JPS59187792A - 酵素法リン脂質糖類誘導体の製法 - Google Patents
酵素法リン脂質糖類誘導体の製法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明１７１、酵素法ｆ／Ｃよるリン脂質糖類誘導体の
製法に関し、従来酵素法１′（よって製造できないとさ
れていたリン脂質糖類誘導体を包含して広いＪ旬囲のリ
ン脂質糖類誘導体の製造を可能とした酵素法リン脂質糖
＠誘導体の製法に関する。更て詳しくは、従来酵素法で
使用されたキャベツ由来のホスホリパーゼＤ（至適温度
４０℃以下、至適７＋ １１５．４〜５．６）とけ異な
って、至適温度６０〜７０℃、至適７ｙＨｑ付近のホス
ホリ・ξ−ゼＤＭの存在下で、リン脂ノはと劇類もしく
けそのフェノール配糖体とを反応させるリン脂質糖類誘
導体の製法に関するっ 尚、本発明Ｖｃ於て、リン脂質糖類誘導体と娃゛、出発
物質であるリン脂質のリン酸構造部分とアルコール構造
部分とのエステル結合を、ホスホリパ−ゼＤＭの作用で
加水分解すると同時ンこ、−Ｆ記反応に用いる糖ａｌｌ
しくけそのフェノール配糖１転移させて誘導した、出発
物質とけ異なる新しいリン脂質を意味する。
製法に関し、従来酵素法１′（よって製造できないとさ
れていたリン脂質糖類誘導体を包含して広いＪ旬囲のリ
ン脂質糖類誘導体の製造を可能とした酵素法リン脂質糖
＠誘導体の製法に関する。更て詳しくは、従来酵素法で
使用されたキャベツ由来のホスホリパーゼＤ（至適温度
４０℃以下、至適７＋ １１５．４〜５．６）とけ異な
って、至適温度６０〜７０℃、至適７ｙＨｑ付近のホス
ホリ・ξ−ゼＤＭの存在下で、リン脂ノはと劇類もしく
けそのフェノール配糖体とを反応させるリン脂質糖類誘
導体の製法に関するっ 尚、本発明Ｖｃ於て、リン脂質糖類誘導体と娃゛、出発
物質であるリン脂質のリン酸構造部分とアルコール構造
部分とのエステル結合を、ホスホリパ−ゼＤＭの作用で
加水分解すると同時ンこ、−Ｆ記反応に用いる糖ａｌｌ
しくけそのフェノール配糖１転移させて誘導した、出発
物質とけ異なる新しいリン脂質を意味する。
特に、本発明は、下記式（１）
％式％（）
但し式中、
ＡＶｉＣ１ｉ２−Ｒ。
誓
ＣＢ−Ｒ２（１）
ＣＨ２−
を示ｌ〜、ここで、Ｒ２及びＲ２に共に−０−ＣＯＲ，
、であるか、もしくけ共に一〇−Ｒ，２であるか、もし
くに式（１）において８１ とこで、ｎけ１１〜１９
の数を示す〕７表わし、上記に於て、／＜、、及び砺、
は同一でも異っていてもよく、夫々、Ｃ７〜Ｃ２，の飽
和もしくけ不飽和の直鎖脂１’ｌｊ族炭化水＃基を示し
、Ｂ ［−（Ｃｌ１２）２Ｎ （Ｃ’＃３１３、− （
ＣＨ２）２ＮＨ２、−ＣＩＪ２ＣＨ（ＮＨ２） Ｃ００
１１、−ＣＩ−１２Ｃ１１２ＮＨ（Ｃｌ−１，）、Ｃｌ
ノｔｃＨ２Ｎ（ＣＨ３）２ 、 Ｃ／１２ｃＨＯＩｉ
ｃＨｚＯＨ（、しくは−（Ｃ１１２） ｔｎ、Ｉｉ に
こで、？？Ｌｉ’ｔｌ 〜５ノ数を示す〕を示す、 で表わされるリン脂質と、 少なくとも１ケの一級アルコール基を含み、且つ全体で
（−級アルコール基のＯＲを包含する）３ケの水酸基を
有する炭紫数５〜７の単糖類及び二糖司から選ばれた糖
仰、ここで該、糖類はアミノ基もしくはアセチルアミノ
基で首途されていてもよい、又はこれら糖類のフェノー
ル配糖体とを、ホスホリ、ぞ−ゼＤＡＩの存在下に反応
させることを ５− 特徴とするリン脂質糖類誘導体の製法に関する。
、であるか、もしくけ共に一〇−Ｒ，２であるか、もし
くに式（１）において８１ とこで、ｎけ１１〜１９
の数を示す〕７表わし、上記に於て、／＜、、及び砺、
は同一でも異っていてもよく、夫々、Ｃ７〜Ｃ２，の飽
和もしくけ不飽和の直鎖脂１’ｌｊ族炭化水＃基を示し
、Ｂ ［−（Ｃｌ１２）２Ｎ （Ｃ’＃３１３、− （
ＣＨ２）２ＮＨ２、−ＣＩＪ２ＣＨ（ＮＨ２） Ｃ００
１１、−ＣＩ−１２Ｃ１１２ＮＨ（Ｃｌ−１，）、Ｃｌ
ノｔｃＨ２Ｎ（ＣＨ３）２ 、 Ｃ／１２ｃＨＯＩｉ
ｃＨｚＯＨ（、しくは−（Ｃ１１２） ｔｎ、Ｉｉ に
こで、？？Ｌｉ’ｔｌ 〜５ノ数を示す〕を示す、 で表わされるリン脂質と、 少なくとも１ケの一級アルコール基を含み、且つ全体で
（−級アルコール基のＯＲを包含する）３ケの水酸基を
有する炭紫数５〜７の単糖類及び二糖司から選ばれた糖
仰、ここで該、糖類はアミノ基もしくはアセチルアミノ
基で首途されていてもよい、又はこれら糖類のフェノー
ル配糖体とを、ホスホリ、ぞ−ゼＤＡＩの存在下に反応
させることを ５− 特徴とするリン脂質糖類誘導体の製法に関する。
従来、ホスホリ・ぞ−ゼＤが、リン脂質たと才はホスフ
ァチツルコリンのコリン塩基−リン酸エステルを加水分
解し、遊＃塩基とホスファチジン酸を生ずる反応を触媒
することが知られている〔Ｍ。
ァチツルコリンのコリン塩基−リン酸エステルを加水分
解し、遊＃塩基とホスファチジン酸を生ずる反応を触媒
することが知られている〔Ｍ。
Ｋａｔｅｓ Ｃａｎ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈａｍ、 ｐｈｙ
ｓｉｏｌ ３２５７１ （１９５４）］。
ｓｉｏｌ ３２５７１ （１９５４）］。
唄に、リン脂質たとえばＩ／シチンとエチルアルコール
とをホスホリパーゼ°Ｄの存在下に反応させると、リン
脂質のリン酸構造部分と４−ｉ ’Ｊン脂質のアルコー
ル構造部分とのエステル結合が加水分解されると同時に
ホスファチヅル基転移作用により、ホスファチツルエタ
ノールを生成することが報告されティる［ Ｄｒｔｒｂ
ｓｓｏｎ、 ； Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｔ、、 １０２．２
０５（１９６５）Ｅ：〔Ｙａｎｇ；Ｊ、Ｂｉｏｌ。
とをホスホリパーゼ°Ｄの存在下に反応させると、リン
脂質のリン酸構造部分と４−ｉ ’Ｊン脂質のアルコー
ル構造部分とのエステル結合が加水分解されると同時に
ホスファチヅル基転移作用により、ホスファチツルエタ
ノールを生成することが報告されティる［ Ｄｒｔｒｂ
ｓｓｏｎ、 ； Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｔ、、 １０２．２
０５（１９６５）Ｅ：〔Ｙａｎｇ；Ｊ、Ｂｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ、、、 ２４２．４７７（１９８７）’］。
上述のようなホスホリパーゼＤのボスファチジ ６−
ル基転移作用が知られて以来、この分野における研″Ｊ
