JPH0870871A - トリプトファンシンターゼをコードする遺伝子を含むｄｎａ断片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 コリネ型細菌染色体から得られ、ＴｒｐＢ蛋
白質をコードする遺伝子およびＴｒｐＡをコードする遺
伝子を含むＤＮＡ断片。 【効果】 本発明のＤＮＡ断片を用いてコリネ型細菌を
育種改良することにより、トリプトファンシンターゼ高
産生能を有するコリネ型細菌の取得が可能となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コリネ型細菌由来のト
リプトファンシンターゼをコードする遺伝子を含むＤＮ
Ａ断片に関する。トリプトファンシンターゼは、生体内
においてＬ−トリプトファンの生合成を触媒する酵素で
あるが、Ｌ−トリプトファンは必須アミノ酸の一つであ
り、食品、医薬および畜産分野等での需要の多い工業的
に重要なアミノ酸である。

【０００２】

【従来の技術】トリプトファンシンターゼをコードする
遺伝子は、原核生物では、エシエリヒア・コリ（Escherich
ia coli）由来の遺伝子［Nucl. Acids Res., Vol.9, p.
6647 (1981)］、バチルス・サチルス（Bacillus subtil
is）由来の遺伝子［Gene, Vol.34, p.169, (1985)］、
ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（Brevibac
t erium lactofermentum）由来の遺伝子［Nucl. Acids R
es., Vol.14, p.10113 (1986)］等が単離されている。
しかしながら、産業上重要な細菌であるブレビバクテリ
ウム・フラバム（Brev ibacterium flavum）由来のトリ
プトファンシンターゼをコードする遺伝子については、
本発明者らの知る限り報告例が無い。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、コリネ型細
菌内で発現可能な、コリネ型細菌由来のトリプトファン
シンターゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片の提供
を目的としてなされたものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ある種のコリネ型
細菌からトリプトファンシンターゼをコードする遺伝子
が単離可能なことを見い出し、本発明を完成するに至っ
た。

【０００５】かくして本発明によれば、後記配列表の配
列番号１の配列中の、アミノ酸番号１からアミノ酸番号
４１７までのアミノ酸配列で示されるＴｒｐＢ蛋白質を
コードする遺伝子およびアミノ酸番号４１８からアミノ
酸番号６９７までのアミノ酸配列で示されるＴｒｐＡ蛋
白質をコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片が提供され
る。以下に、本発明をさらに詳細に説明する。

【０００６】本発明の「トリプトファンシンターゼをコ
ードする遺伝子」とは、ＴｒｐＢ蛋白質およびＴｒｐＡ
蛋白質の２種類の蛋白質より構成され、インドールとＬ
−セリンからＬ−トリプトファンを生成する反応を触媒
する酵素であるトリプトファンシンターゼ（ＥＣ４.２.
１.２０）をコードするｔｒｐＢ遺伝子およびｔｒｐＡ
遺伝子を意味するものであり、以下これを「トリプトフ
ァンシンターゼ遺伝子」、該遺伝子を含むＤＮＡ断片を
「ｔｒｐＢＡ断片」と略称することがある。

【０００７】本発明のｔｒｐＢＡ断片は、その塩基配列
が決定された後においては合成することも可能である
が、通常は、コリネ型細菌、例えばブレビバクテリウム
・フラバム（Brevibacterium flavum）ＭＪ−２３３（F
ERM BP-1497）株等の染色体上に存在し、この染色体Ｄ
ＮＡを適当な制限酵素で切断することにより生ずる切断
断片の中から以下に述べる方法で分離、取得することが
できる。まず、上記コリネ型細菌、例えばブレビバクテ
リウム・フラバムＭＪ−２３３を常法（例えば、特開昭
５１−１３０５９２参照）に従い培養し、培養物から菌
体を集め、該菌体から染色体ＤＮＡを抽出する。染色体
ＤＮＡは、例えば、特開平5-15378号公報の実施例１の
（Ａ）項に記載の方法等により菌体から容易に抽出する
ことができる。

