JPH1045731A - ベンゾオキサゾール系化合物 - Google Patents
ベンゾオキサゾール系化合物Info
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- JPH1045731A JPH1045731A JP8208094A JP20809496A JPH1045731A JP H1045731 A JPH1045731 A JP H1045731A JP 8208094 A JP8208094 A JP 8208094A JP 20809496 A JP20809496 A JP 20809496A JP H1045731 A JPH1045731 A JP H1045731A
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- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＥＬＡＭ−１接着阻害作用を有する新規な生
理活性物質を提供すること。 【構成】 式 【化６】 （式中、Ｒは水素原子又はメトキシ基である。）で表さ
れる化合物、及び式 【化７】
理活性物質を提供すること。 【構成】 式 【化６】 （式中、Ｒは水素原子又はメトキシ基である。）で表さ
れる化合物、及び式 【化７】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は細胞接着阻害作用を有す
る新規な生理活性物質に関する。
る新規な生理活性物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、細胞接着分子はその研究が進み、
炎症、アレルギー、動脈硬化、癌転移、自己免疫疾患、
自己抗原の提示等の病態形成の場において極めて重要な
役割を果たすことが明らかにされている。これまで多く
の種類の細胞接着分子が見いだされているが、各々に機
能分担があり、その発現も厳密にコントロールされてい
ることが明らかになってきた。中でもＥＬＡＭ−１は、
炎症において重要な役割を果たす好中球、単球、Ｔ細胞
を炎症の場に誘導することが知られており、また慢性関
節リウマチなどの自己免疫的機序による慢性炎症を特徴
とする自己免疫疾患においても、その重要性が明らかに
なっている。すでに、種々の炎症動物モデルにおいて、
抗ＥＬＡＭ−１モノクロナール抗体やＥＬＡＭ−１の部
分ペプチドを投与することにより、顕著な抗炎症作用が
認められることが示されており、ＥＬＡＭ−１接着阻害
物質が炎症性疾患である再潅流傷害、喘息、乾せん及び
慢性関節リウマチ薬としても有用であることが明らかに
されている。
炎症、アレルギー、動脈硬化、癌転移、自己免疫疾患、
自己抗原の提示等の病態形成の場において極めて重要な
役割を果たすことが明らかにされている。これまで多く
の種類の細胞接着分子が見いだされているが、各々に機
能分担があり、その発現も厳密にコントロールされてい
ることが明らかになってきた。中でもＥＬＡＭ−１は、
炎症において重要な役割を果たす好中球、単球、Ｔ細胞
を炎症の場に誘導することが知られており、また慢性関
節リウマチなどの自己免疫的機序による慢性炎症を特徴
とする自己免疫疾患においても、その重要性が明らかに
なっている。すでに、種々の炎症動物モデルにおいて、
抗ＥＬＡＭ−１モノクロナール抗体やＥＬＡＭ−１の部
分ペプチドを投与することにより、顕著な抗炎症作用が
認められることが示されており、ＥＬＡＭ−１接着阻害
物質が炎症性疾患である再潅流傷害、喘息、乾せん及び
慢性関節リウマチ薬としても有用であることが明らかに
されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】細胞接着分子ＥＬＡＭ
−１はタンパク質であり、これらのモノクロナール抗体
等の高分子化合物の薬剤化は困難である。従って、ＥＬ
ＡＭ−１接着阻害作用という新しい作用機作を有する低
分子化合物が望まれている。本発明の目的は、ＥＬＡＭ
−１接着阻害作用を有する新規な生理活性物質を提供す
ることにある。
−１はタンパク質であり、これらのモノクロナール抗体
等の高分子化合物の薬剤化は困難である。従って、ＥＬ
ＡＭ−１接着阻害作用という新しい作用機作を有する低
分子化合物が望まれている。本発明の目的は、ＥＬＡＭ
−１接着阻害作用を有する新規な生理活性物質を提供す
ることにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
の達成のために多数の菌株を土壌及び植物より分離し、
その菌株の代謝産物について種々検討した結果、ある種
の菌株がＥＬＡＭ−１接着阻害作用を有する新規な生理
活性物質を生産することを見いだし、本発明を完成する
に至った。
の達成のために多数の菌株を土壌及び植物より分離し、
その菌株の代謝産物について種々検討した結果、ある種
の菌株がＥＬＡＭ−１接着阻害作用を有する新規な生理
活性物質を生産することを見いだし、本発明を完成する
に至った。
【０００５】すなわち、本発明は、式
【０００６】
【化３】
【０００７】で表される化合物（以下、ＡＩ−０７０と
略称する。）、式
略称する。）、式
【０００８】
【化４】
【０００９】で表される化合物（以下、ＡＩ−０７１と
略称する。）及び式
略称する。）及び式
【００１０】
【化５】
【００１１】で表される化合物（以下、ＡＩ−０７２と
略称する。）である。
略称する。）である。
【００１２】本発明の新規生理活性物質ＡＩ−０７０〜
０７２を生産する菌株は、本発明者らが自然界から新た
