JPS58201722A - 抗ウロキナ−ゼ単一抗体の回収方法 - Google Patents
抗ウロキナ−ゼ単一抗体の回収方法Info
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- JPS58201722A JPS58201722A JP8152182A JP8152182A JPS58201722A JP S58201722 A JPS58201722 A JP S58201722A JP 8152182 A JP8152182 A JP 8152182A JP 8152182 A JP8152182 A JP 8152182A JP S58201722 A JPS58201722 A JP S58201722A
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- urokinase
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- antibodies
- monoclonal antibody
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶液から不純抗
体を除去し一１高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を回収
する方法に関するものである。
体を除去し一１高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を回収
する方法に関するものである。
抗ウロキナーゼ単一抗体は、細胞融合法により創出され
た抗ウロキナーゼ単一抗体産生細胞を培養して得られた
培養液から得られる抗体であり、ウロキナーゼの分析、
精製などに利用される。特に、抗原−抗体の特異的結合
を利用したアフィニティークロマトグラフィーへの応用
により、ウロキナーゼ精製ステップが飛躍的に改良され
ることから、今後盛んに利用されるものである。
た抗ウロキナーゼ単一抗体産生細胞を培養して得られた
培養液から得られる抗体であり、ウロキナーゼの分析、
精製などに利用される。特に、抗原−抗体の特異的結合
を利用したアフィニティークロマトグラフィーへの応用
により、ウロキナーゼ精製ステップが飛躍的に改良され
ることから、今後盛んに利用されるものである。
従来、大量の抗体を取得する方法としては、免疫した動
物より得られる抗血清゛から目的の抗体を精製する方法
が唯一のものであり、この精製法としては１、イオン交
換クロマトグラフィー、ゲルｆ過、・アフィニティーク
ロマトグラフィーなどがよく知られており、一般的に使
われてきた。しかし該抗血清法では必然的に膨大な種類
の抗体が産生じ、その多種類の抗体を含む抗血清から・
従来の方法又は組合せを用いても単一の目的抗体のみを
純度よく得るのは非常に困難であった。本発明者等は、
この点を改良するために細胞融合法を用いて抗ウロキナ
ーゼ単一抗体産生細胞を創出し１、この細胞を培養する
ことにより抗ウロキナーゼ単一抗体を大量に取得し、こ
れを用いてウロキナーゼを回収する方法を発明して先に
出願（特願昭５７−３２９０ ） した。しかし、単一
抗体産生細胞を用いる方法においても、若生の不純抗体
の混入があり、単一抗体を純粋な試薬としてさまざまな
分野に利用しようとする場合、この不純抗体を除去する
ことが望ましい。
物より得られる抗血清゛から目的の抗体を精製する方法
が唯一のものであり、この精製法としては１、イオン交
換クロマトグラフィー、ゲルｆ過、・アフィニティーク
ロマトグラフィーなどがよく知られており、一般的に使
われてきた。しかし該抗血清法では必然的に膨大な種類
の抗体が産生じ、その多種類の抗体を含む抗血清から・
従来の方法又は組合せを用いても単一の目的抗体のみを
純度よく得るのは非常に困難であった。本発明者等は、
この点を改良するために細胞融合法を用いて抗ウロキナ
ーゼ単一抗体産生細胞を創出し１、この細胞を培養する
ことにより抗ウロキナーゼ単一抗体を大量に取得し、こ
れを用いてウロキナーゼを回収する方法を発明して先に
