JPH03251173A - マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途 - Google Patents
マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途Info
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- JPH03251173A JPH03251173A JP2048907A JP4890790A JPH03251173A JP H03251173 A JPH03251173 A JP H03251173A JP 2048907 A JP2048907 A JP 2048907A JP 4890790 A JP4890790 A JP 4890790A JP H03251173 A JPH03251173 A JP H03251173A
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- starch
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は澱粉からマルトトリオースを主成分として生成
する新規なマルトトリオース生成アミラーゼ、その製造
法及びこれを用いたマルトトリオース含有糖液の製造法
に関するものである。
する新規なマルトトリオース生成アミラーゼ、その製造
法及びこれを用いたマルトトリオース含有糖液の製造法
に関するものである。
〔従来技術１
マルトトリオースは澱粉を酵素又は酸で部分分解するこ
とにより得られるグルコース３分子がα−１，４−グル
コシド結合で結合した糖である。マルトトリオースの甘
味の強さは砂糖の１７％程度であるが、まろやかな甘味
があるため、食品の低甘味剤として利用される。又、吸
湿性、保水性が大きいことから、食品の水分を保持し、
乾燥の防止、砂糖の結晶析出防止、澱粉の老化防止剤と
しての利用ができる。さらに、マルトトリオースはグル
コースやマルトースより熱安定性に優れているなど、食
品加工上の多くの優れた特性のあることが、最近明らか
になった。
とにより得られるグルコース３分子がα−１，４−グル
コシド結合で結合した糖である。マルトトリオースの甘
味の強さは砂糖の１７％程度であるが、まろやかな甘味
があるため、食品の低甘味剤として利用される。又、吸
湿性、保水性が大きいことから、食品の水分を保持し、
乾燥の防止、砂糖の結晶析出防止、澱粉の老化防止剤と
しての利用ができる。さらに、マルトトリオースはグル
コースやマルトースより熱安定性に優れているなど、食
品加工上の多くの優れた特性のあることが、最近明らか
になった。
しかしながら、未だ工業的に確立されたマルトトリオー
ス製造技術がないため、現在、マルトース製造時の副産
物（澱粉をβ−アミラーゼとプルラナーゼで糖化したマ
ルトース液をイオン交換樹脂等でマルトースを分離した
残りのマルトトリオースを約４５％含む糖液）が市販さ
れているにすぎず、この方法ではマルトトリオースの供
給に限りがある。
ス製造技術がないため、現在、マルトース製造時の副産
物（澱粉をβ−アミラーゼとプルラナーゼで糖化したマ
ルトース液をイオン交換樹脂等でマルトースを分離した
残りのマルトトリオースを約４５％含む糖液）が市販さ
れているにすぎず、この方法ではマルトトリオースの供
給に限りがある。
澱粉からマルトトリオースを生成する酵素としては、こ
れまでストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）の生産するＮ−Ａ４６
８酵素〔特公昭５７−６９１５． 澱粉科学、２３巻
３号、１７５〜１８１頁（１９７９） ］及びバシルス
・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）
のアミラーゼＧ３ （特公昭５９−３７９５７、特公昭
６Ｏ−１５３１５）が知られている。 しかし、これら
の酵素は微生物による酵素の生産性が低く、又酵素が工
業的使用に耐える性質を有していないなどの理由から、
未だ工業的には製造されていない。
れまでストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）の生産するＮ−Ａ４６
８酵素〔特公昭５７−６９１５． 澱粉科学、２３巻
３号、１７５〜１８１頁（１９７９） ］及びバシルス
・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）
のアミラーゼＧ３ （特公昭５９−３７９５７、特公昭
６Ｏ−１５３１５）が知られている。 しかし、これら
の酵素は微生物による酵素の生産性が低く、又酵素が工
業的使用に耐える性質を有していないなどの理由から、
未だ工業的には製造されていない。
本発明者らは、工業的に澱粉又はその派生物からマルト
トリオースを製造する技術を確立することを目的として
、微生物の探索を行ってきた結果、土壌中から分離し、
ミクロバクテリウム属と同定した細菌が特殊なアミラー
ゼを著量生産することを認めた。この特殊なアミラーゼ
は澱粉を加水分解して、５０〜７０％のマルトトリオー
スを生成することが認められた。このように著量のマル
トトリオースを生成するアミラーゼはこれまで知られて
おらず、又ミクロバクテリウム属菌からマルトトリオー
ス生成アミラーゼを生産することについても、これまで
知られていない０本発明はこのような知見に基づいてな
されたものであり、本発明者らは、マルトトリオース生
成アミラーゼを製造、精製し、更にその用途を確立して
本発明を完成した。
トリオースを製造する技術を確立することを目的として
、微生物の探索を行ってきた結果、土壌中から分離し、
