JPS5816691A - L−リジンの製造法 - Google Patents
L−リジンの製造法Info
- Publication number
- JPS5816691A JPS5816691A JP11627881A JP11627881A JPS5816691A JP S5816691 A JPS5816691 A JP S5816691A JP 11627881 A JP11627881 A JP 11627881A JP 11627881 A JP11627881 A JP 11627881A JP S5816691 A JPS5816691 A JP S5816691A
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- JP
- Japan
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- lysine
- nocardia
- methionine
- medium
- producing
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ノカルディア属細菌を使用するリジン発酵に
おいて、DL−メチオニンにより生育抑制をうけるし−
リジン生産菌を使用しリジン発酵をおこなわせ、培地中
に著量のリジンを蓄積せしめ、培地からし−リジンを回
収するし−リジンの製造法に関する。
おいて、DL−メチオニンにより生育抑制をうけるし−
リジン生産菌を使用しリジン発酵をおこなわせ、培地中
に著量のリジンを蓄積せしめ、培地からし−リジンを回
収するし−リジンの製造法に関する。
ノカルディア属細菌を使用するし−リジン発酵ニ関’イ
ハ特公昭47−43073(7)n−t、ラ,インを主
炭素源とする方法、特公昭48−10234のエチルア
ルコールを主炭素源とする方法、usp隘412332
9のn−パラフィンを主炭素源とする方法等があり、u
spNrx4123329には10%n−パラフィンか
ら52.5f/lのし−リジン(塩酸塩として)の生産
が報告されているが、ノカルディア属細菌を用いるリジ
ン生産において糖質を原料とする場合、著量のリジンが
生産されたという報告はない。
ハ特公昭47−43073(7)n−t、ラ,インを主
炭素源とする方法、特公昭48−10234のエチルア
ルコールを主炭素源とする方法、usp隘412332
9のn−パラフィンを主炭素源とする方法等があり、u
spNrx4123329には10%n−パラフィンか
ら52.5f/lのし−リジン(塩酸塩として)の生産
が報告されているが、ノカルディア属細菌を用いるリジ
ン生産において糖質を原料とする場合、著量のリジンが
生産されたという報告はない。
本発明者らは、ノカルディア属細菌を使用するし−リジ
ン発酵において糖質を炭素源とする場合に、DL−メチ
オニン単独により生育抑制をうけるし−リジン生産菌が
L−リジンを著量培地中に生産することを発見し、本発
明を完成した。
ン発酵において糖質を炭素源とする場合に、DL−メチ
オニン単独により生育抑制をうけるし−リジン生産菌が
L−リジンを著量培地中に生産することを発見し、本発
明を完成した。
本発明で使用される微生物はノカルディア属に属する細
菌で、DL−メチオニン単独添加培地で生育阻害が認め
られ(以下、感受性を有すると略記する)、L−リジン
を培地中に著量生成蓄積する能力を有する菌株である。
菌で、DL−メチオニン単独添加培地で生育阻害が認め
られ(以下、感受性を有すると略記する)、L−リジン
を培地中に著量生成蓄積する能力を有する菌株である。
したがってこのような感受性を有する菌株であれば、他
の薬剤に対する感受性又は耐性、栄養要求性などの性質
を併せ持っていても本発明で使用する微生物の範囲に含
まれる。本発明で用いられるし−リジン子産能の優れた
菌株としては、ノカルディア・アルカノグルチノーサ(
Nocardiaalkanoglutinousa)
7040微工研寄託第6046号、ノカルディア・アル
カノグルチノーサ7360等がある。これらの耐性菌は
天然から分離してもよく、また通常の変異方法により誂
