JPH10508032A

JPH10508032A - アリールチオキサンチン類

Info

Publication number: JPH10508032A
Application number: JP8519326A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．カヴァラ，デイヴィッド; ホファー，ペーター; チェイシン，マーク
Original assignee: ユーロ−セルティーク，エス．エイ．
Priority date: 1994-12-13
Filing date: 1995-12-12
Publication date: 1998-08-04
Also published as: US6090816A; TW315369B; ZA9510595B; IL116381A0; DE69531506T2; US6066641A; ZA9510594B; ATE247116T1; WO1996018399A1; DE69531506D1; CA2206287C; US6440979B1; EP0814809B1; EP0814809A4; CA2206287A1; EP0814809A1; AU4527896A

Abstract

(57)【要約】式(I)または(II)： [各式中、Q₃、Q_6a、Q_6bおよびQ₈は独立して結合、C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンであり、そしてR₃、R_6a、R_6bおよびR₈は独立して水素、アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノおよびカルボキシで置換されていてもよい、ただし、式(I)または(II)においてQ₃R₃は水素でもメチルでもなく、そして式(I)においてR₃とR₈の少なくとも１つはアリールまたはヘテロアリールである]で表される化合物を開示する。これらの化合物は有効なＰＤＥIV 阻害剤であり、ＰＤＥ III阻害に対して向上したＰＤＥ IV 阻害および選択性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】アリールチオキサンチン類発明の背景喘息は多くの炎症細胞と免疫細胞、スパスモーゲン、炎症性メディエーター、サイトカインおよび成長因子の協同した作用による複合疾患である。最近、喘息治療に用いられている化合物は主として４つのクラスに類別される。すなわち、気管支拡張薬（例：β−アドレノセプター作動薬）、抗炎症薬（例：コルチコステロイド）、予防用の抗アレルギー薬（例：クロモリンナトリウム）、そして気管支拡張作用と抗炎症作用を兼ね備えていると思われるキサンチン類（例：テオフィリン）である。テオフィリンは喘息の治療において第一に選択される好適な薬剤である。テオフィリンはその直接的な気管支拡張作用のために推奨されてきたが、現在では、テオフィリンの治療価値はその抗炎症作用からも生じると考えられている。その作用機序は依然として不明である。しかしながら、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ阻害、アデノシン受容体拮抗、カテコールアミン放出の刺激、およびサプレッサーＴリンパ球の数と活性を増強するその能力を含めて、その幾つかの細胞活性が抗喘息薬としての活性において重要であると考えられている。これらの全てが実際にその活性に関与している可能性があるが、ＰＤＥ阻害のみが抗炎症および気管支拡張の両成分の原因となるのかもしれない。しかし、テオフィリンは治療係数が狭く、また、広範囲の副作用があることが知られていて、問題を抱えている。上記の活性のうち、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害するテオフィリンの活性は最近相当の関心を集めている。抗喘息薬の分子標的として環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）がかなり注目されてきている。サイクリック3',5'-アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）とサイクリック3',5'-グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）は、多数のホルモン、神経伝達物質およびオートコイド (autocoid)に対する細胞の機能的応答を媒介する第二のメッセンジャーである。少なくとも２つの治療上重要な作用効果は、ホスホジエステラーゼ阻害と、その結果として起こる、喘息の病態生理において鍵となる細胞での細胞内アデノシン 3',5'-一リン酸（ｃＡＭＰ）またはグアノシン3',5'-一リン酸（ｃＧＭＰ）の上昇から生じるのであろう。これらの作用効果は平滑筋の弛緩（結果的に気管支拡張をもたらす）と抗炎症作用である。多数の明確に区別されるＰＤＥイソ酵素（アイソザイム）の存在が知られるようになり、それらは細胞分布が相違している。一つのイソ酵素または他のイソ酵素に対して顕著な選択性を有する種々の阻害剤が合成されている。アイソザイム選択的阻害剤の構造−活性関係（ＳＡＲ）は、例えば、Theodore J．Torphyら，“Novel Phosphodiesterase Inhibitors For The Therapy Of As thma”，Drug News & Prospectives，6(4)May 1993，pp．203-214の論文中で、詳細に論じられている。ＰＤＥ酵素は、ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの加水分解に対するその特異性；カルシウム、カルモジュリンまたはｃＧＭＰによる調節に対するその感受性；および各種の化合物によるその選択的阻害；にしたがって５つのファミリーに分類することができる。ＰＤＥＩはＣａ²⁺／カルモジュリンにより刺激される。ＰＤＥ II はｃＧＭＰにより刺激され、心臓と副腎に見いだされる。ＰＤＥ IIIはｃＧＭＰにより阻害され、この酵素の阻害は陽性の変力作用を生み出す。ＰＤＥ IV はｃＡＭＰ特異的で、その阻害は気道の弛緩、抗炎症および抗うつ作用を引き起こす。ＰＤＥ Vは血管平滑筋のｃＧＭＰ含量を調節する上で重要であると思われ、それゆえ、ＰＤＥＶ阻害剤は心臓血管作用をもつ可能性がある。構造活性関係の研究からＰＤＥ III阻害をもたらす化合物は多数誘導されているが、ＰＤＥ IV 阻害剤の構造クラスの数は比較的限られている。次の構造式：を有するロリプラム(rolipram)の類似体および次の構造式：を有するRo-20-1724の類似体が研究されてきた。ロリプラムは、当初は抗うつ薬としての活性ゆえに研究されたものであるが、ＰＤＥ IV 酵素を選択的に阻害することがわかり、それ以来この化合物はＰＤＥ酵素のサブタイプを分類する際の標準的な薬剤となっている。ＰＤＥ IV 阻害剤には少なからぬ治療効能があると思われる。抗うつ作用を示唆する初期の研究に加えて、ロリプラムはその抗炎症効果、とりわけ喘息における効果について検討された。in vitroでは、ロリプラム、Ro-20-1724および他のＰＤＥ IV 阻害剤は (1)マスト細胞、好塩基球、単球および好酸球におけるメディエーター合成／放出；(2)好中球および好酸球における呼吸バースト、化学走性および脱顆粒；そして(3)リンパ球におけるマイトジェン依存性増殖および分化；を阻害することがわかっている(The PDE IV Family Of Calcium-Phosphodiesterases Enzymes， John A．Lowe，IIIら，Drugs of the Future 1992，17(9):799-807)。ＰＤＥ IV は好酸球、好中球、Ｔリンパ球、マクロファージおよび内皮細胞を含めた喘息の主要な炎症細胞のすべてに存在している。