出願（特願昭５７−３２９０ ） した。しかし、単一
抗体産生細胞を用いる方法においても、若生の不純抗体
の混入があり、単一抗体を純粋な試薬としてさまざまな
分野に利用しようとする場合、この不純抗体を除去する
ことが望ましい。
例えば、精製における抗体カラ、ムのリガ／ドとして利
用しようとす、る場合、用いる単一抗体の純度が作製さ
れた抗体カラムの吸着容量、精製度などの能力に影響を
及ばす。
用しようとす、る場合、用いる単一抗体の純度が作製さ
れた抗体カラムの吸着容量、精製度などの能力に影響を
及ばす。
本発明者等は、これらの問題点を改良すべ（鋭意研究を
重ねた結果、抗ウロキナーゼ単一抗体を回収する工程に
おいて、隘イオン交換クロマトグラフィーな行うことに
より高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を回収することが
できることを見出し、この知見に基ついて本発明を成す
に至った。尚、本発明において、以下不純抗体という用
語は抗ウロキナーゼ単一抗体以外の抗体を総称する意味
で用へ′・る。
重ねた結果、抗ウロキナーゼ単一抗体を回収する工程に
おいて、隘イオン交換クロマトグラフィーな行うことに
より高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を回収することが
できることを見出し、この知見に基ついて本発明を成す
に至った。尚、本発明において、以下不純抗体という用
語は抗ウロキナーゼ単一抗体以外の抗体を総称する意味
で用へ′・る。
、 即ち、本発明は抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶液
ρ・ら、抗ウロキナーゼ単一抗体を回収する工程におい
て、陰イオン交換クロマトグラフィーを行うことにより
、不純抗体を除去することを特徴とする抗ウロキナーゼ
単一抗体の回収方法に関するものである。
ρ・ら、抗ウロキナーゼ単一抗体を回収する工程におい
て、陰イオン交換クロマトグラフィーを行うことにより
、不純抗体を除去することを特徴とする抗ウロキナーゼ
単一抗体の回収方法に関するものである。
本発明で用いられる抗ウロキナーゼ単一抗体産生細胞は
、マウスＢ細胞とミエローマ細胞の融合により創出され
た融合細胞である。この単一抗体産生融合細胞は、Ｍｉ
ｌｓｔａｉ’ｎ等（Ｎａｔｕｒｅ、 ２５６巻。
、マウスＢ細胞とミエローマ細胞の融合により創出され
た融合細胞である。この単一抗体産生融合細胞は、Ｍｉ
ｌｓｔａｉ’ｎ等（Ｎａｔｕｒｅ、 ２５６巻。
’４９５−４９ ’１頁、 １９７５年）、によって最
初に報告され、例えば臨床免役（合口゛克他、１２ （
４１： ２８４−２８９負。
初に報告され、例えば臨床免役（合口゛克他、１２ （
４１： ２８４−２８９負。
１９８０年ン記載の方法で得ることができる。
すなわち、抗原として人尿又は人腎細胞培養液より得ら
れたウロキナーゼをあらかじめ免疫しておいたマウスＢ
ＡＬＢ／ｃ♂のひ臓からのＢ細胞（ここで用いるウロキ
ナーゼは必ずしも高純度のものを用いる必要はな（、例
えば純度１％以上のものであれば免疫は達成される。）
と、同マウス骨髄の膿瘍からのミエローマ細胞（例えば
、 Ｐ３ＵＩＸ６３Ａｇ８）を、細胞数ｌＯ：１の割合
にてポリエチレングリコールの存在下で融合させ、融合
した細胞のみを選択的に生き残らせるように調製した１
０％牛脂児血清添加ＨＡ Ｔ培養液に浮遊させ９６穴デ
イツシユにブレーティングする。約１週間後、ミエロー
マ細胞とＢ細胞との融合細胞以外は、・はとんど死滅し
ており、融合細胞のコロニーが形成されて（る。次に融
合細胞が目的とするウロキナーゼに対する抗体を産生じ
ているか・どうかを調べるため、その培養上清を用いて
１醇素免疫測定法」（石川栄治他著医学書院、１９７８
年）記載の酵素免疫測定法にてマイクロタイタープレー
トを用いて抗体産生能をチェックする。抗体産生が（刊
の培養上清のコロニーについては、１つのコロニーが１
つの培養孔に存在するようにクローニングし、７〜１０
日間培養後再び酵素免疫測定法にて抗体産生をチェック
する。
れたウロキナーゼをあらかじめ免疫しておいたマウスＢ