ヒがｉ、ｆへめられ、英国特許扁１，５８１，８１０（
対応面ドイット１公開／Ｆ６２７１７５４７ ）の提案
が知られている。
ヒがｉ、ｆへめられ、英国特許扁１，５８１，８１０（
対応面ドイット１公開／Ｆ６２７１７５４７ ）の提案
が知られている。
この提案によ？Ｌけ、この提案の一般式で示されたリン
脂質と、水ｒ唆基、ハロケ°ン、アミノその他のＷ４’
、４基で置換されていてもよいＣ３才での直鎖もしく（
・ま分枝のアルキル基を有する一層アルコールとの前１
）１４キヤベツ由来のホスホリパーゼＤの１孝累作用全
利用した一層アルコール転移反応ｖｃついで開示さ；ｔ
−１でいる。−ｔ−シて、該反応は、５を・昭えイ）炭
素１１ｊ子を含有しない−Ｊ゛γルコールでのみ起り、
若Ｌ２．５を招える炭素原子を含′有する一１クアルコ
ールの場＊ ＶＣ（弓、反応の主生成物（（１対応する
ホスファチジンＶ″１！２でＪｌちろど記載さＪｌでい
る。町（Ｉこ、該提案ＶＣＩｒ；１”アルコール成分の
択択な、上記の帝求を／ｌ！〜しブこ−ｉｂψアルコー
ルで・５る苧木右限りとくべつな制約のないことも記載
されている。萌偵イ、シくけそのフェノール配備体につ
いて汀、勿倫、全く記載も示Ｖ？もされていない。
脂質と、水ｒ唆基、ハロケ°ン、アミノその他のＷ４’
、４基で置換されていてもよいＣ３才での直鎖もしく（
・ま分枝のアルキル基を有する一層アルコールとの前１
）１４キヤベツ由来のホスホリパーゼＤの１孝累作用全
利用した一層アルコール転移反応ｖｃついで開示さ；ｔ
−１でいる。−ｔ−シて、該反応は、５を・昭えイ）炭
素１１ｊ子を含有しない−Ｊ゛γルコールでのみ起り、
若Ｌ２．５を招える炭素原子を含′有する一１クアルコ
ールの場＊ ＶＣ（弓、反応の主生成物（（１対応する
ホスファチジンＶ″１！２でＪｌちろど記載さＪｌでい
る。町（Ｉこ、該提案ＶＣＩｒ；１”アルコール成分の
択択な、上記の帝求を／ｌ！〜しブこ−ｉｂψアルコー
ルで・５る苧木右限りとくべつな制約のないことも記載
されている。萌偵イ、シくけそのフェノール配備体につ
いて汀、勿倫、全く記載も示Ｖ？もされていない。
更に、Ｒ，ＡＩ、 ＤａｗｓｏｔＸｄ、リン脂質として
レシチン基質い、糖類として、シュクロース、グルコー
ス及びガラクトースを夫々用い、キャＲツ由来の公知ホ
スホリ・ぐ−ゼＤＶｃ、Ｉ１．る実１検の結果、レシチ
ン基質のホスファチジル基のこれら糖類への転移は起ら
なかったことを報告している［ Ｂ １ｏｃｈｓｒｎ、
。
レシチン基質い、糖類として、シュクロース、グルコー
ス及びガラクトースを夫々用い、キャＲツ由来の公知ホ
スホリ・ぐ−ゼＤＶｃ、Ｉ１．る実１検の結果、レシチ
ン基質のホスファチジル基のこれら糖類への転移は起ら
なかったことを報告している［ Ｂ １ｏｃｈｓｒｎ、
。
−１，、シＱｌ、１ｔ１２．２０５〜２０９ （１９６
７）］。
７）］。
ν、Ｓ、Ｆ、 Ｙａｎｇに−、グルコース及びイノシト
ールを用いて−ｈＡｆと同様な実輪の結果、糖類への転
、４け・ｌ’Ｔ３らなかったことを報告（７ているＣＪ
。
ールを用いて−ｈＡｆと同様な実輪の結果、糖類への転
、４け・ｌ’Ｔ３らなかったことを報告（７ているＣＪ
。
Ｂ１ｎ１．Ｃｈ１？＋）７．、マＪｏ１．２４２．４７
７−４８４＋１９６７）］。
７−４８４＋１９６７）］。
一ヒ述の、１：う（（、従来ホスホリンぐ−ゼＤＶこよ
るリン１）行商とアルコールとの間の転移反応は、−級
アルコールとくンこ炭素原子数の比較的小さな一層アル
コールの冑５合ＶＣシか生起せず、糖′＋ｖ８どの間′
ｆ、は生じないというのが技術常識であった。
るリン１）行商とアルコールとの間の転移反応は、−級
アルコールとくンこ炭素原子数の比較的小さな一層アル
コールの冑５合ＶＣシか生起せず、糖′＋ｖ８どの間′
ｆ、は生じないというのが技術常識であった。
本発明者等に、従来公知のホスホリ・９−ゼＤとに、そ
の至適温厖、至適ｐ Ｈ等で異なるホスホリパーゼＤ生
産能を有する微生物の存在を発見して、既ンＣ１特１会
彊ｊフイ５６− ］、 ６１０７６号、特鴫昭５６−１
６３４７５月に提案した。
の至適温厖、至適ｐ Ｈ等で異なるホスホリパーゼＤ生
産能を有する微生物の存在を発見して、既ンＣ１特１会
彊ｊフイ５６− ］、 ６１０７６号、特鴫昭５６−１
６３４７５月に提案した。
２ｉこ、研究を進めた結果、該ホスホリ・ぐ−ゼ生産性
微生物の生産する酵老け、従来、リン脂質糖類誘導体げ
形成できないとなされていたにも拘わらず、広いハＩｌ
）囲のリンＩＩｗ質と糖類もしくはそのフェノール配糖
体間の転移反応を可能とする酵素的触媒作用を示すとい
う驚くべき事実を発見した。
微生物の生産する酵老け、従来、リン脂質糖類誘導体げ
形成できないとなされていたにも拘わらず、広いハＩｌ
）囲のリンＩＩｗ質と糖類もしくはそのフェノール配糖
体間の転移反応を可能とする酵素的触媒作用を示すとい
う驚くべき事実を発見した。
本発明者等の研究によれば、リン脂質とたとえばフラク
トースとの間νこおけるリン脂質糖類誘導体の形成を触
媒する本発明に於て新たにホスホリ ９− パーゼＩ）Ｍと呼称する酵素が存在し、このホスホリパ
ーゼＩ） Ｍの存在下１／（、前記式（１）で表わされ
るリン脂Ｊｔｑと前記の糖九〇もしくけそのフェノール
配糖体とを反応させることＫより、従来制令できないと
云われたリン脂質糖＠誘導体を包含して新しい誘導体が
岬造できることが発見さ′Ｉ′Ｌだ。
トースとの間νこおけるリン脂質糖類誘導体の形成を触
媒する本発明に於て新たにホスホリ ９− パーゼＩ）Ｍと呼称する酵素が存在し、このホスホリパ
ーゼＩ） Ｍの存在下１／（、前記式（１）で表わされ
るリン脂Ｊｔｑと前記の糖九〇もしくけそのフェノール
配糖体とを反応させることＫより、従来制令できないと
云われたリン脂質糖＠誘導体を包含して新しい誘導体が
岬造できることが発見さ′Ｉ′Ｌだ。
斯くて、煩雑１つ不利益な化学的合成千トνを要するこ
となしＶＣ，温和賢つ容粘な条件及び手段で、副反応を
１弔うおそれもなしＶＣ１酵素法ＶＣよって新しいリン
脂質糖＠誘導体を好収率で輿造できることがわかった。
となしＶＣ，温和賢つ容粘な条件及び手段で、副反応を
１弔うおそれもなしＶＣ１酵素法ＶＣよって新しいリン
脂質糖＠誘導体を好収率で輿造できることがわかった。
従って、本発明の目的に新しい酵素法リン脂質誘導体の
調法を提供するにある。
調法を提供するにある。
本発明の上記目的及び更に多くの仙１の目的ならびに利