導してもよい。又、アミノ酸アナログ例えばS−2アミ
ノエチルーL−システイン等のリジンアナログ、システ
イン酸、α一メチルアスパラギン酸、DL−スレオーβ
−ハイドロキシアスパラギン酸、デアミノコハク酸、ア
スパルトフエノン、β−メチルアスパラギン酸、α−ア
ミノレビュリン酸、β−アスパラギン酸ハイドラジツド
等のアスパラギン酸アナログ、αーメチルグルタミン酸
、メチオニンスルフオキサイド、γ−グルタミルエチル
アミド、S一カルノずミルシステイン、D一カルバミル
セリン、D一カノレバジルセリン等のグルタミン酸アナ
ログ、エチオニン、クロトニルアラニン、クロトニノレ
グリシン、メチオニンスルフオキシム、メトキニン等の
メチオニンアナログ、β−ハイドロキシノルノ寸リン、
β−ハイドロキシノルロイシン、セリン等のスレオニン
アナログ、更にメチオニン、システイン、スレオニン、
リジン、バリン等のアミノ酸の単独又はこれらk組合せ
た薬剤を含む培地に生育する菌株から埒でもよい。又、
この感受性菌にスレオニン、ホモセリシ、メチオニン、
ロイシン、アラニン、インロイシン、パリン、システイ
ン、セリン、グリシン、アルギニン等の単独又は組合せ
要求性を付与してもよい。また上記感受性と要求性を同
時に持つ菌の中から得てもよい。
の薬剤に対する感受性又は耐性、栄養要求性などの性質
を併せ持っていても本発明で使用する微生物の範囲に含
まれる。本発明で用いられるし−リジン子産能の優れた
菌株としては、ノカルディア・アルカノグルチノーサ(
Nocardiaalkanoglutinousa)
7040微工研寄託第6046号、ノカルディア・アル
カノグルチノーサ7360等がある。これらの耐性菌は
天然から分離してもよく、また通常の変異方法により誂
導してもよい。又、アミノ酸アナログ例えばS−2アミ
ノエチルーL−システイン等のリジンアナログ、システ
イン酸、α一メチルアスパラギン酸、DL−スレオーβ
−ハイドロキシアスパラギン酸、デアミノコハク酸、ア
スパルトフエノン、β−メチルアスパラギン酸、α−ア
ミノレビュリン酸、β−アスパラギン酸ハイドラジツド
等のアスパラギン酸アナログ、αーメチルグルタミン酸
、メチオニンスルフオキサイド、γ−グルタミルエチル
アミド、S一カルノずミルシステイン、D一カルバミル
セリン、D一カノレバジルセリン等のグルタミン酸アナ
ログ、エチオニン、クロトニルアラニン、クロトニノレ
グリシン、メチオニンスルフオキシム、メトキニン等の
メチオニンアナログ、β−ハイドロキシノルノ寸リン、
β−ハイドロキシノルロイシン、セリン等のスレオニン
アナログ、更にメチオニン、システイン、スレオニン、
リジン、バリン等のアミノ酸の単独又はこれらk組合せ
た薬剤を含む培地に生育する菌株から埒でもよい。又、
この感受性菌にスレオニン、ホモセリシ、メチオニン、
ロイシン、アラニン、インロイシン、パリン、システイ
ン、セリン、グリシン、アルギニン等の単独又は組合せ
要求性を付与してもよい。また上記感受性と要求性を同
時に持つ菌の中から得てもよい。
次に本発明で使用するDL−メチオニン感受性ノかルデ
ィア・アルカノグルチノーサ7040と感受性を有して
いないノカルディア・アルカノグルチノーサ22B−5
9微工研寄託Nx8260について、DL−メチオニン
、L−リジン、L−スレオニンの組合せに対する生育度
の変化を調べた実験例を示す。
ィア・アルカノグルチノーサ7040と感受性を有して
いないノカルディア・アルカノグルチノーサ22B−5
9微工研寄託Nx8260について、DL−メチオニン
、L−リジン、L−スレオニンの組合せに対する生育度
の変化を調べた実験例を示す。
実験例1
ノカルディア・アルカノグルチノーサ7040とノカル
ディア・アルカノグルチノーサ223−59をペプトン
S(大五栄養K.K.)1%、肉エキス1%、酵母エキ
ス0.5%、塩化ナトリュウム0.3%、寒天2%、P
H7.2(苛性ソーダで中和)の平板培地(以後、ぺ少
トンS肉汁寒天培地と略記する)に33゜C1日培養後
、下記の前培養培地に1白金耳植菌し33゜C29時間
培養し、下記最小培地に、DL−メチオニン、L−リジ
ン、L−スレオニンを第1表の如く添加した培地に0.
