２５カラムで余剰の試
薬を除去した。次に、ＳＤＳ（scdium dodecyl sulfat
e）存在下セファデックスＧ−２００カラム（4.0×１２
０cm）〔溶媒：0.04Ｍ ＳＤＳ−0.05Ｍリン酸緩衝液
（pH8.0）〕にかけて、O.D.280mmで測定し、Ｌ鎖および
Ｈ鎖画分を回収した。次にＬ鎖画分あるいはＨ鎖画分か
らＳＤＳを除去し、生理食塩水に対して透析し、さらに
除菌濾過を行った後、凍結乾燥品とした。
次に本発明の実施例を示す。
実施例１（経口用製剤） (1)ヒトＩｇＧ由来カルバモイルメチ ル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチ ル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメ チル化Ｌ鎖、あるいはカルバモイ ルメチル化Ｈ鎖 5.0mg (2)直打用微粒No.209（富士化学社製）46.6mg メタケイ酸アルミン酸 マグネシウム 20％ トウモロコシデンプン 30％ 乳糖 50％ (3)結晶セルロース 24.0mg (4)カルボキシルメチルセルロース・ カルシウム 4.0mg (5)ステアリン酸マグネシウム0.4mg (1)、(3)および(4)はいずれも予め１００メッシュの篩
に通す。この(1)、(3)、(4)と(2)をそれぞれ乾燥させて一
定含水率にまで下げた後、上記の重量割合で混合機を用
いて混合する。全質均等にした混合末に(5)を添加して
短時間（３０秒間）混合し、混合末を打錠（杵：6.3mm
φ、6.0mmR）して、１錠８０mgの錠剤とした。
に通す。この(1)、(3)、(4)と(2)をそれぞれ乾燥させて一
定含水率にまで下げた後、上記の重量割合で混合機を用
いて混合する。全質均等にした混合末に(5)を添加して
短時間（３０秒間）混合し、混合末を打錠（杵：6.3mm
φ、6.0mmR）して、１錠８０mgの錠剤とした。
この錠剤は必要に応じて通常用いられる胃溶性フィルム
コーティング剤（例、ポリビニルアセタールジエチルア
ミノアセテート）や食用性着色剤でコーティングしても
よい。
コーティング剤（例、ポリビニルアセタールジエチルア
ミノアセテート）や食用性着色剤でコーティングしても
よい。
実施例２ （静脈内注射剤） (1)ヒトＩｇＧ由来カルバモイルメチ ル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチ ル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメ チル化Ｌ鎖、あるいはカルバモイ ルメチル化Ｈ鎖 ５０mg (2)ブドウ糖 １００mg (3)生理食塩水 １０ml (3)に(1)と(2)を上記の重量割合で加えて撹拌し、完全
に溶解させる。この溶解液を孔径0.45μのメンプランフ
ィルターを用いて濾過した後、再び孔径0.20μのメンブ
ランフィルターを用いて除菌濾過を行う。濾過液を１０
mlずつ無菌的にバイアルに分注し、窒素ガスを充填した
後、密封して静脈内注射剤とする。
に溶解させる。この溶解液を孔径0.45μのメンプランフ
ィルターを用いて濾過した後、再び孔径0.20μのメンブ
ランフィルターを用いて除菌濾過を行う。濾過液を１０
mlずつ無菌的にバイアルに分注し、窒素ガスを充填した
後、密封して静脈内注射剤とする。
実施例３（カプセル剤） (1)ヒトＩｇＧ由来カルバモイルメチ ル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチ ル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメ チル化Ｌ鎖、あるいはカルバモイ ルメチル化Ｈ鎖 ５０ｇ (2)乳糖 ９３５ｇ (3)ステアリン酸マグネウム １５ｇ 上記成分をそれぞれ秤量して合計1000gを均一に混合
し、混合粉体をハードラチンカプセルに２００mgずつ充
填する。
し、混合粉体をハードラチンカプセルに２００mgずつ充
填する。
実施例４（リポソーム製剤） ヒトＩｇＧ由来カルバモイルメチル化Ｆｃ断片、カルバ
モイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖
或いはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を0.125MＮａＣｌを含
む0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.2）に約0.5％の濃度に溶か
す。
モイルメチル化Ｆａｂ断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖
或いはカルバモイルメチル化Ｈ鎖を0.125MＮａＣｌを含
む0.01Ｍリン酸緩衝液（pH7.2）に約0.5％の濃度に溶か
す。
他方、０、５、１０、２０％（ｗ／ｗ）のフォスファチ
ジン酸を含む卵黄リン脂質１００mgを、１０mlのクロロ
ホルムにそれぞれ溶解、回転エバポレーターを用いて、
リン脂質のフィルムを形成させた。これに上記のカルバ
モイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ
断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイル
メチル化Ｈ鎖の溶液１mlを加え、振盪することによって
閉鎖脂肪小体を形成し、これら薬剤を取り込ませてリポ
ソーム製剤を得た。