その阻害は細胞活性化のダウンレギュレーションを引き起こし、気管と気管支の平滑筋細胞を弛緩させる。一方、心筋に存在するＰＤＥ IIIの阻害は、心臓の収縮力と収縮速度の両方を増強させる。これらは抗炎症剤にとって望ましくない副作用である。非選択的ＰＤＥ阻害剤であるテオフィリンはＰＤＥ IIIとＰＤＥ IV のどちらも阻害し、その結果として望ましい抗喘息効果と望ましくない心臓血管刺激をもたらす。ＰＤＥアイソザイム間のこのよく知られた区別により、テオフィリン治療と関連した多くの副作用を伴わない抗炎症および気管支拡張の機会が存在するのは明らかである。多くの西欧諸国ではここ１０年間喘息の発生率および死亡率が増加しており、この疾患の炎症性および吸入されるステロイドの有益性が臨床上力説されている。気管支拡張および抗炎症の両作用を有する薬剤の開発が最も有利であろう。選択的なＰＤＥ IV 阻害剤はテオフィリンよりも副作用が少なくて、より有効であると思われる。それゆえ、より選択的で改善されたＰＤＥ IV 阻害作用を有する新規な化合物を捜し出すための努力が続いている。発明の目的および概要したがって、本発明の第一の目的は、有効なＰＤＥ IV 阻害剤である新規な化合物を提供することである。本発明のもう一つの目的は、有効なＰＤＥ IV 阻害剤として作用するが、より低いＰＤＥ III阻害を有する新規な化合物を提供することである。本発明の別の目的は、テオフィリンまたは他の既知化合物と比べて、実質的に同等のまたは優れたＰＤＥ IV 阻害効果を有し、かつそのＰＤＥ阻害効果に関して驚くほど大きい選択性を示す新規な化合物を提供することである。本発明の他の目的は、ＰＤＥ IV 阻害を必要としている患者の治療方法を提供することである。本発明の他の目的は、腫瘍壊死因子を含めたサイトカインの異常に高い生理的レベルと関連した症状を治療するための新規な化合物を提供することである。本発明の他の目的は、本発明の新規化合物の合成方法を提供することである。本発明の他の目的は、喘息、アレルギー、炎症、うつ状態、痴呆、ヒト免疫不全ウイルスが引き起こす疾患、およびサイトカインの異常に高い生理的レベルと関連した症状よりなる群から選ばれる病的状態にある哺乳動物の治療方法を提供することである。上記および他の目的を考慮して、本発明は主に次式：または [各式中、 Q₃、Q_6a、Q_6bおよびQ₈は独立して結合、C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンであり、そして R₃、R_6a、R_6bおよびR₈は独立して水素、アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノおよびカルボキシで置換されていてもよい、ただし、式(I)または(II)においてQ₃R₃は水素でもメチルでもなく、そして式(I)においてR₃とR₈の少なくとも１つはアリールまたはヘテロアリールである] の化合物を包含する。アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン部分は直鎖であっても分枝鎖であってもよく、そして／また、アリールで置換されていてもよい。 R₃、R_6a、R_6bおよびR₈の少なくとも１つがアリールであるとき、フェニルまたはナフチルが好ましい。R₃、R_6a、R_6bおよびR₈の少なくとも１つがヘテロアリールであるときは、ピリジル、ピリミジル、キノリルまたはイソキノリルが好ましい。本発明の他の面では、喘息、アレルギー、炎症、うつ状態、痴呆、アトピー疾患、鼻炎などの病的状態にある哺乳動物を治療するための医薬組成物および方法が提供される。詳細な説明本発明の化合物は、以下の実施例に示すとおり、ヒトや他の哺乳動物においてＰＤＥ IV を仲介または阻害するのに有効である。さらに、これらの化合物は、ＰＤＥ III阻害により起こる望ましくない心臓血管刺激を実質的に示さずに、気管支拡張作用と抗炎症作用の両方を示す選択的ＰＤＥ IV 阻害剤である。こうした化合物の多くはテオフィリンと比べて実質的に同等のまたは優れたＰＤＥ IV 阻害効果を有する。本発明はさらに、有効量の本発明化合物を、アレルギーおよび炎症性疾患の治療を必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる、アレルギーおよび炎症性疾患の治療方法に関する。本発明はまた、有効量の上記の本発明化合物を、ＰＤＥ IV 阻害を必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物におけるＰＤＥ IV 活性の酵素的または触媒的活性の仲介または阻害方法に関する。本発明の化合物はヒトや他の哺乳動物における他の病的状態の治療、例えば、生理的に有害な過剰量の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）と関連した病的状態の治療にも使用することができる。ＴＮＦは単球、マクロファージおよびＴリンパ球を活性化する。この活性化はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症の進行と、ＴＮＦやＴＮＦによってモジュレートされる他のサイトカインの生産に関係した他の病的状態の進行に関係している。本発明の化合物は次式：または [各式中、 Q₃、Q_6a、Q_6bおよびQ₈は独立して結合、C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンであり、そして R₃、R_6a、R_6bおよびR₈は独立して水素、アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノおよびカルボキシで置換されていてもよい、ただし、式(I)または(II)においてQ₃R₃は水素でもメチルでもなく、そして式(I)においてR₃とR₈の少なくとも１つはアリールまたはヘテロアリールである] を有する。 C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレン部分は直鎖であっても分枝鎖であってもよく、そして／また、アリールで置換されていてもよい。すなわち、それらはアラルキル、アラルケニルまたはアラルキニル基でありうる。好ましいアラルキル基としてはフェナルキル、ナフタルキルおよびヘテロアラルキルがある。アラルキル基のアルキル部分は好ましくは低級アルキルである。「低級」という用語は本発明においては炭素原子数１〜３の直鎖または分枝鎖の基として定義される。アラルケニルまたはアラルキニル基が含まれる場合、適当なアラルケニル基はエテニルを含み、そして適当なアラルキニル基はエチニルを含む。本発明の化合物は好ましくは6-チオキサンチンまたはイソグアニン誘導体である。R₃、R_6a、R_6bおよびR₈の１つはアリールまたはヘテロアリールである。これに関して、適当なアリール基としてはフェニルおよびナフチルがある。適当なヘテロアリール基としてはピリジル、ピリミジル、キノリルおよびイソキノリルがある。例えば、本発明の化合物は１または２個のアルコキシ基またはハロゲン（塩素が特に好ましい）で置換されたフェニル基を含むことができる。いくつかの特に好適なヘテロアラルキルはピリジルを含む。 R₃とR₈はどちらもアリールまたはアラルキル基でありうるが、大部分の実施態様では、R₃とR₈の一方だけがこのような基であるにすぎない。それゆえ、上記のアリールおよびアラルキル基に代わる基として、R₃およびR₈は水素であってもよく、こうしてQ₃R₃またはQ₈R₈はC_1-9アルキルであることができ、C_1-9アルキル基は分枝鎖であってもなくてもよく、また、１個以上のハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、またはシクロアルキル基で置換されていてもよい。