JPH10500424A

JPH10500424A - ペプチドニューロテンシンアンタゴニスト

Info

Publication number: JPH10500424A
Application number: JP7530094A
Authority: JP
Inventors: フランソワ−フレデリククレール，; マリ−クリステイーヌデユブルーク，; ジエラールエリンク，; ジヤンルブール，; ジヤン−ポールマルタン，
Original assignee: ローン−プーラン・ロレ・ソシエテ・アノニム
Priority date: 1994-05-20
Filing date: 1995-05-17
Publication date: 1998-01-13
Also published as: US5840682A; DE69509084D1; IL113767A0; ZA954026B; EP0759934B1; FR2720066A1; AU2619595A; FR2720066B1; GR3029950T3; ATE178905T1; IL113767A; DK0759934T3; ES2132671T3; EP0759934A1; DE69509084T2; WO1995032218A1

Abstract

(57)【要約】Ｒはヒドロキシ、アルコキシ、フェニルアルキルオキシ基または-NH-CH₂-COOH基を表し、Ｒ₁は水素原子、アダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基またはアミン官能基の保護基を表し、Ｒ₂はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₃はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₄はPro残基を表し、ｍ、ｎおよびｐ残基は同一または異なり、０または１に等しい数字を表し、Ｒ₁が水素原子であるとき、ｍ＋ｎ＋ｐの和は少なくとも１に等しく、Ｒ₅およびＲ₆は同一であり、そしてヒドロキシまたはメトキシ基を表し、Ｒ₇は水素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはニトロ基を表す式（Ｉ）の化合物、２つのアミノ酸残基の間の１つ以上のペプチド結合(CO-NH)が-CH₂-NH結合で置換されており、かつ／またはアミノ酸残基Ｒ₂およびＲ₃の間のペプチド結合(CO-NH)がCH=CH結合により置換されている式（Ｉ）の化合物の均等物。また本発明は、該化合物の塩、その製造法およびそれを含む薬剤に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチドニューロテンシンアンタゴニスト本発明は式：のアミノ酸誘導体、その製造、その塩およびそれを含む医薬品に関する。式（Ｉ）において、Ｒはヒドロキシル、アルキルオキシ、フェニルアルキルオキシまたは-NH-CH₂-CO OH基を表し、Ｒ₁は水素原子、アダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基またはアミン官能基の保護基を表し、Ｒ₂はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₃はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₄はPro残基を表し、ｍ、ｎおよびｐは同一または異なり、０または１に等しい数字を表し、Ｒ₁が水素原子である時、ｍ＋ｎ＋ｐの和は少なくとも１に等しいと考えられ、Ｒ₅およびＲ₆は同一であり、そしてヒドロキシルまたはメトキシ基を表し、Ｒ₇は水素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはニトロ基を表す。本発明は、２つのアミノ酸残基の間の１つ以上のペプチド結合(CO-NH)が-CH₂- NH結合で置換されており、かつ／またはＲ₂およびＲ₃アミノ酸残基の間のペプチド結合がCH=CH結合により置換されている式（Ｉ）の化合物の均等物も包含する。前述および以下の定義において、アルキルおよびアルキルオキシ基および部分は、直鎖または分枝鎖中に１−４個の炭素原子を含み、Argはアルギニンを意味し、Lysはリシンを意味し、Proはプロリンを意味し、Fmocは9-フルオレニルメトキシカルボニルを意味し、Pmcは2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルホニルを意味し、そしてBocはtert-ブトキシカルボニルを意味する。式（Ｉ）において、各アミノ酸残基はＬまたはＤ配置であることができる。好ましくはアミン官能基の保護基として、9-フルオレニルメトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、アセチル、ピバロイルおよびベンジルオキシカルボニル基が使用され、ベンジオキシカルボニル基のフェニルは場合によってはハロゲン、アルキル、アルキルオキシまたはニトロにより置換されてもよい。ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも１に等しい式（Ｉ）のペプチド化合物は、式：式中、Ｒは式（Ｉ）と同じ意味を有し、Ｒ'およびＲ"は同一であり、そして各々ヒドロキシルまたはメトキシ基を表し、そしてＲ'"は水素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはニトロ基を表す、の誘導体を式：式中、Ｒ₁はアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4- フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基またはアミン官能基の保護基を表し、そしてＲ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、ｎ、ｍおよびｐは式（Ｉ）と同じ意味を有し、ｍ＋ｎ＋ｐの和は少なくとも１に等しい、の誘導体と反応させ、場合によっては続いてＲ₁が水素原子である化合物を得るために、最終アミン官能基の脱保護および／または場合によってはＲがアルコキシまたはフェニルアルキルオキシ基を表す場合には、Ｒがヒドロシル基を表す化合物を得るためにカルボキシル官能基の脱保護により製造できる。式（II）および（III）の誘導体のカップリングは、アミノ誘導体およびペプチドのカップリングについて当業者に周知な任意の方法により行う。活性化状態の式（III）の誘導体を使用することが特に有利である。活性化状態として式（III）の誘導体とN-ヒドロキシスクシンイミド、N-ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは2-[1H-ベンゾトリアゾリ-1-イル]-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロメチルホスフェートとの反応生成物を挙げることができ、これらはジメチルホルムアミドまたはN-メチル-2-ピロリドンを初めとするアミドのような不溶性溶媒、クロロホルムまたは塩化メチレンのような塩化溶媒、テトラヒドロフランのようなエーテル、あるいはこれら溶媒の混合物中で、15 から60℃の間の温度で、４Åのモレキュラーシーブの存在中、またはジシクロヘキシルカルボジイミドのようなカップリング剤またはL.Kisfaludyら、Synthesis ,325-327(1983)により記載された方法に従い製造できるペンタフルオロフェニルエステルの存在下で製造できる。式（II）の生成物と式（III）の活性化生成物との縮合は、一般的に式（III）の誘導体の活性化状態の調製について上記に記載したものと同じ温度および反応混合条件下で行なわれるが、場合によってはピリジンまたはジイソプロピルエチルアミンのようなアミンの存在下で行ってもよい。これらの反応は、活性化生成物を単離することなく行える。この反応を樹脂上の固相で行うことが有利である。好適な樹脂は、4-ヒドロキシメチルフェノキシメチル/スチレン-1％ジビニルベンゼンコポリマー(HMP、アプライドバイオシステムズ:Applied BioSystems、Wang,J.Amer.Chem.Soc.,95,13 28,(1973))またはクロロトリチルクロライド/ポリスチレン-1％ジビニルベンゼンコポリマー(ノバビオケム:No vabiochem)樹脂である。場合によっては最終アミン官能基の脱保護は、T.W.Greene、有機合成の保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）、ジョンウィリー(John Wiley) 、ニューヨークにより記載されているような、アミンの脱保護に関する通常の技術に従い行うこともできる。例えば、ジメチルホルムアミドのような不活性溶媒またはジクロロメタンのような塩化溶媒中で、ピペリジンの存在中、約20−25℃ の温度で行うことが可能である。場合によってはカルボキシル官能基の脱保護は、カルボン酸エステル官能基をカルボキシル官能基に変化させることができる、当業者には周知の任意の方法により行うことができる。好ましくは、この脱保護は、ジオキサン、水のような不活性溶媒またはこれら溶媒の混合物中で、水酸化リチウムの存在中、約０℃の温度で行われる。Ｒ'"が水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"がヒドロキシル基を表す式（ II）の誘導体は、A9738アクチノミセテス(CBS 162.94)を発酵し、そして生産物を単離することにより製造できる。この発酵は、従来の発酵法に従い行われる。ペプトン、酵母エキス、肉エキス、グルコース、炭酸カルシウム、塩化ナトリウムおよび寒天を含んで成る培地が、培養基として好ましく使用される。発酵は好ましくは25から30℃の間の温度で行われる。このブロスを次に抽出し、そして水性相を限外濾過し、そして数回クロマトグラフィーを行う。Ｒがアルキルオキシまたはフェニルアルキルオキシ基を表す式（II）の誘導体は、Ｒがヒドロキシル基を表す対応する式（II）の化合物をエステル化することにより製造できる。このエステル化は好ましくは、アルコールＲ−ＯＨ（式中、Ｒはアルキルまたはフェニルアルキル基を表す）を、塩化チオニルの存在下でM.E.Jungら、Tetrah edron Letters,30(32),4211-4(1989)に記載された方法に従い行うか、あるいは硫酸または塩酸ガスの存在中で、0から25℃の間の温度で行うか、あるいはＲがベンジルオキシ基を表す時にはパラ-トルエンスルホン酸の存在中で、T.E.Walke rら、J.Org.Chem.,51,1175-9(1986)に記載された方法に従い行う。tert-ブチルエステルは、米国特許第3,496,219号明細書に記載の方法に従い、イソブテンとの反応により得ることができる。Ｒが-NH-CH₂-COOH基を表す式（II）の誘導体は、Ｒがヒドロキシル基を表す式（II）の対応する誘導体のグリシンと反応させることにより製造できる。この反応は、上記の式（III）の誘導体を式（II）の誘導体とカップリングさせるために記載した条件下で行われる。Ｒ'およびＲ"がメトキシ基を表す式（II）の誘導体は、Ｒ'およびＲ"がヒドロキシル基を表す式（II）の対応する化合物とトリメチルシリルジアゾメタンとを反応させることにより製造できる。Ｒが未保護ヒドロキシル基を表す時、Ｒ、Ｒ 'およびＲ"がメトキシ基を表す式（II）の誘導体が得られる。この反応は低級脂肪族アルコール（例えばメタノールまたはエタノール）中で、約20℃の温度で行われる。Ｒ'"がニトロ基を表す式（II）の誘導体は、Ｒ'"が水素原子を表す式（II）の対応する誘導体をニトロ化することにより製造できる。このニトロ化は任意の既知のニトロ化法により行われる。好ましくは硝酸を酢酸中で、約20℃で反応させる。Ｒ'"が塩素原子を表す式（II）の誘導体は、Ｒ'"が水素原子を表す式（II）の対応する誘導体を塩素化することにより製造できる。この反応は任意の既知の塩素化法により行われる。