JPH0948791A

JPH0948791A - 新規生理活性物質ｎａ２２５９８ａ１，ａ２，ａ３，ａ４及びａ５、その製造法およびその用途

Info

Publication number: JPH0948791A
Application number: JP7199945A
Authority: JP
Inventors: Takaaki Nishigori; 隆昭錦織; Atsushi Kuwabara; 敦桑原; Yukimasa Uehara; 至雅上原; Shusuke Fukazawa; 秀輔深澤; Satoshi Mizuno; 左敏水野
Original assignee: KOKURITSU YOBOU EISEI KENKYUSHO; Nippon Kayaku Co Ltd; National Institutes of Health NIH
Current assignee: KOKURITSU YOBOU EISEI KENKYUSHO; Nippon Kayaku Co Ltd; National Institutes of Health NIH
Priority date: 1995-08-04
Filing date: 1995-08-04
Publication date: 1997-02-18
Anticipated expiration: 2015-08-04
Also published as: JP3726920B2

Abstract

(57)【要約】【課題】癌細胞に対して強い増殖抑制活性を有する新
規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4およびA5を提供す
る。【解決手段】新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及
びA5はストレプトミセスエスピー NA22598株（FERM P-
14686）の培養によって得られる。NA22598A1は分子式C
₂₀H₃₈N₈O₇、分子量502を、NA22598A2は分子式C₂₃H₄₃N₉O
₈、分子量573を、NA22598A3は分子式C₂₄H₄₅N₉O₈、分子
量587を、NA22598A4は分子式C₂₂H₄₂N₈O₇、分子量530
を、NA22598A5は分子式C₂₁H₄₀N₈O₇、分子量516を持つ化
合物である。これらの新規生理活性物質は、癌細胞に対
して強い制癌作用を有し、制癌剤などの医薬として有用
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規生理活性物質NA
22598A1,A2,A3,A4及びA5並びにそれらの塩、その製造
法、それを有効成分とする医薬並びに制癌剤、およびそ
の生産菌に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、制癌剤としては、アドリアマイシ
ン、アクチノマイシン等が使用されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
制癌剤は効力などの点で不十分であり、また毒性も高
く、更には耐性などの問題もあり、新しい制癌剤が求め
られている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは微生
物の代謝産物について種々検索した結果、ストレプトミ
セス（Streptomyces) 属に属する一菌株が新規生理活性
物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5を産生すること及び該生
理活性物質が優れた制癌活性を有することを見出した。
本発明は上記知見に基づいて完成されたものである。即
ち本発明は、新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及び
A5並びにそれらの塩に関するものである。更に、本発明
は、ストレプトミセス属に属し新規生理活性物質NA2259
8A1,A2,A3,A4及びA5を生産する能力を有する微生物を培
養し、培養物中に新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4
及びA5を生産、蓄積せしめ、次いでこれを採取する事を
特徴とする新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5
並びにそれらの塩の製造法に関するものである。更に、
本発明は、新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4又はA5
あるいはそれらの塩を有効成分として含有する医薬に関
するものである。更に、本発明は、新規生理活性物質NA
22598A1,A2,A3,A4又はA5あるいはそれらの塩を有効成分
として含有する制癌剤に関するものである。更に、本発
明は、ストレプトミセス属に属し新規生理活性物質NA22
598A1,A2,A3,A4又はA5を生産する能力を有する「NA2259
8 」株（生命工学工業技術研究所寄託番号FERM P-1468
6）又はその変異株に関するものである。

【０００５】以下に新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,
A4及びA5の理化学的性質を示す。生理活性物質NA22598A1 １）外観：無色粉末２）融点：190 〜195 ℃ ３）分子量：502 ４）分子式：C₂₀H₃₈N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₀H₃₉N₈O₇の計算値：503.2942 実測値：503.2943 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.14を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図１に示す。 ν_max:3371,2964,1731,1654,1589,1399cm^-1 １０）水素核磁気共鳴スペクトル（300MHz）：重水中で
測定したスペクトルを図２に示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.6(s),175.6(s),175.4(s),157.6(s),157.1(s),7
5.5(d),72.8(d),62.2(d),58.9(d),55.5(d),52.7(d),51.
7(t),51.0(d),37.3(t),31.8(d),29.5(t),28.4(t),20.1
(q),18.6(q),17.8(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
バリン（1:1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質