点は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。
点は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。
本凭明方法で利用する原料リン脂質は下記式％式％
（■）で表わされる。
０
１
Ａ−０−Ｐ−０−Ｂ Ｎ）１１
但し式中、
Ａは ＣＨ２−Ｒ。
ＣＨ−Ｒ２（１）
■
ＣＩＩ 、、 −
を示し、ここで、ｌ？１及びＲ３は共に−０−ＣＯＲ目
であるか、もしくは共に一〇−Ｒ，２であるか、もしく
は式（１）ンこおいてＲｏと〔ここで、η、は１１〜１
９の数を示す〕を表わし、上記Ｖこ於て、Ｉハ、及び１
７４．は朋−でも異っていても」：く、夫々、Ｃ７〜Ｃ
２＋の飽和もしくは不飽第１１の脂Ｕ５族炭イヒ水素基
を示し、Ｂ １ｊ−（Ｃ１ｆ、 ） ２ Ｎ （Ｕｌｆ
ｓｌ ３、− （Ｃｌ１２） ２Ｎｆｉ２、−ＣＤ２Ｃ
Ｈ（Ｎｌ１２） Ｃ００Ｉｉ、 −Ｃ１１２ＣＨ２ＮＨ
（Ｃ１−１３）、−Ｃｔ１２Ｃ１１２Ｎ （ＣＨ３）
、、 、−ＣＨ２ＣＨＯＩ−ＩＣＨ２０１Ｊもしくけ−
（ＣＨ２） ｍＨ［ここで、ｍ、は１〜５の数を示す〕
を示す。
であるか、もしくは共に一〇−Ｒ，２であるか、もしく
は式（１）ンこおいてＲｏと〔ここで、η、は１１〜１
９の数を示す〕を表わし、上記Ｖこ於て、Ｉハ、及び１
７４．は朋−でも異っていても」：く、夫々、Ｃ７〜Ｃ
２＋の飽和もしくは不飽第１１の脂Ｕ５族炭イヒ水素基
を示し、Ｂ １ｊ−（Ｃ１ｆ、 ） ２ Ｎ （Ｕｌｆ
ｓｌ ３、− （Ｃｌ１２） ２Ｎｆｉ２、−ＣＤ２Ｃ
Ｈ（Ｎｌ１２） Ｃ００Ｉｉ、 −Ｃ１１２ＣＨ２ＮＨ
（Ｃ１−１３）、−Ｃｔ１２Ｃ１１２Ｎ （ＣＨ３）
、、 、−ＣＨ２ＣＨＯＩ−ＩＣＨ２０１Ｊもしくけ−
（ＣＨ２） ｍＨ［ここで、ｍ、は１〜５の数を示す〕
を示す。
上記式（１）原料リン脂質は公知化合物であって、市場
でも入手可能であり、それ自体公知の方法ＶＣＸつて天
然物より抽出採取又は合成することができる。例えば、
動植物組織から公知の手段で抽出して得られるレシチン
、ケファリン、ホスファチツルセリン、ホスファチツル
ーＮ−メチルエタノールアミン、ホスファチジルグリセ
ロール、ホスファチツルーＮ、Ｎ−ツメチルエタノール
アミン、ホスファチヅン酸アルギルエステル等の単独Ｗ
るいは混合物をそのまま若しくけ精製して用いることが
できるし、β九すノン月旨質やアルキルエ−テル 法によってその構造の一部もしくは全部を化学合成して
利用することができる。
でも入手可能であり、それ自体公知の方法ＶＣＸつて天
然物より抽出採取又は合成することができる。例えば、
動植物組織から公知の手段で抽出して得られるレシチン
、ケファリン、ホスファチツルセリン、ホスファチツル
ーＮ−メチルエタノールアミン、ホスファチジルグリセ
ロール、ホスファチツルーＮ、Ｎ−ツメチルエタノール
アミン、ホスファチヅン酸アルギルエステル等の単独Ｗ
るいは混合物をそのまま若しくけ精製して用いることが
できるし、β九すノン月旨質やアルキルエ−テル 法によってその構造の一部もしくは全部を化学合成して
利用することができる。
本発明方法に於て、上−１己式（■）原料リン脂質とホ
スホリＡ−ゼＤＭの存在下Ｖこ反応せしめる糖類もしく
けそのフェノール配糖体は、少なくとも１ケの一部アル
コール基を含み、且つ全体で３ケ以上の水酸基を有する
炭宏数５〜７の単糖類及び三糖類からｆばれた糖類、こ
こで該糖類はアミン基もしくにアセチルアミノ基で置換
されていてもよい、又はこれら糖類のフェノール配糖体
である。
スホリＡ−ゼＤＭの存在下Ｖこ反応せしめる糖類もしく
けそのフェノール配糖体は、少なくとも１ケの一部アル
コール基を含み、且つ全体で３ケ以上の水酸基を有する
炭宏数５〜７の単糖類及び三糖類からｆばれた糖類、こ
こで該糖類はアミン基もしくにアセチルアミノ基で置換
されていてもよい、又はこれら糖類のフェノール配糖体
である。
このような糖類もしくはそのフェノール配糖体の具体例
としては、以下の如き糖類φ、しくにそのフェノール醗
糖体を例示することができる。
としては、以下の如き糖類φ、しくにそのフェノール醗
糖体を例示することができる。
すなわち、ペントースとして１−ｊ、Ｄ及びＬ−アラビ
ノース、ローリピース、２−デオキシ−Ｄ−リヒース、
Ｄ−ＩＪキソース、Ｄ−キシロース、Ｄ及びＬ−＋）−
ｊロース、Ｄ及’ｌＪＬ−キシルロースニー １ ３
− ヘキソースとしては、λーデオキシーＤーグルコース、
Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、
Ｌ−ツルがース、Ｄ−タロース、Ｄ−フラクトース；ヘ
ベトースとして汀、Ｄ−α−グルコヘプトース、セドヘ
プツロースなど全例示でき、１だ、アミン糖として一部
、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−マンノ
サミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセ
チル−Ｄ−１−ルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノ
サミンなどを例示でき、更に、フェノール配糖体として
は、サリシン、アルブチンなどが例示でき、又ｔ＜に、
三糖類としてはサッカロース、マルトース、セロビオー
ス、ｒンチビオース、ラクトース、Ｎ，Ｎ′−ソアセチ
ルキトビオースなどがあげられる。
ノース、ローリピース、２−デオキシ−Ｄ−リヒース、
Ｄ−ＩＪキソース、Ｄ−キシロース、Ｄ及びＬ−＋）−
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− ヘキソースとしては、λーデオキシーＤーグルコース、
Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、
Ｌ−ツルがース、Ｄ−タロース、Ｄ−フラクトース；ヘ
ベトースとして汀、Ｄ−α−グルコヘプトース、セドヘ
プツロースなど全例示でき、１だ、アミン糖として一部
、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−マンノ
サミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセ
チル−Ｄ−１−ルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノ
サミンなどを例示でき、更に、フェノール配糖体として