好ましくは、M.Lemaireら、Janssen Chimica Acta,5(1),3-8(1987)に記載の方法に従い、2,3,4,5,6,6-ヘキサクロロ-2,4-シクロヘキサジエン-1-オンを、ジメチルホルムアミド／四塩化炭素混合物中で、約20℃で反応させる。Ｒ'"が臭素原子を表す式（II）の誘導体は、Ｒ'"が水素原子を表す式（II）の対応する誘導体を臭素化することにより製造できる。この反応は任意の既知の臭素化法により行われる。好ましくは臭素を酢酸ナトリウムの存在中で、酢酸中にて約20℃で反応させる。Ｒ'"がヨウ素原子を表す式（II）の誘導体は、Ｒ'"が水素原子を表す式（II）の対応する誘導体をヨウ素化することにより製造できる。この反応は任意の既知のヨウ素化法により行われる。好ましくはアルカリ金属ヨウ化物（例えばヨウ化ナトリウムまたはヨウ化カリウム）を、1,2,4,6-テトラクロロ-3α,6α-ジフェニルグリコウリルのような試薬の存在下で、メタノールのような低級アルコール中で、約20℃で反応させる。式（III）の誘導体は市販されているか、あるいはS.Doulutら、Peptide Resea rch,5(1),30-38(1992);J.Couderら、Int.J.Peptide Res.,41,181-184(1993);V.K .Skuklaら、Can.J.Physiol.Pharmacol.,71,211-216(1993);M.H.Michaelら、J.Ch em.Soc.Perkin I,307-314(1982);T.E.Christosら、Bioorganic Medicinal Chemi stry Letters,3(6),1035-1040(1993)、国際公開93/00359号および同91/02750号明細書、ならびに実施例に記載されている方法を適用または適合させることにより製造できる。ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも１に等しく、そしてＲ₁が水素原子またはアミン官能基の保護基を表す式（Ｉ）の化合物は、対応する式（II）の誘導体を、連続的に(R₄)p-OHおよび／または(R₃)n-OHおよび／または(R₂)m-OH誘導体（式中、Ｒ₄ 、Ｒ₃およびＲ₂は式（Ｉ）と同じ意味を有し、そのアミノ残基は好ましくは保護されている）と反応させ、場合によっては続いて脱保護することによっても製造できる。この反応は、例えば式（II）および式（III）の誘導体にカップリングについて上記に記載したような、ペプチドの化学に関する文献に記載されている条件下で行われる。ｍ＋ｎ＋ｐの和が０に等しく、そしてＲ₁がアミン官能基の保護基を表す式（Ｉ）の化合物は、分子の残りの部分を修飾しないアミン官能基の保護について、当業者には周知な任意の方法により製造できる。特にＲ₁が9-フルオレニルメトキシカルボニル基を表す時、式（II）の誘導体を9-フルオレニルメチル N-スクシニルカーボネートと反応させる。この反応は一般的に、ジオキサンのような不活性溶媒中で、炭酸ナトリウム水溶液の存在中で、約20℃で行われる。Ｒ₁がtert-ブトキシカルボニル、アセチル、ピバロイルまたはフェニルが場合によってはハロゲン、アルキル、アルキルオキシまたはニトロにより置換されてもよいベンジルオキシカルボニル基を表す時、式（II）の誘導体を誘導体R₁-Cl （式中、Ｒ₁はtert-ブトキシカルボニル、アセチル、ピバロイルまたはフェニルが場合によってはハロゲン、アルキル、アルキルオキシまたはニトロにより置換されてもよいベンジルオキシカルボニル基を表す）と反応させる。この反応は好ましくはジメチルホルムアミドのような不活性溶媒中で、トリアルキルアミン（例えばジイソプロピルエチルアミン）のような塩基の存在中で、約20℃で行う。ｍ＋ｎ＋ｐの和が０に等しく、そしてＲ₁がアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルまたは2-ピロリジニルカルボニル基を表す式（Ｉ）の化合物は、Ｒ₁が水素原子を表す式（II）の化合物を、Ｒ₁がアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルまたは2-ピロリジンカルボニル基を表すクロライドR₁-Clと反応させることによっても製造できる。この反応は、好ましくはジメチルホルムアミドのような不活性溶媒中で、トリアルキルアミン（例えばジイソプロピルエチルアミン）のような塩基の存在中で、約20℃で行う。式（Ｉ）の化合物は、例えばクロマトグラフィーまたは抽出のような通常の周知な方法により精製できる。当業者は、上記の方法を実施するために、副反応を避けるためにアミノおよびカルボキシル官能基の保護基を導入し、そして次に脱保護を行うことが必要であると考えるだろう。そのような保護基はT.W.Greene、有機合成の保護基（Protec tive Groups in Organic Synthesis）、ジョンウィリー、ニューヨークおよび実施例により記載されている。Ｒがヒドロキシル基を表す式（Ｉ）の化合物は、それ自体は知られている方法に従い、場合によっては金属塩または窒素塩基との付加塩に転換することができる。これらの塩は溶媒中で式（Ｉ）の化合物と金属塩基（例えばアルカリ金属またはアルカリ−土類金属）、アンモニア、アミンまたは有機酸との塩との反応により得られる。生成した塩は常法により分離される。Ｒ₁が水素原子を表す式（Ｉ）の化合物は、場合によっては、アルコール、ケトン、エーテルまたは塩化溶媒のような有機溶媒中で、無機または有機酸と反応させることにより、無機または有機酸との付加塩に転換することができる。これらの塩も本発明の一部を構成する。医薬的に許容できる塩の例として、無機または有機酸との付加塩（アセテート、トリフルオロアセテート、プロピオネート、スクシネート、ベンゾエート、フマレート、マレート、オキサレート、メタンスルホネート、イセチオネート、テオフィリンアセテート、サリチレート、メチレンビス-β-オキシナフトエート、ヒドロクロライド、サルフェート、ニトレートおよびホスフェート）、アルカリ金属（ナトリウム、カリウムまたはリチウム）あるいはアルカリ−土類金属（カルシウムまたはマグネシウム）との塩、アンモニウム塩または窒素塩基（エタノールアミン、トリメチルアミン、メチルアミン、ピペリジン、ベンジルアミン、 N-ベンジル-α-フェネチルアミン、クロリン、アルギニン、ロイシン、リシンまたはN-メチルグルカミン）との塩を挙げることができる。式（Ｉ）の化合物は、有利な薬学的特性を有する。これらの化合物はニューロテンシンのアンタゴニストであり、したがってニューロテンシンが関連する疾患を処置または予防するために有用である。したがってこれらの化合物は、精神病、不安疾患、鬱病、認識疾患、神経変性、パニック発作、パーキンソン病、アルツハイマー疾患、精神分裂病、自閉症、晩発性ジスキネルジー、過敏性腸症候群、急性膵炎、潰瘍、腸の運動疾患、ニューロテンシンに感受性の特別な腫瘍、慢性の処置およびアルコールまたは薬物濫用から引き離すこと、アレルギーおよび炎症症状、ニューロテンシンが関わる心臓血管および呼吸疾患および喘息を処置または予防するために使用できる。ニューロテンシンについて式（Ｉ）の化合物の親和性は、この化合物が、トリチウム化ニューロテンシンの粗モルモット大脳皮質膜調製物中に存在するそのレセプターへの結合を置き換える能力により測定した。この試験は、M.Goedertら、Brain Research、304,71-81(1984)の記載に基づく：オスのDunkin-Hartleyモルモット(200-300g)を、断頭により屠殺し、そして素早く脳を摘出する。以下のすべての工程は4℃で行う。大脳皮質を裁断し、重量を計り、そして１グラムの組織あたり５mlのTris-HCl緩衝液(50mM、pH7.4)中で、ポリトロン（15秒間に６フォース）でホモジネーションを行う。均質物を48,000gで15分間遠心し、そして得られたペレットを同緩衝液で2回洗浄する。最後にペレットを出発組織１グラムあたり3mlの緩衝液中でホモジネーションを行い、そしてアリコート（1mlあたり約20mgのタンパク質）で-80℃にて使用するまで維持した。タンパク質含量は、Bradford,Anal.Biochem.,72,248-254(1976)の方法に従い測定する。結合試験は、Tris-HCl 50mM pH7.4緩衝液(0.4％のウシ血清アルブミンおよび0.1mMのバシトラシンを、mlあたり0.15mgのタンパク質および0.8nMの[³H]ニューロテンシンの存在下に含む)中で、15分間、25℃にて行う。非−特異的結合は、1μMのニューロテンシン1−13の存在下で測定する。反応を濾過により中止し、そしてフィルター上に保持された放射活性をシンチレーションカウントにより測定する。特異的結合に関する50％の阻害濃度を決定するために、生成物を一連の濃度範囲にわたって試験する。この試験で式（Ｉ）の化合物は、15μM未満のＩＣ₅₀を有する。式（Ｉ）の化合物は低い毒性を有し、医薬品中の有効成分としての使用に適合する。以下の実施例は本発明を説明する。 N.M.R.ペクトルについては、命名法ではＭとして知られいるメチル基を除いて、プロテインデータバンクで使用しているものである。式（Ｉ）および（II）の化合物のマクロ環式残基のアミノ酸残基は、X-TYR1(N末端アミノ酸)、X-ILE2、X -TYR3およびX-TYR4(C末端アミノ酸)として知られている。この鎖のアミノ酸残基は、アミノ酸の名前およびその鎖中での位置から、Ｒとして知られている。 A9738アクチノミセテス株は、ブタペスト条約の条件の下、1994年3月22日にバールン（オランダ国）のセントラルビュローフォーアシュミネルカルチュレン(CBS)(Centraalbureau voor Schimmel culturen)に寄託し、そしてCBS162.9 4の番号で登録された。実施例１ 61mgの式（II）の誘導体（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）、64mgのFmoc-Arg-Pro-OHおよび13mgのN-ヒドロキシベンゾトリアゾールを、１mlのジメチルホルムアミド（４Åのモレキュラーシーブを含む）に溶解する。15時間後、10μlのピリジンおよび21mgのジシクロヘキシルカルボジイミドを混合物に加え、72時間、40℃で反応させておく。15ml の水を次に加え、そしてこのようにして生成した沈殿を焼結ガラスNo.４上で回収する。この固体を10mlのメタノール中で分解し、そして次に濾過する。濾液を15mlに希釈し、そして水(85ml)を加える。溶液をオクタデシル−グラフト化シリカカラム(250×10mm)の高性能液体クロマトグラフィーに、3.5ml/分の流速で供する。溶出は0.07％トリフルオロ酢酸を含む水から、0.07％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル／水(容量で7 0/30)への直線的勾配を使用して行う。１.7mlの画分を回収する。所望の生成物を含むこれらの画分を合わせ、そして減圧下で蒸発させる。0.6mgの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)m-(R₃)n-(R₄)pはFmoc-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆ はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、ベージュ色の粉末状態で単離する［パーキンエルマー：Perkin Elmer API IIIでのマススペクトル、イオンスプレーで：Ｍ／ｚ１０９２ＭＨ⁺、１１１４ＭＮａ⁺；Ｎ.Ｍ. Ｒ.スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，δ ｐｐｍで）：Ｒ−ＦＭＯＣｌ：ＨＡ１、ＨＡ２４.２２、ＨＢ４.３０、芳香族プロトン７.７０、７.３１、７.４０、７.８９；Ｒ−ＡＲＧ２：ＮＨ７.９０、ＨＡ４.２０、ＨＢ１、ＨＢ２１.４５、１.２２、ＨＧ１、ＨＧ２１.４５、ＨＤ１、ＨＤ２２.９７、広いグアニジン；Ｒ−ＰＲＯ３：ＨＡ４.４２、ＨＢ１、ＨＢ２１.８３、１.８８、ＨＧ１、ＨＧ２１.８８、１.