JPH07509132A - 立体特異的なｇａｂａ−ｔ阻害剤のラセミ混合物の酵素的分割 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称　立体特異的なＧＡＢＡ−Ｔ阻害剤のラセミ混合物の酵素的分割 発明の分野 本発明は、γ・アミハ■トランスアミナーゼ（ＧＡＢＡ−Ｔ）の立体特異的で、 製薬上有用な生体内阻害剤のラセミ混合物を酵素的に分割することに間する。 発明の背景 Ｔ−７ミノ酪Ｍ　（ＧＡＢＡ）は重要な抑制的神経伝達物質である。脳内のＧＡ ＢＡＪＩ度がｋｉＡｍ水準より低下するとき、発作や池の神経学的な障害が起こ る［エイ・ヴイ・デルガド＝ニスケタ（Ａ、Ｖ、　Ｄｅｌｇａｄｏ−Ｅｓｃｕｅ ｔａ）ら、「１虐の基本的メカニズム」レイブン・プレス社、ニューヨーク州、 ３６５頁（１９８６年）コ、シナプス裂溝（ｃｌｅｆｔ）におけるＧＡＢＡの適 切な水準は、ＧＡＩＩＡの分解に聞手している酵素ＧＡＢＡづの不可逆的な不活 性化によって維持できる［ニス・エム・ナナヴ７ツティ（Ｓ、Ｍ、　Ｎａｎａｖ ａｔｉ）ら１，１．　Ｍｅｄ。 ＣｈｅＬ３２巻２４１３頁　（１９８９年）］。 ］酵素ＧＡＢＡ−トランスアミナーゼ　ＧＡＢＡ−Ｔ）によって触媒される、γ −アミノ酪＃　（ＧＡＢＡ）のコハク酸セミアルデヒドへの生物転化は、中枢神 経系の抑制的な神経伝達物質であるＧＡＢＡの異化の原因となる一次反応である 。内因のＧＡＢＡの低水準は、発作障害（例えば１廖、アルコール禁断、又はバ ルビッール酸塩禁断て起こるもの）、不随意運動に関わる障害（例えは薬物の錐 体外路の影響、によって起こるもの、例えば遅発性運動異常）、ある精神疾惠（ 例えば精神分裂症とうつ病）、及び筋肉痙撃に結びつくことが知られている。　 ＧＡＢＡ−Ｔの不可逆的阻害などによってコハク酸セミアルデヒドへのＧＡＢＡ の転化を遮断することは、中枢神経系（ＣＮ５）てのＧＡＢＡ水準を高め、従っ て低ＧＡＢＡ水準に間違するＣＮＳの障害を処置する手段を提供している。 ある化合物類は、ＧＡＢＡ−Ｔの不可逆的な阻害剤であるため、脳のＧＡＢＡ水 準を高めることが知られている。その例は４−アミノヘキス−５−エン酸（ビニ ルＧＡＢＡ）　、４−アミノヘキス−５−イン酸（アセチレニックＧＡＢＡ又は エチニルＧＡＢＡ）、及び４−アミノ−へブタ−５，６−ジエン酸（アレニルＧ ＡＢ＾）である［合衆国特許第３．９６０．９２７号、第３．９５９，３５６号 、及び第４，４５４．１５６号：リッパート（Ｌｉｐｐｅｒｔンら、εｕｒ、Ｊ 。 Ｂｉｏｃｈｅｍ、　７４巻４４１頁（１９７７年）；リッパートら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、５巻（２号）３７５頁　（１９８０年） ；ジャング（Ｊｕｎｇ）　ら１．１．　Ｎｅｕｒｏｃｈｅ＊、２８巻７１７頁（ １９７７頁）；パルフレイマン（Ｐａｌｆｒｅｙｗａｎ）ら、ＧＡＢＡ−Ｎｅｕ ｒｏ−Ｔｒａｎｓ■ｉ　ｔｔｅｒ、アルブレッド・ベンゾン・シンポジウム１２ ；ラーセン（Ｌａｒｓｅｎ）ら、Ｅｄｉｔｏｒｓ、　Ｍｕｎｋｓｇａａｒｄ、　 Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、　４３２−４４６頁（１９７９年）；ジューン（Ｊｕｎ ｅ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅ ａｒｃｈ　Ｃｏ５ｍ、、６７巻３０１頁（１９７５年）；パルフレイマンら、Ｂ ｉｏｃｈｅａ＋１ｃａｌ　Ｐｈａｒｍ、。 ３０巻８１７頁（１９８１年）；及びジャンクら、Ｂｉｏｃｈｅ＊１ｃａｌ　Ｐ ｈａｒｍ、　３３巻３７１７頁（１９８４年）を参照コ。 特に、これらの化合物はｇｉ層に伴う発作の制御用の抗痙筆削として有用である 。抗痙筆活性は、実験的に誘発される発作に対する実験動物での標準試験手順を 用いて立証できる。　ＧＡＢＡ　（γ−エチニルｌ、γ−アレニル２、及びγ− ビニル３　ＧＡＢＡ）の阻害剤が設計され合成された。 これらの全化合物類は、治療用途への可能性をもち、またγ−ビニルＧＡＢ＾（ ケイガバトリン）は、ａｍ治療に有効な薬剤として、欧州ですでに認可された。 γ−アレニルＧＡＢＡ及びγ−ビニルＧＡＢＡの生物活性は、（Ｓ）−エナンチ オマーにある［ビー・カサーラ（Ｐ、　Ｃａ５ａｒａ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ ｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　２５巻１８９１頁（１９１３１１年）］。逆に、（Ｒ） −γ−エチニルＧＡＢＡは、抗痙筆削としては、（Ｓ）−エナンチオマーやラセ ミ混合物より活性がある［エム・ジエイ・ジャンク（Ｍ、　、１．　、ｌｕｎｇ ）ら、Ｂｉｏｃｈｅ＋ｗｉｓｔｒｙ　１７巻２６２８頁（１９７８年）。これま で、γ−エチニルＧＡＢＡ、γ−アレニルＧＡＢ＾、及Ｕγ−ビニルＧＡＢＡの エナンチオマー類は、非対称的な合成によって［ビー・カサーラら、及びエイ・ ホームズ（＾、　Ｈｏ１ｎｓ）ら、Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、　Ｐｅｒｋｉ ｎ　Ｔｒａｎｓ、　１巻３３０１頁（１９９１年）］、又はジアステレオマー結 晶化によって［エム・ジエイ・ジャンクら、及びシー・ダンジン（Ｃ，Ｄλｎｚ ｉｎ）ら、「ビタミンＢｌ、触媒作用の化学的及び生物学的な側面（Ｃｈｅｍｉ ｃａｌ　ａｎｄ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｖｉｔａｍｉｎ 　８６）Ｊエイ・イー・エバンジエボーロス編、アラン・Ｒ・リス社、ニューヨ ーク州、Ａ部、３７７−３８５頁（１９８４年”）　］　５ｌｌｉ！された。し かし、これらの方法は、経路が長く、最終生成物の収率が低いため、大規模な合 成に適していない。 化合物類γ−エチニルＧＡＢＡ、γ−アレニルＧＡＢＡ、及びγ−ビニルＧＡＢ Ａは、酵素に基づく分割法には困難な標的でもある［シー・ジエイ・サイ（Ｃ０ Ｊ、　５ｉｈ）ら、５ｔｅｒｅｏｃｈｅ■、１９巻６３−１２５頁（１８９８年 ）、及びエイ・エム・クリバッフ（Ａ、　Ｍ、にｌ　１ｂａｎｏｖ）ら、Ａｃｃ 、　Ｃｈｅｗ、　Ｒｅｓ、　２３巻１１４−１２０頁（１９９０年）コ、アミノ アシラーゼ［エッチ・ケイ・チェシールドＣＨ，に、　Ｃｈｅｎａｕｌｔ）ら、 Ｊ、Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ。 １１１巻６３５４−６４頁（１９８９年）］及びアミノペプチダーゼ［イー・エ ム・メイン＋　−（Ｅ、Ｍ、　Ｍｅｔｊｅｒ）ら、「有機合成のバイオ触媒ＴＡ 　（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ） 」ジェイ・トランバーら編、アムステルダム・エルスケイア社、＋３５−１５６ 頁（１９８５年）］のような酵素類は、α−アミノ酸の分割に通常使用されるが 、γ−アミノ酸類を分割できない、リパーゼ類は（Ｎ−アシル）−ｒ−ビニルα ＢＡのエステル類のエナンチオマー選択的な加水分解を触媒するが、立体選択性 はそれはとてはない、これらの化合物類はまた、ω−アミノ酸トランスアミナー ゼで新たに開発された手法について、重大な問題を提起している［ディー・アイ ・スターリング（０，１，Ｓｔｉｒｌｉｎｇ）ら、合衆国特許第４，９５０，６ ０６号（１９９０年）コ、というのは、γ−エチニルＧＡＢＡ、γ−アレニルＧ ＡＬＡ、及びγ−ビニルＧＡＢＡは、非常に似た群の酵素を不可逆的に阻害する ように設計されているためである。 ここに我々は、対応するＮ−フェニルアセチル誘導体類のペニシリンアシラーゼ で触媒された加水分解により、γ−エチニルＧＡＢＡ、γ−アレニル６＾Ｂ＾、 及びγ−ビニルＧＡＢＡのエナンチオマー類をｖ４Ｉ！するための簡単な手順を 報告する。６−アミノペニシラン酸及び半合成β−ラクタム抗生物質のｖ４製に 、大ｌｌＩＭからのペニシリンアシラーゼ（ＰＡ）が業界で使われている［ケイ ・ケイ争スヴエダス（ν、に、５ｖｅｄａｓ）　ら、Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｃｒｏ ｂ、Ｔｅｃｈｎｏｌ、２巻＋３８頁（１９８０年）］、ＰＡはフェニルアセチル 基に非常に特異的であり、ペニシリンからだけでなく、アミド、ペプチド、及υ エステルからも、その開裂を触媒する［エム・コール　（Ｍ、Ｃｏ１ｅ）　、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、、１．、　１１５巻７３３頁　（１９６９年）；前掲７４１頁； 及びエイ・ツエンテイルマイ（Ａ、Ｃｚｅｎｔｉｒｓａｉ）　、Ａｃｔａ　Ｍｉ ｃｒｏｂｉｏｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｈｕｎｇ、１２巻３９５頁（＋９６５／１ ９６６年）］。基′１ｊＬＲ脱基の構造は、加水分解反応の速度定数にほとんと 影響しない［エム・コール、Ｎａｔｕｒｅ　２０３巻５１９頁（１９６４年）、 及びエイ・エル・マーボリン（Ａ、Ｌ、　Ｍａｒｇｏｌｉｎ）ら、Ｂｉｏｃｈｉ ｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ６１６巻２８３頁（１９８０年）］　、ＰＡ のエナンチオマー選択性は、アミノ酸［ディー・ロッジ（Ｄ、　Ｒｏｓｓｉ）ら 、　Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ　３３巻１５５７頁（１９７７年）及び前掲４１巻 ３５頁（１９８５年）］、アミノアルキルホスホン酸［ケイ・エイ・ソロヂンコ 　（Ｖ、Ａ、５ｏｌｏｄｅｎｋｏ）　ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４７巻３９ ８９頁　（１９９１年）コ、エステル及びアルコール［シー・ファガンティ（Ｃ ，Ｆｕｇａｎｔｉ）　ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　４４巻２ ５７５頁（１９８８年）、及びエッチ番つオルドマン（Ｈ，Ｗａｌｄｖａｎ）３ ０ｔｉ３０５７１Ｎ　（１９８９年）　］　（ＤｒＡＨニオ有利用すｈ　タ、ｌ 、ｔ、エステル結合の加水分解は通常、それほどでない光学純度の生成物を生ず る。