JPH09176010A - Ｈｓｐ６０ファミリーに属するタンパク質のフラボノイド含有合成抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 分子量５７キロダルトンから６８キロダルト
ンまでの間の熱ショックタンパク質（ＨＳＰ６０ファミ
リー）の合成抑制剤を提供する。 【解決手段】 フラボノイドを有効成分として含有す
る。 【効果】 ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質が
発症に関与する自己免疫疾患（例えば、Ｉ型糖尿病や慢
性関節リウマチなど）の患者の生理学的状態を有効に改
善させ、前記病気を効果的に治療することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、フラボノイドを有
効成分として含有する、分子量が５７キロダルトン（ｋ
Ｄ）から６８ｋＤまでの間の熱ショックタンパク質群
（以下、ＨＳＰ６０ファミリーと称する）に属するタン
パク質の合成抑制剤に関する。本発明によるＨＳＰ６０
ファミリーに属するタンパク質の合成抑制剤は、特に、
ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質の組織内合成
を抑制することにより、ＨＳＰ６０ファミリーに属する
タンパク質が発症に関与するものと考えられている自己
免疫疾患、例えばＩ型糖尿病、慢性関節リウマチなどの
病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、Ｉ型糖尿
病や慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患を効果的に治
療することができる。

【０００２】

【従来の技術】近年、自己免疫疾患が大きな問題となっ
ている。自己免疫疾患とは、本来ならば自己の身体を構
成する成分に対しては攻撃しないはずの免疫系が、自己
の組織と反応して破壊してしまう病気であり、例えば、
Ｉ型糖尿病や慢性関節リウマチなどが含まれる。例え
ば、近年わが国では、経済・社会・文化の発達と、生活
水準の向上や生活様式の変化に伴って、糖尿病患者は著
しく増加し、病態も重症化、複雑化してきた。糖尿病学
の進歩によって、患者の予後は改善したとはいえ、特有
な網膜症、腎症及び神経障害が多発し、加えて動脈硬化
も促進され、健康と社会活動に多大な支障をきたしてい
る。糖尿病のうち、Ｉ型糖尿病（インスリン依存性糖尿
病；insulin-dependent diabetes mellitus ；ＩＤＤ
Ｍ）の発生率は、多くの国でこの数十年間に数倍に増加
し、現在生きているヒトの１％は７０才になるまでにＩ
型糖尿病に罹病するものと予想されている。

【０００３】Ｉ型糖尿病は、インスリン産生細胞である
膵臓ランゲルハンス島のβ細胞だけが自己免疫的に破壊
されるためにインスリン欠乏状態となる疾患で、臓器特
異的な自己免疫疾患である（Atkinson, M. A. et al.:
"Sci. Am.", 263 : 42-49, 1990; Todd JA.: "Immunol.
Today", 11: 122-129, 1990)。Ｉ型糖尿病をおこす自
己免疫過程は、非常に厳密に膵臓だけに限られており、
しばしば大人になる前に発症してくることが多い。Ｉ型
糖尿病が臨床的に発症するときには、膵島の炎症（膵島
炎）があり、インスリンを産生しているβ細胞の大半が
特異的に失われる（Atkinson, M. A., et al.: "Sci. A
m.", 263 : 62-67, 1990)。糖尿病の臨床症状は、β細
胞の大部分（おそらく９０％以上）が再生できない程度
にまで破壊された後に初めて現れ、患者の生存はインス
リンの外的供給に依存することになる。即ち、臨床診断
によって発見することができる時期には、この自己免疫
反応が既に不可逆的な損傷を与えており、しかもその多
くは顕著な自覚症状を示さない等、Ｉ型糖尿病は多くの
問題を含んでいる。

【０００４】また、慢性関節リウマチは、関節滑膜を病
変の主座とする慢性炎症性疾患である。病変部位はとき
として関節滑膜のみにとどまらず、全身に及ぶこともま
れではない。関節滑膜に初発した炎症は、やがて滑膜増
殖、更に軟骨及び骨の破壊を起こし、関節組織の破壊が
引き起こされる。その結果、患者は社会的にも家庭的に
も著しく制限を受けるのみならず、経済的負担も無視で
きないものとなる。慢性関節リウマチの患者数は人口の
０．１〜０．３％とされる。これは慢性関節リウマチの
確診例であって、疑診例などや慢性関節リウマチの周辺
疾患を含めると患者数はその１０倍前後にも増えるもの
と思われる。

【０００５】一方、熱ショックタンパク質（heat shock
protein；ＨＳＰ、ストレスタンパク質ともいう）は、
細胞を何らかのストレス、例えば熱、重金属、薬剤、ア
ミノ酸類似体、又は低酸素（低濃度酸素）などで刺激す
ることにより、細胞に発現される一群のタンパク質であ
る。熱ショックタンパク質は、自然界に普遍的に存在し
ており、細菌、酵母、植物、昆虫、及びヒトを含む高等
動物により産生される。

【０００６】ＨＳＰは、その種類は多種多様であるが、
分子量の大きさからＨＳＰ９０ファミリー（例えば、９
０ｋＤ又は１１０ｋＤのＨＳＰなど）、ＨＳＰ７０ファ
ミリー（例えば、７０〜７３ｋＤのＨＳＰなど）、ＨＳ
Ｐ６０ファミリー（例えば、５７〜６８ｋＤのＨＳＰな
ど）、低分子ＨＳＰファミリー（例えば、２０ｋＤ、２
５〜２８ｋＤ、又は４７ｋＤのＨＳＰなど）の４ファミ
リーに大別することができる。なお、本明細書において
は、特定分子量を有するＨＳＰを、ＨＳＰとその直後に
記載する数字とによって示すものとし、例えば、分子量
６０ｋＤのＨＳＰを『ＨＳＰ６０』と称するものとす
る。以上のように、ＨＳＰには多くの種類が存在する
が、これらは分子量だけでなく、構造、機能、又は性質
などもそれぞれ異なるものである。ストレスへの応答に
加えて、これらのタンパク質の中には構成的に合成され
るものがあり、正常な環境の下で、タンパク質のフォー
ルディング、アンフォールディング、タンパク質サブユ
ニットの会合、タンパク質の膜輸送のような、必須の生
理的な役割を演じていることが示されている。熱ショッ
クタンパク質としてのこれらの機能は、分子シャペロン
と称される。