に分離した菌株であり、微生物の名称「Microtetraspor
a spiralis TA-0294」及び微生物寄託番号「FERM P
−15757」として工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託されている。
０７２を生産する菌株は、本発明者らが自然界から新た
に分離した菌株であり、微生物の名称「Microtetraspor
a spiralis TA-0294」及び微生物寄託番号「FERM P
−15757」として工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託されている。
【００１３】この菌株の菌学的性状を以下に示す。 Ａ.形態的特徴 本菌株はイースト麦芽エキス寒天培地、オートミール寒
天培地において良好に生育し、胞子形成も良好である
が、その他の培地での生育は全体的に貧しい傾向にあ
り、胞子形成も認められない。オートミール寒天培地に
生育したコロニーを顕微鏡下に観察すると、基生菌糸は
よく発達し分岐しているが、分断は見られない。気菌糸
に短い胞子柄（０.３〜３.０μｍ程度）を介して１０〜
３０個の胞子からなる胞子鎖が形成される。希に胞子柄
上に第二の胞子柄が形成され、その先端に上記と同様な
胞子鎖が形成される。その胞子鎖は螺旋状で、通常２〜
５回転である。胞子の長さは１.１〜１.６μｍ、幅が
０.８〜１.２μｍ、形は楕円形〜たる形、表面はしわ状
である。また、胞子嚢や菌核及び胞子の運動性は認めら
れない。
天培地において良好に生育し、胞子形成も良好である
が、その他の培地での生育は全体的に貧しい傾向にあ
り、胞子形成も認められない。オートミール寒天培地に
生育したコロニーを顕微鏡下に観察すると、基生菌糸は
よく発達し分岐しているが、分断は見られない。気菌糸
に短い胞子柄（０.３〜３.０μｍ程度）を介して１０〜
３０個の胞子からなる胞子鎖が形成される。希に胞子柄
上に第二の胞子柄が形成され、その先端に上記と同様な
胞子鎖が形成される。その胞子鎖は螺旋状で、通常２〜
５回転である。胞子の長さは１.１〜１.６μｍ、幅が
０.８〜１.２μｍ、形は楕円形〜たる形、表面はしわ状
である。また、胞子嚢や菌核及び胞子の運動性は認めら
れない。
【００１４】Ｂ.各種培地上での諸性状 各種培地上で、２８℃、２１日間培養した場合の肉眼的
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。
観察結果を次の表１に示した。なお色の表示は日本規格
協会、ＪＩＳ色名帳（１９８５年）の系統色名を引用し
た。
【００１５】
【表１】
【００１６】Ｃ.生理学的性質 生育温度範囲：２０〜３８℃、 最適生育温度：２８〜３４℃である。
【００１７】ゼラチンの液化：陰性 脱脂乳の凝固：陰性 脱脂乳のペプトン化：偽陽性 メラニン様色素の生産：陰性 でんぷんの加水分解 ：陰性 炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地
上、２８℃、２週間） Ｌ−アラビノース：ｗ イノシトール ：ｗ Ｄ−キシロース ：ｗ Ｄ−マンニトール ：ｗ Ｄ−グルコース ：＋ マルトース ：＋ Ｄ−フラクトース：ｗ Ｄ−マンノース ：＋ シュクロース ：ｗ グリセロール ：＋ Ｌ−ラムロース ：ｗ ズルシトール ：− ラフィノース ：ｗ ラクトース ：− （＋：生育する ｗ：弱く生育する −：殆ど生育
しない）。
上、２８℃、２週間） Ｌ−アラビノース：ｗ イノシトール ：ｗ Ｄ−キシロース ：ｗ Ｄ−マンニトール ：ｗ Ｄ−グルコース ：＋ マルトース ：＋ Ｄ−フラクトース：ｗ Ｄ−マンノース ：＋ シュクロース ：ｗ グリセロール ：＋ Ｌ−ラムロース ：ｗ ズルシトール ：− ラフィノース ：ｗ ラクトース ：− （＋：生育する ｗ：弱く生育する −：殆ど生育
しない）。
【００１８】Ｄ.化学分類学的性質 ジアミノピメリン酸の有無と光学異性型：ｍｅｓｏ型
のジアミノピメリン酸が検出された。 細胞壁のアミノ酸組成：アラニンとグルタミン酸が検
出された。グリシンは検出されなかった。 全菌体の還元糖の種類：リボース、マジュロース、マ
ンノース、ガラクトース及びグルコースが検出された。 メナキノン： ＭＫ−９（Ｈ4) が主成分として検出
された。またＭＫ−９（Ｈ2）とＭＫ−９（Ｈ6）も少量
検出された。 リン脂質：ホスファチジルイノシトールマンノシド、
ジホスファチジルグリセロール、ヒドロキシホスファチ
ジルエタノールアミン及びニンヒドリン陽性糖脂質が検
出された。また、ホスファチジルグリセロールが微量検
出された。
のジアミノピメリン酸が検出された。 細胞壁のアミノ酸組成：アラニンとグルタミン酸が検
出された。グリシンは検出されなかった。 全菌体の還元糖の種類：リボース、マジュロース、マ
ンノース、ガラクトース及びグルコースが検出された。 メナキノン： ＭＫ−９（Ｈ4) が主成分として検出
された。またＭＫ−９（Ｈ2）とＭＫ−９（Ｈ6）も少量
検出された。 リン脂質：ホスファチジルイノシトールマンノシド、
ジホスファチジルグリセロール、ヒドロキシホスファチ
ジルエタノールアミン及びニンヒドリン陽性糖脂質が検
出された。また、ホスファチジルグリセロールが微量検
出された。
【００１９】ＴＡ−０２９４株は上記したように １）
ジアミノピメリン酸はｍｅｓｏ型が検出され、また細胞
壁のアミノ酸はグリシンを含有しない（細胞壁タイプＩ
ＩＩ ）。２）全細胞糖成分としてマジュロースを含む
（糖パターンＢ）。３）メナキノンはＭＫ−９（Ｈ４）
を主成分とする。 ４）リン脂質はＰIV型である。これ
