JPS5863392A - オリゴ糖の製造法 - Google Patents
オリゴ糖の製造法Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、でん粉からマルトへ中サオースを含有する糖
化物を製造する方法に関するものである。
化物を製造する方法に関するものである。
従来、ア識テーゼとしては、−一７ミテーゼ、β−アミ
ラーゼ、グルコアミ゛ラーゼなど、でん粉に対する分路
様式を興にする植々のアミラーゼが知られ、ダルコース
や！ルトースの製造に使用されてきた。そして最近は、
より分子量の大きい、例えｄ１マルトトリオース＜Ｇ３
＞、マルトテトラオース（Ｇｊ）、マルトペンタオース
（Ｇｊ）、マルトへ午すオース（Ｇ６）などのオリゴ糖
製造技術の開発が要望されている。これらの糖は食品の
甘味料、栄養剤、増量剤、賦形剤、包接剤として食品及
び薬品工業に広く使用できるものと考えられている０そ
して現在までに、例えｄ１マルトトリオースについては
８ｔｒ＠ｐｔｏｍｙｏｓｓ ｇｒｉｏｅｕｓ＋の生産す
るＮ−Ａ４ＩＡＪｒｍ素（特開昭Ｓ／−９７３９号及び
特開昭＆／−／１００ダ９秒）が知られ、マルトテトラ
オースにつ−て）ｉＰ廖ｓｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｕｍｅ
ｒｉ のアミラーゼ（ムｒｏｈｉｖ＋ｓ ｏｆ Ｂｉｏ
ｏｈｅ−ｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂ１ｏ９ｙｓｉｏ＊第
１４’４巻、ｉｏｎ〜／／ＩＩ頁（１９７１年））が知
られている。そしてマルトヘキサオースについては、ム
・ｒｏｂａｏｔ＠ｒ１・ｒｏｇ・ｎ＠−の生産する細胞
壁に結合するアミラーゼが、でん粉をその非還元性末端
からマルトヘキサオース単位で加水分解すると太われて
いるｔ特開昭ダｇ−３ｑｔｔｒｔ号、特開昭ｊｉｇ−３
９４゜ダブ号及びＢｉｏｏｈｉｍｉｅａ ｅｔ ｌ１ｉ
ｏｐｈｙｓｉｏａムＯｔａ第ダｌＯ巻、３３３〜３ダ６
頁（／９７！ｉ年））。
ラーゼ、グルコアミ゛ラーゼなど、でん粉に対する分路
様式を興にする植々のアミラーゼが知られ、ダルコース
や！ルトースの製造に使用されてきた。そして最近は、
より分子量の大きい、例えｄ１マルトトリオース＜Ｇ３
＞、マルトテトラオース（Ｇｊ）、マルトペンタオース
（Ｇｊ）、マルトへ午すオース（Ｇ６）などのオリゴ糖
製造技術の開発が要望されている。これらの糖は食品の
甘味料、栄養剤、増量剤、賦形剤、包接剤として食品及
び薬品工業に広く使用できるものと考えられている０そ
して現在までに、例えｄ１マルトトリオースについては
８ｔｒ＠ｐｔｏｍｙｏｓｓ ｇｒｉｏｅｕｓ＋の生産す
るＮ−Ａ４ＩＡＪｒｍ素（特開昭Ｓ／−９７３９号及び
特開昭＆／−／１００ダ９秒）が知られ、マルトテトラ
オースにつ−て）ｉＰ廖ｓｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｕｍｅ
ｒｉ のアミラーゼ（ムｒｏｈｉｖ＋ｓ ｏｆ Ｂｉｏ
ｏｈｅ−ｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂ１ｏ９ｙｓｉｏ＊第
１４’４巻、ｉｏｎ〜／／ＩＩ頁（１９７１年））が知
られている。そしてマルトヘキサオースについては、ム
・ｒｏｂａｏｔ＠ｒ１・ｒｏｇ・ｎ＠−の生産する細胞
壁に結合するアミラーゼが、でん粉をその非還元性末端
からマルトヘキサオース単位で加水分解すると太われて
いるｔ特開昭ダｇ−３ｑｔｔｒｔ号、特開昭ｊｉｇ−３
９４゜ダブ号及びＢｉｏｏｈｉｍｉｅａ ｅｔ ｌ１ｉ
ｏｐｈｙｓｉｏａムＯｔａ第ダｌＯ巻、３３３〜３ダ６
頁（／９７！ｉ年））。
本発明者社、でん粉又はその部分分解物からオリゴ糖生