ミクロバクテリウム属と同定した細菌が特殊なアミラー
ゼを著量生産することを認めた。この特殊なアミラーゼ
は澱粉を加水分解して、５０〜７０％のマルトトリオー
スを生成することが認められた。このように著量のマル
トトリオースを生成するアミラーゼはこれまで知られて
おらず、又ミクロバクテリウム属菌からマルトトリオー
ス生成アミラーゼを生産することについても、これまで
知られていない０本発明はこのような知見に基づいてな
されたものであり、本発明者らは、マルトトリオース生
成アミラーゼを製造、精製し、更にその用途を確立して
本発明を完成した。
以下、本発明のマルトトリオース生成アミラーゼの理化
学的性質について述べる。
学的性質について述べる。
（ａ）作用及び基質特異性
アミロース、アミロペクチン、 グリコーゲン、澱粉及
びこれらの派生物のα−１，４−グルコシド結合からな
るグルカンをエンド型で分解してマルトトリオースを主
成分とする糖液を生成する。液化澱粉からのマルトトリ
オースの生成率は糖化条件即ち、基質濃度、澱粉液化度
（ＤＥ）、枝切り酵素の有無、ｐＨ１温度などによって
も異なるが、５０〜７０％に達する９本酵素はプルラン
には実質的に作用しない。
びこれらの派生物のα−１，４−グルコシド結合からな
るグルカンをエンド型で分解してマルトトリオースを主
成分とする糖液を生成する。液化澱粉からのマルトトリ
オースの生成率は糖化条件即ち、基質濃度、澱粉液化度
（ＤＥ）、枝切り酵素の有無、ｐＨ１温度などによって
も異なるが、５０〜７０％に達する９本酵素はプルラン
には実質的に作用しない。
（ｂ）作用ｐＨ及び至適ｐＨ
ｐＨ５〜９の広い範囲で作用する。至適ｐＨは６．５付
近に認められた（０．０５Ｍリン酸緩衝液又は酢酸緩衝
液の下で、４０℃で３０分反応）、その結果を第１図に
示す。
近に認められた（０．０５Ｍリン酸緩衝液又は酢酸緩衝
液の下で、４０℃で３０分反応）、その結果を第１図に
示す。
（ｃ）作用温度及び至適温度
約６０℃まで作用する。至適温度は約５０℃に認められ
た［１％可溶性澱粉、０．０５Ｍ トリス緩衝液（ｐＨ
７，０）で３０分間反応］、その結果を第２図に示す。
た［１％可溶性澱粉、０．０５Ｍ トリス緩衝液（ｐＨ
７，０）で３０分間反応］、その結果を第２図に示す。
（ｄ）熱安定性
０．０５Ｍ ）リス緩衝液（ｐＨ７，０）で、５０℃、
１０分間加熱したとき約１０％失活し、６０℃、１０
分間の加熱で殆ど失活した。但し、カルシウムイオンの
存在下では安定性が向上する。その結果を第３図に示す
。
１０分間加熱したとき約１０％失活し、６０℃、１０
分間の加熱で殆ど失活した。但し、カルシウムイオンの
存在下では安定性が向上する。その結果を第３図に示す
。
（ｅ） ｐＨ安定性
０．１Ｍ緩衝液（酢酸又はリン酸緩衝液）の下で、２５
℃で３時間放置後、残存活性を測定した。その結果、ｐ
Ｈ６〜９の範囲で安定であった。その結果を第４図に示
す。
℃で３時間放置後、残存活性を測定した。その結果、ｐ
Ｈ６〜９の範囲で安定であった。その結果を第４図に示
す。
（ｆ）安定化
カルシウムイオンの存在で熱安定性の増加が認められた
（第３図を参照）。
（第３図を参照）。
（ｇ）阻害剖
５ Ｘ １０−３ＭのＭｎＳＯ４，Ｃｕ５Ｏ，、ＨｇＣ
ｌ２． ＦｅＣｌ３゜Ｚ口Ｓｏ４． ＡｌＣｌ３で
それぞれ約８７％、約９７％、約９８％。
ｌ２． ＦｅＣｌ３゜Ｚ口Ｓｏ４． ＡｌＣｌ３で
それぞれ約８７％、約９７％、約９８％。
約１００％、約ｉｏｏ％、約１００％阻害された。又、
ｌＸｌ０−”Ｍ及び２ Ｘ １０−３Ｍのモノヨード酢
酸により、それぞれ８％と１９％阻害された。
ｌＸｌ０−”Ｍ及び２ Ｘ １０−３Ｍのモノヨード酢
酸により、それぞれ８％と１９％阻害された。
（ｈ）分子量
ゲルろ過法により測定した分子量は、約４０，０００で
あった。
あった。
以上の理化学的性質のうち、その主な性質について、特
公昭５７−６９１５に報告されているＮ−Ａ４６８酵素
（以下Ｎ−Ａ４６８と示す、）及び特公昭６０−１５３
１５に報告されているアミラーゼＧ３ （以下、Ａ−Ｇ
３と示す、）の性質を比較し、その結果を第１表に示す
。
公昭５７−６９１５に報告されているＮ−Ａ４６８酵素
（以下Ｎ−Ａ４６８と示す、）及び特公昭６０−１５３
１５に報告されているアミラーゼＧ３ （以下、Ａ−Ｇ
３と示す、）の性質を比較し、その結果を第１表に示す
。
尚、活性測定は下記の方法で行った。
０、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に溶解した２％可
溶性澱粉０．５ｍ ｌに、適量の酵素を加え、全量１．
０ｍｌで、４０℃で反応させ、生成するマルトトリオー
ス及びその他の還元糖をソモギー・ネルラン法で定量す
る。この条件で、 １分間に１マイクロモルのグルコー
スに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位とする。
溶性澱粉０．５ｍ ｌに、適量の酵素を加え、全量１．
０ｍｌで、４０℃で反応させ、生成するマルトトリオー
ス及びその他の還元糖をソモギー・ネルラン法で定量す
る。この条件で、 １分間に１マイクロモルのグルコー
スに相当する還元糖を生成する酵素量を１単位とする。
（以下余白）
第
表
Ｎ−Ａ４６８は、β−アミラーゼと同様に澱粉をマルト
トリオース単位でエキソ型で分解するアミラーゼであり
、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は分解生成糖がα−糖であ
ることからα−アミラーゼの一種であり、澱粉を最終的
にはヨード反応が殆ど消失するまで、主としてマルトト
リオースを含む分解物に分解するアミラーゼである。さ
らにＮ−Ａ４６８はカルシウムイオンの存在で安定化に
