JPS585302A - 生物学的に作用を有する物質を固定するための核一外皮構造を有する再分散性ポリマ−ラテツクス、該ラテツクスの水性分散液、診断試薬の製法、抗原抗体反応検出法、抗体、微生物、ヴイ−ルス及び酵素の固定法、バイオ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の外皮範囲に共有結合固定に好適な官能基を有す
る核−外皮構造の、生物学的に作用を有する物質を固定
するために好適なラテックスに関する。

生物学的に作用を有する物質の担体固定化の問題は例え
ｅ生化学及び生物工学、医学１％に診断医学等の技術分
野において多くの観点下に考慮されている。一般に固定
すべき１生物学的に作用を有する物質ｌ　とは生物学的
システムとの相互作用に好適な化合物もしくＦｉｍ能単
位。

もしくはこの生物学的システム自体である。この技術は
、とりわけ触媒、殊に酵素の固定、更に例えば親和性ク
ロマトグラフィーに重要な基質固定に特に重要である０
次に、存在する技術上の問題を明らかにするために、診
断学的に評価することのできる亀生物学的に作用を有す
る物質ｌの固定に関してよプ詳細にふれる。

この種の診断学的に評価することのできる反応において
は、有機体中に存在するか又は有機体から生成される診
断学；１的１ノに把握すべき状態に兆候的な物質と、こ
れら１兆候的ｌな物質にできるかぎり特異的に応答する
物質との相互作用の把握が問題である。免疫反応は非常
に高い特異性を有する。免疫反応は知られているように
抗原及び抗体間で行なわれる二両方の反応対の一方は公
知でなければならない、こうして他の一方を体液中で定
性的又は定量的に測定するか又は細胞及び組織中に位置
決定することができる。

抗原抗体反応の検出のために種々の分析法がある０例え
ばラジオ免疫効力検定、酵累効カ検定、免疫螢光、免疫
拡散１％に免疫凝集反応がある。

免疫凝集反応は、その固化が免疫反応を視覚的又は測光
的に把握可能とする粒子状担体を指示薬として使用する
ことにより、自体低い濃度の免疫学的に活性の物質の検
出を可能とする。

使用した担体の種類によジノ々クチリア凝集、尿凝集、
白血球凝集、ベントナイト凝集及びラテックス凝集ｒｃ
釧刀り１心、ファ゛ツク−Ａ　置乗ｉｗ　＆　琶的多大
な注目が向けられた。提案きれているラテックスは種々
のポリマータイプに属する。スチロール４Ｌ（ｕスチル
−ル含有コホリマー（カル２キシル化ポリスチロール、
カル２キシル（Ｉｌ？リスチロールーブタジェンーコホ
リマー。

スチロールーシヒニルベンゾール、スチロール−アクリ
ルアミド、アクリルニトリル−ブタジェン−スチロール
、スチロール−メタクリレート）をペースとするラテッ
クス又はアニオン系樹脂、ジアゾ化アミノセルロースを
ペースとするラテックスが微粒子等の形で、しばしば使
用される。

メタクリレニドペース（アクリレートペース）のラテッ
クスも提案されている。米国特許第４１３８３８３号明
細書に−よれば−ＯＨ，−ＮＨ鵞又は−０００１（基を
含有するアクリレートモノマーから架橋剤の存在下に均
一の直径＜２０００Ａの微細球の懸濁液の形にポリマー
を製造する。

このラテックス微細球に、縮合剤としてカルゼジイミド
又はグルタルアルデヒドの存在下に免疫グロブリンＧ（
ＩｇＧ）を共有結合させる。ラテックス構造の改変の試
みも行なわれた。こうして、西ドイツ国特許公開第２８
４０７６８号公報中にけ、ラテックスに水溶性ポリヒド
ロキシ化合物が共有結合しているラテックスが担持体と
して提案されている。この公開公報は０．０１〜約０．
９μｍの範囲の粒径及び水の比重に近い比重である。

ラテックス材料は免疫診断テストに関して不活性であり
、ポリヒドロキシ化合物との共有結合を可能とする活性
基を有すべきである。これらの条件が満たされる限シ、
任意のラテックス−４リマーが好適である。

ベルギー特許第８７４５８８号明細書には外皮構造を有
する直径０．１５〜１．５μｍのラテックス粒子が勧め
られている。この際、核は１硬質ｌモノマーの重合又は
共１合により形成され、外側被覆は１１１１以上の一硬
質Ｉ七ツマーと遊離エポキシ基を有するエチレン系不飽
和化合物との共重合により製造される０例えば、ポリス
チロールラテックスの存在下にスチロールとグリシジル
メタクリレートとのラジカル重合は記載されている。そ
のように形成されたラテックスは例えば人−クロリオン
ザナドトロビン（Ｈｕｍａａ＋−Ｏｋｌｏｒｉｏｎｇｏ
ｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ）を担持することができる。しか
し、従来免疫−診断学においてラテックス−構想の技術
上の実現はある一定程度を越えない、限定するファクタ
ーには１例えば生物学的に作用を有する物質の（例えば
、抗体の）結合が属する。従来、生物学的に作用を有す
る物質はラテックスに主に吸着的に結合された。

僅かにルーズに結合した／々イオマクロ分子の拡散のた
めにほとんど必要的に問題が生じた。

すでに記載したように、いくつかの場合生物学的に作用
を有する物質の共有結合が利用される。この際、一般に
その導入が多数回の工程で行なわれなければならない結
合官能基が問題であり、多くの場合−０００１（基又は
−Ｎ　Ｈ，基のポリマー類似導入並びに引き続く（可溶
性の）カルゼジイミド又はグルタルジアルデヒドを用い
ての蛋白質とのカップリングに関する０例としては西ド
イツ国特許公開第２８１２８４５号公報による多工程共
有結合固定をあげることができる。西ドイツ国特許公開
第２８３３５１０号公報からは核−外皮構造が公知であ
シ、ここでは核はビニル−及び／又はジエンポリマーと
カルゼン酸−及び／又はスルホン酸基とから製造されて
お夛、外皮はぎニルポリマーと末端位でアミン置換のチ
オフェノールエーテル基トから製造されている。ラテッ
クスの活性化は例えばジアゾ化によシ行なわれる。

多工程による共有結合固定のかわりに、永久的反応性基
１例えばオキシラン基を有するラテックスを使用するこ
とも試みられた。しかし、これらは非常に僅かな貯蔵安
定性を示す。生物学的に作用を有するシステムを固定す
るために使用するラテックスの重大な欠点としては、費
用がかか！１１．かつ欠くことのできない精製処理であ
ろう、ラテックスへの蛋白質の共有固定の際に、例えば
すべての助剤（カル−ジイミドカッシリングの場合には
生じる尿素）及び特に結合しない蛋白質を長い精製工程
で、例えば超遠心分離により除去しなければならない、
この時間をとり、費用のかかる処理は高価な、しかし生
物学的に特に安定ではない材料の有意義な使用を＃１と
んど締め出す。

従って、その使用の際に前記欠点を有さないか又は＃１
とんど有さないラテックスを提供することが課題である
。いずれにせよ、ラテックステクノロジーは物理的所与
による一定の限界をもうけているニラテックス粒子は公
知のように界面活性剤の存在下にのみ自体準安定システ
ムを形成し、限られた時間の間のみ安定に保持される。

特に高めた電解質濃度に対してラテックス粒子は不安定
である。しかし、電解質含有溶液中（例えｔｆｏ、９％
食塩溶液中）生理学的に重要な過程が経過するので１通
常のラテックス粒子の取シ扱いは非常に困難であ）、特
に１診断作業に特徴的である僅かな物質量に関する場合
困難である０例えば上がわきが生じるか、又はただの濃
縮がラテックス粒子の析出に導びくやいなや、容易に凝
集と見誤まるであろう、高い乳化剤濃度による安定化は
生物学的システムへの変性作用のために勧めることはで
きない０強いイオン性の基を取り込むことにより安定化
効果をラテックス粒子にひき起こすこともできるが、こ
れにより同時に生物特異性相互作用のために決定された
ラテックスの特性にあとから影響を与える。

次に、生物学的に作用を有する物質の固定に予定するラ
テックスへの一連の要求を記載するこれらラテックスは
生理学的条件下に生物学的に重要な分子の共有結合を可
能とする反応性基を有さなければならない。

これらラテックスは貯蔵期間のあいだ反応性基の含量を
一定に保持するために無水の固体として貯蔵することが
可能でなければならない。

ラテックスは完全に再分散性でなければならない。これ
により取り扱いの際の上がわきは重大ではかくなる。

ラテックスは遠心分離可鉦でなければならない。この条
件はラテックスの密度が担持媒体もしくは連続相の密度
と十分に異なっている時に満たされる。粒子の密度がま
わりの媒体の密度より高い場合には、沈殿により粒子の
分離を行なうことができ、逆に粒子の密度がまわりの媒
体の密度より低い場合には、浮選により粒子の分離を行
なうことができる。

生物学的に作用を有する物質もしくは構造を共有結合固
定するためには、特に診断学的使用に関して、核−外皮
構造を有するポリマーラテックスが特に′好適であるこ
とが判明した。