らの 結果から、本菌株は Microtetraspora 属の１
菌種であることが明かとなった。 本菌株は「BERGEY'S
MANUAL OF Systematic Bacteriology Vol.4」に
より種の検索を行うと、螺旋状の胞子鎖を形成し、白色
系のコロニーを形成している点から Microtetraspora
spiralis もしくは M. fastidiosa に近似してい
ることが判明した。本菌株は胞子の表面構造がしわ状で
あり、コロニーの色調が白色から淡黄色であることから
Microtetraspora spiralis に類似しており、また
その他の性状においても多くの共通点を有している。更
に M.spiralis JCM 3286 との９種の寒天培地によ
る生育性状の比較においても非常に類似していた。以上
の結果から、本菌株を Microtetraspora spiralisTA-
0294と命名した。
ジアミノピメリン酸はｍｅｓｏ型が検出され、また細胞
壁のアミノ酸はグリシンを含有しない（細胞壁タイプＩ
ＩＩ ）。２）全細胞糖成分としてマジュロースを含む
（糖パターンＢ）。３）メナキノンはＭＫ−９（Ｈ４）
を主成分とする。 ４）リン脂質はＰIV型である。これ
らの 結果から、本菌株は Microtetraspora 属の１
菌種であることが明かとなった。 本菌株は「BERGEY'S
MANUAL OF Systematic Bacteriology Vol.4」に
より種の検索を行うと、螺旋状の胞子鎖を形成し、白色
系のコロニーを形成している点から Microtetraspora
spiralis もしくは M. fastidiosa に近似してい
ることが判明した。本菌株は胞子の表面構造がしわ状で
あり、コロニーの色調が白色から淡黄色であることから
Microtetraspora spiralis に類似しており、また
その他の性状においても多くの共通点を有している。更
に M.spiralis JCM 3286 との９種の寒天培地によ
る生育性状の比較においても非常に類似していた。以上
の結果から、本菌株を Microtetraspora spiralisTA-
0294と命名した。
【００２０】ＡＩ−０７０、０７１及び０７２の生産
は、大略一般の発酵生成物を生産する場合に準じ、各種
の栄養物質を含む培地で Microtetraspora spiralis
ＴＡ-0294を好気的条件下で培養することにより行
う。培地は主として液体培地を用い、炭素源、窒素源、
無機塩よりなり、必要に応じてビタミン類、先駆物質、
消泡剤を加えることができ、ｐＨは７前後に調整する。
炭素源としては、例えばグルコース、マルトース、デキ
ストリン、グリセリン、澱粉などを単独か又は混合して
用いる。窒素源としては、例えば酵母エキス、ペプト
ン、肉エキス、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、
尿素、アンモニウム塩などを単独か又は混合して用い
る。無機塩としては、例えばリン酸一カリウム、硫酸マ
グネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムなどを単
独かまたは混合して用いる。消泡剤としてはアデカノー
ル、シリコン化合物などを用いることができる。
は、大略一般の発酵生成物を生産する場合に準じ、各種
の栄養物質を含む培地で Microtetraspora spiralis
ＴＡ-0294を好気的条件下で培養することにより行
う。培地は主として液体培地を用い、炭素源、窒素源、
無機塩よりなり、必要に応じてビタミン類、先駆物質、
消泡剤を加えることができ、ｐＨは７前後に調整する。
炭素源としては、例えばグルコース、マルトース、デキ
ストリン、グリセリン、澱粉などを単独か又は混合して
用いる。窒素源としては、例えば酵母エキス、ペプト
ン、肉エキス、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、
尿素、アンモニウム塩などを単独か又は混合して用い
る。無機塩としては、例えばリン酸一カリウム、硫酸マ
グネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムなどを単
独かまたは混合して用いる。消泡剤としてはアデカノー
ル、シリコン化合物などを用いることができる。
【００２１】培養方法としては振盪培養、通気攪拌培養
などの好気的培養が適しており、ｐＨ５〜７、２５〜３
５℃で４〜７日間、望ましくはｐＨ５〜７、２７〜３２
℃で６〜７日間培養する。
などの好気的培養が適しており、ｐＨ５〜７、２５〜３
５℃で４〜７日間、望ましくはｐＨ５〜７、２７〜３２
℃で６〜７日間培養する。
【００２２】この培養により生産されたＡＩ−０７０、
０７１及び０７２を単離するには、発酵生産物を採取す
る一般的な方法に準じて行えばよい。すなわち、培養終
了後、遠心分離または濾過により培養濾液を得、ダイヤ
イオンＨＰ−２０（商品名、三菱化成社製）などのポリ
スチレン樹脂に吸着させた後、低級アルコール、アセト
ンなどの有機溶媒で溶出させる。この溶出液を減圧濃縮
し有機溶媒を除去した後、酢酸エチル、ベンゼン、塩化
メチレンなどの非水溶性有機溶媒に転溶し、これを減圧
濃縮してシロップ状とする。このシロップを再度酢酸エ
チル、ベンゼン、塩化メチレン、アセトン、メタノール
などの有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いたカラムク
ロマトグラフィー、逆相分配用シリカゲルＯＤＳを充填
したカラムクロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−
２０などのゲル濾過クロマトグラフィーに付すことによ
りＡＩ−０７０、０７１及び０７２を精製、単離するこ
とができる。
０７１及び０７２を単離するには、発酵生産物を採取す
る一般的な方法に準じて行えばよい。すなわち、培養終
了後、遠心分離または濾過により培養濾液を得、ダイヤ
イオンＨＰ−２０（商品名、三菱化成社製）などのポリ
スチレン樹脂に吸着させた後、低級アルコール、アセト
ンなどの有機溶媒で溶出させる。この溶出液を減圧濃縮
し有機溶媒を除去した後、酢酸エチル、ベンゼン、塩化
メチレンなどの非水溶性有機溶媒に転溶し、これを減圧
濃縮してシロップ状とする。このシロップを再度酢酸エ
チル、ベンゼン、塩化メチレン、アセトン、メタノール
などの有機溶媒に溶解し、シリカゲルを用いたカラムク
ロマトグラフィー、逆相分配用シリカゲルＯＤＳを充填
したカラムクロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−
２０などのゲル濾過クロマトグラフィーに付すことによ
りＡＩ−０７０、０７１及び０７２を精製、単離するこ
とができる。
【００２３】以上の精製によって得られた本発明の目的
物質であるＡＩ−０７０、０７１及び０７２は、その分
子量、紫外線吸収スペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトル等の解析結果より、それぞ
れ化３、化４及び化５のようにその化学構造が決定され
た。
物質であるＡＩ−０７０、０７１及び０７２は、その分
子量、紫外線吸収スペクトル、1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトル等の解析結果より、それぞ
れ化３、化４及び化５のようにその化学構造が決定され
た。
【００２４】ＡＩ−０７０の理化学的性質は以下の通り
である。 （ａ）外観：黄色粉末 （ｂ）融点 １２６〜１３０℃ （ｃ）分子量： ４１６ （ｄ）分子式：Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ8 （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４５５.０８５６ 理論値 ４５５.０８５６（Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ8 Ｋとし
て計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４１７ （Ｍ＋Ｈ）＋ （ｇ）比旋光度 ＋８２．７゜（ｃ＝０.０９，メタノ
ール溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１５ｎｍ（ε＝３５７００） ２７２ｎｍ（ε＝８８００） ２８０ｎｍ（ε＝８８００） ２８９ｎｍ（ε＝７４００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ法で測定した結果を
図１に示す。
である。 （ａ）外観：黄色粉末 （ｂ）融点 １２６〜１３０℃ （ｃ）分子量： ４１６ （ｄ）分子式：Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ8 （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４５５.０８５６ 理論値 ４５５.０８５６（Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ8 Ｋとし
て計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４１７ （Ｍ＋Ｈ）＋ （ｇ）比旋光度 ＋８２．７゜（ｃ＝０.０９，メタノ
ール溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１５ｎｍ（ε＝３５７００） ２７２ｎｍ（ε＝８８００） ２８０ｎｍ（ε＝８８００） ２８９ｎｍ（ε＝７４００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：ＫＢｒ法で測定した結果を
図１に示す。
【００２５】（ｊ）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤＣｌ3
中、４００ＭＨｚで測定した結果を図２に示す。
中、４００ＭＨｚで測定した結果を図２に示す。
【００２６】（ｋ）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤＣｌ
3中、１００ＭＨｚで測定した結果を図３に示す。
3中、１００ＭＨｚで測定した結果を図３に示す。
【００２７】（ｌ）溶剤に対する溶解性： クロロホルム、メタノール、エタノール、アセトニトリ
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン硫酸、リン
モリブデン （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン硫酸、リン
モリブデン （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
【００２８】ＡＩ−０７１の理化学的性質は以下の通り
