JPH0940698A - 修飾ポリペプチド化合物及びその用途 - Google Patents
修飾ポリペプチド化合物及びその用途Info
- Publication number
- JPH0940698A JPH0940698A JP7196474A JP19647495A JPH0940698A JP H0940698 A JPH0940698 A JP H0940698A JP 7196474 A JP7196474 A JP 7196474A JP 19647495 A JP19647495 A JP 19647495A JP H0940698 A JPH0940698 A JP H0940698A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- leu
- thr
- cys
- ser
- gly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 39
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000003913 calcium metabolism Effects 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 4
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 abstract description 36
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 abstract description 23
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 abstract description 22
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 abstract description 16
- WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-4-hydroxybutanamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCO WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract description 8
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 abstract description 5
- VLJNHYLEOZPXFW-BYPYZUCNSA-N L-prolinamide Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1 VLJNHYLEOZPXFW-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 abstract description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 abstract description 2
- 208000015202 calcium metabolic disease Diseases 0.000 abstract 2
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 abstract 2
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 abstract 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 36
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 14
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 7
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical compound CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VSHJAJRPRRNBEK-LMVCGNDWSA-N eel calcitonin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CS)[C@@H](C)O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C1=CN=CN1 VSHJAJRPRRNBEK-LMVCGNDWSA-N 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 4
- 101000741447 Gallus gallus Calcitonin Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- PBBAFLCORNAZCD-UHFFFAOYSA-N nonanoyl nonanoate Chemical compound CCCCCCCCC(=O)OC(=O)CCCCCCCC PBBAFLCORNAZCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001670157 Gymnura Species 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 101000619708 Homo sapiens Peroxiredoxin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical group N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 206010031243 Osteogenesis imperfecta Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027067 Paget disease of bone Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100022239 Peroxiredoxin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 208000016738 bone Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- NWADXBLMWHFGGU-UHFFFAOYSA-N dodecanoic anhydride Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC(=O)CCCCCCCCCCC NWADXBLMWHFGGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid anhydride Chemical compound CC(C)C(=O)OC(=O)C(C)C LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000001187 pylorus Anatomy 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- -1 that is Chemical compound 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940120293 vaginal suppository Drugs 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 修飾ポリペプチド化合物、殊にカルシウム代
謝系疾患の予防及び治療に有効な修飾カルシトニン・ア
ナログであって消化管粘膜に存在する蛋白分解酵素の影
響を受け難く、従って注射以外の投与経路にも適用し得
る修飾ポリペプチド化合物を提供する。 【解決手段】 ウナギ、サケ又はニワトリ由来のカルシ
トニンと同様のアミノ酸配列を有するものとなし、但
し、これらの天然型カルシトニンにおいて共通な C末端
のプロリン・アミドをホモセリン・アミドに代替し且つ
