JPS5840532B2 - Ｉｇａ オヨビ ｉｇｍ ノネツアンテイカホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は人の血漿又は胎盤抽出液或はこれらを分画して
得られるＩｇＡおよびＩｇＭの熱安定化法に係り、詳し
くは肝炎ウィルスを不活化するための加熱処理に際し、
ＩｇＡ又はＩｇＭＪ・の熱安定性を高める方法に関する
ものである。

最近輸血に伴なう血清肝炎の発症が大きな社会問題とな
っているが、その原因が肝炎ウィルスによることが明ら
かにされている。

肝炎ウィルスは従来２オーストラリア抗原といわれたも
ので、現在ではＨＢ抗原と呼ばれている。

しかるに輸血用の血漿はＨＢ抗原の不活化処理を施すこ
とが困難であるため、抗ＨＢ抗原を用いてあらかじめ免
疫学的測定法でＨＢ抗原の濃度を測定し、高濃度にＨＢ
抗原を含有する血漿を除外することによっである程度の
肝炎発症防止効果をあげているが十分ではない。

血漿を分画して得られる個別の人血清蛋白製剤について
も肝炎発症の問題は包含されている。

しかし特にアルブミン製剤について６０℃、１０時間の
加熱処理を施すことにより、アルブミンを変質させるこ
となく肝炎の感染性を阻止し得ることが見出され、その
後アルブミン製剤にはこの加熱処理が施され、安全に臨
床使用されている。

このように６０℃、１０時間加熱処理を施した製剤が投
与後肝炎発症の防止に有効であることが判明して以来、
この方法は他の人血清蛋白製剤に応用されている。

６０℃、１０時間の加熱処理の方法を応用できる物質は
、この処理に対して物質自体が安定でなげればならない
。

そこでこの加熱処理を可能とするために各種の安定化剤
が見出され、安定化剤なしでは加熱処理に耐え得ないが
、安定加削の存在下では加熱処理を可能となし得る物質
がある。

般に人血清蛋白の安定化剤としてはアミノ酸や糖類など
が生理的等張或はそれ以下の濃度で用いられる。

発明者は先にハプトグロビン製剤においてアミノ酸およ
び糖類をそれぞれ生理的等張濃度である２、２５％およ
び５％の濃度に添加して６０℃、１０時間の加熱処理を
行なったところ、ハプトグロビンの活性は著しく低下し
た。

そこでハプトグロビンの熱安定化法について多くの研究
を重ねた結果、アミノ酸或は糖類、特にグリシン或はマ
ンニットを１５％以上の濃度に添加することにより、６
０℃、１０時間の加熱処理に対する熱安定性を著しく高
め、製剤の肝炎ウィルス不活化処理を可能とした（特願
昭４８−１２８６０６号参照）。

発明者はその後この熱安定化法がハプトグロビンのみな
らずＩｇＡおよびＩｇＭ に対して有効であることを見
出し、この新知見に基づいて本発明を完成したのである
。

本発明はＩｇＡ又はＩｇＭ（人血清免疫グロブリンＡ又
は同Ｍ）の水溶液にグリシン、アラニン、バリン等の中
性アミノ酸、グルコース、マンノース、果糖などの単糖
類、ショ糖、麦芽糖、乳糖などの三糖類、マンニット、
ンルビット、キシリットなどの糖アルコーツレ類を単独
又は混合して５％以上の濃度に添加し、これに６０℃、
１０時間の加熱処理を施すのである。

加熱前の蛋白に対し加熱後の溶液中の蛋白残存量を一元
免疫拡散法により定量した結果、これらの安定化剤の５
％以上の濃度、好ましくは１５〜２０％濃度の添加で熱
安定効果が顕著に認められた。

各種の安定化剤による熱安定効果を加熱処理前のＩｇＡ
およびＩｇＭを１００％とする加熱処理後の残存率（％
）で示すと第１表の通りである。

本発明のＩｇＡおよびＩｇＭに対する熱安定効果は血漿
の状態においても、血漿分画工程の途中の溶液において
も、又精製ＩｇＡおよびＩｇＭ水溶液に対してもきわめ
て明確に有効であった。

さらに人血清蛋白製剤は人の胎盤からも得ることができ
る。

胎盤を原料とした場合もその抽出液或は適当な精製工程
を行った後の水溶液にアミノ酸、糖類、糖アルコール類
を５％以上、好ましくは１５〜２０％の温度で添加する
ことにより、６０℃、１０時間の加熱処理を施した際胎
盤由来ＩｇＡおよびＩｇＭは血漿を材料とした場合と同
様に安定化された。

このような加熱処理を施したのち、ＩｇＡおよびＩｇＭ
を所定の方法で精製を進めて薬剤としたとき、その投与
による肝炎の発症の危険性のない医療用ＩｇＡおよびＩ
ｇＭ製剤が得られた。

