JPH11276199A - 電解質測定用試薬組成物 - Google Patents

電解質測定用試薬組成物

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JPH11276199A
JPH11276199A JP10086074A JP8607498A JPH11276199A JP H11276199 A JPH11276199 A JP H11276199A JP 10086074 A JP10086074 A JP 10086074A JP 8607498 A JP8607498 A JP 8607498A JP H11276199 A JPH11276199 A JP H11276199A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】液状試薬として流通に耐えうる、高い溶液安定
性を有し、さらに、定量性、正確性に優れた電解質の酵
素的測定用試薬組成物を提供する。 【解決手段】（ａ）不活性化型α−アミラーゼ、（ｂ）
キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質および（ｄ）シ
クロデキストリン誘導体、または該組成物に、さらに、
ＳＨ基含有化合物またはその塩を含有するカルシウムイ
オンまたは塩素イオンなどの電解質測定用試薬組成物で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、体液、特に血液ま
たは尿中の電解質、例えばカルシウムイオン、塩素イオ
ンなどの電解質を測定する試薬組成物に関し、更に詳細
にはα−アミラーゼ活性を利用した電解質を測定する試
薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体内の電解質、例えばカルシウムイオ
ン、塩素イオンなどの濃度は、通常、厳密に代謝調節さ
れていることから、体液中の電解質の測定は、生体機能
のバロメーターとして、生化学的臨床検査の中で最も一
般的な分析であり、これらを測定することにより、各種
疾患の診断が行われる。たとえば、血清中のカルシウム
イオン量の測定は、低カルシウム血症として、低タンパ
ク血症、低リン血症、腎炎、ネフローゼ、ビタミンＤ欠
乏症、副甲状腺機能低下症、クル病等の疾患、高カルシ
ウム血症としては、骨腫瘍、アジソン病、肺気腫、副甲
状腺機能亢進症、腎不全等の疾患の診断に用いられる。
また、血清中の塩素イオン量の測定は、低クロール血症
として、低張性脱水症、グルココルチコイド過剰症、呼
吸性アシドーシス等の疾患、高クロール血症としては、
高張性脱水症、尿細管性アシドーシス、呼吸性アルカロ
ーシス等の疾患の診断に用いられる。
【０００３】α−アミラーゼ活性を利用した電解質測定
方法としては、カルシウムイオンでは、カルシウムイオ
ンにより不活性化型α−アミラーゼが活性化され、糖基
質を分解し、分解された生成物を測定することにより、
体液中のカルシウムイオンを測定するものである（特公
平6-87798 号公報など) 。また、塩素イオンでは、同様
に、塩素イオンにより、不活性化型α−アミラーゼが活
性化され、糖基質を分解し、分解された生成物を測定す
ることにより、体液中の塩素イオンを測定するものであ
る (特開平3-176000号公報、特開平4-94698 号公報) 。
【０００４】これらの方法において、α−アミラーゼ
は、その活性発現に必要なカルシウムイオンまたは塩素
イオンをあらかじめ除去し、通常、不活性化型の状態で
用いられる。また、これらの方法においては、ブランク
反応をおさえる、または拮抗阻害剤として定量性を調節
する、または測定対象外の類似共雑イオンをマスキング
する等の目的で、測定試薬中にキレート剤を共存させて
いる。しかし、上記不活性化型α−アミラーゼは、キレ
ート剤の存在下では不安定であることから、溶液状態で
長期保存ができない、また、測定値が変動する等の問題
を有していた。
【０００５】一方、α−アミラーゼを安定化する方法と
しては、従来、例えばカルシウムイオンを加える方法、
塩素イオンを加える方法、アルブミンを加える方法（臨
床病理、37(10) 1155，(1990)）、アミノ酸を加える方
法（特開昭51-26284号公報）、酸のアルカリ金属塩を加
える方法（特開昭57-29286号公報）、メチオニンを加え
る方法（特開昭63-17690号公報）、アルミニウム塩を加
える方法（特開平1-104173号公報）、尿素を加える方法
（The Enzyme,3rd.Ed.5,235-271(1971) ）、グアニジン
塩酸塩を加える方法（J.Biol.Chem.,244,48-54(196
9)）、ジチオスレイトール、メルカプトエタノールを加
える方法（Biochem.Soc.Trans.,18,310-311(1990) ）等
が知られている。しかし、これらの方法では不活性化さ
れたα−アミラーゼを安定化するには不十分であり、特
にキレート剤を共存させる電解質の測定においては、調
製直後より顕著にα−アミラーゼが失活するのため、経
時的な感度低下が生じ、測定値に影響を与えることか
ら、実用に耐えうるものではない。
【０００６】一方、α−シクロデキストリン、β−シク
ロデキストリンまたはγ−シクロデキストリンが、蛋白
質または糖類加水分解酵素の安定化剤として、有用であ
ることが公知である（特開昭59-104556 号公報、特開平
1-117786号公報) 。また、マルトース、α−シクロデキ
ストリン等の少糖類、またはこれらの混合物を不活性化