【０００８】この染色体ＤＮＡを適当な制限酵素、例え
ばＢｇｌIIを用いて切り出し、得られた切断ＤＮＡ断片
を適当なベクター、例えば pBluescriptII SK⁺（東洋紡
社製）へクローニングし、トリプトファンシンターゼが
欠損したトリプトファン要求性大腸菌変異株を形質転換
する。この形質転換株を適当な選択圧下で培養し、培養
物から菌体を回収し、菌体から常法、例えばアルカリ−
ＳＤＳ法によりプラスミドを抽出する。このプラスミド
を適当な制限酵素で切断し、アガロースゲル電気泳動に
より切断断片を分離および解析し、ブレビバクテリウム
・フラバムＭＪ−２３３染色体由来の挿入ＤＮＡ断片を
ゲルより抽出することにより、本発明のｔｒｐＢＡ断片
を取得することができる。

【０００９】ここで、上記トリプトファン要求性大腸菌
変異株としては、例えばエシエリヒア・コリ ATCC23718
（欠損遺伝子：ｔｒｐＢ）およびエシエリヒア・コリ A
TCC23717（欠損遺伝子：ｔｒｐＡ）等を挙げることがで
きる。また、本発明のｔｒｐＢＡ断片上のｔｒｐＢ遺伝
子およびｔｒｐＡ遺伝子の存在は、上記トリプトファン
要求性大腸菌変異株への相補試験により容易に確認する
ことができる。

【００１０】かくして得られる本発明のｔｒｐＢＡ断片
の１つとして、上記ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ
−２３３の染色体ＤＮＡを制限酵素ＢｇｌIIで切り出す
ことによって得られる大きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ断片
を挙げることができる。この大きさ約３.１ｋｂのｔｒ
ｐＢＡ断片の塩基配列は、プラスミドｐＵＣ１８または
ｐＵＣ１９等を用いるジデオキシヌクレオチド酵素法
（dideoxy chain termination 法; Sanger, F et al.,
Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 74, 5463, 1977）により
決定することができる。このようにして決定した上記大
きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ断片中の配列を後記配列表の
配列番号：１に示す。この配列中に存在するオープンリ
ーディングフレームから、ＴｒｐＢ蛋白質をコードする
遺伝子（ｔｒｐＢ遺伝子）は、配列中のアミノ酸番号１
からアミノ酸番号４１７までのアミノ酸配列をコードす
るものであり、また、ＴｒｐＡ蛋白質をコードする遺伝
子（ｔｒｐＡ遺伝子）は、配列中のアミノ酸番号４１８
からアミノ酸番号６１９までのアミノ酸配列をコードす
るものであることが明らかとなった。上記ｔｒｐＢ遺伝
子およびｔｒｐＡ遺伝子を包含してなる本発明のトリプ
トファンシンターゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断
片は、天然の細菌染色体ＤＮＡ、例えばコリネ型細菌染
色体ＤＮＡから分離されたもののみならず、通常用いら
れるＤＮＡ合成装置、例えばベックマン社製システム−
１プラス（System-1 Plus）を用いて合成されたもので
あってもよい。

【００１１】また、前記の如くブレビバクテリウム・フ
ラバムＭＪ−２３３等の細菌染色体ＤＮＡから取得され
る本発明のＤＮＡ断片は、トリプトファンシンターゼを
コードする機能を実質的に損なうことがない限り、塩基
配列の一部の塩基が他の塩基と置換されていても、削除
されていてもよく、新たに塩基が挿入されていてもよ
く、あるいは塩基配列の一部が転位されているものであ
ってもよく、さらにそれらの塩基配列にハイブリダイズ
する塩基配列であってもよく、これらの誘導体のいずれ
もが、本発明のトリプトファンシンターゼをコードする
遺伝子を含むＤＮＡ断片に包含されるものである。以上
に本発明を説明してきたが下記実施例によりさらに具体
的に説明する。しかしながら、実施例は本発明の具体的
な認識を得る一助とみなすべきものであり、本発明の範
囲を些かなりとも限定するものではないことを理解しな
ければならない。

