JPH09503511A - 細胞および血清タンパク質アンカー並びに接合体 - Google Patents

細胞および血清タンパク質アンカー並びに接合体

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JPH09503511A JP7511062A JP51106295A JPH09503511A JP H09503511 A JPH09503511 A JP H09503511A JP 7511062 A JP7511062 A JP 7511062A JP 51106295 A JP51106295 A JP 51106295A JP H09503511 A JPH09503511 A JP H09503511A
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Abstract

(57)【要約】 生理学的活性物質の延長された生体内寿命を提供するのに有用な新規二価性試薬が提供される。該試薬は、哺乳類宿主中の標的（例えば毒素、乱用薬物、微生物、自己反応性免疫細胞、感染または腫瘍細胞、抗原提示細胞等）に特異的な第一の結合メンバーが、長命血液成分（細胞、例えば赤血球、血小板または内皮細胞、および血漿タンパク質を包含する）に特異的な第二の結合メンバーに連結されている接合体を含んで成る。それらの接合体は、標的と血液成分とを結合するための標的結合メンバーの寿命と利用可能性を拡大し、それによって遊離標的濃度を減らし、標的の分布容積を変更し、増強された免疫応答部位に標的をターゲティングし、血流からの標的のクリアランスを促進し、または免疫原の刺激を延長することによる用途を見出す。

Description

【発明の詳細な説明】 細胞および血清タンパク質アンカー並びに接合体 序論 技術分野 本発明の分野は、宿主中の生理学的活性物質の寿命の延長である。背景 哺乳類の血流中に存在する物質の生物作用を制限することがしばしば所望され る。例えば毒素／毒物に暴露される場合には、毒素／毒物の作用の急速な緩和が 指示されることがある。あるいは、該物質は感染した宿主細胞、自己反応性、同 種反応性、異種反応性もしくは腫瘍性宿主細胞または感染性生物のような細胞性 のものかもしれない。 現在の血液療法は、例えば、血漿瀉血もしくは活性炭吸着、例えば抗生物質も しくは酵素を使った物質の破壊、または例えば抗体を使った標的の選択的結合に より、血液から該物質を除去することを含んでいる。これらの療法は、通常は、 毒素／毒物または細胞の有害作用に患者が暴露され、その結果宿主に相当な損傷 が既に起こってしまった後で用いられる。多くの状況では、血流中の治療レベル を維持するために薬剤の長期投与が必要である。薬剤の経口投与または静脈内注 射は、長期間に及ぶ準治療的投薬に次いで、治療レベルを越え且つ深刻な副作用 を伴う投薬となり得る。また、血流中に或る物質を長期間維持したいような状況 、例えば強力な免疫応答を獲得したい場合、免疫原が免疫系の継続的刺激に備え る形で連続して存在する場合がある。 従って、血流中の物質の連続維持に備える改良方法を提供するこ とができることに相当な関心があり、ここで、該物質の機能は血液由来物質の毒 性もしくは病原性の制限、生理学的活性物質の長期維持、または活性物質の長期 供給のためであることができる。 発明の要約 アンカーと生理学的活性存在物とを含んで成る二価性試薬または接合体が提供 される。ここで前記試薬は、宿主中の生理学的活性存在物の長期維持に備えるよ うに、細胞性または移動性血液タンパク質のいずれかの長命血液関連成分にアン カーによって結合される。それらの試薬は、予防的および治療的用途、抗体の生 産、内因性または外因性血液成分の生物学的有効濃度または活性の減少、および 生理学的活性化合物の長期投与が重要であるような他の状況において、広範な用 途を見出す。 標的は宿主由来であっても外来であってもよい。宿主標的としては、望ましく ない濃度で存在する細胞および血液化合物、例えば自己、同種または異種反応性 白血球、即ちマクロファージを含む白血球、感染細胞、血小板、腫瘍細胞、並び に過剰発現されたサイトカインおよびホルモンが挙げられる。外来標的としては 、毒素、毒物、乱用薬物、病原性感染性微生物などが挙げられる。 長命血液関連成分としては、長命血清タンパク質、赤血球、血小板または内皮 細胞が挙げられ、ここでアンカーは主に特定細胞に関連する１もしくは複数の表 面膜タンパク質にまたは可溶性タンパク質に特異的もしくは非特異的に結合する 。赤血球、血小板およびタンパク質の場合、接合体を生体内または生体外に投与 することができる。内皮細胞の場合、接合体を生体内に投与することができる。 特定の実施態様の記載 生理学的活性物質である標的結合メンバーの哺乳類宿主中での寿命を延長する ための方法と組成物であって、前記標的結合メンバーを長命血液関連存在物（通 常はタンパク質）に結合することによる方法と組成物が提供される。少なくとも 次の２つの活性成分を有するであろう試薬または接合体が使われる：(1)試薬を 長命血液関連存在物に結合するためのアンカー；および(2)前記アンカーによっ て長命血液関連存在物に直接的または間接的に結合される標的結合メンバー。長 命血液関連存在物は、細胞性のもの、例えば移動性細胞、例えば赤血球もしくは 血小板、即ち無核細胞、または固定細胞、例えば内皮細胞；または長期間に渡り 血液中に存在し且つ少なくとも約0.1μg/mlの最低濃度で存在する可溶性もしく は移動性タンパク質であることができる。この濃度条件を満たすタンパク質とし ては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチンおよび免疫グロブリン、 特にIgＭとIgＧが挙げられる。該タンパク質の半減期は少なくとも約12時間でな ければならない。 標的結合メンバーまたは生理学的活性物質は様々な機能に備えることができる 。それは、診断薬または治療薬として関心が持たれる抗血清またはモノクローナ ル抗体の製造のため、ワクチンの製造のため、あるいは有害な血液由来標的、例 えば病原体、有害物質または内因性因子に対する保護、予防または治療のための 免疫原として働くことができる。生理学的活性物質は、有害な血液由来物質と直 接反応することができ、単独でまたは内因性の系と協同して、例えば病原体また は有害な内因性細胞（例えばＴ細胞）または毒素に対する抗体と協同して、増殖 抑制活性、特に細胞毒性活性を有することができ、膜表面レセプターにより変換 されるシグナルを減少または抑制するためにそのようなレセプターとの特異的結 合活性を有す ることができ、溢出または漏出を抑制するために回帰性受容体インテグリンまた はアドレッシンに結合させることができ、あるいは宿主による標的の排出を増大 させるかまたは体内の別の区画に比べて体内の一区画の標的濃度を減少させるこ とを含む、標的の分布を変更することができる。 生理学的活性物質は生物学的有効濃度で提供され、この場合生理学的活性物質 は前記試薬の一部として結合形態で作用してもよく、または長命血液関連存在物 とは無関係に、長命血液成分から遊離後に可溶性物質として作用してもよい。長 命血液成分は生理学的活性の一部であることができ、例えば、標的に結合する赤 血球は該標的の排出作用を増大させることができる。 生理学的活性物質の「生物学的有効濃度」とは、手順の進行中に標的にとって 生物学的に利用可能である（bioavailable）物質濃度を意味する。標的の生物学 的有効濃度は、標的の生体内の作用部位における該標的の即座の生物学的利用可 能濃度を意味するだろう。大部分については、標的は少なくとも一部分は血流中 に分散され、溶液状態にあるかまたは血流の成分と会合し得る。よって、標的の 拡散、移動または遊走などを制限することによって標的が分離される部位に関し て該標的の分布容積を制限することにより、標的の有効濃度を減らすことができ る。生理学的活性物質は所望の結果を与えるように血流中の成分と相互作用する であろう。この相互作用は、所望の結果を達成するのに直接的であっても間接的 であってもよく、また特異的相互作用であっても非特異的相互作用であってもよ い。大部分については、非特異的相互作用は、生理学的物質が相互作用する存在 物のサブセットと一緒になって特異的な結果に備えるであろう。 開示される治療方法は、血液中に存在し且つ不適当な高い有効濃 度のためにまたは腫瘍性細胞の場合のようにどんな量で存在しても有害な生理学 的作用を有する場合がある、宿主由来のものと外来のもの（外因性または非宿主 を意味する）の両方の広範囲の標的に適用することができる。宿主由来の細胞性 標的としては、（臨床上の適応症と共に）：Ｔ細胞またはサブセット、例えばα IFN+，CD4+，CD8+，LFA1+等の細胞（自己免疫病、同種反応性、異種反応性およ び炎症）、Ｂ細胞またはサブセット、例えば前駆Ｂ細胞、CD5+，IgE+，IgM+等（ Ｂ細胞リンパ腫、異種移植、自己免疫、アナフィラキシー）、白血球、例えばマ クロファージおよび単球（炎症、骨髄性白血病）、他の白血球、例えば好中球、 好塩基球、ＮＫ細胞、好酸球、または同種もしくは異種反応性白血球等（炎症、 アナフィラキシー、移植拒絶）、幹細胞、例えばCD34+細胞（赤血球増加症）、 胎児赤血球、例えばRh+赤血球（Rh-母体中での妊娠後の抗Rh免疫の予防）、悪性 細胞（悪性；CALLA）または感染細胞、特にレトロウイルス、例えばＨＩＶに感 染した宿主細胞等が挙げられる。 宿主由来の非細胞性標的としては、クラスＩおよびクラスIIの可溶性ＨＬＡ、 並びに非古典クラスＩのＨＬＡ（Ｅ，ＦおよびＧ）（免疫調節の変更）、可溶性 ＴもしくはＢ細胞表面タンパク質、サイトカイン、インターロイキンおよび増殖 因子、例えばＩＬ１，２，３，４，６，10，13，14および15、可溶性ＩＬ２レセ プター、M-CSF，G-CSF，GM-CSF、血小板増殖因子、α，βおよびγ−インターフ ェロン、ＴＮＦ、ＮＧＦ、アラキドン酸代謝産物、例えばプロスタグランジン、 ロイコトリエン、トロンボキサンおよびプロスタシクリン（心血管性疾患）、免 疫グロブリン、例えば全IgＥ（アナフィラキシー）、特異的抗アレルゲンIgＥ、 自己または同種抗体（自己免疫または同種もしくは異種免疫）、Ig Fcレセプタ ーまたはFcレセプター結合因子、炭水化物（gal）、同種または異種拒絶 に関係する自然抗体、エリトロポイエチン、脈管形成因子、接着分子、ＭＩＦ、 ＭＡＦ、補体因子（調節因子を含む、古典経路および別経路）、ＰＡＦ、カルシ ウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、鉄等のイオン、酵素、例えばプ ロテアーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、ＤＮアーゼ、ＲＮアーゼ、リパーゼお よびコレステロールや他の脂質代謝に影響を与える他の酵素、エステラーゼ、デ ヒドロゲナーゼ、オキシダーゼ、ヒドロラーゼ、スルファターゼ、シクラーゼ、 トランスフェラーゼ、トランスアミナーゼ、アトリオペプチダーゼ、カルボキシ ラーゼおよびデカルボキシラーゼ並びにそれらの天然の基質または類似体、スー パーオキシドジスムターゼ、ホルモン、例えばＴＳＨ、ＦＳＨ、ＬＨ、チロキシ ン（Ｔ４とＴ３）、レニン、インスリン、アポリポタンパク質、ＬＤＬ、ＶＬＤ Ｌ、コルチゾール、アルドステロン、エストリオール、エストラジオール、プロ ゲステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）およ びそれの硫酸塩（ＤＨＥＡ−Ｓ）、カルシトニン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ） 、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、バソプレッシンおよび抗利尿ホルモン（ＡＤＨ ）、プロラクチン、ＡＣＴＨ、ＬＨＲＨ、ＴＨＲＨ、ＶＩＰ、カテコールアミン （アドレナリン、バニリルマンデリン酸等）、ブラジキニンおよび対応するそれ らのプロホルモン、代謝産物、リガンドまたは天然の細胞レセプターもしくは可 溶性レセプター、心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）を含む補因子、ビタミン Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，ＥおよびＫ、セロトニン、凝固因子、例えばプロトロンビン、 トロンビン、フィブリン、フィブリノーゲン、第VIII因子、第ＸＩ因子、ビルブ ラント因子、プラスミノーゲン因子、例えばプラスミン、補体活性化因子、ＬＤ Ｌおよびそれのリガンド、尿酸等が挙げられる。ある態様では、ＤＡＦ、ＣＤ59 のような阻害因子、凝固を調節する化合物、例えば ヒルジン、ヒルログ、ヘメンチン、ＴＰＡ等、または他の化合物、例えば組織因 子、遺伝子療法のための核酸等、酵素拮抗剤である化合物、リガンドを結合する 化合物、例えばサイトカイン、ホルモン、炎症因子（ＰＡＦ、補完因子）を有す ることにより、補体に関連する特定の効果を提供することができる。 外来標的としては、薬物、特に乱用されやすい薬物、例えばヘロインおよび他 のアヘン剤、ＰＣＰ、バルビツレート、コカインおよびその誘導体、ベンゾジア ゼピン、精神興奮薬等、毒物、毒素、例えば水銀や鉛のような重金属、化学療法 剤、パラセタモール、ジゴキシン、ラジカル、砒素、細菌毒素、例えばＬＰＳお よび他のグラム陰性毒素、肺炎球菌毒素、毒素Ａ、破傷風毒素、ジフテリア毒素 および百日咳毒素、植物および海洋毒素、へび毒および他の毒液、毒性因子、例 えばアエロバクチン、放射性化合物もしくは病原性微生物またはそれらの断片、 例えば感染性ウイルス、例えばＡ，Ｂ，Ｃ，Ｅおよびδ型肝炎ウイルス、ＣＭＶ 、ＨＳＶ（１，２および６型）、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｈ ＩＶ−１，−２および他のレトロウイルス、アデノウイルス、ロタウイルス、イ ンフルエンザウイルス、リノウイルス、パルボウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウ イルス、ポリオウイルス、レオウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウ イルス、パポバウイルス、ポックスウイルスおよびピコルナウイルス、プリオン 、マラリア原虫組織因子、原生生物、例えばトキソプラスマ、フィラリア、カラ アザール、住血吸虫、赤痢アメーバおよびジアルジア、並びに細菌、特に敗血症 や院内感染の原因であるグラム陰性菌、例えば大腸菌、アシネトバクター属、シ ュードモナス属、プロテウス属およびクレブシエラ属、更にはグラム陽性菌、例 えばブドウ球菌および連鎖球菌等、髄膜炎菌およびマイコバクテリア属、クラミ ジア属、レジュネラ属並びに 嫌気性菌、真菌、例えばカンジダ菌、ニューモシスチス・カリニ（Pneumocystis carini ）、アスペルギルス、マイコプラズマ、例えばマイコプラズマ・ホミニ ス（Mycoplasma hominis）、およびウレアプラズマ・ウレアリティカム（Ureapl asma urealyticum ）が挙げられる。 