最近、アシル化反応でのＰＡの高いエナンチオマー選択性が、新しいカルバ セファ０スポリンのロカルヘフの合成で立証された［エム・ズミジエウスキー（ Ｍ、　Ｚｍｉ　ｊｅｗｓｋｉ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　 ３２巻１６２１頁（１９９１年）］。 発明のまとめ 我々は、ＰＡの高いエナンチオマー選択性と組み合せた離脱基へのその広い基質 選択性が、光学的に純粋ないＢＡ−Ｔ阻害剤のγ−エチニルＧＡＢＡ、γ−アレ ニルＧＡＢＡ、及びγ−ビニルＧＡＢＡの合成に有用であろうと理由付けた。事 実、これは当たっていることが判明した。生ずる手順を反応経路■に概略を示す 。 反応経路Ｉ ＧＡＢＡ−Ｔ阻害剤のＰＡ−触媒された分割Ａ　・ Ｂ　。 Ｃ。 要約すると、本方法は、式】による構造の立体特異的なＧＡＢＡ−Ｔ阻害剤のラ セミ混合物を酵素的に分割するためのものである０本方法は、（Ａ）、Ｒが１１ ２Ｃ＝ＣＨ−１ＨＣミＣ−１又はＨ２Ｃ＝ＣＨ−ＨＣ＝ＣＨ−である場合の式ｌ 化合物のＮ−フェニルアセチル誘導体を調製し、Ｒが上に定義されたとおりの場 合の、式２化合物の（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーと（Ｒ） −（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーからなるラセミ混合物をつくるもの である。この手順は、ショツテン＝バウマン条件下に行なわれ、当業者に周知で ある。次に、（８）、式２化合物のラセミ混合物をペニシリンアシラーゼと接触 させて、式２化合物の（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーと式１ 化合物の（Ｒ）−エナンチオマーとをつくる０次に、（Ｃ）、式２化合物の（Ｓ ）−（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーを加水分解すると、式ｌ化合物の （Ｓ）−エナンチオマーを生ずる。この加水分解を酵素ペニシリンアシラーゼで 実施するのが好ましい。式１化合物の（Ｒ）−及び（Ｓ）−エナンチオマー類は 、この技術で周知の方法によって分離される。 発明の詳細な記載 実施例１ 典型的な実験で、ユーパージッ）　（Ｅｕｐｅｒｇｉｔ）Ｃ上に固定されたペニ シリンアシラーゼ（０，７ｇ）をＯ，１Ｍリン酸緩ｍ１ｌｌ　（ｐ）ｌ　７．８ ）　３５　ｍｌ中（７）（Ｎ−７Ｘ：、ルアセチル’）−ヒ：−ルＧＡＢＡ　（ １，０ｇ、　４　ａ＋＊ｏｌ）の溶液中に懸濁した。混合物を室温で５時間かき まぜた０次に、溶液をｐ）ｌ　２に調整し、残りの基質をＣＨ２Ｃ１２で抽出す ると、（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）−ビニルＧＡＢＡ　（有機層）及び（ Ｒ）−γ−ビニルＧＡＬＡ（水層）を生ずる。酸性条件下での（Ｓ）−（Ｎ−フ ェニルアセチル）−ビニルＧＡＢＡの化学的脱アシル化は副生物の形成をもたら すため、（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）−ビニルＧＡＢＡの悦アシル化に同 じ酵素を使用した。有効な加水分解を達成するために、より多量のユーバージッ ）　−ＰＡ　（１，５８）、より高い反応温度（４５℃）、及びより長い反応時 −（２日）を使用した０反応終了時（ＨＰＬＣ）　、ユージッ）−ＰＡを濾別し 、フェニル酢酸をＣＨ２Ｃｌ２で酸性溶液（ｐ）１２）から抽出した。