型α−アミラーゼの安定化剤として、使用することも公
知である（特開平6-113894号公報) 。しかし、この方法
でも、短期間（１〜２ヵ月間）の低温（２〜８℃）保存
には耐えうるが、長期間の保存、または実際の作業下の
室温（１８〜３７℃）での安定性がいまだ十分とはいえ
ない。
【０００７】また、マルトース等の単糖１〜３個を結合
した少糖は、α−アミラーゼの基質生成物であることか
ら、測定原理上、感度、定量性に影響を与えるため、使
用量に制約があることから、安定化剤として用いる場合
は、逆に他の性能を低下させることになるという欠点を
有する。さらに、α−シクロデキストリン、β−シクロ
デキストリン、γ−シクロデキストリン等は、低温での
溶解性が悪く、保存中に結晶の析出、白濁等があり、長
期保存には適さない等の欠点がある。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】これらのことから、不
活性化型α−アミラーゼを利用した電解質測定方法で
は、今日、臨床検査用試薬で主流になっている液状試薬
として流通に耐えうる、高い溶液安定性はいまだ達成さ
れていないのが現状である。本発明は、上記のような現
状に鑑み、安定性、定量性、正確性に優れた電解質の酵
素的測定用組成物を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するために鋭意検討したところ、不活性化型α−
アミラーゼの安定化剤として、シクロデキストリン誘導
体を使用すると、α−アミラーゼの反応に影響がなく、
低温から実使用レベルである室温での長期的な溶液安定
性に優れている結果が得られことを見出し、さらに、Ｓ
Ｈ基含有化合物を併用すると、シクロデキストリン誘導
体の低濃度下においても、前述の目的とする安定性が得
られることを見出し、本発明に到達した。
【００１０】なお、グリコシル−α−シクロデキストリ
ンおよび／またはマルトシル−α−シクロデキストリン
をｐ−ニトロフェニル糖基質の易溶性包接化合物として
使用し、α- アミラーゼ活性の作用により遊離するニト
ロフェノールを検出するα-アミラーゼ測定系が公知で
ある（特許第 2681635号公報) 。ここでは、α- アミラ
ーゼは活性化型α−アミラーゼであり、また、キレート
化合物が存在していない。したがって、本発明の不活性
化型α−アミラーゼのキレート化合物の存在下における
液状試薬としての安定性などを示唆するものではない。
【００１１】すなわち、本発明は（ａ）不活性化型α−
アミラーゼ、（ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ
基質および（ｄ）シクロデキストリン誘導体を含有する
ことを特徴とする電解質測定用試薬組成物である。
【００１２】また、本発明は（ａ）不活性化型α−アミ
ラーゼ、（ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質
および（ｄ）シクロデキストリン誘導体、さらに、
（ｅ）ＳＨ基含有化合物またはその塩を含有する電解質
測定用試薬組成物である。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の電解質測定用試薬組成物
は、α−アミラーゼの活性化剤であるカルシウムまたは
塩素等のイオンにより、不活性化型α−アミラーゼが活
性化されることを利用し、活性型α−アミラーゼの作用
により分解された生成物を測定することにより、試料中
の電解質を測定するものであり、次のような測定原理に
従う。
【００１４】（１）マルトオリゴ糖を基質とする方法：
基質として、マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオースなどを用い、活性化されたα−
アミラーゼ、さらにはα−グルコシダーゼ等の追随酵素
の作用により、これらの基質からグルコースを遊離さ
せ、グルコースの量を測定することで、カルシウム等の
電解質量を知る。生成したグルコースの測定方法として
は、グルコースオキシダーゼ−ペルオキシダーゼ法、ヘ
キソキナーゼ−グルコース−６−ホスフェートデヒドロ
ゲナーゼ法等がある。
【００１５】グルコースオキシダーゼ−ペルオキシダー
ゼ法では、遊離したグルコースにグルコースオキシダー
ゼを作用させ、生成した過酸化水素をペルオキシダーゼ
の存在下、フェノール等の酸化発色物質とカプラーを酸
化縮合し、キノン色素に導き、その吸光度をレート測定
する方法である。ヘキソキナーゼ−グルコース−６−ホ
スフェートデヒドロゲナーゼ法では、ヘキソキナーゼに
より遊離したグルコースからグルコース−６−リン酸に
導き、続いて、グルコース−６−リン酸にＮＡＤ+ 、ま
たはＮＡＤＰ+ の存在下、グルコース−６−ホスフェー
トデヒドロゲナーゼを作用させ、ＮＡＤＨまたはＮＡＤ
ＰＨの増加反応をレート測定する方法である。
【００１６】（２）マルトオリゴ糖の還元末端にフェニ
ル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコン
として結合させた誘導体を基質とする方法：ｐ−ニトロ
フェニルマルトペンタオシド、ｐ−ニトロフェニルマル
トヘキサオシド、ｐ−ニトロフェニルマルトヘプタオシ
ド、２，４−ジクロロニトロフェニルマルトペンタオシ
ド、２−クロロ−４−ニトロフェニルマルトトリオシ
ド、２−クロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシ
ド等を基質として用い、活性化されたα−アミラーゼを