【０００７】自己免疫疾患の病因に関して注目されてい
ることのひとつに、分子相同性（molecular mimicry)が
ある。すなわち、自己抗原が微生物などの外来抗原と共
通抗原性をもっている場合、微生物感染によって生成さ
れる抗体や感作リンパ球が交叉反応によって自己の組織
を攻撃してしまう結果、自己免疫疾患が発症するものと
考えられている（Atkinson, M. A. et al.: "Sci. A
m.", 263 : 42-49, 1990;Shinha, A. A. et al.: "Scie
nce", 248 : 1380-1388, 1990)。例えば、細菌のＨＳＰ
６０ファミリーに属するタンパク質は、結核、らい病、
梅毒、在郷軍人病、又はライム病などの主たる抗原であ
り（Young, R. A. et al.: "Cell", 59:5-8, 1989)、
かつ、細菌のＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質
は強い免疫原性を有し、及び自己の（宿主であるヒト
の）タンパク質との分子相同性を有するために、感染症
がトリガーとなった分子相同性による自己免疫疾患が発
症するものと考えられている。

【０００８】例えば、糖尿病の患者やその家族の血中に
検出される６４ｋＤタンパク質と反応する抗体（６４ｋ
Ｄ自己抗体）はβ細胞特異的であるし、また糖尿病と診
断される直前によく出現しやすい。すなわち、Ｉ型糖尿
病において発症の原因と考えられている膵島細胞抗原
は、分子量６４ｋＤの糖タンパク質（Baekkeskov, S. e
t al.: "Nature", 298 : 167-169, 1982)である。６４
ｋＤタンパク質に対する抗体はヒトの糖尿病のみならず
（Atkinson, M. A. et al.: "Lancet", 335 : 1357-136
0, 1990)、ＢＢラット（Baekkeskov, S. et al.: "Scie
nce", 224 : 1348-1350, 1984)やＮＯＤマウス（Atkins
on, M. A. et al.: "Diabetes", 37: 1587-1590, 1988)
などのように、自然にＩ型糖尿病を発症し、ヒトのＩ型
糖尿病の多くの特徴を示す、Ｉ型糖尿病のモデル動物に
おいても検出される。Ｉ型糖尿病における膵臓β細胞の
６４ｋＤタンパク質は、サイトカインや熱刺激で誘導さ
れるので、熱ショックタンパク質である可能性がある。

【０００９】Ｉ型糖尿病のモデル動物であるＮＯＤマウ
スにおける膵臓ランゲルハンス島β細胞の６４ｋＤタン
パク質は、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）のＨ
ＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質に対する抗体と
免疫学的に交叉反応性を示す自己抗原であることが示さ
れている。このように、ＨＳＰ６０ファミリーに属する
タンパク質と６４ｋＤタンパク質自己抗原との間に免疫
学的交叉が観察されることにより、膵臓β細胞の６４ｋ
Ｄタンパク質がＨＳＰ６０ファミリーの一員である可能
性があり、ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質の
エピトープと交叉する自己免疫の機序が、Ｉ型糖尿病の
発症に関与することが示唆されている。また、結核菌の
ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質に特異性を有
するＴリンパ球のクローンを移入すると、幼若ＮＯＤマ
ウスにランゲルハンス島炎と高血糖を引き起こす。ま
た、結核菌のＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質
を免疫原性のある投与方法、すなわちアジュバントとと
もにＮＯＤマウスに注射すると、糖尿病を早期に発症さ
せ得る（Elias, D. et al.: "Proc. Natl. Acad. Sci.
USA", 87: 1576-1580, 1990)。マイコバクテリアのＨＳ
Ｐ６０ファミリーに属するタンパク質に対する動物の免
疫反応がＩ型糖尿病を引き起こすというこれらの事実
は、マイコバクテリアのＨＳＰ６０ファミリーに属する
タンパク質に対する抗体と交叉反応する抗原に対する免
疫系による攻撃が、β細胞に障害を与えることを示して
いる。

【００１０】また、ＨＳＰ６０ファミリーに属するタン
パク質は、慢性関節リウマチの動物モデルであるラット
のアジュバント関節炎や、ヒトのリウマチ関節炎に関連
していることが知られている。例えば、慢性関節リウマ
チの場合、細菌の菌体タンパク質である熱ショックタン
パク質のなかでもＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパ
ク質は、関節軟骨に存在するプロテオグリカンと分子相
同性をもっていることが明らかとなっている。ラットの
アジュバント関節炎ではＨＳＰ６０ファミリーに属する
タンパク質反応性Ｔリンパ球の関与が示されている（"C
urr. Top. Microbiol. Immunol.", 145 : 27-83, 198
9)。この疾患は、放射線照射を受けた免疫学的に無防備
の（ｎａｔｉｖｅ）ラットに、結核菌のＨＳＰ６０ファ
ミリーに属するタンパク質に対して反応性のＴリンパ球
のクローンを移入することにより、前記ラットに移すこ
とができることが見出された（"Science", 219 : 56-5
8, 1983; "Nature", 331: 171-173, 1988)。このＴリ
ンパ球は同時に関節のプロテオグリカンとも交叉反応性
を示す（"Proc. Natl. Acad. Sci. USA", 82: 5117-512
0, 1985)。このＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク
質で誘導される調節性Ｔリンパ球は、溶連菌やプリステ
インによる関節炎でも認められている。従って、アジュ
バント関節炎は、抗ＨＳＰ６０ファミリーに属するタン
パク質Ｔリンパ球により引き起こされる自己免疫疾患の
ようである。また、ヒトの若年性関節リウマチでもＨＳ
Ｐ６０ファミリーに属するタンパク質反応性Ｔリンパ球
の関与が考えられている。

