JPH06500013A - Ａｌｄｃ誘導体およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＡＬＤＣ誘導体およびその使用 本発明は、ＡＬＤＣ誘導体およびその使用に関するＡＬＤＣは、アセトラフター ト　デカルボキシラーゼの略記号である。

例えば、麦芽汁又はグレープジュースの如き炭水化物含有物質を発酵する際、所 望のアルコール発酵以外に種々の副生成物がプロセスにより生成し得る。すなわ ち、未所望の副生成物はジアセチルである。

ＥＰ４６０６６から、ＡＬＤＣは酵素として使用できることが明らかであるが、 これはジアセチルの形成を防止する。しかし、最も自然に存在しているＡＬＤＣ の最適ｐＨは約６であり、ｐＨ３，８〜４．７で活性であり、これは麦芽汁の発 酵のｐＨであり、実際の目的には低すぎ、特にｐｌ（４以下で行うであり、これ は低い麦芽含有値を有する麦芽汁の発酵の通常のｐＨである。この理由のため、 ビール又はワインの発酵からジアセチルの形成を防止するプロセスは、大規模で の実際の工業的生産に対してそのやり方が未だ見出されていない、　ＥＰ４６０ ６６において、ＡＬＤＣは固定化され得ると述べられている。又、ＥＰ４６０６ ６において、ＡＬＤＣは化学的に変成されて最適活性をより低いｐＨ値にシフト される。

Ｂｉｏｃｈｅｓ＋、１１巻ＮＯ，２２，１９７２（４０２２〜４０８４頁）参照 のこと、　Ｂｉｏｃｈｅｌｌ、の文献で言及された修飾方法はポリ（オルニチル ）側鎖をキモトリプシンに成長させることを含んでなり、Ｂｉｏｃｈｅ曽０文献 はＡＬＤＣの修飾に対し何ら提案していない、最適活性を低ｐＨにシフトさせる ための従来技術の修飾方法は、工業的適用には適当でなく、更にもしもポリ（オ ルニチル）法がキモトリプシンからＡＬＤＣに移行できるか否か知られていない 。最後にＢｉｏｃｈｅｍ、の文献から従来技術の修飾されたキモトリプシンの低 ｐＨでは安定性が満足できるか明らかでない。

従って、本発明の目的は産業的に有利に使用できかつ低ｐＨで満足できる安定性 を示すＡＬＤＣ誘導体を提供することにある。

驚くべきことに、以下の内容が見出された。すなわち、ＡＬＤＣをグルタルアル デヒドで処理すると修飾されたＡＬＤＣが与えられ、これは第一に所望のｐＨプ ロフィルを示し、第二に安価でかつ容易に製造でき、第三に満足できる安定性を 示す。又、本発明に係るＡＬＤＣ誘導体は、後に示すように可溶性誘導体および 固定化誘導体の双方で提供され得る。

従って、本発明に係るＡＬ［ｌＧ誘導体は、水性媒質中のＡＬＤＣが純粋のＡＬ ［ｌＣＣ蛋白質１当当り０．１〜５ｇのグルタルアルデヒドに相当する濃度で、 好ましくは純粋なＡＬＤＣ蛋白質蛋白質１リ当、２５〜２ｇに相当する濃度でグ ルタルアルデヒドで処理されていることを特徴とする。

このＡＬＤＣ誘導体は可溶性であることが判明しており、もしも更に処理されな い場合それは高活性の収率で生産され得ることが見出された。

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１０巻ＮＯ，５，３２５〜３３ ０（１９８８）には、グルタルアルデヒドによるβ−グルコシダーゼの架橋が、 改善された熱安定性を有する誘導体を与えることが記載されている。Ａｄｖ、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ。

Ｅｎｇ、１２．　Ｐ、４１−１１８．１９７９中に、ロルフＤ、シュミットは種 々の酵素、例えばパパイン、グルコースオキシダーゼ、カタラーゼおよびウリカ ーゼ、但しＡＬＤＣではないがそれらの架橋が改良された熱酸安定性をこれらの 酵素誘導体に与えることを記載している。従って、従来技術は、本発明の目的を 満たし得る試剤としてグルタルアルデヒドを指摘していない。