８８の、ＨＤ１、ＨＤ２３.６０、３.４０；Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ６.９８、ＨＡ４.６９、ＨＢ１、ＨＢ２２.９２、ＨＤ１６.９０、ＨＤ２、６.７０、ＨＥ１６.６８；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.２７、ＨＡ４.０５、ＨＢ１.６０、ＭＧ１０.８２、ＨＧ２１、ＨＧ２２、１.１５、１.５５、ＭＤ０.８３；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.６５、ＨＡ３.５８、ＨＢ１、ＨＢ２２.８８、２.４０、ＨＤ１６.５７、ＨＤ２５.４７；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.２７、ＨＡ４.１８、ＨＢ１、ＨＢ２２.４８、２.５２、ＨＤ１７.１６、ＨＤ２７.３１、ＨＥ１７.５１、ＨＥ２６.７８］。ペプチドFmoc-Arg-Pro-OHは固相で、N-メチル-2-ピロリドンを溶媒として用いて、製造元から提供された“標準Fmoc”サイクルを使用して、アプライドバイオシステムズ 431Aデバイスを使用して、Fmoc合成法を使用することにより合成できる。α-アミン官能基の脱保護は、N-メチル-2-ピロリドン中の20％ピペリジン溶液を用いて、20分間、各合成段階で行う。ペプチドを0.25mmolの4-ヒドロキシメチルフェノキシメチル/スチレン−１％ジビニルベンゼンコポリマー(HMP、アプライドバイオシステムズ)Wang樹脂(Wang、J.Amer.Chem.Soc.,95,1328(1973)) で合成する。Fmoc-Pro-OHの対称無水物は、0.5mmolのジシクロヘキシルカルボジイミド(1.3mlのN-メチル-2-ピロリドンおよび1.8mlのジクロロメタン中)を用いて、20分間反応させることにより生成する(１mmol)。13分間反応させた後、0.36 mlの0.1M ジメチルアミノピリジン(ジメチルホルムアミド中)を加える。生成したジシクロヘキシルウレアを濾過により除去した後、対称的な無水物を30分間、樹脂と反応させる。プロリンのアミン官能基は20分間、N-メチル-2-ピロリドンの20％ピペリジンの溶液との反応により脱保護される。Fmoc-Arg(Pmc)-OHのN-ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステルは、1mmolのFmoc-Arg(Pmc)-OHを4.1mlのN- メチル-2-ピロリドン中(1mmolのN-ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび1mmolのジシクロヘキシルカルボジイミドの存在中)で、20分間反応させることにより生成する。生成したジシクロヘキシルウレアを除去した後、エステルを30分間、樹脂と反応させる。このようにして、上にFmoc-Arg(P mc)-Pro-基がグラフト化された樹脂を得る。ペプチドを１時間30分間、100mgのペプチジル樹脂あたり10mlのトリフルオロ酢酸、0.75gのフェノール、0.25mlのエタンジチオール、0.5mlのチオアニソールおよび0.5mlの水で処理することにより樹脂から開裂する。濾過により樹脂を除去した後、液相をロータリーエバポレーターで30分間、減圧下(4kPa)で濃縮する。次にtert-ブチル-メチル-エーテル/ 石油エーテル混合物(容量で4/1)を加えてペプチドを沈殿させ、そして遠心により回収する。ペプチドを最少容量のトリフルオロ酢酸に溶解し、tert-ブチル-メチル-エーテルおよび石油エーテル混合物(容量で4/1)を加えて沈殿させ、そして遠心により回収し、この操作を２回繰り返す。ペプチドを次に30mlのtert-ブチル-メチル-エーテルおよび石油エーテル混合物(容量で4/1)で洗浄し、遠心により回収し、そして吸引(4kPa)で乾燥する。ペプチドを以下の合成工程に使用する。式（II）の化合物（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）は、以下のように得られる：5g/リットルのペプトン、5 g/リットルの酵母エキス、15g/リットルのグルコース、5g/リットルの肉エキス、3g/リットルの炭酸カルシウム、5g/リットルの塩化ナトリウムおよび1g/リットルの寒天を含む250mlの培地に、２リットルのエーレンマイヤーフラスコ中で、胞子懸濁液状態のアクチノミセテスA9738(CBS 162.94)の斜面ゲロースを播種する。28℃でサーモスタット制御撹拌器中にて140r/分で72時間撹拌した後、全培養物を滅菌条件下で、60リットルの同培地を満たした初期発酵槽に移す。発酵槽を300r/分で撹拌し、5m³/時で通気し、そして28℃で44時間、サーモスタットで制御する。全培養物を次に滅菌条件下で、122℃で40分間滅菌した450リットル培地(蒸留物 5g/リットル、ビーンズ 40g/リットル、グルコース 5g/リットル、ダイズ油 10g/リットル、塩化ナトリウム 5g/リットルおよび塩化コバルト 20mg/リットル)を含む生産発酵槽に移し、そして250r/分の撹拌および15m³/時の速度で通気しながら28℃に94時間維持する。ブロス（487リットル、pH7.8）を次にCECAで販売している5％のclarcelで撹拌し、そして濾液から菌糸を分離するために濾過する。濾液（300リットル）を２回、100リットルの酢酸エチルで抽出し、そして水相（250リットル）を、20kDの排除限界の限外濾過膜を通して限界濾過した後、40リットルの保持容量を得る。限外濾過液（21 0リットル）を、ロームアンドハス(Rhom and Hass)から販売されている30リットルのDoulite S861を含むステンレス鋼カラム(20×60cm)に、30リットル/時の流速で流す。カラムを80リットルの水ですすぎ、そして次に段階的なメタノール／水の勾配で、30リットル/時の流速および10リットルの画分でクロマトグラフィーを行う（画分１および２については容量で50/50、画分３−８については容量で60/40、画分９および10については容量で80/20、そして画分11および12については100％メタノール）。画分３−６を合わせ、メタノールを減圧下(3.4kPa) で濃縮し、そして次に水相を凍結乾燥する。12.4gの黄色い粉末をこのように得る。この凍結乾燥物を４℃に冷却した600mlのメタノール中で分解し、そして不溶性物質を分離し、そして溶液を減圧下(3.4KPa)で濃縮して４gの乾燥抽出物を得る。この抽出物を110mlのメタノール／水溶液(容量で1/10)に溶解し、そしてアミコン(Amicon)から販売されているMatrex C18-グラフト化シリカ(20μ、60Å )を充填したステンレス鋼カラム(5×60cm)で、Gilson系を使用してクロマトグラフィーを行う。50mlの画分をファルマシア(Pharmacia)フラクションコレクターを用い、50ml/分の流速で回収する。使用する勾配のプロフィールは、以下の通りである；30分間にわたって、 10/90容量のメタノール/水から40/60容量のメタノール/水の直線的勾配、40/60 容量のメタノール／水の一定段階で30分間、そして次に40分間にわたって40/60 容量のメタノール/水から100％メタノールへの直線勾配。画分２１−２９を合わせ、そして減圧下(3.4KPa)で濃縮して10ml容量とする。この溶液をMacherey Nag el SC6 ポリアミドを充填したガラスカラム(5×30cm)の頂点に添加する。溶出は水で行う。様々な容量(20−70ml)の50画分を回収する。画分１−12(約1100ml)を捨てた後、画分13-25(600ml)を合わせ、そして250mlのDEAE Biogel A(バイオラッド：Bio-Rad）を含む直径5cmのガラスカラムに添加する。溶出は水で行う。最初に900mlを流出し、そしてその流出液を捨て、そして次に続いて所望の生成物を２リットルの水で溶出する。この２リットルを、アナリティケムインターナショナル(Analytichem International)から販売されている40mlの40μ Bondesil C18-グラフト化シリカを含む75ml容量(内径2.5cm)のアナリティケムインターナショナルセルに通す。流出液を捨て、そして生成物をメタノールで溶出する。メタノール性溶液を減圧下で濃縮して60mgの式（II）（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）の純粋な化合物を、わずかに黄色い粉末状で得る：［ＩＲスペクトル：特性バント(cm^-1)３３９５で（フェノールＯＨ）、３３００（ＮＨ）、２９７０（ＣＨ３）、２９３５（ＣＨ２）、２８７５（ＣＨ３，ＣＨ２）、３１２５〜２１２５（酸ＯＨ）、１６７０（酸およびアミドＣ＝０）、１５８５〜１５００（ベンゼン環）、１２３５（芳香族エーテルおよびフェノールＣＯ）、８６５および８３５（芳香族ＣＨ；マススペクトル（Finengan ＴＳＱ４６Ｄ／ＣＩ，試薬ガスとしてアンモニアを用いて）Ｍ／ｚ６３４ＭＮＨ₄ ⁺、６１７ＭＨ⁺；Ｎ.Ｍ.Ｒ.スペクトル（４００ＭＨｚ，ｄ₆−ＤＭＳＯ，δ ｐｐｍで）：Ｘ−ＴＹＲ１：広いＮＨ₂、ＨＡ４.１４、ＨＢ１、ＨＢ２３.０５、３.２０、ＨＤ１７.１０、ＨＤ２６.８０、ＨＥ１６. ８１；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.３８、ＨＡ４.２０、ＨＢ１.５８、ＭＧ１０.８８、ＨＧ２１、ＨＧ２２、１.２０、１.５１、ＭＤ０.８４；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.４８、ＨＡ３.６３、ＨＢ１、ＨＢ２２.４２、２.８８、ＨＤ１６.６０、ＨＤ２５.５９；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.２２、ＨＡ４.２６、ＨＢ１、ＨＢ２３.０２、３.４７、ＨＤ１７.２４、ＨＤ２７.２６、ＨＥ１７.４６、ＨＥ２６.７８］。実施例２ 60mgのFmoc-Arg-Arg-Pro-OH、16mgのN-ヒドロキシスクシンイミドおよび20mg のジシクロヘキシルカルボジイミド溶液(1.5mlのジメチルホルムアミド中)を、1 5時間、50℃に加熱する。50mgの式（II）の誘導体（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）および１滴のピリジンを次に混合物に加え、そして混合物を72時間、50℃で反応させておく。反応混合物をジクロロメタンで平衡化したシリカカラム(2.6×6cm)の頂点に添加する。ジクロロメタン(45ml)で洗浄した後、カラムに酢酸エチル／酢酸／水混合物(容量で6 0/12/10)を通す。4.5mlの画分を集める。所望の生成物を含む画分を合わせ、そして減圧下(3.4kPa)で蒸発乾固させて10mgのベーシュ色の粉末を得る。この粉末をオクタデシル-グラフト化シリカカラム(250×10mm)を用いて高性能液体クロマトグラフィーに3.5ml/分の流速で供する。溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸を含む水から、0.07％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル／水(容量で70/30)への直線的勾配を使用して行う。1.7mlの画分を回収する。所望の生成物を含むこれらの画分を合わせ、そして減圧下で蒸発させて５mgの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはFmoc-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅ およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、わずかにベージュ色の粉末状態で得る［パーキンエルマー API IIIでのマススペクトル、イオンスプレーで：Ｍ／ｚ：１２４８ＭＨ⁺、６２４.８（Ｍ＋２Ｈ）⁺⁺；Ｎ .Ｍ.Ｒ.スペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，δ ｐｐｍで）：Ｒ−Fmocl：ＨＡ１、ＨＡ２４.２８、４.３２、ＨＢ４.３２、芳香族プロトン７.６８、７ .３２、７.４２、７.８８；Ｒ−ＡＲＧ２：ＮＨ７.３０、ＨＡ４.０８、ＨＢ１、ＨＢ２１.６５、１.５０、ＨＧ１、ＨＧ２１.５０、ＨＤ１、ＨＤ２３. １５、グアニジン７.３５、６.９０；Ｒ−ＡＲＧ３：ＮＨ７.９８、ＨＡ４.４８、ＨＢ１、ＨＢ２１.５０、ＭＧ１、ＨＧ２１.５０、ＨＤ１、ＨＤ２３. １０、グアニジン７.２２、６.９０；Ｒ−ＰＲＯ４：ＨＡ４.３８、ＨＢ１、ＨＢ２１.８５、１.９５、ＨＧ１、ＨＧ２１.８５、１.９５、ＨＤ１、ＨＤ２３.４５、３.６１；Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ６.９０、ＨＡ４.９２、ＨＢ１、ＨＢ２２.９８、ＨＤ１６.９０、ＨＤ２６.９０、ＨＥ１６.８０；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.１２、ＨＡ４.１３、ＨＢ１.６３、ＭＧ１０.８５、ＨＧ２１、ＨＧ２２１.２２、１.５１、ＭＤ０.８３；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.４８、ＨＡ３.６２、ＨＢ１、ＨＢ２２.６５、２.７０、ＨＤ１６.５８、ＨＤ２５. ５２；Ｘ−ＴＹＲ４−ＮＨ４.２２、ＨＡ４.３２、ＨＢ１、ＨＢ２３.２０、３.３５、ＨＤ１７.２８、ＨＤ２７.３０、ＨＥ１７.５１、ＨＥ２６.７８］。ペプチドFmoc-Arg-Arg-Pro-OHの合成は、実施例１のペプチドFmoc-Arg-Pro-OH について記載されたように行う。実施例１に記載したように基Fmoc-Arg(Pmc)-Pr o-がすでに上にグラフト化された樹脂は、対応するジケトピペラジン誘導体の形成を制限するために、N-メチル-2-ピロリドン中の20％ピペリジンを用いて、そのFmoc保護基からわずか３分で脱保護される。この樹脂を大量のN-メチル-2-ピロリドンで洗浄する。平行して、Fmoc-Arg(Pmc)-OHのN-ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステルが、2.1mlのN-メチル-2-ピロリドン、1mlの1M N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(N-メチル-2-ピロリドン中)、および1mlの1M ジシクロヘキシルカルボジイミド(N-メチル-2-ピロリドン中)中で、１mmolのFmoc-Arg(Pmc)-OHの2 0分間の反応により生成する。生成したジシクロヘキシルウレアを除去した後、このエステルを30分間、グラフト化樹脂と反応させる。基Fmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pm c)-Pro-がこのように上にグラフト化された樹脂を得る。ペプチドFmoc-Arg-Arg- Pro-OHを樹脂から開裂し、そして実施例１でFmoc-Arg-Pro-OHについて記載したように、同じ様式で精製する。実施例３ 7mgの実施例２の生成物を180μlのジメチルホルムアミドに溶解し、そして20 μlのピペリジンを加える。溶液は直ぐに曇り、そして沈殿が生じる。沈殿を遠心により回収し、そして200μlのアセトニトリルで２回洗浄する。1mgのこの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはH-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅ およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、ピペリジン塩の状態でこのように得る[パーキンエルマー API IIIでのマススペクトル、イオンスプレーで:M/z 1026 MH⁺]。実施例４ 50.3mgのペンタフルオロフェニルN-Fmoc-L-プロリネートを、62mgの式（II）の化合物（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）および52.5μlのジイソプロピルエチルアミン溶液(3mlのジメチルホルムアミド中)に加え、そして18時間、約25℃で撹拌を行う。次に25mlの酢酸エチルおよび25mlの水で希釈し、そして次に1N 塩酸水溶液で酸性化する。静置により分離した後、有機相を25mlの水で3回洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥する。濾液を濾液、洗浄および蒸発した後(2kPa)、80mgの固体を得る。この固体を、直径2.5cmおよび長さ31cmのLiChroprep ジオールカラム(メルク)で高性能液体クロマトグラフィーを行い、溶出は１分あたり10mlの流速で、初めの20 0mlはジクロロメタン／エタノール混合物(容量で95/5)、そして次に200mlのジクロロメタン／エタノール混合物(容量で93/7)で行う。予想される化合物を含む画分を合わせ、そして蒸発乾固(2kPa)して、25mgの式（Ｉ）の化合物(式中、R₁-(R₂ )_m-(R₃)n-(R₄)_pはFmoc-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す)を、白色固体の状態で得る［マススペクトル（Au tospec VG Fisons、LS1MSで）：Ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）⁺、Ｍ／ｚ＝７１４( Ｍ−Ｆmoc＋２Ｈ)⁺；赤外スペクトル（ＫＢｒ）：３３９０、２９６５、２９３０、２８７５、３１００〜２２５０、１６８０、１５８５、１４５０、１５０５、８３５、７６０および７４０ｃｍ^-1；ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，Temp.＝３５０Ｋ，δ ｐｐｍで）：Ｒ−Fmocl: ＨＡ１、ＨＡ２４.２０、４.３２、ＨＢ４.３２、芳香族プロトン７.８３、７ .２８、７.４８、７.８８：Ｒ−ＰＲＯ２：ＨＡ４.２２、ＨＢ１、ＨＢ２１. ７４、２.０８、ＨＧ１、ＨＧ２１.７８、１.９５、ＨＤ１、ＨＤ２３.２８、３.３５；Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ７.６２、ＨＡ４.７１、ＨＢ１、ＨＢ２２.９１、３.０６、ＨＤ１６.８９、ＨＤ２、６.８４、ＨＥ１６.６８；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ７.９５、ＨＡ４.１５、ＨＢ１.６２、ＭＧ１０.８２、ＨＧ２１、ＨＧ２２、１.１２、１.４７、ＭＤ０.７９；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.２４、ＨＡ３.６２、ＨＢ１、ＨＢ２２.４６、２.７０.．ＨＤ１６.６２、ＨＤ２５. ５２；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.２２、ＨＡ４.２６、ＨＢ１、ＨＢ２３.１０、３.３８、ＨＤ１７.１８、ＨＤ２７.２５、ＨＥ１７.４５、ＨＥ２６. ７８］。実施例５ 9mgの実施例４の化合物を0.5mlのジクロロメタン／ピペリジン混合物(容量で9 0/10)に溶解する。約25℃で96時間後、溶媒を減圧下(2kPa)で蒸発させる。残渣を0.5mlの水に溶解し、そして次に1mlのジエチルエーテルで2回洗浄する。水相を酢酸で約pH4にする。得られた懸濁液を、バルオ-ラッド 100Åオクタデシル− グラフト化シリカを含む、長さ25cm、そして直径1cmの調製用の高性能液体クロマトグラフィーカラムでクロマトグラフィーを１分あたり６ml流速で行う。溶出は33分間にわたって、水／トリフルオロ酢酸(容量で100/0.07)から、水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸(容量で63/37/0.07)への直線的勾配を使用して行う。3mlの画分を集める。所望の生成物を含む画分を合わせ、-80℃に凍結し、そして凍結乾燥して(1Pa)、0.6mgの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-( R₄)_pはH-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、白色固体状で得る［マススヘペクトル(Finnegan TSQ46、試薬ガスとしてアンモニアガスを用いた化学イオン化脱着で）：Ｍ／ｚ＝７１４（ＭＨ⁺）；ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，Temp.＝３０３Ｋ，δ ｐｐｍで）：Ｒ−ＰＲＯ１：ＨＡ４.１０、ＨＢ１、ＨＢ２１.７７、２ .１２、ＨＧ１、ＨＧ２１.７３、ＨＤ１、ＨＤ２３.２０；Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ８.１３、ＨＡ４.７８、ＨＢ１、ＨＢ２２.９４、３.０３、ＨＤ１６. ７８、ＨＤ２、６.７８、ＨＥ１６.７１；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.３１、ＨＡ４.１０、ＨＢ１.６２、ＭＧ１０.８２、ＨＧ２１、ＨＧ２２、１.１２、１. ４７、ＭＤ０.７９；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.６６、ＨＡ３.５９、ＨＢ１、ＨＢ２２.４２、２.６９、ＨＤ１６.５８、ＨＤ２５.４９；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.１４、ＨＡ４.３１、ＨＢ１、ＨＢ２３.１０、３.３８、ＨＤ１７.１８、ＨＤ２７.３２、ＨＥ１７.５２、ＨＥ２６.８０］。実施例６ 20mgの式（II）の化合物（式中、Ｒはメトキシ基を表し、Ｒ"は水素原子を表し、そしてＲ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）を、23.2mgの(Boc)₂Lys-Ψ[C H₂NH]-Lys(Boc)-Pro-OHトリフルオロアセテート、11.4mgの2-[1H-ベンゾトリアゾリ-1-イル]-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロメチルホスフェートおよび16μlのジイソプロピルエチルアミン混合物(3mlのジメチルホルムアミド中)に、約20℃の温度で加える。混合物を6時間30分この温度で撹拌する。溶媒を減圧下(15Pa) で蒸発させる。残渣を５mlのジクロロエタンに溶解し、そして1mlの水で2回、1m lの0.1M モノリン酸ナトリウム溶液で2回、1mlの0.25M 炭酸水素ナトリウム溶液で2回、そして１mlの水で２回洗浄する。有機相を減圧下(5.3kPa)で濃縮する。残渣を2mlのトリフルオロ酢酸水溶液(容量で95/5)に、約20℃で1時間30分間溶解する。約0.2ml容量に濃縮した後(5.3kPa)、生成物をメチル-tert-ブチルエーテルを加えて沈殿させ、そして遠心により回収する。2.2mgの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはH-Lys-Ψ[CH₂NH]-Lys-Pro-を表し、Ｒはメトキシ基を表し、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、このように淡い黄色で得る［サイエックス:Sciex API IIIでのマススヘペクトル、イオンスプレーで：M/z=970(MH⁺)]。Ｒがメトキシ基を表し、Ｒ'"が水素原子を表し、そしてＲ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す式（II）の化合物は、以下のように得ることができる：200mgの式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表し、そしてＲ '"は水素原子を表す）を、20mlのメタノールに溶解し、そして0.8mlの濃硫酸を加える。