既に指摘したように、本発明は抗体の産生に利用することができ、抗体が収集 されるかまたは脾細胞もしくは別のＢ細胞が不死化とモノクローナル抗体の産生 に使われる。ここで、該抗体は上記に指摘した多数の標的に向けられてもよく、 あるいは治療的投薬の監視のためまたは薬物もしくは乱用薬物の過投薬の処置等 のために、様々な薬物に向けられてもよい。また、本発明は、病原体または他の 有害な存在物に対して予防接種するために使うこともできる。その例として様々 な単核細胞微生物とウイルスが上記に記載されている。加えて、本発明は、抗原 提示細胞の適当な標的に備え、次いでそれをＴ細胞に差し出すことによりまたは Ｔ細胞の直接活性化に備えることにより、特定の標的に対してＴ細胞を活性化す るのに利用することができる。 長命血液成分の選択は、標的への結合の目的によって左右されるだろう。長命 血液成分の選択に依存して、標的は迅速に分離されそして体外に排泄されるか、 生物学的に不活性な形で分離されてゆっくり排除されるか、または時と共に分解 される。長命血液成分は固定されていても移動性であってもよく、即ち、内皮細 胞の場合のように所定の場所に実質的に固定されているか、または脈管系中で移 動性であり、脈管系中で実質的に均一のもしくは異なる分布を有し、そこで長命 血液成分は固形組織を含む特定の区画に優性的に存在することができる。長命血 液成分の選択は一部は標的の性質にも依存するだろう。例えば、細胞性病原物質 の効率的クリアランスには赤 血球が好ましく、一方で可溶性毒素を分離するには血清タンパク質成分、例えば アルブミンまたは免疫グロブリンが特に有用であり、そして再狭窄または血栓症 には内皮細胞が特に有用である。 長命血液成分は少なくとも約12時間、通常少なくとも約48時間、好ましくは少 なくとも約５日、望ましくは少なくとも約10日の半減期を有する。一般に、半減 期は、化合物を同位体（例えば131Ｉ，125Ｉ，Ｔｃ，51Ｃｒ，3Ｈ等）または蛍 光色素で標識し、そして既知量の標識化合物をI.V.（静脈内）注射した後で、該 化合物の全血、血漿または血清濃度を連続測定することにより決定される。赤血 球（半減期約６０日）、血小板（半減期約４〜７日）、血管系に沿って並んだ内 皮細胞、および長命血清タンパク質、例えばアルブミン、ステロイド結合タンパ ク質、フェリチン、α−２−マクログロブリン、トランスフェリン、チロキシン 結合タンパク質、免疫グロブリン、特にIgＧ等が含まれる。好ましい半減期に加 えて、当該成分は、好ましくは、治療的有効量の接合体の結合を許容するのに十 分な細胞数または濃度で存在する。細胞性長命血液成分の場合、少なくとも2,00 0／μｌの細胞数と、少なくとも１μｇ／ml、普通は少なくとも約0.01mg／ml、 より普通には少なくとも約１mg／mlの血清タンパク質濃度が好ましい。 選択された細胞性長命血液成分は脈管系中に多数で存在する。血小板は約１〜 ４×105／μｌで存在し、赤血球は約４〜６×106／μｌで存在する。それらの細 胞は長い半減期を有し、且つ表面膜タンパク質の結合部位、例えば抗体結合のた めのエピトープ、の適切な選択によりエンドサイトーシスが回避される。赤血球 と血小板は核が無く、細胞分裂能力を持たない。好ましい細胞は毛細管と組織中 に広い分布を有し、且つそれらの特異的な分化と関連して細胞表面上に特異的な 結合部位を発現する。当該接合体の生体内投与に加 えて、赤血球や血小板の場合、それらの細胞を迅速に回収し、接合体と一緒にし 、次いで宿主に投与することができる。細胞は自己由来であっても同種異系であ ってもよい。 長命血液成分の選択は、標的の毒性／病原性を制限する所望の経路にも依存す る。例えば、毒性、感染等を制限するために、中枢神経系、間隙等への標的の出 入りを調節することがしばしば望ましい。場所、分布、特定の表面マーカー、ま たは長命血液成分に関連する他の識別できる特徴に基づいて長命血液成分を選択 することにより、標的の最終部位および分布容積を調節することができる。例え ば、細胞の活性化が表面膜タンパク質のアップレギュレーションをもたらす場合 がある。内皮細胞については、炎症の場合にアドレッシン、例えばELAM-1または インテグリン、例えばVLA-4がアップレギュレーションされ得る。こうして、該 物質を炎症の部位またはリンパ系器官（例えば脾臓）に分離して、食作用性白血 球を含む集中した免疫応答への該物質の暴露を強化することができる。別の例で は、補体結合抗体の免疫複合体は細胞または微生物の補体依存性細胞溶解に備え ることができる。別の例は、区画間（例えばＣＮＳと血液間）の内因性または外 因性物質の分布の変更である。該物質の高親和性レセプターを血液中に用意する ことにより、該物質に対する血液の結合能に比例してＣＮＳ中の該物質の濃度を 減少させることができる。こうして、例えば薬物に対する抗体を使って、血液脳 関門を通って血液中に該薬物を引き出すように、薬物に対する血液の結合能を高 めることにより、脳内の薬物濃度を減少させることができる。接合体は、補体特 異的結合部位によって特異的にまたは非特異的に、通常は共有結合を伴って、長 命血液成分に結合することができる。特異的結合部位を指して言う時、相互的な コンホメーションと電荷分布を有する相補的分子に対して高親和性を有する、特 定の立体的 コンホメーションと電荷分布が意図される。よって、長命血液成分とアンカーま たは標的と標的結合成分の場合、脈管系と関連する遭遇し得る無数の他の分子に 比較して、それの相補的結合メンバーに結合するように接合体が選択されるだろ う。 結合部位の例としては、免疫学的エピトープ（抗体またはＴＣＲが結合するエ ピトープ）、糖成分（レクチンが結合する結合部位）、ペプチド特異的結合部位 （リガンドや細胞表面膜レセプター中にあるような、ペプチドが結合する結合部 位）、合成または天然有機化合物特異的結合部位（天然のリガンドに対する有機 作用剤もしくは拮抗剤または抗体に結合するハプテン）等が挙げられる。 適当な赤血球結合部位含有分子としては、グリコフォリンＡ，ＢおよびＣ、バ ンド３並びにＲｈ式血液型抗原が挙げられる。好ましい赤血球結合部位は、細胞 あたり少なくとも1,000、好ましくは少なくとも10,000、より好ましくは少なく とも100,000のコピー数で赤血球上に豊富に発現され、望ましくは二重層表面の 少なくとも約0.5nm上、好ましくは少なくとも約１nm上につなぎ留められ、そし て接合体が細胞に結合された時にそれ自体が細胞変形を促進しない（例えば、結 合が細胞骨格の重要な成分でないように選択されるだろう）。赤血球表面糖タン パク質であるグリコフォリンＡの結合部位と、シアル酸を含んで成る赤血球結合 部位が、好ましい結合部位の例である。好ましい血小板結合部位としては、ＧＰ IIａ，ＧＰIIｂ，ＧＰIIIａおよびＧＰIVが挙げられる。標的への結合により、 長命血液成分（例えば赤血球または血小板）の変形が起こらないのが望ましい。 長命血液成分への結合は特異的であっても非特異的であってもよく、共有結合 であっても非共有結合であってもよい。「〜に特異的」とは、全体的な利用可能 性を基準にして、結合部位が一定の標的ま たは長命血液成分上にあり、接合体成分の親和力で接合体の存在中ずっと存在す る血液関連成分には実質的に欠けていることを意味する。長命血液成分への非共 有結合的特異結合の場合、ある一定の結合部位の存在は、結合部位特異的相互結 合メンバーの結合によって一般に決定される。長命血液成分特異的結合部位また は標的特異的結合部位は、長命血液成分特異的結合部位または標的特異的結合部 位を含む血液関連成分または標的と、処置の時点で宿主中に存在する血液関連成 分とを識別することのできる結合部位特異的相互結合メンバーの能力を利用する ことにより、実験的に容易に同定される。例えば免疫蛍光顕微鏡検査、フローサ イトメトリー、細胞選別、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、アフィニティ ークロマトグラフィー、ビーズ分離、ＮＭＲ、結晶学、等を使って、細胞標的お よび分子（タンパク質、糖タンパク質、炭水化物、脂質、有機物、分子毒素等） 標的それぞれの結合部位の特異性をアッセイすることができる。標識された長命 血液成分または標的を用いる競合アッセイにおいて長命血液成分または標的を含 まない血液を使用することにより、血液の不在下での結合レベルと比較した血液 の存在下での長命血液成分または標的の結合レベルの減少は、長命血液成分また は標的それぞれと血液成分との交差反応性を表す。相補的特異的結合メンバー（ 長命血液成分または標的に相補的である）を宿主中に導入した場合、通常、相補 的結合メンバー（これは投与後に長命血液成分または標的の結合部位に結合する ）の約50％以上、好ましくは約75％以上が長命血液成分または標的に結合するだ ろう。結合アッセイを最適化した場合、特異的レセプター−エピトープ結合は少 なくとも約10-6Ｍ、好ましくは少なくとも約10-7Ｍの結合親和力を有するだろう が、普通は生理的条件下で約10-8Ｍ〜10-12Ｍの範囲で異なるだろう。 接合体の相補的結合部位メンバーは、生体内使用に適合できる必要な長命血液 成分または標的結合特異性を提供することができる任意の分子から誘導すること ができる。接合体の２つの結合部位は、通常は異なる標的上の、異なる相補的結 合メンバーに向けられるだろう。接合体の結合メンバーは、長命血液成分または 標的の天然のレセプターもしくはリガンドから誘導することができる。その例と しては、酵素と基質または補因子；レクチンと糖；抗体またはＴ細胞抗原レセプ ターと免疫学的エピトープ；サイトカイン（例えばインターロイキン）、ホルモ ン（例えばＬＨ）、薬物（例えばオピエート）、ウイルス（例えばＨＩＶ）また は免疫グロブリン（例えばIgＥ）とそれら各々のレセプター（例えばCD4、Fcレ セプターなど）等；または前記分子の先端が切り取られた変異体もしくは断片が 挙げられる。重金属のような或る種の毒素を標的とするためには、EDTAまたはEG TAのようなキレート化剤が有用なレセプターを提供する。 あるいは、接合体結合メンバーは、相補的結合メンバーを特異的に結合するよ うに特別に選択または合成することができる。例えば、有用なペプチド、炭水化 物、核酸、多および単複素環式天然有機化合物並びに合成分子は、天然または合 成ライブラリーを必要な結合特異性についてスクリーニングすることにより単離 される。典型的には、上述したように、ＥＩＡ、ＲＩＡ、蛍光、発光、化学発光 、直接結合アッセイまたは標識拮抗剤の置換による競合アッセイにより特異的結 合分子が分析される。 接合体は、１つまたは２つのメンバーから構成される様々な形態をとることが できる。単一メンバー接合体では、アンカーと標的結合成分の両方が投与時に一 緒に結合されるだろう。２つの成分は共有結合により接合されるだろうが、場合 によっては、２つの成分の 間に非共有結合を有することが十分であったりまたは望ましかったりするだろう 。別の状況では、接合体は２つのメンバーを有する。宿主中に第一メンバー−長 命血液成分の集団を提供するように、最初に第一メンバーが長命血液成分に添加 されそして長命血液成分に結合する。次いで、第二メンバーが添加され、それが 第一メンバーに特異的に結合して第二メンバーを長命血液成分に結合させる。ア ンカーは特異的でも非特異的でもよい。指摘したように、長命血液成分上に存在 するエピトープに結合させるのに特異的結合メンバーを使うことができる。ある いは、長命血液成分だけでなく宿主血流中に存在する別の分子上の活性官能基と も非特異的に反応するであろう反応性化合物を使ってもよい。この状況では、大 部分の他の成分に比べて血流中に非常に高濃度にあり、アンカーと反応性であり 且つ長い寿命のために、短期間、普通７日以内、より普通には５日以内では、第 一結合メンバーが主として宿主中の所望の長命血液成分と結合するであろう条件 下に存在する長命血液成分が選択される。 長命血液成分および標的への非共有結合については、１つのアプローチとして 、接合体の結合メンバーとして１〜２つのモノクローナル抗体またはそれの断片 が挙げられる。抗体またはそれの断片はサブタイプまたはイソタイプのいずれか １つであることができるが、補体依存性細胞障害作用を含めたくない場合には、 補体依存性細胞溶解に参加しないものだけである。補体依存性細胞障害作用を回 避するためには、完全抗体はIgＡ，IgＤ，IgG1もしくはIgG4または他の種の対応 するイソタイプであることができ、一方で断片は任意のイソタイプからのもので あることができる。通常、抗体は同種異系のものであろうが、例えば宿主が免疫 無防備状態であるか、または抗体もしくはその断片が異種であるにもかかわらず 非抗原性であるような状況では、異種抗体を使ってもよい。非ヒト抗体を使うこ と の便利さを維持しながら免疫応答を最少にするために、キメラ抗体を作製するこ とがしばしば望ましい。完全抗体を使う必要は無く、断片、例えばFv、Fab、F(a b')2、重鎖、一本鎖抗原結合タンパク質、抗体結合部位を模倣したペプチドコン ホーマー等がしばしば有用である。よって、通常は重鎖と軽鎖の可変領域を含ん で成る抗体の結合部位のみを使ってもよく、場合によっては、重鎖または軽鎖サ ブユニット可変領域だけでも十分なことがある。使用する断片は元の抗体の親和 性の少なくとも実質的部分、好ましくは少なくとも約10％を保持しているべきで あり；または特異的突然変異後に、より高い親和性を示してもよい。 モノクローナル抗体は常法に従って得ることができる。赤血球に特異的なモノ クローナル抗体の場合には、陽性直接クームズ試験を使って、個体からリンパ球 、特に溶血の徴候がない（補体なし）IgＧ型のリンパ球を収集する。