は、サリシン、アルブチンなどが例示でき、又ｔ＜に、
三糖類としてはサッカロース、マルトース、セロビオー
ス、ｒンチビオース、ラクトース、Ｎ，Ｎ′−ソアセチ
ルキトビオースなどがあげられる。
上記例示の如き糖類もしくけそのフェノール配糖体は、
天然・吻、合成品のいずれでも利用できる− １ ４
− が、１」的とするＬ″Ｊ、外の糖類もしくはそのフェノ
ール配糖体を含丑ないようＶＣ予め適当な公知手段を利
中して精製して利用するのが舛せしい。このような棺製
手ｊスジ′の例として汀、たとえば、セルロース、シリ
カケ゛ル、アルミナ、活性炭その他各種イオン交換、明
脂を用いるカラムクロマトグラフィー、セファデックス
などＫ Ｊ二るグル濾過法及びこれらの適当な絹み合わ
せ精煙手段をｌ＋ｉ示でさる。
天然・吻、合成品のいずれでも利用できる− １ ４
− が、１」的とするＬ″Ｊ、外の糖類もしくはそのフェノ
ール配糖体を含丑ないようＶＣ予め適当な公知手段を利
中して精製して利用するのが舛せしい。このような棺製
手ｊスジ′の例として汀、たとえば、セルロース、シリ
カケ゛ル、アルミナ、活性炭その他各種イオン交換、明
脂を用いるカラムクロマトグラフィー、セファデックス
などＫ Ｊ二るグル濾過法及びこれらの適当な絹み合わ
せ精煙手段をｌ＋ｉ示でさる。
本発明方法Ｖこよれば、前記例示の如き式（１）リン脂
質と上記例示の如き糖→・自もしくはそのフェノール配
糖体とをホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させる。
質と上記例示の如き糖→・自もしくはそのフェノール配
糖体とをホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させる。
このＩ祭利用するホスホリパーゼＤＭとしては、従来公
知のキャベツ由来のホスホリパーゼＤの至適温度４０℃
以下、至適ｐ ８５．４〜５．６に対して、全適温ＩＷ
６０〜７０℃、至適ｐＩｉ ７付近である点で公知ホス
ホリノソ−ゼＤと区別できるホスホリ／ぐ一ゼＤＭ生産
前の生産するホスホリパーゼＤＭが例示できる。該ホス
ホリ・神ゼＤＡｆは、ゝ’ｙクトースと式（Ｎリン脂質
レシチンとの１ｆＪ１におけるリン脂質糖＠訪導体の形
成を触媒する点でも公知ホスホリ・ぐ−ゼＤと区別で轡
る。
知のキャベツ由来のホスホリパーゼＤの至適温度４０℃
以下、至適ｐ ８５．４〜５．６に対して、全適温ＩＷ
６０〜７０℃、至適ｐＩｉ ７付近である点で公知ホス
ホリノソ−ゼＤと区別できるホスホリ／ぐ一ゼＤＭ生産
前の生産するホスホリパーゼＤＭが例示できる。該ホス
ホリ・神ゼＤＡｆは、ゝ’ｙクトースと式（Ｎリン脂質
レシチンとの１ｆＪ１におけるリン脂質糖＠訪導体の形
成を触媒する点でも公知ホスホリ・ぐ−ゼＤと区別で轡
る。
このよう々ホスホリパーゼＤＭ生産菌の例としてＣま、
同−出１９１人の帛＠に係わる特、願昭５６−１６１０
７６号ＶｃｒＢｉ−１示されたノカルディオプシス（Ｎ
ｏｃａｒｄｉｏ７）８ｉ８ ） Ｉ＜Ｉ／ＣＦ＠するホ
スホリパーゼＤＭ生産菌たとえばノルカデイオプシス聞
Ｎ０７７９イ朱〔ＦＥＲＭ−Ｐ盃６１３３ ］、同一出
願人の出Ｑ７１’ｌ Ｋ係わル特１１！ｌ’ｊｒｌ（４
５６−１６３４７５−１１ｃ開示されたアクチノマデュ
ーラ（Ａ ｃ ｔ ｉｎｏ ｍａｄｕｒａ ｌ属にくす
るホスホリ・ぐ−ゼＤＭ生産菌たとえばアクチノマデュ
ーラ用ＮＯ３６９株〔ＦＥＲＭ−ＰＡ、 ６１３２ ）
等を挙げることができる。至適温度人び至適７） １１
の相礁と共ＶＣ他のいくつかの相違点と共Ｖこ、下８帥
１１表Ｖこ、不発明方法で利用するホスホリ・ぐ−ゼＤ
Ｍと公知ホス十り・ぐ−ゼＤとの酵素学的性質の屓異を
示した。
同−出１９１人の帛＠に係わる特、願昭５６−１６１０
７６号ＶｃｒＢｉ−１示されたノカルディオプシス（Ｎ
ｏｃａｒｄｉｏ７）８ｉ８ ） Ｉ＜Ｉ／ＣＦ＠するホ
スホリパーゼＤＭ生産菌たとえばノルカデイオプシス聞
Ｎ０７７９イ朱〔ＦＥＲＭ−Ｐ盃６１３３ ］、同一出
願人の出Ｑ７１’ｌ Ｋ係わル特１１！ｌ’ｊｒｌ（４
５６−１６３４７５−１１ｃ開示されたアクチノマデュ
ーラ（Ａ ｃ ｔ ｉｎｏ ｍａｄｕｒａ ｌ属にくす
るホスホリ・ぐ−ゼＤＭ生産菌たとえばアクチノマデュ
ーラ用ＮＯ３６９株〔ＦＥＲＭ−ＰＡ、 ６１３２ ）
等を挙げることができる。至適温度人び至適７） １１
の相礁と共ＶＣ他のいくつかの相違点と共Ｖこ、下８帥
１１表Ｖこ、不発明方法で利用するホスホリ・ぐ−ゼＤ
Ｍと公知ホス十り・ぐ−ゼＤとの酵素学的性質の屓異を
示した。
−１７−
− １８ −
公知ホスホリンぐ一ゼＤを用いてけイゼられなかったリ
ン脂質糖類誘導体が、本発明方法で形成できる理由ＶＣ
は、この酵素的触媒反応に関与する公知ホスホリ・、ｐ
−ゼＤと不発、明方法で用いるホスホリ・ぐ−ゼＤＭと
の旧制の如き酵素学的性質の差異が関与しているものと
推測される。勿論、本発明方法は、このような作用の推
測Ｖ′ｃよって何等の制約もうけるものではない。
ン脂質糖類誘導体が、本発明方法で形成できる理由ＶＣ
は、この酵素的触媒反応に関与する公知ホスホリ・、ｐ
−ゼＤと不発、明方法で用いるホスホリ・ぐ−ゼＤＭと
の旧制の如き酵素学的性質の差異が関与しているものと
推測される。勿論、本発明方法は、このような作用の推
測Ｖ′ｃよって何等の制約もうけるものではない。
−１９一
本発明方法で利用できるホスホリパーゼ１−）Ｍを生産
する前記ホスホリパーゼＩ）Ｍ生産［省メカルデイオプ
シス属Ｎ０７７９株［Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎ ０．６１
３３１及びアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株［ＦＥＲ
Ｍ−ｆ二’ＮＯ，６１３２］の菌学的性状及びそＦＬら
が生産するホスホリパーゼＤ Ｍの力価測定法、理化学
的性質について以Ｆに述べる。
する前記ホスホリパーゼＩ）Ｍ生産［省メカルデイオプ
シス属Ｎ０７７９株［Ｆ Ｅ ＲＭ−Ｐ Ｎ ０．６１
３３１及びアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株［ＦＥＲ
Ｍ−ｆ二’ＮＯ，６１３２］の菌学的性状及びそＦＬら
が生産するホスホリパーゼＤ Ｍの力価測定法、理化学
的性質について以Ｆに述べる。
７カルデイオプシス属ＮＣ’）７７９株１ＦＦ：ＲＭ−
ＰＮｏ、６１．３］の菌学的性状ニー （ａ）形態 グルコースアスパラギン寒天、グリセリンアスパラキ゛