【０００６】生理活性物質NA22598A2 １）外観：無色粉末２）融点：195 〜205 ℃ ３）分子量：573 ４）分子式：C₂₃H₄₃N₉O₈ ５）HRFAB-MS： C₂₃H₄₄N₉O₈の計算値：574.3313 実測値：574.3310 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.14を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図３に示す。 ν_max:3386,2974,1734,1654,1594,1398cm^-1 １０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定したス
ペクトルを図４に示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：180.8(s),176.3(s),176.0(s),173.4(s),157.6(s),1
57.1(s),75.7(d),72.9(d),60.7(d),59.4(d),55.5(d),5
2.8(d),52.3(d),51.7(t),50.9(d),37.3(t),31.4(d),29.
6(t),28.8(t),19.8(q),18.8(q),18.8(q),17.9(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
バリン（2:1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質

【０００７】生理活性物質NA22598A3 １）外観：無色粉末２）融点：192 〜195 ℃ ３）分子量：587 ４）分子式：C₂₄H₄₅N₉O₈ ５）HRFAB-MS： C₂₄H₄₆N₉O₈の計算値：588.3470 実測値：588.3442 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.19を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図５に示す。 ν_max:3360,2967,1734,1654,1589,1400cm^-1 １０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定したス
ペクトルを図６に示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：180.8(s),176.4(s),176.2(s),173.5(s),157.6(s),1
57.2(s),75.8(d),72.9(d),59.9(d),59.6(d),55.6(d),5
3.0(d),52.3(d),51.7(t),50.8(d),37.4(t),37.4(d),29.
6(t),29.4(t),25.7(t),18.9(q),17.9(q),16.1(q),11.4
(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
イソロイシン（2 ：1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質

【０００８】生理活性物質NA22598A4 １）外観：無色粉末２）融点：190 〜210 ℃ ３）分子量：530 ４）分子式：C₂₂H₄₂N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₂H₄₃N₈O₇の計算値：531.3254 実測値：531.3292 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.21を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図７に示す。 ν_max:3360,2964,1731,1654,1587,1399cm^-1 １０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定したス
ペクトルを図８に示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.4(s),175.9(s),174.0(s),157.6(s),157.1(s),7
5.6(d),72.9(d),62.3(d),61.1(d),59.1(d),55.4(d),52.
7(d),51.7(t),37.3(t),31.8(d),31.3(d),29.7(t),28.5
(t),20.1(q),19.8(q),19.1(q),18.8(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、バリンが存
在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質

【０００９】生理活性物質NA22598A5 １）外観：無色粉末２）融点：195 〜200 ℃ ３）分子量：516 ４）分子式：C₂₁H₄₀N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₁H₄₁N₈O₇の計算値：517.3099 実測値：517.3093 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.19を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図９に示す。 ν_max:3368,2964,1730,1654,1577,1399cm^-1 １０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中で測定したス
ペクトルを図１０に示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.7(s),176.0(s),175.3(s),157.6(s),157.2(s),7
5.7(d),72.9(d),61.4(d),59.6(d),55.5(d),52.9(d),51.
7(t),51.0(d),38.2(d),37.3(t),29.6(t),28.9(t),25.9
(t),17.8(q),16.6(q),12.0(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
イソロイシン（1 ：1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質本発明の新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5は
酸又はアルカリと塩を形成していてもよく、かかる塩と
しては、塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸；ｐ−トルエン
スルホン酸、クエン酸、コハク酸などの有機酸等との酸
付加塩があげられる。またナトリウム、カリウムなどの
アルカリ金属；カルシウムなどのアルカリ土類金属等と
の塩があげられる。