N 末端におけるCys の α-アミノ基に炭素数が 18 個
又はそれ以下のアシル基による修飾を施す。
謝系疾患の予防及び治療に有効な修飾カルシトニン・ア
ナログであって消化管粘膜に存在する蛋白分解酵素の影
響を受け難く、従って注射以外の投与経路にも適用し得
る修飾ポリペプチド化合物を提供する。 【解決手段】 ウナギ、サケ又はニワトリ由来のカルシ
トニンと同様のアミノ酸配列を有するものとなし、但
し、これらの天然型カルシトニンにおいて共通な C末端
のプロリン・アミドをホモセリン・アミドに代替し且つ
N 末端におけるCys の α-アミノ基に炭素数が 18 個
又はそれ以下のアシル基による修飾を施す。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規な修飾ポリペプ
チド化合物及びその用途に係る。本発明による修飾ポリ
ペプチド化合物は天然型カルシトニン及び合成カルシト
ニン・アナログと同様な生物学的活性を示し且つ安定性
において天然型カルシトニンや合成カルシトニン・アナ
ログよりも優れており、従って医薬品成分としてカルシ
ウム代謝系疾患の予防及び治療に、例えば骨粗鬆症にお
ける疼痛の軽減や骨量減少の抑制、骨形成不全症におけ
る骨折の予防、高カルシウム血症及び骨ぺージェット病
(Paget's disease) の予防及び治療に用いることができ
る。
チド化合物及びその用途に係る。本発明による修飾ポリ
ペプチド化合物は天然型カルシトニン及び合成カルシト
ニン・アナログと同様な生物学的活性を示し且つ安定性
において天然型カルシトニンや合成カルシトニン・アナ
ログよりも優れており、従って医薬品成分としてカルシ
ウム代謝系疾患の予防及び治療に、例えば骨粗鬆症にお
ける疼痛の軽減や骨量減少の抑制、骨形成不全症におけ
る骨折の予防、高カルシウム血症及び骨ぺージェット病
(Paget's disease) の予防及び治療に用いることができ
る。
【０００２】
【従来の技術】カルシトニンは血中カルシウム濃度を低
下させる作用を有するペプチドホルモンであり、既にサ
ケ、ウナギ、アカエイ、ニワトリ、ブタ、ラット、ヒツ
ジ及びヒト由来のものが抽出精製され、それらのアミノ
酸一次配列が明らかにされている。これらのカルシトニ
ンに共通な構造的特徴は何れも 32 個のアミノ酸から構
成され、1 位と 7 位の Cys がジスルフィド結合して環
状構造を呈しており、C末端がプロリン・アミドとなっ
ている点である。これらのカルシトニン類を得るには主
として化学的合成法が行なわれてきたが、反応工程が多
く、合成反応や精製に長時間を要するため、廉価に且つ
大量にカルシトニン類を提供することは極めて困難であ
った。然るに、本出願人会社の研究者等が開発した方法
(特開平 4 - 59795 公報)、即ち、リーダー・ペプチド
に相当する DNA フラグメントを N 末端側に配し、一方
C 末端側には、必要に応じスペーサー・ペプチドをコ
ードする DNA フラグメントを介して複数個のカルシト
ニン又はそのアナログに相当する遺伝子をタンデムに結
合し、このようにして且つ二本鎖になした DNA フラグ
メントをプラスミド等のベクターに組込み、この遺伝子
組換えベクターにて微生物、例えば大腸菌を形質転換さ
せ、この形質転換体を培養することにより融合蛋白乃至
封入体として産生させ、ブロムシアンにて処理すること
によりメチオニン (Met) 部分で切断して個々のフラグ
メントに分離させると共に各フラグメントの C 末端を
ホモセリン (Hse) 又はホモセリン・ラクトン残基に変
じ、次いで酸処理を行った後にアンモニアと反応させる
ことにより C 末端ホモセリン残基をアミド化して (Hse
・NH2) 所望の生物学的活性を有するカルシトニン・ア
ナログになす方法を用いれば、廉価に且つ大量に生産で
きることが明らかとなった。
下させる作用を有するペプチドホルモンであり、既にサ
ケ、ウナギ、アカエイ、ニワトリ、ブタ、ラット、ヒツ
ジ及びヒト由来のものが抽出精製され、それらのアミノ
酸一次配列が明らかにされている。これらのカルシトニ
ンに共通な構造的特徴は何れも 32 個のアミノ酸から構
成され、1 位と 7 位の Cys がジスルフィド結合して環
状構造を呈しており、C末端がプロリン・アミドとなっ
ている点である。これらのカルシトニン類を得るには主
として化学的合成法が行なわれてきたが、反応工程が多
く、合成反応や精製に長時間を要するため、廉価に且つ
大量にカルシトニン類を提供することは極めて困難であ
った。然るに、本出願人会社の研究者等が開発した方法
(特開平 4 - 59795 公報)、即ち、リーダー・ペプチド
に相当する DNA フラグメントを N 末端側に配し、一方
C 末端側には、必要に応じスペーサー・ペプチドをコ
ードする DNA フラグメントを介して複数個のカルシト
ニン又はそのアナログに相当する遺伝子をタンデムに結
合し、このようにして且つ二本鎖になした DNA フラグ
メントをプラスミド等のベクターに組込み、この遺伝子
組換えベクターにて微生物、例えば大腸菌を形質転換さ
せ、この形質転換体を培養することにより融合蛋白乃至
封入体として産生させ、ブロムシアンにて処理すること
によりメチオニン (Met) 部分で切断して個々のフラグ
メントに分離させると共に各フラグメントの C 末端を
ホモセリン (Hse) 又はホモセリン・ラクトン残基に変
じ、次いで酸処理を行った後にアンモニアと反応させる
ことにより C 末端ホモセリン残基をアミド化して (Hse
・NH2) 所望の生物学的活性を有するカルシトニン・ア
ナログになす方法を用いれば、廉価に且つ大量に生産で
きることが明らかとなった。
【０００３】そこで、本発明者等は前記の特開平 4 - 5
9795 公報に開示されている遺伝子組換え技術にて合成
可能なカルシトニン・アナログに関して種々検討を重ね
た結果、意外にも、活性発現に従来必須の構造とされて
いた C 末端プロリン・アミド (Pro・NH2) をホモセリ
ン・アミドに代替した下記の [Hse32・NH2]-ウナギカル
シトニン (配列番号 : 1 に相当) が天然型ウナギカル
シトニン、即ち 32 位がプロリン・アミドであるものと
比較して生理活性が著しく高いことを既に明らかにして
いる (特願平 6 - 138618 明細書)。 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記の配列において、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
9795 公報に開示されている遺伝子組換え技術にて合成
可能なカルシトニン・アナログに関して種々検討を重ね
た結果、意外にも、活性発現に従来必須の構造とされて
いた C 末端プロリン・アミド (Pro・NH2) をホモセリ
ン・アミドに代替した下記の [Hse32・NH2]-ウナギカル
シトニン (配列番号 : 1 に相当) が天然型ウナギカル
シトニン、即ち 32 位がプロリン・アミドであるものと
比較して生理活性が著しく高いことを既に明らかにして
いる (特願平 6 - 138618 明細書)。 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記の配列において、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【０００４】一方、カルシトニンの臨床適用に関して
は、カルシトニンがペプチド化合物であるために肺、消
化管及び鼻腔内等の生体粘膜に存在する蛋白分解酵素等
による分解作用を受ける可能性が高く、従って注射によ
る投与方法が主体であった。そこで、この投与に関する
課題を克服するために、蛋白分解酵素阻害剤を同時に添
加する方法 [Morita, T. et al., "Pharamaceutical Re
search", Vol. 11,page 909 (1994); Kobayashi, S. et
al., "Pharamaceutical Research", Vol.11, page 123
9 (1994); 特開平 2 - 115130、同 3 - 48627、同 3 -
170438、同3 - 246233、同 4 - 74133、同 6 - 321804
公報等] や脂肪酸等によりカルシトニンを化学的に修飾
して安定化させる方法 [特開平 1 - 104098、同 1 - 29
4695公報、藤田 忠 等 "Drug Delivery System”, Vol.