ジン酸を含む卵黄リン脂質１００mgを、１０mlのクロロ
ホルムにそれぞれ溶解、回転エバポレーターを用いて、
リン脂質のフィルムを形成させた。これに上記のカルバ
モイルメチル化Ｆｃ断片、カルバモイルメチル化Ｆａｂ
断片、カルバモイルメチル化Ｌ鎖あるいはカルバモイル
メチル化Ｈ鎖の溶液１mlを加え、振盪することによって
閉鎖脂肪小体を形成し、これら薬剤を取り込ませてリポ
ソーム製剤を得た。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭58−21623（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−101427（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−70621（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−21624（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−81817（ＪＰ，Ａ) 特開 昭55−57521（ＪＰ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】ヒトＩｇＧのブロック化Ｆｃ断片、ヒトＩ
ｇＧのブロック化Ｆａｂ断片、ヒトＩｇＧのブロック化
Ｌ鎖、ヒトＩｇＧのブロック化Ｈ鎖から選ばれる少なく
とも一種を有効成分とする免疫調節剤。 - 【請求項２】形態が静脈内、筋肉内、又は経口投与用の
液状製剤である特許請求の範囲第(1)項記載の免疫調節
剤。 - 【請求項３】形態が経口投与用の散剤、錠剤、カプセル
剤、又はリポソーム製剤である特許請求の範囲第(1)項
記載の免疫調節剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59276758A JPH0643343B2 (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 免疫調節剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59276758A JPH0643343B2 (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 免疫調節剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61155335A JPS61155335A (ja) | 1986-07-15 |
| JPH0643343B2 true JPH0643343B2 (ja) | 1994-06-08 |
Family
ID=17573934
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59276758A Expired - Lifetime JPH0643343B2 (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 免疫調節剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0643343B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5172882A (en) * | 1991-03-25 | 1992-12-22 | General Motors Corporation | Manual seat adjuster with dual locking means |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2846412A1 (de) * | 1978-10-25 | 1980-05-08 | Behringwerke Ag | Mittel zur behandlung allergischer reaktionen |
| DE2853453A1 (de) * | 1978-12-11 | 1980-06-19 | Behringwerke Ag | Mittel zur therapie von immunkomplexerkrankungen |
| JPS5821623A (ja) * | 1981-07-28 | 1983-02-08 | Tetsuzo Sugizaki | 抗原抗体複合体沈着疾患治療剤 |
| JPS5821624A (ja) * | 1982-04-06 | 1983-02-08 | Tetsuzo Sugizaki | 慢性関節リウマチの治療剤 |
| JPS5970621A (ja) * | 1982-10-13 | 1984-04-21 | Tetsuzo Sugizaki | 抗原抗体複合体沈着疾患の治療剤 |
| JPS59101427A (ja) * | 1982-11-30 | 1984-06-12 | Teijin Ltd | 腎疾患治療剤 |
-
1984
- 1984-12-28 JP JP59276758A patent/JPH0643343B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61155335A (ja) | 1986-07-15 |
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