【００１０】

【発明の実施の形態】上記新規生理活性物質NA22598A1,
A2,A3,A4及びA5はストレプトミセス属に属するNA22598A
1,A2,A3,A4及びA5生産菌を培養し、新規生理活性物質NA
22598A1,A2,A3,A4及びA5を生成蓄積せしめ、この培養物
より新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5を採取
することにより得られる。新規生理活性物質NA22598A1,
A2,A3,A4及びA5の生産菌の代表的な一例であるストレプ
トミセスエスピー（Streptomyces sp.)NA22598は次の
菌学的性質を有する。

【００１１】１．形態的性質 27℃で二週間後に観察した結果、気菌糸は単純分岐し、
その先端はループ状あるいは、らせん状で、輪生枝の形
成は認められない。また、胞子嚢及び遊走子も認められ
ない。胞子表面は平滑または粗面で、胞子はシリンダー
型で、大きさ0.7 〜0.9 × 0.9〜1.3 μｍである。ま
た、10個以上の連鎖をなして胞子が形成される。

【００１２】２．各種培地における生育各種培地上、27℃、二週間後の生育状態を下記表１に示
す。

【００１３】

【表１】

【００１４】３．生理学的性質生育適度範囲： 27〜37℃ 硝酸塩の還元：陰性スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地）：
陽性脱脂牛乳の凝固：陰性脱脂牛乳のペプトン化：陽性メラニン様色素の生成：陽性４．炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地
上）Ｌ−アラビノース＋Ｄ−キシロース＋Ｄ−グルコース＋Ｄ−フラクトース＋シュクロース − イノシトール＋Ｌ−ラムノース＋ラフィノース − Ｄ−マンニトール＋

【００１５】５．細胞壁中のジアミノピメリン酸 LL- ジアミノピメリン酸である。以上を要約すると、本
菌株は細胞壁がLL- ジアミノピメリン酸であり、また、
メナキノンの種類は、主にMK-9(H6),MK-9(H8) である。
インターナショナル・ストレプトミセス属・プロジェク
ト（略称ISP ）の方法によれば、胞子形成菌糸の形態
は、セクション・スパイラルズ（Spairales ）に属し胞
子表面は平滑あるいは粗面で、成熟した菌糸の色は灰色
系統（Gray color-series)で、メラニン様色素を生産
し、培地中に茶色味を呈する。また、基生菌糸の色はう
す黄茶〜黄茶を呈する。炭素源としてはL-アラビノー
ス、D-グルコース、D-フラクトース、D-キシロース、イ
ノシトール、D-マンニトール、L-ラムノースを利用し、
シュクロース、ラフィノースは、利用しない。

【００１６】以上の性質をもとにアール・イー・ブッフ
ァナン・アンド・エヌ・イー・ギボンズ編、バージーズ
・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロ
ジー（Bergey's Manual of Determinative Bacteriolog
y)第8 版、1974年に従って検索を行った結果、上記NA22
598 株はストレプトミセス属に属することが判明した。
よって、本菌をストレプトミセスエスピー（Streptom
yces sp.）NA22598 と命名した。該菌株は、工業技術院
生命工学工業技術研究所に平成６年１２月５日付で寄託
され、受託され、受託番号としてFERM P-14686が付与さ
れている。

【００１７】本発明に用いるストレプトミセス属に属す
る菌株は他のストレプトミセス属の菌株と同様、その性
状が変化しやすく、例えば、紫外線、エックス線および
薬品などを用いる人工的な変異手段で容易に変異しうる
ものであり、どの様な変異株であっても本発明の対象と
する生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5の生産能を
有するものは、すべて本発明に使用する事ができる。

【００１８】本発明により新規生理活性物質NA22598A1,
A2,A3,A4及びA5を製造するには、まず前記菌株を放線菌
が利用し得る栄養物を含有する培地で好気的に培養す
る。栄養源としては、従来から放線菌の培養に利用され
ている公知のものが使用でき、例えば炭素源としてはグ
ルコース、フラクトース、グリセリン、シュクロース、
デキストリン、ガラクトース、有機酸などを単独かまた
は組み合わせて用いることができる。

【００１９】無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロテイン、オートミールなどを単独または組み
合わせて用いることができる。

