JPH04178379A - ベンズアンスラキノン化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［Ｍ集土の利用分野］ 本発明は、ＬＤＬ取り込み促進作用を有する新規な生理
活性物質に関する。

［従来の技術］ 本発明の生理活性物質ベンズアンスラキノン化金物は分
子量７１０９分子式Ｃ３ＴＨａ。ＯＶａの新規な物質で
あり、これと同一の物理化学的性質および生理活性を有
する物質の存在は知られていない。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は、ＬＤＬ取り込み促進作用を有する新規
な生理活性物質を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、血中におｌブる脂質低下作用を有する新
規物質を土壌分離菌の中から得るべく探索研究を重ねた
結果、本発明者らの見出した特定の微生物が、ＨＥＰＡ
ＴＯＭＡ　　Ｇ　２培養細胞（以下、ＨＥＰ　　Ｇ２と
略す）（ヒト肝癌細胞）に対してＬＤＬ取り込み促進作
用を有する新規な生理活性物質を生産することを見出し
本発明を完成するに至った。

で表される化合物である。本発明の化合物を生産する菌
株は、本発明者らが、新潟県南魚沼郡湯沢町で採取した
土壌より新たに分離した菌株であり、微生物の名称Ｓｔ
ｒｓｐｔｏｍｙｃａｓ　彎ｇｒｉｓａａｖｉｒｉｄｉｓ
　Ａ　−７８８４および微生物寄託番号「微工研菌寄第
１１７８２号（ＦＥＲＭ　ｐ−１１７８２）　Ｊとして
、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。

この菌学的性状を以下に示す。

■　形態 本菌株の栄養糸は合成寒天培地においてよく発達し、不
規則に分岐する。また隔壁は認められない。胞子はスタ
ーチ・無機塩寒天培地およびオートミール寒天培地など
で栄養菌糸より伸長した気菌糸の先端に良好に形成され
る。顕微鏡で観察すると、胞子形成菌糸の分岐方法は単
純分岐で、胞子は通常気菌糸の先端に螺旋状に形成され
る。

胞子は１０個以上連鎖し、表面は平滑である。胞子の形
成は、円筒形でその大きさは、０．９０〜０８４Ｘ　０
．６０〜０．５５　μｍである。

菌核、胞子量、鞭毛胞子は観察されない。

■　培地上での生育状態 各種培地上で２８℃、１４日間培養した時の肉眼的観察
結果を蔦１表に示す。

（この頁以下、余白） 第１表　生育状態 ■　生理的、生態的性質 １）生育温度範囲 イースト−麦芽エキス培地で１７〜３３℃の範囲で良好
に生育する。１０℃以下、３５℃以上の温度範囲では生
育しない。

２）生化学的性質 ａ）好気性、嫌気性の区別：好気性 ｂ）ゼラチンの液化、陽性 Ｃ）脱脂乳の凝固：陰性 ｄ）脱脂乳のペプトン化、陽性 ｅ）スターチの加水分解：陽性 ｆ）メラニン様色素の生成；陰性 ｇ）細胞壁の型：　１型 ３）炭素源の利用 （ブリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）利用する。

Ｌ−７ラビノース、Ｄ−グルコース、 Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース、 ラムノース、Ｄ−マンニット 利用しない： シュウクロース、イノシトール、 ラフィノース 以上の性状から本菌株が放線菌中、ストレプトミセス属
に属することが明らかとなったので、上記諸性状をｌ５
Ｐｒジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プロ
ジェクト」、バーシーズ・マニュアル・オブ・シスマチ
ック・バクテリオＯジー、第４巻、　　（１９８９年）
およびワックスマン著「ジ・アクチノミセテス」第２巻
（１９６１年）に報告されている多くの既知菌株と比較
した結果、本菌株は、ストレプトミセス・グリセオヴイ
リデス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｇｒｉｓｅｏｖ
ｉ　ｒ　１ｄｅｓ）に最も近い性状を示していた。

以上の結果より本菌株はストレプトミセス・グリセオヴ
イリデスと種を同じくするものと判断し、本菌株をスト
レプトミセス・グリセオヴイリデスＡ−７８８４と命名
した。

本発明の化合物の生産は大略一般の発酵生産物を生産す
る場合に準じ、各種の栄養物質を含む培地でＡ−７８８
４株を好気的条件下で培養することにより行う。

この培養液中に生産された本発明化合物を単離するには
、発酵生産物を採取する一般的な方法に準じて行えば良
い。

すなわち培養終了後、培養液を上溝と菌体に分離後、上
清は酢酸エチルエステルにて抽圧する。

菌体はメタノールで抽圧したのち更に酢酸エチルで抽出
し、本発明化合物の両分を濃縮してシロップ状とする。

このシロップをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラ
フ、セファデックスＬＨ−２０（商品名：ファルマシア
社製）を用いたゲルろ過により、本発明化合物を精製単
離することができる。