【００１１】また、慢性関節リウマチの患者の滑液中か
らマイコバクテリア由来のＨＳＰ６０ファミリーに属す
るタンパク質に対して、特異的に反応するＴリンパ球が
取り出されている（"Lancet", II: 478-480, 1988; "Na
ture", 339 : 226, 1989; "Annu. Rev. Immunol.", 1
1: 637, 1993)。このように、マイコバクテリアのＨＳ
Ｐ６０ファミリーに属するタンパク質と交叉反応性を示
すタンパク質が高濃度に慢性関節リウマチの軟骨／パン
ヌス接合部に認められるのに対し、正常な組織や他の疾
患による慢性の炎症を呈する組織においては認められな
い（"Scand. J. Immunol.", 31: 283-288, 1990)。更
に、ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質に対する
抗体がヒト及びラットの慢性関節リウマチで検出される
（Kaufmann,S. H. E., et al.: "Immunol. Today", 11:
129-136, 1990)ことからも、慢性関節リウマチの病因
がマイコバクテリアのＨＳＰ６０ファミリーに属するタ
ンパク質と構造の類似した自己抗原に対する自己免疫で
あるという可能性がある。従ってＨＳＰ６０ファミリー
に属するタンパク質に対する免疫応答の存在はラット及
びヒトの両方の関節炎に関連している。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記事
情に鑑み、Ｉ型糖尿病や慢性関節リウマチなどの自己免
疫疾患の患者の生理学的状態を有効に改善することがで
き、それらの自己免疫疾患を効果的に治療することので
きる方法を開発するために、ＨＳＰ６０ファミリーに属
するタンパク質に対して合成抑制作用を示す化合物に関
して種々検討を重ねてきた。その結果、本発明者らは、
意外にも、フラボノイドが、病態を示す組織の細胞にお
けるＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質の合成を
特異的に抑制することを見出した。すなわち、フラボノ
イドを投与することにより、細胞内でのＨＳＰ６０ファ
ミリーに属するタンパク質の合成が抑制され、従って、
Ｉ型糖尿病や慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患の治
療が可能であることを見出したのである。本発明はこう
した知見に基づくものであり、Ｉ型糖尿病や慢性関節リ
ウマチなどの自己免疫疾患を効果的に治療することので
きる、ＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質の合成
抑制剤を提供することを目的とする。

【００１３】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、フラ
ボノイドを有効成分として含有することを特徴とする、
分子量５７キロダルトンから６８キロダルトンまでの間
の熱ショックタンパク質（すなわち、ＨＳＰ６０ファミ
リーに属するタンパク質）の合成抑制剤に関する。本明
細書において、「ＨＳＰ６０ファミリー」とは、前記の
とおり、分子量が５７ｋＤ〜６８ｋＤの熱ショックタン
パク質群を意味する。また、ＨＳＰ６０ファミリーに属
するタンパク質としては、例えば、ＨＳＰ６０（すなわ
ち、分子量６０ｋＤの熱ショックタンパク質）、ＨＳＰ
５８（すなわち、分子量５８ｋＤの熱ショックタンパク
質）、ＨＳＰ６５（すなわち、分子量６５ｋＤの熱ショ
ックタンパク質）、又はＧｒｏＥＬ（すなわち、原核生
物、例えば、大腸菌などの分子量約６４ｋＤの熱ショッ
クタンパク質）などを挙げることができる。

【００１４】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の合成抑制剤の有効成分として含有される
フラボノイドは、特に限定されず、公知のフラボノイド
を用いることができる。本発明の合成抑制剤において用
いられるフラボノイドとしては、例えば、カルコン類、
フラバノン類、フラボン類、フラボノール類、フラバノ
ノール類、フラバノール類（カテキン類）、イソフラボ
ン類、又はアントシアン類等を挙げることができる。フ
ラボノイドは、単独で用いることもできるし、あるい
は、異なる複数のフラボノイドを組み合わせて同時に用
いることもできる。カルコン類としては、イソオカニン
（Isookanin)、イソカルタミン（Isocarthamin）、イソ
サリプルピン（Isosalipurpin)、イソブトリン（Isobut
rin)、イソリキリチン（Isoliquiritin)、オカニン（Ok
anin）、カルコン（Chalcone）、カルタミン（Carthami
n)、コレオプシン（Coreopsin)、スチロプシジン（Stil
lopsidin）、ネオサクラニン（Neosakuranin）、ブテイ
ン（Butein）、ペジシン（Pedicin)、ペジセリン（Pedi
cellin）、マレイン（Marein）、ランセオリン（Lanceo
lin)、又はランセオレチン（Lanceoletin)等が例示され
る。

