JPH10328565A - 免疫複合体の除去装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 体液中の有効成分をほとんど失うことなく免
疫複合体を選択的に吸着除去するための除去装置を開発
する。 【解決手段】 流体の流入口および流出口を有する容
器、流体および該流体に含まれる成分は通過できるが、
水不溶性多孔質担体に分子量1000以上のポリアニオン化
合物、ただし蛋白質は除く、が固定されてなる免疫複合
体の吸着体は通過できないフィルター、および前記容器
内に充填された前記免疫複合体の吸着体からなる免疫複
合体の除去装置。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は体液から有害な成分
を吸着除去するための除去装置に関する。さらに詳しく
は体液中より免疫複合体を除去し、自己免疫疾患を抑制
するための除去装置に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】われ
われの周囲には、おびただしい種類のウイルス、細菌、
かび、寄生虫などの感染性の異物が存在している。その
いずれもが生体に疾患をおこすことができ、もし無制限
に生体内で増殖すれば、最終的に生物を殺してしまうこ
とになる。そこで生体にはこれを防御する機能として免
疫系が存在している。この免疫系で主役をなすのが抗体
分子である。つまりウイルスや細菌などの異物が抗原と
なり、免疫系を刺激すると、その抗原と選択的に結合す
る抗体分子が産生される。

【０００３】一方自己免疫疾患では、外部の生物でなく
自己の細胞や組織のもつ抗原に対して体液性あるいは細
胞性の免疫応答がおこり、自己に対する抗体（以下、自
己抗体という）や抗原抗体が特異的に反応しあって作ら
れる複合体（以下、免疫複合体という）などが大量に生
じる。そしてこの体液中の免疫複合体は、生理的排除機
構によって処理されず、腎糸球体、関節滑膜、肺、血管
壁などの組織に沈着して自己免疫疾患に特徴的な病態の
出現に直接関わりをもつことが多い。

【０００４】代表的な自己免疫疾患である全身性エリテ
マトーデス（以下、ＳＬＥという）では細胞の核成分、
とりわけデオキシリボ核酸（以下、ＤＮＡという）に対
する抗体（以下、抗ＤＮＡ抗体という）が体液中に出現
し、この自己抗体自身が抗原と結合して免疫複合体を形
成し組織に沈着することにより組織障害を起こす機構が
提唱されている。ＳＬＥのばあいは発生した抗ＤＮＡ抗
体が同じく血中に流出した細胞由来のＤＮＡと免疫複合
体を形成し、血管壁、腎糸球体基底膜に沈着することに
よりそれぞれ血管炎、ループス腎炎を発症することが知
られており、実際ＳＬＥでは腎不全により死亡する例が
多い。

【０００５】このように産生した自己抗体と対応抗原と
の免疫複合体によりさまざまな症状がひきおこされるわ
けであるから、治療には免疫複合体のコントロールが非
常に重要である。

【０００６】従来より免疫複合体の産生を抑制する目的
でステロイド剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤な
どがＳＬＥの治療に広く用いられている。なかでもステ
ロイド剤はもっとも一般的に用いられ、パルス療法と呼
ばれるステロイドの短期超大量投与療法もしばしば行わ
れている。しかしながら、ステロイドは少量の投与によ
っても副作用を生じやすいのでステロイドの短期超大量
投与療法によれば、さらに大きな副作用を生じさせやす
くなるのは自明である。また、これらの薬剤は長期にわ
たって用いられることが多く、そのようなばあいには副
作用がさらに出やすく、また薬剤耐性によりしだいに増
量しなければならないことも多いため症例によってはこ
れらの薬剤の使用が不可能であったり、充分な効果を発
揮しないばあいも多い。とくにＳＬＥの活動期は抗ＤＮ
Ａ抗体および免疫複合体の抑制がもっとも必要な時期で
あるにもかかわらず、上記の理由によりパルス療法や免
疫抑制剤などの薬剤を用いる強力な療法を採用できない
ばあいも多い。

