JPH10227780A - 糖化ヘモグロビンの測定方法および装置 - Google Patents
糖化ヘモグロビンの測定方法および装置Info
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- JPH10227780A JPH10227780A JP3021897A JP3021897A JPH10227780A JP H10227780 A JPH10227780 A JP H10227780A JP 3021897 A JP3021897 A JP 3021897A JP 3021897 A JP3021897 A JP 3021897A JP H10227780 A JPH10227780 A JP H10227780A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問
題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を精度良く測定できる、糖化ヘモグロビンの測定方法お
よび装置を提供する。 【解決手段】 アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を用
いることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方法、お
よびアフィニティクロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラムとカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤
が充填されたカラムを有し、上記カチオン交換クロマト
グラフィー用充填剤が充填されたカラムの前後にバルブ
が設けられていることを特徴とする糖化ヘモグロビンの
測定用装置。
題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を精度良く測定できる、糖化ヘモグロビンの測定方法お
よび装置を提供する。 【解決手段】 アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を用
いることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方法、お
よびアフィニティクロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラムとカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤
が充填されたカラムを有し、上記カチオン交換クロマト
グラフィー用充填剤が充填されたカラムの前後にバルブ
が設けられていることを特徴とする糖化ヘモグロビンの
測定用装置。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィーによる糖化ヘモグロビンの測定方法および装置に
関し、特に糖化ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法および装
置に関する。
フィーによる糖化ヘモグロビンの測定方法および装置に
関し、特に糖化ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法および装
置に関する。
【０００２】
【従来の技術】糖化ヘモグロビンとは血液中の糖がその
濃度に比例して赤血球に入った後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、その濃度は過去１〜２カ月
間の血液中の平均的な糖濃度を反映すると言われてい
る。そして血糖値や尿糖値に比べ生理的要因に左右され
にくいので、血液中の糖化ヘモグロビンの濃度は、糖尿
病の診断の指標とされ、特に、糖化ヘモグロビンのう
ち、糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃとい
う）分画が糖尿病の診断の最適な指標として広く使用さ
れている。
濃度に比例して赤血球に入った後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、その濃度は過去１〜２カ月
間の血液中の平均的な糖濃度を反映すると言われてい
る。そして血糖値や尿糖値に比べ生理的要因に左右され
にくいので、血液中の糖化ヘモグロビンの濃度は、糖尿
病の診断の指標とされ、特に、糖化ヘモグロビンのう
ち、糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃとい
う）分画が糖尿病の診断の最適な指標として広く使用さ
れている。
【０００３】血液中の糖化ヘモグロビンの濃度の測定
は、主にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により
行われている（特公平８−７１９８号公報参照）。血液
中のＨｂＡ１ｃの濃度は、血液試料をカチオン交換液体
クロマトグラフィーにかけて得られるクロマトグラムに
おける全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビンピーク
＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積を１００とした場合
の、ＨｂＡ１ｃピーク面積の割合（％）として表され
る。この測定方法は、近年では、測定時間の短縮化が進
み、１検体あたり数分間で測定が行われている。
は、主にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により
行われている（特公平８−７１９８号公報参照）。血液
中のＨｂＡ１ｃの濃度は、血液試料をカチオン交換液体
クロマトグラフィーにかけて得られるクロマトグラムに
おける全ヘモグロビンピーク（糖化ヘモグロビンピーク
＋非糖化ヘモグロビンピーク）面積を１００とした場合
の、ＨｂＡ１ｃピーク面積の割合（％）として表され
る。この測定方法は、近年では、測定時間の短縮化が進
み、１検体あたり数分間で測定が行われている。
【０００４】また、アフィニティクロマトグラフィーに
よって、糖化ヘモグロビンと非糖化ヘモグロビンを分離
する方法も知られている（特開平３−１５２４５５号公
報参照）。この方法は、特定のボロン酸誘導体をリガン
ドとするものである。この方法を用いると、糖化ヘモグ
ロビンと非糖化ヘモグロビンを分離するので、例えば、
カルバミル化ヘモグロビン（以下、ＣＨｂという）やア
セチル化ヘモグロビン（以下、ＡＨｂという）のような
変性ヘモグロビンの影響を受けずにＨｂＡ１ｃの測定を
できるという利点がある。
よって、糖化ヘモグロビンと非糖化ヘモグロビンを分離