【００２０】その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩
化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加えることができ
るほか有機物、例えばアミノ酸類、ビタミン類、核酸類
や無機物を適当に添加することができる。培養法として
は液体培養法、特に深部攪拌培養法が最も適している。
培養温度は20℃〜45℃、pHは微酸性ないし微アルカリ性
で培養を行うことが望ましい。

【００２１】液体培養では通常3 〜5 日間培養を行うと
新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5物質が培養
液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が最大に達し
たときに培養を停止し、ろ液と菌体とに分離し、ろ液よ
り目的物を精製単離する。ろ液からの本物質の精製単離
には一般に微生物代謝産物をその培養ろ液から単離する
ために、用いられる分離精製の方法が利用される。

【００２２】即ち、培養物をろ過法によりろ液と菌体と
に分離する。ろ液を適当な吸着剤、例えば活性炭、Sepa
beas SP-207 （Mitsubishi Chemical Industries）への
直接吸着によって本物質を培養ろ液から分離できる。NA
22598A1,A2,A3,A4及びA5は、これらの吸着剤から、水、
メタノール、アセトン、またはこれらの適当な混合液あ
るいは、酸性ないしアルカリ性溶液のような移動相を用
いて溶出させることができる。

【００２３】上記の活性溶出液を濃縮し、新規生理活性
物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5を含む油状物質を得る。
この粗物質はさらに水溶性物質の精製に通常用いられる
公知の方法、例えば、1)Sephadex LH-20、またはG シリ
ーズ（Pharmacia Fine Chemicals AB ）により溶出液と
して水、メタノールまたはこれらの適当な混合液あるい
は、酸性ないしアルカリ性溶液を用いたゲルろ過クロマ
トグラフィー； 2)Dowex 50W X8(H⁺) （Dow Chemicals ）を用い、溶出
液をアンモニア水としたイオン交換クロマトグラフィ
ー； 3)SP-Toyopearl 550C (NH₄ ⁺) （東ソー）を用い、溶出
液を塩化アンモニウム水溶液としたイオン交換ゲルクロ
マトグラフィー； 4)QAE-Toyopearl 550C（OH^-）（東ソー）を用い、溶出
液をアンモニア水としたイオン交換ゲルクロマトグラフ
ィーによる精製法；を単独あるいは組み合わせることに
より精製する。精製に好適な例としてSP-Toyopearl 550
C (NH₄ ⁺) を用い、塩化アンモニウム水溶液のグラジエ
ント溶出（0 〜1.0M）を行い、得られた活性画分を活性
炭などを用いて脱塩し、さらに活性画分をQAE-Toyopear
l 550C（OH^-）を用い、アンモニア水のグラジエント溶
出（0 〜2.8 ％）によるクロマトグラフィーを行う。こ
こで得られた活性画分を脱塩後、分取高速液体クロマト
グラフィー（カラム：CAPCELL PAK UG120,資生堂社製）
（移動相：50mMリン酸水素二ナトリウム／アセトニトリ
ル(95/5),pH9.2）にて精製し、脱塩後、凍結乾燥して新
規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5を無色粉末と
して得ることができる。

【００２４】本発明の新規生理活性物質NA22598A1,A2,A
3,A4及びA5並びにそれらの塩は、制癌作用を有するの
で、制癌剤などの医薬として使用できる。医薬品として
使用する場合の製剤化および投与方法は従来公知の種々
の方法が適用できる。すなわち、投与方法として注射、
経口、直腸投与などが可能である。製剤形態としては注
射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座剤などの形態がとり得
る。

【００２５】製剤化の際に新規生理活性物質NA22598A1,
A2,A3,A4及びA5並びにそれらの塩に悪影響を与えない限
り、医薬用に用いられる種々の補助剤、すなわち、担体
やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳
化剤が必要に応じて使用されうる。製剤に於いて、新規
生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5並びにそれらの
塩の含量は製剤形態等により広範囲にかえることが可能
であり、一般には新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4
及びA5を0.01〜100%（重量）、好ましくは0.10〜70%
（重量）含有し、残りは通常医薬用に使用される担体そ
の他補助剤からなる。