【０００７】一方、これらの薬剤療法とは別のアプロー
チとして、体液中の免疫複合体を体外循環によって直接
除去しようとする試みがなされている。もっとも簡便な
方法は、免疫複合体を含む患者の血漿を健常人の血漿と
交換する、いわゆる血漿交換療法である。この方法によ
って血中の免疫複合体は大幅に低下し、症状の改善がみ
られている。しかしながらこの方法では大量の健常血漿
が必要となり高価であるばかりでなく、該療法処置中に
血清肝炎などの感染の危険性を伴うために広く普及する
には至っていない。

【０００８】血漿交換療法では血漿中のすべての成分が
除かれ、健常血漿と交換されるわけであるが、これに対
して病因物質である免疫複合体を選択的に除去する目的
で、分子サイズにより病因物質を分離する血漿分離膜法
が開発された。この方法では膜により血漿を高分子量画
分と低分子量画分に分離し、病因物質が含まれている高
分子量画分を廃棄し、主要蛋白であるアルブミンが含ま
れている低分子量画分を患者に戻すが、免疫複合体は、
分子量約16万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）と抗原との
複合体が主であり、その分子量分布も広いために、アル
ブミン、正常なＩｇＧやＩｇＭ（免疫グロブリンＭ）と
の分離は必ずしも充分でなく、免疫複合体を除去する際
にこれらも大量に除去され、さらに病因物質と同等以上
の分子量の蛋白はすべて除去されるなどの欠点がある。

【０００９】したがって、病因物質である免疫複合体を
より選択的に除去し、体液中の有用成分がほとんど失わ
れることのない除去手段の出現が望まれていた。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる実
情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、体液中の有効成分をほ
とんど失うことなくほぼ免疫複合体のみを選択的に吸着
しうる免疫複合体の除去装置を見出し、本発明を完成す
るに至った。

【００１１】すなわち本発明は、流体の流入口および流
出口を有する容器、流体および該流体に含まれる成分は
通過できるが、水不溶性多孔質担体に分子量1000以上の
ポリアニオン化合物、ただし蛋白質は除く、が固定され
てなる免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、
および前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体
からなる免疫複合体の除去装置に関する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本明細書において体液とは、血
液、血漿、血清、腹水、リンパ液、関節内液およびこれ
らからえられた分画成分、ならびにその他の生体由来の
液性成分をいう。

【００１３】本発明において水不溶性多孔質担体とは、
分子量1000以上のポリアニオン化合物、ただし蛋白質は
除く、を固定するための水に溶解しない性質を有する物
質をいう。本発明に用いる水不溶性多孔質担体は、大き
な径の連続した細孔を有するものが好ましい。すなわち
免疫複合体は、おもにＩｇＧと抗原からなり、分子量が
16万以上であり、分子量が 100万位の巨大分子のものも
存在すると予想されるために、これを効率よく吸着する
ためには免疫複合体が容易に多孔質体内に侵入しうるこ
とが必要である。

【００１４】細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入
法がもっともよく用いられているが、親水性多孔質体の
ばあいには適用が難しい。これに変わる細孔径の目安と
して排除限界分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、
疎水性多孔質体のいずれにも適用できる。排除限界分子
量とは成書（たとえば波多野博之、花井俊彦著、実験高
速液体クロマトグラフィー、化学同人）などに述べられ
ているごとく、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細
孔内に侵入できない（排除される）分子のうちもっとも
小さい分子量をもつ物の分子量をいう。

【００１５】排除限界分子量は対象とする化合物により
異なることが知られており、一般に球状蛋白質、デキス
トラン、ポリエチレングリコールなどについてよく調べ
られているが本発明に用いる担体のばあい、免疫複合体
にもっとも類似していると思われる球状蛋白質を用いて
えられた値を用いるのが適当である。

【００１６】排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質担
体を用いて検討した結果、免疫複合体の吸着に適当な細
孔径の範囲は、40万以上6000万以下であることが明らか
になった。すなわち40万未満の排除限界分子量をもつ水
不溶性多孔質担体を用いたばあいには免疫複合体の吸着
量は小さく実用に耐えない。一方排除限界分子量が大き
くなるにつれて、免疫複合体の吸着量は増加するがやが
て頭打ちとなり、排除限界分子量が6000万をこえると表
面積が少なすぎ吸着量は目だって低下するばかりでな
く、目的とする免疫複合体以外の吸着、すなわち非特異
吸着が増加し選択性がいちじるしく低下する。

