JPS58107193A - 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法Info
- Publication number
- JPS58107193A JPS58107193A JP20778381A JP20778381A JPS58107193A JP S58107193 A JPS58107193 A JP S58107193A JP 20778381 A JP20778381 A JP 20778381A JP 20778381 A JP20778381 A JP 20778381A JP S58107193 A JPS58107193 A JP S58107193A
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- JP
- Japan
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- tryptophan
- producing
- strain
- resistance
- genus bacillus
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるし一トリプトファン（以下、ト
リプトファンと記す）の製造法に関する。
リプトファンと記す）の製造法に関する。
従来トリプトファンの製造法としては、トリプトファン
のｔｉ駆物７８であるアントラニル酸、インドール或い
は３−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造
する方法等が知られている。
のｔｉ駆物７８であるアントラニル酸、インドール或い
は３−インドールピルビン酸よりトリプトファンを製造
する方法等が知られている。
これら前駆物質を使用する方法に対し、５−フロロトリ
プトファン等のトリプトファンアナログ耐性を有するバ
チルス属の微生物を用いて、糖類等の炭素源から直接発
酵法によりトリプトファンを製造する方法が開発されて
いる（特公昭５３−３９５１７）。
プトファン等のトリプトファンアナログ耐性を有するバ
チルス属の微生物を用いて、糖類等の炭素源から直接発
酵法によりトリプトファンを製造する方法が開発されて
いる（特公昭５３−３９５１７）。
本発明者らは更に糖類等の炭素源からトリプトファンを
直接発酵法にまり安酒に製造する方法を開発すべく研究
を行った結果、バチルス属の上記のようなトリプトファ
ンアナログ耐性の他に更に］、 ２．４− トリアゾー
ル−３−アラニン（単にトリアゾールアラニンと略す）
に耐性を有する微生物の中に従来知られているものより
更に大量のトリプトファンを生産する能力を有する菌株
があることを見い出した。この発明はこの知見に基づい
て更に研究の結果完成されたものである。
直接発酵法にまり安酒に製造する方法を開発すべく研究
を行った結果、バチルス属の上記のようなトリプトファ
ンアナログ耐性の他に更に］、 ２．４− トリアゾー
ル−３−アラニン（単にトリアゾールアラニンと略す）
に耐性を有する微生物の中に従来知られているものより
更に大量のトリプトファンを生産する能力を有する菌株
があることを見い出した。この発明はこの知見に基づい
て更に研究の結果完成されたものである。
アソールアラニンに耐性を有し、かつトリプトファンを
生産する能力を有する微生物であり、例えば次のような
変異株が使用される。
生産する能力を有する微生物であり、例えば次のような
変異株が使用される。
バチルス・ズブチリスＡＪ １１７３７ ＦＥＲＭ−
Ｐ６２６４（５−Ｆ−ＴｒＰ’、 Ｌｅｕ”−５ＴＡｒ
）バチルス・ズブチリスＡＪ １１７３ｇ ＦＥＲＭ
−Ｐ６２６６（５−Ｆ−ＴｒＰｒ、 ＩＭ、ＴＡｒ）５
−Ｆ−ＴｒＰ：５−フルオロトリプトファン耐性ＴΔ
トリアゾールアラニン耐性Ｌｅｕ−：Ｌ−ロイシ
ン要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性これら本発明で
使用される変異株は従来知られているバチルス属に属し
トリプトファンアナログに耐１にｉミを有するＬ−１−
’Ｊブトファン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘
導操作、例えば、紫外組ｆｆｌ 射あるいはＮ−メチル
−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−二Ｉ・ロソグアニジン（以下、Ｎ
Ｇと略ス。）亜硝酸等の化学薬剤処理をイｊし、変異熱
にＦした菌株を親株が生育できないような帛のトリアゾ
ールアラニンを含有する平板寒天培地て培養し、該平板
