JPH0449277A

JPH0449277A - 新規物質ｃｃ１２

Info

Publication number: JPH0449277A
Application number: JP16066690A
Authority: JP
Inventors: Haruo Seto; 治男瀬戸; Yoichi Hayakawa; 洋一早川
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1990-06-19
Filing date: 1990-06-19
Publication date: 1992-02-18
Anticipated expiration: 2009-06-15
Also published as: JPH0645593B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は抗菌性を有する新規物質ＣＣ１２およびその製
造法に関する。

（従来の技術）従来、テトラミン酸誘導体としては例えば、チランダマ
イシン（ｔｉｒａｎｄａｍｙｃｉｎ；　Ｎｏ１ｔｅ、Ｍ
、Ｊ、　ｅｔａｌ、、　Ｊ、Ｃ，ｈｅｍ、ｓｏｃ、Ｐｅ
ｒｋｉｎ　ＴｒａｎｓＩ、８５巻、１０５７−１０６５
頁（１９８０））が知られている。

（発明が解決しようとする課題）本発明者らは、土壌から分離したストレプトミセス属に
属するストレプトミセス・エスピーＳＡＮＫ　６０３９
０株の培養物から、抗菌性を有する新規物質ＣＣ’１２
が生産されることを見出して本発明を完成した。

（課題を解決するための手段）本発明の新規物質ＣＣ１２は下記の構造式および理化学
的性状を有する。

１）構造式２）外観；　無色粉末３）融点；　　１６１−１６６℃ ４）比旋光度：　［α］。＋７５．ド（ｃ　　１．０゜
メタノール中）５）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶、アセトンに微溶、
酢酸エチル、クロロホルム、ヘキサンに不溶。

６）薄層クロマトグラフィｍ： ■Ｒｆ値；　　０．２０吸着剤ニジリカゲル６０　Ｆ２５４　（商品名、メルク
社製）展開溶剤；クロロホルム−メタノール−酢酸−水（８：
４：１：１） ■Ｒｆ値；　　０．２２吸着剤ニジリカゲル６０　Ｆ２５４　（商品名、メルク
社製）展開溶剤；クロロホルム−メタノール−２９％アンモニ
ア水（３：３：１）７）高分解能マススペクトル（ｍ／ｚ）：８５５．５４
８３　（Ｍ＋Ｈ）” ８）元素分析：、（％）実測値　Ｃ６４，３２、Ｈ８，３７、Ｎ　６．３６．０
２０．００計算値　Ｃ６６，０２、Ｈ８，７２、Ｎ　６．５５．０
１８．７１９）分子式：　　Ｃ４７Ｈ７４Ｎ　４０１゜１０）紫外
吸収スペクトル：λ、、、ａｘ　ｎｍ（Ｅ）■メタノー
ル中２０７　（１９５００）　、２４５　（９９００）　、
　２８２　（１００００）■０．０１規定塩酸−メタノ
ール中２０７　（１８９００）　、２５０　（６６００）　、
２８２　（９９００）■０．０１規定水酸化ナトリウム
ーメタノール中２０８　（１９９００）　、２４５　（
９７００）　、２８１　（９６００）１１）赤外吸収ス
ペクトルニジ。、ｘｃｍ”−’臭化カリウム（ＫＢｒ）
錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルは第１図に示す
通りである。