【００１７】したがって本発明に用いる水不溶性多孔質
担体の好ましい排除限界分子量は40万以上6000万以下で
あり、さらに好ましくはより選択性吸着容量の大きい点
から60万以上2000万以下であるのがよい。

【００１８】つぎに水不溶性多孔質担体の多孔構造につ
いては表面多孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積
が吸着容量が大きいという点から20％以上であることが
望ましい。水不溶性多孔質担体の形状は、粒状、球状、
繊維状、膜状、ホローファイバー状など任意の形状を選
ぶことができる。粒状の水不溶性多孔質担体を用いるば
あい、その粒子径が１μｍ未満のばあいには圧力損失が
大きく、5000μｍをこえるばあいには吸着容量が小さい
点から、１μｍ以上5000μｍ以下であるのが好ましい。

【００１９】本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機
性、無機性いずれであってもよいが、目的とする免疫複
合体以外の体液成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少
ないものが好ましい。親水性であるほうが非特異吸着が
少ないので水不溶性多孔質担体は疎水性であるよりも、
親水性であるほうが好ましい。

【００２０】さらに、水不溶性多孔質担体表面には、リ
ガンドの固定化反応に用いうる官能基が存在していると
好都合である。これらの官能基の代表例としては、水酸
基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオー
ル基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン
基、スクシニルイミド基、酸無水物基などがあげられる
が、これらに限定されるわけではない。また、水不溶性
多孔質担体は前記官能基のなかでも水酸基を有する化合
物よりなるものであるばあい、非特異吸着が少ないので
とくに好ましい。これら官能基をスペーサーとして導入
された水不溶性多孔質担体も、用いうることはいうまで
もない。

【００２１】本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表
例としては、アガロース、デキストラン、ポリアクリル
アミドなどの軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリ
カゲルなどの無機多孔質体、ポリメチルメタクリレー
ト、ポリビニルアルコール、スチレン、ジビニルベンゼ
ン共重合体などの合成高分子および／またはセルロース
などの天然高分子を原料とする多孔質ポリマーハードゲ
ルなどがあげられるがこれらに限定されるわけではな
い。

【００２２】本発明に用いる吸着体を体外循環治療に用
いる際には、血液、血漿のごとき高粘性流体を高速で流
す必要があるために、圧密化を引き起こさない充分な機
械的強度を有する硬質水不溶性多孔質担体を用いるのが
好ましい。すなわち、硬質水不溶性多孔質担体とは後記
参考例に示すごとく、水不溶性多孔質担体を円筒状カラ
ムに均一に充填し、水性流体を流通したばあいの圧力損
失と流量との関係が少なくとも 0.3kg／cm²まで直線関
係にあるものをいう。

【００２３】本発明に用いる吸着体のアニオン性官能基
は、pHが中性付近で負に帯電するような官能基であれば
いかなるものも使用しうる。これらの代表例としては、
カルボキシル基、スルホン酸基、スルホン基、硫酸エス
テル基、シラノール基、リン酸エステル基、フェノール
性水酸基などがあげられるがこれらに限定されるもので
はない。

【００２４】本発明に用いるポリアニオン化合物、ただ
し蛋白質を除く、は免疫複合体に対する親和性が大き
く、また単位量の水不溶性多孔質担体に多くのアニオン
性官能基を導入しやすいので好ましい。ポリアニオン化
合物が有するアニオン性官能基は１種類であってもよい
し、複数の種類であってもよい。

【００２５】本発明に用いるポリアニオン化合物、ただ
し蛋白質は除く、の代表例としては、ポリアクリル酸、
ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリビニルリ
ン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリスチレンリン酸、
ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリメタクリ
ル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイン酸共重合体など
の合成ポリアニオン化合物、およびヘパリン、デキスト
ラン硫酸、コンドロイチン、コンドロイチン硫酸、ホス
ホマンナン、キチン、キトサンなどのアニオン性官能基
含有多糖類があげられる。