次のように理解されるべきものである。すなわち、全てのＡＬＤＣ酵素、すなわ ち任意の微生物から産生されるＡＬＤＣは本発明に従って用いることができる。

好ましいＡＬＤＣ’　ｓはバシラスブレビスおよびバシラスリケニホルミス由来 のものである。

本発明に係るＡＬＤＣ誘導体の好ましい態様は、前節で示されたＡＬＤＣ誘導体 が固定化されていることを特徴とする。固定化は公知の方法、例えば吸着法によ り行うことができる。この方法でＡＬＤＣなしでビールを含む利益が得られる。

ＥＰ１３１２５１を参照のこと、これには特別な無機担体が記載され、この担体 上に、例えば酵素、例えばＡＬＤＣが吸着により固定化され次いでグルタルアル デヒドで架橋される。しかしこのＥＰはＡＬＤＣのｐｔｒ−活性曲線のｐＨのシ フトは記載しておらず、これは本発明の主特徴の一つである。ＥＰに記載されて いない本発明の他の主な特徴は、任意の固定化の前に定められた小濃度のグルタ ルアルデヒドでＡＬＤＣを処理することである。

また、本発明はビール発酵において本発明に係るＡＬＤＣ誘導体の使用を含んで なる。

本発明に係る使用の好ましい態様は、可溶性ＡＬＤＣ誘導体がバッチ発酵中、通 常の酵母と共に用いられることを特徴とする。これは、本発明に係るＡＬＤＣ誘 導体の使用について最も簡単な方法である。

本発明に係る使用の好ましい１！様は、固定化ＡＬＤＣ誘導体がバッチ発酵中、 通常の酵母と共に用いられることを特徴とする。この態様はＡＬＤＣが最終生成 物中に現われない利益をもたらすであろう。

本発明に係る使用の好ましいＭ様は、固定化ＡＬＤＣ誘導体が連続発酵中、固定 化酵母と共に用いられるということを特徴とする。これはジアセチルプリカーサ −α−アセトラクテートを直ちに除去するという有利さを与える。

本発明を次の実施例により説明する。これらの実施例において、ＡＬＤＣ調製品 が用いられ、これはＤＫ１４９３３５Ｂに記載される性質を有するバッチラスプ レビスのＡＬＤＣをコードしそして発現する遺伝子を含有するバシラスズブチリ ス菌株を培養することによって得られる。

例１ １００　ｍｌのＡＬＤＣ溶液（バッチＨ［１Ｆ２１２．　これはＡＬ［ｌＣ活性 １７００ＡＤＵ　／＊１を有する発酵液の遠心分離液）を、２．５　ｍｌの２％ のグルタルアルデヒド溶液と混合した（最終グルタルアルデヒド濃度０．０５％ （Ｗ／Ｗ）、ＡＬＤＣの１ｇ当たり０．５ｇのグルタルアルデヒドに相当する。

）反応混合物を氷で３時間冷却した。ｐＨを７．５に常に調節した。

ＡＬＤＣ活性（ＡＤＵ／■ｌ）をノボ分析法ＡＰ２７Ｂ　／１−ＧＢ　（要求に よりノボノルディスクＡ／Ｓ、ノボアレ、ＤＫ−２８８０バズグバエルトから入 手可能）により測定し、基質のｐＨを３．６から５．６の値に調節した。

ｐＨ−活性曲線を図１に示す。

ＡＬＤＣおよび誘導されたサンプルの安定性を通常の低温殺菌したデンマークの ビール（［ｌ０Ｆ）中で測定した。２０Ａ口Ｕを１−【当たりのビールに添加し 、ここにおいてｐｉ（をそれぞれ４．０および６．０に調節した。