本発明において、核−外皮ラテックス粒子（Ｋ−８−Ｌ
ａｔｅｘ）の外皮は水で膨潤性の材料からなる。外皮材
料はその組成によ）、これが核材料に結合することなし
に及び／又は架橋することなしに少なくとも部分的に水
溶性であるように高度に親水性でなければならない、こ
の際、外皮もそれ自体で架橋していてよい、ラテックス
外皮の周囲の水中への溶解性は例えばグラフト及び／又
は架橋によるラテックス核への結合により回避される。

更に、外皮は、生物学的に作用を有する物質もしくは構
造の共有結合固定に必要な官能基を有する。水溶液中で
水より強い求核基と反応し、生理学的に重要なｐＨ範囲
、すなわち６．０〜９．０、特に６．５〜８．０の範囲
で全く水により攻撃されないか、又はほとんど攻撃され
ない自体公知の官能基を使用するのが有利である。

官能基の選択は、固定すべき材料、特に生物由来の材料
が求核基として一般に（遊離）アミノ基、更に場合によ
Ｌフェノール性基、ヒト党キシ基又はチオール基を有す
るという事実を考慮に入れる。従って１本発明によるラ
テックスの外皮部分の構造はその反応形において、概略
的に次のような式で示すことができる：人−Ｂ− この際、Ｘは共有結合固定のたりり目能＃’Ｌ久わし、
有利に前記条件を満たすものである。この際、Ｒは官能
基及び重合性基間の間隔を保持するもの（スペーサー）
を表わし、このスペーサーの大きさ及びタイプは比較的
重要ではない。

一連の例においては基ａは全くなくてよく、すなわちｎ
は値０又はｌであってよい、一般にＸは問題となる求核
基により攻撃可能な基、すなわち活性基金表わし、有利
にスルホン酸ノ１０ゲニド基、チオイソシアネート基、
活性化エステル　チオカルブニルジオキシ基、カルゼニ
ルイミドイルジオキシ基、ハロエトキシ基、ノ１０アセ
トキシ基、・オキシラン基、アジリジン基、ホルミル基
、ケト基、アクリロイル基又祉アンヒドリド基である。

スルホン酸ノ〜ロゲニドとしてはクロリド及びプロミド
であり、ノ１０アセトキシとしてはフルオル−、クロル
−及びブロム化合物であシ、活性化エステルのエステル
成分としてはヒドロキシルアミン化合−１例えばＮ−ヒ
ド胃キシサクシンイミド又はＮ−ヒドロキシ７タルイミ
ドからのもの、（電子吸引性基にょ９）活性化したフェ
ノール、例えばハロゲン化フェノール例えばトリクロル
フェノール又はニトロフェノールからのもの、複素環系
ラクタム。

例えばピリドンからのものを挙げることができる。

特に有利であるのはオキシラン基、ケト基。

ホルミル基、スルホン酸クロリド基、チオイソシアネー
ト基並びに活性化カルゼン酸エステル並びにカルデン酸
無水物である。それゆえに、タイプＺ’−（ａ）−Ｘの
七ツマ−において、Ｚ′は（ラジカル的に）重合可能な
単位であり、ｎは０又は１である。このようなラジカル
重合性の単位は例えばビニル基であＬここで２′は例え
ば １ ０Ｈ意＝０−０− １ 〔式中、　　ａｍは水素原子又はメチル基、もしくは−
−ＯＨ，−０００Ｒ，、−ＯＨ，０ＯＮＨａ、又は−Ｏ
ｆ（、−０ＯＮ（Ｒｘ）ｓ（ここでＲ冨は炭素原子数１
〜４のアルキル基を表わす）′ｆＩ：表わす〕である、
更に、Ｚ′はマレイン酸から誘導されていて°よい。

１ １ 反応性で、同時に重合性の単位としては更にマレイン酸
無水物及びイタコン酸無水物、並びにアクロレイン、メ
タアクロレイン、メタビニルケトン及び活性化ビニルエ
ステルを挙げることができる。特に有利であるのは（メ
タ）アクリル酸及びテレイイミドの誘導体並びにマレイ
ン酸無水物及びイタコン酸無水物である。

式ｚ’−ａ−ｘ２明らかにするために次の例を記載する
： ｚ′ＲＯＸ （スペーサーを有する重合可能な活性化エステル） す Ｚ′　　　　　ａ　　　　　　　　　Ｘ（グリシジルア
クリレート） ＯＲ，＝００Ｈ，−００−０−Ｏｆ（、−０）（、−０
−０−ＯＨ，−０１ｚ′Ｂ８Ｘ 〔２−（り四ルアセトキシ）−エチルメタクリレート〕 ＯＨ，＝ＯＯＨｓ　　−Ｃｏ　−０−ｏ＠Ｈ，Ｏｌ。

Ｚ′Ｘ （２，４，５−）リクロルフェニルメタクリレ−））　
　　　　　Ｒ＝０ ０Ｈ２＝０　（ＯＨＭ　）　−Ｃｏｏ−ＯＨ２−ＯＨｍ
−Ｂ　ｒ（２−ブロムエチルメタクリレート） ＯＨ，、＝０　（ＯＨｓ　）０００−ＯＨＭ　−０ＨＯ
Ｈ−Ｏｋｋ　−０−（ＯＨｍ　）ａ　−（１，４ブタン
ジオールジグリシジルエーテルへのメタクリル酸の付加
生成物） ＯＨ鵞＝ＯＨｏｏｏ−ｏＨ，−ａｎ、　−０−０８ＮＨ
−（ＯＨ２）ｓ　−Ｎ＝０＝８ （１，６−ヘキサンジイソチオシアネートへのＯＨ意＝
ＯＨ−０−００−ＯＨ鵞−０重（クロル酢酸ビニルエス
テル） （４−マレイミ）’１Ｆｒｌｌ−ｅンタクロルフェニル
エステル） ＯＨ２＝Ｏ（Ｏ）ｂ　）”　Ｃｏｏ　Ｏ＠　Ｈａ　−８
０ｘ　−０Ｈ１１４−メ＋ルスルフィニルフェエル）−
メタクリレート〕 ＯＦ（、＝ＯＨ−０００−０）１．−０：＝Ｏ−Ｈ（プ
ロパルギルアクリレート） 外皮の構造に関与する通常の単位（概略式にけるＡ及び
Ｂ）は定義上外皮に必要とされる特性、すなわち親水性
及び硬度を付与するようなものである、無水の状態での
所望の硬度のための手がかりとしてはＴ７λｍａｘ　：
　２０〜２５０　Ｔ。

特に５０〜２００℃（ＤＩＮ５３４４５による）であっ
てよい、他方外皮の構造に関与するモノマーは自体有利
に強い求核基（例えば−ＮＲ２、−８１（）を含有して
いてはならない。更に、外皮は有利に芳香族基を有して
い、てはならない。

更に外皮の成分はなんらかの万・法で自体架橋していな
ければならない、この架橋のためにも、もしくは核との
結合のためにもＹはシンゼルである。

概略図の意味において、第１に外皮の親水性に関与する
成分をＢとしてあられし、第１に結果的に生じる全ポリ
マーの硬度にあわせて選択されるその他の成分′ｆｆ：
Ａとして表わす１本発明において使用されるラテックス
の外皮構造にあげられる条件は例えばメタクリレート及
び／又はアクリレートタイプのコポリマーによシ満たさ
れ、この際定性的及び定量的部分がポリマーラテックス
の外皮のための前記基準を満たすように割シ当てられる
。

親水性成分Ｂとしては例えば場合により置換された一般
式■ ｌ 〔式中％　Ｒ１は水素又はメチル基を表わし、−及びＲ
４Ｆｉ相互に独立して水素又は炭素原子数１〜４のアル
キル基を表わす〕のメタクリルアミド及びアクリルアミ
ド、すなわち未置換アミド並びに第１級及び第２級アミ
ンで形成されたアミドを挙げることができる。特に有利
であるのは（メタ）アクリル酸アミド、Ｎ−メチル−（
もしくはイソプロピル−又はブチル−）−（メタ）アク
リル酸アミド％Ｎ、Ｎ−ジメチル−（メタ）アクリル酸
アミド、更に（メタ）アクリル酸モルホリド（特例、こ
こでは窒素はＲ４及びａｓｔ−介して環の１部である）
及びＮ−ビニル−ピロリドン−２である。更に、タイプ
Ｂの親木性モノマーにはアクリレートタイプ又はメタク
リレートタイプのヒドロキシ基含有モノマー、特にアク
リル酸及びメタクリル酸のヒドロキシ含有エステル又は
アミド並びにアクリル酸及びメタクリル酸のアルコキシ
アルキルエステル及ヒ／又はアミド、例えば一般式■ 〔式中、Ｒ′１は水素又はメチル基を表わし、ａ；は水
素又は炭素原子数１〜４のアルキル基を表わし、Ｑは酸
素又は−ＮＲ；基（ここでｈ　　ＲＳは水素又は炭素原
子数ｌ〜４のアルキル基を表わす）を衣わし％ｐは１〜
３の整数、有利に２であ夛。