ＡＬＢ／ｃ♂のひ臓からのＢ細胞（ここで用いるウロキ
ナーゼは必ずしも高純度のものを用いる必要はな（、例
えば純度１％以上のものであれば免疫は達成される。）
と、同マウス骨髄の膿瘍からのミエローマ細胞（例えば
、 Ｐ３ＵＩＸ６３Ａｇ８）を、細胞数ｌＯ：１の割合
にてポリエチレングリコールの存在下で融合させ、融合
した細胞のみを選択的に生き残らせるように調製した１
０％牛脂児血清添加ＨＡ Ｔ培養液に浮遊させ９６穴デ
イツシユにブレーティングする。約１週間後、ミエロー
マ細胞とＢ細胞との融合細胞以外は、・はとんど死滅し
ており、融合細胞のコロニーが形成されて（る。次に融
合細胞が目的とするウロキナーゼに対する抗体を産生じ
ているか・どうかを調べるため、その培養上清を用いて
１醇素免疫測定法」（石川栄治他著医学書院、１９７８
年）記載の酵素免疫測定法にてマイクロタイタープレー
トを用いて抗体産生能をチェックする。抗体産生が（刊
の培養上清のコロニーについては、１つのコロニーが１
つの培養孔に存在するようにクローニングし、７〜１０
日間培養後再び酵素免疫測定法にて抗体産生をチェック
する。
ここでも抗体産性が（刊となったクローンは目的とする
ウロキナーゼに対して同一の抗体を産生する融合細胞の
コロニーであり、抗つロキナーゼ単−抗体注生融合細胞
を得ることができる。このようにして得られた融合細胞
は魚眼に継代培養され、抗ウロキナーゼ単一抗体を生産
し続ける。
ウロキナーゼに対して同一の抗体を産生する融合細胞の
コロニーであり、抗つロキナーゼ単−抗体注生融合細胞
を得ることができる。このようにして得られた融合細胞
は魚眼に継代培養され、抗ウロキナーゼ単一抗体を生産
し続ける。
次に、抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶液は、上記のよ
うにして得られた抗ウロキナーゼ単一抗体産生融合細胞
を細胞培養用容器にて又は、マウス腹腔内にて培養する
ことにより得ることができる。また、細胞′培養用容器
を“用いる培養方法に関する種々の条件は、一般の細胞
培養に用いられる条件１例えば１組織培養」（中井準之
助輪集、朝倉書店、 １９７６年）記載の条件を適用す
ることができる。すなわち細胞の培養のためには通常炭
素源、窒素源および無機塩類などから成る基本培養が必
要である。 ・ 本発明においてもこの基本培地は必要であり１例エハミ
ニマムエツセンシャルミティアム（ＭｉｎｉｍｕｍＥａ
ｓｅｎ−ｔｉ−ａｌ Ｍｅｄｉｕｍ） ＊ １９９培地
、ダルベコ改変イ−グルミゾイアＡ （Ｄｕｌｂｅａｃ
ｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ）
、 ハｂ （Ｈａｍ）のＦ−１０培地、ハムのＦ−１
２培地、 ＰＲＭＩ １６４０培地などが挙げられるが
、本発明の基本培地としてはいずれを用いてもよい。
うにして得られた抗ウロキナーゼ単一抗体産生融合細胞
を細胞培養用容器にて又は、マウス腹腔内にて培養する
ことにより得ることができる。また、細胞′培養用容器
を“用いる培養方法に関する種々の条件は、一般の細胞
培養に用いられる条件１例えば１組織培養」（中井準之
助輪集、朝倉書店、 １９７６年）記載の条件を適用す
ることができる。すなわち細胞の培養のためには通常炭
素源、窒素源および無機塩類などから成る基本培養が必
要である。 ・ 本発明においてもこの基本培地は必要であり１例エハミ
ニマムエツセンシャルミティアム（ＭｉｎｉｍｕｍＥａ
ｓｅｎ−ｔｉ−ａｌ Ｍｅｄｉｕｍ） ＊ １９９培地
、ダルベコ改変イ−グルミゾイアＡ （Ｄｕｌｂｅａｃ
ｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ）
、 ハｂ （Ｈａｍ）のＦ−１０培地、ハムのＦ−１
２培地、 ＰＲＭＩ １６４０培地などが挙げられるが
、本発明の基本培地としてはいずれを用いてもよい。
さらに通常はこれらの基本培地の他に血清が１０〜２０
％（Ｖ／Ｖ ）必要であるが、本発明者等はこの点につ
いても改良を加え、他の添加物で置き換えることにより
血清添加量を大巾に低減する方法を発明し、先に出願し