9, page 179 (1994) 等] を用いて注射以外の投与方法
が検討されてきた。
は、カルシトニンがペプチド化合物であるために肺、消
化管及び鼻腔内等の生体粘膜に存在する蛋白分解酵素等
による分解作用を受ける可能性が高く、従って注射によ
る投与方法が主体であった。そこで、この投与に関する
課題を克服するために、蛋白分解酵素阻害剤を同時に添
加する方法 [Morita, T. et al., "Pharamaceutical Re
search", Vol. 11,page 909 (1994); Kobayashi, S. et
al., "Pharamaceutical Research", Vol.11, page 123
9 (1994); 特開平 2 - 115130、同 3 - 48627、同 3 -
170438、同3 - 246233、同 4 - 74133、同 6 - 321804
公報等] や脂肪酸等によりカルシトニンを化学的に修飾
して安定化させる方法 [特開平 1 - 104098、同 1 - 29
4695公報、藤田 忠 等 "Drug Delivery System”, Vol.
9, page 179 (1994) 等] を用いて注射以外の投与方法
が検討されてきた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題乃至発明の目的】しかし
ながら、蛋白分解酵素阻害剤の添加はカルシトニンの分
解を抑制するにせよ、粘膜上に存在する他の物質の吸収
に影響を及ぼし、又毒性の発現をもたらす可能性があ
り、従って現在の段階において安全性が高く且つカルシ
トニンの分解のみを選択的に阻害する有効な阻害剤は見
い出されるに至っていない。尚、化学修飾を施したカル
シトニン・アナログについては、上記の報告以外に特公
昭 49 - 194 公報、特開昭 62 - 132898、同 63 - 2841
98、同 63 -287800、同 64 - 16800 公報、特開平 1 -
230598、同 1 - 503390、同 2 -17200、同 3 - 505589
公報、USP 4,804,742 明細書等に開示されているが、こ
れらの文献には安定性改善に関する記述はなされておら
ず、更に開示されている修飾カルシトニン・アナログは
化学的に合成されており、従って廉価に且つ大量に生産
するには不適当である。
ながら、蛋白分解酵素阻害剤の添加はカルシトニンの分
解を抑制するにせよ、粘膜上に存在する他の物質の吸収
に影響を及ぼし、又毒性の発現をもたらす可能性があ
り、従って現在の段階において安全性が高く且つカルシ
トニンの分解のみを選択的に阻害する有効な阻害剤は見
い出されるに至っていない。尚、化学修飾を施したカル
シトニン・アナログについては、上記の報告以外に特公
昭 49 - 194 公報、特開昭 62 - 132898、同 63 - 2841
98、同 63 -287800、同 64 - 16800 公報、特開平 1 -
230598、同 1 - 503390、同 2 -17200、同 3 - 505589
公報、USP 4,804,742 明細書等に開示されているが、こ
れらの文献には安定性改善に関する記述はなされておら
ず、更に開示されている修飾カルシトニン・アナログは
化学的に合成されており、従って廉価に且つ大量に生産
するには不適当である。
【０００６】従って、本発明の目的は特願平 6 - 13861
8 明細書に開示されているカルシトニン・アナログと同
様に生産性及び生理活性において優れており且つ基本と
なっているカルシトニン・アナログよりも生体粘膜上で
の安定性が高いようにデザインされた修飾カルシトニン
・アナログである修飾ポリペプチド化合物を提供するこ
とにある。本発明の付随的な、但し重要な目的は、この
ような修飾ポリペプチド化合物を有効成分とする、カル
シウム代謝系疾患の予防及び治療剤を提供することにあ
る。
8 明細書に開示されているカルシトニン・アナログと同
様に生産性及び生理活性において優れており且つ基本と
なっているカルシトニン・アナログよりも生体粘膜上で
の安定性が高いようにデザインされた修飾カルシトニン
・アナログである修飾ポリペプチド化合物を提供するこ
とにある。本発明の付随的な、但し重要な目的は、この
ような修飾ポリペプチド化合物を有効成分とする、カル
シウム代謝系疾患の予防及び治療剤を提供することにあ
る。
【０００７】
【課題を解決し、目的を達成する手段】本発明者等は上
記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、前記の
特願平6 - 138618 明細書に記載されているカルシトニ
ン誘導体を基本骨格とし、N 末端における Cys の α-
アミノ基にアシル基を位置選択的に導入し、更には 1
位から 31 位までは天然型ウナギ、サケ又はニワトリ由
来のカルシトニンと同一のアミノ酸配列を有し、32 位
がホモセリン・アミド (Hse・NH2) である新規な修飾ポ
リペプチド化合物の合成に成功すると共に、該化合物が
消化管粘膜ホモジネート中において高い安定性を示し、
従って当該粘膜に存在する蛋白分解酵素の影響を受け難
いことを見い出し、本発明を完成するに至った。
記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、前記の
特願平6 - 138618 明細書に記載されているカルシトニ
ン誘導体を基本骨格とし、N 末端における Cys の α-
アミノ基にアシル基を位置選択的に導入し、更には 1
位から 31 位までは天然型ウナギ、サケ又はニワトリ由
来のカルシトニンと同一のアミノ酸配列を有し、32 位
がホモセリン・アミド (Hse・NH2) である新規な修飾ポ
リペプチド化合物の合成に成功すると共に、該化合物が
消化管粘膜ホモジネート中において高い安定性を示し、
従って当該粘膜に存在する蛋白分解酵素の影響を受け難
いことを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】即ち、本発明による修飾ポリペプチド化合
物はアミノ酸配列 (配列番号 : 1に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 又、アミノ酸配列 (配列番号 : 2 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly- Thr-Hse・NH2 若しくはアミノ酸配列 (配列番号 : 3 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記の各配列中において、第 1 番目と第 7 番目のア
ミノ酸残基である Cysはジスルフィド結合している)で
あり、N 末端における Cys の α-アミノ基に炭素数が
18 個又はそれ以下のアシル基が結合していることを特
徴としている。
物はアミノ酸配列 (配列番号 : 1に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 又、アミノ酸配列 (配列番号 : 2 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly- Thr-Hse・NH2 若しくはアミノ酸配列 (配列番号 : 3 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記の各配列中において、第 1 番目と第 7 番目のア
ミノ酸残基である Cysはジスルフィド結合している)で
あり、N 末端における Cys の α-アミノ基に炭素数が
18 個又はそれ以下のアシル基が結合していることを特
徴としている。
【０００９】本発明によるカルシウム代謝系疾患の予防
及び治療剤は、上記の修飾ポリペプチド化合物を有効成
分として含有していることを特徴としている。
及び治療剤は、上記の修飾ポリペプチド化合物を有効成
分として含有していることを特徴としている。
【００１０】
【発明の実施の形態】次に参考製造例、製造例、生物学