産能の強φ微生物を求め検索を行ってきた結果、一種の
一一アミラーゼがでん粉からマルトヘキサオースを主成
分とする糖化物に分解するアミラーゼを―体外に著量に
生館することを認めた。そして、この酵素によるでん粉
の糖化条件について詳細に検討を行った結果、でん粉を
先づ、酸又は−一アミラーゼにより液化した液化でん粉
わした１００分率）が約−以上約／Ｓ以下のものを使用
したとき、′ｖ／＆／トヘキサオースの収量が最も高く
、且つ、！ルシヘキサオースＣａ４）以外のグルコース
（Ｇ／）、マルトース（ＧＪ）、マルトトリオース（Ｇ
、？）、マルトテトラオース（かった（第１図）。そし
てＤＩ約−以下及び１１ｍ１ｔ約コＳ以上ではマルトヘ
キサオースの収量が少なくなるばかりか、ＤＭ約７３以
上では、Ｇ／、ＧＪ、Ｇ３、ＧＩＩとＧ５の生成量が多
くなることかわかった。糖化物中にＧ／、ＧＪ、Ｇ３、
ＧＩＩとに ａＳの成分か多くなると、ＧＡの分離精製は当然のこと
ながら著しく困難となり、且つ、糖化物中のマルトヘキ
サオースの収量が相対的に低下する。
産能の強φ微生物を求め検索を行ってきた結果、一種の
一一アミラーゼがでん粉からマルトヘキサオースを主成
分とする糖化物に分解するアミラーゼを―体外に著量に
生館することを認めた。そして、この酵素によるでん粉
の糖化条件について詳細に検討を行った結果、でん粉を
先づ、酸又は−一アミラーゼにより液化した液化でん粉
わした１００分率）が約−以上約／Ｓ以下のものを使用
したとき、′ｖ／＆／トヘキサオースの収量が最も高く
、且つ、！ルシヘキサオースＣａ４）以外のグルコース
（Ｇ／）、マルトース（ＧＪ）、マルトトリオース（Ｇ
、？）、マルトテトラオース（かった（第１図）。そし
てＤＩ約−以下及び１１ｍ１ｔ約コＳ以上ではマルトヘ
キサオースの収量が少なくなるばかりか、ＤＭ約７３以
上では、Ｇ／、ＧＪ、Ｇ３、ＧＩＩとＧ５の生成量が多
くなることかわかった。糖化物中にＧ／、ＧＪ、Ｇ３、
ＧＩＩとに ａＳの成分か多くなると、ＧＡの分離精製は当然のこと
ながら著しく困難となり、且つ、糖化物中のマルトヘキ
サオースの収量が相対的に低下する。
更に、本発明者社、アミラーゼＧ６で液化でん粉を糖化
するに際し、液化でん粉の濃度を約Ｓ％（Ｗ／Ｖ ）以
上で行うとき、マルトヘキサオースの収量が高くなるば
かりでな（、Ｇ／、ＧＪ、Ｇ３ａｌＩｈｅ！；の生成量
を低く抑えることができることを認めた。液化でん粉濃
度は濃いほど望ましいが、ｎｍ＃コ〜約ｔＳの液化でん
粉の溶解性と高濃度基質での酵素反応阻害を考慮すると
、実質的には約ダＯ％以下か望ましい。
するに際し、液化でん粉の濃度を約Ｓ％（Ｗ／Ｖ ）以
上で行うとき、マルトヘキサオースの収量が高くなるば
かりでな（、Ｇ／、ＧＪ、Ｇ３ａｌＩｈｅ！；の生成量
を低く抑えることができることを認めた。液化でん粉濃
度は濃いほど望ましいが、ｎｍ＃コ〜約ｔＳの液化でん
粉の溶解性と高濃度基質での酵素反応阻害を考慮すると
、実質的には約ダＯ％以下か望ましい。
本発明は、これらの知見にもとずψてなされたものであ
る。
る。
すなわち、本発明はでん粉からマルトヘキサオースを生
成するアミラーゼＧ６を、ｌ１１１−以上／ｊ以下、且
つ約３襲以上の液化でん粉に作用させることを特徴とす
るアミラーゼＧ６によるマルトヘキサオースの１造方法
に関するものである。
成するアミラーゼＧ６を、ｌ１１１−以上／ｊ以下、且
つ約３襲以上の液化でん粉に作用させることを特徴とす
るアミラーゼＧ６によるマルトヘキサオースの１造方法
に関するものである。
以下に本発明の内容をより具体的に説明する。
本発明でいうアミラーゼＧ４とは、以下に示す＃事的性
質を有するものであり、例えば、微生吻工業技術研究所
に寄託されている徴工研醒寄第５ＳＳＪ号など、パシル
ス属細菌により生産される本のである。