【００２６】新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及び
A5並びにそれらの塩の投与量は症状等により異なるが、
成人１人１日当たり0.01〜800mg 程度である。連投を必
要とする場合には１日当たり使用量を抑えることが望ま
しい。

【００２７】

【実施例】以下、本発明の実施例及び試験例を示すが、
これは単なる一例示であって何等本発明を限定するもの
ではなく、種々の変法が可能である。

【００２８】実施例１新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5の単離・精
製（１）発酵ロータリー型振盪機用500ml 容三角フラスコにグリセリ
ン2.0 ％、アジプロン（味の素社製）2.0 ％、塩化ナト
リウム0.3 ％の培地（pH7.0 ）100ml を分注し、120
℃、20分間オートクレーブ滅菌した。これに新規生理活
性物質の生産菌であるNA22598 株（FERM P-14686）の1
白金耳を接種し、27℃、220 回転／分、2日間振盪し、
種培養とした。

【００２９】本培養はロータリー型振盪機用500ml 容三
角フラスコにガラクトース2.0 ％、デキストリン（赤玉
No.3）2.0 ％、バクトソイトン1.0 ％、コーン・スチー
プ・リカー0.5 ％、硫酸アンモニウム0.2 ％、炭酸カル
シウム0.2 ％の培地（pH7.4）100ml を分注し、120
℃、20分間オートクレーブ滅菌したフラスコに前記種培
養液1ml を移植し、27℃、220 回転／分の条件下で5 日
振盪培養を行った。培養液を吸引ろ過し、ろ液と菌体と
に分別した。

【００３０】（２）精製得られたろ液（18L ）をDowex 50W X8(H⁺) 2000mlに吸
着させ、2.8 ％アンモニア水で溶出した。これを濃縮
後、Amberlite CG-50 (H⁺) 800ml に吸着し、2.8 ％ア
ンモニア水で溶出した。これを濃縮後、SP-Toyopearl 5
50C (NH₄ ⁺) 300mlに吸着し、0 〜1.0M- 塩化アンモニ
ウム溶液のグラジエント溶出を行い、活性画分を得た。
これを脱塩後、QAE-Toyopearl 550C (OH^-) に吸着し、
0 〜2.8 ％- アンモニア水のグラジエント溶出を行い、
活性画分を得た。この活性画分を、さらに分取高速液体
クロマトグラフィー（カラム：CAPCELL PAK UG120,φ20
mmX250mm, 資生堂社製）（移動相：50mMリン酸水素二ナ
トリウム／アセトニトリル(95/5),pH9.2, 流速7.0ml/mi
n ）にて精製し、脱塩後、凍結乾燥して新規生理活性物
質NA22598A1 （14mg）,A2 （26mg）,A3 （11mg）,A4
（7mg ）及びA5（5mg ）の無色粉末を得た。これらの新
規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5について、そ
れぞれ赤外部吸収スペクトル及び水素核磁気共鳴スペク
トルを測定し、図１〜図１０に示すスペクトルを得た。
また、これらの新規生理活性物質は、それぞれ、前記し
た通りの理化学的性質を示した。

【００３１】試験例１細胞増殖抑制活性の測定新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5のヒト卵巣
癌細胞（A2780 ）に対する増殖抑制活性を検討した。ヒ
ト卵巣癌細胞を 2×10⁴個/ml の割合で96穴テストプレ
ートに 200μl 接種し、37℃、5% CO₂インキュベーター
内で24時間培養した後、新規生理活性物質NA22598A1,A
2,A3,A4及びA5をそれぞれ種々の濃度で培養液に添加し
た。添加72時間後、生細胞数をMTT 法により測定し、新
規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5の種々の濃度
におけるヒト卵巣癌細胞の増殖抑制率を求めた。結果を
表2 に示した。