１２）’Ｈ−核磁気共鳴スベクトル＝　（δ：　　ｐｐ
ｍ）重メタノール中、５００　ＭＨｚで測定した核磁気
共鳴スペクトルは第２図に示す通りである。

１３）１３Ｃ−核磁気共鳴スベクトル：　（δ：　　ｐ
ｐｍ）重メタノール中、１２５　ＭＨｚで測定した核磁
気共鳴スペクトルは第３図に示す通りである。

１２．０　（ｑ）、　１２．０　（ｑ）、　１６．５　
（（］）、１７、ｉ　（ｑ）、　１７．９　（ｑ）、　
２３．４　（ｔ）、２３．４　（ｑ）、　２４．１　（
ｔ）、　２９．６　（ｔ）、２９．９　（ｔ）、　３２
．２　（ｔ）、　３３．６　（ｄ）、３６．７　（ｔ）
、　３７．４　（ｔ）、　３７．９　（ｔ）、３７．９
　（ｄ）、　３９．２　（ｔ）、　４１．７　（ｔ）、
４３．７　（ｄ）、　４４．０　（ｄ）、　４５．０　
（ｄ）、４８．２　（ｔ）、　５０．７　（ｔ）、　５
４．５　（ｓ）、５７．６　（ｄ）、　７０．２　（ｄ
）、　７１．１　（ｄ）、７３．７　（ｄ）、　７５．
５　（ｄ）、　７７．６　（ｄ）、７８．３　（ｄ）、
　８３．７　（ｄ）、　　１０３．０　（ｓ）、１２０
．２　（ｄ）、１２３．０　（ｄ）、１２４．０　（ｄ
）、１２９．８　（ｒＪ）、１３４．３　（ｄ）、１３
４．３　（ｄ）、１３５．０　（ｄ）、１３９．７　（
ｓ）、　１４０．４　（ｓ）、１４１．１　（ｓ）、１
５５．８　（ｓ）、ｉｇｌ、ｏ　（ｓ）、１９２．３　
（ｓ）、２０４．０　（ｓ）、本発明の新規物質ＣＣ１
２は種々の異性体を有する。前記式においては、これら
の異性体および異性体の混合物がすべて単一の式で示さ
れている。

従って、本発明においてはこれらの異性体およびこれら
の異性体の混合物をもすべて含むものである。

本発明の新規物質ＣＣ１２は、常法にしたがって塩とす
ることができる。そのような塩としては例えばリチウム
、ナトリウム、カリウムのようなアルカリ金属；カルシ
ウム、バリウムのようなアルカリ土類金属；アルミニウ
ム；またはリジン、アルギニンのような塩基性アミノ酸
；などの塩基：または塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸
、硝酸のような無機酸；酢酸、シュウ酸、マレイン酸、
リンゴ酸、コハク酸、安息香酸のような有機酸；などの
酸：との塩をあげることができる。このような塩のうち
、好適には薬理上許容される塩である。

新規物質ＣＣ１２の生産菌であるストレプトミセス・エ
スピーＳＡＮＫ　６０３９０株は青森県下北郡大畑町で
採取した土壌から分離されたものであり、その菌学的性
状は次の通りである。

１、形態学的特徴ＳＡＮＫ　６０３９０株は菌株同定用寒天培地上、２８
℃、フないし１４日間の培養において、比較的良好に生
育する。基生菌糸は良好に伸長、分岐し、薄黄味橙色を
示すが断裂やノカルデイア様のジグザグ伸長は観察され
ない。気菌糸は比較的良好に形成し、茶味白、明るい茶
味灰ないし、オリーブ灰色を示す。気菌糸の先端には１
０〜５０個または５０個以上の胞子鎖を形成し、螺旋状
を示す。胞子の表面は平滑状である。胞子柄の着生は気
菌糸上のみであり、胞子のう、べん毛胞子、菌核、車軸
分岐等の特殊器官は認められない。

２、各種培養基上の諸性質各種培養基上で２８℃、１４日間培養後の性状は次表に
示した通りである。色調の表示は日本色彩研究新版″標
準色表″のカラーチップ・ナンバーをあられす。