1耐づつ植菌し33゜C4B時間培養後、培地に生育し
た菌を1:80(濃塩酸:水)の塩酸溶液で10倍に希
釈し、分光光度計で610nmにおける吸光度を測定し
た。
ディア・アルカノグルチノーサ223−59をペプトン
S(大五栄養K.K.)1%、肉エキス1%、酵母エキ
ス0.5%、塩化ナトリュウム0.3%、寒天2%、P
H7.2(苛性ソーダで中和)の平板培地(以後、ぺ少
トンS肉汁寒天培地と略記する)に33゜C1日培養後
、下記の前培養培地に1白金耳植菌し33゜C29時間
培養し、下記最小培地に、DL−メチオニン、L−リジ
ン、L−スレオニンを第1表の如く添加した培地に0.
1耐づつ植菌し33゜C4B時間培養後、培地に生育し
た菌を1:80(濃塩酸:水)の塩酸溶液で10倍に希
釈し、分光光度計で610nmにおける吸光度を測定し
た。
前培養培地;グルコース20f1フラクトース20g、
K2HPO40.5(lXKH2PO40.5ダ、Na
2HPO4・12H201.Q4ダ、NaH2P04・
2H200.589、MgS04・7H201.Og,
KCIO.5f,NaC60.5fXFeSO4・7H
2020mg、znS04・7H2010qXMnSO
4・4H2010q1ペプトン85g、プロエキス2g
(トーメンK.K.)、cacg2−2H2o1.93
f,CaC0330f,硫安17.5!9(別殺菌添加
)、PH7.4(苛性ソーダにより中和)最終液量1l 大型試験管に5zl分注し、120゜C15分薫煮最小
培地;グルコース20g、フラクトース2Of,K2H
PO40.5f,KH2PO40.5f,Na2/HP
O4’12H201.049、NaH2PO4”2H2
00.58y,MgSO4・7H201.OfXKCI
O.5f,Na(J!0.59、FeSO4”7H20
20q,ZnSO4’7H2010W、MnSO4”4
H201qSCaC4・2Hp1.93f/、CaCO
330f,硫安17.5fI(別殺菌添加)、PH7.
4(苛性ソーダ中和)、最終液量667屡71大型試験
管に2mtづつ分注120゜C15分薫煮。別にアミノ
酸溶液を別殺菌し、1ytttを加え第1表の濃度にな
るようにする。
K2HPO40.5(lXKH2PO40.5ダ、Na
2HPO4・12H201.Q4ダ、NaH2P04・
2H200.589、MgS04・7H201.Og,
KCIO.5f,NaC60.5fXFeSO4・7H
2020mg、znS04・7H2010qXMnSO
4・4H2010q1ペプトン85g、プロエキス2g
(トーメンK.K.)、cacg2−2H2o1.93
f,CaC0330f,硫安17.5!9(別殺菌添加
)、PH7.4(苛性ソーダにより中和)最終液量1l 大型試験管に5zl分注し、120゜C15分薫煮最小
培地;グルコース20g、フラクトース2Of,K2H
PO40.5f,KH2PO40.5f,Na2/HP
O4’12H201.049、NaH2PO4”2H2
00.58y,MgSO4・7H201.OfXKCI
O.5f,Na(J!0.59、FeSO4”7H20
20q,ZnSO4’7H2010W、MnSO4”4
H201qSCaC4・2Hp1.93f/、CaCO
330f,硫安17.5fI(別殺菌添加)、PH7.