【００３２】

【表２】

【００３３】試験例２細胞増殖抑制活性の測定新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5のヒト大腸
癌細胞（DLD1）に対する増殖抑制活性を検討した。ヒト
大腸癌細胞を 1×10⁴個/ml の割合で96穴テストプレー
トに 200 ml 接種し、37℃、5% CO₂インキュベーター内
で24時間培養した後、新規生理活性物質NA22598A1,A2,A
3,A4及びA5をそれぞれ種々の濃度で培養液に添加した。
添加96時間後、生細胞数をMTT 法により測定し、新規生
理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5の種々の濃度にお
けるヒト大腸癌細胞の増殖抑制率を求めた。結果を表3
に示した。

【００３４】

【表３】

【００３５】試験例３急性毒性マウスに対する新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及
びA5の急性毒性は静脈内投与 (iv) に於いて、10mg/Kg
で死亡、3mg/Kgで投与後、七日間生存した。

【００３６】

【発明の効果】上記の表２および表３に示した様に、新
規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5はヒト卵巣癌
細胞（A2780 ）およびヒト大腸癌細胞（DLD1）に対して
強い増殖抑制活性を有し、制癌効果を示す。上記のよう
に新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5並びにそ
れらの塩は、制癌作用を有するので、制癌剤などの医薬
として使用できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】NA22598A1 の臭化カリウム錠剤で測定した赤外
部吸収スペクトル