以上の精製法によって得られた本発明化合物の理化学的
性質を以下に示す。

（本発明化合物の理化学的性質） （１）外観：赤褐色粉末 （２）Ｍ点：　１３９．５−１４２．０℃（３）元素分
析値。

実測値・Ｃ：６２．５８ Ｈ，５，９２ ０，３＋、５０ 理論値・Ｃ，６２，５３ Ｈ，５，９６ Ｏ；　　３　＋、Ｓ＋ Ｃ３？Ｈ４２０１４として計算 （４）質量分析値； 陽イオンＦＡＢ−ＭＳスペクトル ｍ／ｚ　　７５　＋　　（Ｍ＋に＋２Ｈ）”（５）　分
子式：　Ｃ３ＴＨ４２０１４（６）［ａ１２ｉ１　：　
＋７６、　３°　（ｃ＝０．５、クロロホルム溶液） （７）ＬＪＶ吸収スペクトル：エタノール溶液で測定し
た結果、 入１１ｓｘ　　＝　　　２　１８ｎｓ（ε　＝１６５４
８）２３０ｎａ（ｇ＝＋４６７０） ４２０　ｎ＊　（ε＝３１４７） （８）ＩＲ吸収スペクトル： にＢｒ錠中で測定したスペクトルを第１図に示す。

（９）＋１−ｌ−１−Ｎスペクトル。

重クロロホルム中、４００ＭＨｚで測定したスペクトル
を第２図に示す。

（１０）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
中、＋ＯＯＭＨｚで測定したスペクトルを第３図に示す
。

（１１）溶解性： メタノール、クロロホルム、アセトン、酢酸エチルエス
テルに易溶。

ｎ−ヘキサン、ベンゼン、エチルエーテルに難溶。

（１２）呈色反応： 陽性：硫酸、ヨウ素、ＦｅＣｌ３ 陰性：ニンヒドリン （１３）塩基性、酸性、中性の区別二中性また、本発明
化合物は、その元素分析値、分子量、紫外線スペクトル
、赤外線スペクトル、ＩＨ−ＮＭＲスペクトル、１３Ｃ
−ＮＭＲスペクトルの解［発明の効果コ 本発明の化合物はＨＥＰ　　Ｇ２細胞（ヒト肝癌細胞）
に対してＬＤＬ取り込み促進活性を有するので脂質低下
剤として有用である。

「実施例コ 以下、実施例および試験例を挙げて本発明を具体的に説
明する。

実施例 （＋）　　　１００ｍ１当り、オートミール２９、グル
コース２９、塩化ナトリウムｏ　３９、肉エキス０．３
９、硫酸第二鉄０．０４９、塩化マンガン（４水和物）
Ｏ，ｏ４ｇ、炭酸カルシウムｏ３９を含む無菌液体培地
にＡ７８８４株を接種し、２８℃、９６時間振とう培養
した。　　次に内宮量５１のミニジャー４ＪＦ、を用い
て種培地と同じ組成の無菌培地３１に前記培地１００ｍ
１を接種し、２８℃、９６時間通気攪拌培養した。

（２）　培養終了後、４基分の培養液１２１を上清と菌
体に分離した後、上溝は酢酸エチルエステルにて抽出し
、無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮し赤褐色の粉末状
物質１．３７９を得た。菌体はメタノールで抽出し、メ
タノールを除去した後、酢酸エチルエステルで抽出を行
い、無水硫酸ナトリウムで脱水後濃縮し、赤褐色粉末物
質４３４９を得、合わせて５７１９の活性画分を得た。

（３）　赤色粉末物質５．７＋９をクロロホルムに溶解
し、クロロホルムで調製したシリカゲル（商品名：ワコ
ーゲルＣ−２００、和光純薬社製）を充填した４５０ｍ
　ｌのカラムに吸着させ、メタノールの濃度を徐々にあ
げながら（０〜１００％）メタノール／クロロホルム溶
液で溶出した。活性画分を合わせ、濃縮乾固し、赤褐色
の粉末状物質１５８９を得た。

（４）　前項の赤褐色の粉末状物質１５８９をアセトニ
トリルに溶解し、６５％アセトニトリルで調製した逆相
シリカゲル（商品名：クロマトレックス、　　Ｆｕｊｉ
−Ｄａｖｉｓｉｏｎ社製）を充填した３００ｍ１のカラ
ムに吸着させ、６５％アセトニトリルにて溶出し、活性
画分を集め、赤褐色粉末１２３８ｍｇを得た。