的活性試験例、安定性試験例及び製剤例により本発明を
更に詳細に且つ具体的に説明する。参考製造例 1 ([Hse32・NH2]-ウナギカルシトニンの合
成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 1 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
的活性試験例、安定性試験例及び製剤例により本発明を
更に詳細に且つ具体的に説明する。参考製造例 1 ([Hse32・NH2]-ウナギカルシトニンの合
成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 1 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１１】参考製造例 2 ([Hse32・NH2]-サケカルシ
トニンの合成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 2 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
トニンの合成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 2 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１２】参考製造例 3 ([Hse32・NH2]-ニワトリカ
ルシトニンの合成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 3 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
ルシトニンの合成) 下記のアミノ酸配列 (配列番号 : 3 に相当) を有し且
つ特願平 6 - 138618明細書に開示されているカルシト
ニン・アナログを当該明細書に記載されている方法に従
い且つ アプライド バイオシステムズ 社製のペプチド
シンセサイザー430A を使用して合成し、次いで精製し
た。 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Se
r-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-
Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１３】製造例 1 (N-α-ヘキサノイル-[Cys1, Hse
32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成) 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを 2mg 秤取し、0.1% トリフルオロ酢酸
(TFA) 2ml に溶解させ、凍結乾燥させた。この凍結乾燥
粉末を乾燥ジメチルホルムアミド (DMF) 1ml に溶解
し、ヘキサン酸無水物を 2 当量添加し、25℃ にて 90
分間反応させた。その後、無水エーテル 9mlを添加し、
氷浴上で冷却して沈殿物を析出させ、遠心処理すること
により沈殿物を集めた。得られた沈殿物を ウォーター
ズ 社製の μ-ボンダスフェアーの逆相C-18 カラム (19
mm x 15cm) を用い、下記の条件で HPLC を行なうこと
により精製した。 溶出液 : 0.1% TFA水溶液中 30% から 60% の 0.1% T
FA アセトニトリル溶液の直線勾配、30分間、 流速 : 7.0ml/分、 検出波長 : 210nm。 HPLC による主ピーク画分を回収して凍結乾燥すること
により目的物であるN-α-ヘキサノイル-[Cys1, Hse32・
NH2]-ウナギカルシトニン 1mg を得た。得られた修飾ポ
リペプチド化合物の同定を下記の条件で FAB-MS を実施
することにより行った結果、フラグメントイオンの解析
から下記の式にて示される構造を有していることが確認
された。 分析条件： マトリックス : メタニトロベンジルアルコ
ール、 インレットセレクション : ダイレクト、 イオンモード : FAB+ FAB-MS, (M+H)+ : 3515.8 (理論値)、 3515.6 (実測値)。 CH3(CH2)4C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成) 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを 2mg 秤取し、0.1% トリフルオロ酢酸
(TFA) 2ml に溶解させ、凍結乾燥させた。この凍結乾燥
粉末を乾燥ジメチルホルムアミド (DMF) 1ml に溶解
し、ヘキサン酸無水物を 2 当量添加し、25℃ にて 90
分間反応させた。その後、無水エーテル 9mlを添加し、
氷浴上で冷却して沈殿物を析出させ、遠心処理すること
により沈殿物を集めた。得られた沈殿物を ウォーター
ズ 社製の μ-ボンダスフェアーの逆相C-18 カラム (19
mm x 15cm) を用い、下記の条件で HPLC を行なうこと
により精製した。 溶出液 : 0.1% TFA水溶液中 30% から 60% の 0.1% T
FA アセトニトリル溶液の直線勾配、30分間、 流速 : 7.0ml/分、 検出波長 : 210nm。 HPLC による主ピーク画分を回収して凍結乾燥すること
により目的物であるN-α-ヘキサノイル-[Cys1, Hse32・
NH2]-ウナギカルシトニン 1mg を得た。得られた修飾ポ
リペプチド化合物の同定を下記の条件で FAB-MS を実施
することにより行った結果、フラグメントイオンの解析
から下記の式にて示される構造を有していることが確認
された。 分析条件： マトリックス : メタニトロベンジルアルコ
ール、 インレットセレクション : ダイレクト、 イオンモード : FAB+ FAB-MS, (M+H)+ : 3515.8 (理論値)、 3515.6 (実測値)。 CH3(CH2)4C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１４】製造例 2 (N-α-ノナノイル-[Cys1, Hse32
・NH2]-ウナギカルシトニンの合成) 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを製造例1 に示される条件で、但しヘキサ
ン酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理し、
次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプチド
化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS に
より行った結果、下記の式にて示される構造を有してい
ることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3557.8 (理論値)、 3557.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
・NH2]-ウナギカルシトニンの合成) 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを製造例1 に示される条件で、但しヘキサ
ン酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理し、
次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプチド
化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS に
より行った結果、下記の式にて示される構造を有してい
ることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3557.8 (理論値)、 3557.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１５】製造例 3 (N-α-ドデカノイル-[Cys1, Hse
32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成） 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを 2mg 秤取し、0.1% トリフルオロ酢酸
(TFA) 2ml に溶解させ、凍結乾燥させた。この凍結乾燥
粉末を乾燥ジメチルホルムアミド (DMF) 1ml に溶解
し、ドデカンサン酸無水物を 2 当量添加し、25℃ にて
120 分間反応させた。その後、製造例 1 に示される条
件で処理し、HPLC により精製した。得られた修飾ポリ
ペプチド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FA
B-MSにより行った結果、下記の式にて示される構造を有
していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3599.9 (理論値)、 3599.9 (実測値)。 CH3(CH2)10C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu
-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-T
yr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成） 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを 2mg 秤取し、0.1% トリフルオロ酢酸
(TFA) 2ml に溶解させ、凍結乾燥させた。この凍結乾燥
粉末を乾燥ジメチルホルムアミド (DMF) 1ml に溶解
し、ドデカンサン酸無水物を 2 当量添加し、25℃ にて
120 分間反応させた。その後、製造例 1 に示される条
件で処理し、HPLC により精製した。得られた修飾ポリ
ペプチド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FA
B-MSにより行った結果、下記の式にて示される構造を有
していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3599.9 (理論値)、 3599.9 (実測値)。 CH3(CH2)10C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu
-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-T
yr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１６】製造例 4 (N-α-オクタデカノイル-[Cys1,
Hse32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成） 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを製造例3 に示される条件で、但しドデカ
ン酸無水物の代わりにオクタデカン酸無水物を用いて処
理し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペ
プチド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-
MS により行った結果、下記の式にて示される構造を有
していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3684.0 (理論値)、 3684.0 (実測値)。 CH3(CH2)16C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu
-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-T
yr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
Hse32・NH2]-ウナギカルシトニンの合成） 参考製造例 1 において得られた [Hse32・NH2]-ウナギ
カルシトニンを製造例3 に示される条件で、但しドデカ
ン酸無水物の代わりにオクタデカン酸無水物を用いて処
理し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペ
プチド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-
MS により行った結果、下記の式にて示される構造を有
していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3684.0 (理論値)、 3684.0 (実測値)。 CH3(CH2)16C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu
-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-T
yr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１７】製造例 5 (N-α-プロパノイル-[Cys1, Hse
32・NH2]-サケカルシトニンの合成) 参考製造例 2 において得られた [Hse32・NH2]-サケカ
ルシトニンを製造例 1に示される条件で、但しヘキサン
酸無水物の代わりにプロピオン酸無水物を用いて処理
し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプ
チド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS
により行った結果、下記の式にて示される構造を有し
ていることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3490.7 (理論値)、 3490.8 (実測値)。 CH3CH2C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly
-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-P
ro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
32・NH2]-サケカルシトニンの合成) 参考製造例 2 において得られた [Hse32・NH2]-サケカ
ルシトニンを製造例 1に示される条件で、但しヘキサン
酸無水物の代わりにプロピオン酸無水物を用いて処理
し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプ
チド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS
により行った結果、下記の式にて示される構造を有し
ていることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3490.7 (理論値)、 3490.8 (実測値)。 CH3CH2C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly
-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-P
ro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１８】製造例 6 (N-α-ノナノイル-[Cys1, Hse32
・NH2]-サケカルシトニンの合成) 参考製造例 2 において得られた [Hse32・NH2]-サケカ