【図２】NA22598A1 の重水中（300MHz）で測定した水素
核磁気共鳴スペクトル

【図３】NA22598A2 の臭化カリウム錠剤で測定した赤外
部吸収スペクトル

【図４】NA22598A2 の重水中（300MHz）で測定した水素
核磁気共鳴スペクトル

【図５】NA22598A3 の臭化カリウム錠剤で測定した赤外
部吸収スペクトル

【図６】NA22598A3 の重水中（300MHz）で測定した水素
核磁気共鳴スペクトル

【図７】NA22598A4 の臭化カリウム錠剤で測定した赤外
部吸収スペクトル

【図８】NA22598A4 の重水中（300MHz）で測定した水素
核磁気共鳴スペクトル

【図９】NA22598A5 の臭化カリウム錠剤で測定した赤外
部吸収スペクトル

【図１０】NA22598A5 の重水中（300MHz）で測定した水
素核磁気共鳴スペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者上原至雅東京都町田市金井８丁目10番36号 (72)発明者深澤秀輔東京都田無市本町７丁目18番26号 (72)発明者水野左敏千葉県船橋市夏見台３丁目10番３−401号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の理化学的性質を示す新規生理活性
物質NA22598A1 又はその塩：１）外観：無色粉末２）融点：190 〜195 ℃ ３）分子量：502 ４）分子式：C₂₀H₃₈N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₀H₃₉N₈O₇の計算値：503.2942 実測値：503.2943 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.14を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤での測定
により図１のスペクトルを示す。１０）水素核磁気共鳴スペクトル（300MHz）：重水中で
の測定により図２のスペクトルを示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.6(s),175.6(s),175.4(s),157.6(s),157.1(s),7
5.5(d),72.8(d),62.2(d),58.9(d),55.5(d),52.7(d),51.
7(t),51.0(d),37.3(t),31.8(d),29.5(t),28.4(t),20.1
(q),18.6(q),17.8(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
バリン（1:1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質。
【請求項２】下記の理化学的性質を示す新規生理活性
物質NA22598A2 又はその塩：１）外観：無色粉末２）融点：195 〜205 ℃ ３）分子量：573 ４）分子式：C₂₃H₄₃N₉O₈ ５）HRFAB-MS： C₂₃H₄₄N₉O₈の計算値：574.3313 実測値：574.3310 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.14を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤での測定
により図３のスペクトルを示す。１０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中での測定によ
り図４のスペクトルを示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：180.8(s),176.3(s),176.0(s),173.4(s),157.6(s),1
57.1(s),75.7(d),72.9(d),60.7(d),59.4(d),55.5(d),5
2.8(d),52.3(d),51.7(t),50.9(d),37.3(t),31.4(d),29.
6(t),28.8(t),19.8(q),18.8(q),18.8(q),17.9(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
バリン（2:1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質。
【請求項３】下記の理化学的性質を示す新規生理活性
物質NA22598A3 又はその塩：１）外観：無色粉末２）融点：192 〜195 ℃ ３）分子量：587 ４）分子式：C₂₄H₄₅N₉O₈ ５）HRFAB-MS： C₂₄H₄₆N₉O₈の計算値：588.3470 実測値：588.3442 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.19を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤での測定
により図５のスペクトルを示す。１０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中での測定によ
り図６のスペクトルを示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：180.8(s),176.4(s),176.2(s),173.5(s),157.6(s),1
57.2(s),75.8(d),72.9(d),59.9(d),59.6(d),55.6(d),5
3.0(d),52.3(d),51.7(t),50.8(d),37.4(t),37.4(d),29.
6(t),29.4(t),25.7(t),18.9(q),17.9(q),16.1(q),11.4
(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
イソロイシン（2 ：1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質。
【請求項４】下記の理化学的性質を示す新規生理活性
物質NA22598A4 又はその塩：１）外観：無色粉末２）融点：190 〜210 ℃ ３）分子量：530 ４）分子式：C₂₂H₄₂N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₂H₄₃N₈O₇の計算値：531.3254 実測値：531.3292 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.21を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤での測定
により図７のスペクトルを示す。１０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中での測定によ
り図８のスペクトルを示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.4(s),175.9(s),174.0(s),157.6(s),157.1(s),7
5.6(d),72.9(d),62.3(d),61.1(d),59.1(d),55.4(d),52.
7(d),51.7(t),37.3(t),31.8(d),31.3(d),29.7(t),28.5
(t),20.1(q),19.8(q),19.1(q),18.8(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、バリンが存
在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質。
【請求項５】下記の理化学的性質を示す新規生理活性
物質NA22598A5 又はその塩：１）外観：無色粉末２）融点：195 〜200 ℃ ３）分子量：516 ４）分子式：C₂₁H₄₀N₈O₇ ５）HRFAB-MS： C₂₁H₄₁N₈O₇の計算値：517.3099 実測値：517.3093 ６）溶解性：易溶：ジメチルスルホキシド、水可溶：メタノール不溶：ヘキサン、クロロホルム７）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ｎ
−ブタノール−酢酸−水（4:1:2 ）の展開溶媒で0.19を
示す。８）紫外部吸収スペクトル：水溶液中末端吸収を示す。９）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤での測定
により図９のスペクトルを示す。１０）水素核磁気共鳴スペクトル：重水中での測定によ
り図１０のスペクトルを示す。１１）炭素核磁気共鳴スペクトル（75MHz,重水中）：
δ：179.7(s),176.0(s),175.3(s),157.6(s),157.2(s),7
5.7(d),72.9(d),61.4(d),59.6(d),55.5(d),52.9(d),51.
7(t),51.0(d),38.2(d),37.3(t),29.6(t),28.9(t),25.9
(t),17.8(q),16.6(q),12.0(q)ppm １２）アミノ酸分析：アミノ酸分析の結果、アラニン、
イソロイシン（1 ：1 ）が存在する。１３）呈色反応：陽性：ニンヒドリン、リンモリブデン酸硫酸、エーリッ
ヒ陰性：バニリン硫酸、ヨウ素１４）塩基性、酸性、中性の区別：塩基性物質。
【請求項６】ストレプトミセス属に属し新規生理活性
物質NA22598A1,A2,A3,A4及びA5を生産する能力を有する
微生物を培養し、培養物中に新規生理活性物質NA22598A
1,A2,A3,A4及びA5を生産、蓄積せしめ、次いでこれを採
取する事を特徴とする新規生理活性物質NA22598A1,A2,A
3,A4及びA5並びにそれらの塩の製造法。
【請求項７】新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4又
はA5あるいはそれらの塩を有効成分として含有する医
薬。
【請求項８】新規生理活性物質NA22598A1,A2,A3,A4又
はA5あるいはそれらの塩を有効成分として含有する制癌
剤。
【請求項９】ストレプトミセス属に属し新規生理活性
物質NA22598A1,A2,A3,A4又はA5を生産する能力を有する
「NA22598 」株（生命工学工業技術研究所寄託番号FERM
P-14686）又はその変異株。