ｍ　＃ｉ１〜２５の整数であり、但し、Ｑが酸素の場合
ｐ　Ｂ　１ではない〕の化合物がある。特に。

ヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシエチルメタ
クリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルア
ミド、２−ヒトルキシプロピル（メタ）アクリルアミド
、グリセリン及び他のポリオールの（メタ）アクリル酸
のモノエステルが挙げられる。モノマータイプＢにはス
ルホエチルアクリレート及びスルホエチルメタクリレー
ト並びにスルホエチルアクリルアミド及びスルホエチル
メタクリルアミドも属する。

ラテックスの外皮中に親水性基として１重合性の酸、例
えば（メタ）アクリル酸、イタコン酸又はマレイン酸又
は重合性のｔｅｒｔ−アミン、例えば２−Ｎ、Ｎ−ジメ
チルアミノエチル−（メタ）アクリルアミド並びに２−
Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノエチル−（メタ）アクリル酸エ
ステル又は３−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノプロピル−（メ
タ）アクリルアミドもしくは３−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミ
ノプロピル−（メタ）アクリル酸エステルを組み入れる
ことができる。ラテックス粒子が１方１１１に荷電する
ことを回避するためにこれら酸性もしくは塩基性基が同
時に１つの粒子中に存在しなければたらない（例えば、
メタクリル酸及び２−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノエチルメ
タクリレート）。

タイプＡの七ツマ−としては水溶性でないモノマー又は
少なくとも限定されて水溶性のモノマーを挙げることが
でき、この際定性的及び定量的部分が生じたポリマーの
硬度の前記基準を満たすように割り当てられる。

１）　アクリル及び／又はメタクリル酸の０１〜０ｗ−
アルコールとのエステル、特にメタクリル酸のメチル−
、エチル−並びにプロピル−及ヒフチルエステル、並び
にアクリル酸のメチル−、エチル−、フロピルー及ヒフ
チルエステル及び２−エチルヘキシルエステル、ｂ）　
ビニルアセテートのタイプの共重合性モノマー、特にビ
ニルアセテート、ビニルグロピオネート、ビニルブチレ
ート及びビニルイソブチレート。

タイプＡの言わゆる１軟質ｌモノマーは外皮のポリマー
に関し、下位の量でのみ、一般に５０重ｔＳより少量で
あってよいということは自明である。

個々のモノマーからのポリマー膜（、の・硬度その他の
重要な特性は公知であシ、コポリマーの特性への寄与に
関して本公知である〔米国特許第２７９５５６４号明細
書：　Ｈ，ｆＬａｕＣｈ−Ｐｕｎｔｉ　−ｇａｍ　、　
Ｔ、Ｖｏｌｋｅｒ著’Ａｃｒｙｌ　−ｕｎｄ　Ｍｅｔｈ
ｍｃｒｙｌｖｅｒ　−ｂｉｎｄｕａｇ＃、　８ｐｒｉａ
ｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、ベルリン１９６７年、第３０
３〜３０４頁：　ＴＡＧ−Ｆｏｘ著、Ｂｕｌ　ｌ　、Ａ
ｍ、ＰｈｙｓＪｏｃ＊第１巻、１２３頁（１９５６年）
参照〕。

架橋剤Ｙの配分はラテックス外皮の分離浮遊がもはや可
能でないように割り当てる。それには一般に少なくとも
０．１重量−が必要である。よ。

り多量の架橋剤は妨害に作用甘ず、一般に０．１〜２０
チ、特に１〜１０重量−を使用する。

化学的な観点から、Ｙはすべての多官能性アクリレート
又はメタクリレートであってよい。

例えばグリコニルジメタクリレート、ブタンジオールジ
アクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレー
ト、テトラエチレングリコールジアクリレート、ペンタ
エリトリットテトラアクリレート等、この際、架橋剤の
基礎となっているポリオールのすべての官能ＯＨ基が重
合性酸でエステル化されていなければならないというこ
とはない（例えば、ペンタエリトリットジメチルアクリ
レート、２個の遊離ＯＨ基）、こうしてこの架橋剤もこ
れにより親水性を示してよい、その他の、親水性架橋剤
Ｙの例はＮ、Ｎ−メチレンピス（メタクリルアミド）で
ある。

その他に、もちろん良好な重合性基の他に容易にグラフ
ト可能な単位を含有する５例えばアリルメタクリレート
のようなモノマーを架橋剤として使用することもできる
。

本発明による核−外皮−ラテックスの核は、生じたラテ
ックス粒子が形状安定である。すなわち十分な硬度を示
すという条件を示すかぎり。

あまり厳密ではない、技術上の要求に関しては。

核−外皮−ラテックスシステムの再分散性が保証されな
ければならない、核の重合材料はこの要求を１例えば軟
質であるが強く架橋したポリマーであるということによ
り、又は硬質（架橋しているか又は架橋していない）ポ
リマーであるということにより満たすことができる。核
−外皮構造の性質において、核材料に由来する妨害性の
相互作用はあま９恐れる必要はなく、この観点において
け比較的選択は自由である。従って、核は物理的分離も
しくは同定に好適な特性の担体、例えば物理的方法で確
認可能な標識の担体であってよい、この際１例えば色素
、螢光色素等が考えられる。更に、核は周囲の媒体と差
のある重址により物理的分離・を可能とすることもでき
る。

これにより、ラテックスの再分散性の要求と適合するモ
ノマーもしくはコモノマーからなる核材料の構造が可能
となる、例えばコポリマーに少なくと屯０℃のＴλ、ｍ
ａｘ（ＤＩＮ　５３４４５による）を付与する種々のビ
ニルエステル、メタクリル酸及びアクリル酸の誘導体か
らなるすべてのコポリマー組成；例えばメチルメタクリ
レート、ブチルメタクリレート、メチルアクリレート等
からなるコポリマーからなる核材料の構造が可能となる
。外皮材料の範Ｈには芳香族基が存在しないことに常に
注意を払わなければならないが（潜在性ハプテン特性）
、ラテックスの核にはもちろ）んスチ四−ルのタイプの
モノマ−、例工ばスチロール、ビニルドルオール、ジビ
ニルペンゾールを使用してもよく、シたがってスチロー
ル及びマレイン酸エステルもしくはフマール酸エステル
からのコポリマーも使用してよい、核ポリマーのガラス
転移温度が明らかに０℃を下まわるならば、少なくとも
１ｑＩＩの架橋剤１例えばグリコールジメタクリレート
、ジビニル（ンゾール等を一緒に使用することが勧めら
れている。

、担持媒体本しくけ連続相の密度と異なる全システムの
密度に対する要求と関連して、ラテックスに高めた密度
を付与するような七ツマ−が特に重要である。特に１重
質ｌ′モノマー、すなわち１個以上のノーロゲンを有す
る１％にクロル化又ｔｉブロム化モノマーがよい０例え
ばビニルクロリドのようなビニル化合物、クロルスチロ
ール又はブロムスチロールのようなスチロール誘導体、
並びに側鎖に重い基を有する（メタ）アクリル酸の誘導
体、例えば２，４．６−）！ｊブロムフェノキシエチル
メタクリレートをあげることかできる。更に、モノマー
の密度がプリマーとして担持媒体もしく社連続相の密度
とあまり差がないモノマーから核を構成することもでき
る。そのような場合Ｋｌｉ、それでも良好な分離性を達
成することができるように核を大きくする。

本発明により使用可能な種類の核−外皮かツクスの製造
は従来公知の方法と同様に行なうことができる。（西ド
イツ国特許公告第２７２２７５２号公報参照）、有利な
実施態様の例に関しては次に粗大もしくは微細核−外皮
−ラテックス材料の製法を記載する。ラテックスが粗大
粒子になるか、′又は微細粒子になるかは、有利に核材
料により決められる０例えば粗大粒子ポリマー核の製造
は完全に乳化剤なしの重合により行なわれる。