影響されないが、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は熱安定性
が向上する。また、Ａ−Ｇ３と本発明の酵素を比較した
とき、至適ｐＨ１安定ｐＨ及び至適温度等は類似してい
るが、安定温度が多少異なり、分子量においてはＡ−Ｇ
３が約２５，０００に対して本発明の酵素は約４０．０
００と全く異なっている０以上により、本発明の酵素は
従来知られている酵素とは全く異なる新規なマルトオリ
オース生成アミラーゼである。
トリオース単位でエキソ型で分解するアミラーゼであり
、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は分解生成糖がα−糖であ
ることからα−アミラーゼの一種であり、澱粉を最終的
にはヨード反応が殆ど消失するまで、主としてマルトト
リオースを含む分解物に分解するアミラーゼである。さ
らにＮ−Ａ４６８はカルシウムイオンの存在で安定化に
影響されないが、Ａ−Ｇ３及び本発明の酵素は熱安定性
が向上する。また、Ａ−Ｇ３と本発明の酵素を比較した
とき、至適ｐＨ１安定ｐＨ及び至適温度等は類似してい
るが、安定温度が多少異なり、分子量においてはＡ−Ｇ
３が約２５，０００に対して本発明の酵素は約４０．０
００と全く異なっている０以上により、本発明の酵素は
従来知られている酵素とは全く異なる新規なマルトオリ
オース生成アミラーゼである。
本発明のマルトトリオース生成アミラーゼを生産する微
生物としては、以下に例示するミクロバクテリウム・エ
スピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ、 ＡＭ−９５８１）または、その変異株などが本
発明に有利に用いることができる。
生物としては、以下に例示するミクロバクテリウム・エ
スピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｓｐ、 ＡＭ−９５８１）または、その変異株などが本
発明に有利に用いることができる。
ミクロバクテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ、 ＡＭ−９５８１）は
新たに土壌から発見、分離されたものであり、その菌学
的性質は下記の通りである。尚１本菌は微工研菌寄第１
１３１５号として、工業技術院微生物工業技術研究所所
に寄託されている。
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ、 ＡＭ−９５８１）は
新たに土壌から発見、分離されたものであり、その菌学
的性質は下記の通りである。尚１本菌は微工研菌寄第１
１３１５号として、工業技術院微生物工業技術研究所所
に寄託されている。
（１）形態：
（２）ダラム染色：
（３）胞子二
（４）運動性：
（５）鞭毛：
（６）オキシダーゼ：
（７）カタラーゼ；
（８）ＯＦテスト：
（９）色素：
（ｌＯ）遊離酸素の要求性＝
（１１）全菌体の加水分
解物中のｍｅｓｏ −
ジアミノピメリン酸＝
（１２）細胞壁のジアミノ酸＝
（１３）Ｖ Ｐ反応：
（１４）クエン酸塩利用
（シモンズ）：
細く長
（約ｌＯμ×４０μ）
→短稈−球菌
陽性
＋
周毛
＋
＋
０ （ｗｅａｋ）
黄色（不溶性）
偏性好気性
リジン
（１５）硝酸塩還元：
（１６）澱粉分解：
（１７）ゼラチン分解：
（１８）リドマスミルク反応・
（１９）ウレアーゼ：
（２０）ホスファターゼ：
（２１）硫化水素産生：
（２２）アルギニン分解：
（２３）耐熱性
６３℃、３０分間・
７２℃、 １５分間：
（２４）食塩の耐性
４％ニ
ア％：
１０％：
（２５）至適温度（℃）：
（２６）発育温度（℃）：
（２７）ｐＨ９，２液体培地の発育性：（２８）ｐＨ５
，０液体培地の発育性＝（２９）インドール産生： ＋ ３５〜４１ １１〜４６ ＋ （３０）エスクリン分解 （３１）フェニルアラニン 脱アミノ反応・ （３２）メチルレッド反応： （３３）チロシン分解： （３４）レシチナーゼ反応： （３５）ｓａｂｏｕｒａｕｄ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ発育：
（３６）クエン酸培地における アルカリ産生： （３７）アルカリ性嫌気下での 硝酸塩からのガス： （３８）Ｖ Ｐ培地の最終ｐＨ： ５．２（３９
）細胞直径：０，４〜０．８μ （４０）芽胞： （４１）ブドウ糖からのガス： （４２）発育 ＭａｃＣｏｎｋｅｙ： Ｓ Ｓ： ＴＳＩ（酸、斜面／高層） ： ＋ （ｗｅａｋ）／
−（４３）ジオキシアセトン産生： （４４）糖から酸の産生 イヌリン： シュークロス： ＋ トレハロース： ＋ グリセロール： ＋ ラフィノース： グルコース： ＋ フラクトース： ＋ ガラクトース： ＋ マンノース： ＋ マルトース： ＋ セロビオース： ＋ イノシトール： ソルボース： ラムノースＨ＋（ｗｅａｋ） ラクトース： ＋ （ｓｌｏｗ）マンニト
ール： 以上の菌学的性質にライて、Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎ
ｎｕａｌｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）を参照し、その性状を
比較したところ、細胞壁にリジン、グリシンを認め、メ
ソジアミノピメリン酸は認めないことから、本菌をミク
ロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に
属する菌と認めた６本菌はその諸性状から最もミクロバ
クテリウム・インペリアレに近いが、下記の点で当該菌
と一致しない （１）黄色素（不溶性）を産生ずる。