である。 （ａ）外観：黄色粉末 （ｂ）融点 ９０〜９１℃ （ｃ）分子量： ４４６ （ｄ）分子式：Ｃ21Ｈ22Ｎ2Ｏ９ （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４４７．１４３１ 理論値 ４４７.１４０４（Ｃ21Ｈ23Ｎ2Ｏ9として
計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４４７ （Ｍ＋Ｈ）+ （ｇ）比旋光度 ＋９２.３゜（ｃ＝０.０５，メタノー
ル溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１５ｎｍ（ε＝３６８００） ２３９ｎｍ（ε＝１５６００） ２７３ｎｍ（ε＝９９００） ２８０ｎｍ（ε＝１００００） ２８８ｎｍ（ε＝９１００） ３１２ｎｍ（ε＝４１００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：Ｎｅａｔ法で測定した結果
を図４に示す。
である。 （ａ）外観：黄色粉末 （ｂ）融点 ９０〜９１℃ （ｃ）分子量： ４４６ （ｄ）分子式：Ｃ21Ｈ22Ｎ2Ｏ９ （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４４７．１４３１ 理論値 ４４７.１４０４（Ｃ21Ｈ23Ｎ2Ｏ9として
計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４４７ （Ｍ＋Ｈ）+ （ｇ）比旋光度 ＋９２.３゜（ｃ＝０.０５，メタノー
ル溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１５ｎｍ（ε＝３６８００） ２３９ｎｍ（ε＝１５６００） ２７３ｎｍ（ε＝９９００） ２８０ｎｍ（ε＝１００００） ２８８ｎｍ（ε＝９１００） ３１２ｎｍ（ε＝４１００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：Ｎｅａｔ法で測定した結果
を図４に示す。
【００２９】（ｊ）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤＣｌ3
中、５００ＭＨｚで測定した結果を図５に示す。
中、５００ＭＨｚで測定した結果を図５に示す。
【００３０】（ｋ）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＣＤＣｌ
3中、１２５ＭＨｚで測定した結果を図６に示す。
3中、１２５ＭＨｚで測定した結果を図６に示す。
【００３１】（ｌ）溶剤に対する溶解性： クロロホルム、メタノール、エタノール、アセトニトリ
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン硫酸、リン
モリブデン （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：Ｈ2ＳＯ4、モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2 陰性：ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン硫酸、リン
モリブデン （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
【００３２】ＡＩ−０７２の理化学的性質は以下の通り
である。 （ａ）外観：淡黄色粉末 （ｂ）融点：１１４〜１１５℃ （ｃ）分子量： ４０２ （ｄ）分子式：Ｃ19Ｈ18Ｎ2Ｏ8 （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４０３.１１２５ 理論値 ４０３.１１４１（Ｃ19Ｈ19Ｎ2Ｏ8として
計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４０３ （Ｍ＋Ｈ）+ （ｇ）比旋光度 ＋１９.６゜（ｃ＝０.１２，メタノー
ル溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１６ｎｍ（ε＝３２６００） ２３８ｎｍ（ε＝９４００） ２４７ｎｍ（ε＝５１００） ２８０ｎｍ（ε＝３２００） ２８８ｎｍ（ε＝２９００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：Ｎｅａｔ法で測定した結果
を図７に示す。
である。 （ａ）外観：淡黄色粉末 （ｂ）融点：１１４〜１１５℃ （ｃ）分子量： ４０２ （ｄ）分子式：Ｃ19Ｈ18Ｎ2Ｏ8 （ｅ）ＨＲＦＡＢマススペクトル 実測値 ４０３.１１２５ 理論値 ４０３.１１４１（Ｃ19Ｈ19Ｎ2Ｏ8として
計算） （ｆ）ＦＡＢマススペクトル： ｍ／ｚ ４０３ （Ｍ＋Ｈ）+ （ｇ）比旋光度 ＋１９.６゜（ｃ＝０.１２，メタノー
ル溶液中で測定） （ｈ）紫外線吸収スペクトル： λmax ２１６ｎｍ（ε＝３２６００） ２３８ｎｍ（ε＝９４００） ２４７ｎｍ（ε＝５１００） ２８０ｎｍ（ε＝３２００） ２８８ｎｍ（ε＝２９００） （メタノール溶液中で測定） （ｉ）赤外吸収スペクトル：Ｎｅａｔ法で測定した結果
を図７に示す。
【００３３】（ｊ）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＤＭＳＯ
−ｄ6中、４００ＭＨｚで測定した結果を図８に示す。
−ｄ6中、４００ＭＨｚで測定した結果を図８に示す。
【００３４】（ｋ）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル：ＤＭＳＯ
−ｄ6中、１００ＭＨｚで測定した結果を図９に示す。
−ｄ6中、１００ＭＨｚで測定した結果を図９に示す。