溶液を18時間、約20℃で撹拌する。次に10gのDuolite S 861(ロームアンドハス)を混合物に加え、そして混合物を200mlの水で希釈し、そして約20℃で 30分間撹拌する。樹脂を濾過し、そして焼結ガラス上で60mlの水で洗浄する。化合物を次に100ml のメタノールで溶出することにより抽出する。減圧下（3.4kPa）で蒸発させた後、残渣を170mlのカルボキシメチルートリアクリル樹脂(セパラコル:Sepracor)により精製し、溶出は水で行い、そして10mlの画分を回収する。所望の化合物を含む画分を合わせ、そして蒸発乾固して40mgの式（II）の化合物（式中、Ｒはメトキシ基を表し、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）を、わずかに黄色い粉末として得る［サイエックスAPI IIIでのイオンスプレーマススペクトル：M/z ＝631(MH⁺);赤外スペクトル(FTIR)、メタノールで):３３９０、３２７５、２９６０、２８７５、１７４０、１６６０、１５８５＋１５００、１５１０、１２１５、８６５＋８３５ｃｍ^-1；ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，Te mp.＝３０３Ｋ，δ ｐｐｍで）：Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ２７.９２、ＨＡ４.７８、ＨＢ１、ＨＢ２３.０１、３.１７、ＨＤ１７.０９、ＨＤ２、６.７４、ＨＥ１６.８２；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.６３、ＨＡ４.１９、ＨＢ１.６２、ＭＧ１０.８２、ＨＧ２１、ＨＧ２２、１.１８、１.４８、ＭＤ０.７９；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.７３、ＨＡ３.５８、ＨＢ１、ＨＢ２２.４２、２.６２、ＨＤ１６.５１、ＨＤ２５.５０；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.２２、ＨＡ４.４５、ＨＢ１、ＨＢ２３.２１、３.３９、ＨＤ１７.１２、ＨＤ２７.３６、ＨＥ１７.５８、ＨＥ２６.８２、ＯＣＨ₃３.８１］。化合物(Boc)₂Lys-Ψ[CH₂NH]-Lys(Boc)-Pro-OHは、S.Doulutら、Peptide Resea rch,5(1),30-38(1992)の方法に従い、(Boc)₂-LysinalをH-Lys(Boc)-Pro-OBgと反応させ、そして次に最終エステル(OBgエステル＝N-ベンズヒドリルグリコールアミドエステル:Tetrahedron,44,5101-5108(1988))をケン化することにより製造できる。実施例７実施例６に記載した37mgの化合物を、0.6mlのジオキサン、0.3mlの水および0. 3mlの1M 水酸化リチウム溶液に約0℃で溶解する。約0℃で70分間撹拌した後、10 mlの酢酸水溶液(容量で90/10)で希釈を行い、そして粗生成物を、バイオ-ラッドRSL 100Åオクタデシル−グラフト化シリカを含む、長さ30cm、そして直径１cmの調製用高性能液体クロマトグラフィーカラムに注入する。溶出は30分間にわたって、水／トリフルオロ酢酸(容量で100/0.07)から、水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸(容量で65/35/0.07)への直線的勾配を使用して行う。所望の生成物を含む画分を合わせ、-80℃に凍結し、そして凍結乾燥して(1Pa)、4.4mgの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはH-Lys- Ψ[CH₂NH]-Lys-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、白色粉末状で得る［サイエックスAPI IIIでのマススヘペクトル、イオンスプレーで：M/z=956(MH⁺)]。実施例８固相合成は、溶血チューブ用のローテーターを除き、シャンダン社(company S handon)（ライフサイエンスインターナショナルグループ）からの装置を使用して行う。樹脂は固相抽出用に、テフロンフィルターを付けた3mlの高密度ポリエチレン(HDPE)シリンジに詰められる。これらのシリンジには、２方向のテフロンバルブが付いており、そして使い捨てのHDPEひれ付ストッパーにより閉じられる。シリンジの撹拌は、溶血用チューブのローテーターで行う。洗浄および濾過操作は、固相抽出用のワークステーション（Luer フィッティング、シャンドン、を装備した吸引チャンバー）で行う。合成は50μmolの樹脂で、Fmoc化学で行う。アミノ酸のカップリングは、250pm olの2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、250μmolのN-ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび75 0μmolのジイソプロピルエチルアミン(1.2mlのN- メチル-2-ピロリドン-ジメチルホルムアミド混合物中、容量で1/1)の存在中で樹脂を１時間、250μmolの適当に保護されたアミノ酸で処理することにより行われる。Fmoc基の脱保護は、2mlの20容量％のピペリジン溶液（N-メチル-2-ピロリドン中）で、それぞれ1分、1分そして20分の３回の連続的な樹脂の処理により行う。 50μmolのFmoc-Gly-[Wang 樹脂]樹脂(Wangら、J.Amer.Chem.Soc.,95,1328(197 3))を、連続的に以下の処理に供する： −Fmoc基を脱保護し、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −アミノがFmocにより保護されている、2当量式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ' およびＲ"はそれぞれ、ヒドロキシル基を表し、そしてＲ'"は水素原子を表す）をカップリングし、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −Fmoc基を脱保護し、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −5当量のFmoc−プロリンをカップリングし、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −Fmoc基を脱保護し、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −5当量のFmoc−アルギニン(Pmc)をカップリングし、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −Fmoc基を脱保護し、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、 −5当量のFmoc−アルギニン(Pmc)をカップリングし、 −2mlのN-メチル-2-ピロリドンで5回洗浄し、そしてペプチドを、10mlのトリフルオロ酢酸／フェノール／エタンジオール／チオアニソール／水混合物(容量で40/3/1/2/2)中で、90分間反応させることにより開裂する。樹脂は濾過により除去する。濾液は膜ポンプおよびドライアイストラップを装備したロータリーエバポレーターを使用して、減圧下で１時間濃縮し、浴の温度は45℃に維持する。濃縮物の最終容量は約1mlである。15mlのメチル-te rt-ブチルエーテルを加えて生成物を沈殿させ、そして遠心で回収する。ペレットを1mlのトリフルオロ酢酸に溶解し、15mlのメチル-tert-ブチルエーテルを加えて沈殿させ、そして0.2mlのトリフルオロ酢酸の存在下で15mlのメチル-tert- ブチルエーテル／石油エーテル混合物(容量で2/1)で洗浄する。生成物を減圧下( 3.5kPa)で乾燥し、次に100ÅＣ₁₈カラム（250×10mm、バイオーラッド）で高性能液体クロマトグラフィーにより精製し、溶出は0.07容量％のトリフルオロ酢酸を含む水中に0.07容量％のトリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルの20から40％勾配を用いて、6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。3.4mgの式（Ｉ）のジトリフルオロ酢酸塩(式中、Ｒは-NH-CH₂-COOH基を表し、 R₁-(R₂)_m-(R₃)n-(R₄)_pはFmoc-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す)を、このように白色の粉末状態で得る [サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝1306(MH)⁺、M/z＝653(M+2H)²⁺]。実施例９ 180mg(170μmol)のBoc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Pro-OHを、31mg(150μmol)のジシクロヘキシルカルボジイミドおよび23mg(170μmol)のN-ヒドロキシベンゾトリアゾール(3mlのジメチルホルムアミド中)で4時間、約20℃で処理する。次に生成したジシクロヘキシルウレアを0.45μmのMillex HVフィルター(ミリポア：Millipore)で濾過し、そして濾液を100mg(162μmol)の式（II）の化合物（式中、Ｒ'"は水素原子を表し、そしてＲ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表す）および0.025ml(143μmol )のジイソプロピルエチルアミン(2.5mlのジメチルホルムアミド中)を含む溶液に添加する。反応は24時間、約20℃で行う。溶媒は、滑り羽根型回転ポンプを装備したSpeed Vac(サバント:Savant)遠心エバポレーターにより18時間、約20℃で除去する。残渣を20mlのジクロロメタンに溶解し、そして溶液を4mlの蒸留水で2回、4mlの0.1M リン酸二水素ナトリウム溶液(蒸留水中)で2回、そして4mlの蒸留水で2回、連続して洗浄する。式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)m-(R₃)n-(R₄)pはB oc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す) をこのようにして、ジクロロメタン溶液中に得る。この溶液を３等分し、乾燥する。３部中の１部を2mlのジクロロメタン/メタノール混合物(容量で1/1)に溶解する。100mgの10％活性炭担持パラジウムおよび100mgのギ酸アンモニウムを、この溶液に加える。反応を100分間、過ヨウ素酸を用いてボルテックスで撹拌して行う。反応媒質を次に0.45μm Millex HVフィルター(ミリポア)で濾過し、そしてフィルターを5mlのメタノールで洗浄する。溶媒を減圧下(2.6kPa、45℃、30分間)で蒸発させる。得られた生成物を最後に高性能液体クロマトグラフィーにより100Å Ｃ₁₈カラム(250×10mm、バイオ-ラッド)で精製し、溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含む水中に0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含むアセトニトリルの15から40 ％勾配を用いて、6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。