有利な実施形式は次のように行なう、０．５〜４時間か
けて、モノマー又はモノマー混合物を約５０〜１００℃
に加熱した、十分量の水溶性開始剤、例えばカリウムペ
ルオキシジスルフエート、アンモニウムペルオキシジス
ルフエート、過酸化水素又ｔｆ４，４’−アゾビス（シ
アノ吉草酸）の塩を含有する水中に滴下する。約５０〜
１０（０℃の範囲の熱重合のかわりに、レドックス開始
剤系により反応を低い温度で開始することもできる。油
溶性開始剤１例えばジベンゾイルペルオキシド又はアゾ
イソ酪酸ジニトリルもポリマー開始剤として好適である
。この場合には少なくとも少量の乳化剤が有利であるか
、又は必要である。大きなラテックス粒子ｆａ成するた
めの他の方法は種ラテツクスを用いて多工程法により行
なわれる。この場合は予め任意に調整した種ラテツクス
上に第２の工程で、又は更にいくつかの引き続く工程で
所望のモノマー又はモノマー混合物を重合させる。方法
としては）９ツチ供給、多重パッチ供給及びより有利に
はモノマー供給もしくはエマルジョン供給を挙げること
ができる。この実施方法に重要であるのＦｉ１種ラテッ
クスに関して引き続く工程において、全乳化剤濃度ｔ−
ｔ−ぺてのモノマーがこの種ラテツクス粒子上に重合し
、新しい粒子形成が起こらない程低く保持することであ
る。特に大きなポリマー核は、種ラテツクスとして最初
に記載した乳化剤なしで製造した粗大粒状ラテックスを
使用する時に得られる（ヨーロッノセ特許公開第７９１
０１３９８．０号公報、もしくは西ドイツ国特許公開第
２８３３６０１号明細書参照）、ポリマーが非常に低い
分子重量である種ラテツクスを第１工程で製造する時も
粗大粒状システムを得る。これらラテックス粒子はモノ
マー又はモノマー混合物と共に膨化し、重合して大きな
ラテックス粒子となる。完全圧非水溶性物質の下位量を
モノ！−又は七ツマー混合物と一緒に使用することは低
分子４リマーと同様の作用を有する（西ドイツ国特許公
開第２７５１８６７号公報、ヨーロッパ特許０００３９
０５号明細書参照）、核ポリマーの密度が担持媒体もし
くは連続相の密度と強く差を有してない場合、例えば直
径約０．５〜〉２μｍの粗大粒状核は有利である　　　
　　　　　　　　　　　　　　　Ｉｌｌ微細粒状ポリマ
ー核の製造は原則的に公知の乳化重合の基準によるラテ
ックスの合成より成り、この際核−ラテックス粒子の所
望の大きさは重合を開始するための乳化剤濃度によ）調
節される。核材料の組成は比較的重要でないので、原則
的には前記要求１例えば形状安定性及び高密度を満たす
かぎシ任意のラテックスを核材料として使用することは
ここでも可能である。微細粒子の核材料の製造のために
は方法として１工程又は多工程の／？ラッチ式供給法七
ツマー供給法、エマルジョン供給法又は連続的な方法が
好適である。開始剤としては粗大粒状核ラテックスの製
造のために前記した水溶性もしくは油溶性開始剤を使用
することができる０重合は前記のように純粋に熱的に又
はレドックスシステムの助けにより行なうことができる
。乳化剤としては原則的にすべてのアニオン系、カチオ
ン系、非イオン系又は両性界面活性剤を単一で又は組み
合わせて使用するのが好適であり、アニオン系及び／又
は非イオン系乳化剤が有利である。微細粒状核−ラテッ
クスを製造するための特に有利な実１ｆ！ＩＩ！！様は
、有利に緩衝剤（約ｐｆ（７）及び乳化剤含有溶液を所
望の重合温度に加熱１水溶性開始剤を一定量まで加え１
次いで０．５〜６時間の時間をかけてモノマーエマルジ
ョン（架橋剤を含めて）を滴加することである０例えば
約０．１〜０．５μｍの直径の微細粒成核は核ポリマー
の密度が担持媒体もしくけ連続相の密度と強く異なる時
に使用することができる。

ラテックス核上べの外皮の重合は核材料の重合に直接に
引き続き行なう仁とができる。この方法は原則的に種ラ
テツクスのために記載したと同様である。有利ＫＺＲＸ
−タイプのモノマーである外皮組成のモノオー混合物を
そのｔｔで又は水又は緩衝溶液中のエマルジョンとして
０．５〜４時間かけて核−ラテックスに加えるが。

この時再び全乳化剤濃度を粒子の新たな形成が回避され
る程低く保持するように注意しなければならない、場合
により二つの異なるモノマー供給を同時に配置すること
が必要であシ、この際−万は場合により水を包含する。

これは常に七ツマ−が相互に溶けないか、もしくけモノ
マーの←部のみが水中にとけるが他の部分は水に溶けな
い時に必要である。

外皮モノ−ｒ　−ｆこれらの条件下に存在するポリマー
核上に重合する。外皮モノマーを供給する前に開始剤又
は緩衝溶液を追加して装入するのが有利であることが判
明し、特にラテックス核の重合が緩衝溶液中で行なわれ
ない時及び外皮モノマー金モノマー供給として加える時
に有利である。緩衝剤の添加は特に官能性モノマーＺ’
−（ａ）ｆｌ−Ｘにおいて高反応性化置物が問題である
時、特に重要である。ζうして、ラテックス粒子の合成
の間これら反応性基の分解（例えば加水分解によりｉを
できるかぎシ僅かに保持するように緩爾剤混合柳ｔ−調
節する０重合条件は限定された乳化剤製置の他は核の製
造のために記載されている条件と同様である。単一パッ
チ法又は多重パッチ法は方法としては可能であるが、モ
ノマー供給法もしくはエマルジョン供給法が有利である
８重合は約５０〜１００℃の範囲で熱的に又はレドック
ス−開始システム管用いて低い温度でも行なわれる８重
合開始剤としては有利に乳化重合において常用の水溶性
開始剤をあげることができる。記載した温度範囲に分解
温度があるかぎり、原則的に油溶性開始剤を使用するこ
ともできる。

外皮密度対接の大きさの有利な比は１例えば核材料の重
量対外皮材料の重量がｌ：３〜５：１である時に生じる
が１％別な核−外皮一比も原則的に可能である。（１０
：１）、ラテックス核が小さければ小さい程、一般に外
皮材料をより大きく選択するべきであるということは明
らかである。ラテックスは比較的低粘性の水性分散液の
形で生じる。ポリマー含量は根拠として例えば１５〜３
０重量−の範囲であってよい。

しかしながら、原則的には固体含量は約７０重量％まで
の重量−が可能である。

診断試薬を製造するために核−外皮ラテックスを使用す
る１本発明による新規の試薬は新規核−外皮ラテックス
と生物学的に作用を有する物質もしくは構造との反応に
ょシ製造することができる。生物学的に作用を有する物
質もしくは構造とは例えば１免疫学的に活性なＩ材料で
ある。１免疫学的に活性なｒ材料としては例えば免疫学
的な対試薬が存在するかもしくはこれが生じると仮定す
る場合生理学的液体、細胞抽出液及び組織抽出液を挙げ
ることができる。

免疫学的に活性な材料の代表的な例としては例えばアミ
ノ酸、ペプチド、プロプ、イン、酵素、リポプロティン
、グリコプロティン、リポイド。

ｘ　ｌ　Ｖ　イ：／　酸ｈ　多糖類、第１７建ン、アル
カロイド、ホルモン、ビタミン、ステリン及びステルイ
ドを挙げることができる。免疫学的に活性の構造として
は例えば微生物１例えばダラム陽性菌及びダラム陰性菌
、スピロヘーター、ミコプラズマ、ミコ／？クチリア、
ビブリオ、放線菌。

腋生動吻、例えば腸原生動物、アメーバ、鞭毛虫網、胞
子虫類、Ｉｋ線中類及び組織線中類（虫）。

吸虫１ＩＩＩ（、ｉＩ幹破裂体、蛭）、条虫目、トキソ
プラズマ、並びに真菌類１例えばスポロトリカム、クリ
シトコツカス、発芽菌属、ヒストプラズマ属、コクシジ
オイデス、カンジクタ（Ｏａｎｄｌｃｔａ）。

ビールス及びリケッチャ、例えば犬肝炎、ショーツ・パ
ピローネ、インフルエンザＡ十Ｂ、　家鶏ペスト、単純
庖疹、アデノビールス、ボリアネ（Ｐｏ１ｙａｎｅ））
ラウス肉腫、接種痘、ポリオビールス、麻疹、犬温熱、
白血病、流行性耳下腺炎、ニューキャッスル病、センダ
イ（８ｅｎｄａｉ　）、Ｂ　Ｏｆ（０，ロ蹄病、オウム
病、狂犬病、エクスドロメリア（Ｂｘｔｒｏｍｅｌｉａ
）、ノぐラムビールｘ（１３−ａｔｌｍｖｉｒｅｎ）、
等のビールス又はリケッチャ更に組織抗原、ホルモン、
例えば下垂体ホルモンのインシュリン、グルカ♂ン、甲
状腺ホルモン、絨毛性ザナドトロフイン、絨毛性成長ホ
ルモン−ゾロラクチン、八−胎盤−ラクトーゲン、酵素
。

例えば膵臓ヒモトリズシン形成素、ゾロカル２キシペプ
チダーゼ、グルコース−オキシダーゼ。

乳酸デヒドロゲナーゼ、ウリカーゼ、アミノ酸。

−オキシダーゼ、ウレア−ぜ、アスパラギナーゼ、プロ
テアーゼ、血球−抗原、血液型物質及び他の同種抗原１
例えば血小板、白血球、血奨九ん白質、乳たん白質、唾
液たん白質、尿たん白質、自己抗体を含めた抗体を挙げ
ることができる。

核−外皮ラテックスを用いて酵素を固定するための方法
。

本発明によるラテックスと酵素との反応のためには簡単
な方法で酵素を水性媒体中、有利にほぼ生理学的条件で
、例えば酵素のタイプに好適に決めた緩衝液中、ラテッ
クスの適当な量と共に有利にあ１）室温をこえず、適度
な攪拌下に恒温保持することができ、官能基としてエポ
キシ基を使用する時は例えばｐｉ（範囲７〜９中に限定
することなく処理することができる。一般に１反応のた
めに＃ｉ１日〜日日数日間１例えば３日間である。共有
結合していない酵素は多数回の遠心分離（約５０００　
ｒｅｐｅｍ　）及び緩衝液中での再分散により分離する
ことができる。活性の測定は公知の酵素特異的測定と同
様に行なうことができる０本発明の特別な利点は、負荷
したラテックス為再分散し、例えば凍結乾燥した粉末の
形で、場合によシ長期間貯蔵することができるというこ
とである。場合によっては限定するファクターは固定生
物学的材料の安定性である。