，０液体培地の発育性＝（２９）インドール産生： ＋ ３５〜４１ １１〜４６ ＋ （３０）エスクリン分解 （３１）フェニルアラニン 脱アミノ反応・ （３２）メチルレッド反応： （３３）チロシン分解： （３４）レシチナーゼ反応： （３５）ｓａｂｏｕｒａｕｄ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ発育：
（３６）クエン酸培地における アルカリ産生： （３７）アルカリ性嫌気下での 硝酸塩からのガス： （３８）Ｖ Ｐ培地の最終ｐＨ： ５．２（３９
）細胞直径：０，４〜０．８μ （４０）芽胞： （４１）ブドウ糖からのガス： （４２）発育 ＭａｃＣｏｎｋｅｙ： Ｓ Ｓ： ＴＳＩ（酸、斜面／高層） ： ＋ （ｗｅａｋ）／
−（４３）ジオキシアセトン産生： （４４）糖から酸の産生 イヌリン： シュークロス： ＋ トレハロース： ＋ グリセロール： ＋ ラフィノース： グルコース： ＋ フラクトース： ＋ ガラクトース： ＋ マンノース： ＋ マルトース： ＋ セロビオース： ＋ イノシトール： ソルボース： ラムノースＨ＋（ｗｅａｋ） ラクトース： ＋ （ｓｌｏｗ）マンニト
ール： 以上の菌学的性質にライて、Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎ
ｎｕａｌｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）を参照し、その性状を
比較したところ、細胞壁にリジン、グリシンを認め、メ
ソジアミノピメリン酸は認めないことから、本菌をミク
ロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に
属する菌と認めた６本菌はその諸性状から最もミクロバ
クテリウム・インペリアレに近いが、下記の点で当該菌
と一致しない （１）黄色素（不溶性）を産生ずる。
（２）グリセロール、ラムノースから酸を産生する。
（３）硝酸塩を還元する。
（４）アルギニンを分解しない。
本菌株は最適発育温度が３５〜４１℃にあり、かつ最高
発育温度が４５〜４６℃を示すことは最新の上記のＢｅ
ｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）
をはじめ、それ以降現在に至るまでのＩＪＳＢリスト上
のミクロバクテリウム属菌には記載されていない。
発育温度が４５〜４６℃を示すことは最新の上記のＢｅ
ｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、第２巻（１９８６）
をはじめ、それ以降現在に至るまでのＩＪＳＢリスト上
のミクロバクテリウム属菌には記載されていない。
以上により、本菌株を新菌株と判定し、ミクロバクテリ
ウム・エスピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｓｐ、 ＡＭ−９５８１） と命名した。
ウム・エスピーＡＭ−９５８１（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｓｐ、 ＡＭ−９５８１） と命名した。
本菌を培養して、マルトトリオース生成アミラーゼを生
産するには、窒素源として、肉エキ入 ペプトン、コー
ンステイープリカー、カゼインなど、通常、微生物の培
養に使用される有機窒素源、及び塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウムなどの無機窒素源が使用される。又、炭
素源としては、澱粉、液化澱粉、デキストリン、マルト
−人 グルコ−人 シュークロースなどが使用される。
産するには、窒素源として、肉エキ入 ペプトン、コー
ンステイープリカー、カゼインなど、通常、微生物の培
養に使用される有機窒素源、及び塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウムなどの無機窒素源が使用される。又、炭
素源としては、澱粉、液化澱粉、デキストリン、マルト
−人 グルコ−人 シュークロースなどが使用される。
そしてこれに補足する培地成分としてリン酸塩、マグネ
シウム塩、銅塩など各種金属塩が使用される。
シウム塩、銅塩など各種金属塩が使用される。
培養は、ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜８、温度２５
〜５０℃、好ましくは３０℃で２〜６日程度培養される
。
〜５０℃、好ましくは３０℃で２〜６日程度培養される
。
マルトトリオース生成アミラーゼは菌体外に生産される
酵素であるので、培養後、ろ過又は遠心分離により除菌
し、上澄液を回収し、濃縮する。
酵素であるので、培養後、ろ過又は遠心分離により除菌
し、上澄液を回収し、濃縮する。
必要により、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウムなどに
よる塩析によるか、又はアセトン、イソプロパツール、
エタノールなどの有機溶媒を加え酵素を沈澱物として回
収し、乾燥保存する。
よる塩析によるか、又はアセトン、イソプロパツール、
エタノールなどの有機溶媒を加え酵素を沈澱物として回
収し、乾燥保存する。
本酵素は通常の酵素の精製方法により、電気泳動的に単
一まで精製できる。例えば、培養上澄から、硫酸アンモ
ニウム塩析（〜４０％飽和）、ＤＥＡＥ＝セファロ−人
ＤＥＡＥ−セファデックス ＤＥＡＥ−トヨバール等
のイオン交換クロマトグラフィーおよびバイオゲル、セ
ファデックス、ＴＳＫゲル等によるゲルろ過により精製
することができる。
一まで精製できる。例えば、培養上澄から、硫酸アンモ
ニウム塩析（〜４０％飽和）、ＤＥＡＥ＝セファロ−人
ＤＥＡＥ−セファデックス ＤＥＡＥ−トヨバール等