15.2mgの式（Ｉ）の化合物(式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)n-(R₄)_pはBoc-Arg-Arg-Pro -を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す)を、このように白色の粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝1126(MH )⁺、M/z＝563(M+2H)²⁺］。ペプチドBoc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Pro-OHは以下のように製造できる:化合物Boc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-OHを、2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(アセトニトリルまたはジメチルホルムアミド中) 、8より高いpHを得るために塩基として使用するジイソプロピルエチルアミンの存在下で、メチルプロリネートと反応させ、そしてBoc基を次に40％トリフルオロ酢酸（ジクロロメタン中）で開裂する。化合物Boc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-OHを、2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(アセトニトリルまたはジメチルホルムアミド中)、８より高いpHを得るために塩基として使用するジイソプロピルエチルアミンの存在下で、この生成物と反応させる。得られたエステルを、次に水酸化リチウムを用いて約＋4℃でケン化する。実施例１０実施例９で得た式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはBoc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂ -Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）の３部中の１部を、90分間、5mlのトリフルオロ酢酸／蒸留水混合物(容量で95/5)で処理する。媒質を次にロータリーエバポレーター(2.6kPa、45℃、45 分間)で乾燥させ、そして15mlの蒸留水を媒質に加える。得られた懸濁液を-80℃ に凍結し、そして凍結乾燥する(96時間)。生成物を、0.0625mlのジイソプロピルエチルアミン(0.36mmol)を含有する１mlのジメチルホルムアミドに溶解する。50 μl(50pmol)の1-アダマンチル酢酸クロライド溶液(38.8mg(200μmol)の1-アダマンチル酢酸を17.2μl(200μmol)の塩化オキサリル(200μlのジクロロメタン中) とジメチルホルムアミドの水滴の存在中で、15分間、約20℃で反応させることにより得る)を、ペプチド溶液に添加し、そして反応を約20℃で１時間行う。溶媒は、滑り羽根型回転ポンプを装備したSpeed Vac(サバント)遠心エバポレーターにより、18時間、約20℃で除去する。残渣を2mlのジクロロメタン／メタノール混合物（容量で１／１）に溶解し、そして100mgの10％活性炭担持パラジウムおよび100mgのギ酸アンモニウムを加える。反応を150分間、過ヨウ素酸を用いてボルテックスで撹拌して行う。反応媒質を次に0.45μm Millex HVフィルター(ミリポア)で濾過し、そしてフィルターを5mlのメタノールで洗浄する。溶媒を減圧下 (2.6kPa、45℃、30分間)で蒸発させる。得られた生成物を最後に高性能液体クロマトグラフィーにより100Å C₁₈カラム(250×10mm、バイオ-ラッド)で精製し、溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含む水中に0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含むアセトニトリルの15から40％勾配を用いて、6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。2.9mgの式（Ｉ）の化合物のジトリフルオロアセテート(式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pは1-アダマンチルアセチル-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す) を、このように白色の粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝601.6(M+2H)²⁺ ］。実施例１１実施例９で得た式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはBoc-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Arg(ベンジルオキシカルボニル)₂-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す)の３部中の１部を、90分間、5mlのトリフルオロ酢酸／蒸留水混合物(容量で95/5)で処理する。媒質を次にロータリーエバポレーター(2.6kPa、45℃、45分間)で乾燥させる。15mlの蒸留水を残渣に加え、そして懸濁液を-80℃に凍結し、そして凍結乾燥する(96時間)。得られた生成物を、62.5μlのジイソプロピルエチルアミン(0.36 mmol)を含有する１mlのジメチルホルムアミドに溶解する。9.9mg(50μmol)の1- アダマンチルカルボン酸クロライドを溶液に加え、そして反応を約20℃で１時間行う。溶媒は、滑り羽根型回転ポンプを装備したSpeed Vac(サバント)遠心エバポレーターにより、18時間、約20℃で除去する。残渣を2mlのジクロロメタン／メタノール混合物（容量で1/1）に溶解し、そして100mgの10％活性炭担持パラジウムおよび100mgのギ酸アンモニウムを加える。反応を150分間、過ヨウ素酸を用いてボルテックスで撹拌して行う。反応媒質を次に0.45μm Millex HVフィルター(ミリポア)で濾過し、そしてフィルターを5mlのメタノールで洗浄する。溶媒を減圧下で蒸発させる。生成物を最後に高性能液体クロマトグラフィーにより10 0Å C₁₈カラム(250×10mm、バイオ-ラッド)で精製し、溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸(容量で)を含む水中に0.07％のトリフルオロ酢酸(容量で)を含むアセトニトリルの18から43％勾配を用いて、6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。3.1mgの式（Ｉ）の化合物のジトリフルオロアセテート（式中、R₁-(R₂)m-(R₃)n-(R₄)_pは1-アダマンチルカルボニル-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、このように白色の粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝594.5(M+2H)²⁺ ］。実施例１２ 100mg(85μmol)のFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHを、17.4mgのジシクロヘキシルカルボジイミド(85μmol)および12.2mgのN-ヒドロキシベンゾトリアゾール( 90μmol)(1.5mlのジメチルホルムアミド中)で4時間、約20℃で処理する。次に生成したジシクロヘキシルウレアを0.45μmのMillex HVフィルター(ミリポア)で濾過し、そしてフィルターを0.5mlのジメチルホルムアミドで洗浄する。得られた0 .45mlの濾液(19μmolのFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHに対応する)を、16.7mg( 22.5μmol)の式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇はヨウ素原子を表す）および4μl(23μmol)のジイソプロピルエチルアミン(ジメチルホルムアミド中)を含む0.25mlの溶液に添加する。反応は3時間、約20℃で行う。溶媒は、滑り羽根型回転ポンプを装備したSpeed Vac(サバント)遠心エバポレーターにより、18時間、約20℃で除去する。残渣を５mlのトリフルオロ酢酸／フェノール／エタンジチオール／チオアニソール／水混合物(容量で40/3/1/2/2)に溶解し、そして90分間、約20℃で撹拌しながら反応させておく。混合物を次に滑り羽根型回転ポンプを装備したRC10-10(ジュアン：Jouan)遠心エバポレーターで45分間、濃縮する（蒸発器のチャンバーの温度は50℃、-90℃で蒸気をトラップする）。ペプチドを沈殿させるために15mlのtert-ブチル-メチルエーテル/石油エーテル混合物(容量で1/ 1)を、得られた濃縮物（約1ml）に加える。沈殿を遠心により回収し、そして1ml のトリフルオロ酢酸に溶解する。沈殿操作を１回繰り返す。ペプチドを減圧下(3 .5kPa)で乾燥する。生成物を最後に高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)により 100Å C₁₈カラム(250×10mm、バイオ-ラッド)で精製し、溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸(容量で)を含む水中に0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含むアセトニトリルの22から47％勾配を用いて、6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。10mgの式（Ｉ）の化合物のジトリフルオロアセテート(式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはFmoc-Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆ はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇はヨウ素原子を表す)を、このように白色の粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝1374、(M＋H)⁺、M/z＝687(M+2H)² ⁺ ］。Ｒ、Ｒ'およびＲ"がヒドロキシル基を表し、Ｒ'"がヨウ素原子を表す式（II）の化合物は以下のように製造できる：740mgの式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ' およびＲ"はヒドロキシル基を表し、Ｒ'"は水素原子を表す）を、60mlのメタノールに溶解し、そして180mgのヨウ化ナトリウムを加え、続いて133mgの1,2,4,6- テトラクロロ-3α,6α-ジフェニルグリコウリルを加える。溶液を45分間、約20 ℃で撹拌する。次に溶媒を減圧下(2kPa)で蒸発させ、そして粗反応混合物を10g のシリカゲルに固定する。混合物を150gのシリカゲルを含む直径4cmのカラムに添加し、そして酢酸エチル／酢酸／水混合物(容量で103/12/10)で溶出し、100mlの画分を集める。 900から2400mlの間の画分を合わせ、そして濃縮乾固して734mgの黄土色固体を得る。この固体を20mlの水および100mlの酢酸エチルに溶解し、約40℃に加温し、そして約20℃に冷却した後、濾過し、そして3mlの水そして次に20mlの酢酸エチルで3回洗浄する。これを減圧下(30Pa)、40℃で乾燥して387.7mgの式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ’およびＲ"はヒドロキシル基を表し、そしてＲ'"はヨウ素原子を表す）を、260℃より高い温度で融解するベージュ色の固体で得る［Autos pec VG Fisonsでのマススペクトル、LIMS(液体第二イオンマス分光法：Liquid S econdary Ion Mass Spectroscopy)で、グリセロール／チオグリセロールマトリックス：Ｍ／ｚ＝７４３（ＭＨ）⁺；ＮＭＲスペクトル（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，Temp.