しかし、特に好ましいものは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルおよびシクロプロピルである。上記の式のうち、次の化合物が特に好適である： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 8-イソプロピル-3-(4-ピリジルメチル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶-エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン。これらの分子の合成法は実施例において述べられる。実施例に特に示してないが本発明の範囲に含まれる他の分子の合成は、当業者に知られた改変を加えて、示されたこれらの技法により実施できる。本発明の化合物は非常に有効なＰＤＥ IV 阻害剤であることが判明し、その阻害は実際に、約 350μM でＰＤＥ IV の50％阻害を示すテオフィリンよりも顕著にかつ驚異的に強いものである。すなわち、実施例１で製造された化合物の場合、ＰＤＥ IV の50％阻害をもたらす濃度（ＩＣ₅₀）は1.0 μM であり、一方、同一の検定法で調べたロリプラムのＩＣ₅₀は2.8 μM であった。本発明の化合物はロリプラム（またはテオフィリン）と比べてＰＤＥ IV 阻害剤として数倍有効であることが明白である。実施例１の化合物のＰＤＥ III阻害のＩＣ₅₀は約25μM であるが、それでも該化合物や他の本発明化合物が高度に選択的なＰＤＥ IV 阻害剤であることは明らかである。したがって、本発明の化合物はＰＤＥ IV 阻害を必要としているだれにでも投与することができる。投与は経口的、局所的、座剤もしくは吸入剤により、または非経口的に行われる。本発明はまた、適当な場合は、上記の化合物のあらゆる薬学的に許容される塩を包含する。当業者であれば、本発明化合物の酸付加塩を、該化合物と適当な酸とを種々の公知方法により反応させることで製造できることが理解されよう。また、本発明の化合物と適当な塩基とを種々の公知方法により反応させることで、アルカリおよびアルカリ土類金属塩も製造できる。各種の経口剤形を、例えば錠剤、ゲルカップ剤、カプセル剤、カプレット剤、顆粒剤、ロゼンジ剤、バルク粉剤などの固体剤形および乳濁剤、溶液剤、懸濁剤などの液体剤形を含めて、使用することができる。本発明の化合物は単独で投与しても、当業者には公知の種々の製剤上許容される担体および賦形剤（希釈剤、懸濁化剤、可溶化剤、結合剤、崩壊剤、防腐剤、着色剤、滑沢剤などを含むがこれらに限らない）と組み合わせてもよい。本発明の化合物を経口錠剤中に配合する場合、かかる錠剤は圧縮錠剤、すりこみ錠剤、腸溶コーティング、シュガーコーティングもしくはフィルムコーティングを施した錠剤、多重圧縮錠剤または多層錠剤でありうる。液体の経口剤形としては、例えば水性または非水性の溶液剤、乳濁剤、懸濁剤、および非泡起性の顆粒から再調製される溶液剤および／または懸濁剤があり、これらは適当な溶剤、防腐剤、乳化剤、懸濁化剤、希釈剤、甘味剤、着色剤、矯味矯臭剤などを含有する。本発明の化合物を非経口的に注入しようとする場合、それらは例えば無菌の等張溶液の形であり得る。また、本発明の化合物を吸入によって投与しようとする場合、それらは乾燥エアロゾル剤または水性もしくは一部水性の溶液剤に製剤化することができる。さらに、本発明の化合物を経口剤形中に配合する場合、かかる剤形は該化合物の胃腸管への即時放出、または胃腸管への制御および／または持続放出を与えるものであり得る。多種多様な制御および／または持続放出製剤が当業者には公知であり、本発明の製剤との関連において用いられる。例えば、経口剤形にコーティングを施したり、本発明の化合物を制御および／または持続放出マトリックス中に配合することで、制御および／または持続放出が得られる。経口剤形の調製に用いられる製剤上許容される担体および賦形剤の特定の例は、Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Associa tion（1986）に記載されており、それをここに参考として組み入れる。固体の経口剤形を調製するための技法および組成物は、Marcel Dekker，Inc．から発行された Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets（Lieberman，Lachman and Schwar tz編）第２版に記載されており、それをここに参考として組み入れる。また、錠剤（圧縮および成型）、カプセル剤（硬質および軟質ゼラチン）および丸剤を調製するための技法および組成物は、Remington's Pharmaceutical Sciences(Arth ur Osol編)，1553-1593（1980）に記載されており、それをここに参考として組み入れる。液体の経口剤形を調製するための技法および組成物は、Marcel Dekke r，Inc．から発行された Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems（Li eberman，Rieger and Banker編）に記載されており、それをここに参考として組み入れる。本発明の化合物を注入（例えば、連続輸液またはボーラス注射）による非経口投与のために配合する場合、非経口投与用の製剤は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液の形にすることができ、この種の製剤はさらに製剤上必要な添加剤、例えば安定化剤、懸濁化剤、分散助剤などを含んでいてよい。また、本発明の化合物は注射用製剤として用時調製するための粉剤の形であってもよい。本発明の化合物の投与量は、とりわけ、治療すべき苦痛の原因、症状の重症度、投与経路、投与回数、有害な副作用の存在、用いる個々の化合物などに左右される。本発明の種々の化合物はまた強力なＰＤＥＶ阻害剤であり、これは平滑筋の細胞増殖を低下させ、かつ肺の血管拡張を高める。ＰＤＥ IV 阻害とＰＤＥＶ阻害の組合せは、ある種の医学的症状、例えば再狭窄と関連疾患の抑制のために有効であると考えられる。本発明のＰＤＥ IV 阻害化合物は、以下の実施例に記載する方法によりそのＰＤＥ IV 阻害効果について試験することができ、実施例にはウシ気管平滑筋から単離したＰＤＥ IV を阻害する化合物の能力が示される。好適な実施態様の説明次の実施例は本発明の種々の面を例示するものであり、いかなる場合も請求の範囲を制限するものと解釈されるべきでない。実施例１ 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)- 8- イソプロピル-6- チオキサンチン a) 3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル尿素水 440mlとTHF 50mlに溶解した3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジルアミン炭酸塩 31.54g とシアン酸ナトリウム8.30gの溶液に、15分かけて5NHCl 25ml を添加した。３時間後、さらにシアン酸ナトリウム 0.83gを加えた。20時間後、固形分を集め、5%のTHF を含有する水で洗い、2.2 リットルのエーテル中に懸濁し、回収して表題化合物(28.55g)を融点 134-5℃の白色固体として得た。 b) 1- シアノアセチル-3-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-尿素 98% シアノ酢酸 9.64gと無水酢酸 38ml を65℃で１時間加熱した。