【００１５】フラバノン類としては、アルピネチン（Al
pinetin)、イソカルタミジン（Isocarthamidin）、イソ
サクラニン（Isosakuranin）、イソサクラネチン（Isos
akuranetin）、イソペジシン（Isopedicin）、エリオジ
クチオール（Eriodictyol)、カルタミジン（Carthamidi
n)、クリプトストロビン（Cryptostrobin)、サクラニン
（Sakuranin)、サクラネチン（Sakuranetin)、サリプル
ピン（Salipurpin）、ジヒドロオーゴニン（Dihydrowog
onin）、シルトミネチン（Cyrtominetin）、ストロボピ
ニン（Strobopinin)、ナリンギン（Naringin）、ナリン
ゲニン（Naringenin）、ネオカルタミン（Neocarthami
n）、ネオヘスペリジン（Neohesperidin)、ピノストロ
ビン（Pinostrobin)、ピノセンブリン（Pinocembrin)、
ファルレロール（Farrerol）、ブチン（Butin)、ブトリ
ン（Butrin）、フラバノオカニン（Flavanookanin)、フ
ラバノマレイン（Flavanomarein)、フラバノランセオレ
チン（Flavanolanceoletin）、フラバノン（Flavanon
e)、プルニン（Prunin）、ヘスペリジン（Hesperidi
n）、ヘスペレチン（Hesperetin）、ベレクンジン（Ver
ecundin）、ホモエリオジクチオール（Homoeriodictyo
l)、ポンシリン（Poncirin）、マットイシノール（Matt
eucinol)、リキリチゲニン（Liquiritigenin）、又はリ
キリチン（Liquiritin）等が例示される。

【００１６】フラボン類としては、アカシイン（Acacii
n)、アカセチン（Acacetin）、アピイン（Apiin)、アピ
ゲニン（Apigenin）、オーゴニン（Wogonin)、オロキシ
リン−Ａ（Oroxylin-A）、ガルテオリン（Galuteoli
n）、クリシン（Chrysin)、クリソエリオール（Chrysoe
riol)、グルコルテオリン（Glucoluteolin)、ゲンカニ
ン（Genkwanin)、コスモシイン（Cosmosiin)、ジオスミ
ン（Diosmin)、ジオスメチン（Diosmetin)、スクテラリ
ン（Scutellarin)、スクテラレイン（Scutellarein）、
ストロボクリシン（Strobochrysin)、テクトクリシン
（Tectochrysin）、トリシン（Tricin）、トリンギン
（Toringin）、ノビレチン（Nobiletin)、バイカリン
（Baicalin）、バイカレイン（Baicalein)、フラボン
（Flavone)、プリメチン（Primetin）、ペクトリナリゲ
ニン（Pectolinarigenin）、ペクトリナリン（Pectolin
arin）、ペダリイン（Pedaliin）、ペダリチン（Pedali
tin)、ポンカネチン（Ponkanetin）、リナリン（Linari
n)、ルテオリン（Luteolin）、ロイホリン（Rhoifoli
n)、ロツシン（Lotusin)、又はロトフラビン（Lotoflav
in）等が例示される。

【００１７】フラボノール類としては、アザレアチン
（Azaleatin)、アザレイン（Azalein)、アストラガリン
（Astragalin）、アビクラリン（Avicularin）、アフゼ
リン（Afzelin)、アヤニン（Ayanin）、イカリイン（Ic
ariin)、イカリチン（Icaritin）、イザルピニン（Izal
pinin)、イソケルシトリン（Isoquercitrin)、イソラム
ネチン（Isorhamnetin）、エリアンチン（Erianthin)、
オーラネチン（Auranetin)、カヌギン（Kanugin)、ガラ
ンギン（Galangin）、カランジン（Karanjin）、ガルデ
ニン（Gardenin）、カンナビスシトリン（Cannabiscitr
in）、キサントラムニン（Xanthorhamnin)、クリソスプ
レネチン（Chrysosplenetin)、ケルシツロン（Quercitu
ron)、ケルシトリン（Quercitrin）、ケルシメリトリン
（Quercimeritrin）、ケルセタギトリン（Quercetagitr
in）、ケルセタゲチン（Quercetagetin)、ケルセチン
（Quercetin)、ケヤキニン（Keyakinin)、ケンフェリド
（Kaempferid）、ケンフェリトリン（Kaempferitrin)、
ケンフェロール（Kaempferol）、ゴッシピトリン（Goss
ypitrin)、ゴッシピン（Gossypin）、ゴッシペチン（Go
ssypetin）、スピレオシド（Spiraeoside)、ダチスセチ
ン（Datiscetin）、タプシン（Thapsin)、タンゲリチン
（Tangeritin）、タンブリン（Tambulin）、タンブレチ
ン（Tambuletin）、テルナチン（Ternatin）、トリホリ
ン（Trifolin）、ナルシッシン（Narcissin)、ノルイカ
リイン（Noricariin）、ノルイカリチン（Noricariti
n)、パツレチン（Patuletin)、ヒビスシトリン（Hibisc
itrin)、ヒビスセチン（Hibiscetin）、ヒペリン（Hype
rin)、フィセチン（Fisetin)、フラボノール（Flavono
l）、ペルシカリン（Persicarin）、ヘルバシトリン（H
erbacitrin)、ヘルバセチン（Herbacetin）、ミケリア
ニン（Miquelianin)、ミリシトリン（Myricitrin）、ミ
リセチン（Myricetin)、メラチン（Meratin)、メリシン
プリン（Melisimplin)、メリシンプレキシン（Melisimp
lexin)、メリテルナチン（Meliternatin）、メリテルニ
ン（Meliternin）、モリン（Morin)、ラムナジン（Rham
nazin)、ラムネチン（Rhamnetin)、ラムノシトリン（Rh
amnocitrin）、ルチン（Rutin)、レイノウトリン（Reyn
outrin）、ロビニン（Robinin)、又はロビネチン（Robi
netin)等が例示される。