する方法も知られている（特開平３−１５２４５５号公
報参照）。この方法は、特定のボロン酸誘導体をリガン
ドとするものである。この方法を用いると、糖化ヘモグ
ロビンと非糖化ヘモグロビンを分離するので、例えば、
カルバミル化ヘモグロビン（以下、ＣＨｂという）やア
セチル化ヘモグロビン（以下、ＡＨｂという）のような
変性ヘモグロビンの影響を受けずにＨｂＡ１ｃの測定を
できるという利点がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、カチオ
ン交換液体クロマトグラフィー法には、ＨｂＡ１ｃの測
定値が、ＣＨｂやＡＨｂのような変性ヘモグロビンの影
響を受けやすいという問題点がある。また、アフィニテ
ィクロマトグラフィーによる方法においては、ＨｂＡ１
ｃ以外の糖化ヘモグロビンをも測定してしまうという問
題点がある。
ン交換液体クロマトグラフィー法には、ＨｂＡ１ｃの測
定値が、ＣＨｂやＡＨｂのような変性ヘモグロビンの影
響を受けやすいという問題点がある。また、アフィニテ
ィクロマトグラフィーによる方法においては、ＨｂＡ１
ｃ以外の糖化ヘモグロビンをも測定してしまうという問
題点がある。
【０００６】本発明は上記問題点を解決するものであ
り、その目的は、カチオン交換クロマトグラフィーにお
いて問題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受ける
ことなく、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分
離することができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂ
Ａ１ｃを精度良く測定できる、糖化ヘモグロビンの測定
方法および装置を提供することにある。
り、その目的は、カチオン交換クロマトグラフィーにお
いて問題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受ける
ことなく、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分
離することができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂ
Ａ１ｃを精度良く測定できる、糖化ヘモグロビンの測定
方法および装置を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明の請求項１記載の
糖化ヘモグロビンの測定方法は、アフィニティクロマト
グラフィー用充填剤およびカチオン交換クロマトグラフ
ィー用充填剤を用いたことを特徴とする。
糖化ヘモグロビンの測定方法は、アフィニティクロマト
グラフィー用充填剤およびカチオン交換クロマトグラフ
ィー用充填剤を用いたことを特徴とする。
【０００８】本発明の請求項２記載の糖化ヘモグロビン
の測定方法は、アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を、
この順に用いることを特徴とする。
の測定方法は、アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を、
この順に用いることを特徴とする。
【０００９】本発明の請求項３記載の糖化ヘモグロビン
の測定方法は、試料をアフィニティクロマトグラフィー
用充填剤で分離し、次いでアフィニティクロマトグラフ
ィー用充填剤に吸着された成分を、カチオン交換クロマ
トグラフィー用充填剤で分離することを特徴とする。
の測定方法は、試料をアフィニティクロマトグラフィー
用充填剤で分離し、次いでアフィニティクロマトグラフ
ィー用充填剤に吸着された成分を、カチオン交換クロマ
トグラフィー用充填剤で分離することを特徴とする。
【００１０】本発明の糖化ヘモグロビンの測定用装置
は、アフィニティクロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラムとカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤
が充填されたカラムを有し、上記カチオン交換クロマト
グラフィー用充填剤が充填されたカラムの前後にバルブ
が設けられていることを特徴とする。
は、アフィニティクロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラムとカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤
が充填されたカラムを有し、上記カチオン交換クロマト
グラフィー用充填剤が充填されたカラムの前後にバルブ
が設けられていることを特徴とする。
【００１１】本発明において用いられるアフィニティク
ロマトグラフィー用充填剤としては、糖成分を吸着でき
る充填剤であれば特に限定されない。例えば、リガンド
としてボロン酸誘導体（ｍ−アミノフェニルボロン酸な
ど）が基材に固定化されたものが挙げられる。上記基材
としては、ポリマー系基材（例えば、ポリスチレン、ポ
リアクリレート等の合成高分子微粒子；ポリアミノ酸、
多糖類等の天然高分子微粒子など）、無機系基材（例え
ば、シリカ粒子など）などが挙げられる。充填剤の平均
粒径としては、１〜２０μｍが好ましい。
ロマトグラフィー用充填剤としては、糖成分を吸着でき
る充填剤であれば特に限定されない。例えば、リガンド
としてボロン酸誘導体（ｍ−アミノフェニルボロン酸な
ど）が基材に固定化されたものが挙げられる。上記基材
としては、ポリマー系基材（例えば、ポリスチレン、ポ
リアクリレート等の合成高分子微粒子；ポリアミノ酸、
多糖類等の天然高分子微粒子など）、無機系基材（例え
ば、シリカ粒子など）などが挙げられる。充填剤の平均
粒径としては、１〜２０μｍが好ましい。
【００１２】本発明において用いられるカチオン交換ク
ロマトグラフィー用充填剤としては、公知のカチオン交
換充填剤が用いられる。例えば、基材となる粒子に、カ
ルボキシル基、スルホン酸基などのカチオン交換能を有
する官能基が導入された充填剤が挙げられる。上記基材
としては、ポリマー系基材（例えば、ポリスチレン、ポ
リアクリレート等の合成高分子微粒子；ポリアミノ酸、
多糖類等の天然高分子微粒子など）、無機系基材（例え
ば、シリカ粒子など）などが挙げられる。上記官能基を
導入する方法としては、例えば、上記の官能基を有する
モノマーを材料として重合する；基材となる粒子を調製
した後、官能基を有する低分子化合物を化学反応によっ
て結合させるなどの方法がある。充填剤の平均粒径とし
ては、１〜２０μｍが好ましい。
ロマトグラフィー用充填剤としては、公知のカチオン交
換充填剤が用いられる。例えば、基材となる粒子に、カ