た。（特願昭５６−１３２６１９）次に、培地のｐＨや
培養温度は目的の細胞増殖に通常用いられる条件でよ（
、ｐＨは６〜８、培養温度は２５〜４０℃が一般的であ
る。培養容器も通常の培養用ディツシュ、培養フラスコ
など一般の細胞培養に用いられる容器はいずれも本発明
の方法に適用することができる。
％（Ｖ／Ｖ ）必要であるが、本発明者等はこの点につ
いても改良を加え、他の添加物で置き換えることにより
血清添加量を大巾に低減する方法を発明し、先に出願し
た。（特願昭５６−１３２６１９）次に、培地のｐＨや
培養温度は目的の細胞増殖に通常用いられる条件でよ（
、ｐＨは６〜８、培養温度は２５〜４０℃が一般的であ
る。培養容器も通常の培養用ディツシュ、培養フラスコ
など一般の細胞培養に用いられる容器はいずれも本発明
の方法に適用することができる。
次に、本発明で用いられる陰イオン交換体は、通常の陰
イオンクロマトに用いられる例えばＤＥＡＥ（ジエチル
アミンエチル）−セファデックス（）７ Ａ／ Ｗ−７
ア社登録ＷＢＪＩＡ ） 、 ＤＥＡＥ−セルロース。
イオンクロマトに用いられる例えばＤＥＡＥ（ジエチル
アミンエチル）−セファデックス（）７ Ａ／ Ｗ−７
ア社登録ＷＢＪＩＡ ） 、 ＤＥＡＥ−セルロース。
ＤＥＡＥ−セファロース（ファルマシア社登録商１ｆｓ
）。
）。
ＱＡＥ（ジエチル−（２−ハイドロオキシプロピル）ア
ミンエチルトーセファデックス（ファルマシア社登録商
標） 、 ＴＥＡＥ（） ！Ｊエチルアミノエチル）−
セルロースなどがあるが、リガンドと抗ウロキナーゼ単
一抗体との結合力などの点からＤＥＡＥ基を官能基とし
て有する隙イオン交換体が好ましい。
ミンエチルトーセファデックス（ファルマシア社登録商
標） 、 ＴＥＡＥ（） ！Ｊエチルアミノエチル）−
セルロースなどがあるが、リガンドと抗ウロキナーゼ単
一抗体との結合力などの点からＤＥＡＥ基を官能基とし
て有する隙イオン交換体が好ましい。
本発明の方法により、例えばカラムに充填された該陰イ
オン交換体と前記した抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶
液から硫安沈殿・透析により得られた溶液を接触せしめ
ることにより、抗ウロキナーゼ単一抗体は該陰イオン交
換体に固定されてカラムに保持され、未吸着不純抗体は
流出除去される。ここで、抗ウロキナーゼ単一抗体を含
む溶液の吸着及び洗浄における電導度はθ〜１５ ｍＪ
／（Ｍに保つ必要があり、この条件下において大部分の
不純抗体を流出除去できる。次に隙イオン交換体に吸着
された抗ウロキナーゼ単一抗体は電導度を１６ ｍ０７
ｃｍ以上より好ましくは３０ 鴨り以上に保った溶離液
を用いることにより該隘イオン交換体から溶離せしめら
れる。この方法を行うに際して、洗浄液・溶離液のｍ類
は通常の隙イオン交換クロマトグラフィーに用いられる
ものならどのようなものでもよ（、例えばアルキルアミ
ン、アミノエチルアルコール、アンモニウム、エチレン
ジアミン、イミダゾール、トリス、リン酸などがある。
オン交換体と前記した抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶
液から硫安沈殿・透析により得られた溶液を接触せしめ
ることにより、抗ウロキナーゼ単一抗体は該陰イオン交
換体に固定されてカラムに保持され、未吸着不純抗体は
流出除去される。ここで、抗ウロキナーゼ単一抗体を含
む溶液の吸着及び洗浄における電導度はθ〜１５ ｍＪ
／（Ｍに保つ必要があり、この条件下において大部分の
不純抗体を流出除去できる。次に隙イオン交換体に吸着
された抗ウロキナーゼ単一抗体は電導度を１６ ｍ０７
ｃｍ以上より好ましくは３０ 鴨り以上に保った溶離液
を用いることにより該隘イオン交換体から溶離せしめら
れる。この方法を行うに際して、洗浄液・溶離液のｍ類
は通常の隙イオン交換クロマトグラフィーに用いられる
ものならどのようなものでもよ（、例えばアルキルアミ
ン、アミノエチルアルコール、アンモニウム、エチレン
ジアミン、イミダゾール、トリス、リン酸などがある。
またこれらの溶液はすべてｐＨ６〜９に調節して使用す