【００１８】フラバノノール類としては、アスチルビン
（Astilbin）、アルピノン（Alpinon)、アロマデンドリ
ン（Aromadendrin）、アンペロプチン（Ampeloptin）、
イソエンゲリチン（Isoengelitin）、エンゲリチン（En
gelitin)、ケヤキノール（Keyakinol)、ジヒドロロビネ
チン（Dihydrorobinetin）、ストロボバンクシン（Stro
bobanksin)、タキシホリン（Taxifolin)、ピノバンクシ
ン（Pinobanksin)、フェラムリン（Phellamurin)、フェ
ラムレチン（Phellamuretin)、又はフスチン（Fustin）
等が例示される。

【００１９】フラバノール類（カテキン類）としては、
アフゼレキン（Afzelechin）、エピアフゼレキン（Epia
fzelechin)、エピカテキン（Epicatechin)、エピカテキ
ンガレート（Epicatechin gallate)、エピガロカテキン
（Epigallocatechin）、エピガロカテキンガレート（Ep
igallocatechin gallate）、カテキン（Catechin）、カ
テキンガレート（Catechin gallate）、ガロカテキン
（Gallocatechin)、又はガロカテキンガレート（Galloc
atechin gallate)等が例示される。

【００２０】イソフラボン類としては、イソフラボン
（Isoflavon)、イリゲニン（Irigenin）、イリジン（Ir
idin）、オサジン（Osajin）、オノニン（Ononin）、ゲ
ニスチン（Genistin）、ゲニステイン（Genistein)、サ
ンタール（Santal）、ソホラビオシド（Sophorabiosid
e）、ソホリコシド（Sophoricoside)、ダイジン（Daidz
in)、ダイゼイン（Daidzein）、テクトリゲニン（Tecto
rigenin）、テクトリジン（Tectoridin）、ビオカニン
Ａ（Biochanin A)、プソイドバプチゲニン（Pseudobapt
igenin）、プソイドバプチシン（Pseudobaptisin）、プ
ルヌセチン（Prunusetin）、プルネチン（Prunetin）、
ポミフェリン（Pomiferin)、又はホルムオノネチン（Fo
rmononetin）等が例示される。

【００２１】アントシアン類としては、アオバニン（Aw
obanin）、イデイン（Idaein）、イリシシアニン（Ilic
icyanin)、エニン（Oenin)、クリサンテミン（Chrysant
hemin)、ゲスネリン（Gesnerin）、ゲスネリジン（Gesn
eridin）、ケラシアニン（Keracyanin）、サルビアニン
（Salvianin)、シアニジン（Cyanidin）、シアニン（Cy
anin）、デルフィニジン（Delphinidin)、デルフィニン
（Delphinin)、デルフィン（Delphin)、ネグレテイン
（Negretein)、ビオラニン（Violanin）、ヒルスチジン
（Hirsutidin）、ヒルスチン（Hirsutin）、プリムリン
（Primulin）、プルニシアニン（Prunicyanin)、ペオニ
ジン（Paeonidin)、ペオニン（Paeonin)、ペツニジン
（Petunidin)、ペツニン（Petunin)、ペラルゴニジン
（Pelargonidin）、ペラルゴニン（Pelargonin）、マル
ビジン（Malvidin）、又はマルビン（Malvin）等が例示
される。

【００２２】本発明の合成抑制剤において用いられるフ
ラボノイドとしては、特に好ましくは、ケルセチン〔す
なわち、２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３，
５，７−トリヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４
−オン〕、ルチン（すなわち、ケルセチン−３−ルチノ
シド）、バイカレイン（すなわち、５，６，７−トリヒ
ドロキシ−２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４
−オン）、又はカテキン類を挙げることができる。本発
明の合成抑制剤において有効成分として用いるカテキン
類としては、（＋）カテキン、（＋）ガロカテキン、
（＋）カテキンガレート、（＋）ガロカテキンガレー
ト、（−）エピカテキン、（−）エピガロカテキン、
（−）エピカテキンガレート、（−）エピガロカテキン
ガレートが好ましい。なお、本発明の合成抑制剤におい
て有効成分として用いるフラボノイドとしては、純粋な
立体異性体又はそれらの混合物を用いることができる。

【００２３】本発明の合成抑制剤に含有されるフラボノ
イドは、化学合成によって、又は天然物から抽出して精
製することによって、調製することができる。あるい
は、市販品を用いてもよい。また、本発明の合成抑制剤
において有効成分として用いるカテキン類は、主に茶カ
テキン類として知られており、天然物から抽出して精製
する場合、これに限定するものではないが、茶から抽出
することが好ましい。

【００２４】前記のように、茶には茶カテキン類が含ま
れているので、茶抽出物を本発明の合成抑制剤の有効成
分として用いることもできる。本明細書において「茶」
とは、茶〔Ｃａｍｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ，
（Ｌ）Ｏ．Ｋｕｎｔｚｅ〕の全草若しくはその一部分、
例えば葉、木部、根、実等の生若しくは乾燥物のそのま
ま若しくは部分発酵物又は完全発酵物を意味し、それら
の部分を単独で、又は任意に組み合わせて使用すること
ができる。抽出原料として茶葉を用いる場合、各種形態
のものがあり、たとえば茶生葉から仕上げ茶（乾燥茶）
まで、通常の製茶工程のいずれの段階のものでもよく、
かつ発酵の程度に関係なく、紅茶などの発酵茶、ウーロ
ン茶などの半発酵茶、緑茶などの不発酵茶のいずれをも
使用することができる。