作用させ、必要により、α−グルコシダーゼ等の追随酵
素を作用させて、これらの基質からアグリコンを遊離さ
せ、遊離したアグリコンの量を光学的に測定することに
より、カルシウム等の電解質量を知る。
【００１７】（３）マルトオリゴ糖の還元末端にフェニ
ル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコン
として結合させたマルトオリゴ糖誘導体の非還元末端の
グルコースの４位および６位のヒドロキシル基がなんら
かの手段で修飾された誘導体を基質とする方法：該方法
としては、上記（２）に準ずるが、基質として、非還元
末端グルコースがハロゲン、グルコピラノシル基等で修
飾されたタイプの基質（例えば、特開昭60-237998 号公
報）あるいは、４位および６位のヒドロキシル基をアル
キル基、アルコイル基またはフェニル基で置換したタイ
プの基質（例えば特開昭60-54395号公報、特開平1-1579
96号公報）あるいは４位および６位のヒドロキシル基を
β−ガラクトピラノシル基で置換したタイプの基質（例
えば特開平3-264596号公報、特開平6-315399号公報）な
どを用いる方法がある。
【００１８】これら公知の測定法の中でも、上記（３）
に示す測定法は、原理的に優れ、その中でも、２−クロ
ロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−α−マルトシドを用いる方法は、非還元末端
が修飾されていることから、内因性α−グルコシダーゼ
等による分解による試薬ブランクの上昇がなく、また、
追随酵素を必要としないことから、低コストであり、さ
らに、α−アミラーゼの基質親和性が高いため、好感度
であるといったメリットがあり、本発明の電解質測定方
法として特に好ましい。
【００１９】本発明の一実施様態として、カルシウムイ
オンの測定について示すと、試料中のカルシウムイオン
に不活性化型α−アミラーゼ、キレート剤、α−アミラ
ーゼ基質、シクロデキストリン誘導体、または、さらに
ＳＨ基含有化合物を含有する電解質測定用試薬組成物を
作用させる。さらに、α−アミラーゼ基質として、例え
ば２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシル−α−マルトシドを作用させ、遊離
する２−クロロ−４−ニトロフェノールを測定し、試料
中のカルシウム量を知るものである。
【００２０】本発明のシクロデキストリン誘導体は、い
わゆる分岐シクロデキストリン誘導体であり、このよう
な誘導体としては、グリコシル−α−シクロデキストリ
ン、マルトシル−α−シクロデキストリン、グリコシル
−β−シクロデキストリン、マルトシル−β−シクロデ
キストリン、グリコシル−γ−シクロデキストリン、マ
ルトシル−γ−シクロデキストリン、メチル−β−シク
ロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキシ
トリン、トリアセチル−β−シクロデキストリン、ヒド
ロキシエチル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプ
ロピル−β−シクロデキストリン等がある。該化合物
は、通常、水溶性向上のために側鎖を導入したものであ
る。また、これら側鎖は、溶解性を向上させる目的で、
シクロデキストリンの環状骨格にいくつ導入されても良
く、また、これら誘導体を複数組み合わせて用いても良
い。
【００２１】該シクロデキストリン誘導体の試薬組成中
の濃度は、０．０１〜１００ｍＭの範囲で用いられる。
該シクロデキストリン誘導体中に含まれる不純物等によ
るα−アミラーゼ反応への影響およびニトロフェノール
等の発色源基がシクロデキストリンに包接されることに
よる感度への影響等を考慮し、好ましくは、１〜１２ｍ
Ｍである。
【００２２】本発明のＳＨ基含有化合物とは、通常、タ
ンパク質等のＳＨ基に対し、保護または抗酸化作用を有
する、またはジスルフィド結合を還元し切断する作用を
有するＳＨ基を含有する化合物を指し、例えば、Ｎ−ア
セチルシステイン、ジチオスレイトール、グルタチオ
ン、チオグリセロール、メルカプトエタノール、チオサ
リチル酸、チオ尿素等があげられるが、特に、Ｎ−アセ
チルシステイン、還元型グルタチオンなどが好適であ
る。該ＳＨ基含有化合物の試薬組成中濃度は、０．０１
〜５０ｍＭの範囲で用いられるが、溶解性等を考慮し、
０．０１〜２０ｍＭが好適である。また、これらのＳＨ
基含有化合物は複数組み合わせて用いても良い。
【００２３】本発明のα−アミラーゼとは、微生物、植
物、または動物のいずれの起源のものも用いることがで
きるが、好適には動物起源のものであり、たとえばブタ
膵由来のα−アミラーゼが例示される。しかしながら、
本発明に用いられるα−アミラーゼは脱塩されて、不活
性化型である必要がある。不活性化型α−アミラーゼ
は、前述のように試料中のカルシウムまたは塩素等の電
解質を得て、活性化型α−アミラーゼとなり、α−アミ
ラーゼの基質と反応する。脱塩方法としては、透析、限
外濾過、イオン交換、カラム除去などの方法がある。不
活性化型α−アミラーゼの試薬組成中の濃度は、好まし
くは０．５〜１０００ ＩＵ／ｍｌの範囲で用いられ
る。
【００２４】本発明のキレート剤とは、エチレンジアミ
ン四酢酸、およびその塩、グリコールエーテルジアミン
四酢酸、１，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン
四酢酸、トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン四
酢酸等があげられる。キレート剤の電解質測定組成中で
の役割としては、前述のようにブランク反応をおさえ
る、または拮抗阻害剤として定量性を調節する、または
測定対象外の類似共雑イオンをマスキングする等があげ
られるが、逆にα−アミラーゼの失活を招く要因の一つ
でもあることから、該キレート剤の試薬組成中での濃度
は、これらを勘案した上で設定すべきであるが、０．０
１〜１０ｍＭで好適に用いられる。また、これらのキレ
ート剤は複数組み合わせて用いても良い。
【００２５】本発明に係るα−アミラーゼの基質は、前
述のとおり何ら限定されるものではないが、追随酵素を
必要としないことから低コストであるというメリットよ
り、２−クロロ−４−ニトロフェニルマルトトリオシ
ド、２−クロロ−４−ニトロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシルマルトシドが好適である。さらに、
非還元末端が修飾されていることから、内因性α−グル
コシダーゼ等による分解による試薬ブランクの上昇がな
い、α−アミラーゼの基質親和性がより高いため好感度
であるといったメリットがあることから、２−クロロ−
４−ニトロフェニル４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ルマルトシドが好適に用いられる。該基質の試薬組成中
での濃度は、０．１〜５０ｍＭで好適に用いられる。
【００２６】また、本発明の試薬組成物には、試薬ブラ
ンクをおさえる、定量性を向上させる等の目的のため、
必要により、最終的な光学的測定法が異なる２種の基質
を組み合わせて用いることで、糖分解反応を競合させ、
見かけの基質親和性を低下させることができる。例え
ば、マルトオリゴ糖、またはその還元末端グルコースに
非発色源基が結合したマルトオリゴ糖より選ばれる基質
を競合させ、主反応である、還元末端グルコースに発色
源基を結合させるか、または、さらに非還元末端に置換
基を結合させた基質に対するα−アミラーゼの反応速度
を調節する。
【００２７】ここで用いられるマルトオリゴ糖として
は、例えば、マルトース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース、マルトヘプタオースなどのグルコース数
が２〜７のマルトオリゴ糖があげられ、還元末端グルコ
ースに非発色源基が結合したマルトオリゴ糖としては、
例えば、２，４−ジクロロフェニル−α−Ｄ−マルトト
リオシド、２，４−ジクロロフェニル−（αまたはβ）
−Ｄ−マルトペンタオシド、２，４−ジクロロフェニル
−（αまたはβ）−Ｄ−マルトトリオシドなどがあげら
れる。これらのマルトオリゴ糖の濃度としては、試薬組
成中で５０〜２５０ｍＭで好適に用いられる。
【００２８】本発明での試薬組成物の最終ｐＨは５．０
〜８．０の範囲であり、より一層、α−アミラーゼの糖
分解反応速度そのものを制御し、測定範囲を広げること
が可能となる。一方、α−アミラーゼの安定至適ｐＨは
６〜８の中性付近であることより、本発明の試薬組成物
をｐＨ６〜８の範囲で調製するのが好ましいと考えられ
るが、同時に定量性等の性能を得るには、最終ｐＨを調
製する試薬をさらに処方し、第一試薬と第二試薬に分
け、これらが混合した状態で反応至適ｐＨになるように
処方することもできる。試薬ｐＨを保持する方法は公知
の方法であれば、何ら限定されるものではないが、一般
的には緩衝剤が用いられる。用いる緩衝剤としては、例
えば、グッド緩衝剤、トリス緩衝剤、リン酸緩衝剤等が
あげられる。緩衝剤は１０〜５００ｍＭの濃度で好適に
用いられる。
【００２９】本発明の目的とする試薬安定性を維持した
状態で、定量性を得る方法として、前述した（１）キレ
ート剤の添加、（２）マルトオリゴ糖の添加、（３）試
薬ｐＨの調節などがあるが、単独あるいは組み合わせて
用いることができる。
【００３０】さらに、本発明の試薬組成物には、必要に
応じて、イオノフォア、クラウンエーテル等の干渉電解
質の影響回避、または感度調節のため、干渉電解質また
は、測定対象電解質に対する選択的結合剤を使用するこ
とができる。選択的結合剤としては、前述のキレート剤
の他に、１８−クラウン−６（メルク社製）、クリプト
フィックス２２１（メルク社製）などがあげられる。ま
た、必要に応じて、防腐剤、界面活性剤、酸化防止剤、
プロテアーゼ阻害剤等を測定する電解質の定量性に影響
を及ぼさない範囲で使用することもできる。
【００３１】防腐剤としては、特に限定されないが、α
−アミラーゼの安定性に対する影響の少ない、アジ化ナ
トリウム、または、セフェム系、ペニシリン系、アミノ
グリコシド系、キノロン系等の抗生物質、等が好適に用
いられ、これらを単独あるいは組み合わせて使用するこ
とができる。界面活性剤としては、非イオン界面活性
剤、陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤などを単
独あるいは組み合わせて使用することができる。
【００３２】また測定する電解質がカルシウムイオンの
場合は、アルカリ金属のハロゲン化物、例えば、塩化ナ
トリウム、塩化カリウムなどを３〜３００ｍＭの濃度で
添加することが好ましい。また測定する電解質が塩素イ
オンの場合は２価カチオン、例えば、カルシウム、マグ
ネシウム、バリウム、亜鉛等を０．０１〜２００ｍＭの
濃度で添加することができる。
【００３３】酸化防止剤としては、アスコルビン酸およ
びその塩、ソルボース等の糖類、カタラーゼ等があげら