シュクロース・硝酸塩寒天Ｇ：へＭニゲルコース・アスパラギン寒天Ｒ：ＳＰ二Ｇ＝八Ｍ：Ｒ：ＳＰ二Ｇ：グリセリン・アスパラギン寒天（ＩＳＰ　５）　　ＡＭ　：Ｒ：良好、平坦、薄黄味橙余り良くない、ビロード状、明るい茶味白４黄法条（４−８−９）産生ぜず良好、平坦、薄黄味橙僅かに形成、白４黄法条（４−８−８）産生ぜず非常に良好、平坦、薄黄法条（４−８−９）良好に形成、ビロード状、４黄法条（２−７−９）４黄法条（６−８−９）澱粉・無機塩寒天（ＩＳＰ　４）チロシン寒天（ＩＳＰ　７）栄養寒天（ＤＩＦＣＯ）Ｇ：　良好、平坦、４黄法条八Ｍ：　良好に形成、ビロード状、茶味白（１−６−６）Ｒ：　４黄法条（６−８−９）ＳＰ：　産生せずＧ：　非常に良好、平坦、薄黄法条（４−８−９）八Ｍ：　良好に形成、ビロード状、４黄法条（２−７−９）Ｒ：　４黄法条（６−８−９）ＳＰ：　産生せずＧ：　良好、平坦、薄黄味橙へＭ二　余り良くない、ビロード状、白Ｒ：　４黄法条（４−８−９）イーストエキ　　Ｇニス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ　２）　　ＡＭ　：オートミール寒天（ＩＳＰ　３）Ｒ：ＳＰ二Ｇ　：八Ｍ：Ｒ：ＳＰ：水寒天Ｇ：八Ｍ：Ｒ：非常に良好、平坦、４黄法条（４−８−９）豊富に形成、ビロード状、オリーブ灰（１−６−１０）黄法条（８−７−９）産生ぜず良好、平坦、４黄法条豊富に形成、ビロード状、茶味白（１−６−６）４黄法条（４−７−１０）産生ぜず良くない、平坦、薄黄味橙（２−９−９）僅かに形成、明るい茶味灰（２−７−８）明るい茶味灰（２−８−８）ポテトエキス・　Ｇ：　余り良くない、平坦、人参エキ
ス寒天　　　　薄黄味橙（２−９−９）ＡＭ：　良好、
ビロード状、灰味茶（４−５−６）Ｒ：　４黄法条（２−７−９）ＳＰ：　産生せずＧ：生育、　　ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、　　　ＳＰ：可溶性色素３、生理学的性質２８℃で培養後、２ないし２１日間に観察したＳＡＮＫ
　６０３９０株の生理学的性質は次表に示したとうりで
ある。

澱粉の氷解　　　　　　　　　　　　　陽　性ゼラチン
の液化　　　　　　　　　　　陽　性硝酸塩の還元　　
　　　　　　　　　　陽　性ミルクの凝固　　　　　　
　　　　　　陽　性ミルクのペプトン化　　　　　　　
　　陽　性メラニン様色素生産性（培地１）＊　　陰　
性（培地２）木　　陰　性カゼイン　　　　　　陰　性チロシン　　　　　　　陽　性キサンチン　　　　　　陽　性生育温度範囲（培地３）＊　　　　　　　１５〜３６℃
食塩耐性　　　　　　　　　　　　　　７％＊：培地１
；トリプトン・イーストエキス・ブロス（ＩＳＰ　１）２；チロシン寒天（ＩＳＰ　７）３；イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ　２）また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地（ＩＳＰ９）を
使用して、２８℃、１４日間培養後に観察したＳＡＮＫ
　６０３９０株の炭素源の資化性は次表に示すとうりで
ある。

Ｄ−グルコース　　＋　　Ｄ−フルクトース　±Ｌ−ア
ラビノース　＋　　Ｌ−ラムノース　　±Ｄ−キシロー
ス　　士　　シュクロース　　　＋イノシトール　　　
士　　ラフィノース　　　＋Ｄ−マンニトール　−　　
対　照基質分解性ＳＡＮＫ　６０３９０株の細胞壁はビー・ペソカーらの
方法［Ｂ、　Ｂｅｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ。

１２巻、４２１〜４２３頁、１９８４年〕に従い検討し
た結果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸およびグリシンが検
出されたことから、細胞壁タイプ■型であることが確認
された。また、ＳＡＮＫ　６０３９０株の全細胞壁中の
糖成分をエム・ピー・レシエバリエの方法［Ｍ、　Ｐ、
　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ＆　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ、　７１巻、８３４頁、１９６８年］に従い検
討した結果、特徴的なパターンは認められなかった。

以上のことから、本菌株は放線菌の中でもストレプトミ
セス属に属することが判明したので、ストレプトミセス
０エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｓｐ＋）Ｓ
ＡＮＫ　６０３９０　　（微工研菌寄第１１５２３号；
　ＦＥＲＭ　Ｐ１１５２３　）と命名された。

なお、ＳＡＮＫ　６０３９０株の同定はＩＳＰ　Ｃジ・
インターナショナル・ストレプトミセス・プロジェクト
（Ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　Ｐｒｏｊｅｃｔ）〕基準、バーシーズ・
マニュアル（Ｂｅｒｇｅｙ　ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第
４巻、ジ・アクチノミセテス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）第２巻および放線菌に関する最近の文献
によって行った。