【００１２】

【実施例】

実施例１ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３由来トリプ
トファンシンターゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片のクローン
化 （Ａ） ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３の
全ＤＮＡの抽出 ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３（FERM BP-
1497）を、半合成培地であるＡ培地［組成：尿素 ２
ｇ、(ＮＨ₄)₂ＳＯ₄ ７ｇ、Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０.５ｇ、ＫＨ₂
ＰＯ₄ ０.５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ０.５ｇ、ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂
Ｏ ６ｍｇ、ＭｎＳＯ₄・４〜６Ｈ₂Ｏ ６ｍｇ、酵母エキ
ス ２.５ｇ、カザミノ酸 ５ｇ、ビオチン２００μｇ、
塩酸チアミン ２００μｇ、グルコース ２０ｇを蒸留水
に溶解して１リットルとする］１ｌ中で対数増殖期後期
まで培養した後に菌体を回収した。得られた菌体を、リ
ゾチームを１０ mg/ml の濃度で含有する溶液［組成：
１０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ トリス緩衝液(ｐＨ８.
０)、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ］１５ｍｌに懸濁した。
該懸濁液にプロテナーゼＫを１００ μg/ml の最終濃度
で添加し、これを３７℃で１時間インキュベートした。
次に、ドデシル硫酸ナトリウムを最終濃度が０.５％と
なるように添加し、５０℃で６時間インキュベートして
溶菌させた。得られた溶菌液に等量のフェノール/クロ
ロホルム溶液を添加して室温で１０分間穏やかに振盪し
た後、その全量を１０〜１２℃で２０分間、５,０００
×ｇの遠心分離に供し、その上清画分を分取した。該上
清画分に酢酸ナトリウムをその濃度が０.３Ｍとなるよ
うに添加し、次いで２倍量のエタノールを穏やかに添加
した。水層とエタノール層の間に存在するＤＮＡをガラ
ス棒で搦め取り、これを７０％エタノールで洗浄して風
乾した。得られたＤＮＡは、溶液［組成：１０ｍＭ ト
リス緩衝液（ｐＨ７.５)、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ］
５ｍｌを加えて４℃で一晩静置した後、実験に供した。

【００１３】（Ｂ） トリプトファンシンターゼ遺伝子
を含むＤＮＡ断片の調製 上記（Ａ）項で調製した、ブレビバクテリウム・フラバ
ムの染色体ＤＮＡ ２５μｇを、制限酵素ＢｇｌII ５０
units と３０℃で１時間反応させて切断し、染色体Ｄ
ＮＡのＢｇｌII分解物溶液を調製した。この分解物溶液
に、プラスミドｐBluescriptII SK⁺（東洋紡社製）１μ
ｇを制限酵素ＢｇｌIIと３７℃で１時間反応させて得た
分解物溶液を混合し、これにそれぞれ最終濃度が ５０
ｍＭ トリス緩衝液（ｐＨ７.６)、１０ｍＭ ジチオスレ
イトール、１ｍＭ ＡＴＰ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、およ
びＴ４ＤＮＡリガーゼ １ unit となるように各成分を
添加し、１６℃で１５時間反応させて、ＤＮＡ分解物を
結合させた。

【００１４】得られた溶液を用いて常法［ M.Mandel、
A.Higa ; J. Mol. Biol., 53, 159 (1970）参照］に従
って大腸菌変異株、エシエリヒア・コリ ATCC23718（ト
リプトファンシンターゼ欠損変異株、即ちトリプトファ
ン要求性株）を形質転換し、得られた形質転換菌をアン
ピシリンを５０ μg/ml 含む選択培地［組成；Ｋ₂ＨＰ
Ｏ₄ ７ｇ、ＫＨ₂ＰＯ₄ ２ｇ、(ＮＨ₄)₂ＳＯ₄ １ｇ、Ｍ
ｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.１ｇ、グルコース ２ｇ、および
寒天 １６ｇを蒸留水に溶解して１リットルとする］に
塗抹した。選択培地上に生育した菌株を、アンピシリン
を最終濃度で５０ μg/ml 含有するＬ培地に植菌し、こ
れを３７℃で７時間培養した。培養液を４℃で１０分
間、８,０００×ｇの遠心分離にかけて菌体を回収し
た。回収した菌体からアルカリ-ＳＤＳ法[T.Maniatis,
E.F. Fritsch, J.Sambrook, Molecular cloning, p.90
〜91 (1982）参照］によりプラスミドを抽出した。該プ
ラスミドを制限酵素ＢｇｌIIで切断し、その切断断片を
アガロースゲル電気泳動に供したところ、プラスミドｐ
BluescriptII SK⁺ のＢｇｌII部位に大きさ約３.１ｋｂ
のＤＮＡ断片の挿入が認められた。