質を有するものであり、例えば、微生吻工業技術研究所
に寄託されている徴工研醒寄第５ＳＳＪ号など、パシル
ス属細菌により生産される本のである。
アミチー４０番の酵素的性質
（１）作用：でん粉、アミロース、アミロペクチン、デ
キストリンなどからマルトヘキサオースを主成分とする
糖分解物を生成する。生成量がｍ−型であり、−棟のｍ
−アミラーゼである。マルトヘキサオースの収量は基質
の液化度に依存するが通常、２！に〜３３％である。可
溶性でん粉に対するｋｍは約ａｔＨ！ｒｆＬ。可溶性で
ん粉を基質としたときの典型的な糖化物の組成は第７表
に記載されて−る通りである＠ （２）作用１）Ｈ範囲及び最適作用ｐＨ！ｐ−Ｈｐ〜／
／の範囲に作用し、最適ｐＨはｔ付近（１％可溶性性で
ん粉、ｄＯｊＭ）リス緩衝液の下で、ＩＩＯ℃で１時間
反応） （８） 作用温度範囲及び最遺作用温ｒ！ｌ＝約７０
℃まで作用し、最適作用温度は約６０℃（１％可溶性で
ん粉、００３Ｍトリス緩衝液の下で、各瀉噴で３０分間
反応） （４） ｐＨ安定性富す１ｌｉｊ〜約／Ｉで安定（ａｏ
ｓｗ＊＠液の下”Ｃ，３０℃で３時間放置後、残存活性
を測定） （５）熱安定性ｔＱＯ！ｒＭ）リス緩衝液の下で、各温
度で１０分間加熱後、残存活性を測定した。
キストリンなどからマルトヘキサオースを主成分とする
糖分解物を生成する。生成量がｍ−型であり、−棟のｍ
−アミラーゼである。マルトヘキサオースの収量は基質
の液化度に依存するが通常、２！に〜３３％である。可
溶性でん粉に対するｋｍは約ａｔＨ！ｒｆＬ。可溶性で
ん粉を基質としたときの典型的な糖化物の組成は第７表
に記載されて−る通りである＠ （２）作用１）Ｈ範囲及び最適作用ｐＨ！ｐ−Ｈｐ〜／
／の範囲に作用し、最適ｐＨはｔ付近（１％可溶性性で
ん粉、ｄＯｊＭ）リス緩衝液の下で、ＩＩＯ℃で１時間
反応） （８） 作用温度範囲及び最遺作用温ｒ！ｌ＝約７０
℃まで作用し、最適作用温度は約６０℃（１％可溶性で
ん粉、００３Ｍトリス緩衝液の下で、各瀉噴で３０分間
反応） （４） ｐＨ安定性富す１ｌｉｊ〜約／Ｉで安定（ａｏ
ｓｗ＊＠液の下”Ｃ，３０℃で３時間放置後、残存活性
を測定） （５）熱安定性ｔＱＯ！ｒＭ）リス緩衝液の下で、各温
度で１０分間加熱後、残存活性を測定した。
その結果、ｊ Ｏ”Ｃ／ ０分間の加熱で約１０％失活
し、！！ｆ″ｃｌｏ分間の加熱で約３０％失活しｔｓｏ
″ＣｔＯ分間の加熱で約ざ。％失活した〇（６）阻害剤
官本＃Ｒｔｒｉ左ｘ１０ Ｍｆ）Ｈｇ０％、ＩＦ ｅ
Ｓ ０４．０００１ｇ 、Ｚ！１８０４．０ｕＳＯ４
により、それぞれ約９デ外、約ｔ９％、約７９％、約７
６％、約６４％ｆｆｉ害された◎又！×１０ ＭＯａ
０１２によっても約１０％失活された。
し、！！ｆ″ｃｌｏ分間の加熱で約３０％失活しｔｓｏ
″ＣｔＯ分間の加熱で約ざ。％失活した〇（６）阻害剤
官本＃Ｒｔｒｉ左ｘ１０ Ｍｆ）Ｈｇ０％、ＩＦ ｅ
Ｓ ０４．０００１ｇ 、Ｚ！１８０４．０ｕＳＯ４
により、それぞれ約９デ外、約ｔ９％、約７９％、約７
６％、約６４％ｆｆｉ害された◎又！×１０ ＭＯａ
０１２によっても約１０％失活された。
（７）安定化：カルシウムによる熱安定性の増加は認め
られなかった０ ８） 精製方法、Ｘ本酵素は培養Ｐ液から硫安亭。〜り
Ｏ％鉋和で沈殿物として回収され、次いで、１１１１： ＤＫＡＩｉ−セファローズ・カラムクロマトグラｙ イ
ー （Ｑ ０２ ！ｉ Ｍ ９ ＞ｍ緩衝液に一′ｆＩ
ｌｓＬり塩化カリウムミコ〜０４Ｍでグラジェント溶出
）同カラムによる再クロマトグラフィー、セ７アデツタ
スＧ−コＯＯガラム會・クロマトグラフィーによりクロ
マト的に単゛−アミラーゼに精−することができる。
られなかった０ ８） 精製方法、Ｘ本酵素は培養Ｐ液から硫安亭。〜り
Ｏ％鉋和で沈殿物として回収され、次いで、１１１１： ＤＫＡＩｉ−セファローズ・カラムクロマトグラｙ イ