【００３５】（ｌ）溶剤に対する溶解性： クロロホルム、メタノール、エタノール、アセトニトリ
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2、リンモリ
ブデン 陰性：Ｈ2ＳＯ4、ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン
硫酸 （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
ルに可溶 ｎ−ヘキサン、ベンゼンに不溶 （ｍ）呈色反応； 陽性：モリブデン酸アンモニウム硫酸、Ｉ2、リンモリ
ブデン 陰性：Ｈ2ＳＯ4、ニンヒドリン、ＦｅＣｌ3、バニリン
硫酸 （ｎ）塩基性、酸性、中性の区別：中性。
【００３６】
【発明の効果】本発明の化合物はＥＬＡＭ−１細胞接着
阻害活性を示し、抗炎症剤、抗リウマチ及び抗喘息薬と
して有用である。
阻害活性を示し、抗炎症剤、抗リウマチ及び抗喘息薬と
して有用である。
【００３７】
【実施例】以下、実施例及び試験例を示し、本発明を更
に詳細に説明する。 実施例 可溶性デンプン２.０％、グルコース０.５％、ＮＺケー
ス（和光純薬）０.３％、酵母エキス０.２％、肉エキス
（ミクニ化学産業）０.５％，炭酸カルシウム０.３％を
含むｐＨ７の液体培地２ｍＬを２４ｍＬの試験管に入れ
１２０℃、２気圧で２０分間滅菌した。次いで、この無
菌液体培地にMicrotetraspora spiralis TA-0294株を
接種し、２８℃、６日間回転振盪機（２００ＲＰＭ）上
で培養し、種培養液とした。次に、内容量５００ｍＬの
三角フラスコ７０本に、オートミール２.０％、グルコ
ース２.０％、肉エキス０.３％、炭酸カルシウム０.３
％、塩化ナトリウム０.３％、硫酸第二鉄０.０４％、塩
化マンガン０.０４％からなる生産培地１００ｍＬを入
れ、ｐＨ７.０に調製して滅菌した後、前記種培養液を
２ｍＬずつ接種し、２８℃、６日間通気攪拌培養（２０
０ＲＰＭ）を行った。培養終了後、得られた培養液７Ｌ
を遠心分離により濾液と菌体に分けた。濾液をダイヤイ
オンＨＰ−２０（商品名、三菱化成社製）３５０ｍＬに
吸着させた後、１Ｌの８０％水性アセトンで２回溶出し
た。これらを合わせ減圧下溶媒留去後、得られた水層を
酢酸エチル３００ｍｌで３回抽出し、酢酸エチル層を合
わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧濃縮し、褐色の
シロップ状物質３２２ｍｇを得た。
に詳細に説明する。 実施例 可溶性デンプン２.０％、グルコース０.５％、ＮＺケー
ス（和光純薬）０.３％、酵母エキス０.２％、肉エキス
（ミクニ化学産業）０.５％，炭酸カルシウム０.３％を
含むｐＨ７の液体培地２ｍＬを２４ｍＬの試験管に入れ
１２０℃、２気圧で２０分間滅菌した。次いで、この無
菌液体培地にMicrotetraspora spiralis TA-0294株を
接種し、２８℃、６日間回転振盪機（２００ＲＰＭ）上
で培養し、種培養液とした。次に、内容量５００ｍＬの
三角フラスコ７０本に、オートミール２.０％、グルコ
ース２.０％、肉エキス０.３％、炭酸カルシウム０.３
％、塩化ナトリウム０.３％、硫酸第二鉄０.０４％、塩
化マンガン０.０４％からなる生産培地１００ｍＬを入
れ、ｐＨ７.０に調製して滅菌した後、前記種培養液を
２ｍＬずつ接種し、２８℃、６日間通気攪拌培養（２０
０ＲＰＭ）を行った。培養終了後、得られた培養液７Ｌ
を遠心分離により濾液と菌体に分けた。濾液をダイヤイ
オンＨＰ−２０（商品名、三菱化成社製）３５０ｍＬに
吸着させた後、１Ｌの８０％水性アセトンで２回溶出し
た。これらを合わせ減圧下溶媒留去後、得られた水層を
酢酸エチル３００ｍｌで３回抽出し、酢酸エチル層を合
わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧濃縮し、褐色の
シロップ状物質３２２ｍｇを得た。
【００３８】この褐色シロップ状物質３２０ｍｇを塩化
メチレンに溶解し、塩化メチレンで調製したシリカゲル
［Silica gel 60 （Ｍｅｒｃｋ社製）］の４０ｍＬ
のカラムに吸着させた。塩化メチレン−メタノール（１
００：０）１００ｍＬで溶出を行いこれらの区分を除去
した。次に塩化メチレン−メタノール（９９：１）、
（９８：２）、（９５：５）の混合溶媒１００ｍＬで順
次溶出し、得られた画分を濃縮乾固し粗精製物１８９ｍ
ｇを得た。
メチレンに溶解し、塩化メチレンで調製したシリカゲル
［Silica gel 60 （Ｍｅｒｃｋ社製）］の４０ｍＬ
のカラムに吸着させた。塩化メチレン−メタノール（１
００：０）１００ｍＬで溶出を行いこれらの区分を除去
した。次に塩化メチレン−メタノール（９９：１）、
（９８：２）、（９５：５）の混合溶媒１００ｍＬで順
次溶出し、得られた画分を濃縮乾固し粗精製物１８９ｍ
ｇを得た。
【００３９】この粗精製物１８５ｍｇを少量のメタノー
ルに溶解し、２０％メタノール（メタノール：水＝１：
４）で調製したＯＤＳカラム［クロマトレックス（セン
シュ−科学社製）］６０ｍｌに吸着させ２０％メタノー
ル、３０％メタノールで順次溶出を行った。２０％メタ
ノール画分を濃縮乾固し得られた粗精製物６７ｍｇをク
ロロホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン＝５：１：５で
調製したセファデックスＬＨ−２０（商品名；ファルマ
シア社製）を充填した２８０ｍｌのカラムを用いて、同
一溶媒でゲル濾過を行い、活性画分を減圧濃縮乾固し