【００２５】本発明による合成抑制剤の有効成分である
茶抽出物は、前記の茶カテキン類を含有していればよ
く、従って、茶の粗抽出物を用いることができる。この
茶粗抽出物は、茶を温水（好ましくは熱湯）によって抽
出するか、又は有機溶媒を用いて抽出することにより、
得ることができる。有機溶媒としては、例えば、メチル
アルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコー
ル、イソプロピルアルコール、若しくはブチルアルコー
ル等の低級アルコール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸
プロピル、若しくは酢酸ブチル等の低級エステル、又は
アセトン、若しくはメチルイソブチルケトン等のケトン
類を用いることができ、これらの有機溶媒を単独又は適
宜組み合わせ、更には無水又は好ましくは含水状態で用
いることができる。

【００２６】水抽出及び有機溶媒抽出の方法としては、
通常の生薬抽出に用いられる方法を用いることができ、
例えば、（乾燥）茶葉１重量部に対し、水又は有機溶媒
５〜２０重量部を用いて、攪拌しながら、その沸点以下
の温度で加熱還流することが望ましい。抽出工程は、通
常は５分〜７日間、好ましくは１０分〜２４時間実施
し、必要に応じて、攪拌等の補助的手段を加えることに
より、抽出時間を短縮することができる。水又は有機溶
媒抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、
不溶物を分離することができる。常法による熱水抽出物
又は有機溶媒抽出物の他に、これらの抽出液を各種有機
溶媒又は吸着剤等により、更に処理した生成物も、本発
明の合成抑制剤の有効成分として用いることができる茶
抽出物に含まれる。これらの茶抽出物は、必要に応じ
て、濃縮や乾燥して粉末化したり、更には冷水より結晶
化して精製することができる。

【００２７】こうして得られた茶抽出物は、茶（特に茶
葉）に含まれるカテキン類、すなわち、茶カテキン類
（例えば、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エ
ピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレ
ート、エピガロカテキンガレート、又はガロカテキンガ
レート）を混合物として含み、同時に原料茶に由来する
不純物を含んでいる。

【００２８】本発明の合成抑制剤は、前記のケルセチ
ン、ルチン、バイカレイン、若しくはカテキン類等のフ
ラボノイド又は茶抽出物を、それ単独で、又は好ましく
は製剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる通
常の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動物（特にはヒ
ト）に投与することができる。投与剤型としては、特に
限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カ
プセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキ
ス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液
剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼
薬などの非経口剤を挙げることができる。これらの経口
剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱
粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリ
ビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、シ
ョ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシ
ウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、
無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形
剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進
剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化
剤、保湿剤、防腐剤、酸化防止剤等を用いて、常法に従
って製造することができる。例えば、カテキン１重量部
と乳糖９９重量部とを混合して充填したカプセル剤など
である。

【００２９】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としてのフラボノイドの他
に、例えば生理食塩水、リンゲル液等の水溶性溶剤、植
物油、脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖、塩
化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防
腐剤、懸濁化剤、乳化剤等を任意に用いることができ
る。具体的に一例を示すと、（＋）カテキン１０ｍｇと
マンニトール５０ｍｇを蒸留水に溶解して１０ｍｌと
し、常法で除菌した後、２ｍｌずつを注射用小瓶に分注
し、又はそのまま凍結乾燥して注射剤とする。使用に際
して、生理食塩水で希釈して注射液とする。また、本発
明の合成抑制剤は、徐放性ポリマーなどを用いた徐放性
製剤の手法を用いて投与してもよい。例えば、本発明の
合成抑制剤をエチレンビニル酢酸ポリマーのペレットに
取り込ませて、このペレットを治療すべき組織中に外科
的に移植することができる。

【００３０】本発明の合成抑制剤は、これに限定される
ものではないが、フラボノイド又はその医薬上許容され
る塩を０．０１〜９９重量％、好ましくは０．１〜８０
重量％の量で含有することができる。また、茶抽出物を
有効成分として含有する本発明の合成抑制剤は、その中
に含まれるフラボノイドが前記の量範囲になるように適
宜調整して、調製することができる。なお、茶抽出物を
有効成分として含有する合成抑制剤を、経口投与用製剤
とする場合には、製剤学的に許容することのできる担体
を用いて、製剤化することが好ましい。本発明の合成抑
制剤を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者の年
齢、症状の程度、投与方法などにより異なり、特に制限
はないが、フラボノイド量として通常成人１人当り１ｍ
ｇ〜１０ｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口的
に又は非経口的に投与する。更に、用途も医薬品に限定
されるものではなく、種々の用途、例えば、機能性食品
や健康食品として飲食物の形で与えることも可能であ
る。

【００３１】なお、本発明の合成抑制剤に用いられるフ
ラボノイドのうち、ケルセチンの急性毒性（ＬＤ₅₀）
は、マウス経口投与の場合、１６０ｍｇ／ｋｇであり
（ザ・メルク・インデックス、１１版、メルク社、１２
７８頁）、ルチンの急性毒性（ＬＤ₅₀）は、マウス静脈
注射の場合、９５０ｍｇ／ｋｇである（ザ・メルク・イ
ンデックス、１１版、メルク社、１３１９頁）。また、
本発明の合成抑制剤に用いる茶カテキン類に毒性は特に
認められなかった。

【００３２】

【作用】上記したように、本発明の合成抑制剤に含有さ
れるフラボノイドは、細胞内のＨＳＰ６０ファミリーに
属するタンパク質の合成を特異的に抑制する作用がある
ので、前記フラボノイドを投与すると細胞でのＨＳＰ６
０ファミリーに属するタンパク質の生合成が特異的に減
少する。従って、前記フラボノイドは、ＨＳＰ６０ファ
ミリーに属するタンパク質がその発症に関連する自己免
疫疾患、例えばＩ型糖尿病や慢性関節リウマチなどの予
防及び治療に使用することができる。