ン寒天、酵母麦芽寒天培地等では良好に、また澱粉無機
塩培地では中程度に生育して気菌糸の集落を着生する。
ＰＮｏ、６１．３］の菌学的性状ニー （ａ）形態 グルコースアスパラギン寒天、グリセリンアスパラキ゛
ン寒天、酵母麦芽寒天培地等では良好に、また澱粉無機
塩培地では中程度に生育して気菌糸の集落を着生する。
胞子を着生した菌叢の色は培地の種類、観察時期により
若−Ｅ変化するか、おおむね白色ないし灰白色から明る
い灰色を呈する。
若−Ｅ変化するか、おおむね白色ないし灰白色から明る
い灰色を呈する。
シュークロース硝酸塩寒天、栄養寒天、オートミール寒
天培地では気菌糸を着生しないが、貧弱２０− にしか着生しない。
天培地では気菌糸を着生しないが、貧弱２０− にしか着生しない。
寒天培地トに生付させた本菌株を顕微鏡で観察すると、
気菌糸は０．５〜０．８μで１ｆて線状でゆるく波形又
は屈曲を混じえながら分枝をもって長く伸び、×菌糸全
体は数１０から１ｏ ＋）ケ）υ、上のすべて胞子から
なる連鎖によって形成されている。
気菌糸は０．５〜０．８μで１ｆて線状でゆるく波形又
は屈曲を混じえながら分枝をもって長く伸び、×菌糸全
体は数１０から１ｏ ＋）ケ）υ、上のすべて胞子から
なる連鎖によって形成されている。
胞子の太ぎさは（’１．５−１）、８Ｘ□、７Ｘ１．（
１μで、はぼ短円筒形で大きさはやや不規則である。
１μで、はぼ短円筒形で大きさはやや不規則である。
基土菌糸はｉ］ｆ）、５〜０．８μで分枝をもって伸長
し、寒天培地上ではかならずしも分断しないが、液体培
養することによ１）はとんどの場合細かく分断する。
し、寒天培地上ではかならずしも分断しないが、液体培
養することによ１）はとんどの場合細かく分断する。
しかし遊走胞子、胞子のう、菌核等は形成されない。
（１））各種培地にでの性状
以下に記載する実験方法は主としてイー・ビー・シャー
リング（Ｉ ｎｌ、、 Ｊ 、 Ｓ ｙｓｔ、、 Ｂａ
ｃｌ、ｅｒｉｏｌ、 １６巻、！（１：）・＝ ：（／
ｌ （１，１９６６年）の方法にしたかって行った。
リング（Ｉ ｎｌ、、 Ｊ 、 Ｓ ｙｓｔ、、 Ｂａ
ｃｌ、ｅｒｉｏｌ、 １６巻、！（１：）・＝ ：（／
ｌ （１，１９６６年）の方法にしたかって行った。
２１−
色調は［−色の標準１（財団法人［１本色彩研究所、］
り Ｇ ４３Ｉ’−）を用いて決定し、色相名ととも
に括弧内に色相名、彩度番号、明度番号の順に色相記号
を記入した。
り Ｇ ４３Ｉ’−）を用いて決定し、色相名ととも
に括弧内に色相名、彩度番号、明度番号の順に色相記号
を記入した。
培養は２５°Ｃで行い、最も生育の旺盛な２〜３週間目
の各培地上における観察結果を第２表に示した。但し第
２＆中、牛ｆ′ｆ項日に記載した基土菌糸表面の色は胞
ｒ着生前の培養−・週間目における観、察結果を示して
おり、胞子着生がψく基土菌糸表面の色のｉ’ｌｌ定田
１ｔｌな培地に１）いては、記載していない。
の各培地上における観察結果を第２表に示した。但し第
２＆中、牛ｆ′ｆ項日に記載した基土菌糸表面の色は胞
ｒ着生前の培養−・週間目における観、察結果を示して
おり、胞子着生がψく基土菌糸表面の色のｉ’ｌｌ定田
１ｔｌな培地に１）いては、記載していない。
２２−
Δ ′
−べ （ｃ）生理的性質 １ 生付温度：５°Ｃ−３０’Ｃ１ｔイ・１近で生付し
、２０〜３０’Ｃで最もよく生育する。
−べ （ｃ）生理的性質 １ 生付温度：５°Ｃ−３０’Ｃ１ｔイ・１近で生付し
、２０〜３０’Ｃで最もよく生育する。
２ゼラチンの液化：液化しない（グルコース・ペプトン
・ゼラチン培地」−１２５°Ｃ１３週間培養）。
・ゼラチン培地」−１２５°Ｃ１３週間培養）。
３ スターチの加水分解二分解する（スターチ寒天培地
−に、２５°Ｃ５３週間培養）。
−に、２５°Ｃ５３週間培養）。
４ 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化ン疑固、ペプトン化共
にせず（３ｆ）’Ｃ１３〜・１週間培養）。
にせず（３ｆ）’Ｃ１３〜・１週間培養）。
５ メラニン様色素の生成：ペプトンイースト鉄寒天、
チロシン寒天で生成する（２！’）’Ｃ１２〜１１日間
）。
チロシン寒天で生成する（２！’）’Ｃ１２〜１１日間
）。
（（］）炭素源の同化性（３０’（’：、１０へ１６日
培養）Ｌ−アラピアース − シュークロース −１）
−キシロ−人 −イノシトール −Ｉ）−グルコー
ス ＋ Ｌ−ラムノース −［）−７ラクトース
− ラフィノース −（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミ７ピメリン酸はメン型であり、ヒドロ
キシディアミノピメリン酸を含まない。細胞壁の糖！ｌ
ｌｙ＆は、アラピアース、キシロース、マデュロース、
ラムノース等を有せず、ガラクトース、マン７−ス等を
有する。又本菌株はノカル）Ｓミコール酸を有しない。
培養）Ｌ−アラピアース − シュークロース −１）
−キシロ−人 −イノシトール −Ｉ）−グルコー
ス ＋ Ｌ−ラムノース −［）−７ラクトース
− ラフィノース −（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミ７ピメリン酸はメン型であり、ヒドロ
キシディアミノピメリン酸を含まない。細胞壁の糖！ｌ
ｌｙ＆は、アラピアース、キシロース、マデュロース、
ラムノース等を有せず、ガラクトース、マン７−ス等を
有する。又本菌株はノカル）Ｓミコール酸を有しない。
以−１−の分析結果にツいてＢ（・ｒｇｅｙ’ｓ Ｍａ
ｎｕａｌ ｏｆｔ、ｈ（！ｔ’）ｅＬｅｒｍｉｎａｌ、
ｉｖｅ Ｂｅｃｌ、ｅｒｉｏｌｏＨｙ第ｓ＋ｈ、６５７
頁へ・Ｇ５８頁（１９７ｊＩ年）や、レシエバリエ（Ｉ
ｎｌ、ｅｒ、 、Ｊ 、 Ｓ ｙｓｌ、ｅｒ１＋、
Ｂａｃｌ、ｅｒｉｏｌ、 ２０巻、４３５百〜、−１、
’１３頁、１９７ （１年）、メイヤー（Ｔ ｎ１０．
Ｊ 。
ｎｕａｌ ｏｆｔ、ｈ（！ｔ’）ｅＬｅｒｍｉｎａｌ、
ｉｖｅ Ｂｅｃｌ、ｅｒｉｏｌｏＨｙ第ｓ＋ｈ、６５７
頁へ・Ｇ５８頁（１９７ｊＩ年）や、レシエバリエ（Ｉ
ｎｌ、ｅｒ、 、Ｊ 、 Ｓ ｙｓｌ、ｅｒ１＋、
Ｂａｃｌ、ｅｒｉｏｌ、 ２０巻、４３５百〜、−１、
’１３頁、１９７ （１年）、メイヤー（Ｔ ｎ１０．
Ｊ 。
５ｙｓｔ、 ＢａｃＬｅｒｉｏｌ、 ２６巻、−１，８
７頁−ｌｌ ９３頁１９７Ｇ年）らの分類法（こしたが
って判定すると、本漬は細胞壁類型（ｃｅｌｌ ｕ＋ａ