次いで該リ ンパ球を任意の便利な手段、例えばエプスタイン−バーウイルス形質転換、細胞 融合、細胞移入等を使って不死化した後、所望の特異性と親和性並びに所望のイ ソタイプを有する抗体についてスクリーニングする。次いで様々な方法で、例え ばパパイン、キモトリプシン、ペプシン、トリプシンを使った断片を与える酵素 的開裂、分子内ジスルフィド結合の開裂を伴う還元などにより、該抗体を修飾す ることができる。抗体は任意の源、例えば霊長類、特にヒト、ネズミ、ウサギ、 ネコ、ウシ、ブタ、ヤギ等から得てもよく、または該抗体の少なくとも１領域を コードする遺伝子をクローニングしそして原核または真核発現系中で発現させて もよい。 赤血球に結合する接合体結合メンバーは、Ｏ Rh-赤血球にまたは既知の表現型 の赤血球のパネルに結合させることにより更に特徴づけることができる。パネル のうちの実質的に全ての（少なくとも80 ％の）細胞と反応し、更に、抗補体グロブリンを使った直接クームズ試験におい て陰性結果を示すような接合体結合メンバーを選択する。Stratton，F.；Rawlin son，Vi；Merry，A.H.；Thomson，E.E.；Clin．Lab．Haematol.，1983，5: 17-2 1を参照のこと。加えて、血液関連成分、特にリンパ球、骨髄単球、血小板等の ような細胞、および血清タンパク質との交差反応について、抗体をスクリーニン グする。同様に、長命血清タンパク質、血小板または内皮細胞を含んで成る長命 血液成分に特異的な抗体については、そのようなタンパク質／細胞に特異的であ り且つ宿主中で出会う可能性がある他のタンパク質／細胞には特異的でない抗体 を選択する。大部分については、赤血球の場合、細胞１個あたりに結合した接合 体の数は（血液由来の標的には結合しない時）、溶血を引き起こすレベルよりも 低いであろう。 所望であれば、様々な方法で抗体を調製または修飾することができる。定常領 域がイソタイプまたは種に関して修飾されているキメラ抗体を調製することがで きる。例えば、マウスモノクローナル抗体を調製し、重鎖と軽鎖をコードする遺 伝子を単離し、そして重鎖と軽鎖の定常領域をヒト定常領域の適当な定常領域に より置換し、マウス定常領域の抗原性を欠いているキメラ抗体に備えることがで きる。あるいは、宿主から得られた可変領域をクローニングし、突然変異せしめ 、次いでスクリーニングして特異的結合親和性を同定することができる。更なる 選択肢は、抗体の抗原性を更に減少させるために、重鎖および軽鎖の定常領域を 交換するだけでなく、可変領域のフレームワーク領域も交換することである。多 数の技術が文献中に記載されている。例えば、“The synthesis and in vivo as sembly of functional antibodies in yeast,”Wood，C.R.，Boss，M.A.，Kente n，J.H.，Calvert，J.E.，Roberts，N.A.， Emtage，J.S.，Nature，1985年４月４〜10日，314 (6010):446-9；“Constructi on of chimaeric processed immunoglobulin genes containing mouse variable and human constant region sequences”Takeda，S.，Naito，T.，Hama，K.，N oma，T.，Honjo，T.，Nature，1985年４月４〜10日，314 (6010):452-4；“A re combinant immunotoxin consisting of two antibody variable domains fused to Pseudomonas exotoxin,”Chaudhary，V.K.，Queen，C.，Junghns，R.P.，Wal dmann，T.A.，FitzGerald，D.J.，Pastan，I.，Laboratory of Molecular Biolo gy，DCBD，National Cancer Institute，Bethesda，Maryland 20892，Nature，1 989年６月１日，339 (6223):394-7；“Binding activities of a repertoire of single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli[s eecomments],”Ward，E.S.，Gussow，D.，Griffiths，A.D.，Jones，P.T.，Wint er，G.，MRC Laboratory of Molecular Biology，Cambridge，UK，Nature（英国 ），1989年10月12日，341 (6242):544-6，ISSN 0028-0836，Nature，1989年10月 12日，341 (6242):484-5中のコメント。 抗体の代わりに、長命血液成分に特異的である別の結合性分子を使用してもよ い。アンカーは天然もしくは合成分子であることができ、または修飾された、例 えば先端が切り取られたもしくは変異されたそれの誘導体であることができる。 化合物、例えば薬剤、例えばペニシリン、Ｔ2、Ｔ4、コルチゾール、コレステロ ール等、ホルモン、微生物、例えばウイルス、例えばレオウイルス、風疹ウイル ス、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＣＭＶからの糖タンパク質、レクチン等 は、赤血球、血清アルブミン、チロキシン結合タンパク質、ステロイド結合タン パク質等のような長命血液成分に特異的である結合部位を有する。ある場合には 、別の生物学的活性を減 らしながらそれの結合親和性を維持するように結合分子を変更することが望まし いだろう。これは、しばしば、アンカーを標的結合メンバーに連結するための部 位の選択によって達成されるだろう。場合によっては、第一化合物と第二化合物 の連続付加を考慮にいれることが望ましいだろう。この場合、第一化合物がアン カーを有しそして第二化合物が標的結合メンバーを有する。第一および第二化合 物は特異的結合ペアの相補的結合メンバーも有し、その結果、第一化合物への第 二化合物の付加によって、２つの化合物が非共有結合により結合して接合体を提 供するだろう。第一化合物は活性官能基、連結基、および第一の結合存在物を含 んで成るだろう。タンパク質上の利用可能である官能基は、主としてアミノ基、 カルボキシル基およびチオール基である。それらのうちのいずれも反応性官能基 の標的として利用できるが、大部分は、アミノ基への結合、特にアミド結合の形 成が使われるだろう。アミド結合を作るために、要求されるレベルでヒドロキシ ル成分が生理学的に許容される、多種多様な活性カルボキシル基、特にエステル を使用することができる。多数の異なるヒドロキシル基を使うことができるが、 最も便利であるのはＮ−ヒドロキシスクシンイミドとＮ−ヒドロキシスルホスク シンイミドであろう。しかし、血液のような水性媒体中で機能的である別のアル コールを使ってもよい。場合によっては、アミド、エステル、イミン、チオエー テル、ジスルフィド、置換アミン等を形成させるために、アジド、ジアゾ、カル ボジイミド無水物、ヒドラジン、ジアルデヒド、チオール基またはアミンのよう な特殊な試薬が利用される。通常、形成される共有結合は、それを薬剤放出部位 とするつもりでない限りは、標的結合メンバーの寿命の間ずっと維持できなけれ ばならない。 存在物を結合させるために多数の二価性化合物が利用できる。例示的な化合物 としては、アジドベンゾイルヒドラジド、Ｎ−〔４−（ｐ−アジドサリチルアミ ノ）ブチル〕−３′−（２′−ピリジルジチオ）プロピオンアミド、ビス−スル ホスクシンイミジルスベレート、ジメチルアジピミデート、ジスクシンイミジル タートレート、Ｎ−γ−マレイミドブチリルオキシスクシンイミドエステル、Ｎ −ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、Ｎ−スクシン イミジル（４−アジドフェニル）−１，３′−ジチオプロピオネート、Ｎ−スク シンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート、グルタルアルデヒド 、およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１− カルボキシレートが挙げられる。 連結基のうちの一方または両方が永久である時、連結基は本発明にとって重要 でなく、好都合であり、使用量において生理学的に許容され、且つ分子の必要条 件、例えば血流中で安定であること、標的結合メンバーまたは第一の結合存在物 を効率的に提示すること、化学的変更の容易さを考慮に入れていること、等を満 たしている任意の連結基を使用することができる。連結基は脂肪族、脂環式、芳 香族もしくは複素環式またはそれらの組合せであることができ、その選択は主に 便宜上のことであろう。大部分については、いずれのヘテロ原子も窒素、酸素、 硫黄またはリンを含むだろう。使用することができる基としては、アルキレン、 アリーレン、アラルキレン、シクロアルキレン等が挙げられる。一般に連結基は 、鎖中に０〜30、普通は０〜10、より普通には約０〜６個の原子を含むだろう。 ここで前記鎖は炭素と上記に示したようなヘテロ原子のいずれかを含むだろう。 大部分については、通常は側基からの恩恵が全くないだろうから、連結基は直鎖 状または環状であろう。連結基の長さは、特 に標的結合メンバーと第一結合存在物の性質によって、いろいろ異なるだろう。 何故なら、場合によっては、標的結合メンバーまたは第一結合存在物は本来それ に関連する鎖または官能基を有することがあるからだ。ある場合、特にアミノ酸 のカルボキシル基が反応性官能基である場合には、アミノ酸、通常１〜３個のア ミノ酸が連結鎖として働き得る。かくして、アミノ基は標的結合メンバーまたは 第一結合存在物に結合させる働きをすることができる。 柔軟性、剛性、多機能性、配向性または改良された分子機能のための他の特徴 に備えるのに、アームの長さを使ってもよい。共有結合連結基は、異なる血液タ ンパク質に対して同等でない親和性を有する官能基であるか、または一定のタン パク質エピトープもしくは配列、例えばIgＧもしくはアルブミンエピトープに対 して高い親和性を有する官能基であることができる。 第一結合存在物は、一般に、いずれかの免疫応答を模倣するのに適当である小 分子であろう。好都合な相補的結合メンバーが存在するいずれの生理学的に許容 される分子も使うことができる。特に着目されるのは、アビジンが相補的結合メ ンバーとなり得るビオチンであるが、他の分子、例えば金属キレート、天然のエ ピトープもしくはレセプターまたは抗体結合部位を模倣した分子も利用すること ができ、この場合には相補的結合メンバーは抗体またはその断片、特にFab断片 、酵素、天然のレセプター等である。よって、第一結合存在物は天然レセプター のリガンド、酵素基質、または相補的レセプターを有するハプテンであることが できる。 第一化合物を製造する方法は、第一化合物を含有する様々な要素の性質に依存 して広範囲に異なるだろう。単純であり、高収率に備え、且つ高度に精製された 生成物を考慮に入れるようにして合成的手法が選択されるだろう。通常は、最終 段階として標的結合メンバ ーまたは第一結合存在物の或る官能基を脱保護しようと思わない限り、反応性官 能基は最終段階として作られ、例えば、カルボキシル基では、活性エステルを形 成させるためのエステル化が合成の最終段階であろう。 一般に、第一化合物が第一結合物質を含んで成る時の第一化合物は、少なくと も約200Dで且つ多くても約2.5kD、通常は多くても約1.5kD、しばしば約１kD未満 の分子量を有するだろう。 模範的な化合物としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルビオチンエステル 、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルビオチンエステル、Ｎ−ビオチニル− ６−アミノヘキサン酸のＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ− ビオチニル−４−ブチリル−３−アミノプロピルジスルフィドのＮ−ヒドロキシ スルホスクシンイミジルエステル等が挙げられる。タンパク質を官能化するため の多数の水溶性ビオチン誘導体が利用可能であり、そしてそのような化合物が生 理学的に許容されるリンカーを有する限り、それらの化合物は本発明において用 途を見出すことができる。 第一化合物は通常はボーラスとして投与されるだろうが、計量流液を使った点 滴注入などにより時間をかけてゆっくり投与してもよい。あるいは、あまり好ま しくないけれども、宿主から血液を取り、生体外で処置し、そして宿主に戻して もよい。第一化合物は生理学的に許容される媒体、例えば脱イオン水、リン酸塩 緩衝化塩類溶液、塩類溶液、マンニトール、水性グルコース、アルコール、植物 油等の中で投与されるだろう。通常は１回の注射が使われるが、所望により複数 回の注射を使ってもよい。第一化合物は、シリンジ、トロカール、カテーテル等 を含む任意の便利な手段により投与することができる。特定の投与方法は、投与 すべき量、単一ボーラスか連続投与か、などによって異なるだろう。大部分につ いては、投与は脈 管内であり、ここで投与部位は本発明にとって重要でなく、好ましくは速い血流 がある部位であり、例えば静脈内、末梢または中心静脈内であろう。投与が徐放 技術または保護マトリックスと結び付けられた別の経路を利用してもよい。第一 化合物が血液成分と反応できるように血液中に効率的に分配されることが重要で ある。 大部分は、反応は血液中の移動性成分、特に血液タンパク質および血液細胞、 特に血液タンパク質および赤血球とであろう。「移動性」とは、該成分がいずれ かの長期間の間、通常５分以下、より普通には１分とも固定した位置にいないこ とを意味する。大部分は、反応は血漿タンパク質、例えば免疫グロブリン、特に IgＭとIgＧ、アルブミン、フェリチンとであり、そして小程度には実質的に少量 で存在する別のタンパク質とであろう。血小板、内皮細胞および白血球との反応 もあり得る。従って、最初は、機能化されたタンパク質や細胞の比較的不均一の 集団が存在するだろう。