【００２６】本発明に用いる吸着体に固定される分子量
1000以上のポリアニオン化合物、ただし蛋白質は除く、
は１種類であってもよいし、２種類以上であってもよ
い。

【００２７】本発明に用いる吸着体は、水不溶性多孔質
担体に分子量1000以上のポリアニオン化合物、ただし蛋
白質は除く、が固定された状態のものをいう。そのよう
な分子量1000以上のポリアニオン化合物、ただし蛋白質
は除く、やそれ以外のアニオン性官能基を有する化合物
が固定されてなる状態をうるためにアニオン性官能基を
水不溶性多孔質担体に導入する方法としては公知の種々
の方法を特別な制限なしに用いることができるが、代表
的な導入方法としては、（１）アニオン性官能基あるい
は容易にアニオン性官能基に変換しうる官能基を含有す
る化合物をモノマーあるいは架橋剤として用いる重合に
よって吸着体を形成させる方法、（２）アニオン性官能
基を含有する化合物を水不溶性多孔質担体に固定させる
方法、（３）アニオン性官能基を形成する化合物と水不
溶性多孔質担体とを直接反応させることによって、水不
溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有する化合物を固
定させる方法などがあげられる。

【００２８】（１）の方法において用いるアニオン性官
能基あるいは容易にアニオン性官能基に変換しうる官能
基を含有するモノマーあるいは架橋剤の代表例として
は、アクリル酸およびそのエステル、メタクリル酸およ
びそのエステル、スチレンスルホン酸などがあげられる
がこれらに限定されるわけではない。

【００２９】（２）の方法、すなわちアニオン性官能基
を含有する化合物を水不溶性多孔質担体に固定させる方
法としては、物理的吸着による方法、イオン結合による
方法、共有結合により固定する方法などがあり、いかな
る方法を用いてもよいが、吸着体の保存性ならびに安定
性のためにはアニオン性官能基含有化合物が脱離しない
ことが重要であるので、強固な固定が可能な共有結合法
が望ましい。

【００３０】共有結合によりアニオン性官能基含有化合
物を固定させるばあい、アニオン性官能基含有化合物が
アニオン性官能基以外に固定に利用できる官能基を有す
るのが好ましい。

【００３１】固定に利用できる官能基の代表例として
は、アミノ基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物
基、スクシニルイミド基、水酸基、チオール基、アルデ
ヒド基、ハロゲン基、エポキシ基、シラノール基などが
あげられるがこれらに限定されるわけではない。

【００３２】これらの官能基を有するアニオン性官能基
含有化合物は多数存在するが、後述する、スルファニル
酸、ホスホリルエタノールアミン、グリシン、タウリン
などはその一例である。

【００３３】また、アニオン性官能基を含有する化合物
のうち硫酸エステル基を含有する化合物の代表例として
はアルコール、糖類、グリコールなどの水酸基含有化合
物の硫酸エステルがあげられるが、これらのなかでも多
価アルコールの部分硫酸エステル化合物、とりわけ糖類
の硫酸エステル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官
能基の双方を含んでいるうえに、生体適合性および活性
ともに高く、さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔
質担体に固定しうることからとくに好ましい。

【００３４】つぎに、（３）の方法、すなわちアニオン
性官能基を形成する化合物と水不溶性多孔質担体とを反
応させることによって、水不溶性多孔質担体にアニオン
性官能基を有する化合物を固定させてアニオン性官能基
を導入する方法の代表例として水酸基含有多孔質担体に
硫酸エステル基を導入する反応があげられる。このばあ
い、水酸基含有水不溶性多孔質担体とクロロスルホン
酸、濃硫酸などの試薬を反応させることによって直接硫
酸エステル基を導入することができる。

【００３５】導入されるアニオン性官能基の量は、吸着
体１mlあたり0.01μmol 以上10mmol以下が好ましい。0.
01μmol 未満のばあい吸着能力が充分でなく、10mmolを
こえるばあい非特異吸着が多すぎて実用に供することが
困難になる。より好ましいアニオン性官能基導入量は 1
μmol 以上 100μmol 以下であるのがよい。