（Ｒ）− 及び（Ｓ）−γ−ビニルＧＡＢＡ両方の水溶液をイオン交換クロマトグラフィ（ ダウニック２１Ｘ２−１００（ＯＨ−））に続いて凍結乾燥にかけた。γ−エチ ニルαＢＡとγ−アレニルＧＡＢＡのエナンチオマー類を同じ手順によって調製 したく表１）。 ａ）　γ−エチニルＧＡ８＾、γ−アレニルＧＡＢ＾、及びγ−ビニルＧＡＢＡ のＮ−フェニルアセチル夙導体類は、ショツテン＝バウマン条件下にｒｊ４１！ された。 ｂ）　［５］＝５０　ｍ（ｐＨ７，８：　２５℃。 Ｃ）凍結乾燥化合物類の単離収率。 ｄ）凍結乾燥化合物類のエナンチオマー過剰量は、ジェイ・ワグナ−ら、Ｃｈｒ ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　３９２巻２１＋頁（１９８７年）の手順に従って、チ ラシル（Ｃｈｉｒａｓｉ　ＩＬＶａｌカラム（クロムパック（Ｃｈｒｏｌ＋ｐａ ｃｋ）社製）を使用してガス−クロマトグラフィによって決定された。 ｅ）絶対立体配置は、本物の試料での［α］。どの直接比較によフて与えられた 。 ｆ）　Ｅｌ＋［は、（Ｒ）−エナンチオマーの収率とｅｅとから計算された［シ ー命ニス拳チェン（Ｃ，Ｓ、　Ｃｈｅｎ）ら、Ｊ、Ａｍ。 Ｃｈｅｗ、Ｓｏｃ、１０４巻７２９４頁（１９８２年）］。 ］γ−アレニル６＾Ｂとγ−ビニルＧＡＢＡの製薬上重要な（Ｓ）−エナンチオ マー類、並びにγ−ビニルＧＡＢＡの両エナンチオマー類が、良好な収率と高い 光学純度で合成されたことがわかる。この手順は、安価な市販の固定化酵素を使 用しており、このことが非常に大きな規模の場合の優れた性質をすでに証明して いることが、強調されるべきである。 国際調査報告 一ユ、。１＾−−Ｈ・　ＰＣＴ／ＵＳ　９３１０５７］７ＡＮ）−１＾ｈＪＧ　 ＡＮＮＩＥＸ　ＭＮｒＪＥＸＥ

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．式１ ▲数式、化学式、表等があります▼式１▲数式、化学式、表等があります▼式 ２〔式中、ＲはＨ２Ｃ＝ＣＨ−、ＨＣ≡Ｃ−、又はＨ２Ｃ＝ＣＨ−ＨＣ＝ＣＨ− である〕構造の化合物のラセミ混合物を酵素的に分割する方法であって、 ３）溶液中で、Ｒが上に定義されたとおりである式１の化合物のＮ−フェニルア セチル誘導体を調製し、Ｒが上に定義されたとおりである式２の化合物の（Ｓ） −（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーと（Ｒ）−（Ｎ−フェニルアセチル ）エナンチオマーとからなるラセミ混合物をつくり；ｂ）ほぼ室温で、式２化合 物のラセミ混合物をベニシリンアシラーゼと接触させて、式１化合物の（Ｒ）− エナンチオマーをつくり； ｃ）式２化合物の（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーを有機溶媒 で抽出し、それによって有機層と水層をもった溶液をつくり； ｄ）式１化合物の（Ｒ）−エナンチオマーを含有する溶液の水層を除去し； ｅ）式２化合物の（Ｓ）−（Ｎ−フェニルアセチル）エナンチオマーを加水分解 して、式１化合物の（Ｓ）−エナンチオマーをつくる； 以上の段階を含む方法。
2. ２．ＲがＨ２Ｃ＝ＣＨ−である、請求項１に記載の方法。
3. ３．ＲがＨＣ≡Ｃ−である、請求項１に記載の方法。
4. ４．ＲがＨ２Ｃ＝ＣＨ−ＨＣ＝ＣＨ−である、請求項１に記載の方法。