しかしながら、大部分については、該集団は、血流中の 機能化されたタンパク質の半減期に依存して、２〜３日のうちに初期集団から相 当変化するだろう。従って、通常は約３日またはそれ以上のうちに、IgＧが血流 中の主な機能化されたタンパク質となるだろう。このことは、数日後に、標的結 合メンバーがIgＧに接合されるか、または大抵は第二化合物がIgＧと接合されそ れに結合された状態になるだろうことを意味する。 多くの場合、一度宿主中で（特にヒト宿主中で）徹底的に試験されれば、該化 合物の生理学が十分に確立され、それの薬物動態学が確立され、そして長期間に 渡るそれの安全性も確立されるだろうから、第一結合存在物を含んで成る単一の 第一化合物を使用することができる。ある場合には、第一化合物は生理学的およ び／または療法的に活性であり、その場合にはそれを第二化合物の付加と無関係 に利用することができる。しかしながら、特異体質の個体がいるかもしれないし 、または第一化合物の慢性投与が何らかの免疫反応を引き起こし得るという点で は、投与に使用できる複数の第一化合物がある方が望ましいかもしれない。しか し、第一化合物の役割は第二化合物と併用すると幾らか制限されることがあるの で、同じ目的に有用である無数の代替物があるだろうが、多数の代替物を発明す る必要はない。 大部分は、第一化合物の半減期は少なくとも約５日、より普通には少なくとも 約10日、好ましくは20日以上であろう。２または３半減期の後であっても血流中 に有効量の第一化合物がまだ存在するように実質的過剰量の第一化合物を導入す るので、有効濃度を提供する期間はもっと長いかもしれない。 一般に、第一化合物の一部分として標的結合メンバーを有することが十分であ ろう。しかし、第一化合物と第二化合物の組合せを使うことが望ましいような状 況があるだろう。例えば、標的結合メンバーを担持している成分の比較的均一な 集団を得たいと思うならば、第二化合物を添加する前に、短命血液成分が消失し てしまうまで待つことができる。特に、第一化合物の初期濃度が高い場合、様々 な血液成分と反応するよりも主として第一化合物に結合するであろう第二化合物 を続いて添加することが望ましいかもしれない。場合によっては、着目の物質の 高度に機能化された性質のため、標的結合メンバーを有する第一化合物の合成が 困難なことがある。これは、合成されそして合成の終わりに保護基の除去を必要 とするオリゴペプチドに特に当てはまる。また、標的結合メンバーを血液成分か ら放出させようとする場合、第一化合物の連結基に依存するよりもむしろ、効率 的な放出を考慮に入れた第一化合物と第二化合物の組合せをデザインする方が容 易かもしれない。 第一化合物の用量決定は、それが標的結合メンバーを含むかどうかに依存し、 従って標的結合メンバーの副作用、血液成分に結合した時のそれの活性、標的結 合メンバーを含む第一化合物の遊離濃度を減少させるのに必要な時間、治療活性 に必要な用量、治療しようとする適応症、血液酵素に対する剤の感受性、投与の 経路および形態、等に依存するだろう。必要なら、最初は通常投与される治療量 の小倍数を使って、そして多くの経験が得られたら用量を増やして、用量を経験 的に決定することができる。免疫応答を惹起せしめるために標的結合メンバーを 使う場合、標的結合メンバーは抗原であり、免疫応答を増強するのに血液成分へ の接合を当てにしないだろう。この場合、生成物として抗体を生産することに関 心があり、治療される宿主が通常家畜または実験動物であるような場合、比較的 多量を使うことができる。標的結合メンバーがワクチンとして作用する場合、用 量は少なくてよく、それは経験的に決定することができる。大抵は、ワクチンと しての用量は一般に約10ng〜100μｇの範囲内であろう。通常、初回量の少なく とも50％、通常少なくとも90％を削除した任意の追加量が初回量の後に投与され るだろう。 第一化合物と比較した時、ある意味では、第二化合物はずっと精巧であるかも しれない。この化合物は、第一の結合存在物の性質によって決定される第二の結 合存在物を有するだろう。既に指摘したように、この存在物は多数の形態を取る ことができ、特に結合タンパク質、例えば免疫グロブリンおよびその断片、特に Fab，Fc等、特に一価の断片、天然に存在するレセプター、例えば膜表面タンパ ク質、酵素、レクチン、他の結合タンパク質、例えばアビジンまたはストレプト アビジン等の形態である。 特に第一の結合存在物が第二化合物と併用される場合、第一の結合存在物は本 来は血流中にあるとしても低濃度で見つかるので、第 二の結合存在物を目当てにした第一の結合存在物と天然化合物との間の競争はあ るとしてもごくわずかであろう。第二の結合存在物、それが血液中または関連細 胞中で遭遇し得る化合物には結合すべきでない。従って、使用される酵素は一般 に、血液中に現れない基質に対して活性であるだろう。使われるレクチンは普通 、血液中に現れず且つ脈管系に沿って並ぶ内皮細胞または他の細胞上に存在しな いような糖に結合するだろう。 大部分については、第二の結合存在物はタンパク質であるだろうが、比較的高 い特異性と親和性に備えることができる他の分子を使ってもよい。組合せライブ ラリーは、必要な結合特性を有するであろうタンパク質以外の化合物を提供する 。一般に、親和性は少なくとも約10-6、より普通には約10-8Ｍ、例えば特異的モ ノクローナル抗体を使って通常観察される結合親和性であろう。特に着目される のはアビジンまたはストレプトアビジンであるが、特に着目される別のレセプタ ーとしては、ステロイド、ＴＳＨ、ＬＨ、ＦＳＨまたはそれらの作用剤、並びに シアル酸およびウイルス血球凝集素、並びに超抗原のためのレセプターが挙げら れる。第二の結合存在物は、普通は少なくとも約５kD、より普通には少なくとも 約10kDで、且つ普通は約160kD未満、好ましくは約80kD未満の巨大分子であろう 。これは結合部位が一価であっても二価であってもよく、通常は一価であろう。 第一化合物または第二化合物中に１または複数の着目の剤が存在し、通常は第 一または第二の連結基を通して中心コアに結合されている複数の着目の剤、例え ばタンパク質、核酸、多糖、または他の多機能性存在物が存在し得る。連結基は 標的結合メンバーを共有結合的に結合する働きをするだけでなく、それは標的結 合メンバーが血液成分に結合したままであるかどうかを決定し、または遊離され たなら遊離の形式と速度を決定するためにも働く。従って、連結基の性質はその 役割に応じて広く異なるだろう。 標的結合メンバーを血液成分に結合したままにしようとする場合、多種多様な 好都合な連結基（結合を含む）のいずれを使ってもよい。例えば、第一化合物に 使われるのと同じ型の連結基が第二化合物にも認容されるだろう。しかしながら 、連結基を開裂させて標的結合メンバーを遊離させようとする場合、連結基は標 的結合メンバーの性質、所望の遊離速度、遊離させようとする標的結合メンバー 上の原子価または官能価、等に依存して異なるだろう。従って、血液の環境、血 液の成分、特に酵素、肝臓中の活性、または他の因子が、ほどよい速度での標的 結合メンバーの遊離を伴う連結基の開裂を引き起こし得るような、様々な基を使 用することができる。 利用できる官能基としては、エステル、有機酸または無機酸のいずれか、特に カルボキシル基またはリン酸基、ジスルフィド、ペプチドまたはヌクレオチド結 合、特にトリプシン、トロンビン、ヌクレアーゼ、エステラーゼ等に感受性であ るペプチドまたはヌクレオチド結合、アセタール、エーテル、特に糖質エーテル などが挙げられる。一般に、開裂用の連結基は、鎖中に少なくとも２つの原子を 必要とし（例えばジスルフィド）、そして鎖中に50原子、通常多くても約30原子 、好ましくは多くても約20原子を必要とすることがある。よって、鎖はオリゴペ プチド、オリゴ糖、オリゴヌクレオチド、ジスルフィド、脂肪族、芳香族、脂環 式、複素環式またはそれらの組合せである有機二価基、例えばエステル、アミド 、エーテル、アミン等を含んで成ることができる。特定の連結基は、生理学的認 容、所望の開裂速度、合成上の便宜性などに従って選択されるだろう。 接合体は、該接合体の結合メンバー成分の性質、結合メンバーの結合能を維持 する必要性、および接合体の生体内使用に関連するよ うな他の考慮すべき事柄に従って、任意の便利な方法で調製することができる。 接合体の性質に応じて、接合体の２つの結合メンバーの間の結合比は、１から結 合メンバーの一方または両方が複数を有するまで異なることができる。普通は接 合体中に結合メンバーのいずれかが平均して多くても６つ、より普通には多くて も３つ存在するだろう。一般にアンカーは１つであるが、長命血液成分に対する 親和性の増強を所望する場合には複数であってもよい。 前に指摘したように、アンカーと標的結合メンバーとの会合には次の３形態が 存在し得る：(1)多数の様々な形態をとることができる適当な鎖によって前記２ つが共有結合的に連結される；(2)非共有結合的に連結されるように各鎖が特異 的結合ペアの相互相補的メンバーで終わっている鎖の組合せにより、前記２つが 連結される；または(3)アンカーを最初に長命血液成分に付加し、次いで、非共 有結合的に連結されるように各メンバーが特異的結合ペアの相互相補的メンバー で終わっている鎖を有する標的結合メンバーを付加することにより、前記２つが 連続的に付加される。 接合体の結合メンバー間の結合の性質は、結合メンバーの化学組成、標的結合 メンバーの末端、標的の性質、などによって大きく異なるだろう。一般に、安定 な結合が使われ、共有結合が一般に適用される。「安定な」とは、分子中の他の 結合に比べてその結合が優先的に開裂されないことを意味する。「不安定な」と は優先的開裂を意味する。しかしながら、時には結合の限定的経時分解を許容し たいと望む場合がある。例えば、接合体の結合メンバーの親和性が非常に高い場 合には、接合体と標的の複合体の制御放出を所望することがある。接合体の開裂 または分解に備えることにより、複合体からの標的の分離速度よりもむしろ接合 体の開裂または分解の速度に従って標的が放出されるだろう。様々な結合は生理 的条件下で不 安定であり、この不安定性は酵素的または非酵素的反応の結果として生じてもよ い。例えば、比較的不安定でありそして血流中で時間が経つにつれて開裂される ようなエステル結合を提供することができる。立体障害の程度を変えることによ り、異なる程度の不安定さを達成することができる。あるいは、多種多様な酵素 （例えばプロテアーゼ）により認識される配列を提供することができる。例えば 、一連のアルギニン−リジン二量体単位はトリプシンに感受性であろう。プロテ アーゼを血流中に見つけることができる場合、別のプロテアーゼ不安定結合を使 ってもよい。あるいは、還元的開裂を受けるであろうジスルフィド結合を使って もよい。利用することができる別の官能価としては、オリゴ糖、チオールエステ ル、核酸等が挙げられる。あるいは、長命血液成分からの標的の遊離に備える結 合メンバーの一方または両方の性質、例えばプロテアーゼに感受性である抗体の ペプチド性質に頼ってもよい。 異なる官能基を有する接合体を調製するために多種多様な化合物を共有結合に より連結するための方法の文献中に多数の報告がある。接合体結合メンバーの性 質によって様々な合成スキームを心に描くことができる。例えば、スルフヒドリ ル基が存在する場合には、スルフヒドリル基への結合に備えてそれらを容易に活 性化してジスルフィド基を提供することができ、またはマレイミド基を使って、 チオールがマレイミドに結合してチオールエーテルに備えることができる。カル ボキシル基は、様々なヒドロキシル化合物またはカルボジイミドを使って容易に 活性化することができ、得られたエステルまたは無水物をヒドロキシルまたはア ミノ基と反応させてエステルまたはアミドを提供することができる。同様に、糖 質成分を過ヨウ素酸塩を使って活性化することができる。イミン、ヒドラジン等 の別の結合も利用できる。あるいは、非共有結合、例えばビオチン− アビジン結合、二重抗体結合、レクチン−糖質結合などを使ってもよい。接合体 結合メンバーが両方ともタンパク質、例えば抗体または断片である場合、様々な ベクターと宿主細胞を使って、接合体を単一構成物として遺伝子操作し、クロー ニングし、そして発現させてもよい。あるいは、特にカップリングに利用できる ユニークな官能基を提供することにより、２つの接合体結合メンバーを組換え的 にまたは化学的に合成し、続いてカップリングすることができる。化学合成は液 相または固相合成を利用した市販の合成装置を使うことができる。この場合、合 成は接合体の全部であっても一部であってもよい。主題の組成物は様々な細胞の 疾患、毒性および環境暴露の予防的または治療的処置に使うことができ、指示に 応じて様々な方法で投与することができる。所望であれば、最初に接合体を適当 な比率で長命血液成分に結合し、次いで投与することができる。あるいは、長命 血液成分細胞またはタンパク質へ結合させるために接合体を宿主に投与すること ができる。投与される接合体の量は、接合体の性質、接合体の目的、治療量、接 合体として存在する時や細胞に結合した時の化合物の生理学的活性などに依存し て、広く異なるだろう。従って、宿主に投与される接合体の量は１μｇ〜50mg／ kg宿主に及ぶことができる。 本発明の組成物は、大部分については、非経口に、例えば静脈内(IV)、動脈内 、筋肉内(IM)、皮下(SC)等に投与されるだろう。投与は通常、接合体が細胞に結 合されているならば輸液による投与であろう。接合体が未結合ならば、投与は通 常IV，IMまたはSCであろう。組成物が低分子量（約10kD未満）のものであるかま たは消化酵素に耐性であるならば、接合体の投与は経口、鼻内、直腸、経皮また はエーロゾル投与であり、接合体の性質は脈管系への輸送を考慮したものである 。生理学的に許容される担体、例えば水、塩類 溶液、リン酸塩緩衝化塩類溶液、水性エタノール、血漿、タンパク様溶液、グル コースまたはマンニトール溶液などが一般に使われるだろう。接合体の濃度は広 く異なるが、通常は約１pg／ml〜50mg／mlの範囲であろう。含めることができる 他の添加剤としては、緩衝剤（溶媒が通常約５〜10の範囲のpHに緩衝化され、緩 衝剤は通常約50〜250mMの濃度であろう）、塩（塩の濃度は通常約５〜500mMの範 囲であろう）、生理学的に許容される安定剤、などが挙げられる。好都合な貯蔵 と輸送のために組成物を凍結乾燥してもよい。 