ルボキシル基、スルホン酸基などのカチオン交換能を有
する官能基が導入された充填剤が挙げられる。上記基材
としては、ポリマー系基材（例えば、ポリスチレン、ポ
リアクリレート等の合成高分子微粒子；ポリアミノ酸、
多糖類等の天然高分子微粒子など）、無機系基材（例え
ば、シリカ粒子など）などが挙げられる。上記官能基を
導入する方法としては、例えば、上記の官能基を有する
モノマーを材料として重合する；基材となる粒子を調製
した後、官能基を有する低分子化合物を化学反応によっ
て結合させるなどの方法がある。充填剤の平均粒径とし
ては、１〜２０μｍが好ましい。
【００１３】本発明で用いられる液体クロマトグラフの
システムについては、後述するが、液体クロマトグラフ
ィー測定の条件等については、流速は０．２〜５ｍｌ／
分程度、糖化ヘモグロビンおよび非糖化ヘモグロビンの
検出には４１５ｎｍの吸光度測定が適当である。測定試
料は、溶血された血液であり、例えば、血液抗凝固剤
（例えば、フッ化ナトリウムなど）が収容された採血管
により採血された（または、採血後、血液抗凝固剤を加
えてもよい）全血血液を、溶血剤（トリトンＸ−１００
などの界面活性剤を含む緩衝液など）で５０〜３００倍
程度に溶血・希釈したものが挙げられる。測定試料の液
体クロマトグラフへの注入量は検出の感度により異なる
が、通常、１０〜３００μｌ程度が適当である。
システムについては、後述するが、液体クロマトグラフ
ィー測定の条件等については、流速は０．２〜５ｍｌ／
分程度、糖化ヘモグロビンおよび非糖化ヘモグロビンの
検出には４１５ｎｍの吸光度測定が適当である。測定試
料は、溶血された血液であり、例えば、血液抗凝固剤
（例えば、フッ化ナトリウムなど）が収容された採血管
により採血された（または、採血後、血液抗凝固剤を加
えてもよい）全血血液を、溶血剤（トリトンＸ−１００
などの界面活性剤を含む緩衝液など）で５０〜３００倍
程度に溶血・希釈したものが挙げられる。測定試料の液
体クロマトグラフへの注入量は検出の感度により異なる
が、通常、１０〜３００μｌ程度が適当である。
【００１４】本発明で用いられる液体クロマトグラフの
システムとしては、以下の３つのシステムが例示され
る。第１のシステムは、図１に示すシステムであり、溶
離液１が切り替え機構（図示せず）を通り、送液ポンプ
２により試料導入装置３を経由して、アフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤（以下、ＡＦＣ用充填剤とい
う）が充填されたカラム４（以下、ＡＦＣ用カラム４と
いう）に入り、次いで、カチオン交換クロマトグラフィ
ー用充填剤（以下、ＣＥＣ用充填剤という）が充填され
たカラム５（以下、ＣＥＣ用カラム５という）に入り、
試料中の各成分が分離される。分離された各成分は検出
器６によって、例えば、吸光度を測定する等によって検
出される。
システムとしては、以下の３つのシステムが例示され
る。第１のシステムは、図１に示すシステムであり、溶
離液１が切り替え機構（図示せず）を通り、送液ポンプ
２により試料導入装置３を経由して、アフィニティクロ
マトグラフィー用充填剤（以下、ＡＦＣ用充填剤とい
う）が充填されたカラム４（以下、ＡＦＣ用カラム４と
いう）に入り、次いで、カチオン交換クロマトグラフィ
ー用充填剤（以下、ＣＥＣ用充填剤という）が充填され
たカラム５（以下、ＣＥＣ用カラム５という）に入り、
試料中の各成分が分離される。分離された各成分は検出
器６によって、例えば、吸光度を測定する等によって検
出される。
【００１５】上記システムについて、さらに詳述する
と、まず、（１）ＡＦＣ用カラム４に、糖化ヘモグロビ
ンが吸着するような溶離液Ａを流しておく。（２）次い
で、試料を試料導入装置３より注入する。（３）試料中
の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖化ヘモグロビン成分がＡＦＣ
用カラム４に吸着され、非糖化ヘモグロビン成分はＣＥ
Ｃ用カラム５に直ぐ移動する。（４）溶離液Ｂに切り換
え、ＡＦＣ用カラム４に吸着した糖化ヘモグロビン成分
を脱離させる。（５）脱離した糖化ヘモグロビン成分
は、ＣＥＣ用カラム５に導かれ、カチオン交換反応によ
り、順次溶出する。（６）溶出した糖化ヘモグロビン成
分は、溶出順に検出器６に導かれる。
と、まず、（１）ＡＦＣ用カラム４に、糖化ヘモグロビ
ンが吸着するような溶離液Ａを流しておく。（２）次い
で、試料を試料導入装置３より注入する。（３）試料中
の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖化ヘモグロビン成分がＡＦＣ
用カラム４に吸着され、非糖化ヘモグロビン成分はＣＥ
Ｃ用カラム５に直ぐ移動する。（４）溶離液Ｂに切り換
え、ＡＦＣ用カラム４に吸着した糖化ヘモグロビン成分
を脱離させる。（５）脱離した糖化ヘモグロビン成分
は、ＣＥＣ用カラム５に導かれ、カチオン交換反応によ
り、順次溶出する。（６）溶出した糖化ヘモグロビン成
分は、溶出順に検出器６に導かれる。
【００１６】上記第１のシステムにおいて、溶離液Ａと
しては、一般に高速液体クロマトグラフィー（以下、Ｈ
ＰＬＣという）に用いられる緩衝液、例えば、リン酸塩
などの無機酸塩緩衝液が用いられる。溶離液ＡのｐＨと
しては、７〜１１が適当である。
しては、一般に高速液体クロマトグラフィー（以下、Ｈ
ＰＬＣという）に用いられる緩衝液、例えば、リン酸塩
などの無機酸塩緩衝液が用いられる。溶離液ＡのｐＨと
しては、７〜１１が適当である。
【００１７】上記溶離液Ｂは、ＡＦＣ用充填剤に吸着し
た糖成分よりも、ボロン酸に対して親和性の強い成分を
含む緩衝液により構成される。このような成分として
は、例えば、ソルビトールやトリス（ヒドロキシメチ
ル）アミノメタンが挙げられる。溶離液ＢのｐＨとして
は、４〜７が適当である。
た糖成分よりも、ボロン酸に対して親和性の強い成分を
含む緩衝液により構成される。このような成分として
は、例えば、ソルビトールやトリス（ヒドロキシメチ
ル）アミノメタンが挙げられる。溶離液ＢのｐＨとして
は、４〜７が適当である。
【００１８】第２のシステムは、図２に示すシステムで
あり、第１のシステムにおける、ＣＥＣ用カラム５の前
後に三方バルブ７および三方バルブ８が設けられてい
る。なお、図２において、三方バルブ７および三方バル
ブ８上にａ，ｂ，ｃとして表したものは、各バルブのポ
ートを示している。
あり、第１のシステムにおける、ＣＥＣ用カラム５の前
後に三方バルブ７および三方バルブ８が設けられてい
る。なお、図２において、三方バルブ７および三方バル
ブ８上にａ，ｂ，ｃとして表したものは、各バルブのポ
ートを示している。
【００１９】上記第２のシステムについて、さらに詳述
すると、まず、（１）ＡＦＣ用カラム４に、糖化ヘモグ