のイオン交換クロマトグラフィーおよびバイオゲル、セ
ファデックス、ＴＳＫゲル等によるゲルろ過により精製
することができる。
本酵素を用い澱粉からのマルトトリオースの製造は以下
のようにして行う。
のようにして行う。
澱粉としては、通常、 トウモロコシ澱粉、バレイショ
澱粉などが使用され、これをバシルス属細菌の生産する
澱粉液化酵素（α−アミラーゼ）を用い、常法により液
化する（ＤＥ ２〜１日程度）、該液化澱粉を、通常２
０〜４０％濃度、ｐＨ６〜８、温度５０〜６０℃で、該
マルトトリオース生成アミラーゼを用いて糖化する６本
酵素による糖化において、プルラナーゼやイソアミラー
ゼなどの枝切り酵素を存在させると、糖化が促進され、
かつマルトトリオースの収量が増加する。
澱粉などが使用され、これをバシルス属細菌の生産する
澱粉液化酵素（α−アミラーゼ）を用い、常法により液
化する（ＤＥ ２〜１日程度）、該液化澱粉を、通常２
０〜４０％濃度、ｐＨ６〜８、温度５０〜６０℃で、該
マルトトリオース生成アミラーゼを用いて糖化する６本
酵素による糖化において、プルラナーゼやイソアミラー
ゼなどの枝切り酵素を存在させると、糖化が促進され、
かつマルトトリオースの収量が増加する。
以下、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例１
コーンステイープリカー１０％、可溶性澱粉２％、Ｋ２
ＨＰＯ４０，２％、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，１％、Ｃ
ａＣｌ、、 ０．０１％、ＮａＮ０．０．１％、ツイー
ン４００．１％からなる培地（ｐＨ７，０） ４０ｍ１
を２００ｍ ｌ容三角フラスコニ入れ、常法により殺菌
後、 ミクロバクテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（
微工研菌寄託第１１３１５号）を接種し、３０℃で３日
間振盪培養した。培養後、遠心分離機で除菌し、得られ
た上澄液について、生産されたマルトトリオース生成ア
ミラーゼを測定した結果、培地１ｍｌ当り５単位であっ
た。
ＨＰＯ４０，２％、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，１％、Ｃ
ａＣｌ、、 ０．０１％、ＮａＮ０．０．１％、ツイー
ン４００．１％からなる培地（ｐＨ７，０） ４０ｍ１
を２００ｍ ｌ容三角フラスコニ入れ、常法により殺菌
後、 ミクロバクテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（
微工研菌寄託第１１３１５号）を接種し、３０℃で３日
間振盪培養した。培養後、遠心分離機で除菌し、得られ
た上澄液について、生産されたマルトトリオース生成ア
ミラーゼを測定した結果、培地１ｍｌ当り５単位であっ
た。
実施例２
実施例１において、培地として、魚肉エキス３％、Ｋ、
ＨＰｏ、 ０．３％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１％、
ＣａＣ１２０，０１％を含む培地を使用し、 ミクロバ
クテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（微工研菌寄託第
１１３１５号）を接種し、３０℃で３日間振盪培養した
。培養後、遠心分離した上澄液について、生産されたマ
ルトトリオース生成アミラーゼを測定した結果、培地１
１当り８単位であった。この上澄液５９を限外７５ｇを
加えて溶かし、５℃で一夜放置した。遠心分離して沈澱
物を得た。得られた沈澱物に少量の水を加え遠心分離し
て、上澄液を約５０ｍ１得た。これをＴＳＫ−ＧＥＬ
トヨバールＨＷ−４０Ｅのカラム（直径２．４ｃｍＸ長
さ１１０ｃｍ）に負荷し、ゲルろ過で脱塩した。活性化
区分をＤＥＡＥ−）ヨバールカラム（直径２．３ｃｍＸ
長さ２１ｃｍ）に吸着させて、０．０２Ｍ トリス・塩
酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄し、同緩衝液を含む塩化
カリウム溶液でＯ→０．５Ｍまでリニヤグラジェントに
より溶出した。このＤＥＡＥ−トヨバールクロマトグラ
フィーの活性画分を濃縮して５ｍｌにし、ＴＳＫＧＥＬ
トヨバールＨＷ６５Ｆのカラム（直径２．４ｃｍ Ｘ長
さ１１０ｃｍ）にてゲルろ過クロマトグラフィーを行い
、ディスク電気泳動的にも、ＨＰＬＣでも単一な酵素を
得ることができた。この酵素をＧ２０００ＳＷＸＬカラ
ム（ＴＯＳＯ製）を用いてＨＰＬＣで分子量を推定する
と約４０、０００であった。精製過程の液量、活性及び
回収率等を第２表に示す。
ＨＰｏ、 ０．３％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，１％、
ＣａＣ１２０，０１％を含む培地を使用し、 ミクロバ
クテリウム・エスピーＡＭ−９５８１（微工研菌寄託第
１１３１５号）を接種し、３０℃で３日間振盪培養した
。培養後、遠心分離した上澄液について、生産されたマ
ルトトリオース生成アミラーゼを測定した結果、培地１
１当り８単位であった。この上澄液５９を限外７５ｇを
加えて溶かし、５℃で一夜放置した。遠心分離して沈澱
物を得た。得られた沈澱物に少量の水を加え遠心分離し
て、上澄液を約５０ｍ１得た。これをＴＳＫ−ＧＥＬ
トヨバールＨＷ−４０Ｅのカラム（直径２．４ｃｍＸ長
さ１１０ｃｍ）に負荷し、ゲルろ過で脱塩した。活性化
区分をＤＥＡＥ−）ヨバールカラム（直径２．３ｃｍＸ
長さ２１ｃｍ）に吸着させて、０．０２Ｍ トリス・塩
酸緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄し、同緩衝液を含む塩化