ー （Ｑ ０２ ！ｉ Ｍ ９ ＞ｍ緩衝液に一′ｆＩ
ｌｓＬり塩化カリウムミコ〜０４Ｍでグラジェント溶出
）同カラムによる再クロマトグラフィー、セ７アデツタ
スＧ−コＯＯガラム會・クロマトグラフィーによりクロ
マト的に単゛−アミラーゼに精−することができる。
（９）分子量：セ７アデツクスＧ−一〇〇カラム・クロ
マ）グチフィーによる分子ｉｌは約７１ａ０００であっ
た。
マ）グチフィーによる分子ｉｌは約７１ａ０００であっ
た。
０Ｉ 力価測定法富本靜素の活性淘定は、Ｑ／Ｍ）リ
ス緩衝液に溶解さ破た１％可溶性でん粉１！ＱＳＩｌ＆
１１！に適量の酵素を加え、水で全飯ｌ−とし、４Ｉ０
℃で反応させる。この条件で１時間に／１ｍ９のグルコ
ースに相当する還元力を生成する酵素ｋを／単位とした
。
ス緩衝液に溶解さ破た１％可溶性でん粉１！ＱＳＩｌ＆
１１！に適量の酵素を加え、水で全飯ｌ−とし、４Ｉ０
℃で反応させる。この条件で１時間に／１ｍ９のグルコ
ースに相当する還元力を生成する酵素ｋを／単位とした
。
以上の酵素的性質について、ム・ｒｏｂａｏｔ＠ｒａ＠
ｒｏｇｅｎ・■の酵素と比較した結果を第１表に示す。
ｒｏｇｅｎ・■の酵素と比較した結果を第１表に示す。
第１表
第１表から明らかなように、本賛明のアミラーゼＧ６に
よるでん粉糖化＃Ｊｕ、主成分である！ルトヘキサオー
スの他に、反応初期よりマルトースマルト）リオース、
マルトテトラオース及びマルトペンタオースを生成する
ことから、でん粉性基質の非還元性末端から！ルトヘキ
サオース単位で分解する酵素と断定できない。本発明の
アミラーゼａｔｔａムｅｒａｂａｏｔ＠ｒ ａｓｒｏｇ
ｅｎ＠ｓの酵素に比ベアルカリ性側に安定であり、作用
ｐＨもアルカリ性側にある０又、ムｅｒｏｂａａｔｅｒ
ａｅｒｏ−ｇｓｚｔｅａ のアミラーゼＧＡｄカル
シウムイイ、ＡラーゼＧ６にはこのような効果は認めら
れない。
よるでん粉糖化＃Ｊｕ、主成分である！ルトヘキサオー
スの他に、反応初期よりマルトースマルト）リオース、
マルトテトラオース及びマルトペンタオースを生成する
ことから、でん粉性基質の非還元性末端から！ルトヘキ
サオース単位で分解する酵素と断定できない。本発明の
アミラーゼａｔｔａムｅｒａｂａｏｔ＠ｒ ａｓｒｏｇ
ｅｎ＠ｓの酵素に比ベアルカリ性側に安定であり、作用
ｐＨもアルカリ性側にある０又、ムｅｒｏｂａａｔｅｒ
ａｅｒｏ−ｇｓｚｔｅａ のアミラーゼＧＡｄカル
シウムイイ、ＡラーゼＧ６にはこのような効果は認めら
れない。
素であるが、Ａｓｒｏｂａｏｔｅｒ ＆＠ｒｏｇ＠ｌｌ
＠ｌ ｆ）ｔ＃素は細胞壁に結合した酵素である。
＠ｌ ｆ）ｔ＃素は細胞壁に結合した酵素である。
なお、本発明社アミツーーｖＧ＆生産能を有する微生物
のアミラーゼ０６線適川することができるが、例示−と
して、微工研菌寄第ｓｔｓ、ｙ号を使用して、以下に具
体的に説明する０本＃は下記の菌学的性質を有する。
のアミラーゼ０６線適川することができるが、例示−と
して、微工研菌寄第ｓｔｓ、ｙ号を使用して、以下に具
体的に説明する０本＃は下記の菌学的性質を有する。
（１） 形顧：単桿−１大きさ。７〜／、 ＯＸ Ｊ
亭〜ＩＡＯμ、非運動性、ダラム陰性 （２）胞子：、胞子ａｌ細旭はふくらみ、球彰〜楕円杉
の胞子を形成する。
亭〜ＩＡＯμ、非運動性、ダラム陰性 （２）胞子：、胞子ａｌ細旭はふくらみ、球彰〜楕円杉
の胞子を形成する。
（３） ゼラチン：殆んど液化しない〇（４）肉汁寒
天：生育中程炭、表面平滑で薄く、半透明乳白色。
天：生育中程炭、表面平滑で薄く、半透明乳白色。
（５） グルコース肉汁寒天富肉汁寒天培地よりも生
育不良・ （６） クエン酸寒天電わずかに生育。
育不良・ （６） クエン酸寒天電わずかに生育。
（γ） グルコース硝醸塩寒天Ｘわずかに生育。
（８） 肉汁８わずかに混濁、沈−する。