本発明によるときは医療用として有用なＩｇＡおよびＩ
ｇＭの熱安定性を顕著に高めることができ、安全なＩｇ
ＡおよびＩｇＭ製剤を収率よく製しうる効果がある。

次に幾つかの実施列を挙げて本発明を具体的に説明する
。

なお本発明はこれらの実施例に示される安定化剤および
対象に限定されるものではない。

実施列 １ プール人血漿１１にグリシン２５Ｍ’を溶解し、Ｏ１■
規定カセイソーダ又は０．１規定塩酸を用いてｐＨを８
．０に調整する。

除菌濾過して６０℃、１０時間の加熱処理を施した。

加熱後生理食塩液（ｐＨ７ｙ２ ）で透析し、生じた沈
澱を遠心分離して除去し、澄明な溶液を得た。

加熱前後のＩｇＡの定量を一元免疫拡散法により測定し
たとき、定量値はそれぞれ１７５．２’ｍ９／ｄｉおよ
び１３２．８１ｖ／ｄｌであった。

同様にＩｇＭの定量値はそれぞれ１０９１１１９／ｄｌ
および６ＵＩ１９／ｄｌ−Ｃ−あった。

実施例 ２ 実施例１で用いたグリシンの代りにマンニット２０Ｏｆ
？を用いて同様に処理した。

加熱前後のＩｇＡの定量を一元免疫拡散法により測定し
たとき、定量値はそれぞれ１７０．３ ｍ９／ｄｌおよ
び１０８８ｍ９７ｄｌであった。

同様にＩｇＭの定量値は１１６１１１９／ｄｌおよび１
０３１１１９／ｄｉ！Ｑアツタ。

実施例 ３ 実施例１で用いたグリシンの代りにブドウ糖２５０？を
用いて同様に処理した。

加熱前後のＩｇＡの定量値はそれぞれ１７２．３■／ｄ
ｌおよび１３９、６ ｍ９／ｄｌテあった。

同様にＩｇＭの定量値１１１即／ｄｌおよび９０■／ｄ
ｌであった。

実施例 ４ プール人血漿をコーンの低温エタノール分画法で分画し
て得た画分ＩＶ３０Ｐに水を加えて均一な懸濁液とし、
遠心分離して不溶性物質の大部分を除去する。

この液にアラニン６０グを溶解し、ｐＨを７．５に調整
したのち水を加えて全量３００ｍ１とする。

この液を６０℃、１０時間加熱したのち、ｐＨ６，０の
０．００６３Ｍ酢酸緩衝液で透析し、生じた沈澱を遠心
分離して除去し、澄明な液を得る。

ＩｇＡの定量を加熱処理前後の液について一元免疫拡散
法で測定したとき、定量値はそれぞれ２１３ ｍ９７ｄ
ｌおよび１４９ ｍｑ／ｄｌテあった。

同様にＩｇＭの定量値は１３２ｍ９／ｄｌおよび８８，
４ｙｎｙ／ｄｌであった。

実施列 ５ プール人血漿にグリシンおよびマンニットをそれぞれ１
５％の濃度に溶解した溶液を１：２の割合で混入し、こ
の溶液を６０℃、１０時間加熱した。

加熱後生理食塩液で透析し、生じた沈澱を遠心分離して
除去し、澄明な溶液を得た。

加熱前後の液につきＩｇＡの定量を一元免疫拡散法で測
定したとき、定量値はそれぞれ７２．３■／ｄｉおよび
５７．６■／ｄｌであった。

同様にＩｇＭの定量値は４５■／ｄｌおよび３４．６■
／ｄｌであった。

実施例 ６ 胎盤３個を凍結融解を３回繰返した後細砕し、同重量の
生理食塩液を加えてよくホモジネートしたのち遠心分離
して残香を分離し、澄明な液を得る。

この液１．ｅにマンニット２００グを加えｐＨを７．２
に調整したのち６０℃、１０時間加熱した。

加熱を終えた液をｐＨ６，０の０．００６３Ｍ酢酸緩衝
液で透析し、生じた沈澱を除去して澄明な溶液を得る。

加熱前後の液についてＩｇＡおよびＩｇＭの定量を一元
免疫拡散法で測定したときの定量値は、ＩｇＡについて
はそれぞれ２６１１１９／ｄｌおよび２０．８ ｍ９／
ｄｌであり、ＩｇＭについてはそれぞれ１６．０■／ｄ
ｌおよび１３．５〜／ｄｌであった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 人の血漿又は胎盤抽出液或はこれらを分画して得ら
   れるＩｇＡ又はＩｇＭを含有する溶液を中性アミノ酸類
   、単糖類、三糖類及び（又は）糖アルコール類の存在下
   において、肝炎ウィルスを不活化するための加熱処理を
   施すことを特徴とするＩｇＡおよびＩｇＭの熱安定化法
   。