【００１５】（Ｃ） トリプトファン要求性大腸菌変異
株への相補試験 上記（Ｂ）で調製したプラスミド溶液を用いて、トリプ
トファン生合成系の各ステップを欠くトリプトファン要
求性大腸菌変異株であるエシエリヒア・コリATCC23720
（欠損遺伝子：ｔｒｐＤ)、同 ATCC23719（欠損遺伝
子：ｔｒｐＣ)、同ATCC23718（欠損遺伝子：ｔｒｐ
Ｂ)、同 ATCC23717（欠損遺伝子：ｔｒｐＡ）を形質転
換したところ、エシエリヒア・コリ ATCC23718 株およ
び同 ATCC23717 株において約１０⁵ 細胞/μｇＤＮＡの
頻度で前記選択培地上に生育する形質転換株を得た。こ
れにより、上記（Ｂ）項で調製したプラスミドの大きさ
約３.１ｋｂのＢｇｌII−ＢｇｌII ＤＮＡ断片上にｔｒ
ｐＢとｔｒｐＡよりなるトリプトファンシンターゼ遺伝
子が含まれることが確認された。

【００１６】実施例２ トリプトファンシンターゼ遺伝
子を含むＤＮＡ断片の塩基配列の決定 上記実施例１の（Ｃ）項でトリプトファンシンターゼが
含まれることが確認された大きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ
断片の塩基配列を下記操作により決定し、このＤＮＡ断
片上に存在するトリプトファンシンターゼ遺伝子の存在
部位を特定した。大きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ断片溶液
１４μｌを制限酵素Ｓａｕ３ＡＩと３７℃で１〜５分間
反応させてＤＮＡ断片を部分分解した。また、クローニ
ングベクターｐＵＣ１１８（宝酒造社製）を制限酵素Ｂ
ａｍＨＩで切断した後、脱リン酸化処理した。得られた
ベクター断片と部分分解ＤＮＡ断片とを混合し、この混
合液にそれぞれ最終濃度が５０ｍＭ トリス緩衝液（ｐ
Ｈ７.６)、１０ｍＭ ジチオスレイトール、１ｍＭ ＡＴ
Ｐ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、およびＴ４ＤＮＡリガーゼ
１ unitとなるように各成分を添加し、１６℃で１０時
間反応させて結合させた。

【００１７】上記と同様に大きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ
断片溶液 １４μｌを制限酵素ＴａｑＩ ５０ units と
５〜８分間反応させてＤＮＡ断片を部分分解した。クロ
ーニングベクターｐＵＣ１１８を制限酵素ＡｃｃＩと反
応させて切断した後に脱リン酸化処理し、これを、上記
と同様にして、部分分解ＤＮＡ断片と結合させた。

【００１８】得られたプラスミド混液を用い、塩化カル
シウム法［Journal of Molecular Biology, 53, 159 (1
970）参照］によりエシエリヒア・コリＪＭ１０９株
（宝酒造社製）を形質転換し、アンピシリン ５０ μg/
ml を含む選択培地［トリプトン １０ｇ、酵母エキス
５ｇ、塩化ナトリウム ５ｇおよび寒天 １６ｇを蒸留水
１リットルに溶解する］に塗抹した。上記培地に生育し
た菌株を常法に従い液体培養し、得られた培養液からプ
ラスミドＤＮＡを抽出した。抽出したプラスミドＤＮＡ
の塩基配列を、プラスミドｐＵＣ１１８（宝酒造社製）
を用いてジデオキシヌクレオチド酵素法［dideoxy chai
n termination method, Sanger,F.ら, Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 74, 5463 (1977) 参照］により決定し
た。