れる。プロテアーゼ阻害剤としてはＰＭＳＦ等があげら
れる。
【００３４】本発明では、不活性化型α−アミラーゼ
が、前述のように試料中のカルシウムまたは塩素等の電
解質を得て、活性化型α−アミラーゼとなり、α−アミ
ラーゼの基質と反応することを利用する。前述の自体公
知である測定方法に基づく操作法に従い、測定すること
ができる。例えば、カルシウムの測定の場合は、試料中
のカルシウムイオンに不活性化型α−アミラーゼ、キレ
ート剤、シクロデキストリン誘導体または、さらにＳＨ
基含有化合物を含有する電解質測定用試薬組成物を作用
させ、さらにα−アミラーゼの基質として、２−クロロ
−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル−α−マルトシドを作用させることで、カルシウ
ム量に依存して活性化されたα−アミラーゼの反応によ
り、２−クロロ−４−ニトロフェノールを生成する。２
−クロロ−４−ニトロフェノールが、それ自体４００ｎ
ｍ付近に吸収があることから、遊離後、４００ｎｍ付近
の吸光度の変化を測定し、既知濃度の試料の吸光度を対
照に、試料中のカルシウムの濃度を求める。２−クロロ
−４−ニトロフェノールの測定方法としては、アミラー
ゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定時間反
応させた後反応を止めて測定するエンドポイント法のい
ずれもが使用されうる。
【００３５】本発明の別な実施様態として、塩素イオン
の測定について示すと、試料中の塩素イオンに不活性化
型α−アミラーゼ、キレート剤、α−アミラーゼ基質、
シクロデキストリン誘導体または、さらにＳＨ基含有化
合物を含有する電解質測定用試薬組成物を作用させる。
さらに、α−アミラーゼ基質として、２−クロロ−４−
ニトロフェニル−４−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
−α−マルトシドを作用させ、遊離する２−クロロ−４
−ニトロフェノールを測定し、試料中の塩素イオン量を
知るものである。
【００３６】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでな
い。実施例１ 下記試薬組成からなるカルシウム測定用試薬のうち、シ
クロデキストリン誘導体として、グリコシル−α−シク
ロデキストリン（Ｇ１αＣＤ）、マルトシル−α−シク
ロデキストリン（Ｇ２αＣＤ）、グリコシル−β−シク
ロデキストリン（Ｇ１βＣＤ）、マルトシル−β−シク
ロデキストリン（Ｇ２βＣＤ）を各々単独で、０、１．
５、３、６、１２ｍＭの濃度になるように添加して、酵
素試薬を調製した。また、グリコシル−β−シクロデキ
ストリン３ｍＭである酵素試液には、さらにＮ−アセチ
ルシステインまたは還元型グルタチオンを各々単独で
２．５、５、１０、２０ｍＭの濃度になるように添加し
た。
【００３７】Ａ．試薬組成 （１）酵素試液 トリス塩酸バッファー ｐＨ７．３ ５０ ｍＭ 不活性化型α−アミラーゼ（ブタ膵臓由来） １．７ ＩＵ／ｍｌ ＮａＣｌ ２００ ｍＭ １，２−ビス（ｏ−アミノフェノキシ）エタン四酢酸 ０．８ ｍＭ マルトース １６０ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ シクロデキストリン誘導体 表１記載 ＳＨ基含有化合物 表１記載 （２）基質試液 グッド緩衝液 ｐＨ５．７ ３００ ｍＭ ＮａＣｌ ２００ ｍＭ マルトース １６０ ｍＭ ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル ０．０５ ％ ２−クロロ−４−ニトロフェニル−４−Ｏ−β− Ｄ−ガラクトピラノシル−α−マルトシド ０．８ ｍＭ
【００３８】上記方法により調製した両試液を４℃で３
ヵ月間保存し、調製直後および保存後の試液の目視観察
を行い、結晶の析出または白濁の有無について確認を行
った。調製直後の目視観察結果を表１、保存後の目視観
察結果を表２に示す。
【００３９】比較例１ 上記した試薬組成のシクロデキストリン誘導体およびＳ
Ｈ基含有化合物に代えて、α−シクロデキストリン（α
ＣＤ）（１．５、３、６、１２ｍＭ）、β−シクロデキ
ストリン（βＣＤ）（１．５、３、６、１２ｍＭ）、γ
−シクロデキストリン（γＣＤ）（１．５、３、６、１
２ｍＭ）を各々単独で、表１に記載の濃度になるように
添加し、実施例１と同様に調製した両試液を４℃で３ヵ
月間保存し、調製直後および保存後の試液の目視観察を
行い、結晶の析出または白濁の有無について確認を行っ
た。調製直後の目視観察結果を表１、保存後の目視観察
結果を表２に示す。
【００４０】
【表１】
【００４１】
【表２】
【００４２】表１および表２から明らかなように、比較
例１のα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリ
ン、γ−シクロデキストリンでは、調製直後で６ｍＭの
場合、すでに濁りが生じ、４℃、３ヶ月保存後には３ｍ
Ｍの場合、濁りが生じている。しかし、実施例１のシク
ロデキストリン誘導体を用いた場合は、実施条件の最高
濃度である１２ｍＭでも濁りがなく、清澄であることが
わかる。
【００４３】実施例２ 上記実施例１に示す試薬組成からなるカルシウム測定試
薬の酵素試液において、シクロデキストリン誘導体とし
て、グリコシル−α−シクロデキストリン、マルトシル
−α−シクロデキストリン、グリコシル−β−シクロデ
キストリン、マルトシル−β−シクロデキストリン、を