ロビンが吸着するような溶離液Ｃを流しておく。（２）
次いで、試料を試料導入装置３より注入する。このと
き、三方バルブ７および三方バルブ８のポートは、７ａ
−７ｃ；８ｃ−８ｂが連結しているようにする。（３）
試料中の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖化ヘモグロビン成分が
ＡＦＣ用カラム４に吸着され、非糖化ヘモグロビン成分
は他の流路９を通って（ＣＥＣ用カラム５を通過せず
に）検出器６に導かれる。（４）非糖化ヘモグロビン成
分が、三方バルブ７および三方バルブ８を通過後、三方
バルブ７および三方バルブ８のポートを切り換え、７ａ
−７ｂ；８ａ−８ｂが連結するようにする。（５）溶離
液Ｄに切り換え、ＡＦＣ用カラム４に吸着した糖化ヘモ
グロビン成分を脱離させる。（６）脱離した糖化ヘモグ
ロビン成分は、三方バルブ７を通過してＣＥＣ用カラム
５に導かれ、カチオン交換反応により、順次溶出する。
（７）溶出した糖化ヘモグロビン成分は、溶出順に検出
器６に導かれる。
すると、まず、（１）ＡＦＣ用カラム４に、糖化ヘモグ
ロビンが吸着するような溶離液Ｃを流しておく。（２）
次いで、試料を試料導入装置３より注入する。このと
き、三方バルブ７および三方バルブ８のポートは、７ａ
−７ｃ；８ｃ−８ｂが連結しているようにする。（３）
試料中の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖化ヘモグロビン成分が
ＡＦＣ用カラム４に吸着され、非糖化ヘモグロビン成分
は他の流路９を通って（ＣＥＣ用カラム５を通過せず
に）検出器６に導かれる。（４）非糖化ヘモグロビン成
分が、三方バルブ７および三方バルブ８を通過後、三方
バルブ７および三方バルブ８のポートを切り換え、７ａ
−７ｂ；８ａ−８ｂが連結するようにする。（５）溶離
液Ｄに切り換え、ＡＦＣ用カラム４に吸着した糖化ヘモ
グロビン成分を脱離させる。（６）脱離した糖化ヘモグ
ロビン成分は、三方バルブ７を通過してＣＥＣ用カラム
５に導かれ、カチオン交換反応により、順次溶出する。
（７）溶出した糖化ヘモグロビン成分は、溶出順に検出
器６に導かれる。
【００２０】上記溶離液Ｃとしては、上記溶離液Ａと同
様のものが、溶離液Ｄとしては、上記溶離液Ｂと同様の
ものが、例示される。
様のものが、溶離液Ｄとしては、上記溶離液Ｂと同様の
ものが、例示される。
【００２１】上記第２のシステムの特徴は、第１のシス
テムにおける、ＣＥＣ用カラム５の前後に三方バルブ７
および三方バルブ８を設けることにより非糖化ヘモグロ
ビン成分はＣＥＣ用カラム５を通過せずに検出される。
これにより、非糖化ヘモグロビン成分のＣＥＣ用カラム
５内での滞留が解消され、より迅速な分析が可能とな
る。上記バルブは、上述のように溶離液の流路を変更す
る機能を有していれば、三方バルブに限定されない。
テムにおける、ＣＥＣ用カラム５の前後に三方バルブ７
および三方バルブ８を設けることにより非糖化ヘモグロ
ビン成分はＣＥＣ用カラム５を通過せずに検出される。
これにより、非糖化ヘモグロビン成分のＣＥＣ用カラム
５内での滞留が解消され、より迅速な分析が可能とな
る。上記バルブは、上述のように溶離液の流路を変更す
る機能を有していれば、三方バルブに限定されない。
【００２２】第３のシステムは、図３に示すシステムで
あり、第１のシステムおよび第２のシステムにおいて
は、ＡＦＣ用充填剤およびＣＥＣ用充填剤は、それぞれ
別のカラムに充填されていたが、第３のシステムにおい
ては、この両方の充填剤を一本の充填剤混合カラム１０
中に充填したことを特徴とする。
あり、第１のシステムおよび第２のシステムにおいて
は、ＡＦＣ用充填剤およびＣＥＣ用充填剤は、それぞれ
別のカラムに充填されていたが、第３のシステムにおい
ては、この両方の充填剤を一本の充填剤混合カラム１０
中に充填したことを特徴とする。
【００２３】上記第３のシステムについて、さらに詳述
すると、まず、（１）充填剤混合カラム１０内のＡＦＣ
用充填剤に、糖化ヘモグロビンが吸着するような溶離液
Ｅを流しておく。（２）次いで、試料を試料導入装置３
より注入する。（３）試料中の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖
化ヘモグロビン成分が、充填剤混合カラム１０内のＡＦ
Ｃ用充填剤に吸着される。（４）一方、非糖化ヘモグロ
ビン成分は、充填剤混合カラム１０内を通過して検出器
６に導かれる。（５）溶離液Ｆに切り換え、充填剤混合
カラム１０内のＡＦＣ用充填剤に吸着した糖化ヘモグロ
ビン成分を脱離させる。（６）脱離した糖化ヘモグロビ
ン成分は、充填剤混合カラム１０内のＣＥＣ用充填剤と
相互作用をしながら溶出し、検出器６に導かれる。
すると、まず、（１）充填剤混合カラム１０内のＡＦＣ
用充填剤に、糖化ヘモグロビンが吸着するような溶離液
Ｅを流しておく。（２）次いで、試料を試料導入装置３
より注入する。（３）試料中の、ＨｂＡ１ｃをふくむ糖
化ヘモグロビン成分が、充填剤混合カラム１０内のＡＦ
Ｃ用充填剤に吸着される。（４）一方、非糖化ヘモグロ
ビン成分は、充填剤混合カラム１０内を通過して検出器
６に導かれる。（５）溶離液Ｆに切り換え、充填剤混合
カラム１０内のＡＦＣ用充填剤に吸着した糖化ヘモグロ
ビン成分を脱離させる。（６）脱離した糖化ヘモグロビ
ン成分は、充填剤混合カラム１０内のＣＥＣ用充填剤と
相互作用をしながら溶出し、検出器６に導かれる。
【００２４】上記第３のシステムにおいて、溶離液Ｅに
ついては、非糖化ヘモグロビン成分（大部分はヘモグロ
ビンＡ０）は、上記（４）に記載の通り、充填剤混合カ
ラム１０内のＡＦＣ用充填剤には吸着されない。しかし
ヘモグロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）はＣＥＣ用
充填剤には最も強く保持される。一方、糖化ヘモグロビ
ン成分はＣＥＣ用充填剤には保持されにくい。つまりＣ
ＥＣ用充填剤のみのカラムを用いた場合には、ＡＦＣ用
充填剤のみを用いた場合と比べてＨｂＡ０の溶出順序が
逆転してしまう。そこで、上記（４）のように、本方法
で非糖化ヘモグロビン成分が迅速に溶出されるために
は、非糖化ヘモグロビン成分がＣＥＣ用充填剤に保持さ
れにくい条件で試料をカラムに導入する必要がある。す
なわち、糖化ヘモグロビン成分がＡＦＣ用充填剤に保持
され、かつ非糖化ヘモグロビン成分がＣＥＣ用充填剤に
保持されないような溶離液Ｅを用いる必要がある。そこ
で、ＨｂＡ０成分は、特定のイオン強度およびｐＨにお
いてＣＥＣ用充填剤に保持されずに溶出されるので、溶
離液Ｅはそのような条件に設定される。上記の特定のイ
オン強度およびｐＨは、これらの組み合わせにより異な
り、また、充填剤の保持能力によっても異なるが、一般