【００３３】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ヒト培養癌細胞のＨＳＰ発現量の測定 （１）ヒト培養癌細胞の培養 以下の各種ヒト培養癌細胞を、５％二酸化炭素条件下
で、熱ショック処理時以外は、３７℃で培養した。乳癌
細胞株ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ ＨＴＢ ２２）、及び前立
腺癌細胞株ＤＵ １４５（ＡＴＣＣ ＨＴＢ ８１）
は、１０％非働化ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略称す
る）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。ＭＣＦ
７の培地には１０^-8Ｍβ−エストラジオールを添加し
た。子宮癌細胞株ＨｅＬａ Ｓ３（ＡＴＣＣ ＣＣＬ
２．２）、及び腎癌細胞株ＡＣＨＮ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ
１６１１）は、１０％非働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地
にて培養した。前立腺癌細胞株ＰＣ−３（ＡＴＣＣ Ｃ
ＲＬ−１４５）は、７％非働化ＦＢＳを含むＦ−１２Ｋ
培地（シグマ，カタログ番号Ｎ ３５２０）にて培養し
た。

【００３４】（２）フラボノイド処理及び熱ショック処
理 播種２日後の前記各種培養ヒト癌細胞の培地中に、以下
のフラボノイドの内のいずれか１つを添加し、２４時間
培養した。用いたフラボノイドの添加後の培地中での濃
度は、ケルセチン（ナカライテスク，カタログ番号298-
12）１００μＭ、ルチン（ナカライテスク，カタログ番
号303-19）１００μＭ、カテキン〔（＋）−Ｃａｔｅｃ
ｈｉｎ；フナコシ Code No. 0952：ＥＸＴＲＡＳＹＮＴ
ＨＥＳＥ社製，フランス〕１００μＭ、バイカレイン
（松浦薬業）２０μＭであった。その後、４５℃にて１
５分間熱ショック処理をしてから、３７℃にて終夜培養
した。対照試験は、フラボノイドを添加しないこと以外
は前記と同様に実施した。

【００３５】（３）ヒト培養癌細胞でのＨＳＰ発現量の
測定 前項（２）で処理した各細胞を、以下に示す方法により
ホモジナイズし、ＨＳＰ発現量をウェスタンブロット法
にて測定した。すなわち、前項（２）で処理した細胞
を、リン酸緩衝生理食塩水〔組成：ＫＣｌ＝０．２ｇ／
ｌ，ＫＨ₂ ＰＯ₄ ＝０．２ｇ／ｌ，ＮａＣｌ＝８ｇ／
ｌ，Ｎａ₂ＨＰＯ₄ （無水）＝１．１５ｇ／ｌ；以下、
ＰＢＳ（−）と称する〕で洗浄した後、ライシスバッフ
ァー（ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）〔１．０％ＮＰ−４
０、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−ＨＣ
ｌ（ｐＨ８．０）、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭ−Ｎ−エ
チルマレイミド、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフル
オリド、２μｇ／ｍｌロイペプチン及び２μｇ／ｍｌペ
プスタチン〕１ｍｌを加え、氷上で２０分間静置した。
その後、４℃で１２０００ｒｐｍにて、２０分間、遠心
を行った。遠心後の上清１０μｌをＰＢＳ（−）７９０
μｌに加え、更にプロテインアッセイ染色液（Dye Reag
ent Concentrate : バイオラッド，カタログ番号500-00
06）２００μｌを加えた。５分間、室温にて静置した
後、５９５ｎｍで吸光度を測定してタンパク質定量を行
った。

【００３６】タンパク質定量を行った試料を用いて、Ｌ
ａｅｍｍｌｉのバッファー系（Laemmli, N. K., "Natur
e", 283 : pp. 249-256, 1970)にて、等量のタンパク質
を含むライセートのＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気
泳動を行った。電気泳動後、ブロッティング及びそれに
続くブロッキングを行った。すなわち、タンパク質転写
装置（Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell：バ
イオ・ラッド，カタログ番号170-3946）を用いて、室温
にて１００Ｖにて、０．４５μｍニトロセルロース膜
（Schleicher & Schuell，カタログ番号401196）にゲル
を密着させ、３時間ブロッティングを行った。ブロッテ
ィングバッファーとしては、０．０２５Ｍトリス及び
０．１９２ＭグリシンよりなりｐＨ８．５に調整された
トリスグリシンバッファー（Tris Gly Running and Blo
tting Buffer；Enprotech, 米国マサチューセッツ州，
カタログ番号 SA100034)にメチルアルコールを２０％に
なるように加えて調製したバッファーを用いた。ブロッ
ティング後、ニトロセルロース膜を１０％スキムミルク
（雪印乳業）−ＰＢＳ（−）溶液に室温にて３０分間、
インキュベートし非特異的結合をブロックした。