ｌｌ ｔ、ｙｐｐ）Ｉｌｌ型、糖糺成類型（ｃｅｌｌ
ｕ＋ａｌｌ ｓｕｇａｒ ｐａｔｔｅｒｎ）Ｃ望となる
。
７頁−ｌｌ ９３頁１９７Ｇ年）らの分類法（こしたが
って判定すると、本漬は細胞壁類型（ｃｅｌｌ ｕ＋ａ
ｌｌ ｔ、ｙｐｐ）Ｉｌｌ型、糖糺成類型（ｃｅｌｌ
ｕ＋ａｌｌ ｓｕｇａｒ ｐａｔｔｅｒｎ）Ｃ望となる
。
以上本漬は、細胞壁類型カ弓ＩＩ、糖紺ｒｌｔ、類型か
Ｃであることか呟しシエバリエの分類法によればダソン
ビレイタイプのアクチ７マデューラ属、サーモアクチノ
ミセス属、アクチノビイフイグヌ、属、ゲオダーマ）・
フィラス属のいづれが（こ属する。
Ｃであることか呟しシエバリエの分類法によればダソン
ビレイタイプのアクチ７マデューラ属、サーモアクチノ
ミセス属、アクチノビイフイグヌ、属、ゲオダーマ）・
フィラス属のいづれが（こ属する。
しかじ本漬は、その形態において気菌糸のすべてが胞子
の良い連鎖から成り、基土菌糸を細かく分断するか、内
生胞子、遊走胞子、胞子のうが見い出されない二とより
、グソンビレイクイプのアクチ７マデューラ属（Ｇｅｎ
ｕｓ ＡｃｌｉｎｏＡｃｌｌｎｏ ｄａｓｓ−０１１ν
１１１ｅｉ １．ｙｐｃ）に同定するのか分類）ユ妥当
である。
の良い連鎖から成り、基土菌糸を細かく分断するか、内
生胞子、遊走胞子、胞子のうが見い出されない二とより
、グソンビレイクイプのアクチ７マデューラ属（Ｇｅｎ
ｕｓ ＡｃｌｉｎｏＡｃｌｌｎｏ ｄａｓｓ−０１１ν
１１１ｅｉ １．ｙｐｃ）に同定するのか分類）ユ妥当
である。
なオタ、近年グソンビレイクイプのアクチアマチ゛ユー
ラ属はメイヤーの提起した新炭７カルデイオプシス属に
統合され、７カルデイオプシス属の名称で取り扱われる
ことか一般的である。
ラ属はメイヤーの提起した新炭７カルデイオプシス属に
統合され、７カルデイオプシス属の名称で取り扱われる
ことか一般的である。
そこで本漬は、／カルデイオプシス属Ｎ０Ｖ７９ （Ｇ
（！ＩＩＩＪｓ Ｎｏｃａｒｄｉｏｌ）ｓｉｓ ｓｐ
Ｎ Ｏ７７９）と称することにした。そして本漬は工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されておＩ）、その
受託番号は［微工研菌寄第６１３３号−１である。
（！ＩＩＩＪｓ Ｎｏｃａｒｄｉｏｌ）ｓｉｓ ｓｐ
Ｎ Ｏ７７９）と称することにした。そして本漬は工業
技術院微生物工業技術研究所に寄託されておＩ）、その
受託番号は［微工研菌寄第６１３３号−１である。
本発明で用いるホスホリパーゼＤＭを生産するのに用い
る使用菌としては、７カルデ゛イオプシス属Ｎ（−）”
７７９および本菌株を変異処理した変異株だけでなく、
／カルデイオプシ又属（旧属名アク２６− チ７マデユーラ ダソンビレイクイブ属）に属しホスホ
リパーゼＤ Ｍを生産する菌であれば全て利できる。
る使用菌としては、７カルデ゛イオプシス属Ｎ（−）”
７７９および本菌株を変異処理した変異株だけでなく、
／カルデイオプシ又属（旧属名アク２６− チ７マデユーラ ダソンビレイクイブ属）に属しホスホ
リパーゼＤ Ｍを生産する菌であれば全て利できる。
アクチ７マデューラ属ｐＪ Ｃ） ３６２株［ＦＥＲＭ
−Ｐ１’Ｊｏ、６１３２］の菌学的性状ニー（ａ）形態 澱粉無敗塩寒天、チロシン寒天、酵刊・麦芽寒天、オー
トミール寒天培地等では良好に、またグリセリンアスパ
ラギン寒天では中程度に生育して気菌糸の集落を着生す
る。
−Ｐ１’Ｊｏ、６１３２］の菌学的性状ニー（ａ）形態 澱粉無敗塩寒天、チロシン寒天、酵刊・麦芽寒天、オー
トミール寒天培地等では良好に、またグリセリンアスパ
ラギン寒天では中程度に生育して気菌糸の集落を着生す
る。
胞子を着生した菌叢の色は培地の種類、観察時期により
若干変化するが、おおむねやや紫味を持った灰白色から
灰色を呈する、。
若干変化するが、おおむねやや紫味を持った灰白色から
灰色を呈する、。
シュークロース硝酸塩大入、栄養寒天、グルコースアス
パラギン寒天では気菌糸を着生しないか、貧弱にしか着
生しない。
パラギン寒天では気菌糸を着生しないか、貧弱にしか着
生しない。
寒天培地ヒに生付させた本菌株を顕微鏡で観察すると、
気菌糸は中０．８〜１゜２μで分枝し、−・部ループ状
又は螺線状をなし、屈曲を混じえなが２７− らｉ二として直線状に長く伸び、先端はループ状に４】
ろく巻いている場合が多い。
気菌糸は中０．８〜１゜２μで分枝し、−・部ループ状
又は螺線状をなし、屈曲を混じえなが２７− らｉ二として直線状に長く伸び、先端はループ状に４】
ろく巻いている場合が多い。
胞子は数１０から１ ＋−） ０以上の連鎖状をなして
着生し、はぼ気菌糸全体を形成する。
着生し、はぼ気菌糸全体を形成する。
胞子の大きさは（１，８〜１，２Ｘ１，２へ・１．７μ
で・、短円筒又は卵形で、大きさ形ともやや不規則であ
る。
で・、短円筒又は卵形で、大きさ形ともやや不規則であ
る。
基土菌糸は「旧）、６〜１．（）μで、イ２規則な分枝
をもって屈曲しなから伸長し、遊走胞子、胞子のり、菌
核等は形成されない。
をもって屈曲しなから伸長し、遊走胞子、胞子のり、菌
核等は形成されない。
また通常、隔壁、菌糸の分断は見られないが、液体培養
により菌糸の分断か見られることもある。
により菌糸の分断か見られることもある。
（１））各種培地−１−での性状
以Ｆに記載する実験ノｊ法は、土としてイー・ビ一番シ
ャーリング（丁ＩＩ↑８．Ｊ 、Ｓ ｙｓｌ、Ｂａｃ！
、ｅｒｉｏｌ。
ャーリング（丁ＩＩ↑８．Ｊ 、Ｓ ｙｓｌ、Ｂａｃ！
、ｅｒｉｏｌ。
１６巻、３１ｊ（へ３４． （’）、］ ０６６年）の
方法にしたがって行った１、 色］づ、′・Ｉは、１色の標？Ｆｌｕｔａ団法／＜ Ｅ
１本色彩研究所、１°］（３・′１イ１′）を用いて決
定し色相名とともに拮弧内に色相名、彩度番号、明度番
号のｊ頃に色相記号を記入１７た。
方法にしたがって行った１、 色］づ、′・Ｉは、１色の標？Ｆｌｕｔａ団法／＜ Ｅ
１本色彩研究所、１°］（３・′１イ１′）を用いて決
定し色相名とともに拮弧内に色相名、彩度番号、明度番
号のｊ頃に色相記号を記入１７た。
培養は２５℃で行い、最も生付の旺盛な２〜３週間［１
の各培地上における観察結果を第３表に示した。但し第
３表中、生育項（１に記載した基土菌糸表面の色は胞子
着生前の培養−・週間目における観察結果を示しており
、胞子着生が早く基土菌糸表面の色の判定困難な培地に
ついては記載していない。
の各培地上における観察結果を第３表に示した。但し第
３表中、生育項（１に記載した基土菌糸表面の色は胞子