THF 280ml 中に懸濁した3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル尿素 27.93g の微細な懸濁液を添加した。65℃で４時間後、THF を留去し、残留物をトルエン150m lで希釈し、固形分を５℃で回収して表題化合物(25.44g)を白色固体として得た。濾液を蒸発乾固させ、残留物をトルエンに懸濁し、追加の表題化合物(4.89g) を回収した。 c) 6- アミノ-1-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-ウラシル 1-シアノアセチル-3-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-尿素 30.33gを2-プロパノール 200ml中に懸濁した液を、2-プロパノール 67ml 中に溶解した水酸化カリウム 1.28gの溶液に加え、還流下で１時間加熱した。最初は溶解したが、あとで沈殿が生じた。固形分を５℃で回収し、洗浄して粗製の表題化合物 21.10g を得た。濾液を蒸発乾固させ、水 100mlと少量のジエチルエーテルで処理し、pH 6に酸性化した。結晶を回収し、温めたメタノール中に懸濁し、５ ℃で回収して追加の生成物 4.66gを得た。 d) 6- アミノ-1-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-5-ニトロソ - ウラシル酢酸 300ml中に溶解した1-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル )6-アミノウラシル 20.53g の溶液に、4N亜硝酸ナトリウム溶液 15.81mlを65〜7 0℃で８分かけて滴下した。30分後、この懸濁液を室温まで冷却し、固形分を回収し、水で洗浄して表題化合物(19.36g)をピンクの結晶として得た。濾液を蒸発乾固させ、残留物を水 100ml中に懸濁し、固形分を回収して追加の生成物1.98g を得た。 e) 6- アミノ-1-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-5-イソブチリルアミノ- ウラシル DMF 80ml中の6-アミノ-1-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)- 5-ニトロソ- ウラシル 4.32g、重炭酸ナトリウム 2.00gおよび無水イソ酪酸2.98 ml を、中性ラネーニッケル 1.68gにより室温で水素化した。９時間後、混合物を60℃に15分加熱した。ニッケルを濾過し、濾液を蒸発乾固させ、残留物を水 1 00ml中に懸濁した。pH 8で固形分を回収して粗製の表題化合物(4.64g)を白色固体として得た。 f) 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-8-イソプロピル- キサンチン 6-アミノ-1-(3-シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-5-イソブチリルアミノ- ウラシル 4.64g、水 100mlおよび1N NaOH 50mlの混合物を還流下で１時間加熱した。この溶液を濾過し、木炭 0.25gで処理し、再度濾過した後にpH 8 へと中和した。固形分を回収し、乾燥し、THF から再結晶して表題化合物 (4.03g)を融点 282-3℃の白色固体として得た。 g) 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチン 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-8-イソプロピル- キサンチン 3.59gおよび五硫化リン 2.40gをピリジン 60ml 中で還流下に８時間加熱した。-5℃で2N NaOH 11.9mlを徐々に添加した。この懸濁液を蒸発乾固させ、残留物を水 100ml中に懸濁し、pH 8に中和し、その後固形分を回収し、洗浄し、乾燥して粗製の6-チオキサンチン(3.45g)を得た。濾過クロマトグラフィー(SiO₂,1 5g; クロロホルム)により精製して固形分を得、これをHCl の添加によりpH 6.5 にしてNaOHから再沈殿させ、回収し、洗浄し、乾燥すると、表題化合物の一水和物(3.38g)が融点 192-3℃の白色固体として得られた。元素分析：C₂₁H₂₆N₄O₃S.H₂O 計算値％ C 58.31 H 6.52 N 12.95 O 14.80% 実測値％ C 58.60 H 6.36 N 12.91 O 15.06% 実施例２ 3-(4- クロロベンジル)-6-チオキサンチン a) 4- クロロベンジル尿素水１リットル中の95% 4-クロロベンジルアミン 100mlおよびシアン酸ナトリウム 51.53gを、4N HCl 194mlで25℃以下にて処理した。追加のシアン酸ナトリウム(5.15g)を加え、pHを7.3 に調整した。３日後、固形分を回収し、水で洗い、乾燥して表題化合物(131.1g)を融点 186-9℃の白色固体として得た。 b) 1-(4- クロロベンジル)-3-シアノアセチル- 尿素 98% シアノ酢酸 68.7gおよび無水酢酸 155mlを65℃に30分保持した。4-クロロベンジル尿素（132.9g）を10分かけて少しずつ加えた。70〜75℃で２時間後、追加の無水酢酸(25ml)を加えた。さらに15分後、トルエン 90ml を加え、室温まで冷却し、固形分を回収し、トルエンで洗浄して表題化合物(155.60g)を融点203-6 ℃の白色固体として得た。 c) 6- アミノ-1-(4-クロロベンジル)-ウラシル 2-プロパノール 230ml中の1-(4- クロロベンジル)-3-シアノアセチル- 尿素15 5.6g を、2-プロパノール 450mlに溶解したKOH 14.0g に加え、還流下で１時間加熱した。冷却後固形分を回収し、洗浄して表題化合物(153.4g)を融点 238-41 ℃の白色固体として得た。 d) 6- アミノ-1-(4-クロロベンジル)-5-ニトロソ- ウラシル酢酸 825ml中に懸濁した6-アミノ-1-(4-クロロベンジル)-ウラシル 165gに、6 5〜70℃で45分かけて4N亜硝酸ナトリウム 157.6mlを加えた。70℃でさらに15分反応させた後、この反応混合物を室温まで冷却し、ピンクの固体を回収し、80% 酢酸と水で洗浄して、融点が320 ℃より高い表題化合物(150.9g)を得た。 e) 6- アミノ-1-(4-クロロベンジル)-5-ホルミルアミノ- ウラシル 6-アミノ-1-(4-クロロベンジル)-5-ニトロソ- ウラシル 150.0g をギ酸 1.2リットル中に70℃で溶解し、温度を75〜80℃に保ちながら亜鉛粉末 76.84g を少しずつ加えて1.5 時間にわたり処理した。温度を55℃に下げた後、固形分を濾過し、残留物をギ酸 800ml中に懸濁し、再び固形分を濾過した。濾液を蒸発させて固体を得、これを水 350ml中に懸濁した。固形分を回収し、洗浄し、乾燥して表題化合物(149.1g)を融点 274-8℃の白色固体として得た。 f) 3-(4- クロロベンジル)-キサンチン 6-アミノ-1-(4-クロロベンジル)-5-ホルミルアミノ- ウラシル(25.58g)を2NNa OH 200ml と水 150ml中で還流下に３時間加熱した。木炭(2.6g)を加え、濾過後この溶液をpH7.0 へと中和し、固形分を集めた。HCl で中和することでNaOHから再沈殿させ、表題化合物 22.91g を融点 304-10 ℃の白色固体として得た。 g) 3-(4- クロロベンジル)-6-チオキサンチン 3-(4- クロロベンジル)-キサンチン 11.06g および五硫化リン 11.34g をピリジン 112ml中で還流下に４時間加熱した。10℃に冷却後、2N NaOH 52mlを30分かけて添加した。