【００３７】ブロッキング後、ニトロセルロース膜の上
で、抗ヒトＨＳＰ６０マウスモノクローナル抗体（Stre
ssGen, Victoria, B.C., Canada, カタログ番号 SPA-8
06）により、１次抗体反応を行った。この抗ヒトＨＳＰ
６０マウスモノクローナル抗体は、大腸菌を用いるリコ
ンビナントＤＮＡ法により作製したヒトＨＳＰ６０を免
疫原として作製した抗体であり（"J. Exp. Med." 175
, 1805-1810, 1992)、哺乳類ＨＳＰ６０（霊長類ＨＳ
Ｐ６０、マウスＨＳＰ６０、ラットＨＳＰ６０、及びハ
ムスターＨＳＰ６０）と特異的に反応する（"J. Exp. M
ed." 175 , 1805-1810, 1992)。この抗ヒトＨＳＰ６０
マウスモノクローナル抗体が認識するエピトープは、ヒ
トＨＳＰ６０アミノ酸配列の第３８３番目〜第４４７番
目のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列中に局在する
（"J. Exp. Med." 175 , 1805-1810,1992)。１次抗体
反応後、ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、溶液を取り替えて
２回の洗浄をスロー・ロッキング・シェイカーによって
行い、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バ
イオ・ラッド，カタログ番号170-6531）溶液で１５分間
ずつ、溶液を取り替えて４回の洗浄を行った。最終的
に、ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、２回の洗浄を行った。

【００３８】洗浄終了後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗
マウスＩｇＧ抗体（CAPPEL，カタログ番号55550)を、２
％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に
希釈して調製した抗体溶液５ｍｌを用いて、２時間、２
次抗体反応を行った。反応終了後、ニトロセルロース膜
に関して、ＰＢＳ（−）溶液で５分間ずつ溶液を変えて
２回、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液
で１５分間ずつ溶液を変えて５回の洗浄をスロー・ロッ
キング・シェイカーにより行った。最後にＰＢＳ（−）
溶液で５分間ずつ２回の洗浄を行った。余分なＰＢＳ
（−）溶液を除去した後、ウェスタンブロッティング検
出試薬（ECL Western blotting detectionreagent；Ame
rsham，カタログ番号RPN2106)をニトロセルロース膜上
に振りかけ、１分間インキュベートした後、余分な検出
試薬を除去し、ニトロセルロース膜をラップに包み、反
応面をＸ線フィルム（コダック X-OMAT, AR, カタログ
番号165 1454）に密着させて露光し、現像してＨＳＰ６
０の有無の検討を行った。結果を表１に示す。表中、
「↓」は、対照に比べて、ＨＳＰ６０発現量が減少した
ことを意味する。

【００３９】

【表１】 癌種 癌細胞 ケルセチン ルチン カテキン バイカレイン 子宮 ＨｅＬａ Ｓ３ ↓ 腎臓 ＡＣＨＮ ↓ 前立腺 ＤＵ １４５ ↓ ↓ 前立腺 ＰＣ−３ ↓ 乳 ＭＣＦ７ ↓ ↓ ↓

【００４０】対照試験、すなわち、フラボノイドを添加
しなかった細胞では、分子量約６０ｋＤのバンドが一本
検出された。なお、分子量は、前記抗ヒトＨＳＰ６０マ
ウスモノクローナル抗体との結合、及び分子量マーカー
（卵白オバルブミン及びウシ血清アルブミン）により決
定した。表１に示すとおり、カテキンは、腎臓癌細胞株
ＡＣＨＮ及び乳癌細胞株ＭＣＦ７においてＨＳＰ６０の
発現を抑制した。ケルセチンは、子宮癌細胞株ＨｅＬａ
Ｓ３、前立腺癌細胞株ＤＵ １４５、前立腺癌細胞株Ｐ
Ｃ−３、及び乳癌細胞株ＭＣＦ７においてＨＳＰ６０の
発現を抑制した。ルチンは、乳癌細胞株ＭＣＦ７におい
てＨＳＰ６０の発現を抑制した。バイカレインは、前立
腺癌細胞株ＤＵ１４５においてＨＳＰ６０の発現を抑制
した。すなわち、カテキン、ケルセチン、ルチン、及び
バイカレインは、ＨＳＰ６０の発現を抑制する合成抑制
剤の活性を有するものと結論することができる。

【００４１】

【発明の効果】以上詳述したように、フラボノイドは細
胞内のＨＳＰ６０ファミリーに属するタンパク質の発現
を抑制する合成抑制剤の活性を有する。従って、フラボ
ノイドを投与することにより、例えば、ＨＳＰ６０ファ
ミリーに属するタンパク質が発症に関与する自己免疫疾
患（例えば、Ｉ型糖尿病や慢性関節リウマチなど）の患
者の生理学的状態を有効に改善させ、前記病気を効果的
に治療することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 311/32 Ｃ０７Ｄ 311/32 311/62 311/62 Ｃ０７Ｈ 17/065 Ｃ０７Ｈ 17/065

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フラボノイドを有効成分として含有する
   ことを特徴とする、分子量５７キロダルトンから６８キ
   ロダルトンまでの間の熱ショックタンパク質の合成抑制
   剤。
2. 【請求項２】 フラボノイドがケルセチンである、請求
   項１に記載の分子量５７キロダルトンから６８キロダル
   トンまでの間の熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
3. 【請求項３】 フラボノイドがカテキン類である、請求
   項１に記載の分子量５７キロダルトンから６８キロダル
   トンまでの間の熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
4. 【請求項４】 カテキン類がエピガロカテキンガレー
   ト、エピカテキンガレート、エピガロカテキン、エピカ
   テキン及びこれらの異性体からなる群から選んだ化合物
   の少なくとも１種である、請求項３に記載の分子量５７
   キロダルトンから６８キロダルトンまでの間の熱ショッ
   クタンパク質の合成抑制剤。
5. 【請求項５】 フラボノイドがルチンである、請求項１
   に記載の分子量５７キロダルトンから６８キロダルトン
   までの間の熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
6. 【請求項６】 フラボノイドがバイカレインである、請
   求項１に記載の分子量５７キロダルトンから６８キロダ
   ルトンまでの間の熱ショックタンパク質の合成抑制剤。