ルシトニンを製造例 1に示される条件で、但しヘキサン
酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理し、次
いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプチド化
合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS によ
り行った結果、下記の式にて示される構造を有している
ことが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3574.8 (理論値)、 3574.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
・NH2]-サケカルシトニンの合成) 参考製造例 2 において得られた [Hse32・NH2]-サケカ
ルシトニンを製造例 1に示される条件で、但しヘキサン
酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理し、次
いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプチド化
合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS によ
り行った結果、下記の式にて示される構造を有している
ことが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3574.8 (理論値)、 3574.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００１９】製造例 7 (N-α-ノナノイル-[Cys1, Hse32
・NH2]-ニワトリカルシトニンの合成) 参考製造例 3 において得られた [Hse32・NH2]-ニワト
リカルシトニンを製造例 1 に示される条件で、但しヘ
キサン酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理
し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプ
チド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS
により行った結果、下記の式にて示される構造を有し
ていることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3514.8 (理論値)、 3514.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
・NH2]-ニワトリカルシトニンの合成) 参考製造例 3 において得られた [Hse32・NH2]-ニワト
リカルシトニンを製造例 1 に示される条件で、但しヘ
キサン酸無水物の代わりにノナン酸無水物を用いて処理
し、次いで HPLC にて精製した。得られた修飾ポリペプ
チド化合物の同定を製造例 1 に示される条件で FAB-MS
により行った結果、下記の式にて示される構造を有し
ていることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3514.8 (理論値)、 3514.8 (実測値)。 CH3(CH2)7C(O)-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-
Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Ty
r-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００２０】製造例 8 (N-α-2-メチルプロパノイル-[C
ys1, Hse32・NH2]-ニワトリカルシトニンの合成） 参考製造例 3 において得られた [Hse32・NH2]-ニワト
リカルシトニンを製造例 1 に示される条件で、但しヘ
キサン酸無水物の代わりに 2-メチルプロピオン酸無水
物を用いて処理し、次いで HPLC にて精製した。得られ
た修飾ポリペプチド化合物の同定を製造例 1 に示され
る条件で FAB-MS により行った結果、下記の式にて示さ
れる構造を有していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3444.8 (理論値)、 3444.6 (実測値)。 (CH3)2CHC(O)-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-G
ly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr
-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
ys1, Hse32・NH2]-ニワトリカルシトニンの合成） 参考製造例 3 において得られた [Hse32・NH2]-ニワト
リカルシトニンを製造例 1 に示される条件で、但しヘ
キサン酸無水物の代わりに 2-メチルプロピオン酸無水
物を用いて処理し、次いで HPLC にて精製した。得られ
た修飾ポリペプチド化合物の同定を製造例 1 に示され
る条件で FAB-MS により行った結果、下記の式にて示さ
れる構造を有していることが確認された。 FAB-MS, (M+H)+ : 3444.8 (理論値)、 3444.6 (実測値)。 (CH3)2CHC(O)-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-G
ly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr
-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Hse・NH2 (上記の配列中において、Hse・NH2 はアミド化されたホ
モセリン残基を意味し、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)
【００２１】試験例 (ラットの腸管粘膜に存在する蛋白
分解酵素に対する安定性の測定) 製造例及び参考製造例において得られた修飾及び未修飾
ポリペプチド化合物(カルシトニン・アナログ) 並びに
市販の天然型サケ及びウナギカルシトニンがラットの腸
管粘膜ホモジネート中において示す安定性を測定した。
Wistar 系雄性ラット (6 週齢) を 24 時間絶食させた
後に屠殺し、胃幽門部から盲腸結腸接合部までの腸管を
摘出した。得られた腸管の内部を生理食塩水にて洗浄
し、ハサミにより開管し、ガラスプレートで粘膜を掻き
取り、生理食塩水に添加した。その後、ポリトロンホモ
ジナイザー (Kinematica 社製) にて氷浴上で 60 秒間
処理し、次いで 4℃ にて遠心処理 (3600g x 30分)
し、得られた上清を腸管粘膜ホモジネートとした。この
ホモジネート (蛋白濃度 : 27μg/ml) 200μl に 20mM
燐酸緩衝液 (pH 6.8) 250μl を添加し、37℃ にて 1分
間インキュベーションした。次いで、検体としてのポリ
ペプチド化合物 (1.0mg/ml) を 50μl 添加し、37℃ に
てインキュベーションした。インキュベーション開始前
と開始から 2 時間後にそれぞれ 40μl 宛採取し、直ち
に 0.13mg/ml塩化ベンザルコニウム溶液 10μl とエタ
ノール 40μl とを添加して混和し、得られたサンプル
溶液をウォーターズ社製のμ-ボンダスフェアーの逆相
C-18 カラム (3.9mm x 15cm) を用い、下記の条件で HP
LC にて分析した。 溶出液 : 0.1% TFA 水溶液中 30% から 60% の 0.1%
TFA アセトニトリル溶液の直線勾配、20分間。 流 速 : 1.0ml/分、 検出波長 : 210nm。 各ポリペプチド化合物に関して得られたクロマトグラム
における面積値から残存率を求め、その経時変化より消