培地上に生育するコロニーを分離することによって得ら
れる。
Ｐ６２６４（５−Ｆ−ＴｒＰ’、 Ｌｅｕ”−５ＴＡｒ
）バチルス・ズブチリスＡＪ １１７３ｇ ＦＥＲＭ
−Ｐ６２６６（５−Ｆ−ＴｒＰｒ、 ＩＭ、ＴＡｒ）５
−Ｆ−ＴｒＰ：５−フルオロトリプトファン耐性ＴΔ
トリアゾールアラニン耐性Ｌｅｕ−：Ｌ−ロイシ
ン要求性 ＩＭｒ ：インドールマイシン耐性これら本発明で
使用される変異株は従来知られているバチルス属に属し
トリプトファンアナログに耐１にｉミを有するＬ−１−
’Ｊブトファン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘
導操作、例えば、紫外組ｆｆｌ 射あるいはＮ−メチル
−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−二Ｉ・ロソグアニジン（以下、Ｎ
Ｇと略ス。）亜硝酸等の化学薬剤処理をイｊし、変異熱
にＦした菌株を親株が生育できないような帛のトリアゾ
ールアラニンを含有する平板寒天培地て培養し、該平板
培地上に生育するコロニーを分離することによって得ら
れる。
親株としては、トリプトファンアナログ耐性のトリプト
ファン生産菌、トリプトファンアナログ耐性でかつＬ−
アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
ェニルアラニン要求性のトリプトファン生産菌（特公昭
５３−３９５１７号公報）、又はトリプトファンアナロ
グ耐性がかつインドールマイシン耐性のトリプトファン
生産菌（特開昭５６−９２７９６号公報）等が使用され
、例えば次のようなトリプトファン生産性変異株が使用
される。
ファン生産菌、トリプトファンアナログ耐性でかつＬ−
アルギニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
ェニルアラニン要求性のトリプトファン生産菌（特公昭
５３−３９５１７号公報）、又はトリプトファンアナロ
グ耐性がかつインドールマイシン耐性のトリプトファン
生産菌（特開昭５６−９２７９６号公報）等が使用され
、例えば次のようなトリプトファン生産性変異株が使用
される。
バチルス・ズブチリス ＦＴ−１４５ＦＥＲＭ−Ｐ］７
８３（５−Ｆ−Ｔ ｒ Ｐ ｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ］７８
６（５−Ｆ−ＴｒＰｒ、Ｌｅｕ−） バチルス・ズブチリス ＡＪｌ＋４８３ ＦＥＲＭ−
Ｐ５２８６（５−Ｆ−ＴｒＰ’、 ＩＭ） その他に本発明の変異株はバチルス属の野性株を親株と
し、これにトリアゾールアラニン耐性を付与した後トリ
プトファンアナログ耐性を付与することによっても誘導
できる。この場合にも更にトリプトファン生産に有用な
性質、例えハエ、−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、
Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に耐する栄
養要求性等を付与することが望ましい。
８３（５−Ｆ−Ｔ ｒ Ｐ ｒ） バチルス・ズブチリス ＦＦＬ−５ＦＥＲＭ−Ｐ］７８
６（５−Ｆ−ＴｒＰｒ、Ｌｅｕ−） バチルス・ズブチリス ＡＪｌ＋４８３ ＦＥＲＭ−
Ｐ５２８６（５−Ｆ−ＴｒＰ’、 ＩＭ） その他に本発明の変異株はバチルス属の野性株を親株と
し、これにトリアゾールアラニン耐性を付与した後トリ
プトファンアナログ耐性を付与することによっても誘導
できる。この場合にも更にトリプトファン生産に有用な
性質、例えハエ、−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、
Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に耐する栄
養要求性等を付与することが望ましい。
以下の実験例にて本発明のトリアゾールアラニン耐性ト
リプトファン生産菌のトリアゾールアラニンに対する耐
性度を示す。
リプトファン生産菌のトリアゾールアラニンに対する耐
性度を示す。
実験例
第１表に示す組成の戦少培地及び最少培地に１、０００
μｇ／ｒｒｒｒ のトリアゾールアラニンを添加した寒
天培地を調製し、加熱滅菌した後、直径ｆ３，５ｃｍの
プレートに移してプレート寒天培地を作った。
μｇ／ｒｒｒｒ のトリアゾールアラニンを添加した寒
天培地を調製し、加熱滅菌した後、直径ｆ３，５ｃｍの
プレートに移してプレート寒天培地を作った。
上記トリアゾールアラニン含有のプレートに最少寒天プ
レート上に生育したバチルス・ズブチリスＡ Ｊ １１
７３７ Ａ Ｊ １１７３Ｂ 及び ５ − ＡＪ／／７３ヲ を夫々各プレート当り１０６個宛個宛