るのがよい。さらに、洗浄液及び溶離液の電導度を保っ
たあの方法としては、例えば、ＮａＨ，ＰＯ４＋ Ｎａ
１ＨＰＯ４、ＮａＣｌ 、ＫＣｌ 、 ＫＨ，ＰＯ４，
に、ＨＰＯ４＊ ＭｇＣＩｔ ＋ＣａＣ１，などの無機
塩類を１種又は２撫以上絵加する方法が挙げられる。
るのがよい。さらに、洗浄液及び溶離液の電導度を保っ
たあの方法としては、例えば、ＮａＨ，ＰＯ４＋ Ｎａ
１ＨＰＯ４、ＮａＣｌ 、ＫＣｌ 、 ＫＨ，ＰＯ４，
に、ＨＰＯ４＊ ＭｇＣＩｔ ＋ＣａＣ１，などの無機
塩類を１種又は２撫以上絵加する方法が挙げられる。
本発明方法によれば、抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶
液に含まれる不純抗体を容易に分離除去することができ
、高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を取得することがで
きる。また、アフィニティークロマトグラフィーに比べ
て 和な条件で溶離できるので抗体の変性を防ぐことが
できる。さらに、本発明で使用する陰イオン交換体は市
販品で十分であり、安価に入手できるなど多（の利点を
有し、工業的に非常に有用である。
液に含まれる不純抗体を容易に分離除去することができ
、高純度の抗ウロキナーゼ単一抗体を取得することがで
きる。また、アフィニティークロマトグラフィーに比べ
て 和な条件で溶離できるので抗体の変性を防ぐことが
できる。さらに、本発明で使用する陰イオン交換体は市
販品で十分であり、安価に入手できるなど多（の利点を
有し、工業的に非常に有用である。
次に実施例によって不発ｆ！Ａをさらに詳細に説明（９
） する。
） する。
実施例】
抗つロキナーゼ単−抗体注生細胞をマウス腹腔内にて培
養し得られた腹水５ｎｄに硫安を加えて４５％飽和とし
、遠心して得られた沈殿を生理的リン酸嶽衝液（ｐＨ７
，０）５ｍｊに溶かし、２００倍量の同緩衝液にて４℃
、−晩透析した。透析終了後、遠沈して得られた溶液を
セファクリル５−ａｏｏ（ファルマシア件登録向標）、
１６φＸ、７４のカラムにチャージし、生理的リン酸ａ
Ｓ液（ＰＨ７りで展開してゲル濾過を行うことにより、
アルブミン分画等を除去した抗体分画（ｕｓｙｙ＋１）
を得た。この分画を碌縮して５ｍｔとし、電導度１．２
ｍ０７ｃｍの０．０２５Ｍ ）リスー塩酸叡衝液（ｐ
Ｈ８，０）Ｉ Ｊにて４℃、−晩透析した。
養し得られた腹水５ｎｄに硫安を加えて４５％飽和とし
、遠心して得られた沈殿を生理的リン酸嶽衝液（ｐＨ７
，０）５ｍｊに溶かし、２００倍量の同緩衝液にて４℃
、−晩透析した。透析終了後、遠沈して得られた溶液を
セファクリル５−ａｏｏ（ファルマシア件登録向標）、
１６φＸ、７４のカラムにチャージし、生理的リン酸ａ
Ｓ液（ＰＨ７りで展開してゲル濾過を行うことにより、
アルブミン分画等を除去した抗体分画（ｕｓｙｙ＋１）
を得た。この分画を碌縮して５ｍｔとし、電導度１．２
ｍ０７ｃｍの０．０２５Ｍ ）リスー塩酸叡衝液（ｐ
Ｈ８，０）Ｉ Ｊにて４℃、−晩透析した。
透析終了後、遠沈して得られた抗体溶液を同緩衝液で十
分に洗浄したＤＥＡＥ−セルロース（ワンドマン社ｊＬ
ｌｊＤＥ５２）のカラＡ（１６φ、２０ｍ１）に通した
。
分に洗浄したＤＥＡＥ−セルロース（ワンドマン社ｊＬ
ｌｊＤＥ５２）のカラＡ（１６φ、２０ｍ１）に通した
。
未吸着分画を電導度１．２川／ｃＩＩＬのｏ、ｏ２５Ｍ
）リスー塩酸級術液（ｐＨ８，０）で洗浄除去後、カラ
ムに吸着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体’１Ｎａｃ
ｌで電導（１０） 度を徐々に上昇させた（１〜５０１ＲＪ／ｃｍ ）同緩
衝液にて溶出した。溶出した分画のＡ２．。と抗原（ウ
ロキナーゼ）結合能（前記した酵素免疫測定法にて測定
）及び電導度の関係を矛１図に示した。オ・１図より大
部分の抗原結合能が回収分画に認められた。またこの分
画はポリアクリルアミドディスク電気泳動により、はば
単一のバンドから成ることが認められた。
）リスー塩酸級術液（ｐＨ８，０）で洗浄除去後、カラ