着生前の培養−・週間目における観察結果を示しており
、胞子着生が早く基土菌糸表面の色の判定困難な培地に
ついては記載していない。
＼
ｑ、■ 嘱
セ（ｃ）生理的性質 １ 生育温度：１０°Ｃ〜３７°Ｃ附近で生育し、２０
へ３ ＋１ ’（Ｃで最もよく生育する。
セ（ｃ）生理的性質 １ 生育温度：１０°Ｃ〜３７°Ｃ附近で生育し、２０
へ３ ＋１ ’（Ｃで最もよく生育する。
２ゼラチンの液化：液化しない（グルコース・ペプトン
・ゼラヂン培地ト、２５°Ｃ１３週間培養）。
・ゼラヂン培地ト、２５°Ｃ１３週間培養）。
３ スターチの加水分解二分解する（スターチ寒天培地
上、２５°Ｃ１３週間培養）。
上、２５°Ｃ１３週間培養）。
４脱脂牛乳の凝固、ペプトン化ニー疑固せず、ベプト、
化するい（０”Ｃ１３〜４週間培養）。
化するい（０”Ｃ１３〜４週間培養）。
５ メラニン様色素の生成：ペプトンイースト鉄寒天、
チロシン寒天で生成する（２５°Ｃ１２〜、・１日）。
チロシン寒天で生成する（２５°Ｃ１２〜、・１日）。
（ｄ）炭素）原の同化性（３０”Ｃ１１０〜１６０培養
）Ｌ−アラピアース ＋ シュークロース −Ｄ−キシ
フー又 十 イノシトール ±Ｄ−グルコース
＋ Ｉ、−ラム７−又 −Ｄ−７ラクトース − ラフ
イ／−ス −（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミ７ピメリン酸はメン型であり、細胞ｊ
１にの糖組成は、アラピアース、ギシロース、うｌｘ／
−ス等を有せず、マデュロース、力′ラクト−ス、マン
７−ス等を有する。
）Ｌ−アラピアース ＋ シュークロース −Ｄ−キシ
フー又 十 イノシトール ±Ｄ−グルコース
＋ Ｉ、−ラム７−又 −Ｄ−７ラクトース − ラフ
イ／−ス −（ｅ）細胞の化学分析 本菌株のディアミ７ピメリン酸はメン型であり、細胞ｊ
１にの糖組成は、アラピアース、ギシロース、うｌｘ／
−ス等を有せず、マデュロース、力′ラクト−ス、マン
７−ス等を有する。
以上の分析結果にツいてＢｅｒｇｅｙ’ｓ ｌ＼４ａｎ
ｕａｌ ｏｆ’ｔ、ｈｅ Ｄｅｌ、ｅｒｍｉｎａＬｉｖ
ＯＢｅｃｔｅｒｉｏｌｏＨｙ第８版、６５７頁〜６５８
頁（１９７４年）や、レジエバ′り工（Ｉ ｎｔｅｒ、
、Ｊ 、 Ｓ ｙｓｊｒｍ、 Ｒａｃｔｅｒｉｏｌ、
２ （’）巻、−′ｌ ３５頁へ４４３頁、１９７０
年）等の分類法にしたがって１゛り定すると、本漬は細
胞壁類型（ｃｅｌｌ ＋ａａｌｌｔｙｐｅ）ＩＩＩ型、
糖組成類型（ｃｅｌｌ ｕ＋ａｌｌ ｓｕｇａｒ ｐａ
ｔｔ：ｅ−ｒｎ）Ｂ型となる。
ｕａｌ ｏｆ’ｔ、ｈｅ Ｄｅｌ、ｅｒｍｉｎａＬｉｖ
ＯＢｅｃｔｅｒｉｏｌｏＨｙ第８版、６５７頁〜６５８
頁（１９７４年）や、レジエバ′り工（Ｉ ｎｔｅｒ、
、Ｊ 、 Ｓ ｙｓｊｒｍ、 Ｒａｃｔｅｒｉｏｌ、
２ （’）巻、−′ｌ ３５頁へ４４３頁、１９７０
年）等の分類法にしたがって１゛り定すると、本漬は細
胞壁類型（ｃｅｌｌ ＋ａａｌｌｔｙｐｅ）ＩＩＩ型、
糖組成類型（ｃｅｌｌ ｕ＋ａｌｌ ｓｕｇａｒ ｐａ
ｔｔ：ｅ−ｒｎ）Ｂ型となる。
以上本漬は、細胞壁類型がｌ＋＋、初ｉ ＩＩＩ成類型
がＢであることがら、ミクロビスポラ属、ストレプトス
ボランギウム属、又ビリロスボラ属、フラ７モ／スポラ
属、デルマドフィラス属、アクチ／マデューラ属のいづ
れかに属する。しがし本漬はその形態に４９いて多数の
胞子がら成る胞子連４Ｖｉを着生し、菌核、胞ｒ嚢、遁
走胞子が見い出されないことより、アクチノマデューラ
属（Ｃ；ｅｌｌｌｌ！Ｈｉ〜ｃ ｔ、 ｉ ｎ −ｏ＋
ｎａｄｕｒａ）に同定するのか分類学上、最も妥当であ
る。
がＢであることがら、ミクロビスポラ属、ストレプトス
ボランギウム属、又ビリロスボラ属、フラ７モ／スポラ
属、デルマドフィラス属、アクチ／マデューラ属のいづ
れかに属する。しがし本漬はその形態に４９いて多数の
胞子がら成る胞子連４Ｖｉを着生し、菌核、胞ｒ嚢、遁
走胞子が見い出されないことより、アクチノマデューラ
属（Ｃ；ｅｌｌｌｌ！Ｈｉ〜ｃ ｔ、 ｉ ｎ −ｏ＋
ｎａｄｕｒａ）に同定するのか分類学上、最も妥当であ
る。
そこで本菌は、アクチノマデラーラ属ＮＯ３６２（Ａｃ
ｔ、ｉｎｏｍａｄｕｒａ ３１１ Ｎ Ｏ３Ｇ ２ ）
と称することにした。そして本漬は工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されており、その受託番号は「微工
研菌寄第６１３２号（ＦＥＲＭ Ｐ−６１３２）ｊであ
る。
ｔ、ｉｎｏｍａｄｕｒａ ３１１ Ｎ Ｏ３Ｇ ２ ）
と称することにした。そして本漬は工業技術院微生物工
業技術研究所に寄託されており、その受託番号は「微工
研菌寄第６１３２号（ＦＥＲＭ Ｐ−６１３２）ｊであ
る。
本発明で用いるホスホリパーゼＤ Ｍを生産するのに利
用する使用菌としては、上記したアクチノマデューラ属
ＮＯ３６２、及び本菌株を変異処理した変異株だけでな
く、アクチ７マデューラ属に属しホスホリパーゼＤを生
産する菌であれば全て用いる事かできる。
用する使用菌としては、上記したアクチノマデューラ属
ＮＯ３６２、及び本菌株を変異処理した変異株だけでな
く、アクチ７マデューラ属に属しホスホリパーゼＤを生
産する菌であれば全て用いる事かできる。
本発明方法で利用するホスホリパーゼＤＭを、−に記例
示の如きホスホリパーゼ０Ｍ生産菌を用いて製造するに
は、−に記例示の如きホスホリパーゼ１） Ｍ生産菌を
培地に培養し、培養物よりホスホリパーゼＤＭを採取す
ればよい。その培養形態とし３３− ては、液体培養、固体培養いづれも用いることが出来る
か、工裟的には深部通気攪拌培養を行うのか有利である
。
示の如きホスホリパーゼ０Ｍ生産菌を用いて製造するに
は、−に記例示の如きホスホリパーゼ１） Ｍ生産菌を
培地に培養し、培養物よりホスホリパーゼＤＭを採取す
ればよい。その培養形態とし３３− ては、液体培養、固体培養いづれも用いることが出来る
か、工裟的には深部通気攪拌培養を行うのか有利である
。
また使用する培養源としては、−・般に微生物培養に用
いられる炭素源、窒素源、無（投稿、及びその他の徽惜
栄養素の池、７カルデイオプシス属やアクチ／マデュー
ラ属に属するホスホリパーゼ［）Ｍ生産微生物の利用す
ることの出来る栄養を原であれば、すべて使用すること
が出来る。
いられる炭素源、窒素源、無（投稿、及びその他の徽惜
栄養素の池、７カルデイオプシス属やアクチ／マデュー
ラ属に属するホスホリパーゼ［）Ｍ生産微生物の利用す
ることの出来る栄養を原であれば、すべて使用すること