【００１９】具体的には、上記培養液より抽出したプラ
スミドＤＮＡをパーキン・エルマー社製カタリスト８０
０モレキュラー・バイオロジー・ラボステーション（CA
TALYST 800 Moleculer Biology Labostation；Prkin-El
mer）を用いてプロトコールに従い反応させた後、パー
キン・エルマー社製 ３７３Ａ ＤＮＡシーケンサーによ
り各々のプラスミドの挿入ＤＮＡ断片の塩基配列を決定
した。そして、これら個々の配列の連結は、パーキン・
エルマー社製のシーケンス解析ソフト インヘリット（I
NHERIT）を用いて行い、大きさ約３.１ｋｂのＤＮＡ断
片の全塩基配列を決定した。その配列を、後記配列表の
配列番号：１に示す。決定した塩基配列中には２つのオ
ープンリーディングフレームの存在が認められ、既知の
エシエリヒア・コリのｔｒｐＢ遺伝子およびｔｒｐＡ遺
伝子との相同性の比較により、それらがブレビバクテリ
ウム・フラバムＭＪ−２３３のｔｒｐＢ遺伝子（塩基番
号８８９〜２１３９）およびｔｒｐＡ遺伝子（塩基番号
２１３９〜２９７８）であることが判明した。

【００２０】

【発明の効果】本発明により提供されるトリプトファン
シンターゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を用い
てコリネ型細菌を育種改良することにより、トリプトフ
ァンシンターゼ高産生能を有するコリネ型細菌の取得が
可能となる。