的には、ｐＨとしては５〜１０程度が好ましい。
ついては、非糖化ヘモグロビン成分（大部分はヘモグロ
ビンＡ０）は、上記（４）に記載の通り、充填剤混合カ
ラム１０内のＡＦＣ用充填剤には吸着されない。しかし
ヘモグロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）はＣＥＣ用
充填剤には最も強く保持される。一方、糖化ヘモグロビ
ン成分はＣＥＣ用充填剤には保持されにくい。つまりＣ
ＥＣ用充填剤のみのカラムを用いた場合には、ＡＦＣ用
充填剤のみを用いた場合と比べてＨｂＡ０の溶出順序が
逆転してしまう。そこで、上記（４）のように、本方法
で非糖化ヘモグロビン成分が迅速に溶出されるために
は、非糖化ヘモグロビン成分がＣＥＣ用充填剤に保持さ
れにくい条件で試料をカラムに導入する必要がある。す
なわち、糖化ヘモグロビン成分がＡＦＣ用充填剤に保持
され、かつ非糖化ヘモグロビン成分がＣＥＣ用充填剤に
保持されないような溶離液Ｅを用いる必要がある。そこ
で、ＨｂＡ０成分は、特定のイオン強度およびｐＨにお
いてＣＥＣ用充填剤に保持されずに溶出されるので、溶
離液Ｅはそのような条件に設定される。上記の特定のイ
オン強度およびｐＨは、これらの組み合わせにより異な
り、また、充填剤の保持能力によっても異なるが、一般
的には、ｐＨとしては５〜１０程度が好ましい。
【００２５】上記充填剤混合カラム１０の作製方法は、
特には限定されず、例えば、カラムに充填する前にＡＦ
Ｃ用充填剤とＣＥＣ用充填剤を混合してから充填する方
法、溶離液入り口側にＡＦＣ用充填剤、出口側にＣＥＣ
用充填剤が配置されるように分割して充填する方法など
が挙げられる。上記両充填剤の混合比率は、それぞれの
充填剤によって異なる。両者の平均粒径は、なるべく近
い方がよい。上記の第１のシステムおよび第２のシステ
ムについても言えることであるが、特にこの第３のシス
テムでは、両者が一本のカラムに充填されるため、平均
粒径の大きく異なる充填剤の混合は、ボイドボリューム
の発生を誘発し、分離能の低下を引き起こすため好まし
くない。
特には限定されず、例えば、カラムに充填する前にＡＦ
Ｃ用充填剤とＣＥＣ用充填剤を混合してから充填する方
法、溶離液入り口側にＡＦＣ用充填剤、出口側にＣＥＣ
用充填剤が配置されるように分割して充填する方法など
が挙げられる。上記両充填剤の混合比率は、それぞれの
充填剤によって異なる。両者の平均粒径は、なるべく近
い方がよい。上記の第１のシステムおよび第２のシステ
ムについても言えることであるが、特にこの第３のシス
テムでは、両者が一本のカラムに充填されるため、平均
粒径の大きく異なる充填剤の混合は、ボイドボリューム
の発生を誘発し、分離能の低下を引き起こすため好まし
くない。
【００２６】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明するが、本発
明はこれに限定されるものではない。
を挙げることにより、本発明を詳細に説明するが、本発
明はこれに限定されるものではない。
【００２７】実施例１ ＡＦＣ用充填剤入りカラム ＴＳＫｇｅｌ Ｂｏｒｏｎａｔｅ−５ＰＷ（内径７．５
ｍｍ×長さ７５ｍｍ、東ソ−社製）を用いた。
ｍｍ×長さ７５ｍｍ、東ソ−社製）を用いた。
【００２８】ＣＥＣ用充填剤入りカラム 特公平８−７１９７号公報の方法によりＣＥＣ用充填剤
を調製した。すなわち、ジエチレングリコールジメタク
リレート（新中村化学社製）１００ｇ、ジビニルベンゼ
ン（キシダ化学社製）２００ｇを混合したものに、ベン
ゾイルパーオキサイド（重合開始剤、和光純薬社製）１
ｇを溶解した。この混合物を４重量％ポリビニルアルコ
ール（日本合成社製）水溶液２．５リットルに添加し、
攪拌しながら調粒した後、窒素置換下で８０℃に加熱し
重合を行った。８０℃で２時間重合を行った後、アクリ
ル酸５０ｇを添加し更に８０℃で２時間重合し、生成物
を熱水およびアセトンで順次洗浄し、乾燥した。得られ
た粒子を、空気分級機（日鉄鉱業社製、ターボクラシフ
ァイアＴＣ−１５Ｎ）により分級し、平均粒径１０μｍ
の充填剤粒子を得た。該充填剤を内径６ｍｍ、長さ７５
ｍｍのステンレス製カラムに充填して、ＣＥＣ用充填剤
入りカラムを製造した。
を調製した。すなわち、ジエチレングリコールジメタク
リレート（新中村化学社製）１００ｇ、ジビニルベンゼ
ン（キシダ化学社製）２００ｇを混合したものに、ベン
ゾイルパーオキサイド（重合開始剤、和光純薬社製）１
ｇを溶解した。この混合物を４重量％ポリビニルアルコ
ール（日本合成社製）水溶液２．５リットルに添加し、
攪拌しながら調粒した後、窒素置換下で８０℃に加熱し
重合を行った。８０℃で２時間重合を行った後、アクリ
ル酸５０ｇを添加し更に８０℃で２時間重合し、生成物
を熱水およびアセトンで順次洗浄し、乾燥した。得られ
た粒子を、空気分級機（日鉄鉱業社製、ターボクラシフ
ァイアＴＣ−１５Ｎ）により分級し、平均粒径１０μｍ
の充填剤粒子を得た。該充填剤を内径６ｍｍ、長さ７５
ｍｍのステンレス製カラムに充填して、ＣＥＣ用充填剤
入りカラムを製造した。
【００２９】液体クロマトグラフィーの測定条件 前述の図２に示した第２のシステムによって、試料中の
ＨｂＡ１ｃ量を測定した。送液ポンプ２としては、島津
製作所社製、ＬＣ−９Ａとし、試料導入装置３として
は、積水化学工業社製、ＡＳＵ−４２０とし、検出器６
としては、島津製作所社製、ＳＰＤ−６ＡＶとした。
ＨｂＡ１ｃ量を測定した。送液ポンプ２としては、島津
製作所社製、ＬＣ−９Ａとし、試料導入装置３として
は、積水化学工業社製、ＡＳＵ−４２０とし、検出器６
としては、島津製作所社製、ＳＰＤ−６ＡＶとした。
【００３０】液体クロマトグラフィーの測定条件として
は、以下の通りとした。 溶離条件：溶離液Ｃ〔２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホ
ン酸）緩衝液：ｐＨ８）および溶離液Ｄ（１００ｍＭの
濃度でソルビトールを含むＨＥＰＥＳ緩衝液：ｐＨ６）
の２液を用いたステップグラディエント溶出を行った。 流速：１．２ｍｌ／分 検出：４１５ｎｍ 試料として以下の試料１および試料２を用いた。 ・試料１（健常人血）：フッ化ナトリウム入り採血管で
健常人から採血し、これに０．１％でトリトンＸ−１０
０を含む１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）を添加して
１５０倍に溶血・希釈したものを試料１とした。 ・試料２（ＣＨｂ含有試料）：変性ヘモグロビンを含む
試料として、ＣＨｂを高濃度に含有する試料を調製し
た。すなわち、０．２ｍｇ／ｄｌのシアン酸ナトリウム
生理食塩水溶液０．５ｍｌを、上記試料１のように採血
した健常人血０．５ｍｌに添加した。この混合物を４０
℃で２時間加温した。冷却後、上記試料１と同様にして