３０３Ｋ；δ ｐｐｍで）：Ｘ−ＴＹＲ１：ＨＡ３.９８、ＨＢ１、ＨＢ２３.１６、２.８０、ＨＤ１、ＨＤ２７.３４、６.６７；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.５１、ＨＡ４.１８、ＨＢ１.６２、ＭＧ１０.８４、ＨＧ２１、ＨＧ２２１.４９、１.１６、ＭＤ０.８２；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.６１、ＨＡ３. ６４、ＨＢ１、ＨＢ２２.６６、２.４０、ＨＤ１、ＨＤ２６.５２、５２９；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.１９、ＨＡ４.２７、ＨＢ１、ＨＢ２３.３９、３. ０２、ＨＤ１、ＨＤ２７.４０、７.２２、ＨＥ１、ＨＥ２７.１０、６.７０］。化合物Fmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHを以下のように製造できる：Fmoc-Pro- クロロトリチル樹脂は、0.3mmolのクロロトリチルクロライド／ポリスチレン-１％ジビニルベンゼンコポリマー樹脂（ノバビオケム）を1mmolのFmoc-プロリン(3.5mlのジクロロメタン／ジイソプロピルエチルアミン混合物(容量で6/1)中と30分間、約20℃で反応させることにより得る。次に2mlのメタノールを反応に加え、反応を30分間、約20℃で続行させておく。樹脂を次に連続的に5mlのメタノールで3回、そして5mlのジクロロメタンで3回洗浄し、そして乾燥する。ペプチドFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHは、製造元から提供される“標準的F moc”サイクルを使用することにより、N-メチル-2-ピロリドンを溶媒として使用して、アプライドバイオシステムズ 431Aデバイスで集成する。α-アミン官能基の脱保護は、N-メチル-2-ピロリドン中の20％ピペリジンにより、各合成段階で2 0分間行う。Fmoc-Pro-クロロトリチル樹脂をデバイスの反応槽に分配する。プロリンのα-アミン官能基の脱保護後、Fmoc-Arg(Pmc)のN-ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステルが、1mmolのFmoc-Arg(Pmc)-OH(2.1mlのN-メチル-2-ピロリドン中 )、1mlの1M N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(N-メチル-2-ピロリドン中)および 1mlの1M ジシクロヘキシルカルボジイミド(N-メチル-2-ピロリドン中)と、20分間反応させることにより形成される。生成したジシクロヘキシルウレアを除去した後、エステルを30分間、樹脂と反応させる。次にアルギニンのα-アミン官能基を脱保護し、そしてFmoc-Arg(Pmc)-OHのN-ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステルが、上記のように樹脂とカップルする。ペプチドFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-P ro-OHは、樹脂を15分間、10mlの酢酸／トリフルオロエタノール／ジクロロメタン混合物(容量で1/2/7)で20分間、約20℃で処理することにより樹脂から脱着させる。次に樹脂を連続的に10mlのジクロロメタン、そして10mlのアセトニトリルで洗浄する。有機相を合わせ、そして溶媒をロータリーエバポレーター（2 .6kPA、1時間、45℃）で除去する。残渣を1mlのアセトニトリルに溶解し、そして30mlの蒸留水を加える。得られた懸濁液を-80℃で凍結し、そして凍結乾燥する。102mgのFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHがこのように得られる。実施例１３ 3.06gの式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ'およびＲ"はヒドロキシル基を表し、そしてＲ'"は水素原子を表す）を、80mlの５％炭酸ナトリウム水溶液に溶解し、そこに1.8gの9-フルオレニルメチルN-スクシニルカーボネート、そして次に40 mlのジオキサンを加える。反応を５時間、約20℃で続行する。反応混合物を２回、100mlの酢酸エチルで抽出する；有機相を除去し、そして水相を濃塩酸溶液で１から２の間のｐＨに酸性化する。抽出は100mlの酢酸エチルで3回行い、そして有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、シリカゲル上で濾過し、そして次に減圧下(2kPa)で蒸発させる。沈殿を300mlのメチルtert-ブチルエーテル/塩化メチレン混合物(容量で1/1)で分解し、そして減圧下で乾燥して3.3gの式（Ｉ）の化合物（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはFmocを表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、白色粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z＝861(M+Na)⁺、M/z＝839(M+H)⁺；赤外スペクトル（メタノールでのFMIR）：３３９５、３３３５、２９７０、２９４０、２８８０、３１２５から２１２５、１７００、１６６５、１５９０、１５００、１４５０および１２２５；ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，Temp.＝２９７Ｋ；δ ｐｐｍで）：Ｒ−Fmoc-１：ＨＡ１、ＨＡ２４.２３、ＨＢ４.４８、ＨＧ１、ＨＧ２７.７０、ＨＤ１、ＨＤ２７.３７、ＨＥ１、ＨＥ２７.４５、ＨＺ１、ＨＺ２７.９２；Ｘ−ＴＹＲ１：ＮＨ５.７３、ＨＡ４.５２、ＨＢ１、ＨＢ２２.９３、３.０３、ＨＤ１６.７０、ＨＤ２６.７２、ＨＥ１６ .７０；Ｘ−ＩＬＥ２：ＮＨ８.３６、ＨＡ４.１２、ＨＢ１.６２、ＭＧ１０. ８３、ＨＧ２１、ＨＧ２２１.１８、１.４９、ＭＤ０.８３；Ｘ−ＴＹＲ３：ＮＨ８.６７、ＨＡ３.５８、ＨＢ１、ＨＢ２２.４５、２.７９、ＨＤ１６. ５７、ＨＤ２５.５１；Ｘ−ＴＹＲ４：ＮＨ４.１７、ＨＡ４,２８、ＨＢ１、ＨＢ２３.１８、３.４３、ＨＤ１７.１９、ＨＤ２７.３１、ＨＥ１７. ５２、ＨＥ２６.８０］。実施例１４ 100mgのFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OH(85μmol)を、17.4mgのジシクロヘキシルカルボジイミド(85μmol)および12.2mgのN-ヒドロキシベンゾトリアゾール( 90μmol)(1.5mlのジメチルホルムアミド中)で4時間、約20℃で処理する。次に生成したジシクロヘキシルウレアを0.45μmのMillex HVフィルター(ミリポア)で濾過し、そしてフィルターを0.5mlのジメチルホルムアミドで洗浄する。得られた0 .972mlの濾液(41μmolのFmoc-Arg(Pmc)-Arg(Pmc)-Pro-OHに対応する)を、32mg(4 8.6μmol)の式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ'およびＲ"はメトキシ基を表し、そしてＲ'"は水素素原子を表す）および7μl(40μmol)のジイソプロピルエチルアミンを含む0.5mlの溶液に添加する。反応は3時間、約20℃で行う。溶媒は、滑り羽根型回転ポンプを装備したSpeed Vac(サバント)遠心エバポレーターにより、18時間、約20℃で除去する。残渣を10mlのトリフルオロ酢酸／フェノール／エタンジチオール／チオアニソール／水混合物(容量で4 0/3/1/2/2)に溶解し、そして90分間、約20℃で撹拌しながら反応させておく。混合物を次に滑り羽根型回転ポンプを装備したRC10-10(ジュアン)遠心エバポレーターで45分間、濃縮する（蒸発器のチャンバーの温度は50℃、-90℃で蒸気をトラップする）。ペプチドを沈殿させるために30mlのtert-ブチル-メチルエーテル /石油エーテル混合物(容量で1/1)を、得られた濃縮物（約2ml）に加える。ペプチドを遠心により回収する。これを２mlのトリフルオロ酢酸に溶解し、沈殿操作を１回繰り返す。ペプチドを減圧下(3.5kPa)で乾燥する。生成物を最後に高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)により100Å C₁₈カラム(250×10mm、バイオ-ラッド)で精製し、溶出は0.07％のトリフルオロ酢酸(容量で)を含む水中に0.07％のトリフルオロ酢酸（容量で）を含むアセトニトリルの22から47％勾配を用いて、 6ml/分の流速で30分間にわたって行い、そして次に凍結乾燥する。23.6mgの式（Ｉ）の化合物のジトリフルオロアセテート（式中、R₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはFmoc -Arg-Arg-Pro-を表し、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はメトキシ基を表し、そしてＲ₇は水素原子を表す）を、このように白色の粉末状態で得る［サイエックス API IIIでのマススペクトル、ESMS(エレクトロスプレーマススペクトロメトリー)で：M/z ＝1290(M+H)⁺、M/z＝646(M+2H)²⁺］。Ｒ、Ｒ'およびＲ"がメトキシ基を表し、Ｒ'"が水素原子を表す式（II）の化合物は以下のように製造できる：20mlの2M トリメチルシリルジアゾメタン溶液(ヘキサン中)を１時間にわたって、不活性環境下で30mlのメタノールに溶解した実施例１３で得られた１.4gの式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はヒドロキシル基を表し、Ｒ₇は水素原子を表し、そしてR₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pはFmoc- を表す）の溶液に加え、そして撹拌を18時間、約20℃で行う。さらに10mlの2M トリメチルシリルジアゾメタン溶液(ヘキサン中)を加え、そして撹拌を24時間、約20℃で行う。0.5mlの酢酸を加え、そして溶媒を減圧下(2kPa)で蒸発させる。得られた残渣を、250gのシリカゲルを含む直径４cmのカラムでクロマトグラフィーにより精製し、溶出は連続的に 750mlのジクロロメタン、3000mlのジクロロメタン／メタノール混合物(容量で98 /2)、そして次にジクロロメタン／メタノール混合物(容量で95/5)で行い、100ml 画分を集める。2500から4400mlの間の画分を合わせ、そして蒸発させて932mgの白色固体を得る。生成物を10mlのジクロロメタンに溶解し、そして50mlのエタノールで希釈することによりさらに精製することができ；次に溶液を沈殿が生成し始めるまで減圧下で約20℃にて濃縮し、そして16時間、約+５℃で静置する。441 mgの式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ₅およびＲ₆はメトキシ基を表し、そしてＲ₇ は水素原子を表し、そしてR₁-(R₂)_m-(R₃)_n-(R₄)_pがFmocを表す）は、このように145℃で融解（分解）する白色粉末状で得られる［Autospec VG Fisonsでのマススペクトル、LIMS(液体第二イオンマス分光法)で、グリセロール＋チオグリセロールマトリックス:M/z＝881(MH)⁺］。0.1mlのピペリジンを187mgの上記で得た化合物(20mlのジクロロメタンに溶解)に加え、そして撹拌を約20℃で42時間行う。