【００３６】本発明に用いる吸着体を治療に用いるには
種々の方法がある。もっとも簡便な方法としては患者の
血液を体外に導出して血液バッグに貯め、これに本発明
に用いる吸着体を混合して免疫複合体を除去後、フィル
ターを通して吸着体を除去し、血液を患者に戻す方法が
ある。この方法は、複雑な装置を必要としないが、１回
の処理量が少なく治療に時間を要し、操作が煩雑になる
という欠点を有する。

【００３７】つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体
外循環回路に組み込みオンラインで吸着除去を行うもの
である。すなわち流体の流入口および流出口を有する容
器、流体および該流体に含まれる成分は通過できるが、
水不溶性多孔質担体に分子量1000以上のポリアニオン化
合物、ただし蛋白質は除く、が固定されてなる免疫複合
体の吸着体は通過できないフィルター、および前記容器
内に充填された前記免疫複合体の吸着体からなる免疫複
合体の除去装置に体液を通液する方法が簡便で好まし
い。

【００３８】図１に本発明の免疫複合体の除去装置の一
実施例の概略断面図を示す。図１中、（１）および
（２）はそれぞれの流体の流入口と流出口、（３）は前
記吸着体、（４）および（５）は流体および流体に含ま
れる成分は通過できるが前記吸着体は通過できないフィ
ルターまたはメッシュ、（６）はカラム、（７）は容器
である。ここで流体の流入口側のフィルター（４）は存
在しなくてもよい。

【００３９】以下、実施例により本発明の除去装置をさ
らに詳しく説明するが、本発明はかかる実施例のみに限
定されるものではない。

【００４０】

【実施例】

参考例 両端に孔径15μｍのフィルターを装着したガラス製円筒
カラム（内径９mm、カラム長さ150mm）にアガロースゲ
ル（バイオラド（Biorad）社製のBiogel A5m、粒径50〜
100 メッシュ）、ポリマー硬質ゲル（東洋曹達工業
（株）製のトヨパールHW65、粒径50〜100μｍ、および
チッソ（株）製のセルロファインGC700、粒径45〜105
μｍ）をそれぞれ均一に充填しペリスタルティックポン
プによりカラム内に水を流通し、流量と圧力損失ΔP と
の関係を求めた。その結果を図２に示す。同図より明ら
かなように軟質ゲルであるアガロースゲルは一定の流量
以上では圧密化をおこし、圧力を増加させても流量が増
加しないのに対し、トヨパール、セルロファインなどの
硬質ゲルは圧力の増加にほぼ比例して流量が増加する。

【００４１】製造例１ 多孔質セルロースゲルであるセルロースCKゲルA3（商品
名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量5000
万、粒径45〜105μｍ）100mlに20％NaOH40ｇ、ヘプタン
120ｇおよびノニオン系界面活性剤トゥイーン20（商品
名、花王アトラス（株）製）を10滴加えた。40℃で２時
間撹拌後、エピクロルヒドリン50ｇを加えて２時間撹拌
し、ゲルを水洗濾過し、エポキシ基の導入されたセルロ
ースゲル（以下、エポキシ化ゲルという）をえた。

【００４２】比較製造例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにスルファニル酸0.
17ｇを10mlの水に溶解してpH9.9 に調整した溶液を加
え、常温で24時間振盪し、0.5％モノエタノールアミン
水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してス
ルファニル酸が固定されたセルロースゲルをえた。固定
されたスルファニル酸により導入されたアニオン性官能
基量は吸着体１mlあたり6.5μmol であった。

【００４３】比較製造例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにホスホリルエタノ
ールアミン0.1ｇを10mlの水に溶解してpH9.6 に調整し
た溶液を加え、40℃で４時間振盪し、0.5％モノエタノ
ールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を
封止してホスホリルエタノールアミンが固定されたセル
ロースゲルをえた。固定されたホスホリルエタノールア
ミンにより導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ml
あたり４μmol であった。