溶血・希釈したものを試料２とした。
は、以下の通りとした。 溶離条件：溶離液Ｃ〔２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホ
ン酸）緩衝液：ｐＨ８）および溶離液Ｄ（１００ｍＭの
濃度でソルビトールを含むＨＥＰＥＳ緩衝液：ｐＨ６）
の２液を用いたステップグラディエント溶出を行った。 流速：１．２ｍｌ／分 検出：４１５ｎｍ 試料として以下の試料１および試料２を用いた。 ・試料１（健常人血）：フッ化ナトリウム入り採血管で
健常人から採血し、これに０．１％でトリトンＸ−１０
０を含む１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）を添加して
１５０倍に溶血・希釈したものを試料１とした。 ・試料２（ＣＨｂ含有試料）：変性ヘモグロビンを含む
試料として、ＣＨｂを高濃度に含有する試料を調製し
た。すなわち、０．２ｍｇ／ｄｌのシアン酸ナトリウム
生理食塩水溶液０．５ｍｌを、上記試料１のように採血
した健常人血０．５ｍｌに添加した。この混合物を４０
℃で２時間加温した。冷却後、上記試料１と同様にして
溶血・希釈したものを試料２とした。
【００３１】ＨｂＡ１ｃの測定 上記試料１および試料２を測定し、ＨｂＡ１ｃ値を求め
た。 ・ＨｂＡ１ｃ値の算出：上記測定条件で試料１を分析し
た場合の、代表的なクロマトグラムを図４に示す。この
クロマトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビン
ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピ
ーク３はＨｂＡ０である。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面
積から以下の算出式により求められる。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
０の面積＋ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＡ１
ｃの面積）〕×１００
た。 ・ＨｂＡ１ｃ値の算出：上記測定条件で試料１を分析し
た場合の、代表的なクロマトグラムを図４に示す。この
クロマトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビン
ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピ
ーク３はＨｂＡ０である。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面
積から以下の算出式により求められる。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
０の面積＋ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＡ１
ｃの面積）〕×１００
【００３２】・上記測定条件で試料１および試料２を測
定した結果、試料１のＨｂＡ１ｃ値は４．８％であり、
試料２のＨｂＡ１ｃ値は４．７％であった。すなわち、
試料１および試料２の測定値間に殆ど差がないので、試
料２ではＣＨｂの影響を受けずにＨｂＡ１ｃ値を測定で
きた。なお、試料１および試料２のクロマトグラム形状
はいずれも図４の通りであり、試料２におけるＣＨｂは
ＨｂＡ０ピーク３に重なって溶出されているものと考え
られる。
定した結果、試料１のＨｂＡ１ｃ値は４．８％であり、
試料２のＨｂＡ１ｃ値は４．７％であった。すなわち、
試料１および試料２の測定値間に殆ど差がないので、試
料２ではＣＨｂの影響を受けずにＨｂＡ１ｃ値を測定で
きた。なお、試料１および試料２のクロマトグラム形状
はいずれも図４の通りであり、試料２におけるＣＨｂは
ＨｂＡ０ピーク３に重なって溶出されているものと考え
られる。
【００３３】比較例１ 液体クロマトグラフィーの測定条件 前述の図３に示した第３のシステムにおける、充填剤混
合カラム１０として、実施例１で用いたと同様のＣＥＣ
用充填剤のみ充填したカラムとした（すなわち、ＡＦＣ
用充填剤は含まない）システム（送液ポンプ２、試料導
入装置３および検出器６は実施例１と同様）を用い、実
施例１と同様の試料１および試料２のＨｂＡ１ｃ値の測
定を行った。
合カラム１０として、実施例１で用いたと同様のＣＥＣ
用充填剤のみ充填したカラムとした（すなわち、ＡＦＣ
用充填剤は含まない）システム（送液ポンプ２、試料導
入装置３および検出器６は実施例１と同様）を用い、実
施例１と同様の試料１および試料２のＨｂＡ１ｃ値の測
定を行った。
【００３４】液体クロマトグラフィーの測定条件として
は、以下の通りとした。 溶離条件：溶離液Ｇ（５０ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ６）
および溶離液Ｈ（３００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ７）の
２液を用いたステップグラディエント溶出を行った。 流速：１．２ｍｌ／分 検出：４１５ｎｍ
は、以下の通りとした。 溶離条件：溶離液Ｇ（５０ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ６）
および溶離液Ｈ（３００ｍＭリン酸緩衝液：ｐＨ７）の
２液を用いたステップグラディエント溶出を行った。 流速：１．２ｍｌ／分 検出：４１５ｎｍ
【００３５】ＨｂＡ１ｃの測定結果 ・ＨｂＡ１ｃ値の算出：上記測定条件で試料１を分析し
たときの、代表的なクロマトグラムを図５に示す。この
クロマトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビン
ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピ
ーク３はＨｂＡ０およびピーク４は胎児性ヘモグロビン
ＨｂＦである。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面積から以下
の算出式により求めた。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＦの面積＋ＨｂＡ１ｃ
の面積＋ＨｂＡ０の面積）〕×１００
たときの、代表的なクロマトグラムを図５に示す。この
クロマトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビン
ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピ
ーク３はＨｂＡ０およびピーク４は胎児性ヘモグロビン