て、ＡＩ−０７２を２４.４ｍｇ得た。３０％メタノー
ル画分を濃縮乾固し得られた粗精製物２６ｍｇをクロロ
ホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン＝５：１：５で調製
したセファデックスＬＨ−２０（商品名；ファルマシア
社製）を充填した１１０ｍＬのカラムを用いて同様にゲ
ル濾過を行い、活性物質としてＡＩ−０７０を１２.３
ｍｇ、ＡＩ−０７１を２.０ｍｇ得た。純度の確認は、
カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡＭ−３０２ ＯＤＳ−ＡＭ
（４.６Ф×１５０ｍｍ）を用い、ＵＶ吸収２１５ｎｍ
でモニターしながら３０％ＣＨ3ＣＮ、流速１.０ｍｌ／
ｍｉｎで行った。ＡＩ−０７０はＲｔ９.１ｍｉｎ、Ａ
Ｉ−０７１はＲｔ１０.１ｍｉｎ、ＡＩ−０７２はＲｔ
４.２ｍｉｎだった。
ルに溶解し、２０％メタノール（メタノール：水＝１：
４）で調製したＯＤＳカラム［クロマトレックス（セン
シュ−科学社製）］６０ｍｌに吸着させ２０％メタノー
ル、３０％メタノールで順次溶出を行った。２０％メタ
ノール画分を濃縮乾固し得られた粗精製物６７ｍｇをク
ロロホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン＝５：１：５で
調製したセファデックスＬＨ−２０（商品名；ファルマ
シア社製）を充填した２８０ｍｌのカラムを用いて、同
一溶媒でゲル濾過を行い、活性画分を減圧濃縮乾固し
て、ＡＩ−０７２を２４.４ｍｇ得た。３０％メタノー
ル画分を濃縮乾固し得られた粗精製物２６ｍｇをクロロ
ホルム：メタノール：ｎ−ヘキサン＝５：１：５で調製
したセファデックスＬＨ−２０（商品名；ファルマシア
社製）を充填した１１０ｍＬのカラムを用いて同様にゲ
ル濾過を行い、活性物質としてＡＩ−０７０を１２.３
ｍｇ、ＡＩ−０７１を２.０ｍｇ得た。純度の確認は、
カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡＭ−３０２ ＯＤＳ−ＡＭ
（４.６Ф×１５０ｍｍ）を用い、ＵＶ吸収２１５ｎｍ
でモニターしながら３０％ＣＨ3ＣＮ、流速１.０ｍｌ／
ｍｉｎで行った。ＡＩ−０７０はＲｔ９.１ｍｉｎ、Ａ
Ｉ−０７１はＲｔ１０.１ｍｉｎ、ＡＩ−０７２はＲｔ
４.２ｍｉｎだった。
【００４０】試験例１ ［Huvec-Colo201細胞接着阻害
作用試験］ ＥＬＡＭ−１細胞接着阻害作用は、Ｈｕｖｅｃ−Ｃｏｌ
ｏ２０１細胞接着阻害作用試験を用いて評価した。すな
わち、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞であるHuvec細胞を固
層培養し、ＴＮＦ−αで刺激することにより細胞上に接
着分子（ＥＬＡＭ−１）を誘導する。これに蛍光標識し
たヒト大腸癌細胞（Ｃｏｌｏ２０１細胞、ＳＬｅｘ発
現）を検体と同時に添加し、細胞間の接着量を測定する
ことにより評価した。 （検体）実施例で得られたＡＩ−０７０、０７１及び０
７２をＤＭＳＯに溶解し、検体として用いた。 （試験細胞） Ｈｕｖｅｃ細胞（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞） 蛍光標識Ｃｏｌｏ２０１細胞（ヒト大腸癌細胞） （試験方法）Ｈｕｖｅｃ細胞を２×１０4ｃｅｌｌｓ／
ｗｅｌｌとなるようにコラーゲンコート９６穴プレート
に播種し、３７℃、１９９培地で１晩培養する。培地を
除去し、rhＴＮＦ−α（１００ｕ／ｍｌ）を含む培地
（１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）を５０ｕｌ／ｗｅｌｌで加
えた後、サンプルを添加し３７℃で６時間培養する。更
に蛍光標識したＣｏｌｏ２０１細胞を１×１０5ｃｅｌ
ｌｓ／５０ｕｌ／ｗｅｌｌで加え、このプレートを３７
℃で５０ｒｐｍで２０分振とう培養し、接着を完了させ
た。培地を除去し、０.２５ｍＭＣａ2+ＰＢＳ緩衝液で
洗浄した後、接着したＣｏｌｏ２０１細胞を１％ＮＰ−
４０（５０ｕｌ／ｗｅｌｌ）で溶解して、その蛍光強度
を測定した。結果は接着阻害率で表示した。
作用試験］ ＥＬＡＭ−１細胞接着阻害作用は、Ｈｕｖｅｃ−Ｃｏｌ
ｏ２０１細胞接着阻害作用試験を用いて評価した。すな
わち、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞であるHuvec細胞を固
層培養し、ＴＮＦ−αで刺激することにより細胞上に接
着分子（ＥＬＡＭ−１）を誘導する。これに蛍光標識し
たヒト大腸癌細胞（Ｃｏｌｏ２０１細胞、ＳＬｅｘ発
現）を検体と同時に添加し、細胞間の接着量を測定する
ことにより評価した。 （検体）実施例で得られたＡＩ−０７０、０７１及び０
７２をＤＭＳＯに溶解し、検体として用いた。 （試験細胞） Ｈｕｖｅｃ細胞（ヒト臍帯静脈血管内皮細胞） 蛍光標識Ｃｏｌｏ２０１細胞（ヒト大腸癌細胞） （試験方法）Ｈｕｖｅｃ細胞を２×１０4ｃｅｌｌｓ／
ｗｅｌｌとなるようにコラーゲンコート９６穴プレート
に播種し、３７℃、１９９培地で１晩培養する。培地を
除去し、rhＴＮＦ−α（１００ｕ／ｍｌ）を含む培地
（１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ）を５０ｕｌ／ｗｅｌｌで加
えた後、サンプルを添加し３７℃で６時間培養する。更
に蛍光標識したＣｏｌｏ２０１細胞を１×１０5ｃｅｌ
ｌｓ／５０ｕｌ／ｗｅｌｌで加え、このプレートを３７
℃で５０ｒｐｍで２０分振とう培養し、接着を完了させ
た。培地を除去し、０.２５ｍＭＣａ2+ＰＢＳ緩衝液で