【００２１】

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：３１１８ 鎖の数：二本鎖 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源： 生物名：ブレビバクテリウム・フラバム（Brevibacteri
um flavum） 株名：ＭＪ−２３３ 配列の特徴： 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：８８９−２１４２ 特徴を決定した方法：Ｅ 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：２１３９−２９８１ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 AGATCTTTGG CGTCAACCAC CGCAACCTGC ATGATCTGTC CATTGATTTG GATCGTTCAC 60 GTCGCCTGTC CAAGCTCATT CCAGCAGATG CCGTGCTCGT GTCTGAGTCT GGCGTGCGCG 120 ATACCGAAAC CGTCCGCCAG CTAGGTGGGC ACTCCAATGC ATTCCTCGTT GGCTCCCAGC 180 TGACCAGCCA GGAAAACGTC GATCTGGCAG CCCGCGAATT GGTCTACGGC CCCAACAAAG 240 TCTGCGGACT CACCTCACCA AGTGCAGCAC AAACCGCTCG CGCAGCGGGT GCGGTCTACG 300 GCGGGCTCAT CTTCGAAGAG GCATCACCAC GCAATGTTTC ACGTGAAACA TCGCAAAAAA 360 TCATCGCCGC AGAGCCCAAC CTGCGCTACG TCGCGGTCAG CCGTCGCACC TCCGGGTACA 420 AGGATTTGCT TGTCGACGGC ATCTTCGCCG TACAAATCCA CGCCCCACTG CAGGGCAGCG 480 TCGAAGCAGA AAAGGCATTG ATCGCCGCCG TTCGTGAAGA GGTTGGACCG CAGGTCCAGG 540 TCTGGCGCGC GATCTCGATG TCCAGCCCCT TGGGGGCTGA AGTGGCAGCT GCGGTGGAGG 600 GTGACGTCGA TAAGCTAATT CTTGATGCCC ATGAAGGTGG CAGCGGGGAA GTATTCGACT 660 GGGCTACGGT GCCAGCCGCT GTGAAGGCAA AGTCTTTGCT CGCGGGAGGC ATCTCTCCGG 720 ACAACGCTGC GCAGGCACTC GCTGTGGGCT GCGCAGGTTT GGACATCAAC TCTGGCGTGG 780 AATACCCCGC CGGTGCAGGC ACGTGGGCTG GGGCGAAAGA CGCCGGCGCG CTGCTGAAAA 840 TTTTCGCAAC CATCTCCACA TTCCACTACT AAAGGTTTAA ATAGGATC ATG ACT GAA 897 Met Thr Glu 1 AAA GAA AAC TTG GGT GGC TCC ACG CTG CTG CCT GCA TAC TTC GGT GAA 945 Lys Glu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Leu Leu Pro Ala Tyr Phe Gly Glu 5 10 15 TTC GgC GGC CAG TTC GTC GCG GAA TCC CTC CTG CCT GCT CTC GAC CAG 993 Phe Gly Gly Gln Phe Val Ala Glu Ser Leu Leu Pro Ala Leu Asp Gln 20 25 30 35 CTG gAG AAG GCC TTC GTT GAC GCG ACC AAC AGC CCA GAG TTC CGC GAA 1041 Leu Glu Lys Ala Phe Val Asp Ala Thr Asn Ser Pro Glu Phe Arg Glu 40 45 50 GAA CTc GGC GGC TAC CTC CGC gAT TAC CTC GGC CGC CCA ACC CCG CTG 1089 Glu Leu Gly Gly Tyr Leu Arg Asp Tyr Leu Gly Arg Pro Thr Pro Leu 55 60 65 ACC GAA TGC TCC AAC CTG CCA CTC TCA GGC GAA GGC AAA GGC TTT GCG 1137 Thr Glu Cys Ser Asn Leu Pro Leu Ser Gly Glu Gly Lys Gly Phe Ala 70 75 80 CGG aTC TTC CTC AAG CGC GAA GAC CTC GTC CAC GGC GGT GCA CAC AAA 1185 Arg Ile Phe Leu Lys Arg Glu Asp Leu Val His Gly Gly Ala His Lys 85 90 95 ACT AAC CAG GTG ATC GGC CAG GTG CTG CTT GCC AAG CGC ATG GGC AAA 1233 Thr Asn Gln Val Ile Gly Gln Val Leu Leu Ala Lys Arg Met Gly Lys 100 105 110 115 ACC CGC ATC ATC GCA GAG ACC GGC GcA GGC CAG CAC GGC ACC GCC ACC 1281 Thr Arg Ile Ile Ala Glu Thr Gly Ala Gly Gln His Gly Thr Ala Thr 120 125 130 GcT CTC GCA TGT GCG CTC ATG GGC CTC GAG TGC GTT GTC TAC ATG GGC 1329 Ala Leu Ala Cys Ala Leu Met Gly Leu Glu Cys Val Val Tyr Met Gly 135 140 145 GCC AAG