ＨｂＦである。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面積から以下
の算出式により求めた。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＦの面積＋ＨｂＡ１ｃ
の面積＋ＨｂＡ０の面積）〕×１００
【００３６】また、上記測定条件で試料２を分析したと
きの、代表的なクロマトグラムを図６に示す。このクロ
マトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビンＨｂ
Ａ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピーク
３はＨｂＡ０、ピーク４はＨｂＦおよびピーク５はＣＨ
ｂである。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面積から以下の算
出式により求めた。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＦの面積＋ＣＨｂの面
積＋ＨｂＡ１ｃの面積＋ＨｂＡ０の面積）〕×１００
きの、代表的なクロマトグラムを図６に示す。このクロ
マトグラムにおいて、ピーク１は糖化ヘモグロビンＨｂ
Ａ１ａ及びＨｂＡ１ｂ、ピーク２はＨｂＡ１ｃ、ピーク
３はＨｂＡ０、ピーク４はＨｂＦおよびピーク５はＣＨ
ｂである。ＨｂＡ１ｃ値は、各ピーク面積から以下の算
出式により求めた。 ＨｂＡ１ｃ（％）＝〔（ＨｂＡ１ｃの面積）／（ＨｂＡ
１ａ及びＨｂＡ１ｂの面積＋ＨｂＦの面積＋ＣＨｂの面
積＋ＨｂＡ１ｃの面積＋ＨｂＡ０の面積）〕×１００
【００３７】・上記測定条件で試料１および試料２を測
定した結果、試料１のＨｂＡ１ｃ値は４．８％であり、
試料２のＨｂＡ１ｃ値は３．２％であった。試料２で
は、図６に見られる通りＣＨｂピーク５がＨｂＡ１ｃピ
ーク２に重なっている。そのため、試料２のＨｂＡ１ｃ
値が大きく低下したものと考えられる。
定した結果、試料１のＨｂＡ１ｃ値は４．８％であり、
試料２のＨｂＡ１ｃ値は３．２％であった。試料２で
は、図６に見られる通りＣＨｂピーク５がＨｂＡ１ｃピ
ーク２に重なっている。そのため、試料２のＨｂＡ１ｃ
値が大きく低下したものと考えられる。
【００３８】
【発明の効果】本発明の請求項１記載の糖化ヘモグロビ
ンの測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を
用いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問
題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を精度良く測定できる。
ンの測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を
用いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問
題となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を精度良く測定できる。
【００３９】本発明の請求項２記載の糖化ヘモグロビン
の測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を用
いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問題
となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を更に精度良く測定できる。
の測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を用
いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問題
となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
を更に精度良く測定できる。
【００４０】本発明の請求項３記載の糖化ヘモグロビン
の測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を用
いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問題
となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
をより一層精度良く測定できる。
の測定方法の構成は、上記の通りであり、この方法を用
いると、カチオン交換クロマトグラフィーにおいて問題
となっていた変性ヘモグロビンの影響を受けることな
く、かつアフィニティクロマトグラフィーでは分離する
ことができなかった糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃ
をより一層精度良く測定できる。
【００４１】本発明の糖化ヘモグロビンの測定用装置の
構成は、上記の通りであり、この装置を用いると、カチ
オン交換クロマトグラフィーにおいて問題となっていた
変性ヘモグロビンの影響を受けることなく、かつアフィ
ニティクロマトグラフィーでは分離することができなか
った糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃを精度良く、よ
り迅速に測定できる。
構成は、上記の通りであり、この装置を用いると、カチ
オン交換クロマトグラフィーにおいて問題となっていた
変性ヘモグロビンの影響を受けることなく、かつアフィ
ニティクロマトグラフィーでは分離することができなか
った糖化ヘモグロビン、特にＨｂＡ１ｃを精度良く、よ
り迅速に測定できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明で用いられる液体クロマトグラフのシス
テムの例を示す説明図である。
テムの例を示す説明図である。
【図２】本発明で用いられる液体クロマトグラフのシス
テムの他の例を示す説明図である。
テムの他の例を示す説明図である。
【図３】本発明で用いられる液体クロマトグラフのシス
テムの他の例を示す説明図である。
テムの他の例を示す説明図である。
【図４】実施例１における、試料１を用いて得られたク
ロマトグラムである。
ロマトグラムである。
【図５】比較例１における、試料１を用いて得られたク
ロマトグラムである。
ロマトグラムである。
【図６】比較例１における、試料２を用いて得られたク
ロマトグラムである。
ロマトグラムである。