ムに吸着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体’１Ｎａｃ
ｌで電導（１０） 度を徐々に上昇させた（１〜５０１ＲＪ／ｃｍ ）同緩
衝液にて溶出した。溶出した分画のＡ２．。と抗原（ウ
ロキナーゼ）結合能（前記した酵素免疫測定法にて測定
）及び電導度の関係を矛１図に示した。オ・１図より大
部分の抗原結合能が回収分画に認められた。またこの分
画はポリアクリルアミドディスク電気泳動により、はば
単一のバンドから成ることが認められた。
実施例２
抗ウロキナーゼ単一抗体産生細胞を細胞培養用容器にて
培養して得られた培養液１１から実施例１同様の硫安沈
殿、ゲルｒ過により抗体分画（２５７？１ｌＪ）を得た
。この分画を濃縮して５ ｍｌとし、電導度２．５ 川
／（ｍの０．０６７Ｍ ）リス−リン酸緩衝液（ｐＨｓ
ｓ’） ｚ ｔにて４℃、−晩透析した。透析終了後、
遠沈して得られた抗体溶液を同緩衝液で十分に洗浄Ｌ
タＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６Ｂ （ファルマシア
社登録商Ｓ）のカラム（１６φ、２０ｍｊ）に通した。
培養して得られた培養液１１から実施例１同様の硫安沈
殿、ゲルｒ過により抗体分画（２５７？１ｌＪ）を得た
。この分画を濃縮して５ ｍｌとし、電導度２．５ 川
／（ｍの０．０６７Ｍ ）リス−リン酸緩衝液（ｐＨｓ
ｓ’） ｚ ｔにて４℃、−晩透析した。透析終了後、
遠沈して得られた抗体溶液を同緩衝液で十分に洗浄Ｌ
タＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６Ｂ （ファルマシア
社登録商Ｓ）のカラム（１６φ、２０ｍｊ）に通した。
未吸着分画を電導度２．５用／ａｍの０．０６７Ｍ ）
！Ｊスス−ン酸緩衝液（Ｐｉ（８，５）で洗浄除去後
、カラムに吸（１１） 着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体’ｆ Ｎ’ａ Ｃ
ｌで電導度を３０１１ＲＪ／Ｃｍに調節した同緩衝液に
て溶出した。溶出した分画のＡ、８゜と抗原結合能の関
係な矛２図に示した。１・２図より、実施例１同様、大
部分の抗原結合能が回収分画に認められ、電気泳動的Ｉ
Ｃモホば単一のバンドであることが確認された。
！Ｊスス−ン酸緩衝液（Ｐｉ（８，５）で洗浄除去後
、カラムに吸（１１） 着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体’ｆ Ｎ’ａ Ｃ
ｌで電導度を３０１１ＲＪ／Ｃｍに調節した同緩衝液に
て溶出した。溶出した分画のＡ、８゜と抗原結合能の関
係な矛２図に示した。１・２図より、実施例１同様、大
部分の抗原結合能が回収分画に認められ、電気泳動的Ｉ
Ｃモホば単一のバンドであることが確認された。
実施例３
実施例】と同様の方法により得られた抗体分画（２０ｗ
ｒｌ ｋ １ｍｌ縮して５Ｆ）Ｉｊとし、電導度０．５
＞ｎ（３７ｃｍの０．０１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８
，０）ｌｌにて４℃、−晩透析した。透析終了後、遠沈
して得られた抗体溶液を同緩衝液で十分に洗浄したＤＥ
ＡＥ−セファデックス（ファルマシア社登録商標）のカ
ラム（ｌＳ−。
ｒｌ ｋ １ｍｌ縮して５Ｆ）Ｉｊとし、電導度０．５
＞ｎ（３７ｃｍの０．０１ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８
，０）ｌｌにて４℃、−晩透析した。透析終了後、遠沈
して得られた抗体溶液を同緩衝液で十分に洗浄したＤＥ
ＡＥ−セファデックス（ファルマシア社登録商標）のカ
ラム（ｌＳ−。
２０ｍｌ ）に通した。
未吸着分画を電導度０．５ ｎｒＴＪ／ｃｙＬの０．０
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄除去後、カラム
に吸着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体なＮａＣ１で
電導度を３０町／ｃＩＩＬに調節した同緩衝液にて浴出