本発明によるラテックスは他の、例えば工業的に使用可
能な酵素の担体としても好適な形で使用することができ
る０例えばアシラーゼ、ぺ二シリナーゼ、グルコースー
インメラーセ、ペルオキシダーゼ等を挙げることができ
る。

種々の観点下に、例えば免疫縦集を追跡するためには、
すでに記載したようにラテックスに標識剤、・例えば螢
光色素を加えることができる。

本発明のポリマーラテックスは一般に微生物の固定に好
適であシ、この際反応条件はプルティンの固定における
と同様である。公知技術に対し１本願方法は基質分子に
対し固定化微生物に良好な入手可能性を提供する０本願
発明の固定方法に特有である僅かな細胞毒性はきわだつ
ている。

前記の点はヴシールス及び成熟核細胞の固定にもあては
まる。ｆ！′リマーラテックスの多官能基の性質は一般
に生物学的に作用を有する物質の架橋に使用することも
可能とする。このためＫＦｉ特に小さい直径（概略的５
００ＡＡのラテックス粒子が重要である。

有機合成にも本発明のポリマーラテックスは有利に使用
することができ、この際水性媒体中で作業する必要はな
く、有機反応媒体を一緒に使用することも、有機反応媒
体を使用することもできる。例えば、仁の方法で保護基
を導入することもできる０％に興味深い点はメリーフィ
ールドによるペプチド合成に使用することである。　（
Ｍｅｒｒ目１ｅｌｄ、　ＡｄｖＪｎｘｙｍｏｌ＋＋第３
２巻（１９６９年）、第２２１〜２９６頁）。

例１ ラテックス１の製法 （粗大粒状ラテックスの例） 暑）　母分散液の合成 還流冷却器、攪拌機及び温度計を備える重合容器中に水
１６００ｙをあらかじめ入れ。

８０℃に加熱する。

インブチルメタクリレート　　　　　　３゜メチルメタ
クリレ−）　　　　　　　　　　３ｆエチレングリコー
ルジメタクリレート０．３ｆからなるモノマー混合物を
添加した後、水３６、中に溶かしたアンモニウムベルス
ルフェート４ｆｔ加える。更に、同様に８０℃でインブ
チルメタクリレ−）　　　　　　２０　Ｏｆ。

メチルメタクリレート　　　　　　　　２００　ｆ。

エチレングリコールジメタクリレート　２０ｆ１からな
る混合物ｔ−２時間かけて滴加する。モノマー添加の終
了後、更に１時間８０℃で保持する。凝集物を有さない
、良好な濾過性の。

低活性、約２０％分散液が得られる。

ｂ）　オキシラン基含有分散液の合成 還流冷却器、攪拌機及び温度計を備える重　　゛合容器
中に永３５０−をあらかじめ入れる。

これに燐酸塩緩衝液ｐＨ７（チドリゾール（Ｔ−１ｔｒ
ｉｓｏｌ）メルク）１０ｗｔ及び母分散液８０ｆを加え
る。８０℃に加熱した後、水４−中の４．４′−アゾビ
ス−（４−シアノ吉草酸）のナトリウム塩０．４ｆを加
える。その後水　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ｔｏｏｏｌナトリウムラウリルスルフニー）　　
　　　１ｆ４．４′−アゾビス−（シアノ吉草酸）のナ
トリウム塩　　　　　　　　　　　２ｔメチルメタクリ
レート　　　　　　　　１５０ｙイソブチルメタクリレ
ート　　　　　ｌ５Ｏｆエチレングリコールジメタクリ
レート　１５ｆカラなるエマルジョン？８０℃で３時間
かけて加える。引き・続き、６０分かけて水３００を中
のメタクリル酸アミド２０ｆ及び４．４’−アゾビス（
４−シアノ吉草酸）のナトリウム塩０．６ｆ並−びにメ
チルメタクリレート３５ｆ。

グリシジルメタクリレート４０ｆ及びエチレングリフー
ルジメタクリレートからなるモノマー混合物を同時に加
える。その後、更に６０分８０℃で攪拌する。約２０ｅ
ｓの固体含量の凝集していない低粘性の分散液が得られ
る。

粒径的２μｍ。

例２ ラテックス２の製造 （粗大粒状ラテックスの例） ａ）　母分散液の合成 例ＩＫよる重合容器中に水ｔｓｏｏｙｔ予め入れ、８０
℃に加熱する。

スチロール　　　　　　　　　　　６．２４９アリルメ
タクリレ−）　　　　　　　　０．０６　ｆからなるモ
ノマー混合物を添加した後、水３６ｆ中に溶カしたアン
モニウムベルスルフェート４ｆｔ加える。これに スチ四−ル　　　　　　　　　　　４１５ｆアリルメタ
クリレ−）　　　　　　　　　　５ｆからなる混合物ｆ
：８０℃で同様に２時間かけて滴下する。七ツマー添加
の終了後、更に２時間８０℃保持する。凝集物を有さな
い、粗大、濾過可能な粘性の約２０−分散液が得られる
。

ｂ）　オキシラン基含有分散液の合成 例１と同様に行なうが８５℃に加熱し、水１〇−中のナ
トリウム塩として４．４′−アゾビス（４−シアノ吉草
酸）ナトリウム塩１．０ｐを加える。これに 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００
０ｙナトリウムラウリルスルフニー）　　　　　１ｆ４
．４′−アゾビス−（シアノ吉草酸）のナトリウム塩　
　　　　　　　　　　　４ｔスチロール　　　　　　　
　　　　　Ｆ１２ｙアリルメタクリレ−）　　　　　　
　　　　４ｆからなるエマルジョンを８５℃で３時間か
けて配量する。引き続き９０分かけて、水３００を中の
メタクリル酸アンド２０ｆ及び４，４′−アゾビス−（
４−シアノ吉草酸）のナトリウム塩０．６２の溶液並び
にメチルメタクリレ−）３５ｙ、グリシジルメタクリレ
ート４０ｆ及ヒエチレングリコールジメタクリレート４
ｔからなるモノマー混合物を同時に加える。その後頁に
６０分８０℃で攪拌する。固体含量的２０％の凝集物を
有さない、良好な濾過性の低粘性分散液が得られる０粒
径：約２μｍ。

例３ ラテックス３の製造 （微細粒状ラテックスの例） 前記の装備を有する重合容器中で燐酸塩緩衝液（ｐｆ（
７、Ｔｉ　ｔｒｉｓｏｌ　％Ｍ＠ｒｃｋ）　５　ｗｌ、
ナトリウムラウリルスルフェート０．０３　ｆ及び４．
４′−アゾビス−（４−シアノ吉草酸）のナトリウム塩
０．２　ｆ　ｔ−水ｔｏｏｄ中で溶かす１．８０℃′に
加熱し、ナトリウムラウリルスルフニー）　０−１　ｙ
　ｂ４．４′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）のナトリ
ウム塩０．５　’ｆ　、メチルメタクリレ−）　８０　
ｆ。

（２−エチル−（２，４，６−）リブ四ムフェノキシ〕
−エチル）−メタクリレート１５ｆ。

エチレングリコールジメタクリレート５ｆ及び水２００
ｔから表るエマルジョンを３時間かけて滴加する。引き
続き、９０分かけて、水７５ｆ中のメタクリル酸アミド
５ｔの溶液及びグリシジルメタクリレ−）　　　　　　
　　１０ｔエチレングリコールジメタクリレート　　１
ｔメチルメタクリレート　　　　　　　　　　９゜ぶら
なるモノマー混合物を同時に反応配合物中に加える。

その後、更に約６０分間８０℃で保持する。

約２５チの低粘性分散液が生じる０粒径：０．３μｍ、
オキシラン含量：使用したグリシジルメタクリレートの
３１％（ナトリウムチオスルフェートでの滴定）。

例４ ラテックス４の製法 ４ｍ）枝分散液の製造 例１に記載された装備の重合容器中に、ナトリウムテト
ラデシルスルフォネート０．３９ アンモニウムペル早ルフエー）　　　　０．６９蒸留水
　　　　　　　　　　　　５００　ｆを予め装入し、８
０℃に加熱する。これに６時間かけて。

ｐ−ブロムスチロール　　　　　　５００ｆフマル酸ジ
エチルエステル　　　　３００ｆナトリクムテトラデシ
ルスルホネート　４ｆアンモニウムベルスルフエート４
ｆ 蒸留水　　　　　　　　　　　　　７１０ｔからなるエ
マルジョンを６時間かけて８０℃で滴加する。