各々単独で１２ｍＭで添加した。また、グリコシル−β
−シクロデキストリン３ｍＭである酵素試液に、さら
に、Ｎ−アセチルシステインまたは還元型グルタチオン
を各々単独で、２０ｍＭになるように添加し、３５℃で
７日間保存した。そして、調製直後、および３５℃で７
日間保存した酵素試液中のα−アミラーゼの活性を市販
のα−アミラーゼ活性測定試薬（ダイヤカラー・リキッ
ドＡＭＹ；東洋紡績（株）製）で測定し、３５℃、７日
保存後の残存活性（％）を求めた。その結果を表３およ
び図１に示す。
【００４４】比較例２ 上記実施例１に示す試薬組成のシクロデキストリン誘導
体およびＳＨ基含有化合物に代えて、グルコース（１０
０ｍＭ）、マルトース（５０ｍＭ）、マルトトリオース
（３０ｍＭ）、α−シクロデキストリン（１．５ｍ
Ｍ）、β−シクロデキストリン（１．５ｍＭ）、γ−シ
クロデキストリン（１．５ｍＭ）、Ｎ−アセチルシステ
イン（２０ｍＭ）、還元型グルタチオン（２０ｍＭ）を
各々単独で表３に記載の濃度になるように添加した。調
製した試液は実施例２と同様に４℃で３ヵ月間、３５℃
で７日間保存し、酵素試液中のα−アミラーゼの活性を
測定し、３５℃、７日保存後の残存活性（％）を求め
た。その結果を表３および図１に示す。
【００４５】
【表３】
【００４６】表３および図１から明らかなように、無添
加時および比較例２に比べ、実施例２であるシクロデキ
ストリン誘導体、または、さらにＳＨ基含有化合物の添
加でα−アミラーゼの安定性が向上していることがわか
る。
【００４７】実施例３ 上記実施例１に示す試薬組成からなるカルシウム測定試
薬の酵素試液において、シクロデキストリン誘導体とし
て、グリコシル−α−シクロデキストリン、マルトシル
−α−シクロデキストリン、グリコシル−β−シクロデ
キストリン、マルトシル−β−シクロデキストリンを各
々単独で０、１．５、３、６、１２ｍＭで添加した。ま
た、グリコシル−β−シクロデキストリン３ｍＭである
酵素試液に、さらに、Ｎ−アセチルシステインまたは還
元型グルタチオンを各々単独で、２．５、５、１０、２
０ｍＭで調製し、次のようにしてカルシウム標準液のカ
ルシウオンイオン測定を実施した。
【００４８】１０ｍｇ／ｄｌカルシウム標準液を試料と
し、調製直後の試液を用いて、下記カルシウム量の測定
方法に従い、測定を実施し、シクロデキストリン誘導体
無添加時の感度を１００％とした各試薬条件での相対感
度（％）を求めた。その結果を表４に示す。
【００４９】Ｂ．カルシウム量の測定方法 試料５．８μｌに酵素試液１８０μｌ加え、５分間予備
加温した後、さらに、基質試液９０μｌを加えて反応を
開始させ、該基質試液添加後、２分後から３分間におけ
る１分あたりの吸光度変化を求め、精製水およびカルシ
ウム１０ｍｇ／ｄｌ標準液での２点検量線に基づき、試
料中のカルシウム量を求めた。
【００５０】なお、測定装置は日立７１７０形自動分析
装置を使用し、測定波長は、主波長４０５ｎｍ、副波長
５４６ｎｍであり、温度３７℃で測定を実施した。
【００５１】比較例３ 上記実施例１に示す試薬組成のシクロデキストリン誘導
体およびＳＨ基含有化合物に代えて、マルトース（６．
３、１２．５、２５、５０ｍＭ）、マルトトリオース
（３．８、７．５、１５、３０ｍＭ）を各々単独で、表
４に記載の濃度で添加した。調製した試液は、実施例３
と同様にカルシウム標準液の測定を実施した。その結果
を表４に示す。
【００５２】
【表４】
【００５３】表４から明らかなように、比較例３である
マルトースまたはマルトトリオースの添加では、著しく
標準液感度が下がるが、実施例３であるシクロデキスト
リン誘導体の添加では、感度はむしろ向上し、１．５ｍ
Ｍ以上ではほぼ感度に変動がなく、さらにＳＨ基含有化
合物の添加でも感度に変動がないことがわかる。
【００５４】実施例４ 上記実施例１に示す試薬組成のカルシウム測定試薬の酵
素試液において、シクロデキストリン誘導体として、グ
リコシル−β−シクロデキストリンを１２ｍＭで添加し
た。また、グリコシル−β−シクロデキストリン３ｍＭ
である酵素試液に、さらに、還元型グルタチオンを２０
ｍＭで添加し、３５℃で７日間保存した。カルシウム直
線性の測定は、５０ｍｇ／ｄｌカルシウム水溶液を１０
水準に希釈したものを試料とし、調製直後、および３５
℃、７日間保存後の試液を用いて、実施例３、Ｂ．カル
シウム量の測定方法に従い実施した。その結果を図３お
よび４に示す。
【００５５】比較例４ 上記実施例１に示す試薬組成のシクロデキストリン誘導
体およびＳＨ基含有化合物に代えて、β−シクロデキス
トリンを１．５ｍＭで添加した。調製した試液は実施例
３と同様に、３５℃で７日間保存し、カルシウム直線性
の測定を実施した。その結果を図２に示す。
【００５６】図２から明らかなように、比較例４であ
る、β−シクロデキストリン添加時の３５℃、７日間保
存後の直線性がそりあがり、高値での定量性が低下して
いるのに対し、図３および図４の実施例４であるグリコ
シル−β−シクロデキストリン、およびグリコシル−β
−シクロデキストリンに加え、還元型グルタチオンを添
加すると、３５℃、７日間保存後においても高値での定
量性を維持していることがわかる。
【００５７】
【発明の効果】本発明の電解質測定用試薬組成物は、不
活性化型α−アミラーゼの安定化剤としてシクロデキス
トリン誘導体、または、さらにＳＨ基含有化合物を添加
することにより、α−アミラーゼの酵素反応に影響を与
えることなく、α−アミラーゼの安定化効果を得ること
ができ、低温から実際の使用レベルである室温での長期