長命血液成分の選択は、標的の生物活性を変更する方法に影響を及ぼすだろう 。標的の性質に依存して、異なる長命血液成分が使われるだろう。標的が分子、 例えば小さな有機分子またはペプチドである場合、血清タンパク質が好都合な長 命血液成分であり、標的の排除は血清タンパク質の排除を伴うだろう。特に標的 が細胞毒性作用を有する場合、標的を接合体に結合させる一方で実質的に不活性 化しなければならない。標的がウイルス粒子または細胞である場合、長命血液成 分は一般に細胞であり、細胞の選択は標的細胞を迅速に排除したいのかまたは特 定の細胞区画に分離して宿主中に維持したいのかに依存するだろう。例えば、ウ イルス感染細胞または新生物性細胞を排除したいならば、長命血液成分は赤血球 または血小板であり、標的細胞が赤血球または血小板に結合された状態になって 標的細胞が小さな脈管に入るのを防ぎ、そして複合体が脾臓によって排除と認識 されるだろう。赤血球の場合、標的細胞への結合による赤血球の変形が複合体の 排除との認識を助ける。同様なメカニズムが血小板にも有効である。 本発明は慢性または急性状態において、予防的にまたは治療的にのいずれかで 用いることができる。急性状態には、接合体は急性状態を見越して標準的に投与 されるだろう。例えば薬物常用者では、 特に患者がメタドンプログラム中である場合、特定の乱用薬物の使用を防ぎたい と思うだろう。数週間または数カ月の有効結合能を発揮することができる主題の 接合体を投与することにより、乱用薬物の捕獲がそれの不活性化を引き起こし、 陶酔作用を阻害するだろう。同様に、院内感染が心配される場合、感染すると毒 素または腫瘍壊死因子が結合された形態になってそれの有効濃度を病原性水準よ り下に下げるように、感染を見越して接合体が投与されるだろう。 治療的用途には、転移細胞または増殖因子過剰について血液をモニタリングす るために、癌患者に接合体を投与することができる。この場合、迅速な排除に備 える長命血液成分、例えば赤血球が使われる。乳房細胞（mammary cell）のよう に、正常では脈管系中に細胞が見られない場合、脈管系中のいずれの乳房細胞も 検出でき且つ排除できるように、接合体は標的タンパク質として乳房細胞表面タ ンパク質を有するだろう。自己免疫病に関与するＴ細胞の場合、そのような細胞 が共通エピトープを有する時、接合体はそのような細胞に向かう血液を管理し、 そして上記に指摘したメカニズムによりそのような細胞に結合し且つ該細胞を排 除することができるだろう。 本発明は、有害な生理学的作用を有し得る１もしくは複数の出来事、例えば薬 物摂取、または外傷もしくは手術に対する宿主の不利な生理学的応答を見越して 、あるいは難治性感染の結果として毒素、ウイルス粒子等の連続生産を長命血液 成分に結合された接合体によって継続的にモニタリングする慢性状態に、利用す ることができる。本発明は、標的の結合と同時に標的の有害な生物学的作用が迅 速に削減され、そして変性したまたは欠陥のある赤血球と血小板の分解、化学的 変性、排除に関係する様々な天然のメカニズムにより、宿主からゆっくりとまた は迅速に標的が排除される、長命の結合能力源を提供する。 主題の剤の延長された供給時間または利用可能性のため、本発明は多種多様の 状況に利用することができる。標的結合メンバーは、病院での院内感染または病 気が広がり得る別の状況が心配される場合、毒素に対する抗体であることができ る。本発明は、患者の障害を回避しながら、反復投与を必要とせずに手術中と手 術後の薬剤濃度を確実に維持するために手術前に使用することができる。例えば 、手術および適応の性質が血餅を形成しやすい場合、抗凝固剤を使用することが できる。灌流障害を防ぐために白血球回帰性の阻害剤を使用することもできる。 患者が長期間に渡り特に心筋梗塞になりやすい場合、心血管薬を使って本発明を 利用してもよい。薬剤の長期利用可能性から有益であろう別の治療としては、ホ ルモン療法、不妊療法、免疫抑制療法、神経弛緩療法、乱用薬物予防、感染性物 質により引き起こされる病気の治療、血友病の治療などが挙げられる。 生物学的に活性な標的結合メンバーを哺乳類宿主の血液中のIgＧに結合させる ことにより、多数の利点の結果として、免疫グロブリンの多数の望ましい特徴を 維持しながら、延長された寿命に加えて、免疫グロブリンに新たな活性を提供す る。例えば、免疫グロブリンはＦcエフェクター機能、例えば補体結合における それの役割、または抗体依存性細胞障害作用、不活性化および分泌に対する作用 などをまだ有することができる。同様に、血清アルブミンまたは他の長命血清タ ンパク質は、標的存在物を不活性化しそしてそれらの迅速な排除を手伝う働きを することができる。よって、標的結合メンバーが結合されている血液成分は、標 的結合メンバーの活性にそれらの生理学的活性を加える。こうして、免疫グロブ リンを細胞性標的もしくは可溶性標的に差し向けることにより、または細胞性も しくは可溶性標的を血液タンパク質で被覆することにより、細胞性標的を不活性 化または排除することができる。 次の実施例は例示のつもりで与えるのであって限定のつもりではない。 実験 実施例１：コカインの分布容積の変更 BALB/cマウスとSP20ミエローマを使ってコカイン−ＢＳＡ接合体（モル比10： １）に対して惹起せしめたモノクローナル抗体を、コカイン−ＢＳＡおよび対照 抗原としての無関係のペプチド−ＢＳＡに対して固相マイクロタイタープレート ELISAによりスクリーニングする。選択された抗体特異性を、抗体の結合が遊離 のコカインにより用量依存形式で阻害されるコカイン−ＢＳＡに対する競合アッ セイにより確認する。選択された抗体は、１：64のELISAによる上清力価を有す るIgG1である。腹水中でMabを生産させ、プロテインＡアフィニティークロマト グラフィーにより精製する。 抗RBC MabはヒトのグリコフォリンＡに特異的であり且つ血液型抗原Ｍ（Hospi tal Saint-Louis，Parisから入手）と反応するIgG1Mabである。このMabはチンパ ンジーとアカゲザルの赤血球と交差反応する。 抗RBC Mabと抗コカインMabの両者からのFab断片（SDS-PAGEによりモニタリン グしたパパイン消化により製造）をナカネ法を使って接合する。まず、接合体の 第一メンバーを過ヨウ素酸ナトリウムにより活性化した後、接合体の第二メンバ ーを付加し、炭水化物−NH2基共有結合を形成させる。カップリング反応中はpH をモニタリングし、両メンバーの比率を最適化して１：１に近い平均モル比を与 える。接合体をゲル濾過により精製する。80KD〜120KDの分子量（SDS-PAGEによ り決定）に相当する写真を選択する。抗マウスκ鎖特異的ペルオキシダーゼ接合 体と、対照としての抗マウスFc特異 的ペルオキシダーゼ接合体（コカイン結合型Fabと反応しない）とを使って、上 述したようなELISAにより接合体とコカインの反応性を確認する。抗マウスFab F ITC接合体と対照としての抗マウスFc特異的FITC接合体（コカイン結合型Fabと反 応しない）とを使って、フローサイトメトリーによりヒトRBCと接合体の反応性 を試験する。該接合体は、新鮮なウサギ補体を添加したヒトおよびマウス血漿中 でインキュベートした時にRBCを凝集させず且つ溶血を誘導しない（100ng/ml〜1 0μg/mlで）ことがわかった。 125Ｉ標識コカインの生体分布を、抗RBCコカイン特異的接合体で動物を前処理 をしたものとしないものを使って評価する。ゆっくりした注射（５分間）により １％ヒト血清アルブミンを含む５％グルコース中に希釈した50μg/kgの接合体を 動物（ｎ＝３）にIV投与する。注射の１日後、動物に10μCiの125Ｉ標識コカイ ン（動物あたり100μｇ）をIV投与する。コカイン注射の１時間後、動物を犠牲 にし、脳標本（前頭皮質と後頭皮質）を含む様々な組織および血液標本を収集す る。 対照動物（ｎ＝３）には125Ｉ標識コカインのみを投与し接合体は投与しない 。γカウンターを使って比放射能を測定し、血液１mlあたりのcpmまたは組織１ グラムあたりのcpmとして表す。接合体前処理を受けた動物は、対照動物の平均 脳125Ｉ比活性の2.2％（±0.7％）の平均脳125Ｉ比活性と、対照動物の25（±４ ）倍の平均全血比活性を有する（赤血球：血漿の125Ｉ比活性の比は接合体処理 グループでは20:1で、対照グループでは0.2である）。 これらの結果は、コカインに特異的な接合体に結合させた赤血球での前処理が コカイン分布容積を変更し、中枢神経系へのコカインの拡散を減少させ、そして 血漿：赤血球のコカイン濃度の比を減少させる（血中濃度の正味の減少を伴う） 。実施例２：抗Ｔ細胞サブセット接合体 ラット抗マウスRBC特異的Fab断片を精製組換えHIV1 gp120に接合させる（モル 比１：２）。SCID HuマウスへのRBC/gp120長命血液成分のIV投与（マウスあたり １０μｇ）後、48時間にわたり定期的に全血標本を収集し、そして蛍光顕微鏡検 査とフローサイトメトリーにより分析する。最初の６時間は、アンカーで前処理 した動物では赤血球とCD3+，CD4+，CD8-Ｔ細胞のロゼットが観察され、対照動物 では観察されなかった。実施例３：抗ウイルスタンパク質アンカー ラット抗マウスRBC特異的Fab断片を精製組換えCD4に接合させる（モル比１： ３）。BALB/cマウスにRBC/CD4接合体をIV投与（マウスあたり10μｇ）した48時 間後に、125Ｉ標識組換えHIV1 gp120を接合体前処理動物または対照動物にIV注 射する。その後の24時間と８日間に渡りgp120の半減期（全血、赤血球および血 漿）濃度を測定する。処理動物ではgp120の血漿半減期が大きく減少し、一方で 赤血球と全血半減期は増加する。実施例４：寿命延長免疫原の２段階付加 Ｉ．第０日に２羽のウサギにＮ−スクシンイミジルビオチンエステル（NHS−ビ オチン）の溶液（200μｌまたは１mlのDMSO中、５mgまたは50mg）をIV注射した 。最初は１時間間隔で、次に１日間隔で血液試料を採取し、60μｇの試料を使っ てゲル電気泳動（SDS-PAGE）によりビオチンの存在について該試料を分析し、発 光基質（ECLキット、Amersham）を使って、アビジン−ペルオキシダーゼ接合体 によりビオチンが結合されているタンパク質を検出した。赤血球に結合したビオ チンについては、該細胞を遠心分離により単離し、洗浄し、低張溶解により溶解 し、そして血漿タンパク質と同じ方法でSDS-PAGEによりタンパク質を分離した。 血漿タンパク質については、 還元条件下と非還元条件下で電気泳動を行い、還元条件下ではIgＭとIgＧはサブ ユニットに還元された。 １羽のウサギの血漿タンパク質のゲルは、ビオチンがIgＭ，IgＧ，p90，p75（ トランスフェリン）、血清アルブミンおよびp38に結合していることを示した。 還元条件下でのゲル電気泳動における検出期間は血清アルブミンで９〜12日間、 そしてIgＭとIgＧで33日までであり、非還元条件下では、暴露時間が実質的に短 かった場合、血清アルブミンで２日間そしてIgＧで９日間の間バンドを観察でき た。赤血球を使うと、多数のタンパク質を12日間観察することができ、次の時点 はバンドが全く観察できなくなった33日であった。主な標識成分はバンド３を示 唆する電気泳動パターンを有した。 II．本発明が異種タンパク質に対する免疫応答を増強するのに利用できることを 証明するために、上述したようなビオチン接合体の投与後に、250μｇまたは１m gの卵白アビジンを２羽のウサギの各々に静注した。約２日以内に力価が迅速に 上昇しはじめ、そしてマイクロプレートにコーティングされたアビジンを使った ELISAにより、約600のＯＤ値により証明されるように、高い抗アビジンカ価が10 日まで観察された。対比して、予めビオチン接合体を投与しなかったウサギに上 述したようにアビジンを投与した時、６日目に50μｇのアビジンの静脈内ブース ター注射を行うまでは実質的に全く抗体の産生が観察されなかった。注射を行っ た６日目の時点で、ビオチン接合体変性ウサギにおいて12日目までに観察された 力価に近い、抗アビジンカ価の急速な増加が観察された。実施例５：RBCおよび血漿タンパク質へのビオチン−NHSの結合 DMSO中に可溶化された５mg（〜1.5mg／kg）と50mg（〜15mg／kg）のNHS−ビオ チンをそれぞれウサギ３またはＡと８に注射した。次いで注射後同日の0.5，１ ，２および４時間目と、注射後１，２，３，６， ９，13，20，27，34，41，48および55日目に血液試料を採取した。 注射の30分後、フィコエリトリン接合アビジンを使って実施したフローサイト メトリーにより示されるように、全てのRBCがビオチン化された。平均蛍光はウ サギ３の方がウサギ８よりもずっと低く（それぞれ26と320）、RBCの標識とNHS −ビオチンの用量との間に直接関係があることを示した。ウサギ３または８にお いて観察された曲線からそれぞれ17日および15日の半減期が計算された。ウサギ ３では55日の寿命が得られた。49日後、ウサギ８ではビオチン化されたRBCの６ ％が残存していた。常法により測定すると、ウサギRBCの寿命は45〜70日である 。 ウサギ３とウサギ８の血漿タンパク質をイムノブロット法により分析した。血 漿タンパク質を還元条件下（10mM DTT）で10％ポリアクリルアミドゲル中で分離 した（クーマシーブルー染色）。主な成分はp180，p90，p75，アルブミン並びに 免疫グロブリンの重鎖および軽鎖と同定された。ポンソー赤で染色された全ての 血漿タンパク質はアビジン−フィコエリトリンを捕捉することができ、これはそ れらのタンパク質がビオチン化されていることを証明する。ウサギ３については 、第20日には血清アルブミンだけが検出できた。ウサギ８からの試料を使った染 色はずっと強力であり、これは高分子量成分（〜200kDa）と免疫グロブリンの軽 鎖のビオチン化を示す。第19日には全く染色が観察されなかった。 ８％ポリアクリルアミドゲル中で非還元条件下で分離された血漿タンパク質の パターン（クーマシーブルー染色）は、主成分としてIgＭ，IgＧ，p90，p75およ び血清アルブミンを示した。イムノブロット上では、アルブミン（60kDa）、ト ランスフェリン、p90、IgＧ（160kDa）およびIgＭに一部対応する高分子量成分 が検出された。アルブミンはウサギ８から第12日に採取した試料から検出で きなかったので、高分子量成分とIgＧの半減期はアルブミンのものより長いらし かった。