カリウム溶液でＯ→０．５Ｍまでリニヤグラジェントに
より溶出した。このＤＥＡＥ−トヨバールクロマトグラ
フィーの活性画分を濃縮して５ｍｌにし、ＴＳＫＧＥＬ
トヨバールＨＷ６５Ｆのカラム（直径２．４ｃｍ Ｘ長
さ１１０ｃｍ）にてゲルろ過クロマトグラフィーを行い
、ディスク電気泳動的にも、ＨＰＬＣでも単一な酵素を
得ることができた。この酵素をＧ２０００ＳＷＸＬカラ
ム（ＴＯＳＯ製）を用いてＨＰＬＣで分子量を推定する
と約４０、０００であった。精製過程の液量、活性及び
回収率等を第２表に示す。
（以下余白）
第２表
実施例３
実施例２で得られた酵素を用いてアミロース（ＤＰ＝約
１７）、アミロペクチン、可溶性澱粉等を基質として反
応させ、分解物の糖組成をＨＰＬＣで調べた０反応条件
は基質濃度 ２．５％、酵素量２単位／ｇ基質、反応温
度５５℃、反応ｐＨ７，０（５ｍＭＣａＣ１２を含む５
ｍＭ−トリス・塩酸緩衝液）とした。
１７）、アミロペクチン、可溶性澱粉等を基質として反
応させ、分解物の糖組成をＨＰＬＣで調べた０反応条件
は基質濃度 ２．５％、酵素量２単位／ｇ基質、反応温
度５５℃、反応ｐＨ７，０（５ｍＭＣａＣ１２を含む５
ｍＭ−トリス・塩酸緩衝液）とした。
その結果、アミロースは２４時間でほぼ完全に分解され
て６４以上のオリゴ糖やリミットデキストリンはなく、
その糖組成はＧ１が５．５％、Ｇ２が２６．２％、Ｇ３
が６８．３％であり、反応時間を４８−９６時間として
もその糖組成に変化はなかった。
て６４以上のオリゴ糖やリミットデキストリンはなく、
その糖組成はＧ１が５．５％、Ｇ２が２６．２％、Ｇ３
が６８．３％であり、反応時間を４８−９６時間として
もその糖組成に変化はなかった。
アミロペクチン（トウモロコシ・シグマ製）や可溶性澱
粉（和光紬薬製）ではリミットデキストリンが残り、完
全には分解できなかった。アミロペクチンの４８時間後
の糖組成はＧ１が１．７％、Ｇ２が９．９％、Ｇ３が３
６．２％、可溶性澱粉の４８時間後の糖組成はＧ１が２
．２％、Ｇ２が１１．６％、Ｇ３が４０．８％であった
。また、これらの糖化反応のときにプルラナーゼ（人好
製薬製）を５ ｕ／ｇ添加して反応させると、２４時間
でアミロースの場合と同様にほぼ完全に基質は分解され
た。このときの糖組成はアミロペクチンではＧｌが５．
６％、Ｇ２が２６．４％、Ｇ３が６８．０％、可溶性澱
粉ではＧ１が５．３％、Ｇ２が２５．５％、Ｇ３が６９
．２％であった。
粉（和光紬薬製）ではリミットデキストリンが残り、完
全には分解できなかった。アミロペクチンの４８時間後
の糖組成はＧ１が１．７％、Ｇ２が９．９％、Ｇ３が３
６．２％、可溶性澱粉の４８時間後の糖組成はＧ１が２
．２％、Ｇ２が１１．６％、Ｇ３が４０．８％であった
。また、これらの糖化反応のときにプルラナーゼ（人好
製薬製）を５ ｕ／ｇ添加して反応させると、２４時間
でアミロースの場合と同様にほぼ完全に基質は分解され
た。このときの糖組成はアミロペクチンではＧｌが５．
６％、Ｇ２が２６．４％、Ｇ３が６８．０％、可溶性澱
粉ではＧ１が５．３％、Ｇ２が２５．５％、Ｇ３が６９
．２％であった。
この結果より、マルトトリオース生成アミラーゼはアミ
ロース、アミロペクチン、澱粉などのα−１，４−グル
コシド結合を分解するがα−１，６−グルコシド結合は
分解できない、従って、α−１，６−グルコシド結合を
分解できるプルラナーゼや枝切り酵素を添加して糖化す
れば澱粉はほぼ完全に分解されてＧ３含量が６０〜７０
％でがつりミツトデキストリンを含まない糖化液が得ら
れる。
ロース、アミロペクチン、澱粉などのα−１，４−グル
コシド結合を分解するがα−１，６−グルコシド結合は
分解できない、従って、α−１，６−グルコシド結合を
分解できるプルラナーゼや枝切り酵素を添加して糖化す
れば澱粉はほぼ完全に分解されてＧ３含量が６０〜７０
％でがつりミツトデキストリンを含まない糖化液が得ら
れる。
実施例４
ポテト澱粉をバシルス・ズブチリスのα−アミラーゼを
用いて液化した。ＤＥ４．２の液化澱粉を使用し、糖化
試験を行った。
用いて液化した。ＤＥ４．２の液化澱粉を使用し、糖化
試験を行った。
実施例１で調製したマルトトリオース生成アミラーゼを
、上記の液化澱粉に固形分当り１、２又は５単位を添加
し、 ＩＸＩ叶２ＭのＣａＣｌ２の存在下、２０％濃度
（ｗ／ｗ％）、ｐ）１７、温度５０”Ｃで反応を行った
０反応後４８時間目及び７２時間目の糖化液の糖組成を
高速液体クロマトグラフィーにより定量した結果は第３
表に示す通りであった。
、上記の液化澱粉に固形分当り１、２又は５単位を添加
し、 ＩＸＩ叶２ＭのＣａＣｌ２の存在下、２０％濃度
（ｗ／ｗ％）、ｐ）１７、温度５０”Ｃで反応を行った
０反応後４８時間目及び７２時間目の糖化液の糖組成を
高速液体クロマトグラフィーにより定量した結果は第３
表に示す通りであった。
（以下余白）
第 ３ 表
表から明らかなように、液化澱粉固形分１ｇ当り５単位
を使用したとき、糖化７２時間目において、マルトトリ
オース約５０．６％、マルトース約１４．８％、グルコ
ース約３．６％、Ｇ４およびその他の糖３１．０％を含
む糖化液が得られた。
を使用したとき、糖化７２時間目において、マルトトリ
オース約５０．６％、マルトース約１４．８％、グルコ
ース約３．６％、Ｇ４およびその他の糖３１．０％を含
む糖化液が得られた。
実施例５
ＤＥ４．２５の液化澱粉１ｇ当り５単位の酵素を用い、
実施例３と同様にして、反応温度をそれぞれ（資）。
実施例３と同様にして、反応温度をそれぞれ（資）。
５．６０℃で糖化した。得られた結果を第４表に示第４
表 第５表 表から明らかなように、５０℃よりも５５℃で反応する
方が、速くマルトトリオースを生成し、約５２％のマル
トトリオースを含む糖液を得ることができた。