的な溶液安定性に優れる。該組成物は安定性、定量性、
正確性に優れた電解質の酵素的測定用組成物である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例２および比較例２において、３５℃、
７日間保存後のα−アミラーゼの残存活性を示す図であ
る。縦軸にα−アミラーゼの残存活性（％）、横軸に対
応する組成Ｎｏを示す。
【図２】 比較例４において、β−シクロデキストリン
１．５ｍＭを添加した場合の調製直後、および３５℃、
７日間保存後のカルシウム直線性を示す図である。
【図３】 実施例４において、グルコシル−β−シクロ
デキストリン１２ｍＭを調製した場合の調製直後、およ
び３５℃、７日間保存後のカルシウム直線性を示す図で
ある。
【図４】 実施例４において、グルコシル−β−シクロ
デキストリン１２ｍＭに加えて、還元型グルタチオン２
０ｍＭを添加した場合の調製直後、および３５℃、７日
間保存後のカルシウム直線性を示す図である。

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
    （ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質および
    （ｄ）シクロデキストリン誘導体を含有することを特徴
    とする電解質測定用試薬組成物。
  2. 【請求項２】 シクロデキストリン誘導体が、グリコシ
    ル−α−シクロデキストリン、マルトシル−α−シクロ
    デキストリン、グリコシル−β−シクロデキストリン、
    マルトシル−β−シクロデキストリン、グリコシル−γ
    −シクロデキストリン、マルトシル−γ−シクロデキス
    トリン、メチル−β−シクロデキストリン、カルボキシ
    メチル−β−シクロデキシトリン、トリアセチル−β−
    シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−β−シクロデ
    キストリンおよびヒドロキシプロピル−β−シクロデキ
    ストリンからなる群から選択された分岐シクロデキスト
    リン誘導体である請求項１記載の電解質測定用試薬組成
    物。
  3. 【請求項３】 シクロデキストリン誘導体が、グリコシ
    ル−β−シクロデキストリンまたはマルトシル−β−シ
    クロデキストリンである請求項１記載の電解質測定用試
    薬組成物。
  4. 【請求項４】 さらに、（ｅ）ＳＨ基含有化合物または
    その塩を含有する請求項１〜３記載の電解質測定用試薬
    組成物。
  5. 【請求項５】 ＳＨ基含有化合物が、Ｎ−アセチルシス
    テインまたは還元型グルタチオンである請求項４記載の
    電解質測定用試薬組成物。
  6. 【請求項６】 電解質がカルシウムイオンである請求項
    １〜５記載の電解質測定用試薬組成物。
  7. 【請求項７】 電解質が塩素イオンである請求項１〜５
    記載の電解質測定用試薬組成物。
  8. 【請求項８】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
    （ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質および
    （ｄ）グリコシル−β−シクロデキストリンまたはマル
    トシル−β−シクロデキストリンを含有することを特徴
    とするカルシウムイオン測定用試薬組成物。
  9. 【請求項９】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
    （ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質および
    （ｄ）グリコシル−β−シクロデキストリンまたはマル
    トシル−β−シクロデキストリンを含有することを特徴
    とする塩素イオン測定用試薬組成物。
  10. 【請求項１０】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
    （ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質、（ｄ）
    グリコシル−β−シクロデキストリンまたはマルトシル
    −β−シクロデキストリンおよび（ｅ）Ｎ−アセチルシ
    ステインまたは還元型グルタチオンを含有することを特
    徴とするカルシウムイオン測定用試薬組成物。
  11. 【請求項１１】 （ａ）不活性化型α−アミラーゼ、
    （ｂ）キレート剤、（ｃ）α−アミラーゼ基質、（ｄ）
    グリコシル−β−シクロデキストリンまたはマルトシル
    −β−シクロデキストリンおよび（ｅ）Ｎ−アセチルシ
    ステインまたは還元型グルタチオンを含有することを特
    徴とする塩素イオン測定用試薬組成物。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006129800A (ja) * 2004-11-08 2006-05-25 Toyobo Co Ltd 電解質測定用試薬のα−アミラーゼＫｍ値維持剤
JP2006129801A (ja) * 2004-11-08 2006-05-25 Toyobo Co Ltd 測定再現性向上方法
JP2006180742A (ja) * 2004-12-27 2006-07-13 Toyobo Co Ltd 電解質測定試薬の定量域拡大方法