以上、ＣＣ１２の生産菌について説明したが、放線菌の
諸性質は一定したものではなく、自然的、人工的に容易
に変化することは周知の通りであり、本発明で使用しう
る菌株は、ストレプトミセス属に属するＣＣ１２を生産
するすべての菌株を包含するものである。

本発明の新規化合物ＣＣ１２は、ストレプトミセス属に
属するＣＣ１２生産菌を適当な培地で好気的に培養し、
培養物から目的物を採取することによって製造すること
ができる。

培地は、ＣＣ１２生産菌が利用しうる任意の栄養源を含
有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源と
してグルコース、シュークロース、マルトース、スター
チおよび油脂類などが使用でき、窒素源として大豆粉、
綿実粕、乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンステイープ
リカーなどの有機物ならびにアンモニウム塩または硝酸
塩、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび
塩化アンモニウムなどの無機物が利用できる。また、必
要に応じて、塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸塩、
重金属塩など無機塩類を添加することができる。発酵中
の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡剤、
例えばシリコン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は２０−３７℃が適当であるが、２５−３０℃が
好ましい。この方法でＣＣ１２の生産量は、振盪培養、
通気攪拌培養ともに培養４日間で最高に達する。

このようにしてＣＣ１２の蓄積された培養物が得られる
。培養物中では、ＣＣ１２はその一部は菌体中に存在す
るが、その大部分は培養濾液中に存在する。

このような培養物からＣＣ１２を採取するには、合目的
的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方法は
抽出の原理に基くものであって、具体的には、培養ろ液
中のＣＣ１２についてはこれを水不混和性のＣＣ１２用
溶媒、例えばブタノールなどで抽出する方法、あるいは
菌体内のＣＣ１２についてはろ過、遠心分離などで得た
菌体集体をメタノール、エタノール、アセトンなどで処
理して回収する方法などがある。菌体を分離せずに培養
物そのままを上記の抽出操作に付すこともできる。適当
な溶媒を用いた向流分配法も抽出の範晴に入れることが
できる。

培養物からＣＣ１２を採取する他のひとつの方法は吸着
の原理に基くものであって、既に液状となっているＣＣ
１２含有物、たとえば培養ろ液あるいは上記のようにし
て抽出操作を行うことによって得られる抽出液を対象と
して、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、活性炭、「
ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　　（商品名、三菱化成曲社製
）などを用いて目的のＣＣ１２を吸着させ、その後、適
当な溶媒にて溶離させることによってＣＣ１２を得るこ
とができる。このようにして得られたＣＣ１２溶液を減
圧濃縮乾固すれば、ＣＣ１２粗標品が得られる。

このようにして得られるＣＣ１２の粗標品をさらに精製
するためには、上記の抽出法および吸着法にゲルろ適法
、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて組合
せて必要回数行えばよい。

例えば、シリカゲルなどの吸着剤、［セファデックスＬ
Ｈ−２０４（商品名、ファルマシア社製）などのゲルろ
通則を用いたカラムクロマトグラフィ゛、ｒＹＭＣパッ
クｊ　（商品名、山村科学社製）などを用いた高速液体
クロマトグラフィーおよび向流分配法を適宜組合せて実
施することができる。

具体的には、例えば、ＣＣ１２粗標品を［セファデック
スＬＨ−２ＯＪカラムにイ寸し、メタノールで活性画分
を溶出させ、濃縮乾固するとＣＣ１２の純品が得られる
。

本発明のＣＣ１２は、文献未載の新規物質であり、動物
（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ等）に対して抗菌活性
を有し、抗菌剤として有用である。

したがって、本発明物質は抗菌剤もしくは感染症治療剤
として使用することができる。

抗菌剤としての本発明物質は合目的的な任意の投与経路
で、また採用投与経路によって決る剤型、例えば粉末、
顆粒、錠剤、カプセル剤、注射剤などの形態、で経口的
または非経口的に安全に投与することができる。薬剤と
しては、製薬上許容される担体あるいは希釈剤で希釈さ
れた形態が普通である。

本発明の物質を医薬として投与する場合、これを注射用
蒸留水または生理食塩水に溶解して注射する方法が代表
的なもののひとつとして挙げられる。具体的には、腹腔
内注射、皮下注射、静脈または動脈への血管内注射およ
び注射による局所投与などの方法がある。