滴加終了稜、更に２時間８０℃で攪拌し。

その後室温で冷却し濾過する。この分散液は約４０９６
の固体含量の低粘性のものである。

４ｂ）核−外皮分散液の製造 ４〇−分散液４ａの５０ｏｆを燐酸塩緩衝液でｐｉ（７
，０とし、蒸留水１００〇−中の４゜４′−アゾビス−
（シアノ吉草酸）のナトリウム塩１を及びナトリウムテ
トラデシルスルホネー）　０．５　ｆからなる＊１で希
釈し全体で１０００−の容量とする。　（＝ｐ［（７，
０の２０−分散ｆ１４ｍ）、この溶液を重合容器中で８
０℃に加熱し、この温度に１５分間保持し１次いで次の
二種の溶液を８０℃で同時に滴加する： 溶液人 ２−ブロムエチルメタクリレート　２０　ｔグリコール
ジメタクリレー）　　　　　２．５９Ｎ−１−ブチルメ
タクリルアミド　１７・５ｆメチルメタクリレ−）　　
　　　　　１０　　ｆ溶液Ｂ 蒸留水５０ｆ中の４．４′−アゾビス−（シアノ吉草酸
）のナトリウム塩　　　　　　１゜滴加時間：約２時間
、配置速度は両者の供給物においてできるだけ同じ大き
さでなければならない、供給終了後、更に１時間８０℃
に保持する。その後冷却し、濾過する。約２３−の固体
含量の微細粒状、低粘性分散液が生じる。

４ｃ）核−外皮分散液の製造 例４ｂ（分散液４暑の希釈、中和等）におけると同様に
処理するが１次の溶液を配量した。

溶液Ａ： 酢酸ビニル　　　　　　　　　　　　１０＃クロル酢酸
ヒニルエステル　　　　３０　　ｆメチレンビスアクリ
ルアミド　　　　２．５゜アクリルアミド　　　　　　
　　　　７．５ｆ溶液Ｂ 蒸留水５０９中の４．４−アゾビス（シアノ吉草酸）の
ナトリウム塩　　　　　　　２２滴加時間：約３時間、
供給終了後、更に２時間８０℃で保持する。冷却及び濾
過後、微細粒状低活性分散液が生じる。

例５ ラテックス５の合成 工程Ｉ 例１による重合容器中に次の成分 蒸留水　　　　　　　　　　　　１５５０　　ｆナトリ
ウムラウリルスルフニー）　　　ｏ、ａｆメチルメタク
リレート　　　　　　　　３．２ｇイソブチルメタクリ
レ−）　　　　　　３．２　。

を予め装入し、攪拌下に８０℃に加熱する。

引＊Ｈき水４ｏＷｄ中のアンモニウムベルスルフェート
４ｆの溶液を加える。引き続き。

メチルメタクリレート　　　　　　１９０ｆイソブチル
メタクリレート　　　　１９０ｔクリコールビスメタク
リレート　　　２０ｔからなるモノマー混合物を８０℃
で配量する。・モノマー供給時間：２時間。供給終了後
、更に２時間８０℃に保持する。冷却後、良好な濾過性
の凝集物を有さない分散液が生じる：固体含量：　１９
９６　ｂ　ｐｋｌ　２．２　ｂ粘度４ｍＰａ。

ｓｅｃ。

第■工程 例１による重合容器中に第１工程による分散液１６０ｔ
を装入し、これに 燐酸塩緩衝液、ｐｉ（７ （ティトリシール、メルク）　　　　１０　ｔ４．４′
−アゾビス−（シアノ吉草酸）のナトリウム塩　　　　
　　　　　　０．４ｆ蒸留水　　　　　　　　　　　３
１０　ｆを加える。この溶液を８０℃に加熱し、３時間
かけて次のエマルジョン： メチルメタクリレート　　　　　　１４３ｔイソブチル
メタクリレ−）　　　　１４３　　ｆエチレングリコー
ルビスメタクリレート５　　ｆ ナトリウムラウリルスルフェート　　１ｆナトリウムラ
ウリルスルフエート１．８２蒸留水　　　　　　　　　
　　　９７０　ｆを加える。引き続きすぐに次の両方の
混合物を同時に加える（添加時間：１時間）。

混合物Ａ メチルメタクリレート　　　　　　４４　　ｆエチレン
クリコールビスメタクリレートｆ グリツジルメタクリレート　　　　　４２　　ｆ混合物
Ｂ ４．４′−アゾビス（シアノ吉草酸） のナトリウム塩　　　　　　　　　　　０．６゜メタク
リルアミド　　　　　　　　１０　　ｆ蒸留水　　　　
　　　　　　　　３２０　ｆ添加終了後８０℃で更に１
時間保持する。

冷却後、凝集物を有さない分散液が生じる：固体含量：
約１９％、粒径的０．４μｍ。

例６ 例１によるラテックスの精製 （合成に必要な助剤、乳化剤、開始剤等の除去） 分散液１１０−を１５分間５０００　ｒ、ｐ、ｍで遠心
分離する。上澄漿液を注ぎ出し、引き続巻粒子をＩＮ　
　Ｎａ１ｌ中に再分散させる（ＩＮＮ畠ＯＬ約５０−中
のポリマー固体１ｔ）、その後、１０分間５０００　ｒ
、ｐ、ｍで遠心分離し傾瀉する。

ＩＮ　　Ｎａ０Ａ中への再分散及び遠心分離を更に２回
繰り返す、引き続き粒子を０．０５　Ｍ燐酸塩緩衝液、
ｐＨ７，５中に再分散させる（　０．０５燐酸塩緩衝液
％ｐｆ（７，５，５０−中のポリマー固体１２）ｅ５０
００　ｒｅｐｓｆｎで１０分間遠心分離し、上澄を注ぎ
出す、仁の工程ｔ−１回繰シ返す、こうして得られたラ
テックスの貯蔵を＋５℃で冷蔵庫中で行なう。

例７ 例３によるラテックスの精製 例６におけるように行なうが、遠心分離時間をそれぞれ
３０分間に高め九（５０００ｒ、ｐ、ｔｏ）。

例８ トリプシンの固定のための反応 例ＩＫよる分散液ｔ　５ｓｄ（Ａポリマー固体ａｙ）に
トリプシンａｏｏｑ（１Ｍ燐酸塩緩衝液５９Ｈ７，５，
６ｄ中に溶かした）を加え、引き続き７２時間２３℃で
攪拌する。その後、共有結合していない酵素を３回の遠
心分離及び０．０５　Ｍ燐酸緩衝塩中への再分散により
除去する（例６により実施）。

例９ 固定酵素の活性測定 り３７℃及びｐＨ７，５（ｐＨ−スタット］におけるＮ
、ペシーソイルーアルギニンーエチルエステル（ＢＡＢ
Ｅ）の加水分解 遠心分離精製した例８によるラテックスの乾燥物質１ｔ
（水約ｌｆｋ有する湿った物質的２ｆとして使用）を２
％Ｂ五１Ｂ溶液２゜−中に分散させる。

１、　使用　　　　１４．２ ２　使用　　　　１２．１ λ　使用　　　　１１．８ ４、　使用　　　　１１．８ 米） 活性はそれぞれ担体１ｔに対するものであり、ＵＦｉｌ
マイクロモル／分に相応し、開始速度に基すき測定した
。

ｂ）　カゼインの加水分解（３７℃、ｐＨ８，０）例８
により遠心分離精製したラテックスの乾燥物質１ｔ（約
１２の水と共に約２２の湿った物質として使用）ｒ４％
カゼイン溶液２〇−中に分散する。

Ｌ　使用　　　　　　　３．２ ２　使用　　　　　　　２．６ λ　使用　　　　　　　２．６ ζ　使用　　　　　　　２．６ 例１０ 反応性ラテックスの凍結乾燥 例１による分散液１５−を例６に記載されているように
精製する。仁の際約５０−の残留水分を有するポリマー
が生じる。この遠心分離したラテックスを凍結乾燥し、
引き続き一２０℃で６ケ月貯蔵する。

凍結乾燥ラテックスの再分散： 再分散は０．０５　Ｍ燐酸塩緩衝液、Ｉ）１７．５で行
なわれる。この際、約５分間強力に攪拌しなければなら
ない、緩衝液中に懸濁させた試料を短時間超音波で処理
することもできる。

引き続き、例８中に記載したように酵素との反応を行な
う（使用したラテックスに関しトリプシン１０チ）。

使用　　　活性（Ｕ／ｆ　）米）　　　　活性（Ｕ／ｌ
　）＊）１、　使用　　　１３．３　　　　　　　　２
．９λ　使用　　　１０．６　　　　　　　２．２米）
担体材料、に関して 例１１ 固定トリプシンを有するラテックスの凍結乾・燥 トリプシンと反応させたラテックス（例８）ｌｔｂｋ凍
結乾燥させ、その後６ケ月−２０℃で貯蔵する。再分散
は例１０に記載したように０．０５　Ｍ燐酸塩緩衝剤で
行なわれる。

カゼインに対する活性（４％カゼイン溶液２０−中の再
分散性ラテックスの固体１．）使用　　　　　活性（Ｕ
／ｆ担体材料〕１、　使用　　　　　　　　３．６ ２　使用　　　　　　　　２．４ １　使用　　　　　　　　２．４ 例１２ トリプシンの固定 例８におけると同様に行なうが、トリプシンの固定のた
めに例３による分散＊１５ｍｇ（遠心分離３０分ｂ　５
０００　ｒ−ｐ−ｍ　）を使用する。

