JPH028718B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH028718B2 JPH028718B2 JP20778481A JP20778481A JPH028718B2 JP H028718 B2 JPH028718 B2 JP H028718B2 JP 20778481 A JP20778481 A JP 20778481A JP 20778481 A JP20778481 A JP 20778481A JP H028718 B2 JPH028718 B2 JP H028718B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tryptophan
- deoxyribose
- producing
- resistance
- resistant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、発酵法によるＬ−トリプトフアン
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或は３−インドールピルビン酸よりトリプ
トフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭48−18828、特公昭
53−39517）が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行つた結果、バチルス属の上記のようなト
リプトフアンアナログ耐性の他に更に２−デオキ
シリボースに耐性を有する微生物の中に、従来知
られているものより更に大量のトリプトフアンを
生産する能力を有する菌株があることを見い出し
た。この発明はこの知見に基づいて更に研究の結
果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属し、５−フルオロトリプトフアン、７−ア
ザトリプトフアン、メチルトリプトフアン、ナフ
チルアラニン、トリブタゾン等のトリプトフアン
アナログ及び２−デオキシリボースに耐性を有
し、かつトリプトフアンを生産する能力を有する
微生物であり、例えば、次のような変異株が使用
される。 バチルス・ズブチリス AJ11750 FERM−
P6267（５−Ｆ−Trpr、2DRr） バチルス・ズブチリス AJ11751 FERM−
P6268（５−Ｆ−Trpr、Leu-、2DRr） バチルス・ズブチリス AJ11752 FERM−
P6269（５−Ｆ−Trpr、IMr、2DRr） ５−Ｆ−Trpr：５−フロオロトリプトフアン耐
性 2DRr：２−デオキシリボース耐性 Leu-：Ｌ−ロイシン要求性 IMr：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射或はＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと
略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌株を親株が生育できないような量の２−
デオキシリボースを含有する平板寒天培地で培養
し、該平板培地上に生育するコロニーを分離する
ことによつて得られる。 上記の親株としては、トリプトフアンアナログ
耐性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有
するトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギ
ニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
エニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌
（特公昭53−39517号公報）、更にはトリプトフア
ンアナログ耐性でかつインドールマイシン耐性の
トリプトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）
等が使用される。具体例としては次のようなトリ
プトフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌
が使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145 FERM−
P1783（５−Ｆ−Trpr） バチルス・ズブチリス FFL−５ FERM−
P1786（５−Ｆ−Trpr＋Leu-） バチルス・ズブチリス AJ11483 FERM−
P5286（５−Ｆ−Trpr＋IMr） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これに２−デオキシリボース耐性を
付与した後トリプトフアンアナログ耐性を付与す
ることによつても誘導することができる。この場
合には更にトリプトフアン生産に有用な性質、例
えば、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ
−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対す
る栄養要求性、或はフエニルアラニンアナログ耐
性等を付与することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明の２−デオキシリボ
ース耐性トリプトフアン生産菌の２−デオキシリ
ボースに対する耐性度を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に4.0ml宛分注し、110℃で10分間加熱した。
これに別途フイルターで過（除菌）した２−デ
オキシリボース溶液を、第２表に示す濃度となる
ように加えて調体培地調製した。 上記培地に２−デオキシリボースを含まない最
少培地で24時間培養して得られたバチルス・ズブ
チリス AJ11750 、AJ11751、及びAJ11752の
培養液を夫々各0.1ml宛接種し、30℃で48時間振
盪培養を行い、培養液の570nｍの吸光度を測定
した。その結果を第２表に示す。 第１表 最少培地の組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 5.0ｇ／ 硫酸アンモニウム 1.0 〃 KH2PO4 8.65 〃 MgSO4・7H2O 0.2 〃 FeSO4・7H2O 10mg／ MnSO4・4H2O 10 〃 クエン酸ナトリウム 0.5ｇ／ ※Ｌ−ロイシン 10mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加）
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或は３−インドールピルビン酸よりトリプ
トフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭48−18828、特公昭
53−39517）が開発されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行つた結果、バチルス属の上記のようなト
リプトフアンアナログ耐性の他に更に２−デオキ
シリボースに耐性を有する微生物の中に、従来知
られているものより更に大量のトリプトフアンを
生産する能力を有する菌株があることを見い出し
た。この発明はこの知見に基づいて更に研究の結
果完成されたものである。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属し、５−フルオロトリプトフアン、７−ア
ザトリプトフアン、メチルトリプトフアン、ナフ
チルアラニン、トリブタゾン等のトリプトフアン
アナログ及び２−デオキシリボースに耐性を有
し、かつトリプトフアンを生産する能力を有する
微生物であり、例えば、次のような変異株が使用
される。 バチルス・ズブチリス AJ11750 FERM−
P6267（５−Ｆ−Trpr、2DRr） バチルス・ズブチリス AJ11751 FERM−
P6268（５−Ｆ−Trpr、Leu-、2DRr） バチルス・ズブチリス AJ11752 FERM−
P6269（５−Ｆ−Trpr、IMr、2DRr） ５−Ｆ−Trpr：５−フロオロトリプトフアン耐
性 2DRr：２−デオキシリボース耐性 Leu-：Ｌ−ロイシン要求性 IMr：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性のトリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射或はＮ−メチル−N′−
ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、NGと
略す。）亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、変異処
理した菌株を親株が生育できないような量の２−
デオキシリボースを含有する平板寒天培地で培養
し、該平板培地上に生育するコロニーを分離する
ことによつて得られる。 上記の親株としては、トリプトフアンアナログ
耐性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有
するトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギ
ニン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フ
エニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌
（特公昭53−39517号公報）、更にはトリプトフア
ンアナログ耐性でかつインドールマイシン耐性の
トリプトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）
等が使用される。具体例としては次のようなトリ
プトフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌
が使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145 FERM−