本発明物質の投与量は、動物試験の結果および種々の状
況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに総
投与量が一定量を越えないように定められる。具体的な
投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、た
とえば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、併
用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて異なる
が、例えば、成人１日あたり０．０１〜５ｇを、症状に
応じて１回または数回に分けて投与するのが好ましい。

（実施例）次に実施例および試験例をあげて本発明をさらに具体的
に説明する。

実施例１．新規物質ＣＣ１２の生産１）培養使用した培地は、下記の組成の成分をＩＬの水に溶解し
て、ｐＨ７，０に調整したものである。

培地組成グリセリン　　　　　　２０　ｇモラセス　　　　　　　　１０　ｇカゼイン　　　　　　　　　５ｇポリペプトン　　　　　　１ｇ炭酸カルシウム　　　　　　４ｇ上記培地を１００　ｍｌずつ５００　ｍｌ容イボ付三角
フラスコに分注殺菌したものへ、ストレプトミセス・エ
スピーＳＡＮＫ　６０３９０株を接種し、２７℃にて４
日間、２００　ｒｐｍの回転培養を行った。

２）単離上記の条件で培養後、培養液２Ｌをろ過し、ろ液をダイ
アイオンＨＰ２０　（商品名、三菱化成■社製）カラム
（３ｃｍφＸ　２５　ｃｍ）に吸着させた。カラムを５
０％メタノールで洗浄後、５０％アセトン５００　ｍｌ
で溶出し、溶出液をＺＯＯｍｌまで濃縮した。これを２
００　ｍｌのブタノールで３回抽出し、濃縮後、シリカ
ゲル（商品名「ワコーゲルＣ２００Ｊ　、和光純薬工業
■社製）カラム（２ｃｍφｘ　２０　ｃｍ）に付し、ク
ロロホルム−メタノール−２９％アンモニア水（５：３
：１）で展開した。活性フラクションを濃縮して得られ
た　ＣＣ１２の粗粉末を少量のメタノールに溶解し、セ
ファデックスＬＨ−２０カラム（ファルマシア社製）（
２，５０ｍφＸ　５０　ｃｍ）中、メタノールでクロマ
トグラフィーを行なった。活性画分を濃縮乾固すること
により、２８　ｍｇのＣＣ１２の純品が得られた。

試験例１．抗菌スペクトル一般細菌に対するＣＣ１２の最小発育阻止濃度は普通寒
天培地（栄研化学■製）、カビに対してはサブロー寒天
培地（栄研化学■製）を用いて寒天培地希釈法によって
測定した。

スタフィロコッカス・７ウレウス　２０９ＰスタフイＤ
コツカス・７ウレウス　５６Ｒスタフイ■ゴツがス・ア
ウレウス　５３５（ＭＲ３Ａ）エンテＵ］ツカス・フェ
カリス　６８１エスシエリシ７・コリー　ＮＩＨＪエスシェリシ７・コリー　６０９クレフ”シェラ・二１モニエ　８０６７°ロチウス・７゛ルｈ゛クス　１４２０シユードモナ
ス・エルキ゛ノーサ　１００１キヤンシ゛り゛・フルヒ
゛カンス　ＳＣクリプトコツカス・ネｔフｔルマンス　
　５８０６３７スベル〜゛ルス・フミカ゛タス　　　　
　　１０５６９トリコフイトン・メンタク°゛■フイテ
ス　　　　ＳＣ３，１６，２６，２〉１００〉２００〉２００〉２００＞２００〉２００〉５０＞５０〉５０（発明の効果）このように、本発明の新規物質ＣＣ１−２は、細菌、特
にダラム陽性菌に対して抗菌作用を示し、抗菌剤として
有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＣＣ１２の赤外吸収スペクトルを示す。第２図は、同物質の１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを示す
。第３図は、同物質の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示
す。

Claims

【特許請求の範囲】１、次式で示される新規物質ＣＣ１２およびその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ２、ストレプトミセス属に属するＣＣ１２生産菌を培養
し、その培養物よりＣＣ１２を採取することを特徴とす
るＣＣ１２の製造法。３、請求項２、において、ストレプトミセス属に属する
ＣＣ１２生産菌がストレプトミセス・エスピーＳＡＮＫ
６０３９０株（微工研菌寄第１１５２３号；ＦＥＲＭＰ
−１１５２３）である製造法。