失半減期を算出した。結果は下記の表 1 に示される通
りであり、本発明による修飾カルシトニン化合物は市販
の天然型サケカルシトニン及びウナギカルシトニン並び
に特願平 6 - 138618 明細書に開示されている未修飾の
[Hse32・NH2]-ウナギ、サケ及びニワトリカルシトニン
と比較する場合に安定性において有意に優れていること
が判明した。
分解酵素に対する安定性の測定) 製造例及び参考製造例において得られた修飾及び未修飾
ポリペプチド化合物(カルシトニン・アナログ) 並びに
市販の天然型サケ及びウナギカルシトニンがラットの腸
管粘膜ホモジネート中において示す安定性を測定した。
Wistar 系雄性ラット (6 週齢) を 24 時間絶食させた
後に屠殺し、胃幽門部から盲腸結腸接合部までの腸管を
摘出した。得られた腸管の内部を生理食塩水にて洗浄
し、ハサミにより開管し、ガラスプレートで粘膜を掻き
取り、生理食塩水に添加した。その後、ポリトロンホモ
ジナイザー (Kinematica 社製) にて氷浴上で 60 秒間
処理し、次いで 4℃ にて遠心処理 (3600g x 30分)
し、得られた上清を腸管粘膜ホモジネートとした。この
ホモジネート (蛋白濃度 : 27μg/ml) 200μl に 20mM
燐酸緩衝液 (pH 6.8) 250μl を添加し、37℃ にて 1分
間インキュベーションした。次いで、検体としてのポリ
ペプチド化合物 (1.0mg/ml) を 50μl 添加し、37℃ に
てインキュベーションした。インキュベーション開始前
と開始から 2 時間後にそれぞれ 40μl 宛採取し、直ち
に 0.13mg/ml塩化ベンザルコニウム溶液 10μl とエタ
ノール 40μl とを添加して混和し、得られたサンプル
溶液をウォーターズ社製のμ-ボンダスフェアーの逆相
C-18 カラム (3.9mm x 15cm) を用い、下記の条件で HP
LC にて分析した。 溶出液 : 0.1% TFA 水溶液中 30% から 60% の 0.1%
TFA アセトニトリル溶液の直線勾配、20分間。 流 速 : 1.0ml/分、 検出波長 : 210nm。 各ポリペプチド化合物に関して得られたクロマトグラム
における面積値から残存率を求め、その経時変化より消
失半減期を算出した。結果は下記の表 1 に示される通
りであり、本発明による修飾カルシトニン化合物は市販
の天然型サケカルシトニン及びウナギカルシトニン並び
に特願平 6 - 138618 明細書に開示されている未修飾の
[Hse32・NH2]-ウナギ、サケ及びニワトリカルシトニン
と比較する場合に安定性において有意に優れていること
が判明した。
【表１】
【００２２】製剤例 1 (注射剤) 製造例 1 により得られた修飾ポリペプチド化合物 100I
U にヒト血清アルブミン溶液を添加して溶解し、凍結乾
燥した。この凍結乾燥製剤は用時には生理食塩水に溶解
せしめられる。尚、使用される修飾ポリペプチド化合物
の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定すること
ができ、又上記の血清アルブミンをペプチドホルモン系
製剤に関して汎用されている他の添加剤に代替すること
もできる。
U にヒト血清アルブミン溶液を添加して溶解し、凍結乾
燥した。この凍結乾燥製剤は用時には生理食塩水に溶解
せしめられる。尚、使用される修飾ポリペプチド化合物
の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定すること
ができ、又上記の血清アルブミンをペプチドホルモン系
製剤に関して汎用されている他の添加剤に代替すること
もできる。
【００２３】製剤例 2 (坐剤) 製造例 2 により得られた修飾ポリペプチド化合物 100I
U をカカオ脂又はウィテップゾール (標章) に添加して
加温混和し、常法により処理して坐剤を調製した。尚、
使用される修飾ポリペプチド化合物の活性単位は 10 -
400IU 程度の範囲内で設定することができる。
U をカカオ脂又はウィテップゾール (標章) に添加して
加温混和し、常法により処理して坐剤を調製した。尚、
使用される修飾ポリペプチド化合物の活性単位は 10 -
400IU 程度の範囲内で設定することができる。
【００２４】製剤例 3 (坐剤) 製造例 6 により得られた修飾ポリペプチド化合物 100I
U を精製水に溶解後、予め溶融させたマクロゴール (標
章) に均一に分散させ、次いで常法により処理して膣坐
剤を調製した。尚、使用される修飾ポリペプチド化合物
の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定すること
ができる。
U を精製水に溶解後、予め溶融させたマクロゴール (標
章) に均一に分散させ、次いで常法により処理して膣坐
剤を調製した。尚、使用される修飾ポリペプチド化合物
の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定すること
ができる。
【００２５】製剤例 4 (点鼻剤) 製造例 7 により得られた修飾ポリペプチド化合物 50IU
を塩化ベンザルコニウム含有精製水に溶解し、鼻腔内
投与製剤を調製した。尚、使用される修飾ポリペプチド
化合物の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定す
ることができる。
を塩化ベンザルコニウム含有精製水に溶解し、鼻腔内
投与製剤を調製した。尚、使用される修飾ポリペプチド
化合物の活性単位は 10 - 400IU 程度の範囲内で設定す
ることができる。
【００２６】
【発明の効果】本発明による修飾ポリペプチド化合物
は、天然型のサケカルシトニン及びウナギカルシトニン
並びに未修飾の [Hse32・NH2]-カルシトニン・アナログ
と比較する場合に消化管粘膜ホモジネート中における安
定性が極めて高く、該粘膜に存在する蛋白分解酵素の影
響を受け難いので、注射以外の投与経路を利用すること
が可能である。更に、本発明による修飾ポリペプチド化
合物は、その C 末端がHse32・NH2 なので遺伝子工学的
手法を適用することができ、更に N 末端の化学修飾も
簡便な位置選択的手法を利用でき、従って廉価に且つ大
量に調製することができる。斯くて、本発明はカルシウ
ム代謝系疾患の予防及び治療剤の有効成分を提供する上
で極めて優れている。
は、天然型のサケカルシトニン及びウナギカルシトニン
並びに未修飾の [Hse32・NH2]-カルシトニン・アナログ
と比較する場合に消化管粘膜ホモジネート中における安
定性が極めて高く、該粘膜に存在する蛋白分解酵素の影
響を受け難いので、注射以外の投与経路を利用すること
が可能である。更に、本発明による修飾ポリペプチド化
合物は、その C 末端がHse32・NH2 なので遺伝子工学的
手法を適用することができ、更に N 末端の化学修飾も
簡便な位置選択的手法を利用でき、従って廉価に且つ大
量に調製することができる。斯くて、本発明はカルシウ
ム代謝系疾患の予防及び治療剤の有効成分を提供する上
で極めて優れている。
配列番号 : 1 配列の長さ : 32 配列の型 : アミノ酸 鎖の数 : 1 本鎖 トポロジー : 両形態 配列の種類 : ペプチド 他の情報 :1 位と 7 位の Cys はジスルフィド結合して
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Xaa 配列番号 : 2 配列の長さ : 32 配列の型 : アミノ酸 鎖の数 : 1 本鎖 トポロジー : 両形態 配列の種類 : ペプチド 他の情報 :1 位と 7 位の Cys はジスルフィド結合して
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly- Thr-Xaa 配列番号 : 3 配列の長さ : 32 配列の型 : アミノ酸 鎖の数 : 1 本鎖 トポロジー : 両形態 配列の種類 : ペプチド 他の情報 :1 位と 7 位の Cys はジスルフィド結合して