（９） 食塩肉汁！／−４％食塩濃度でも生Ｈ１ｉ。
％食塩１ｖｕｔでは生育しな１慶、わずかに生育。
輪 ミルク：ゆっくり＃固、その後ペプトン化。
αｌ） ポテト窓生育微弱。
（ロ） チロシン寒天８生育中程度、チロシナーゼ陰性
Ｏ （至） グルコース−アスパラギン寒天；生育微弱。
Ｏ （至） グルコース−アスパラギン寒天；生育微弱。
（２）インドール：生成しな−。
（ロ）アセチルメチルカルビノール：生成する。
（ロ）硫化水素富生成する。
（ロ）硝酸塩の還元冨陰性
−ウレアーゼ客生成しな−
一 カタラーゼ：生成しない
− グルコース肉・汁平地のｐＨ３約３ｅ） でん粉
の加水分解！陽性 （２時炭水化物の利用３グルコース、７ラクシースマン
ノース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アシビノース、シューク
ν−ス、ククトース、マルトースラフィノース、マンニ
トール、イヌリン、でん粉、Ｌ−ソルボース、ソルビト
ールを利用虫酸するが、ガスの発生なし くに）生育温度！最適生育温Ｗ１は３３〜ダＳ℃、最高
生育温室は！ｆｏＮｙ、ｔ’ｃ Ｑ→ 死滅温度１１００℃でｉｏ分間加熱しても死滅し
ない。
の加水分解！陽性 （２時炭水化物の利用３グルコース、７ラクシースマン
ノース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アシビノース、シューク
ν−ス、ククトース、マルトースラフィノース、マンニ
トール、イヌリン、でん粉、Ｌ−ソルボース、ソルビト
ールを利用虫酸するが、ガスの発生なし くに）生育温度！最適生育温Ｗ１は３３〜ダＳ℃、最高
生育温室は！ｆｏＮｙ、ｔ’ｃ Ｑ→ 死滅温度１１００℃でｉｏ分間加熱しても死滅し
ない。
（ロ）最適生育ｐｅｌｆ〜９
以上の菌学的性質について、Ｂ＠ｒｇ＠ｙ’ａＭａｎｎ
ｕａｌ ｏｆ ］）＠ｔ＠ｒｍｉｎａｔｌｖｅ
Ｂａｏｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙの第７版及び第１版（テｈｅ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｍＷｉｌｋｉｍｓ Ｏｏｍｐａ
ｍ７ ／ ９ ｊり年及びＩタクダ年）を参照し、本微
生物社バシルス・サーキュランスに近縁の微生物である
と思われる。
ｕａｌ ｏｆ ］）＠ｔ＠ｒｍｉｎａｔｌｖｅ
Ｂａｏｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙの第７版及び第１版（テｈｅ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｍＷｉｌｋｉｍｓ Ｏｏｍｐａ
ｍ７ ／ ９ ｊり年及びＩタクダ年）を参照し、本微
生物社バシルス・サーキュランスに近縁の微生物である
と思われる。
本発明による＃嵩生産のための培養社、通常用いられる
固体培地また社液体培地が使用され、液体培養のための
培地の炭素源としては、ペプシン肉エキス、酵母エキス
、カゼイン、コーン・ステイープ・リカーなどの−ずれ
かと、炭素源としてでん粉、デキスシリン、マルトース
、グルコース、シュークロースなどの−ずれか、及びこ
れを補足に する無機窒素源、リン酸塩、マグネシウム塩及びはコｊ
−５ｓ℃、ｐＨ７〜９で行う。
固体培地また社液体培地が使用され、液体培養のための
培地の炭素源としては、ペプシン肉エキス、酵母エキス
、カゼイン、コーン・ステイープ・リカーなどの−ずれ
かと、炭素源としてでん粉、デキスシリン、マルトース
、グルコース、シュークロースなどの−ずれか、及びこ
れを補足に する無機窒素源、リン酸塩、マグネシウム塩及びはコｊ
−５ｓ℃、ｐＨ７〜９で行う。
アミラーゼＧ６は一体外に生産される酵素であるので、