この混合物を蒸発乾固させ、残留物を水 120ml中に懸濁してpH 7 .5に調整した。その後固形分を回収し、1N NaOH 150ml 中に再溶解し、木炭0.6g で処理し、濾過後pH7.0 に中和した。固形分を再度回収すると、融点313-7℃の表題化合物(10.07g)が得られた。元素分析：C₁₂H₉ClN₄OS 計算値％ C 49.23 H 3.10 N 19.14 S 10.95% 実測値％ C 49.05 H 2.93 N 19.00 S 11.28% 実施例３ 8- イソプロピル-3-(4-ピコリル)-6-チオキサンチン a) 4- ピコリル尿素水 50ml に溶解した4-ピコリルアミン 2.53ml とシアン酸ナトリウム 1.66gの溶液に5N HCl 5.1mlを加えた。５時間後、さらにシアン酸ナトリウム 0.166g を加え、pHを7.5 へと調整した。18時間後、反応混合物を蒸発乾固させ、残留物を温めた2-プロパノール 100mlで抽出した。濾液を濃縮し、冷却し、固形分を回収して融点 194-6℃の表題化合物(3.03g)を得た。第２および第３の収穫物としてさらに0.63g を単離することができた。 b) 1- シアノアセチル-3-(4-ピコリル)-尿素シアノ酢酸 2.20gと無水酢酸 8.7mlを65℃に１時間保ち、THF 27ml中に懸濁した4-ピコリル尿素 3.65gを加えた。65℃で２時間後、この混合物を冷却し、固形分を集め、THF で洗って表題化合物(3.84g)を融点 193-5℃の白色固体として得た。 c) 6- アミノ-1-(4-ピコリル)-ウラシル 2-プロパノール 40ml に溶解したKOH 0.24g に60℃で1-シアノアセチル-3-(4- ピコリル)-尿素 3.91gを加えた。還流下で1.5 時間後、この混合物を冷却し、固形分を集め、洗浄し、乾燥して融点 163-8℃の粗製表題化合物(2.98g)を得た。 d) 6- アミノ-5- ニトロソ-1-(4-ピコリル)-ウラシル水 25ml および5N HCl 4mlに溶解した6-アミノ-1-(4-ピコリル)-ウラシル2.35 gに4N亜硝酸ナトリウム 2.6mlを加えた。15分後、1N重炭酸ナトリウム10ml を加えた。固形分を集め、洗浄し、乾燥して表題化合物(2.15g)を得た。 e) 8- イソプロピル-3-(4-ピコリル)-キサンチン 6-アミノ-5- ニトロソ-1-(4-ピコリル)-ウラシル 2.07g、重炭酸ナトリウム 1 .34g）および無水イソ酪酸 2.0mlをDMF 40ml中で中性ラネーニッケル 0.83gにより室温で水素化した。２時間後水素化が完結し、60℃に15分保持した。ニッケルを濾過し、濾液を蒸発乾固させた。残留物を1N NaOH 40mlと水 150ml中で還流下に20分加熱し、木炭 0.2g を加え、この溶液を濾過し、真空濃縮してpH7.5 に中和した。固形分を集め、洗浄し、乾燥して表題化合物(1.48g)を融点 305-7℃の白色固体として得た。 f) 8- イソプロピル-3-(4-ピコリル)-6-チオキサンチン 8-イソプロピル-3-(4-ピコリル)-キサンチン 1.19gおよび五硫化リン 1.07gをピリジン 25ml 中で還流下に４時間加熱した。５℃に冷却後、2N NaOH 5.28ml(1 0.6mM)を添加した。固形分を濾過し、ピリジンで洗った。濾液を蒸発乾固させ、残留物を水に懸濁し、固形分を集め、1N NaOH 40ml中に再溶解し、木炭0.2g で処理し、濾過後pH7.5 に中和した。固形分を回収し、洗浄し、乾燥すると、表題化合物(0.99g)が融点 310-14 ℃（分解）の白色固体として得られた。元素分析：C₁₄H₁₅N₅OS + 0.89w/w% H₂O 計算値％ C 55.29 H 5.07 N 23.03 O 6.05% 実測値％ C 55.38 H 5.03 N 23.11 O 6.10% 実施例４ 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチン a) (3- クロロベンジル)尿素水 40ml とTHF 40mlに溶解した3-クロロベンジルアミン 5.50ml にシアン酸ナトリウム 3.22gを加え、続いて1N HCl 48.6ml を滴下した。３日後、この混合物を蒸発乾固させ、残留物を温めたTHF で抽出し、濾液を再度蒸発乾固させた。残留物をジエチルエーテル 180mlに懸濁し、固形分を回収して白色固体の表題化合物(7.91g)を得た。 b) 1-(3- クロロベンジル)-3-シアノアセチル- 尿素 98% シアノ酢酸 3.76gと無水酢酸 14ml を65℃で１時間加熱した。THF 55mlに溶解した(3- クロロベンジル)尿素 7.73gを加え、この混合物を65℃に４時間保持した。THF を真空除去し、残留物をトルエン 50ml で希釈した。固形分を回収し、洗浄して白色固体の表題化合物(8.94g)を得た。 c) 6- アミノ-1-(3-クロロベンジル)-ウラシル 2-プロパノール 80ml に懸濁した1-(3- クロロベンジル)-3-シアノアセチル- 尿素 10.17g(40.4mM)を2-プロパノール 40ml に溶解したKOH 5.7gに加え、還流下で１時間加熱した。冷却後、固形分を集め、洗浄して灰白色固体の粗製表題化合物(9.07g)を得た。 d) 6- アミノ-1-(3-クロロベンジル)-5-ニトロソ- ウラシル酢酸 92ml に懸濁した6-アミノ-1-((3- クロロベンジル)-ウラシル 6.29g(25m M)に4N亜硝酸ナトリウム 6.4mlを65〜70℃で加えた。30分後、この混合物を冷却し、固形分を集め、酢酸と水で洗浄し、乾燥して、ピンク色をした固体の表題化合物(5.21g)を得た。 e) 6- アミノ-1-(3-クロロベンジル)-5-イソブチリルアミノ- ウラシル 6-アミノ-1-(3-クロロベンジル)-5-ニトロソ- ウラシル 4.09gをDMF 45mlに溶解し、炭酸ナトリウム 2.54gと中性ラネーニッケル 0.88gで処理して36時間水素化した。無水イソ酪酸(3.6ml)を加え、この混合物を50℃で２時間振とうした。ラネーニッケルを濾過し、濾液を蒸発乾固させ、残留物を水 100mlに懸濁してpH を８に調整した。固形分を集め、洗浄し、乾燥して灰白色固体の粗製表題化合物 (4.71g)を得た。 f) 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル- キサンチン 6-アミノ-1-(3-クロロベンジル)-5-イソブチリルアミノ- ウラシル 4.70gを1N NaOH 50ml中で還流下に30分加熱した。この溶液を木炭 0.3g で２回処理し、濾過し、濾液をpH7.5 に調整した。固形分を集め、洗浄し、乾燥して表題化合物(3 .52g)を融点 319-21 ℃の白色固体として得た。 g) 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチン 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル- キサンチン 3.19gおよび五硫化リン 2.67g をピリジン 35ml 中で還流下に５時間加熱した。-5℃に冷却後、2N NaOH 13.2ml(26.4mM)を15分かけて添加した。この反応混合物を蒸発乾固させ、残留物を水に懸濁してpHを7.5 に調整し、固形分を回収した。生成物を1N NaOH 100ml 中に再溶解し、木炭(5%)で処理し、濾過後pH7.5 に中和した。固形分を回収し、洗浄し、乾燥すると、粗製キサンチン 2.29gが得られた。この生成物をクロロホルム 250mlに溶解し、シリカゲル 15gを通して濾過した。集めた物質をHCl で中和することでNaOHから再沈殿させると、表題化合物(2.38g)が融点 218-20 ℃の灰白色固体として得られた。