表 第５表 表から明らかなように、５０℃よりも５５℃で反応する
方が、速くマルトトリオースを生成し、約５２％のマル
トトリオースを含む糖液を得ることができた。
実施例６
実施例４において、基質としてＤＥ ４．２５の液化澱
粉を、それぞれ５． １０． １５． ２０及び３０％
の濃度（ｗ／ｗ％）の下、酵素を液化澱粉固形分当り５
単位を加え、ｐＨ７、温度５０℃で７２時間糖化した。
粉を、それぞれ５． １０． １５． ２０及び３０％
の濃度（ｗ／ｗ％）の下、酵素を液化澱粉固形分当り５
単位を加え、ｐＨ７、温度５０℃で７２時間糖化した。
得られた糖組成を第５表に示す。
表から明らかなように、高い基質濃度で反応させるほど
、グルコース含量の少ない、又マルトース含量の少ない
糖化液が得られた。そして３０％のような高い基質濃度
の下でもマルトトリオース含量の高い糖化液が得られた
。
、グルコース含量の少ない、又マルトース含量の少ない
糖化液が得られた。そして３０％のような高い基質濃度
の下でもマルトトリオース含量の高い糖化液が得られた
。
実施例７
本実施例においては、本酵素による液化澱粉糖化におい
て、プルラナーゼを存在させて糖化したときの結果につ
いて示す。
て、プルラナーゼを存在させて糖化したときの結果につ
いて示す。
実施例４において、基質としてＤＥ ２．３８． ４．
２５゜５．８１． ８．０５及び１２．６の液化澱粉を
使用し、各基質濃度２０％の下、酵素を各基質１ｇ当り
５単位加え。
２５゜５．８１． ８．０５及び１２．６の液化澱粉を
使用し、各基質濃度２０％の下、酵素を各基質１ｇ当り
５単位加え。
ｐＨ７、温度５０℃で、４８時間糖化した。得られた結
果を第６表に示す。
果を第６表に示す。
第６表
マルトトリオース生成アミラーゼ１単位（基質１ｇ当り
５単位）、市販バシルス属プルラナーゼ（人好製薬製）
を基質１ｇ当り、 ■又は５単位加え、全量を水で１ｍ
ｌとし、ｐＨ７、温度５０℃で４８時間糖化した。糖化
物の糖組成を第７表に示す。
５単位）、市販バシルス属プルラナーゼ（人好製薬製）
を基質１ｇ当り、 ■又は５単位加え、全量を水で１ｍ
ｌとし、ｐＨ７、温度５０℃で４８時間糖化した。糖化
物の糖組成を第７表に示す。
第７表
表から明らかなように、ＤＥ２．３８〜１２．６の範囲
のいずれの液化澱粉を使用した場合も、約５０％の高い
含量のマルトトリオース糖液が得られた。
のいずれの液化澱粉を使用した場合も、約５０％の高い
含量のマルトトリオース糖液が得られた。
実施例７
本実施例においては、本酵素による液化澱粉糖化におい
て、プルラナーゼを存在させて糖化した結果について記
載する。
て、プルラナーゼを存在させて糖化した結果について記
載する。
実施例４で使用したＤＥ ４．２５の液化澱粉各２０
０■、プルラナーゼを存在させると糖化反応が促進され
、表から明らかなように、プルラナーゼを澱粉１ｇ当り
５単位添加したとき、無添加に比べ約１２％高い、マル
トトリオース含量が６３％の糖化液が得られた。
０■、プルラナーゼを存在させると糖化反応が促進され
、表から明らかなように、プルラナーゼを澱粉１ｇ当り
５単位添加したとき、無添加に比べ約１２％高い、マル
トトリオース含量が６３％の糖化液が得られた。
なお、プルラナーゼ活性は、 １％プルランの下、ｐＨ
５，０、温度４０℃で反応を行い、 １分間に１マイク
ロモルのグルコースに相当する還元力を生成する酵素を
１単位とした。
５，０、温度４０℃で反応を行い、 １分間に１マイク
ロモルのグルコースに相当する還元力を生成する酵素を
１単位とした。
第１図、第２図、第３図及び第４図は、各々本発明のマ
ルトトリオース生成アミラーゼの至適ｐＨ１至適温度、
熱安定性及び［）Ｈ安定性を示すものである。尚、第３
図において、−・−はＣａＣｌ２存在下での安定性を示
すものである。
ルトトリオース生成アミラーゼの至適ｐＨ１至適温度、
熱安定性及び［）Ｈ安定性を示すものである。尚、第３
図において、−・−はＣａＣｌ２存在下での安定性を示
すものである。
Claims (4)
- （１）下記の理化学的性質を有するマルトトリオース生
成アミラーゼ。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。 - （２）ミクロバクテリウム属に属し、マルトトリオース
生成アミラーゼを生産する微生物を培養し、マルトトリ
オース生成アミラーゼを産生せしめ、これを採取するこ
と特徴とするマルトトリオース生成アミラーゼの製造法
。 - （３）澱粉又はその派生物に下記の理化学的性質を有す
るマルトトリオース生成アミラーゼを作用せしめ、得ら
れるマルトトリオース含有糖液を採取することを特徴と
するマルトトリオース含有糖液の製造法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。 - （４）澱粉又はその派生物に少なくとも下記の理化学的
性質を有するマルトトリオース生成アミラーゼおよび枝
切り酵素を作用せしめ、得られるマルトトリオース含有
糖液を採取することを特徴とするマルトトリオース含有
糖液の製造法。 （ａ）作用 澱粉に作用して、主にマルトトリオースを生成する。 （ｂ）基質特異性 アミロース、アミロペクチン、グリコーゲンおよび澱粉
に作用し、プルランには実質的に作用しない。 （ｃ）至適ｐＨ ４０℃、３０分反応でｐＨ６．５付近 （ｄ）至適温度 ｐＨ７．０、３０分反応で５０℃付近 （ｅ）熱安定性 ｐＨ７．０、１０分間で、４０℃付近まで、但しカルシ
ウムイオンの存在下では、５０℃で９０％の活性が残存
する。 （ｆ）ｐＨ安定性 ２５℃、３時間でｐＨ６乃至９付近 （ｇ）安定・阻害 カルシウムイオンで熱安定性が向上する。 マンガンイオン、銅イオン、水銀イオン、鉄イオン、亜
鉛イオン及びアルミニウムイオンで実質的に阻害される