培養終了−後、濾過又は遠心分陰して除菌し、上澄液を
回収する。そして、必要に応じて濃縮し、硫安、硫ルナ
トリウムなどにょる塩析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として収得する。
培養終了−後、濾過又は遠心分陰して除菌し、上澄液を
回収する。そして、必要に応じて濃縮し、硫安、硫ルナ
トリウムなどにょる塩析、又はアセトン、エタノール、
メタノール、イソプロパツールなどの有機溶剤を加え、
酵素を沈澱物として収得する。
本発明において使用される、液化でん粉社、各種でん粉
を酸又はパシルスｍ−−アミラーゼを用いて、通常ので
ん粉の液化方法によシ餉製される。
を酸又はパシルスｍ−−アミラーゼを用いて、通常ので
ん粉の液化方法によシ餉製される。
液化方法の詳細について祉例えば、シュガーへンドプツ
ク（浜口栄次部、桜井芳人編 朝食書店、’ｐｓｔｔ〜
ｂ１０）に記載されて−る。
ク（浜口栄次部、桜井芳人編 朝食書店、’ｐｓｔｔ〜
ｂ１０）に記載されて−る。
糖化反応は、通常、１１１４〜９、望ましく社）１１ｚ
Ｓ〜ＬＳ１温度ダＯ〜６０℃で行われる。
Ｓ〜ＬＳ１温度ダＯ〜６０℃で行われる。
以下に実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例１
−１の三角７テスコに、カツオ肉エキス！ｆ襲、Ｋ、Ｈ
ＰＯ４０３％、Ｍｇ８０４１＋りＨ！ＯＱ／％、可溶性
でん粉１％からなる培地４ｃＯＯ−を入れ、常法により
殺菌後、バシルス・サーキュランスＧ！（微工研菌寄第
！；ｇ！ｆ３号）を接穂し、３０℃で４Ｉ１時間振緻培
養した。培養後、得られた上皺液につ≠て生産されたア
ミラーゼＧ６を測定した結束、培地ｍノ当りダ／、／単
位であった０ この上澄液２２１から硫安ダＯ〜７０％飽和沈澱区分を
集め、蒸溜水で透析した（−！０１Ｌｔ）。
ＰＯ４０３％、Ｍｇ８０４１＋りＨ！ＯＱ／％、可溶性
でん粉１％からなる培地４ｃＯＯ−を入れ、常法により
殺菌後、バシルス・サーキュランスＧ！（微工研菌寄第
！；ｇ！ｆ３号）を接穂し、３０℃で４Ｉ１時間振緻培
養した。培養後、得られた上皺液につ≠て生産されたア
ミラーゼＧ６を測定した結束、培地ｍノ当りダ／、／単
位であった０ この上澄液２２１から硫安ダＯ〜７０％飽和沈澱区分を
集め、蒸溜水で透析した（−！０１Ｌｔ）。
この龜ののアミラーゼＧ６活性はコｓ３単位／―であっ
た。
た。
ボテシスターチを常法により、市販パシルス・ズプチル
スの一一アミツーゼ（大和化成製、商品名クライスラー
ゼ、）で液化ｗ４製した、ｎｕ／、ｔ〜−りの液化でん
ぷん、各ｌＯＯ■に前記の＃素剤各ａり単位を添加し、
全量ｉｇＬｔｐｍｔ−ｔ、ｓで、ＳＯ℃で反応させた。
スの一一アミツーゼ（大和化成製、商品名クライスラー
ゼ、）で液化ｗ４製した、ｎｕ／、ｔ〜−りの液化でん
ぷん、各ｌＯＯ■に前記の＃素剤各ａり単位を添加し、
全量ｉｇＬｔｐｍｔ−ｔ、ｓで、ＳＯ℃で反応させた。
経時的＜７、ＩＱ、１３時間後）に一定ｉ１瓢料を採取
し、液体クロマドグラフ（カラム、昭和亀工株式金社製
ＮＨｐａｏｋ、Ｔ−ダ／／、溶出液ア七）ニトリル６
５％、水３！ｆ％）で分廃定置した。同時に溶出液を分
画採取し、蒸発乾燥後、魚捕水に溶解しｓｙエノール−
ｍ除法で定検した。得られた各椋Ｄｌ穂化物のうち、マ
ルトヘキサオース含りが最高値を示した権化物の糖組成
を第７図に示す。図から明らかなように、マル）ヘキサ
オースの収＠ＦｉＤＮｌダ〜／２４のの範Ｈにおいて、
は寸一定し、約３０％の収量で得られたが、グルコース
、マルトース、マルトトリオース、マルトヘキサオース
とマルトペンタオースはＤＥＣが高くなるにつれて増加
し、特に１ハｐ′饗か約１１１１１０以上、特にＤ１約
／ｌ付近から、着、しく増大することが明らかになった