4(苛性ソーダ中和)、最終液量667屡71大型試験
管に2mtづつ分注120゜C15分薫煮。別にアミノ
酸溶液を別殺菌し、1ytttを加え第1表の濃度にな
るようにする。
第1表の結果から明らかな如く、DL−メチオニン0、
3〜1f/lの存在下でノカルディア・アルカノグルチ
ノーサ223−59の生育は殆んど阻害されないのに対
し、感受性株ノカルディア・アルカノグルチノーサ70
40の生育はこの条件で著しい生育阻害がみられる。こ
のことは他の感受性株ノカルディア・アルカノグルチノ
ーサ7360についても同様である。
3〜1f/lの存在下でノカルディア・アルカノグルチ
ノーサ223−59の生育は殆んど阻害されないのに対
し、感受性株ノカルディア・アルカノグルチノーサ70
40の生育はこの条件で著しい生育阻害がみられる。こ
のことは他の感受性株ノカルディア・アルカノグルチノ
ーサ7360についても同様である。
以上の結果から本発明でDL−メチオニン感受性と云う
微生物は、1例を示せばDL−メチオニンをlf/lの
濃度に最小培地に添加した培地に培養したときの生育が
無添加区の生育の50%以下のものである。
微生物は、1例を示せばDL−メチオニンをlf/lの
濃度に最小培地に添加した培地に培養したときの生育が
無添加区の生育の50%以下のものである。
培地に用いられる炭素源としては、グルコース、フラク
トース、澱粉又は糖蜜の加水分解物等の単糖類、酢酸、
乳酸、フマール酸、クエン酸等の有機酸、エタノール及
びn−アルカン等が用いられる。窒素源としては、グル
タミン酸、メチオニン等のアミノ酸逼大豆蛋白等の植物
蛋白氷解物;ペプトン、肉エキス、イーストエキス、硫
安、アンモニア水、塩化アンモン等を使用することが出
来る。又、必要に応じビタミンを添加してもよい。
トース、澱粉又は糖蜜の加水分解物等の単糖類、酢酸、
乳酸、フマール酸、クエン酸等の有機酸、エタノール及
びn−アルカン等が用いられる。窒素源としては、グル
タミン酸、メチオニン等のアミノ酸逼大豆蛋白等の植物
蛋白氷解物;ペプトン、肉エキス、イーストエキス、硫
安、アンモニア水、塩化アンモン等を使用することが出
来る。又、必要に応じビタミンを添加してもよい。
無機塩としては燐酸塩、マグネシュウム塩、カルシュウ
ム塩、カリ塩、ナトリュウム塩、鉄塩、マンガン塩、亜
鉛塩、その他微量金属を必要に応じて使用する。
ム塩、カリ塩、ナトリュウム塩、鉄塩、マンガン塩、亜
鉛塩、その他微量金属を必要に応じて使用する。
培養する場合PHは6〜9、好ましくは6〜8、温度は
20〜45゜C1好ましくは33〜39゜C1振盪培養
又は通気撹拌培養をする。
20〜45゜C1好ましくは33〜39゜C1振盪培養
又は通気撹拌培養をする。
L−リジンは常法により単離することが出来る。
即ちアンバーライトIR−120又はアンバーライ}I
RC−84等のイオン交換樹脂に吸着させ、水洗後アン
モニア水で溶出し濃縮後、濃塩酸で中和し更に濃縮冷却
し晶析する方法で得られる。
RC−84等のイオン交換樹脂に吸着させ、水洗後アン
モニア水で溶出し濃縮後、濃塩酸で中和し更に濃縮冷却
し晶析する方法で得られる。
L−IJジンの測定は、大腸菌の変異株を使用するパイ
オアツセイ法でおこなった。
オアツセイ法でおこなった。
以下に、実施例をあげて本発明を説明する。
実施例1
ノカルディア・アルカノグルチノーサ223−59及び
ノカルディア・アルカノグルチノーサ7040及びノカ
ルディア・アルカノグルチノーサ7360のペプトンS
肉汁寒天斜面培養(33゜Cl日)より1白金耳菌体を
とり、前記の前培養培地5tttlを含む大型試験管に
植菌し33゜Cl日培養する。この種母8ynlを下記
の本培養培地24mlを含む500耐容坂口フラスコに
8txt植菌し、同時に別殺菌した38%(w/v)硫
安を3ml添加し、36゜Cで振盪培養した所、培地中
に生成したし−リジンは塩酸塩として次の如くであった
。
ノカルディア・アルカノグルチノーサ7040及びノカ
ルディア・アルカノグルチノーサ7360のペプトンS
肉汁寒天斜面培養(33゜Cl日)より1白金耳菌体を
とり、前記の前培養培地5tttlを含む大型試験管に
植菌し33゜Cl日培養する。この種母8ynlを下記
の本培養培地24mlを含む500耐容坂口フラスコに
8txt植菌し、同時に別殺菌した38%(w/v)硫
安を3ml添加し、36゜Cで振盪培養した所、培地中
に生成したし−リジンは塩酸塩として次の如くであった
。
72時間目のしー
リジン濃度
ノカルテイア・アルカノク九チゾーナ223−5953
g/1ノデν冫1イア・アノレbノク冫レチノ−470
4048.5ダ/lノプν洲ア・フシ冫bノク》レ升ノ
ーサ736046.59/1本培養培地;グルコース5
0g1フラクトース50F/、K2HPO40.25!