実施例６：ビオチン化血漿成分に結合させたアビジンを使った抗アビジンの生産 第０日に１mlのDMSO中の50mgのNHS−ビオチンをウサギに注射し、次いで30分 後にペルオキシダーゼ標識アビジン（１mfl／250μｇ）を注射した。７日後、ウ サギに125Ｉ−アビジン（１×107cpm：50μｇ）を注射した。その後定期的に血 液試料を採り、125Ｉの存在と抗アビジン抗血清の存在について分析した。第53 日に、600μｌのDMSO中の50mgのNHS−ビオチンを注射し、その30分後に１mg／50 0μｌのアビジンを注射し、そしてその後定期的に血液試料を採り抗アビジンカ 価を測定した。抗アビジンは第２日ほどの早期に出現し、その力価は第12日付近 で最大になり、その後ゆっくり減少した。抗体の力価は33日後は有意でなかった 。NHS−ビオチンとアビジンでのブースター注射後、高力価抗体が得られた。ア ビジンがコーティングされたELISAプレートを使って測定したＯＤ値に基づくと 、第70日に、力価は第12日よりも約８倍大きかった（606対4790）。 NHS−ビオチンを投与しなかった対照ウサギでは、500μｇのペルオキシダーゼ 標識アビジンの注射後７日以内に有意なレベルの抗体が観察されなかった。しか しながら、125Ｉ−アビジン（15μｇ）の追加注射は５日後に免疫応答を引き起 こした。 本発明は、様々な目的で哺乳類宿主の血流中の剤の寿命を延長することに備え る。本発明は、哺乳類の血流中に存在する剤の病原性または毒性作用を限定する ための改良方法を提供する。その上、本発明は、サーヴェイラントとして働くこ とができる分子を提供するか、または生理学的活性物質の反復投与を避けるため に長期間に渡り治療様式を維持する、抗原の継続提示を考慮に入れる。 本発明の方法は、血流中の生理学的に有害な物質の存在についてサーヴェイラ ンス（免疫学的監視）が所望される場合に用途を見出す。そのような物質に特異 的に結合し、且つ血液中の接合体の寿命を延ばす長命血液関連成分に結合されて いる接合体を提供することにより、該接合体はそのような物質に結合しそして不 活性化する働きをすることができ、また長命血液関連成分の適当な選択により、 通常の生理学的排除機構を使って、そのような物質をゆっくりとまたは迅速に宿 主から排除することができる。 本明細書中に言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当業 者の技術水準を示すものである。全ての刊行物および特許出願は、あたかも個々 の刊行物または特許出願が具体的に且つ個別的に参考として組み込まれると指摘 されたかのように参考として本明細書中に組み込まれる。 今まで本発明を十分記載してきたが、添付の請求の範囲の精神または範囲から 逸脱することなくそれに多数の変更と改良を加え得ることは当業者にとって明白 であろう。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/46 9051−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．哺乳類宿主の血流中の標的結合メンバーの長期存在のための方法に使われ る第一の接合体を含んで成る組成物であって、ここで前記標的結合メンバーは前 記宿主の血流中に存在し得る生理学的活性物質である標的に特異的に結合し、前 記方法は アンカーと特異的結合ペアの第一メンバーとを含んで成る第一の接合体を前記 宿主に投与することを含んで成り、ここで前記特異的結合ペアの前記第一メンバ ーは前記標的結合メンバーであるかまたは連結用特異的結合ペアのメンバーであ り、ここで相補的メンバーは前記標的結合メンバーに接合されて第二の接合体を 形成し、前記アンカーは長命血液関連タンパク質に特異的に結合するかまたは長 命血液関連タンパク質に共有結合的に結合する反応性官能基であり；そして前記 アンカーが細胞性長命血液関連タンパク質に特異的に結合する時、前記第一メン バーは前記連結用結合メンバーであり； それにより前記宿主中に存在する標的が前記タンパク質に結合された状態にな る、前記組成物。 ２．前記アンカーが長命血液関連タンパク質に特異的に結合する、請求項１に 記載の組成物。 ３．前記第一メンバーがモノクローナル抗体またはそれの結合性断片である、 請求項２に記載の組成物。 ４．前記長命血液関連タンパク質が、アルブミン、フェリチン、α1−ミクロ グロブリン、免疫グロブリン、α２−マクログロブリン、α−，β−もしくはγ −グロブリン、チロキシン結合タンパク質またはステロイド結合タンパク質から 成る群より選択される、請求項２に記載の組成物。 ５．前記標的が前記宿主に対して外因性の細胞または化合物であ る、請求項２に記載の組成物。 ６．前記標的が前記宿主に対して内因性の細胞または化合物である、請求項２ に記載の組成物。 ７．前記アンカーがタンパク質に共有結合的に結合する反応性官能基である、 請求項１に記載の組成物。 ８．前記反応性官能基が、水性媒体中でアミンと反応してアミドを形成する反 応性エステルである、請求項７に記載の組成物。 ９．前記長命血液関連タンパク質が免疫グロブリンである、請求項７に記載の 組成物。 10．前記長命血液関連タンパク質が、アルブミン、フェリチン、α1−ミクロ グロブリン、免疫グロブリン、α２−マクログロブリン、α−，β−もしくはγ −グロブリン、チロキシン結合タンパク質またはステロイド結合タンパク質から 成る群より選択される、請求項７に記載の組成物。 11．前記アンカーと前記標的結合メンバーが前記血流中で不安定である共有結 合により連結される、請求項１に記載の組成物。 12．哺乳類宿主の血流中の標的結合メンバーの長期存在のための方法に使われ る第一の接合体を含んで成る組成物であって、ここで前記標的結合メンバーは前 記宿主の血流中に存在し得る生理学的活性物質である標的に特異的に結合し、前 記方法が アンカーと特異的結合ペアの第一メンバーとを含んで成る第一の接合体を前記 宿主に投与することを含んで成り、ここで前記特異的結合ペアの前記第一メンバ ーは連結用特異的結合ペアのメンバーであり、ここで相補的メンバーは前記標的 結合メンバーに接合されて第二の接合体を形成し、前記アンカーは長命血液関連 タンパク質に特異的に結合するかまたは長命血液関連タンパク質に共有結合的に 結合する反応性官能基であり； それにより前記宿主中に存在する標的が前記タンパク質に結合された状態にな る、前記組成物。 13．前記アンカーがＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含んで成る、請 求項12に記載の組成物。 14．前記Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルがビオチンエステルである、 請求項12に記載の組成物。 15．哺乳類宿主の血流中の標的結合メンバーの長期存在のための方法に使われ る第一および第二の接合体を含んで成る組成物であって、ここで前記標的結合メ ンバーは前記宿主の血流中に存在し得る生理学的活性物質である標的に特異的に 結合し、前記方法が アンカーと特異的結合ペアの第一メンバーとを含んで成る第一の接合体を前記 宿主に投与することを含んで成り、ここで前記特異的結合ペアの前記第一メンバ ーは連結用特異的結合ペアのメンバーであり、ここで相補的メンバーは前記標的 結合メンバーに接合されて第二の接合体を形成し、前記アンカーは長命血液関連 タンパク質に特異的に結合するかまたは長命血液関連タンパク質に共有結合的に 結合する反応性官能基であり； それにより前記宿主中に存在する標的が前記タンパク質に結合された状態にな る、前記組成物。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003501486A (ja) * 1999-06-09 2003-01-14 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2003508502A (ja) * 1999-09-07 2003-03-04 コンジュケム，インコーポレーテッド 長期存続抗腫瘍剤の産生のための方法および組成物
JP2006512895A (ja) * 2002-06-28 2006-04-20 ドマンティス リミテッド リガンド
JP2006520584A (ja) * 2002-11-08 2006-09-14 アブリンクス エン．ヴェー． 安定化単一ドメイン抗体
JP2007524341A (ja) * 2002-11-06 2007-08-30 アビディア インコーポレイテッド 単量体ドメインの組み合わせライブラリー
JP2014012670A (ja) * 2007-02-12 2014-01-23 A1M Pharma Ab 子癇前症の診断及び治療

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5612034A (en) * 1990-10-03 1997-03-18 Redcell, Inc. Super-globuling for in vivo extended lifetimes
US5840733A (en) * 1996-07-01 1998-11-24 Redcell, Canada, Inc. Methods and compositions for producing novel conjugates of thrombin inhibitors and endogenous carriers resulting in anti-thrombins with extended lifetimes
EP0975368A1 (en) * 1997-02-19 2000-02-02 Centocor, Inc. Sustained drug delivery and compositions useful therefor
EP0966304B1 (en) * 1997-02-20 2005-05-25 David S. Dime Site-specific drug delivery
US7033765B1 (en) 1997-02-20 2006-04-25 Toronto Research Chemicals, Inc. Site-specific drug delivery
US6824986B1 (en) 1997-10-06 2004-11-30 University Of Cincinnati Methods for measuring in vivo cytokine production
ATE218892T1 (de) 1997-11-07 2002-06-15 Conjuchem Inc Affinitätsmarkierer für menschliches serum albumin
US6437092B1 (en) 1998-11-06 2002-08-20 Conjuchem, Inc. Conjugates of opioids and endogenous carriers
US6942859B2 (en) 1998-03-13 2005-09-13 University Of Southern California Red blood cells covalently bound with polymers
US6312685B1 (en) 1998-03-13 2001-11-06 Timothy C. Fisher Red blood cells covalently bound with two different polyethylene glycol derivatives
US6107489A (en) * 1998-03-17 2000-08-22 Conjuchem, Inc. Extended lifetimes in vivo renin inhibitors
CA2291066A1 (en) * 1998-03-23 1999-09-30 Conjuchem, Inc. Local delivery of long lasting therapeutic agents
ATE473759T1 (de) 1998-05-22 2010-07-15 Univ Leland Stanford Junior Bifunktionelle moleküle sowie darauf basierende therapien.
US6440417B1 (en) 1998-11-06 2002-08-27 Conjuchem, Inc. Antibodies to argatroban derivatives and their use in therapeutic and diagnostic treatments
US6605648B1 (en) * 1999-04-06 2003-08-12 Phillips Plastics Corporation Sinterable structures and method
SI1180121T1 (en) * 1999-05-17 2004-04-30 Conjuchem, Inc. Long lasting insulinotropic peptides
US7601691B2 (en) * 1999-05-17 2009-10-13 Conjuchem Biotechnologies Inc. Anti-obesity agents
US6514500B1 (en) * 1999-10-15 2003-02-04 Conjuchem, Inc. Long lasting synthetic glucagon like peptide {GLP-!}
US6849714B1 (en) * 1999-05-17 2005-02-01 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
US7144854B1 (en) 1999-09-10 2006-12-05 Conjuchem, Inc. Long lasting anti-angiogenic peptides
EP1623994A3 (en) * 1999-05-17 2008-07-16 ConjuChem Biotechnologies Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
BR0010757A (pt) * 1999-05-17 2002-02-19 Conjuchem Inc Inibidores de peptìdeo de fusão de longa duração de infecção viral