元素分析：C₁₅H₁₅ClN₄OS 計算値％ C 53.81 H 4.52 N 16.73% 実測値％ C 53.74 H 4.52 N 16.64% 実施例５ 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン a) 3-(4- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチン 3-(4- クロロベンジル)-8-イソプロピル- キサンチン 12.75g および五硫化リン 10.67g をピリジン 200ml中で還流下に5.5 時間加熱した。-5℃に冷却後、2N NaOH 52.5mlを15分かけて添加した。固形分を濾過し、濾液を真空下で蒸発乾固させた。残留物を水 250mlに懸濁し(pH7)、固形分を回収して洗った。粗製生成物を2N NaOH 200ml 中に再溶解し、木炭 1.4g で処理し、濾過後5N HCl 38ml で pH7 に中和した。固形分を回収し、洗浄し、乾燥すると、粗製表題化合物(12.36 g)が得られた。この生成物をクロロホルムに溶解し、シリカゲル 60gを通して濾過すると、表題化合物(10.89g)が融点 235-6℃（アセトンから）の灰白色固体として得られた。元素分析：C₁₅H₁₅ClN₄OS 計算値％ C 53.81 H 4.52 N 16.73 O 4.78 実測値％ C 53.79 H 4.47 N 16.74 O 4.77 b) 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン 3-(4- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチン 5.02gおよび70% エチルアミン水溶液 60ml を450ml 反応器に入れて、150 ℃に加熱した。圧力が 270psiに上昇した。20時間後、反応混合物を冷却し、濾過して蒸発乾固させた。残留物を水に取り上げ、2N HClでpH2 に酸性化し、2N NaOH でpH7 に中和した。固形分を集め、洗浄し、メタノール 20ml とTHF 20mlと2N NaOH 100ml の混合溶媒に再溶解し、木炭 0.5g で処理し、濾過した。メタノールとTHF を真空除去し、この溶液を5N HClでpH7 に中和した。非晶質の固体を集め、洗浄し、乾燥して粗製生成物(5.70g)を得た。メタノールから再結晶すると、表題化合物(4.42g)が融点 187-196℃の灰白色固体として得られた。元素分析：C₁₇H₂₀ClN₅O (1.4% のメタノールと1.5%のHCl を含む) 計算値％ C 57.85 H 5.88 N 19.67 O 5.27 実測値％ C 57.61 H 5.75 N 19.67 O 5.27 実施例６ 3- シクロプロピルメチル-8- イソプロピル-N⁶-プロピル- イソグアニン 3-シクロプロピルメチル-8- イソプロピル-6- チオキサンチン 5.29gおよびプロピルアミン 50ml を450ml 反応器に入れて、150 ℃に加熱した。10時間後、この溶液を蒸発乾固させ、残留物をメタノール 200mlに溶解し、木炭 0.26gで処理し、濾過後に濃縮した。結晶を集め、洗浄し、乾燥して、融点 208-10 ℃の灰白色結晶の表題化合物(4.81g)を得た。元素分析：C₁₅H₂₃N₅O 計算値％ C 62.26 H 8.01 N 24.20 実測値％ C 62.34 H 8.06 N 23.89 塩酸塩も融点 170-202℃の灰白色固体として得られた。実施例７ 8- シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン 8-シクロプロピル-3- エチル-6- チオキサンチン 5.91gおよび70% エチルアミン水溶液 100mlを450ml 反応器に入れて、150 ℃に加熱した。６時間後、この溶液を濾過し、蒸発乾固させた。残留物をメタノールに懸濁し、回収し、洗浄し、乾燥して、融点 260℃（昇華）／301-5 ℃の灰白色固体の表題化合物(5.67g)を得た。塩酸塩も融点 205-50 ℃の灰白色固体として得られた。さらに、上述した方法と同様の方法を用いて次の化合物を製造した。実施例８ 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン、融点 195-7℃の灰白色固体。実施例９ 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン、融点 237-9℃ の灰白色固体。実施例10 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン、融点 220-3℃の灰白色固体。実施例11 3-(3- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオキサンチンキサンチン 3.66g（12mM）および五硫化リン 3.20g（14.4mM）をピリジン57ml 中で４時間還流した。温度を10℃以下に保ちながら、2N NaOH 15.8mlを攪拌下にゆっくり加えた。固形分を濾過してピリジンで洗った。濾液を蒸発乾固させ、残留物を水 100mlに懸濁した。固形分を回収し、2N NaOH 50mlに溶解し、木炭 3 .80gで処理し、濾過し、5N HClでpH6.5 に酸性化した。固形分を回収し、水で洗って粗製チオキサンチン 3.43g(89.1%)を得た。メタノールから２回再結晶を行うと、融点 290-3℃のチオキサンチン 2.41g(62.6%)が得られた。元素分析：C₁₄H₁₃ClN₄OS 計算値％ C 52.42 H 4.08 N 17.46 O 4.99 実測値％ C 52.61 H 4.05 N 17.49 O 5.02 実施例12 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシ- ベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニンキサンチン 1.20g(3mM)をオキシ塩化リン 12ml 中で30分還流した。過剰のオキシ塩化物を真空除去し、トルエンを用いて２回繰り返した。残留物をTHF 20ml に溶解し、冷やしながら70% エチルアミン水溶液 12ml（150mM）で処理した。２相混合物を室温で60時間攪拌し、真空下で蒸発乾固させた。残留物を水/ エーテルに取り上げ、エーテル相を1N NaOH で洗って蒸発させた。残留物(0.95g)をシリカゲル９g でクロロホルムを使ってクロマトグラフィーにかけた。画分６〜13 を合わせ(0.57g)、水性エーテルから結晶化すると、融点 110-5℃のイソグアニン 0.28g(21.0%)が得られた。元素分析：C₂₃H₃₁N₅O₃-H₂O 計算値％ C 62.28 H 7.50 N 15.79 O 14.43 実測値％ C 61.98 H 7.53 N 15.55 O 14.69 実施例13 ＰＤＥ IV、ＰＤＥ IIIおよびＰＤＥＶ阻害活性のプロトコールを以下に説明する。III 型ホスホジエステラーゼ酵素の単離法 III 型ＰＤＥは、Weishaar，R.E.ら，Biochem．Pharmacol.，35:787，1986 に記載された方法と同様の方法を用いてヒト血小板から単離する。簡単に述べると、１〜２ユニットの血小板を等容量のバッファー（2mM 酢酸マグネシウム、1mM ジチオトレイトールおよび5mM Na₂EDTA を含有する20mM Tris-HCl，pH7.5）に懸濁する。このバッファーにはプロテイナーゼ阻害剤であるフッ化フェニルメチル -スルホニル（PMSF）を200 μM の最終濃度で加えておく。この懸濁液をポリトロンを使ってホモジナイズし、ホモジネートを100,000 ×g で60分遠心する。