P1783（５−Ｆ−Trpr） バチルス・ズブチリス FFL−５ FERM−
P1786（５−Ｆ−Trpr＋Leu-） バチルス・ズブチリス AJ11483 FERM−
P5286（５−Ｆ−Trpr＋IMr） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これに２−デオキシリボース耐性を
付与した後トリプトフアンアナログ耐性を付与す
ることによつても誘導することができる。この場
合には更にトリプトフアン生産に有用な性質、例
えば、Ｌ−フエニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ
−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対す
る栄養要求性、或はフエニルアラニンアナログ耐
性等を付与することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明の２−デオキシリボ
ース耐性トリプトフアン生産菌の２−デオキシリ
ボースに対する耐性度を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地を直径16.5mmの試
験管に4.0ml宛分注し、110℃で10分間加熱した。
これに別途フイルターで過（除菌）した２−デ
オキシリボース溶液を、第２表に示す濃度となる
ように加えて調体培地調製した。 上記培地に２−デオキシリボースを含まない最
少培地で24時間培養して得られたバチルス・ズブ
チリス AJ11750 、AJ11751、及びAJ11752の
培養液を夫々各0.1ml宛接種し、30℃で48時間振
盪培養を行い、培養液の570nｍの吸光度を測定
した。その結果を第２表に示す。 第１表 最少培地の組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 5.0ｇ／ 硫酸アンモニウム 1.0 〃 KH2PO4 8.65 〃 MgSO4・7H2O 0.2 〃 FeSO4・7H2O 10mg／ MnSO4・4H2O 10 〃 クエン酸ナトリウム 0.5ｇ／ ※Ｌ−ロイシン 10mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加）
【表】
【表】
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース−澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝
酸塩、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含
有するペプトン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆
蛋白分解物等が使用され、生育にアミノ酸等を要
求する栄養要求性変異株を使用する場合には要求
される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。 培養は通常の培養条件下で行えば良く、PHを５
ないし９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜
４日間振盪培養又は通気撹拌培養することにより
培養液中に著量のトリプトフアンが蓄積される。
培養中にPHが下がる場合には、炭酸カルシウムを
別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニ
アガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭
素源とする場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中
和する。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法或はイオン交換クロマトグラフイー等によつて
採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容フラスコに分注し、110℃で
10分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞ
れ1/3スラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトフアン生成
量は第４表の如くであつた。 第３表 トリプトフアン生産用培地組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 80ｇ／ 塩化アンモニウム 10 〃 KH2PO4 １ 〃 KCl ２ 〃 MnSO4・7H2O 10ml／ FeSO4・4H2O 10 〃 カザミノ酸 ４ｇ／ MgSO4・7H2O 0.4 〃 CaCO2 40 〃 ※Ｌ−ロイシン 20mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） 第４表 トリプトフアン生成量 菌 株 （mg／ml） FT−145 1.90 AJ11750 2.5 FEL−５ 4.2 AJ11751 5.2 AJ11483 6.2 AJ11752 7.4
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース−澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独或は上記他の炭素源と併用して用いられる。窒
素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝
酸塩、尿素、ペプトン等有機或は無機の窒素源が
使用される。有機微量栄養素としてはアミノ酸、
ビタミン、脂肪酸、核酸、更にこれらのものを含
有するペプトン、カザミノ酸、酵母エキス、大豆
蛋白分解物等が使用され、生育にアミノ酸等を要
求する栄養要求性変異株を使用する場合には要求
される栄養素を補添することが必要である。無機
塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシ
ウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用される。 培養は通常の培養条件下で行えば良く、PHを５
ないし９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜
４日間振盪培養又は通気撹拌培養することにより
培養液中に著量のトリプトフアンが蓄積される。
培養中にPHが下がる場合には、炭酸カルシウムを
別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニ
アガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭
素源とする場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中
和する。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法或はイオン交換クロマトグラフイー等によつて
採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容フラスコに分注し、110℃で
10分間加熱した後、第４表に示す微生物をそれぞ
れ1/3スラント量植えつけ30℃で96時間振盪培養
した。それぞれの培養液中のトリプトフアン生成
量は第４表の如くであつた。 第３表 トリプトフアン生産用培地組成（PH7.0） 成 分 濃 度 グルコース 80ｇ／ 塩化アンモニウム 10 〃 KH2PO4 １ 〃 KCl ２ 〃 MnSO4・7H2O 10ml／ FeSO4・4H2O 10 〃 カザミノ酸 ４ｇ／ MgSO4・7H2O 0.4 〃 CaCO2 40 〃 ※Ｌ−ロイシン 20mg／dl （※Ｌ−ロイシン要求株の場合のみ添加） 第４表 トリプトフアン生成量 菌 株 （mg／ml） FT−145 1.90 AJ11750 2.5 FEL−５ 4.2 AJ11751 5.2 AJ11483 6.2 AJ11752 7.4
Claims (1)
- １ バチルス属に属し、トリプトフアンアナログ
及び２−デオキシリボースに耐性を有し、かつＬ
−トリプトフアン生産能を有する微生物を液体培
地中に好気的に培養し、培養液中にＬ−トリプト
フアンを生成蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とするＬ−トリプトフアンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778481A JPS58107194A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20778481A JPS58107194A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107194A JPS58107194A (ja) | 1983-06-25 |
| JPH028718B2 true JPH028718B2 (ja) | 1990-02-26 |
Family
ID=16545443
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20778481A Granted JPS58107194A (ja) | 1981-12-22 | 1981-12-22 | 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58107194A (ja) |
-
1981
- 1981-12-22 JP JP20778481A patent/JPS58107194A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58107194A (ja) | 1983-06-25 |
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