１ 溶離液 ２ 送液ポンプ ３ 試料導入装置 ４ アフィニティクロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラム ５ カチオン交換クロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラム ６ 検出器 ７、８ 三方バルブ ９ 他の流路 １０ 充填剤混合カラム
れたカラム ５ カチオン交換クロマトグラフィー用充填剤が充填さ
れたカラム ６ 検出器 ７、８ 三方バルブ ９ 他の流路 １０ 充填剤混合カラム
Claims (4)
- 【請求項１】 アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を用
いることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測定方法。 - 【請求項２】 アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤およびカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を、
この順に用いることを特徴とする糖化ヘモグロビンの測
定方法。 - 【請求項３】 試料をアフィニティクロマトグラフィー
用充填剤で分離し、次いでアフィニティクロマトグラフ
ィー用充填剤に吸着された成分を、カチオン交換クロマ
トグラフィー用充填剤で分離することを特徴とする糖化
ヘモグロビンの測定方法。 - 【請求項４】 アフィニティクロマトグラフィー用充填
剤が充填されたカラムとカチオン交換クロマトグラフィ
ー用充填剤が充填されたカラムを有し、上記カチオン交
換クロマトグラフィー用充填剤が充填されたカラムの前
後にバルブが設けられていることを特徴とする糖化ヘモ
グロビンの測定用装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3021897A JPH10227780A (ja) | 1997-02-14 | 1997-02-14 | 糖化ヘモグロビンの測定方法および装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3021897A JPH10227780A (ja) | 1997-02-14 | 1997-02-14 | 糖化ヘモグロビンの測定方法および装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10227780A true JPH10227780A (ja) | 1998-08-25 |
Family
ID=12297591
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3021897A Pending JPH10227780A (ja) | 1997-02-14 | 1997-02-14 | 糖化ヘモグロビンの測定方法および装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10227780A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001022077A1 (en) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Method of separating hemoglobin a2 |
| JP2006159148A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-22 | Nagoya Institute Of Technology | クロマトグラフィー用カラムおよび電気クロマトグラフィー用カラム |
| WO2019203302A1 (ja) * | 2018-04-18 | 2019-10-24 | 積水メディカル株式会社 | ヘモグロビン分析方法 |
| JP2021021570A (ja) * | 2019-07-24 | 2021-02-18 | 東ソー株式会社 | 液体クロマトグラフを用いた分析方法 |
| WO2021182599A1 (ja) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | 積水メディカル株式会社 | ヘモグロビン分析方法 |
-
1997
- 1997-02-14 JP JP3021897A patent/JPH10227780A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001022077A1 (en) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Method of separating hemoglobin a2 |
| US6488857B1 (en) * | 1999-09-24 | 2002-12-03 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Method of separating hemoglobin A2 |
| JP2006159148A (ja) * | 2004-12-10 | 2006-06-22 | Nagoya Institute Of Technology | クロマトグラフィー用カラムおよび電気クロマトグラフィー用カラム |
| WO2019203302A1 (ja) * | 2018-04-18 | 2019-10-24 | 積水メディカル株式会社 | ヘモグロビン分析方法 |
| JP6600123B1 (ja) * | 2018-04-18 | 2019-10-30 | 積水メディカル株式会社 | ヘモグロビン分析方法 |
| US12203945B2 (en) | 2018-04-18 | 2025-01-21 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Haemoglobin analysis method for detecting abnormal haemoglobins and/or thalassemia markers |
| JP2021021570A (ja) * | 2019-07-24 | 2021-02-18 | 東ソー株式会社 | 液体クロマトグラフを用いた分析方法 |
| WO2021182599A1 (ja) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | 積水メディカル株式会社 | ヘモグロビン分析方法 |
| JPWO2021182599A1 (ja) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 |
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