上、３０℃で４８時間プレート培養を行い、プレート上
に生育したコロニー数を測定した。その結果を第２表に
示す。
レート上に生育したバチルス・ズブチリスＡ Ｊ １１
７３７ Ａ Ｊ １１７３Ｂ 及び ５ − ＡＪ／／７３ヲ を夫々各プレート当り１０６個宛個宛
上、３０℃で４８時間プレート培養を行い、プレート上
に生育したコロニー数を測定した。その結果を第２表に
示す。
グルコース ５ 、０ ？／１
硫酸アンモニウム １，０ 〃ＫＨ，Ｐ
Ｏ４Ｂ、６５／／ Ｍ９ＳＯ，・７Ｈ２００，２／／ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ｌＯ＋＋ｌＶＩ Ｍｎ ＳＯ４’ ４Ｈ２０１０ クエン酸ナトリウム ０ 、５９
７１※Ｌ−ロイシフ １ｏ ｍ９
／ｄｉ ６− 第２表 耐性株の生育度 ＦＴ−１４５０以」− ＡＪ １１７３７ ］・０００ 〃ＡＪ １１７
３８ １・０００ 〃ＡＪ１１７３９ １．０
００ ／／尚、本発明でいうトリアゾールアラニン耐
性とは１０６個の変異株をＩ、 ＯＯＯμｑ／ｍｌ！の
トリアゾールアラニンを含有する最少培地で培養（３０
℃、４８時間）した場合に５００個以上のコロニーを生
成するものをいう。
硫酸アンモニウム １，０ 〃ＫＨ，Ｐ
Ｏ４Ｂ、６５／／ Ｍ９ＳＯ，・７Ｈ２００，２／／ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ｌＯ＋＋ｌＶＩ Ｍｎ ＳＯ４’ ４Ｈ２０１０ クエン酸ナトリウム ０ 、５９
７１※Ｌ−ロイシフ １ｏ ｍ９
／ｄｉ ６− 第２表 耐性株の生育度 ＦＴ−１４５０以」− ＡＪ １１７３７ ］・０００ 〃ＡＪ １１７
３８ １・０００ 〃ＡＪ１１７３９ １．０
００ ／／尚、本発明でいうトリアゾールアラニン耐
性とは１０６個の変異株をＩ、 ＯＯＯμｑ／ｍｌ！の
トリアゾールアラニンを含有する最少培地で培養（３０
℃、４８時間）した場合に５００個以上のコロニーを生
成するものをいう。
本発明で使用する培養培地は特に制限するところはなく
、炭素α；１５、窒素源、無機塩及び必要ならば有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。炭素源としては
グルコース、フラクトース、ンユークロース、マルト−
ス、澱粉の氷解物、糖蜜等の炭水化物が使用され、その
他酢酸、クエン酸等の有ｉ酸、あるいはエタノール、グ
リセリン等のアルコール類も単独あるいは上記。
、炭素α；１５、窒素源、無機塩及び必要ならば有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。炭素源としては
グルコース、フラクトース、ンユークロース、マルト−
ス、澱粉の氷解物、糖蜜等の炭水化物が使用され、その
他酢酸、クエン酸等の有ｉ酸、あるいはエタノール、グ
リセリン等のアルコール類も単独あるいは上記。
他の炭素源と併用して使用できる。窒素源としては硫酸
アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無虫塩としてはリン
酸塩、マグネシウム塩、カルノウム塩、塩基、マンガン
塩が使用され、その他微量金属塩等を必要に応じて使用
する。有機微量栄養緊としては、栄養要求性のある場合
には該当するアミノ酸、ビタミン、脂肪酸類、有機塩基
物質等を適量添加し必要に応じてさらに生育促進物質と
してアミノ酸、ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分
解物）、酵母エキス、ペプトン、カザミノ酸等を使用す
る。
アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、アンモニアガス、その他を、無虫塩としてはリン
酸塩、マグネシウム塩、カルノウム塩、塩基、マンガン
塩が使用され、その他微量金属塩等を必要に応じて使用
する。有機微量栄養緊としては、栄養要求性のある場合
には該当するアミノ酸、ビタミン、脂肪酸類、有機塩基
物質等を適量添加し必要に応じてさらに生育促進物質と
してアミノ酸、ビタミン、味液（登録商標、大豆加水分
解物）、酵母エキス、ペプトン、カザミノ酸等を使用す
る。
培養条件は、通常の培養条件で良く、ｐＨ５ないし９、
温度は２０℃ないし４０℃で好気的条件下に２４ないし
９６時間培養すればよい。
温度は２０℃ないし４０℃で好気的条件下に２４ないし
９６時間培養すればよい。
培養中にｐＨが下がる場合には、炭酸カル／ラムを別殺
菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガス等の
アルカリで中和する。又、有機酸を炭素源とする場合は