基質としてカゼインに対する活性（ｐｌ（８，０゜３７
℃） １、　使用　　　　５．５　Ｕ／ｆ担持材料２　使用　
　　　４．２　Ｕ／ｆ担持材料λ　使用　　　　４．Ｏ
Ｕ／ｆ担持材料例１３ 螢光標識化ラテックスの合成 例１による重合容器中に量分散液１ａ４０ｙを予め装入
し、これに燐酸塩緩衝液ｐＨ７（ティトリシール、メル
ク）５ｄ、４．４’−アゾビス−（シアノ吉１酸）のナ
トリウム塩０．２．及び蒸留水１８０ｔを加える。この
混合液を８０℃に加熱した後、同様に８０℃で３時間か
けて、メチルメタクリレート　　　　　　　１２７　ｆ
イソブチルメタクリレート　　　　　１ｓ　ｔエチレン
グリコールビスメタクリレ−）　？、５　ｆフロールー
グリーンーゴ→＞５ （Ｆｌｕｒｏｌ　　−Ｇｒｉｎ　−’Ｇｏｌｄ　　）　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６，６　１１
４．４ｒ−アゾビス−（シアノ−吉草酸）のナトリウム
塩　　　　　　　　　　　　１．Ｏｆ　　　　　’ナト
リウムラウリルスルフニー）　　　　０．５７募留水　
　　　　　　　　　　　　４５０　　ｆからなるエマル
ジョンを加える。

この供給の終了後（＝ラテックス核）、８０℃で１時間
かけて同時に次の両方の混合物を添施する： 混合物Ａ； メチルメタクリレート　　　　　　　　２４ｔエチレン
グリコールビスメタクリレート２ｔグリシジルメタクリ
レート　　　　　　２１を混合物Ｂ メタクリルアミド　　　　　　　　　３　。

４．４′−アゾビス−（シアノ吉草酸）のナトリウム塩
　　　　　　　　　　０．３９蒸留水　　　　　　　　
　　　　１５５　を供給の終了後、更に６０分間８０℃
で保持し、その齢却する。良好な濾過性の凝集物を有さ
ない固体含量１９ｑ／ｂの分散液、ｐＨ７，７、粘度：
１０ｍＰａ＊ｓｅｃが生じる１粒径：２μｍ、ＵＶ−励
起において螢光は肉眼でも螢光顕微鏡によってもあきら
に可視である。

例１４ 抗アルブミンの固定 例５による分散液１０−を０．０５　Ｍ燐酸塩緩−液ｐ
Ｅ（７，５で１００ｍｇＫ希釈する。（燐酸塩緩衝液に
有利に０．０５−ナトリウムアジドを加える）。ポリマ
ー固体的２ｓの分散液が生じる。

抗血清（カタログ扁６１−０１５６３８９＜ヤギ〉）を
□緩衝液と一緒に次の濃度に希釈する。

ａ）　　　１０００μ　　ＡＫ／ｓｇ ｂ）　　　　２００μｆ　　り− Ｃ）　　　　４０μｙ　　　ｙ／ｗｔ ｄ）　　　　　　　８μｔｙ／ｍ ｅ）　　　　　　０μｙ　　　Ｉ、ヘ ラテックス粒子への抗アルブミンの結合はそれぞれ２−
分散液１−と希釈列−）〜ｅ）１ｍとを反応させること
により行なわれる。室温で５日間攪拌し１例６に記載し
たようにラテックス粒子を遠心分離によシ精製する。

第１頁の続き ０発　明　者　ゲルハルト・マルケルトドイッ連邦共和
国オーバー−ラ ムシュタット・ライブツイガー ・シュトラーセ２０ ０発　明　者　ノルベルト・シュターリンドイツ連邦共
和国オーバー−ラ ムシュタット・アム・ホレト２３ ０発　明　者　コルネリア・ファイル ドイツ連邦共和国エルッハウゼ ン・ラインシュトラーセ３６ 手続補正書゛ｅｉ発） 昭和５７年　７月２７日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５７年特許願第７０５４１　　号 ２、！！明の名称 生物学的に作用を有する物質を固定するための核−外皮
構造を有する再分散性ポリマーラテックス、該ラテック
スの水性分散液、診断試薬の製法、抗原抗体反応検出法
、抗体、微生物、ヴシールス及び酵素の固定法、バイオ
（マクロ）分子の３・　補正ヲスル者　　　　　　　　
　　架橋法及び有機合成法事件との関係　特許出願人 名称　　レーム・ゲゼルシャフト・ミツト・ベシュレン
クテル・ハフラング ４、復代理人 ６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、　補正の内容 （リ　明細書第２４頁第１行の「本発明の」を「本発明
は」と補正する。

（２）同第２８頁第１３行の「必要的」を「必然的」と
補正する。

（３）同第３６頁第７〜８行の「メタビニルケトン」を
「メチルビニルケトン」と補正する。

（４）同第４４頁末行〜第４５頁１行の「ペンタエリト
リットジメチルアクリレート」を「ペンタエリトリット
ジメタクリレート」と補正する。

（５）同第５４頁第１７〜１８行の「固体含量は・・・
・・・・・・可能である。」を［固体含量はわず力１な
重量％から約７０重量％まで可能である。

］と補正する。

（６）同第５８頁第１８〜１９行の「本願方法・・・・
・・・・・を提供する。」を「基質分子に関して固定化
微生物の良好な入手可能性が本願方法により得られる。

」と補正する。。

（））　同第６０頁末行の「チドリゾール」を「ティト
リシール」と補正する。

（８）　　同第７０頁第５行の「ナト１ノウムラウ１ノ
ルスルフエート」をｒ４，４’−アゾビス（シアノ吉草
酸）のナトリウム塩」と補正する。

（９）　　同第７７頁第１８〜１９行の「あきらに」を
「あきらかに」と補正する。

手続補正書（方式） 昭和５７年８　月　７３日 特許庁長官殿 １・　事件の表示　昭和５７年特許願第７０５４１号事
件との関係′特許出願人 名　称　レーム・ゲゼルシャフト・ミツト・ペシュレン
クテル・−・フラング ４、複代理人 住　所　〒１００東京都千代田区丸の内３丁目３番１号
伝及びＭ機せ取汰　」