Ｏまた、ＤＥＣが約２以下では、マルトヘキサオースの
収量が低下することがわかった。
し、液体クロマドグラフ（カラム、昭和亀工株式金社製
ＮＨｐａｏｋ、Ｔ−ダ／／、溶出液ア七）ニトリル６
５％、水３！ｆ％）で分廃定置した。同時に溶出液を分
画採取し、蒸発乾燥後、魚捕水に溶解しｓｙエノール−
ｍ除法で定検した。得られた各椋Ｄｌ穂化物のうち、マ
ルトヘキサオース含りが最高値を示した権化物の糖組成
を第７図に示す。図から明らかなように、マル）ヘキサ
オースの収＠ＦｉＤＮｌダ〜／２４のの範Ｈにおいて、
は寸一定し、約３０％の収量で得られたが、グルコース
、マルトース、マルトトリオース、マルトヘキサオース
とマルトペンタオースはＤＥＣが高くなるにつれて増加
し、特に１ハｐ′饗か約１１１１１０以上、特にＤ１約
／ｌ付近から、着、しく増大することが明らかになった
Ｏまた、ＤＥＣが約２以下では、マルトヘキサオースの
収量が低下することがわかった。
実施例コ
第１表記載の各量の液化でん粉（Ｉ）ＩＣＩＡ、？）に
実施例１で５ｌＩＩ楠したアミラーゼＧ４！素剤を、液
化でん粉ｇｒ当りａり単位添加し、全量約ｌ−にしｐｕ
ｇ−１ｆ、３で３０℃て反応させた。靴詩的に試料管採
し、実施例１と同様にして、糖化物中の糖組成を定置し
た。第１表及び第−同社、マルトヘキサオースの生成が
ほず最高値を示したときの釉化物の堝・１組成を示して
いる。第２図から明らかなように、糖化物めマルトヘキ
サオースの含Ｍは各基質誕度において、ｔゴず一定（３
７〜３５％）を示した。しかし、基質ｆ４Ｎが約５％以
下では、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラ
オース及びマルトペンタオースの含ｋが多くなるこトミ
に、マルトースとマルトテトラオースの含量が多くなる
ことがわかった・これは、低濃度の基實下では、生成し
たマルトヘキサオースがマルトースとマルトテトラオー
スに分解されやすいため１１：ｌ と考えられる。
実施例１で５ｌＩＩ楠したアミラーゼＧ４！素剤を、液
化でん粉ｇｒ当りａり単位添加し、全量約ｌ−にしｐｕ
ｇ−１ｆ、３で３０℃て反応させた。靴詩的に試料管採
し、実施例１と同様にして、糖化物中の糖組成を定置し
た。第１表及び第−同社、マルトヘキサオースの生成が
ほず最高値を示したときの釉化物の堝・１組成を示して
いる。第２図から明らかなように、糖化物めマルトヘキ
サオースの含Ｍは各基質誕度において、ｔゴず一定（３
７〜３５％）を示した。しかし、基質ｆ４Ｎが約５％以
下では、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラ
オース及びマルトペンタオースの含ｋが多くなるこトミ
に、マルトースとマルトテトラオースの含量が多くなる
ことがわかった・これは、低濃度の基實下では、生成し
たマルトヘキサオースがマルトースとマルトテトラオー
スに分解されやすいため１１：ｌ と考えられる。
第ｚ！１−
第１図社、各棹Ｄｌｌｔの液化でん粉をノくシルス蜘ア
ミラ−４１Ｇ＆で糖化した時の糖化ヤリ中のグルコース
（Ｇ／）％マルトース（Ｇ２）、マルト） ９オース（
Ｇ３）、マルトテトラオース（Ｇダ）、マルトペンタオ
ース（（ｋ！；）ンマルトヘ中すオース（Ｇ６）金型を
示す。 第一図は、各１ｍ＃度の液化でん粉を使用したときのＧ
／％Ｇコ、Ｇ３、Ｇダ、Ｇ＆とＧ６含量を示す。 才 １ 関 ＤＥ 第２図 Ｐ−ｆｉｉ淳崖（句 −Ｘ−Ｇ３ →ｌ−Ｇ６ ４
ミラ−４１Ｇ＆で糖化した時の糖化ヤリ中のグルコース
（Ｇ／）％マルトース（Ｇ２）、マルト） ９オース（
Ｇ３）、マルトテトラオース（Ｇダ）、マルトペンタオ
ース（（ｋ！；）ンマルトヘ中すオース（Ｇ６）金型を
示す。 第一図は、各１ｍ＃度の液化でん粉を使用したときのＧ