GAC GTT GCC CGC CAG CAG CCC AAC GTC TAC CGC ATG CAG CTG 1377 Ala Lys Asp Val Ala Arg Gln Gln Pro Asn Val Tyr Arg Met Gln Leu 150 155 160 CAC GGC GCG AAG GTC ATC CCC GTG GAA TcT GGT TCC GGC ACC CTG AAG 1425 His Gly Ala Lys Val Ile Pro Val Glu Ser Gly Ser Gly Thr Leu Lys 165 170 175 GAC GCC GTG AAT GAA GCG CTG CGC GAT TGG ACC GCA ACC TTC CAC GAG 1473 Asp Ala Val Asn Glu Ala Leu Arg Asp Trp Thr Ala Thr Phe His Glu 180 185 190 195 TCC CAC TAC CTT CTC GGC ACC GCC GCC GGC CCG CAT CCA TTC CCA ACC 1521 Ser His Tyr Leu Leu Gly Thr Ala Ala Gly Pro His Pro Phe Pro Thr 200 205 210 ATc GTG CGT GAA TTC CAC AAG GTG ATC TCT GaG GAA GCC AAG GCA CAG 1569 Ile Val Arg Glu Phe His Lys Val Ile Ser Glu Glu Ala Lys Ala Gln 215 220 225 ATG CTA GAG CGC ACC GGC AAG CTT CCC GAC GTT GTG GTC GCC TGT GTC 1617 Met Leu Glu Arg Thr Gly Lys Leu Pro Asp Val Val Val Ala Cys Val 230 235 240 GGT GGT GGC TCC AAC GCC ATC GGC ATG TTC GCA GAC TTC ATT GAC GAT 1665 Gly Gly Gly Ser Asn Ala Ile Gly Met Phe Ala Asp Phe Ile Asp Asp 245 250 255 GAA GgC GTA GAG CTC GTC GGC GCT GAG CCA GCC GGT GAA GGC CTC GAC 1713 Glu Gly Val Glu Leu Val Gly Ala Glu Pro Ala Gly Glu Gly Leu Asp 260 265 270 275 TCC GGC AAG CAC GGC GCA ACC ATC ACC AAC GGT CAG ATC GGC ATC CTA 1761 Ser Gly Lys His Gly Ala Thr Ile Thr Asn Gly Gln Ile Gly Ile Leu 280 285 290 CAC GGC ACC CGT TCC TAC CTG ATG CGC AAC TCC GAC GGC CAA GTG GAA 1809 His Gly Thr Arg Ser Tyr Leu Met Arg Asn Ser Asp Gly Gln Val Glu 295 300 305 GAG TCC TAC TCC ATC TCC GCC GGA CTT GAT TAC CCA GGC GTC GGC CCA 1857 Glu Ser Tyr Ser Ile Ser Ala Gly Leu Asp Tyr Pro Gly Val Gly Pro 310 315 320 CAG CAC GCA CAC CTG CAC GCC ACC GGC CGC GCC ACC TAC GTT GGT ATC 1905 Gln His Ala His Leu His Ala Thr Gly Arg Ala Thr Tyr Val Gly Ile 325 330 335 ACC GAC GCC GAA GCC CTC CAA GCA TTC CAG TAT CTC GCC CGC TAC GAA 1953 Thr Asp Ala Glu Ala Leu Gln Ala Phe Gln Tyr Leu Ala Arg Tyr Glu 340 345 350 355 GGC ATC ATC CCC GCA CTG GAA TCC TCA CAC GCA TTC GCC TAC GCA CTC 2001 Gly Ile Ile Pro Ala Leu Glu Ser Ser His Ala Phe Ala Tyr Ala Leu 360 365 370 AAG CGC GCC AAG ACC GCC GAA GAG GAA GGC CAG AAC TTA ACC ATC CTC 2049 Lys Arg Ala Lys Thr Ala Glu Glu Glu Gly Gln Asn Leu Thr Ile Leu 375 380 385 GTC TCC CTA TCC GGC CGT GGC GAC AAG GAC GTT GAC CAC GTG CGC CGC 2097 Val Ser Leu Ser Gly Arg Gly Asp Lys Asp Val Asp His Val Arg Arg 390 395 400 ACC CTC GAA GAA AAT CCA GAA CTG ATC CTG AAG GAC AAC CGATG AGC CGT 2147 Thr Leu Glu Glu Asn Pro Glu Leu Ile Leu Lys Asp Asn Arg 405 410 415 Met Ser Arg 418 420 TAC GAC GAT CTT TTT GCA CGC cTC GAC ACG GCA GGG GAG GGC GCC TTT 2195 Tyr Asp Asp Leu Phe Ala Arg Leu Asp Thr Ala Gly Glu Gly Ala Phe 425 430 435 GTT CCC TTC ATC ATG CTG AGC GAC CCT TCA CCA GAG GAG GCT TTC CAG 2243 Val Pro Phe Ile Met Leu Ser Asp Pro Ser Pro Glu Glu Ala Phe Gln 440 445 