。 （ｈ）分子量 ゲルろ過法により、約４０，０００。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2048907A JP2964042B2 (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2048907A JP2964042B2 (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03251173A true JPH03251173A (ja) | 1991-11-08 |
| JP2964042B2 JP2964042B2 (ja) | 1999-10-18 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2048907A Expired - Fee Related JP2964042B2 (ja) | 1990-02-28 | 1990-02-28 | マルトトリオース生成アミラーゼ、その製造法および用途 |
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|---|---|
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Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557637A3 (en) * | 1992-02-28 | 1994-11-02 | Japan Res Dev Corp | Pullulanase, methods of producing pullulanase and methods of saccharification of starch using pullulanase |
| EP0686348A1 (en) | 1994-05-30 | 1995-12-13 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Bread quality-improving composition and bread producing process using the same |
| WO2020145371A1 (ja) * | 2019-01-10 | 2020-07-16 | 味の素株式会社 | デンプン含有食品の製造方法 |
| JP2022541526A (ja) * | 2019-07-16 | 2022-09-26 | ダニスコ・ユーエス・インク | イソマルト－オリゴ糖を生成するための改良された方法 |
| WO2023095840A1 (ja) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | 天野エンザイム株式会社 | 植物性飲食品の製造方法、及び糖類低減用酵素剤 |
| WO2023249041A1 (ja) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | 天野エンザイム株式会社 | 保形性向上用酵素剤 |
| WO2024004848A1 (ja) * | 2022-06-28 | 2024-01-04 | 天野エンザイム株式会社 | 植物性飲食品の糖類低減用酵素剤 |
-
1990
- 1990-02-28 JP JP2048907A patent/JP2964042B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557637A3 (en) * | 1992-02-28 | 1994-11-02 | Japan Res Dev Corp | Pullulanase, methods of producing pullulanase and methods of saccharification of starch using pullulanase |
| EP0686348A1 (en) | 1994-05-30 | 1995-12-13 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Bread quality-improving composition and bread producing process using the same |
| WO2020145371A1 (ja) * | 2019-01-10 | 2020-07-16 | 味の素株式会社 | デンプン含有食品の製造方法 |
| JPWO2020145371A1 (ja) * | 2019-01-10 | 2021-11-25 | 味の素株式会社 | デンプン含有食品の製造方法 |
| JP2022541526A (ja) * | 2019-07-16 | 2022-09-26 | ダニスコ・ユーエス・インク | イソマルト－オリゴ糖を生成するための改良された方法 |
| WO2023095840A1 (ja) | 2021-11-25 | 2023-06-01 | 天野エンザイム株式会社 | 植物性飲食品の製造方法、及び糖類低減用酵素剤 |
| WO2023249041A1 (ja) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | 天野エンザイム株式会社 | 保形性向上用酵素剤 |
| WO2024004848A1 (ja) * | 2022-06-28 | 2024-01-04 | 天野エンザイム株式会社 | 植物性飲食品の糖類低減用酵素剤 |
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