US20090175821A1 (en) * 1999-05-17 2009-07-09 Bridon Dominique P Modified therapeutic peptides with extended half-lives in vivo
US6887470B1 (en) 1999-09-10 2005-05-03 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
US20040266673A1 (en) * 2002-07-31 2004-12-30 Peter Bakis Long lasting natriuretic peptide derivatives
WO2001014886A2 (en) * 1999-08-23 2001-03-01 Polaris Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of binding between proteins and macromolecular ligands
EP1889639A3 (en) * 1999-09-07 2008-04-09 ConjuChem Biotechnologies Inc. Methods and compositions containing succinimide or maleimide derivatives of antineoplastic agents, for producing long lasting antineoplastic agents
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
US7090851B1 (en) 1999-09-10 2006-08-15 Conjuchem Inc. Long lasting fusion peptide inhibitors of viral infection
US7220552B1 (en) 1999-11-19 2007-05-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Bifunctional molecules and their use in the disruption of protein-protein interactions
US6887842B1 (en) 1999-11-19 2005-05-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulating a pharmacokinetic property of a drug by administering a bifunctional molecule containing the drug
EP1229924A4 (en) 1999-11-19 2004-12-15 Univ Leland Stanford Junior TARGETED BIFUNCTIONAL MOLECULES AND THERAPIES BASED THEREON
AU2001270231A1 (en) * 2000-06-28 2002-01-08 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Localized delivery to a target surface
CN1491233A (zh) * 2001-02-02 2004-04-21 康久化学公司 长效生长激素释放因子衍生物
ATE396202T1 (de) * 2001-02-16 2008-06-15 Conjuchem Biotechnologies Inc Lang wirkendes glucagon-ähnliches peptid-2 für die behandlung von gastrointestinalen krankheiten und störungen
DK1479691T3 (da) * 2001-05-31 2007-03-12 John Erickson Langvarigt aktive fuionspeptidinhibitorer for HIV infektion
ES2384235T3 (es) * 2001-10-22 2012-07-02 The Scripps Research Institute Compuestos dirigidos a integrinas
CA2476468A1 (en) * 2002-02-13 2003-08-21 Medbridge, Inc. Protein carrier system for therapeutic oligonucleotides
EP1497466A4 (en) * 2002-05-01 2007-11-14 Trellis Bioscience Inc BINARY OR POLYNARY TARGETING AND USES THEREOF
AU2003239478A1 (en) * 2002-06-04 2003-12-22 Eli Lilly And Company Modified glucagon-like peptide-1 analogs
AU2003275116A1 (en) * 2002-09-24 2004-04-19 Frontier Biotechnologies Co., Ltd Peptide derivative fusion inhibitors of hiv infection
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
NZ541365A (en) * 2002-12-27 2009-09-25 Diobex Inc Compositions and methods for the prevention and control of insulin-induced hypoglycemia
US7655618B2 (en) * 2002-12-27 2010-02-02 Diobex, Inc. Compositions and methods for the prevention and control of insulin-induced hypoglycemia
DE602004021603D1 (de) * 2003-07-25 2009-07-30 Conjuchem Biotechnologies Inc Insulinderivative mit langanhaltender wirkung und verfahren zu deren herstellung
US7214190B1 (en) 2003-09-09 2007-05-08 Kitchener Clark Wilson Apparatus and method for noninvasive monitoring of analytes in body fluids
CA2564031A1 (en) * 2004-04-23 2005-11-03 Conjuchem Biotechnologies Inc. Method for the purification of albumin conjugates
CA2565658A1 (en) * 2004-05-06 2005-11-17 Conjuchem Biotechnologies Inc. Compounds for specific viral target
US8921528B2 (en) 2004-06-01 2014-12-30 Domantis Limited Bispecific fusion antibodies with enhanced serum half-life
US7713944B2 (en) * 2004-10-13 2010-05-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers comprising activated disulfides which bind to plasma proteins and their use for delivery to cells
TW200732347A (en) 2005-10-06 2007-09-01 Trophogen Inc VEGF analogs and methods of use
US8168592B2 (en) * 2005-10-21 2012-05-01 Amgen Inc. CGRP peptide antagonists and conjugates
US8039432B2 (en) * 2005-11-09 2011-10-18 Conjuchem, Llc Method of treatment of diabetes and/or obesity with reduced nausea side effect
EP1976876A4 (en) * 2005-12-22 2010-01-13 Conjuchem Biotechnologies Inc PROCESS FOR PRODUCING PREFORMED ALBUMIN CONJUGATES AND THERAPEUTIC AGENT
US7982018B2 (en) * 2006-10-16 2011-07-19 Conjuchem, Llc Modified corticotropin releasing factor peptides and uses thereof
US20090099074A1 (en) * 2007-01-10 2009-04-16 Conjuchem Biotechnologies Inc. Modulating food intake
US20090088378A1 (en) * 2007-01-12 2009-04-02 Omar Quraishi Long lasting inhibitors of viral infection
BRPI0811864A2 (pt) * 2007-05-16 2014-11-18 Conjuchem Biotechnologies Inc Derivados de ácido cistéico de peptídeos antivirais
WO2008157824A2 (en) * 2007-06-21 2008-12-24 Conjuchem Biotechnologies Inc. Thrombopoietin peptide conjugates
US20090186819A1 (en) * 2007-12-11 2009-07-23 Marieve Carrier Formulation of insulinotropic peptide conjugates
KR101593285B1 (ko) 2008-10-29 2016-02-11 아블린쓰 엔.브이. 단일 도메인 항원 결합 분자의 제형
CA2739352C (en) 2008-10-29 2021-07-13 Wyeth Llc Methods for purification of single domain antigen binding molecules
CN107115314B (zh) * 2011-06-02 2022-04-29 加利福尼亚大学董事会 膜包封的纳米颗粒及使用方法
AU2013216943B2 (en) 2012-02-10 2018-04-19 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
KR20220051197A (ko) 2012-05-17 2022-04-26 익스텐드 바이오사이언시즈, 인크. 개선된 약물 전달용 캐리어
EP3572515B1 (en) 2012-07-30 2021-07-21 Trophogen Inc. Glycoprotein hormone long-acting superagonists
US10457713B2 (en) 2012-07-30 2019-10-29 Trophogen, Inc. Glycoprotein hormone long-acting superagonists
CN105873602A (zh) 2013-11-05 2016-08-17 特洛佛根股份有限公司 糖蛋白激素长效超激动剂
US9585934B2 (en) 2014-10-22 2017-03-07 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin D conjugates
WO2016065052A1 (en) 2014-10-22 2016-04-28 Extend Biosciences, Inc. Insulin vitamin d conjugates
US9789197B2 (en) 2014-10-22 2017-10-17 Extend Biosciences, Inc. RNAi vitamin D conjugates
JP2019518017A (ja) 2016-02-09 2019-06-27 アレクサンダー・クランツ トレースレス親和性標識を使用したタンパク質の部位選択的官能化
JP2021502418A (ja) 2017-11-04 2021-01-28 アドバンスト・プロテオーム・セラピューティクス・インコーポレイテッド ポリペプチドを修飾するための組成物及び方法
EP4593867A2 (en) 2022-09-30 2025-08-06 Extend Biosciences, Inc. Long-acting parathyroid hormone

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1023287A (en) * 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
JPS55136235A (en) * 1979-04-09 1980-10-23 Teijin Ltd Antitumor protein complex and its preparation
JPS57106626A (en) * 1980-12-22 1982-07-02 Teijin Ltd Cytotoxic protein complex and its preparation