これと、その後のすべての手順を０〜４℃で行う。次に、上清を４枚のガーゼを通して濾過し、バッファーＢ（1mM 酢酸マグネシウム、1mM ジチオトレイトールおよび200 μM PMSFを含有する20mM Tris-HCl，pH7.5）で予め平衡にしておいたDE AE-Trisacryl Mカラムにかける。サンプルをアプライした後、カラムを数倍のベットボリュームのバッファーＢで洗い、その後２種類の連続する直線NaCl勾配(0 .05-0.15M，合計 300ml; 0.15-0.40M，合計 200ml)を用いてカラムから異なる型のＰＤＥを溶出させる。５ml画分を集め、サイクリックＡＭＰおよびサイクリックＧＭＰＰＤＥ活性についてアッセイする。ＰＤＥ III活性を含有する画分をプールし、４ＬのバッファーＢで一夜透析する。その後、透析したＰＤＥ IIIをもとの容量の１０％になるまで濃縮し、エチレングリコールモノエチルエーテルで５０％に希釈し、−２０℃で保存する。ＰＤＥ IIIは一般的にはその活性をほとんどまたは全く失うことなく最高４週間保存することが可能である。III 型ＰＤＥ活性の測定酵素活性は、Thompson，W.J.ら，Adv．Cyclic Nucleotide Res.，10:69，1979 に記載されるとおりに、[³H]- サイクリックＡＭＰの加水分解を測定することによりアッセイする。このアッセイで用いるサイクリックＡＭＰの濃度は0.2 μM であり、これはＫ_m値に近似する。タンパク質の濃度は、インキュベーション期間中に利用可能な基質の１５％以下が確実に加水分解されるように調整する。試験化合物はすべてジメチルスルホキシドに溶解する（最終濃度 2.5％）。この濃度のジメチルスルホキシドは酵素活性を約１０％だけ阻害する。IV 型ホスホジエステラーゼ酵素の単離法 IV型ＰＤＥは、Silver，P.J.ら，Eur．J．Pharmacol.，150:85，1988に記載された方法と同様の方法を用いてウシ気管平滑筋から単離する。簡単に述べると、ウシ気管から得られた平滑筋を細かく切り刻み、ポリトロンを使って10倍容量の抽出バッファー（10mM Tris-酢酸，pH7.5、2mM 塩化マグネシウム、1mM ジチオトレイトールおよび2,000 ユニット/ml のアプロチニンを含有する）中でホモジナイズする。これと、その後のすべての手順を０〜４℃で行う。ホモジネートを音波処理した後、48,000×g で30分遠心する。得られた上清を、酢酸ナトリウムとジチオトレイトールで予め平衡にしておいたDEAE-Trisacryl Mカラムにかける。サンプルをアプライした後、カラムを酢酸ナトリウム／ジチオトレイトールで洗い、その後異なる型のＰＤＥをカラムから直線状のTris-HCl/NaCl 勾配を用いて溶出する。IV型ＰＤＥを含有する画分を集め、透析し、もとの容量の１４％になるまで濃縮する。濃縮した画分をエチレングリコールで５０％に希釈し、−２０℃で保存する。IV 型ＰＤＥ活性の測定酵素活性は、Thompson，W.J.ら，Adv．Cyclic Nucleotide Res.，10:69，1979 に記載されるとおりに、[³H]- サイクリックＡＭＰの加水分解を測定することによりアッセイする。このアッセイで用いるサイクリックＡＭＰの濃度は0.2 μM であり、これはＫ_m値に近似する。タンパク質の濃度は、インキュベーション期間中に利用可能な基質の１５％以下が確実に加水分解されるように調整する。試験化合物はすべてジメチルスルホキシドに溶解する（最終濃度 2.5％）。この濃度のジメチルスルホキシドは酵素活性を約１０％だけ阻害する。Ｖ型ホスホジエステラーゼ酵素の単離法酵素単離の手順：Ｖ型ＰＤＥは、Weishaarら，Hypertension，15:528，1990に記載された方法と同様の方法を用いて単離する。簡単に述べると、１〜２ユニットの血小板をポリトロンを使って等容量のバッファーＡ（2mM 酢酸マグネシウム、1mM ジチオトレイトールおよび5mM Na₂EDTA を含有する20mM Tris-HCl，pH7.5）に懸濁する。このバッファーにはプロテイナーゼ阻害剤であるフッ化フェニルメチルスルホニル (PMSF)を200 μM の最終濃度で加えておく。これと、その後のすべての手順を０〜４℃で行う。次にホモジネートを100,000 ×g で60分遠心する。次に、上清を分離し、４枚のガーゼを通して濾過し、DEAE-Trisacryl Mカラムにかける。このカラムを数倍のベットボリュームのバッファーＢ（2mM 酢酸マグネシウム、1mM ジチオトレイトールおよび200 μM PMSFを含有する20mM Tris-HCl，pH7.5）で洗い、２種類の連続する直線NaCl勾配（0.05-0.15M，合計 300ml; 0.15-0.40M，合計 200ml）を用いて溶出させる。５ml画分を集め、サイクリックＡＭＰおよびサイクリックＧＭＰＰＤＥ活性についてアッセイする。ＰＤＥＶ活性を含有する画分をプールし、４ＬのバッファーＣ（2mM 酢酸マグネシウムとプロテイナーゼ阻害剤を含有する20mM Tris-HCl，pH7.5）で一夜透析する。その後、透析したＰＤＥＶをもとの容量の１０％になるまで濃縮し、エチレングリコールモノエチルエーテルで５０％に希釈し、−２０℃で保存する。ＰＤＥＶは一般的にはその活性をほとんどまたは全く失うことなく最高４週間保存することが可能である。Ｖ型ＰＤＥ活性の測定酵素活性は、Thompsonら（Thompson，W.J.，Teraski，W.L.，Epstein，P.N.， Strada，S.J.：Adv．Cyclic Nucleotide Res.，10:69，1979）に記載されるとおりに、[³H]- サイクリックＧＭＰの加水分解を測定することによりアッセイする。このアッセイで用いるサイクリックＧＭＰの濃度は0.2 μM であり、これはＫ_m 値に近似する。タンパク質の濃度は、インキュベーション期間中に利用可能な基質の１５％だけが確実に加水分解されるように調整する。試験化合物はすべてジメチルスルホキシドに溶解する（最終濃度 2.5％）。この濃度のジメチルスルホキシドは酵素活性を約１０％だけ阻害する。基準のＶ型ＰＤＥ阻害剤ザプリナスト(zaprinast)を各アッセイにおいて評価する。各化合物を次の濃度範囲、すなわち 0.1、1、10、100 μM にわたって試験し( n=1)、ＩＣ₅₀を５つの適当な濃度を用いて測定する(n=2)。実施例14 上記の手順にしたがって、実施例のいくつかの化合物およびロリプラムについてＰＤＥ III、ＰＤＥ IV およびＰＤＥＶ阻害ＩＣ₅₀を測定し、比較した。結果を以下の表１に示す。上記のことからわかるように、本発明の化合物は高レベルのＰＤＥ IV 阻害をもたらし、同時に比較的低レベルのＰＤＥ III阻害をもたらす。したがって、本発明の化合物はＰＤＥ IV 阻害に対する選択性を与える。本発明を特定の化合物の製造および使用により例示してきたが、本発明の精神または範囲から逸脱することなく、本発明を変更および修飾しうることが明らかだろう。