ｐｒ−ｒの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する。
菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニアガス等の
アルカリで中和する。又、有機酸を炭素源とする場合は
ｐｒ−ｒの上昇を鉱酸又は有機酸で中和する。
トリプトファンの単離採取は常法によって行いうる。得
られたものはペーパークロマトグラム上のＲｆ 値、Ｅ
ｈｒｌｉｃｈ試薬によるトリプトファン特異反応或いは
微生物定量法による生物活性値により、トリプトファン
標品のそれらと一致することを確かめ、トリプトファン
と同定した。
られたものはペーパークロマトグラム上のＲｆ 値、Ｅ
ｈｒｌｉｃｈ試薬によるトリプトファン特異反応或いは
微生物定量法による生物活性値により、トリプトファン
標品のそれらと一致することを確かめ、トリプトファン
と同定した。
トリプトファンの定量はロイコ／ストック、メセンテロ
イデス（ＡＴＣＣ８０４２’）を用いる微生物定量法に
従って行った。
イデス（ＡＴＣＣ８０４２’）を用いる微生物定量法に
従って行った。
−° 以下、実施例にて説明する。
実施例１
下記第３表に示した組成のトリプトファン生産用培地２
０ｍ／を５００ｍ／！容のフラスコに分注し、加熱滅藺
した後、これに第４表に示す微生物をそれぞれ晃スラン
ト量植えつけ３０℃で９６時間振盪培養した。それぞれ
の培養液中のトリプトファン生成量は第４表の如くであ
った。
０ｍ／を５００ｍ／！容のフラスコに分注し、加熱滅藺
した後、これに第４表に示す微生物をそれぞれ晃スラン
ト量植えつけ３０℃で９６時間振盪培養した。それぞれ
の培養液中のトリプトファン生成量は第４表の如くであ
った。
第３表 トリプトファン生産用培地組成 （ｐＨ７，＋
１）グルコース ｓｏ ｆ
ｔ／１１塩化アンモニウム １０ ＫＨ２ＰＯ４１ Ｋ Ｃｌ ２ 〃Ｍｎ Ｓ
Ｏ４−７Ｈ２０］ ＯＭ９／ｌＦｅ ＳＯ４・４Ｈ２０
１０ カザミノ酸 ４ ９／１ＭＳ
’５Ｏ４−７Ｈ２００，４〃 ・町−ゆイッ、 。。 ヶ、／、。
１）グルコース ｓｏ ｆ
ｔ／１１塩化アンモニウム １０ ＫＨ２ＰＯ４１ Ｋ Ｃｌ ２ 〃Ｍｎ Ｓ
Ｏ４−７Ｈ２０］ ＯＭ９／ｌＦｅ ＳＯ４・４Ｈ２０
１０ カザミノ酸 ４ ９／１ＭＳ
’５Ｏ４−７Ｈ２００，４〃 ・町−ゆイッ、 。。 ヶ、／、。
（※ ＡＪ １１７３Ｂ の場合のみ添加）ＦＴ−
１４５１，９ ＡＪ １１７３７ ３．．５ＡＪ
１．１７３８ ６・５ＡＪ １１７３
９ ７．１特許出願人 味の素株式会社
１４５１，９ ＡＪ １１７３７ ３．．５ＡＪ
１．１７３８ ６・５ＡＪ １１７３
９ ７．１特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- バチルス属に属し、トリプトファンアナログおよびトリ
アゾールアラニンレこ耐性を有し、かつＬ −１−！Ｊ
ブトファン生産能を有する微生物を液体培地中に好気的
に培養し、培養液中にＬ−トリプトファンを生成蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とするＬ−）リプトフ
ァンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778381A JPS58107193A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778381A JPS58107193A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107193A true JPS58107193A (ja) | 1983-06-25 |
| JPH027637B2 JPH027637B2 (ja) | 1990-02-20 |
Family
ID=16545428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20778381A Granted JPS58107193A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58107193A (ja) |
-
1981
- 1981-12-22 JP JP20778381A patent/JPS58107193A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH027637B2 (ja) | 1990-02-20 |
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