【００４４】実施製造例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlに分子量約5000、イ
オウ含量15％のデキストラン硫酸ナトリウム４ｇおよび
水５mlを加えpH９に調整して45℃で16時間振盪した。そ
の後、ゲルを濾別して、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液
および水を用いてこの順に洗浄し、0.5％モノエタノー
ルアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封
止してデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸により導
入されたアニオン性官能基量は吸着体１mlあたり10μmo
l であった。

【００４５】比較製造例３ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにグリシン0.22ｇを
10mlの水に溶解してpH9.8 に調整した溶液を加えて常温
で24時間振盪した。その後、ゲルを濾別して、0.5％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポ
キシ基を封止してグリシンが固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたグリシンにより導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１mlあたり９μmol であった。

【００４６】比較製造例４ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにタウリン0.37ｇを
10mlの水に溶解してpH9.0 に調整した溶液を加えて常温
で24時間振盪した。その後、ゲルを濾別して、0.5％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポ
キシ基を封止してタウリンが固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたタウリンにより導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１mlあたり５μmol であった。

【００４７】実施製造例２ 製造例１で用いたものと同様のセルロースCKゲルA3、10
mlを水洗後吸引濾過し、これにジメチルスルホキシド６
ml、2N-NaOH2.6ml、エピクロルヒドリン1.5mlを加えて4
0℃で２時間撹拌した。反応後ゲルを濾別し、水洗して
エポキシ基の導入されたセルロースゲルをえた。

【００４８】これに濃アンモニア水６mlを加え40℃で２
時間反応させてアミノ化セルロースゲルをえた。

【００４９】このゲル５mlに分子量19万〜50万のポリア
クリル酸ナトリウム0.2ｇを10mlの水に溶解してpH4.5
に調整した溶液を加え、さらに1-エチル-3-（ジメチル
アミノプロピル）カルボジイミド200mgをpH4.5 に保ち
ながら添加し、４℃で24時間振盪した。反応後ゲルを濾
別し、水洗してポリアクリル酸の導入されたセルロース
ゲルをえた。固定されたポリアクリル酸により導入され
たアニオン性官能基量は吸着体１mlあたり14μmol であ
った。

【００５０】実施製造例３ 多孔質セルロースゲルをセルロースCKゲルA22（商品
名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量2000
万、粒径45〜105μｍ）、セルロファインGCL-2000m（商
品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量30
0万、粒径44〜105μｍ）、セルロファインGCL-1000m
（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子
量60万、粒径44〜105μｍ）、セルロファインGC-700m
（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子
量40万、粒径44〜105μｍ）、セルロファインGC-200m
（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子
量12万、粒径45〜105μｍ）、セルロファインGCL-90
（商品名、チッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子
量3.5万、粒径45〜105μｍ）にかえたほかは製造例１お
よび実施製造例１と同様にしてデキストラン硫酸ナトリ
ウムの固定されたセルロースゲルをえた。固定されたデ
キストラン硫酸により導入されたアニオン性官能基量は
吸着体１mlあたりそれぞれ16、18、30、24、30、37μmo
l であった。

【００５１】実施製造例４ エポキシ化架橋アガロースゲルであるエポキシアクティ
ベイティッドセファロースCL-6B（商品名、ファルマシ
アファインケミカルズ社製、球状蛋白質の排除限界分子
量 400万、粒径45〜165μｍ）ゲルを用いたほかは実施
製造例１と同様の方法でデキストラン硫酸ナトリウムを
固定した。固定されたデキストラン硫酸により導入され
たアニオン性官能基量は吸着体１mlあたり20μmol であ
った。

【００５２】実施製造例５ ポリメタクリル酸メチルを主成分とする親水性多孔性硬
質ヒドロゲルであるFP-HG（商品名、三菱化成（株）
製、球状蛋白質の排除限界分子量 400万、粒径 120μ
ｍ）を用いたほかは製造例１および実施製造例１と同様
にしてデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたゲルを
えた。固定されたデキストラン硫酸により導入されたア
ニオン性官能基量は吸着体１mlあたり９μmol であっ
た。