（５）　前項の赤褐色粉末状物質１２３．８ｍｇをアセ
トン３ｍｌに溶解し、アセトンで調製したセファデック
スしＨ−２０（商品名；ファルマシア社製）を充填した
２００ｍ１のカラムを用いて、アセトンでゲル濾過を行
った。活性画分を集め、赤褐色粉末８２．０ｍｇを得た
。

（６）　前項の赤色粉末物質８２．０ｍｇをアセトニト
リルに溶解し、５５％アセトニトリルで調製した逆相シ
リカゲル（商品名、クロマトレックス、　　Ｆｕｊｉ−
Ｄａｖｉｓｉｏｎ社製）を充填した５０ｍ１のカラムに
吸着させ、５５％アセトニトリルにて溶出し活性画分を
集め、３９．２ｍｇの本発明化合物を赤褐色粉末として
得た。

（１）外ａｔ：赤褐色粉末 （２）融点：　１３９．５−１４２．０℃（３）元素分
析値 実測値　Ｃ，６２，５８ Ｈ；５．９２ ｏ：３１５０ 理論値：Ｃ；６２．５３ Ｈ：５．９６ Ｏ；３＋　　５＋ Ｃａ７）’ｌ　４２０１４として計算 （４）ｆ量分桁値 陽イオンＦＡＢ−ＭＳスペクトル ｍ／ｚ　　７５１　（Ｍ＋に＋２Ｈ）”（５）　分子式
”　ａＴＨ４２０１４ （６）［αコ２匙：＋７６、　３”　　（ｃ＝０．５、
クロロホルム溶液） （７）ＬＩＶ吸収スペクトル　エタノール溶液で測定し
た結果、 入、□＋　２＋８ｎｗ（ε＝１６５４８）２３０ｎｍ（
ａ＝Ｉ　４６７０） ４２　０　ＩＩｍ　（ε　＝３　　＋　　４７）（８）
ＩＲ吸収スペクトル： ＫＢｒ錠中１測定したスペクトルを第１図に示す。

（９）’ｌ−ｌ−１−Ｎスペクトル： 重クロロホルム中、４０　ＯＭＨｚで測定したスペクト
ルを第２図に示す。

（Ｔ　Ｏ）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
中、１００ＭＨｚで測定したスペクトルを第３因に示す
。

（１１）溶解性： メタノール、クロロホルム、アセトン、酢酸エチルエス
テルに易溶。

ｎ−ヘキサン、ベンゼン、エチルエーテルに難溶。

（１２）呈色反応： 陽性：硫酸、ヨウ素、Ｆ　ｅ　Ｃｌ　３陰性：ニンヒド
リン （１３）塩基性、酸性、中性の区別：中性試験例（ＨＥ
Ｐ　　Ｇ２細胞を用いたＬＤＬ取り込み促進作用） （検体） 実施例で得られた赤褐色粉末１．０ｍｇをエタノールに
溶解し、目的濃度となるように調製したものを用いた。

（試験細胞） ＨＥＰ　　Ｇ２　　ヒト肝癌細胞 （使用した培養液） ＤＭＥＭ　（１０％ＦＢＳを含む） （試験方法） 前記培養液を用いて、ＨＥＰ　　Ｇ２細胞を４×１０Ｓ
／ｍｌの濃度に調製した培養液を、直径２０ｍｍの２４
穴プレート（コーニング社製）に０．５ｍＩずつ分注し
、３７℃、５％炭酸ガス培養器内で４８時間培養した。

次いで目的濃度にあらかじめ希釈した検体１０μｍを加
えた、１０％ＬＰＤＳ（国際バイオ社）を含むＤＭＥＭ
ｏ、３ｍｌで培地交換し、さらに２４時間培養した。１
μ９のＤｉ　１−ＬＤＬ（フナコシ薬品）を添加して４
時間培養したのち培地を除去し、２ｍＭ　　ＳＤＳ溶液
０４ｍ１で細胞を溶解した。細胞溶解液の０．３ｍ１を
精製水で２倍に希釈して蛍光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ
　　ＲＦ−５０００）で蛍光強度を測定し、残るＯ、＋
ｍｌをＬｏｗｒｙ法にて蛋白定量に供した。取り込まれ
たＤｉｌ−ＬＤＬ量は蛍光強度から検量線にて算出し、
コントロールに対する単位蛋白量あたりの比活性を取り
込み促進活性として表した。

（結果） 結果は表２に示した。

表２ □

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＫＢｒ錠にて測定した本発明化合物の１日ス
ペクトルを示す。 第２図は重り００ホルム中、４００ＭＨｚで測定した本
発明化合物の’Ｉ−ｌ−１−Ｎスペクトルを示す。 第３図は重クロロホルム中、Ｉ　ＯＯＭＨｚで測定した
本発明化合物の”Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表されるベンズアンスラキノン化合物。