【手続補正書】【提出日】１９９７年７月８日【補正内容】請求の範囲１．次式：または [各式中、 Q₃、Q_6a、Q_6bおよびQ₈は独立して結合、C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンであり、１個またはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、またはシクロアルコキシ基でさらに置換されていてもよく、 R₃はハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルコキシ、ニトロ、シアノまたはカルボキシで任意に置換されたアリールであり、そして R_6a、R_6bおよびR₈は独立して水素、アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルコキシ、ニトロ、シアノまたはカルボキシで任意に置換されていてもよい、ただし、式(II)においてQ₃R₃は水素でもメチルでもない] で表される化合物。２．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが分枝鎖である、請求項１に記載の化合物。３．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが非分枝鎖である、請求項１に記載の化合物。４．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが１個またはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ基、またはシクロアルキル基でさらに置換されている、請求項１に記載の化合物。５．R₃、R_6a、R_6bおよびR₈のうちの１つがフェニルおよびナフチルよりなる群から選ばれるアリールである、請求項１に記載の化合物。６．R_6a、R_6bおよびR₈のうちの１つがピリジル、ピリミジル、キノリルおよびイソキノリルよりなる群から選ばれるヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。７．次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。８．請求項１に記載の化合物と適切な担体とを含有する医薬組成物。９．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項８に記載の医薬組成物。 10．治療上有効量の請求項１に記載の化合物を患者に投与することを含んでなる、ＰＤＥ IV を阻害することにより患者を治療する方法。 11．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶-プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項10に記載の方法。 12．治療上有効量の請求項１に記載の化合物を患者に投与することを含んでなる、喘息、アレルギー、うつ状態、および鼻炎よりなる群から選ばれる病的状態にある患者の治療方法。 13．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項12に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/52 ＡＥＤＡ６１Ｋ 31/52 ＡＥＤＣ０７Ｄ 473/18 Ｃ０７Ｄ 473/18 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者チェイシン，マークアメリカ合衆国 07726 ニュージャージー州，マナラパン，ウェインコート３

Claims

【特許請求の範囲】１．次式：または [各式中、 Q₃、Q_6a、Q_6bおよびQ₈は独立して結合、C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンであり、そして R₃、R_6a、R_6bおよびR₈は独立して水素、アリールまたはヘテロアリールであり、該アリールまたはヘテロアリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノおよびカルボキシで置換されていてもよい、ただし、式(I)または(II)においてQ₃R₃は水素でもメチルでもなく、そして式(I)においてR₃とR₈の少なくとも１つはアリールまたはヘテロアリールである] で表される化合物。２．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが分枝鎖である、請求項１に記載の化合物。３．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが非分枝鎖である、請求項１に記載の化合物。４．C_1-8アルキレン、C_2-8アルケニレンおよびC_2-8アルキニレンのうちの１つが１個またはそれ以上のハロゲン、ヒドロキシまたはアルコキシ基、またはシクロアルキル基でさらに置換されている、請求項１に記載の化合物。５．R₃、R_6a、R_6bおよびR₈のうちの１つがフェニルおよびナフチルよりなる群から選ばれるアリールである、請求項１に記載の化合物。６．R₃、R_6a、R_6bおよびR₈のうちの１つがピリジル、ピリミジル、キノリルおよびイソキノリルよりなる群から選ばれるヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物。７．次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 8-イソプロピル-3-(4-ピリジルメチル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。８．請求項１に記載の化合物を含有する医薬組成物。９．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 8-イソプロピル-3-(4-ピリジルメチル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項８に記載の医薬組成物。 10．選択的なＰＤＥ IV 阻害を必要としている患者に、有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含んでなる、選択的にＰＤＥ IV を阻害する方法。 11．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 8-イソプロピル-3-(4-ピリジルメチル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項10に記載の方法。 12．有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含んでなる、喘息、アレルギー、炎症、うつ状態、痴呆、アトピー疾患、鼻炎および異常に高い生理学的レベルのサイトカインと関連した症状よりなる群から選ばれる病的状態にある患者の治療方法。 13．前記の化合物が次の化合物： 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ - キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-6-チオ- キサンチン； 8-イソプロピル-3-(4-ピリジルメチル)-6-チオ- キサンチン； 3-(3- クロロベンジル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 3-(4- クロロベンジル)-N⁶- エチル-8- イソプロピル- イソグアニン； 3-(シクロプロピルメチル)-8-(1- メチル- エチル)-N⁶- プロピル- イソグアニン塩酸塩； 8-シクロプロピル-3,N⁶-ジエチル- イソグアニン塩酸塩； 3-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-6-チオ- キサンチン； 3-(4- クロロフェニル)-8-イソプロピル-6- チオ- キサンチン； 8-(3- シクロペンチルオキシ-4- メトキシベンジル)-3-エチル-6- チオ- キサンチン； 8-(3,4- ジメトキシベンジル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチン；および 8-(2- ナフチルメチル)-3-プロピル-6- チオ- キサンチンよりなる群から選ばれる、請求項12に記載の方法。