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有する再分散性／　リマーラテックスにおい
   て、外皮のポリマー材料が１）核材料に結合することな
   しに及び／又は架橋することなしに少なくとも部分的に
   水溶性であるように親水性であり、 Ｉｆ）　　生物学的に作用を有する物質の共有結合固定
   に好適である官能基を有しており、Ｉｍ）　　外皮のモ
   ノマー組成により、無水状態で２０〜２５０ＣのＴλｍ
   ａｗを有してお９゜かつ核のポリマー材料はラテックス
   粒子の形状安定性及びその再分散性が得られるように決
   められていることを特徴とする生物学的に作用を有する
   物質を固定するための核−外皮構造を有する再分散性ポ
   リマーラテックス。 ２、外皮のポリマー材料は外皮のポリマー材料の重量に
   対し４．９〜９９．９重緊憾まで、親水性モノマーＢと
   共に官能基を有するモノマーから、θ〜９５重量憾まで
   はとんど非親水性のモノマームから、及び０．１〜２０
   重量４まで架橋モノマーから構成されており、但し官能
   基を有するモノマーの量は少なくとも０．１重量鴫であ
   る特許請求の範囲第１項記載の核−外皮構造を有する再
   分散性２リマーラテツクス。 ３、官能基を有するモノマーが、一般式２式％） 〔式中　７．ａＦｉ重合性単位を表わし、８は間隔を保
   持する単位を表わし、ＸはｐＨ範囲６．０〜９．０の水
   溶液中で生物学的に作用を有する物質の求核基と反応す
   る基を表わし、かつｎはＯ又は１を表わす〕に相応する
   特許請求の範囲第１項又は第２項記載の核−外皮構造を
   有する再分散性ポリマーラテックス。 ４　外皮のポリマー材料は芳香族構造単位を有さない特
   許請求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記載の核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマー２テツクス。 ５、外皮の重合材料は電気的に中性である特許請求の範
   囲第１項〜第４項のいずれか１項に記載の核−外皮構造
   を有する再分散性ポリマーラテックス。 ６　タイプＡ及びＢのモノマーはそれぞれモノマー人文
   けＢの全重量に対し、少なくとも５０Ｍ１ｎｔでアクリ
   ル酸及び／又はメタクリル酸の誘導体からなる特許請求
   の範囲第２項〜第５項のいずれか１項に記載の核−外皮
   構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 ７、　核が自体軟質であるが強く架橋したポリマー材料
   から構成されている特許請求の範囲第１項〜第６項のい
   ずれか１項に記載の核−外皮構造を有する再分散性ポリ
   マーラテックス。 ＆　核が自体硬質ポリマー材料から構成されている特許
   請求の範囲第１項〜第６項のいずれか１項に記載の核−
   外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 ９　核が物理的方法で確認可能な標識の担体である特許
   請求の範囲第１項〜第８項のいずれか１項に記載の核−
   外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 １０、核が、使用すべき水性媒体と相違する密度を全ポ
   リマーラテックスに付与するような密度を有する特許請
   求の範囲第１項〜第９項のいずれか１項に記載の核−外
   皮構造を有する再分散性ポ１１マーラテックス。 １１、核が全体的に又は部分的に、全ポリマーラテック
   スに水性媒体の密度より高い密度を付与するようなモノ
   マーから構成されている特許請求の範囲第１０項記載の
   核−外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 １ｚ　平均粒子径は０．０５〜５μｍ、である特許請求
   の範囲第１項〜第１１項のいずれか１項に記載の核−外
   皮構造を有する再分散性／　＋７マーラテツクス。 １３、平均粒子径は０．５〜〉２μｍである特許請求の
   範囲第１２項記載の核−外皮構造を有する再分散性ポリ
   マーラテックス。 １４、核の＆　＋７マー材料の重量は外皮のポリマー材
   料の重量に対し、１：３〜１０：１の比であろ特許請求
   の範囲第１項〜第１３項のいずれか１項に記載の核−外
   皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 １５、ラテックス核が小さければ小さい程、外皮の重ｉ
   部をより大きく選択する特許請求の範囲第１項〜第１４
   項のいずれか１項に記載の核−外皮構造を有する再分散
   性ポリマーラテックス。 １６　生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくと′４１ｓ分的に水溶性であるように親
   水性であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘを有し、 かつ核のポリマー材料はラテックス粒子の形状安定性及
   びその再分散性が得られるように決められている生物学
   的に作用を有する物質を固定するための核−外皮構造を
   有する再分散性＆ＩＪマーラテックスにおいて、核力；
   １種以上の色素を含有することを特徴とする生物学的に
   作用を有する物質を固定するための核−外皮構造を有す
   る再分散性ポリマーラテックス。 １７、核が１種以上の螢光色素金含有する特許請求の範
   囲第１６項記載の核−外皮構造を有する再分散性ポリマ
   ーラテックス。 １８　　核が、使用すべき水性媒体と相違する密度を全
   ラテックスに付与するような密度を有する特許請求の範
   囲第１６項又は１７項に記載の核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックス。 １９、核が全体的に又は部分的に、全？リマーラテック
   スに水性媒体の密度より高い密度を付与するようなモノ
   マーから構成されている特許請求の範囲第１８項記載の
   核−外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 ２０、平均粒子径は０．０５〜５μｍである特許請求の
   範囲第１６項〜第１９項のいずれか１項に記載の核−外
   皮構造を有する再分散性ポリマーラテックス。 ２１、平均粒子径は０．５〜〉２μｍである特許請求の
   範囲第２０項記載の核−外皮構造を有する再分散性ポリ
   マーラテックス。 ２ｚ核のポリマー材料の重量は外皮のポリマー材料の重
   量に対し、１：３〜１０：１の比である特許請求の範囲
   第１６項〜第２１項のいずれか１項に記載の核−外皮構
   造を有する再分散性ポリマーラテックス。 ２３、ラテックス核が小さければ小さい程、外皮の重量
   部をより大きく選択する特許請求の範囲第１６項〜第２
   ２項のいずれか１項に記載の核−外皮構造を有する再分
   散性ポリマーラテックス。 ２４、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘｔ−有し
   ており、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状
   安定性及びその再分散性が得られるように決められてい
   る、生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有する再分散性ポリマー２テツクヌの水性分
   散液。 ２５　　全分散液に対し１５〜３０重量憾のポリマー含
   量を有する特許請求の範囲第２４項記載の再分散性ポリ
   マーラテックスの水性分散液。 ２６　　生物学的に作用を有する物質を固定する九めの
   核−外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外
   皮のポリマー材料が、 Ｉ）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   とな、しに少なくとも部分的に水溶性であるように親水
   性であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   を有する物質を固定するための核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックスの水性分散液。 ２７　全分散液に対し１５〜３０重量憾のポリマー含量
   を有する特許請求の範囲第２６項記載の再分散性Ｉリマ
   ーラテックスの水性分散液。 ２８、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められている
   、生物学的に作用を有する物質を固定するための核−外
   皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスを使用する
   ことを特徴とする診断試薬の製法。 ２９、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性４リマーラテツクスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   と表しに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   を有する物質を固定するための核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックスを使用することを特徴とする
   診断試薬の製法。 ３０、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が。 ■）核材料に結合することなしに及び／又紘架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍｍＮを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められている
   。生物学的に作用を有する物質を固定するための核−外
   皮構造を有する再分散性ポリマーフテツクスを使用して
   いる診断試薬を使用することを特徴とする抗原抗体反応
   の検出法。 ３１、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるよう和親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｘを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   ｔ−有する物質を固定するための核−外皮構造を有する
   再分散性？リマーラテックスを使用している診断試薬を
   使用することを特徴とする抗原抗体反応の検出法。 ３λ生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有すｂ再分散性／Ｑマーラテックスの外皮の
   ポリマー材料が。 Ｉ）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、Ｉ）外皮のモノマー組成に
   より％無水状Ｉで２０〜２５０℃のＴλｍｍＫを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められている
   、生物学的に作用を有する物質を固定する九めの核−外
   皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスを使用する
   ことを特徴とする抗体の固定法。 ３３、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であ諷ようＫｍ水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、かつ核の４リマー材料がラ
   テックス粒子の形状安定性及びその再分散性が得られる
   ように決められており、核が１種以上の色素を含有して
   いる、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスを使用
   することを特徴とする抗体の固定法。 ３４　生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり。 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａＸ　を有し
   ており、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状
   安定性及びその再分散性が得られるように決められてい
   る。生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスを使用す
   る仁とを特徴とする微生物の固定法。 ３５　　生物学的に作用を有する物質を固定するための
   核−外皮構造を有する再分散性？リマーラテックスの外
   皮のポリマー材料が、 Ｉ）核材料に結合する仁となしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 Ｉ）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍｍＫを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   を有する物質を固定するための核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックスを使用することを特徴とする
   微生物の固定法。 ３６　　生物学的に作用を有する物質を固定するための
   核−外皮構造を有する再分散性ポリマー２テツクスの外
   皮のポリマー材料が。 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、ＩＩ）外皮の七ツマー組成
   により、無水状仲で２０〜２５０℃のＴλｍａＸを有し
   ており、かつ核のポリマー材料−がラテックス粒子の形
   状安定性及びその再分散性が得られるように決められて
   いる、生物学的に作用を有する物質を固？するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスを使用
   することを特徴とするビールス固定法。 ３７生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮の
   ポリマー材料が、 ｌ）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａＸを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   を有する物質を固定する友めの核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックスを使用することを特徴とする
   ビールスの固定法。 ３８、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 Ｉ）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、Ｉｆ）　　外皮のモノマー
   組成により、無水状態で２０〜２５０℃の’ｆ２　ｍａ
   ｘ　を有しており、かつ核の４リマー材料がラテックス
   粒子の形状安定性及びその再分散性が得られるように決
   められている、生物学的に作用を有する物質を固定する
   ための核−外皮構造を有する再分散性ポリマーラテック
   スを使用することを特徴とする１種又はそれ以上の酵素
   の固定法。 ３９、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃のＴλｍａｙを有して
   おり、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している、生物学的に作用
   を有する物質を固定するための核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマークテククスを使用することを％微とする
   １種又はそれ以上の酵素の固定法。 ４０、生物学的に作用を有する物質を固定するた゛めの
   核−外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外
   皮のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５′θ℃のＴλｍａｗを有し
   ており、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状
   安定性及びその再分散性が得られるように決められてい
   る、生物学的に作用を有する物質を固定するための核−
   外皮構造を有する再分散性ポリ・マーラテックスを使用
   することを特徴とするノ々イオ（マクロ）分子の架橋法
   。 ４１、メリーフィールドによるペプチド合成に使用する
   特許請求の範囲第４０項記載の方法。 ４２、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０ＣのＴλｍａＸを有して
   おり１かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安
   定性及びその再分散性が得られるように決められており
   、核が１種以上の色素を含有している。生物学的に作用
   を有する物質を固定するための核−外皮構造を有する再
   分散性ポリマーラテックスを使用することを特徴とする
   ／？イオ（マクロ）分子の架橋法。 ４３、メリーフィールドによるペプチド合成に使用する
   特許請求の範囲第４２項記載の方法。 ４４、生物学的に作用を有する物質を固定する九めの核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が。 ■）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少表くとも部分的に水溶性であるように親水性
   であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、■）外皮のモノマー組成に
   より、無水状態で２０〜２５０℃の’ｆ２ｒｎａｘを有
   しており、かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形
   状安定性及びその再分散性が得られるように決められて
   いる、生物学的に作用ｔＶする物質管固定するための核
   −外皮構造を有すｂ再分散性ポリマーラテックスを固定
   相として使用することを特徴とする有機合成法。 ３４、生物学的に作用を有する物質を固定するための核
   −外皮構造を有する再分散性ポリマーラテックスの外皮
   のポリマー材料が、 Ｉ）核材料に結合することなしに及び／又は架橋するこ
   となしに少なくとも部分的に水　　３溶性であるよう和
   親水性であり、 ■）生物学的に作用を有する物質の共有結合固定に好適
   である官能基を有しており、ＩＩ）　　外皮のモノマー
   組成により、無水状態で２０〜２５０℃のＴ２ｍａｘ？
   有しており。 かつ核のポリマー材料がラテックス粒子の形状安定性及
   びその再分散性が得られるように決められており、核が
   １種以上の色素を含有している、生物学的に作用を有す
   る物質を固定するための核−外皮構造を有する再分散性
   ポリマーラテックスを固定相として使用することを特徴
   とする有機合成法。