JPS57106625A (en) * 1980-12-22 1982-07-02 Teijin Ltd Cytotoxic protein complex and its preparation
NL188622C (nl) * 1981-12-15 1992-08-17 Cordis Europ Werkwijze ter verbetering van de bloedcompatibiliteit van een materiaaloppervlak door bekleding daarvan met een heparine of heparine-analoga en een eiwit houdende film, alsmede voorwerp, omvattende een oppervlak met verbeterde bloedcompatibiliteit verkregen onder toepassing van een op het oppervlak aangebrachte heparine of heparine-analoga en een eiwit houdende film.
JPS5942323A (ja) * 1982-09-02 1984-03-08 Teijin Ltd 選択的殺細胞性蛋白複合体及びその製造方法
JPS59116229A (ja) * 1982-12-24 1984-07-05 Teijin Ltd 細胞毒性複合体を活性成分とする癌治療用剤およびその製造法
DE3482649D1 (de) * 1983-12-16 1990-08-09 Denis M Callewaert Stellenselektiver plasminogenaktivator und verfahren zu seiner herstellung und verwendung.
US4954637A (en) * 1984-03-10 1990-09-04 Cetus Corporation Certain maleimide-N-alkylenecarboxylate-ortho-nitrobenzenesulfonic acid esters and derivatives useful for coupling biological materials
CA1314245C (en) * 1984-05-23 1993-03-09 Franz Jansen Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators
JPS611622A (ja) * 1984-06-14 1986-01-07 Teijin Ltd 細胞毒性複合体及びその製造法
US4676980A (en) * 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
JPS62228025A (ja) * 1985-12-27 1987-10-06 Teijin Ltd 抗体複合体の製造方法
JPS62267240A (ja) * 1986-05-15 1987-11-19 Teijin Ltd 安定な細胞毒性蛋白複合体の製造法
US4971792A (en) * 1987-03-27 1990-11-20 The Wistar Institute Monoclonal antibodies against glycolipid antigens
JPS63264533A (ja) * 1987-04-21 1988-11-01 Teijin Ltd 殺細胞性免疫グロブリンとその製造方法
NL8701337A (nl) * 1987-06-09 1989-01-02 Sentron V O F Substraat voorzien van een bloedcompatibel oppervlak, verkregen door koppeling aan het oppervlak van een fysiologisch aktieve stof met remmende invloed op de vorming van bloedstolsels en/of in staat om gevormde bloedstolsels af te breken, alsmede werkwijze ter vervaardiging van het substraat.
US4981979A (en) * 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
AU625613B2 (en) * 1988-01-05 1992-07-16 Novartis Ag Novel chimeric antibodies
GB2218100A (en) * 1988-03-02 1989-11-08 Erling Sundrehagen Conjugates for the detection and/or quantification of antigenic substances in body fluids
US4883650A (en) * 1988-04-13 1989-11-28 Albert Einstein College Of Medicine - Of Yeshiva University Radioidohippuric acid ester, a conjugate thereof, and methods of making the same
US5112615A (en) * 1988-08-03 1992-05-12 New England Deaconess Hospital Corporation Soluble hirudin conjugates
US5169933A (en) * 1988-08-15 1992-12-08 Neorx Corporation Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging
DE69030829T2 (de) * 1989-03-10 1998-01-15 Hoffmann La Roche Reagenzien zum Nachweis von Drogen
EP0395918A3 (en) * 1989-04-13 1991-10-23 Vascular Laboratory, Inc. Plasminogen activator complex of pure pro-urokinase covalently bound by a disulfide bridge to human serum albumin
US5308604A (en) * 1989-04-19 1994-05-03 Deutsches Krebsforschungsinstitut Conjugates for tumor localization and/or tumor therapy
SE509359C2 (sv) * 1989-08-01 1999-01-18 Cemu Bioteknik Ab Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel
US5328840A (en) * 1989-08-15 1994-07-12 The Research Foundation Of The State University Of New York Method for preparing targeted carrier erythrocytes
US5177059A (en) * 1989-11-15 1993-01-05 Sandoz Ltd. Polymyxin B conjugates
US5116944A (en) * 1989-12-29 1992-05-26 Neorx Corporation Conjugates having improved characteristics for in vivo administration
DE4014540A1 (de) * 1990-05-07 1991-11-14 Klaus Dr Tschaikowsky Immunkonjugate zur prophylaxe und therapie von organschaeden bei entzuendlichen prozessen
DK176290D0 (da) * 1990-07-24 1990-07-24 Novo Nordisk As Terapeutisk og diagnostisk praeparat
US5843440A (en) * 1990-10-03 1998-12-01 Redcell Canada, Inc. Cellular and serum protein anchors for modulating pharmacokinetics
US5612034A (en) * 1990-10-03 1997-03-18 Redcell, Inc. Super-globuling for in vivo extended lifetimes
JP3105629B2 (ja) * 1991-04-23 2000-11-06 サングスタット メディカル コーポレイション 特異的結合ペアのメンバーの細胞活性調節接合体
US5326778A (en) * 1992-03-03 1994-07-05 Research Corporation Technologies, Inc. Conjugates of biotin and deferoxamine for radioimmunoimaging and radioimmunotherapy
EP0602290B1 (en) * 1992-12-04 1999-08-25 ConjuChem, Inc. Antibody-conjugated Hepatitis B surface antigen and use thereof
US5283344A (en) * 1993-03-10 1994-02-01 Abbott Laboratories Coupling method using selective amination of maleimide
CA2179990A1 (en) * 1994-01-12 1995-07-20 Gary Robert Bower Biological targeting agents
DE4435087A1 (de) * 1994-09-30 1996-04-04 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur Behandlung von Infektions-, Autoimmun- und Hauterkrankungen

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003501486A (ja) * 1999-06-09 2003-01-14 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2011173913A (ja) * 1999-06-09 2011-09-08 Ktb Tumorforschungs Gmbh 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2014055192A (ja) * 1999-06-09 2014-03-27 Ktb Tumorforschungs Gmbh 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2016047847A (ja) * 1999-06-09 2016-04-07 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＫＴＢ Ｔｕｍｏｒｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓ ＧｍｂＨ 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2018035191A (ja) * 1999-06-09 2018-03-08 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＫＴＢ Ｔｕｍｏｒｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓ ＧｍｂＨ 注射可能な医薬調製剤の製法
JP2003508502A (ja) * 1999-09-07 2003-03-04 コンジュケム，インコーポレーテッド 長期存続抗腫瘍剤の産生のための方法および組成物
JP2006512895A (ja) * 2002-06-28 2006-04-20 ドマンティス リミテッド リガンド
JP2011125342A (ja) * 2002-06-28 2011-06-30 Domantis Ltd リガンド
JP2007524341A (ja) * 2002-11-06 2007-08-30 アビディア インコーポレイテッド 単量体ドメインの組み合わせライブラリー
JP2006520584A (ja) * 2002-11-08 2006-09-14 アブリンクス エン．ヴェー． 安定化単一ドメイン抗体
JP2014012670A (ja) * 2007-02-12 2014-01-23 A1M Pharma Ab 子癇前症の診断及び治療

Also Published As

Publication number Publication date
CA2172630C (en) 2008-05-20
WO1995010302A1 (en) 1995-04-20
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DE69430450T2 (de) 2002-11-07
US6103233A (en) 2000-08-15
DE69434725T2 (de) 2007-05-10
AU7955894A (en) 1995-05-04
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EP1132097A2 (en) 2001-09-12
JP2006056907A (ja) 2006-03-02

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