,KH2PO40.25f,Na2HPO4・12H2
00.52g、NaH2P04・2H200.29f,
MgSO4−7H200.6f,NaClO.39、K
CI0.3f,FeS04・7H2020m+1i’X
ZnS04’7H20101#j,ペプトン85g,プ
ロエキス2g、グルタミン酸ナトリュウム1水塩1f.
.CaC4・2H200.97f−,CaCO3401
−,PH7.4(苛性ソーダにより中和)、全液i80
0tst実施例2 実施例1の本培養培地の炭素源をグ′ルコース80g、
フラクトース20gとする以外は、実施例1と同様に振
盪培養した。結果は次の如くであるQ 72時間目のしー リジン濃度 ノカルゲイア・アノnノク九イノーサ223−595.
1f/1ノカルヴイア・アノtrノクλイFノーサ70
40423Fl/1ノプν洲ア・アノレカノク)レチノ
−4736048.49/1実施例3 ノカルディア・アルカノグルチノーサ7040及びノカ
ルディア・アルカノグルチノーサ7360について本培
養温度を38℃とする以外は実施例1と同様に振盪培養
をおこない次の結果を得た。
g/1ノデν冫1イア・アノレbノク冫レチノ−470
4048.5ダ/lノプν洲ア・フシ冫bノク》レ升ノ
ーサ736046.59/1本培養培地;グルコース5
0g1フラクトース50F/、K2HPO40.25!
,KH2PO40.25f,Na2HPO4・12H2
00.52g、NaH2P04・2H200.29f,
MgSO4−7H200.6f,NaClO.39、K
CI0.3f,FeS04・7H2020m+1i’X
ZnS04’7H20101#j,ペプトン85g,プ
ロエキス2g、グルタミン酸ナトリュウム1水塩1f.
.CaC4・2H200.97f−,CaCO3401
−,PH7.4(苛性ソーダにより中和)、全液i80
0tst実施例2 実施例1の本培養培地の炭素源をグ′ルコース80g、
フラクトース20gとする以外は、実施例1と同様に振
盪培養した。結果は次の如くであるQ 72時間目のしー リジン濃度 ノカルゲイア・アノnノク九イノーサ223−595.
1f/1ノカルヴイア・アノtrノクλイFノーサ70
40423Fl/1ノプν洲ア・アノレカノク)レチノ
−4736048.49/1実施例3 ノカルディア・アルカノグルチノーサ7040及びノカ
ルディア・アルカノグルチノーサ7360について本培
養温度を38℃とする以外は実施例1と同様に振盪培養
をおこない次の結果を得た。
72時間目のしー
リジン濃度
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 [+)ノカルディア属に属し、DL−メチオニンにより
生育抑制をうけるリジン生産菌を、資化し得る炭素源及
び窒素源を含む培地に好気的に培養し、培地中!4L−
!Jジンを蓄積せしめ、これを回収することを特徴とす
るし−リジンの製造法。 (2)菌株がノカルディア・アルカリグルチノーサ70
40である特許請求の範囲第1項記載のし−リジンの製
造法。 (3)培養温度が30〜45゜Cの範囲である特許請求
の範囲第1項記載のし−IJジンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11627881A JPS5816691A (ja) | 1981-07-23 | 1981-07-23 | L−リジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11627881A JPS5816691A (ja) | 1981-07-23 | 1981-07-23 | L−リジンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5816691A true JPS5816691A (ja) | 1983-01-31 |
Family
ID=14683108
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11627881A Pending JPS5816691A (ja) | 1981-07-23 | 1981-07-23 | L−リジンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5816691A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61282065A (ja) * | 1985-06-07 | 1986-12-12 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素の製造方法 |
| WO2000056912A1 (en) * | 1999-03-19 | 2000-09-28 | Agro-Ferm A/S | Method for treating organic waste products |
-
1981
- 1981-07-23 JP JP11627881A patent/JPS5816691A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61282065A (ja) * | 1985-06-07 | 1986-12-12 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素の製造方法 |
| WO2000056912A1 (en) * | 1999-03-19 | 2000-09-28 | Agro-Ferm A/S | Method for treating organic waste products |
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