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Xaa
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Xaa 配列番号 : 2 配列の長さ : 32 配列の型 : アミノ酸 鎖の数 : 1 本鎖 トポロジー : 両形態 配列の種類 : ペプチド 他の情報 :1 位と 7 位の Cys はジスルフィド結合して
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly- Thr-Xaa 配列番号 : 3 配列の長さ : 32 配列の型 : アミノ酸 鎖の数 : 1 本鎖 トポロジー : 両形態 配列の種類 : ペプチド 他の情報 :1 位と 7 位の Cys はジスルフィド結合して
いるXaa はホモセリン・アミド (Hse・NH2) 1 5 10 15 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Xaa
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 富谷 昇 愛知県名古屋市東区東外堀町35番地 株式 会社三和化学研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 アミノ酸配列 (配列番号 1 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記配列中において、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)であ
り、N 末端における Cys の α-アミノ基に炭素数が 18
個又はそれ以下のアシル基が結合していることを特徴
とする、修飾ポリペプチド化合物。 - 【請求項２】 アミノ酸配列 (配列番号 2 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記配列中において、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)であ
り、N 末端における Cys の α-アミノ基に炭素数が 18
個又はそれ以下のアシル基が結合していることを特徴
とする、修飾ポリペプチド化合物。 - 【請求項３】 アミノ酸配列 (配列番号 3 に相当) が 1 5 10 15 Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu- 20 25 30 Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly- Thr-Hse・NH2 (上記配列中において、第 1 番目と第 7 番目のアミノ
酸残基である Cys はジスルフィド結合している)であ
り、N 末端における Cys の α-アミノ基に炭素数が 18
個又はそれ以下のアシル基が結合していることを特徴
とする、修飾ポリペプチド化合物。 - 【請求項４】 請求項 1 - 3 の何れか 1 つに記載の修
飾ポリペプチド化合物を有効成分として含有しているこ
とを特徴とする、カルシウム代謝系疾患の予防及び治療
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7196474A JPH0940698A (ja) | 1995-08-01 | 1995-08-01 | 修飾ポリペプチド化合物及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7196474A JPH0940698A (ja) | 1995-08-01 | 1995-08-01 | 修飾ポリペプチド化合物及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0940698A true JPH0940698A (ja) | 1997-02-10 |
Family
ID=16358409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7196474A Pending JPH0940698A (ja) | 1995-08-01 | 1995-08-01 | 修飾ポリペプチド化合物及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0940698A (ja) |
-
1995
- 1995-08-01 JP JP7196474A patent/JPH0940698A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0477885B1 (en) | Parathyroid hormone derivatives | |
| AU598205B2 (en) | Peptide analogues of mammalian insulin-like growth factor-1 | |
| JP2507106B2 (ja) | インスリン様成長因子１（ｉｇｆ―１）または因子２（ｉｇｆ―２）の類縁ペプチド | |
| KR100658961B1 (ko) | 공유적으로 가교결합된 인슐린 이량체, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 진단 키트, 및 이의 제조방법 | |
| JPH0674279B2 (ja) | 成長ホルモン放出性因子類似体及びその製造方法 | |
| EP0748817A2 (en) | Parathyroid hormone derivatives and their use | |
| JP2000512137A (ja) | レプチン（ｏｂタンパク質）のフラグメント | |
| KR970009353B1 (ko) | 초고활성 인체 인슐린 동족체 | |
| JPH083196A (ja) | カルシトニン誘導体及びその用途 | |
| CZ158895A3 (en) | Insulin analog, process of its preparation and pharmaceutical composition containing thereof | |
| KR101036524B1 (ko) | 수식 펩티드의 제조 방법 | |
| JPH01250396A (ja) | ポリペプチドの製造方法 | |
| JPH07316195A (ja) | 新規なＰＴＨｒＰ関連ペプチド及びその用途 | |
| US4732972A (en) | Polypeptides having growth hormone releasing activity | |
| JPH0940698A (ja) | 修飾ポリペプチド化合物及びその用途 | |
| JPH09157294A (ja) | 副甲状腺ホルモン誘導体 | |
| US4820804A (en) | Analogs of [1,7-di-alanine, des-19-leucine]calcitonin | |
| EP0348399B1 (fr) | Sorbine et peptides derives, elevant l'absorption par les muqueuses | |
| EP0367463A1 (en) | Calcitonin gene related peptide analogues | |
| JPH1080281A (ja) | 新規蛋白質及びその製造方法 | |
| JPH05208999A (ja) | セリンプロテアーゼインヒビターおよびこれを含有する医薬組成物 | |
| JP2619268B2 (ja) | 新規なペプチド硫酸エステル誘導体 | |
| KR920005659B1 (ko) | 인슐린 유도체의 제조방법 | |
| JPS62116597A (ja) | 人インシユリンの製造方法 | |
| JPH0680695A (ja) | ペプチド |