／％Ｇコ、Ｇ３、Ｇダ、Ｇ＆とＧ６含量を示す。 才 １ 関 ＤＥ 第２図 Ｐ−ｆｉｉ淳崖（句 −Ｘ−Ｇ３ →ｌ−Ｇ６ ４
Claims (1)
- でん粉から！ルトヘキすオースを生成するアミラーゼＧ
６をＤＩ約−以上約／ｊ以下、且つ約Ｓ−以上の液化で
ん粉に作用させることを特徴とするアミラーゼＧ６によ
るマル）ヘキサオースの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56161838A JPS5838155B2 (ja) | 1981-10-09 | 1981-10-09 | オリゴ糖の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56161838A JPS5838155B2 (ja) | 1981-10-09 | 1981-10-09 | オリゴ糖の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5863392A true JPS5863392A (ja) | 1983-04-15 |
| JPS5838155B2 JPS5838155B2 (ja) | 1983-08-20 |
Family
ID=15742888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56161838A Expired JPS5838155B2 (ja) | 1981-10-09 | 1981-10-09 | オリゴ糖の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5838155B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61285998A (ja) * | 1985-06-11 | 1986-12-16 | Shokuhin Sangyo Baioriakutaa Syst Gijutsu Kenkyu Kumiai | マルトオリゴ糖の製造方法 |
| WO1992001805A1 (en) * | 1990-07-26 | 1992-02-06 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Process for producing sugar and transfusion |
-
1981
- 1981-10-09 JP JP56161838A patent/JPS5838155B2/ja not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61285998A (ja) * | 1985-06-11 | 1986-12-16 | Shokuhin Sangyo Baioriakutaa Syst Gijutsu Kenkyu Kumiai | マルトオリゴ糖の製造方法 |
| WO1992001805A1 (en) * | 1990-07-26 | 1992-02-06 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Process for producing sugar and transfusion |
| US5364794A (en) * | 1990-07-26 | 1994-11-15 | Nippon Shinyaku Company Limited | Process for producing saccharides |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5838155B2 (ja) | 1983-08-20 |
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