450 ATC ATC TCC ACA GCA ATC GAA GCT GGC GcA GAT GCA CTG GAA CTT GGC 2291 Ile Ile Ser Thr Ala Ile Glu Ala Gly Ala Asp Ala Leu Glu Leu Gly 455 460 465 GTA CCT TTC TCC GAC CCA GTT GCC GAT GGC CCC ACC GTC GCG GAA TCC 2339 Val Pro Phe Ser Asp Pro Val Ala Asp Gly Pro Thr Val Ala Glu Ser 470 475 480 CAC CTC CGC GCA CTC GAC GGC GGC GCC ACC GTA GAC AGC GCA CTC GAG 2387 His Leu Arg Ala Leu Asp Gly Gly Ala Thr Val Asp Ser Ala Leu Glu 485 490 495 500 CAG ATC AAG CGC GTG CGC GCA GCC TAC CCA GAG GTT CCC ATC GGA ATG 2435 Gln Ile Lys Arg Val Arg Ala Ala Tyr Pro Glu Val Pro Ile Gly Met 505 510 515 CTC ATC TAC GGC AAC GTT CCT TTC ACC CGT GGC TTG GAT CGC TTC TAC 2483 Leu Ile Tyr Gly Asn Val Pro Phe Thr Arg Gly Leu Asp Arg Phe Tyr 520 525 530 CAA GAG TTC GCT GAA GCT GGC GCA GAC TCC ATC CTC CTG CCA GAC GTC 2531 Gln Glu Phe Ala Glu Ala Gly Ala Asp Ser Ile Leu Leu Pro Asp Val 535 540 545 CCA GTC CGC GAA GGC GCA CCG TTT TCT GCA GCA GCT GCA GCA GCC GGA 2579 Pro Val Arg Glu Gly Ala Pro Phe Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly 550 555 560 ATT GAT CCC ATT TAC ATC GCT CCG GCC AAC GCC AGC GAG AAA ACC CTC 2627 Ile Asp Pro Ile Tyr Ile Ala Pro Ala Asn Ala Ser Glu Lys Thr Leu 565 570 575 580 GAG GGT GTC TCC GCC GCA TCA AAG GGC TAC ATC TAC GCC ATC TCC CGC 2675 Glu Gly Val Ser Ala Ala Ser Lys Gly Tyr Ile Tyr Ala Ile Ser Arg 585 590 595 GAC GGC GTC ACC GGC ACC GAA CGT GAA TCA TCC ACC GAC GGC CTG TCC 2723 Asp Gly Val Thr Gly Thr Glu Arg Glu Ser Ser Thr Asp Gly Leu Ser 600 605 610 GCA GTG GTG GAC AAT ATC AAg AAA TTT GAT GGC GCA CCC ATC TTC TTG 2771 Ala Val Val Asp Asn Ile Lys Lys Phe Asp Gly Ala Pro Ile Phe Leu 615 620 625 GGC TTC GGC ATC TCA TCC CCT CAG CAC GTG GCA GAC GCG ATT GCA GCG 2819 Gly Phe Gly Ile Ser Ser Pro Gln His Val Ala Asp Ala Ile Ala Ala 630 635 640 GGT GCT TCC GGT gCG ATC ACG GGT TCC GCG ATC ACC AAG ATC ATT GCT 2867 Gly Ala Ser Gly Ala Ile Thr Gly Ser Ala Ile Thr Lys Ile Ile Ala 645 650 655 660 TCC CAC TGC GAA GGT GAG CAC CCG AAC CCG TCC ACC ATT CGA GAT ATG 2915 Ser His Cys Glu Gly Glu His Pro Asn Pro Ser Thr Ile Arg Asp Met 665 670 675 GAC GGT TTG AAG AAG GAT CTC ACT GAG TTC ATC TCT GCG ATG AAG GCA 2963 Asp Gly Leu Lys Lys Asp Leu Thr Glu Phe Ile Ser Ala Met Lys Ala 680 685 690 GCG ACC AAG AAG GTT TAGGCCTTTA AATGTGGCAA TGTTTCACGT GAAACATTCT 3018 Ala Thr Lys Lys Val 695 GAGAGAATGT AGAAACATCA AAGAAGCCGC CTCCTAGCTC TCGGGCTGGG AGGCGGCTTC 3078 TTTGTTTGCG GTTTAGGAAA TCTCAGGGTT TTGGAGATCT 3118

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｎ 9/88 Ｃ１２Ｒ 1:13） Ｃ１２Ｒ 1:13） (72)発明者 湯川 英明 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社筑波総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１の配列中の、アミノ
   酸番号１からアミノ酸番号４１７までのアミノ酸配列で
   示されるＴｒｐＢ蛋白質をコードする遺伝子およびアミ
   ノ酸番号４１８からアミノ酸番号６９７までのアミノ酸
   配列で示されるＴｒｐＡ蛋白質をコードする遺伝子を含
   むＤＮＡ断片。