洗浄した後、接着したＣｏｌｏ２０１細胞を１％ＮＰ−
４０（５０ｕｌ／ｗｅｌｌ）で溶解して、その蛍光強度
を測定した。結果は接着阻害率で表示した。
【００４１】（結果）結果を表２に示した。
【００４２】
【表２】
【図１】ＫＢｒ法で測定したＡＩ−０７０の赤外線吸収
スペクトルを示す。
スペクトルを示す。
【図２】ＣＤＣｌ3中、４００ＭＨｚで測定したＡＩ−
０７０の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
０７０の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】ＣＤＣｌ3中、１００ＭＨｚで測定したＡＩ−
０７０の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
０７０の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】Ｎｅａｔ法で測定したＡＩ−０７１の赤外線吸
収スペクトルを示す。
収スペクトルを示す。
【図５】ＣＤＣｌ3中、５００ＭＨｚで測定したＡＩ−
０７１の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
０７１の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】ＣＤＣｌ3中、１２５ＭＨｚで測定したＡＩ−
０７１の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
０７１の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】Ｎｅａｔ法で測定したＡＩ−０７２の赤外線吸
収スペクトルを示す。
収スペクトルを示す。
【図８】ＤＭＳＯ−ｄ6中、４００ＭＨｚで測定したＡ
Ｉ−０７２の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｉ−０７２の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図９】ＤＭＳＯ−ｄ6中、１００ＭＨｚで測定したＡ
Ｉ−０７２の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
Ｉ−０７２の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/14 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 安藤 勉 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 山口 章恵 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内
Claims (2)
- 【請求項１】 式 【化１】 （式中、Ｒは水素原子又はメトキシ基である。）で表さ
れる化合物。 - 【請求項２】 式 【化２】 で表される化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8208094A JPH1045731A (ja) | 1996-08-07 | 1996-08-07 | ベンゾオキサゾール系化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8208094A JPH1045731A (ja) | 1996-08-07 | 1996-08-07 | ベンゾオキサゾール系化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1045731A true JPH1045731A (ja) | 1998-02-17 |
Family
ID=16550544
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8208094A Pending JPH1045731A (ja) | 1996-08-07 | 1996-08-07 | ベンゾオキサゾール系化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1045731A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008022462A1 (en) * | 2006-08-25 | 2008-02-28 | University Of Northern British Columbia | Para-quinol derivatives and methods of stereo selectively synthesizing and using same |
-
1996
- 1996-08-07 JP JP8208094A patent/JPH1045731A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008022462A1 (en) * | 2006-08-25 | 2008-02-28 | University Of Northern British Columbia | Para-quinol derivatives and methods of stereo selectively synthesizing and using same |
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