ビールのサンプルを毎日採取し、残留ＡＬＤＣ活性をｐＨ６，０で測定した。

結果を図２および図３に示す。

グルタルアルデヒドでの処理は、ｐＨ４，０でＡＬ［］Ｃの活性と安定性の双方 を改善する。

例２ 云　・バッチ　における憬　れたＡＬＤＣの−ＡＬＤＣ（ハツチＥＤＦ２１２． １７００ＡＤＵ　７■ｌ）　（調製品１）および、例１（ＩｌｏｏＡＤＵ　／■ ｌ）に記載した如く調製したグルタルアルデヒド処理ＡＬＤＣ（調製品２）を用 いた。

発酵を醸造所のモルト麦芽汁（ＦＡＸＥ）を用いて行い、そして付加物（スクロ ース）の添加量（１０，２０，３０および４０％Ｗ／Ｗ）を有する同じモルト麦 芽汁について行った。麦芽汁１ｆｆｉ当たり２．５ｇの酵母を加えた。　ＡＬＤ Ｃを酵母と共に添加した。　（４６ＡＤＵ／Ｉｌ＞　、発酵を１２℃で行い７日 間継続した。　ｐＨ（図４　）　、ＡＬＤＣ残留活性（図５）および全ジアセチ ル（α−アセトラクチド酸＋ジアセチル）（図６〜９）を毎日測定した。

結果は以下の内容を示している。すなわち、全アセチルの減少は誘導されたＡＬ ＤＣＣｍ製品２）を用いた場合、未処理のＡＬＤＣを用いた場合よりもより大き く、更に誘導体の調製品はより安定である。

例３ 例１に記載した如く調製した３＋１のグルタルアルデヒド処理ＡＬＤＣ（Ｉｌｏ ｏＡＤＵ　７■ｌ）を、Ｉｇの担体（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔ　５ｕｐｐｏｒｔ ｓ　５ＧＢＣＩＥ　７６月１９８７年に記載、ブレース社製のシリカ担体、グレ ード５００ＭＰ）に添加した。ｐＨを４．５に調節し次いで担体およびＡＬＤＣ 溶液を５°Ｃで回転させながら２０時間ゆっくり攪拌し次いで真空濾過した。ポ リアゼチジン（クメネ、バーキュレスＢＶ）の３％溶液の０．５■ｌを吸着した ＡＬＤＣを有する粒子に添加し、混合物を真空乾燥した。固定化ＡＬＤＣの活性 はｐＨ６，０テ５８９　ＡＤＵ　／　ｇ　テあり、ｐＨ３，８テ３３１　ＡＤＵ 　／　ｇ　Ｔ！ある。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年２月ｌケ日

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．ＡＬＤＣ誘導体であって、ここにおいて水性媒質中のＡＬＤＣが純粋なＡＬ ＤＣ蛋白質１ｇ当たり０．１〜５ｇのグルタルアルデヒドに相当する濃度で、好 ましくは純粋なＡＬＤＣ蛋白質１ｇ当たり０．２５〜２ｇのグルタルアルデヒド に相当する濃度でグルタルアルデヒドで処理されている、前記ＡＬＤＣ誘導体。
2. ２．グルタルアルデヒド処理のＡＬＤＣ誘導体が固定化されている、請求の範囲 第１項記載のＡＬＤＣ誘導体。
3. ３．ビール発酵において、請求の範囲第１項又は第２項記載のＡＬＤＣ誘導体の 使用。
4. ４．請求の範囲第１項記載のＡＬＤＣ誘導体がバッチ発酵において通常の酵母と 共に用いられる、請求の範囲第３項記載の使用。
5. ５．請求の範囲第２項記載のＡＬＤＣ誘導体がバッチ発酵において通常の酵母に 共に用いられる、請求の範囲第３項記載の使用。
6. ６．請求の範囲第２項記載のＡＬＤＣ誘導体が、連続発酵において固定化酵母と 共に用いられる、請求の範囲第３項記載の使用。