【００５３】実施製造例６ 実施製造例２と同様にしてえたアミノ化セルロースゲル
2gに、実施製造例１で用いたものと同様の分子量5000、
イオウ含量15％のデキストラン硫酸ナトリウム4gを 0.1
M リン酸バッファー（pH 8.0）８mlに溶解した液を加え
室温で16時間振盪した。反応後NaCNBH₃20mgを加え室温
で30分攪拌後、40℃で４時間加熱したのちゲルを濾別水
洗してデキストラン硫酸ナトリウムの固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸により導
入されたアニオン性官能基量は吸着体１mlあたり18μmo
l であった。

【００５４】実験例１ 実施製造例１、２および６、ならびに比較製造例１〜４
でえられた吸着体および比較の目的で製造例１で用いた
担体のCKゲルA3を15M トリス緩衝液（pH 7.4）で洗浄し
たのち、各吸着体 0.1mlずつをポリプロピレン製マイク
ロチューブ（容量７ml）にとり、0.15Mトリス緩衝液（p
H 7.4）を加えて全量を１mlとした。これに免疫複合体
を含む血清 0.2mlずつを加え、25℃で２時間振盪した。
この吸着操作終了後、遠心分離してゲルを沈降させ、採
取した上清中の免疫複合体濃度を酵素免疫抗体法（ELIS
A 法）により測定した。つまり、免疫複合体濃度は、C1
qをコートしたプレートに希釈した検体を加え、抗原−
抗体反応を行い、ペルオキシダーゼ標識抗ヒト免疫グロ
ブリン抗体を滴下し、酵素発色反応をSLT-210（商品
名、ラボサイエンス（株）製）にて測定波長486nm で測
定した。測定値は、熱変性 IgG により作成した標準曲
線により標準化した。表１に、各吸着体に固定されたア
ニオン性官能基を有する化合物名、および各吸着体の上
澄み中の免疫複合体濃度を希釈を考慮して原血清中の濃
度に換算して示す。

【００５５】表１から水不溶性多孔質担体にアニオン性
官能基を有する化合物が固定されてなる吸着体は、免疫
複合体を吸着しているのがわかる。そして、デキストラ
ン硫酸が固定された吸着体の免疫複合体の吸着能がとく
に優れていることがわかる。

【００５６】

【表１】

【００５７】実験例２ 実施製造例１および３〜５でえられた吸着体を用い、加
えた血清量を 0.1mlとしたほかは実験例１と同様の方法
にしたがって上澄み中の免疫複合体濃度を希釈を考慮し
て原血清中の濃度に換算して求めた。えられた結果を用
いた種々の水不溶性多孔質担体名とともに表２に示す。
比較のため原血清の免疫複合体濃度を測定したところ3
2.2μg/mlであった。

【００５８】表２から、排除限界分子量が40万以下の水
不溶性多孔質担体である実施製造例３のセルロファイン
GC-700ｍ、セルロファインGC-200ｍおよびセルロースGC
L-90の免疫複合体吸着能がおとることがわかる。また、
逆に、排除限界分子量を5000万と大きくしすぎても実施
製造例１のセルロースCKゲルA3の結果から免疫複合体吸
着能は落ちる傾向にあることがわかる。

【００５９】

【表２】

【００６０】

【発明の効果】本発明の除去装置は体液より免疫複合体
を選択的に除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は本発明の免疫複合体の除去装置の一実施
例の概略断面図である。

【図２】図２は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失と
の関係を調べた結果を示すグラフである。

【符号の説明】

１：流入口 ２：流出口 ３：吸着体 ４、５：フィルター ７：容器

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 流体の流入口および流出口を有する容
   器、流体および該流体に含まれる成分は通過できるが、
   水不溶性多孔質担体に分子量1000以上のポリアニオン化
   合物、ただし蛋白質は除く、が固定されてなる免疫複合
   体の吸着体は通過できないフィルター、および前記容器
   内に充填された前記免疫複合体の吸着体からなる免疫複
   合体の除去装置。
2. 【請求項２】 免疫複合体の吸着体の水不溶性多孔質担
   体の球状蛋白質の排除限界分子量が40万以上6000万以下
   である請求項１記載の除去装置。
3. 【請求項３】 水不溶性多孔質担体が水酸基を有する化
   合物よりなる請求項２記載の除去装置。