することにより、実施例２とほば同様の結果が得られた
。
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄除去後、カラム
に吸着保持された抗ウロキナーゼ単一抗体なＮａＣ１で
電導度を３０町／ｃＩＩＬに調節した同緩衝液にて浴出
することにより、実施例２とほば同様の結果が得られた
。
（１２）
３・１図は実施例１におけるＤＥＡＥセルロースクロマ
トパターンを示す浴出した分画のＡｔａｏと抗原結合能
及びｔ導度の関係を示したグラフであり、７２図は実施
例２におけるＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６Ｂクロマ
トパターンを示すところの俗用した分画のＡ２８０と抗
原結合能及び電導度の関係を示したグラフである。 特許出願人 旭化成工業株式会社 （１３）
トパターンを示す浴出した分画のＡｔａｏと抗原結合能
及びｔ導度の関係を示したグラフであり、７２図は実施
例２におけるＤＥＡＥ−セファロースＣＬ−６Ｂクロマ
トパターンを示すところの俗用した分画のＡ２８０と抗
原結合能及び電導度の関係を示したグラフである。 特許出願人 旭化成工業株式会社 （１３）
Claims (3)
- （１） 抗ウロキナーゼ単一抗体を含む溶液から、抗
ウロキナーゼ単一抗体を回収する工程において、陰イオ
ン交換クロマトグラフィーを行うことにより、不純抗体
を除去することを特徴とする抗ウロキナーゼ単一抗体の
回収方法 - （２）陰イオン交換クロマトグラフィーにおいてＤＥＡ
Ｅ基２を有する陰イオン交換体を用いることを特徴とす
る特許請求の範囲、１−１項記載の抗ウロキナーゼ単一
抗体の回収方法 - （３）陰イオン交換クロマトグラフィーにおいて、吸着
液及び洗浄液の電導度がθ〜１５ ｒｒｌＪ／ｃｔｎで
あり、溶離液が１６ ｒｒｌｃＪ／ｃｔｎ、以上である
ことを特徴とする特許請求の範囲矛１項記載の抗ウロキ
ナーゼ単一抗体の回収方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8152182A JPS58201722A (ja) | 1982-05-17 | 1982-05-17 | 抗ウロキナ−ゼ単一抗体の回収方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8152182A JPS58201722A (ja) | 1982-05-17 | 1982-05-17 | 抗ウロキナ−ゼ単一抗体の回収方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58201722A true JPS58201722A (ja) | 1983-11-24 |
Family
ID=13748637
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8152182A Pending JPS58201722A (ja) | 1982-05-17 | 1982-05-17 | 抗ウロキナ−ゼ単一抗体の回収方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58201722A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6185326A (ja) * | 1984-10-03 | 1986-04-30 | Fuji Yakuhin Kogyo Kk | 抗ヒト単鎖ウロキナ−ゼ抗体 |
-
1982
- 1982-05-17 JP JP8152182A patent/JPS58201722A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6185326A (ja) * | 1984-10-03 | 1986-04-30 | Fuji Yakuhin Kogyo Kk | 抗ヒト単鎖ウロキナ−ゼ抗体 |
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