JP2010263839A (ja) * 2009-05-15 2010-11-25 Asahi Kasei Pharma Kk Ｉｍｐｄｈ含有組成物及びｉｍｐｄｈの安定化方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6818415B2 (en) * 2001-06-22 2004-11-16 Abaxis, Inc. Sodium activation of amylase
KR100785913B1 (ko) * 2006-11-29 2007-12-17 한국과학기술연구원 경화된 β-사이클로덱스트린 중합체 분말과 그의 제조방법

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5126284A (ja) 1974-08-30 1976-03-04 Amano Pharma Co Ltd Kosonoanteikaho
FR2474051A1 (fr) 1980-07-30 1981-07-24 Bristol Myers Co Compositions aqueuses renfermant des enzymes stabilisees
JPS59104556A (ja) 1982-12-07 1984-06-16 Sekisui Chem Co Ltd 蛋白質安定化剤
DE3328616A1 (de) 1983-08-08 1985-02-28 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Oligoglucosidderivate
JPS60237998A (ja) 1983-12-22 1985-11-26 Toyobo Co Ltd α−アミラ−ゼ活性測定法
HU207282B (en) 1984-05-31 1993-03-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing phenyl-alkyl-amine derivatives and pharmaceutical compositions containing them
JPH0822229B2 (ja) 1986-07-10 1996-03-06 大和化成株式会社 安定化された酵素水溶液
JPH0612999B2 (ja) * 1986-11-17 1994-02-23 関東化学株式会社 塩素イオン定量用試薬
JP2681635B2 (ja) 1987-05-13 1997-11-26 オリエンタル酵母工業株式会社 分析感度及び分析精度を向上させる方法
JPH01104173A (ja) 1987-10-16 1989-04-21 Agency Of Ind Science & Technol アミラーゼの安定化法
JPH01117786A (ja) 1987-10-28 1989-05-10 Nippon Shinyaku Co Ltd 酵素安定化剤
JPH0631293B2 (ja) 1987-12-11 1994-04-27 東洋紡績株式会社 マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬
JPH0687798B2 (ja) * 1989-01-09 1994-11-09 小野薬品工業株式会社 体液中のカルシウム測定方法
JP2886249B2 (ja) 1990-03-14 1999-04-26 日本食品化工株式会社 ガラクトシル―マルトオリゴ糖誘導体、その製造法およびα―アミラーゼ活性測定方法
US5470715A (en) 1990-07-23 1995-11-28 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Composition for determination of chloride ion
JP2906200B2 (ja) 1992-09-29 1999-06-14 小野薬品工業株式会社 電解質測定試薬のα−アミラーゼ安定化剤
JP2807949B2 (ja) 1992-11-10 1998-10-08 東洋紡績株式会社 α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法
JPH0739397A (ja) * 1993-08-04 1995-02-10 Kyowa Medex Co Ltd 塩素イオンの定量方法
JPH1117786A (ja) * 1997-06-25 1999-01-22 Saitama Nippon Denki Kk 携帯電話機

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006129800A (ja) * 2004-11-08 2006-05-25 Toyobo Co Ltd 電解質測定用試薬のα−アミラーゼＫｍ値維持剤
JP2006129801A (ja) * 2004-11-08 2006-05-25 Toyobo Co Ltd 測定再現性向上方法
JP2006180742A (ja) * 2004-12-27 2006-07-13 Toyobo Co Ltd 電解質測定試薬の定量域拡大方法
JP2010263839A (ja) * 2009-05-15 2010-11-25 Asahi Kasei Pharma Kk Ｉｍｐｄｈ含有組成物及びｉｍｐｄｈの安定化方法

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