溶媒を減圧下(2kPa)で蒸発させる；残渣を10mlのジエチルエーテルで約35℃ でトリチュレートし、約20℃に冷却し、濾過し、そして5mlのジエチルエーテルで3回洗浄して140mgの白色粉末を得、これを5mlの水に溶解し、そして20mlの酢酸エチルで5回抽出する。溶媒を減圧下(2kPa)で蒸発させる。精製は10mlのジエチルエーテルで希釈した1mlのジクロロメタンに溶解して行う。80mgの式（II）の化合物（式中、Ｒ、Ｒ₅ およびＲ₆はメトキシ基を表し、Ｒ₇は水素原子を表す）を、240℃で融解(分解) するわずかに黄色い粉末で得る[Autospec VG Fisonsでのマススペクトル、LIMS( 液体第二イオンマス分光法)で、グリセロール+チオグリセロールマトリックス: m/z＝659(MH⁺)]。本発明の医薬品は、遊離状態の式（Ｉ）の化合物、あるいは純粋な状態で、または不活性もしくは生理学的に活性な他の任意の薬学的に適合性のある生成物と組み合わされた組成物の状態で薬学的に許容できる塩の式(Ｉ)の化合物から成る。本発明の医薬品は経口、非経口、直腸または局所を介して使用できる。経口投与用の固体組成物として、錠剤、ピル、粉末（カシュ剤またはゼラチンカプセル）、あるいは粒末を使用できる。これらの組成物において、本発明の有効成分は澱粉、セルロース、セルロース、シュクロース、ラクトースまたはシリカのような１つ以上の不活性希釈剤と、アルゴン流下で混合される。これらの組成物は希釈剤以外の物質、例えばステアリン酸マグネシウムまたはタルク、色素、被覆剤（ドラジェ）またはワニスのような１つ以上の滑剤を含んでもよい。経口投与用の液体組成物として、水、エタノール、グリセロール、植物油または液体パラフィンのような不活性希釈剤を含む薬学的に許容できる溶液、懸濁液、乳剤、シロップおよびエリクシルを使用できる。これらの組成物は、湿潤剤、甘味剤、増粘剤、芳香剤または安定化生成物のような希釈剤以外の物質を含むことができる。非経口投与用の滅菌組成物は、好ましくは水性または非−水性溶液、懸濁液または乳剤であることができる。水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、特にオリーブ油、注射用の有機エステル、例えばオレイン酸エチル、あるいは他の適当な有機溶媒を溶剤または賦形剤として使用できる。これらの組成物は助剤、特に湿潤剤、強壮剤、乳化剤、分散剤および安定化剤のような補助剤を含んでもよい。滅菌は幾つかの様式で行うことができ、例えば無菌濾過により、滅菌剤の組成物中への取り込みにより、照射により、または加熱による。それらは使用時に滅菌水または他の注射用滅菌媒質に溶解できる、滅菌固体組成物の状態に調製することもできる。直腸投与用組成物は、坐剤または直腸用カプセルであり、これらは有効生成物の外にカカオバター、半−合成グリセリドまたはポリエチレングリコールのような賦形剤を含む。局所投与用の組成物は、例えばクリーム、ローション、洗眼剤、口中清浄剤、点鼻薬またはエアゾールを含むことができる。ヒトの治療において、本発明の組成物は特にニューテンシンが関係する疾患を処置または予防するために有用である。すなわち、これらの化合物は、精神病、不安疾患、鬱病、認識疾患、神経変性、パニック発作、パーキンソン病、アルツハイマー疾患、精神分裂病、自閉症、晩発性ジスキネルジー、過敏性腸症候群、急性膵炎、潰瘍、腸の運動疾患、ニューロテンシンに感受性の特別な腫瘍、慢性の処置およびアルコールまたは薬物濫用から引き離すこと、アレルギーおよび炎症症状、ニューロテンシンが関わる心臓血管および呼吸疾患および喘息を処置または予防するために使用できる。投与量は、所望の効果、治療期間および使用する投与経路に依存する；一般的にそれらは成人に関して、経口経路を介して1日あたり50mgから300mgの間であり、有効物質の単位投与量は10mgから100mgの範囲である。一般的に、医師が処置を行う患者の年齢、体重および患者に特別なすべての他の因子に応じて決定する。以下の実施例は本発明の組成物を説明する。実施例Ａ常法に従い調製され、50mgの有効生成物を含むゼラチンカプセルは以下の組成を有する： −式（Ｉ）の化合物 50mg −セルロース 18mg −ラクトース 55mg −コロイドシリカ 1mg −カルボキシメチル澱粉ナトリウム 10mg −タルク 10mg −ステアリン酸マグネシウム 1mg実施例Ｂ常法に従い調製され、50mgの有効生成物を含む錠剤は以下の組成を有する： −式（Ｉ）の化合物 50mg −ラクトース 104mg −セルロース 40mg −ポリビドン 10mg −カルボキシメチル澱粉ナトリウム 22mg −タルク 10mg −ステアリン酸マグネシウム 2mg −コロイドシリカ 2mg −ヒドロキシメチルセルロース、グリセロール、および酸化チタン混合物(72/3.5/24.5)を処方して245mgのコート錠剤１錠を完成する。実施例Ｃ以下の組成を有する10mgの有効生成物を含む注射用溶液を調製する： −式（Ｉ）の化合物 10mg −安息香酸 80mg −ベンジルアルコール 0.06cm³ −安息香酸ナトリウム 80mg −95％エタノール 0.4cm³ −水酸化ナトリウム 24mg −プロピレングリコール 1.6cm³ −水加えて 4cm³

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＢＮＡ６１Ｋ 37/02 ＡＡＢＡＣＤＡＣＪＡＣＪＡＣＬＡＣＬＡＤＵＡＤＵＡＢＦ // Ｃ０７Ｋ 5/10 ＡＣＤＣ１２Ｐ 21/02 ＡＢＮ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:04）Ｃ０７Ｋ 105:00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者エリンク，ジエラールフランス・エフ−94600シヨワシ−ル−ロワ・スクワールサルバトールアランド４ (72)発明者ルブール，ジヤンフランス・エフ−91400ゴメ−ラ−ビル・ドメーヌドモンボワザン24 (72)発明者マルタン，ジヤン−ポールフランス・エフ−92700コローンブ・アベニユードラジヤン−サレ14

Claims

【特許請求の範囲】１．式：式中、Ｒはヒドロキシル、アルキルオキシ、フェニルアルキルオキシまたは-NH-CH₂- COOH基を表し、Ｒ₁は水素原子、アダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基またはアミン官能基の保護基を表し、Ｒ₂はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₃はArgまたはLys残基を表し、Ｒ₄はPro残基を表し、ｍ、ｎおよびｐは同一または異なり、０または１に等しい数字を表し、Ｒ₁が水素原子である時、ｍ＋ｎ＋ｐの和は少なくとも１に等しいと考えられ、Ｒ₅およびＲ₆は同一であり、そしてヒドロキシルまたはメトキシ基を表し、Ｒ₇は水素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはニトロ基を表し、アルキルおよびアルキルオキシ基および部分は、直鎖または分枝鎖中に１−４個の炭素原子を含み、Argはアルギニンを意味し、Lysはリシンを意味し、Proはプロリンを意味すると理解される、の化合物、および２つのアミノ酸残基の間の１つ以上のペプチド結合(CO-NH)が- CH₂-NH結合で置換されており、かつ／またはＲ₂およびＲ₃アミノ酸残基の間のペプチド結合(CO-NH)がCH=CH結合により置換されている式（Ｉ）の化合物の均等物、ならびにその塩。２．Ｒ₁を表すアミン官能基の保護基が9-フルオレニルメトキシカルボニル、ter t-ブトキシカルボニル、アセチル、ピバロイルおよびベンジオキシカルボニル基であり、ベンジオキシカルボニル基のフェニルは場合によってはハロゲン、アルキル、アルキルオキシまたはニトロにより置換されてもよい、請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物。３．式：式中、Ｒが請求の範囲第１項と同じ意味を有し、Ｒ'およびＲ"は同一であり、そして各々ヒドロシルまたはメトキシ基を表し、そしてＲ'"が水素、塩素、臭素もしくはヨウ素原子またはニトロ基を表す、の誘導体を式：式中、Ｒ₁はアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4- フェニルベンゾイル、4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基またはアミン官能基の保護基を表し、そしてＲ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、ｎ、ｍおよびｐは請求の範囲第１項と同じ意味を有し、ｍ＋ｎ＋ｐの和は少なくとも１に等しい、の誘導体と反応させ、場合によっては続いてＲ₁が水素原子である化合物を得るために、最終アミン官能基の脱保護および／または場合によってはＲがアルキルオキシまたはフェニルアルキルオキシ基を表す場合には、Ｒがヒドロシル基を表す化合物を得るためにカルボキシル官能基の脱保護を行い、生成物を単離し、そして場合によっては塩に転換することを特徴とする、ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも１に等しい請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。４．請求の範囲第３項の式（II）の誘導体を、Ｒ₄、Ｒ₃およびＲ₂が式（Ｉ）と同じ意味を有し、そのアミノ酸残基は好ましくは保護されている誘導体(R₄)p-OH および／または(R₃)n-OHおよび／または(R₂)m-OHと連続して反応させ、場合によっては続いて脱保護を行い、生成物を単離し、そして場合によっては塩に転換することを特徴とする、ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも１に等しく、Ｒ₁が水素原子またはアミン官能基の保護基を表す、請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。５．請求の範囲第３項の式（II）の誘導体を、9-フルオレニルメチル N −スクシニルカーボネートと反応させ、生成物を単離し、そして場合によっては塩に転換することを特徴とする、ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも０に等しく、Ｒ₁ が9-フルオレニルメトキシカルボニル基を表す、請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。６．請求の範囲第３項の式（II）の誘導体を、Ｒ₁がtert-ブトキシカルボニル、アセチル、ピバロイルまたはフェニルが場合によってはハロゲン、アルキル、アルキルオキシまたはニトロで置換されてもよいベンジルオキシカルボニル基を表す誘導体Ｒ₁-Ｃｌと反応させ、生成物を単離し、そして場合によっては塩に転換することを特徴とする、請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。７．Ｒ₁が水素原子を表す請求の範囲第３項の式（II）の誘導体を、Ｒ₁がアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、 4-tert-ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基を表すクロライドＲ₁-Ｃｌと反応させ、生成物を単離し、そして場合によっては塩に転換することを特徴とする、ｍ＋ｎ＋ｐの和が少なくとも０に等しく、Ｒ₁がアダマンチルアセチル、アダマンチルカルボニル、ノルボルニルアセチル、ノルボルニルフェノキシカルボニル、ベンゾイル、ニコチノイル、4-フェニルベンゾイル、4-tert- ブチルベンゾイルもしくは2-ピロリジンカルボニル基を表す請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造法。８．少なくとも１つの請求の範囲第１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそのような化合物の塩を有効成分として含む、医薬組成物。