が出来る。
培地の炭素源としては、例えばブドウ糖、果糖、ショ糖
、乳糖、澱粉、グリセリン、デキストリン、糖蜜、ソル
ビト−ル等の池、脂肪酸、油脂、イ１ルシチン、アルコ
ール、有機酸などを例示でき、これらはｉｔ独でまたは
組合ぜて用いることかで゛ぎる。
、乳糖、澱粉、グリセリン、デキストリン、糖蜜、ソル
ビト−ル等の池、脂肪酸、油脂、イ１ルシチン、アルコ
ール、有機酸などを例示でき、これらはｉｔ独でまたは
組合ぜて用いることかで゛ぎる。
窒素源としでは、無（幾窒素源、有機窒素）原いづれで
も利用可能であり、無機窒素源としては、例えば硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、燐
酸１アンモニウｌ１、燐酸２アンモニウ１１、塩化アン
モニウム等か挙げられ、また有３４− （代窒素源としては、火見、米、とうもろこし、綿実、
菜種、小麦などの粉、糠、＋１３１．脂粕をはじめ、フ
ーンスチープリカー、ペフトン、Ｆｌｙ−ａ＋エキス、
肉エキス、カゼイン、アミノ酸等が例示できる。
も利用可能であり、無機窒素源としては、例えば硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、燐
酸１アンモニウｌ１、燐酸２アンモニウ１１、塩化アン
モニウム等か挙げられ、また有３４− （代窒素源としては、火見、米、とうもろこし、綿実、
菜種、小麦などの粉、糠、＋１３１．脂粕をはじめ、フ
ーンスチープリカー、ペフトン、Ｆｌｙ−ａ＋エキス、
肉エキス、カゼイン、アミノ酸等が例示できる。
無機塩及び微量栄養素としては、例えばリン酸、マグネ
シウム、カリウム、鉄、アルミニウム、カルシラｌ３、
マンカ゛ン、ｊｎ：鉛等の塩類の池、ビタミン、非イオ
ン界面活性剤、消泡剤等菌の生育や本人ホリパーゼＩ）
Ｍの生産を促進する適当な物質を例示でき、必要に応じ
て使用出来る。
シウム、カリウム、鉄、アルミニウム、カルシラｌ３、
マンカ゛ン、ｊｎ：鉛等の塩類の池、ビタミン、非イオ
ン界面活性剤、消泡剤等菌の生育や本人ホリパーゼＩ）
Ｍの生産を促進する適当な物質を例示でき、必要に応じ
て使用出来る。
培養は好気的条件で行なわれる。ｊ８養温度は菌か発付
し、ホスホリパーゼｌ） Ｍを生産する温度範囲で適宜
変更選択でとるか、待ｉこｆ、７よし５いのは約２０・
−系勺３５°Ｃである。
し、ホスホリパーゼｌ） Ｍを生産する温度範囲で適宜
変更選択でとるか、待ｉこｆ、７よし５いのは約２０・
−系勺３５°Ｃである。
培養時間は条件によ１）異なるか、ホスホリパーゼＩ）
Ｍか最高生成量に達するよでｊ８養すればよい。
Ｍか最高生成量に達するよでｊ８養すればよい。
液化」；４養の場合は例えば１〜３Ｌ１程度である。
ｊ８養物中に生成したホスホリパーゼＤは、液内培養で
は主として培養液中に溶けているので、給養終了液より
固形物を炉別し、てイ（１られる培養か液よりホスホリ
パーゼＤＭを採取でとる。
は主として培養液中に溶けているので、給養終了液より
固形物を炉別し、てイ（１られる培養か液よりホスホリ
パーゼＤＭを採取でとる。
培養か液中よりホスホリパーゼＤＭを採取するに当って
は、通常酵素精製に用いられるあらゆる方法が利用出来
る。例えば硫安、食塩等による塩析、アセトン、エタノ
ール、メタ７−ル等の有機溶剤による沈澱、透析、イオ
ン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、
ゲル濾過、吸着剤、等電点沈澱等の方法か使用出来る。
は、通常酵素精製に用いられるあらゆる方法が利用出来
る。例えば硫安、食塩等による塩析、アセトン、エタノ
ール、メタ７−ル等の有機溶剤による沈澱、透析、イオ
ン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、
ゲル濾過、吸着剤、等電点沈澱等の方法か使用出来る。
さらにこれ等の方法を適当に組み合せることによって、
ホスホリパーゼｌ）Ｍの精製効果が上る場合には、紹介
せて行うことか出来る。
ホスホリパーゼｌ）Ｍの精製効果が上る場合には、紹介
せて行うことか出来る。
上述のようにして祷ることのできる本発明方法で利用で
きるホスホリパーゼＤＭは、たとえば安定化剤として各
種塩類、糖質、蛋白質、脂質、界面活性剤等を加えるか
、もしくは加えることなく、ｉ威圧濃縮、減圧乾燥、凍
結乾燥等の方法１こよｌ）ｉ状又は固形のホスホリパー
ゼＤＭの形態にすることが出来る。本発明方法で利用す
るホスホリバーｒｌ）Ｍの酵素部・ｌ’ｌ測定法は、ノ
１（貿グリセロ・す、ｉ脂質に作用してリン酸と含窒素
塩基とのエステル結合を分Ｉ１１イして生ずる塩基の量
を測定して求める。ホスホリパーゼＩＴｈ・１の活性は
、特に記載しないかぎ１）、以下に記載するコリンオキ
シグーゼ法により測定した。
きるホスホリパーゼＤＭは、たとえば安定化剤として各
種塩類、糖質、蛋白質、脂質、界面活性剤等を加えるか
、もしくは加えることなく、ｉ威圧濃縮、減圧乾燥、凍
結乾燥等の方法１こよｌ）ｉ状又は固形のホスホリパー
ゼＤＭの形態にすることが出来る。本発明方法で利用す
るホスホリバーｒｌ）Ｍの酵素部・ｌ’ｌ測定法は、ノ
１（貿グリセロ・す、ｉ脂質に作用してリン酸と含窒素
塩基とのエステル結合を分Ｉ１１イして生ずる塩基の量
を測定して求める。ホスホリパーゼＩＴｈ・１の活性は
、特に記載しないかぎ１）、以下に記載するコリンオキ
シグーゼ法により測定した。
力価測定法：
１％卵ＭＭ 製レシチンエマルション（０，１ｇレシチ
ン、１ｍｌエチルエーブル、１０＋１１１蒸留水の超音
波″′ｌＬ化液戸）、ｉ、ｍｌに、（’）、２Ｍ ＩＩ
Ｈ７，２トリス−塩酸緩衝液０，１ｍｌ、０．ＩＭ Ｃ
ａＣｌ、水溶液０゜＋１５＋ｎｌ、蒸留水０．１５＋ｎ
ｌを混合し、これｔこ酵素液０ 、１ ＋ｎｌ ヲ加え
、３７°Ｃで２０分反応後、５０ｍＭ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ
−２Ｎ ａを含むＩ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８，０）０．２ｍｌを加え、直ちに５分間煮沸して反応
を完全に停止する。次にコリンエステラーゼ測定用試薬
〔日本商事（株）製造〕のキットに含まれるコリン呈色
剤を摺色溶解液に溶解した溶液４、 ＋１１１を加え、
３７°Ｃで２０分間反応させた後、３７− Ｓ （ｌ ｆｌ ｎｍの吸先度を測定する。
ン、１ｍｌエチルエーブル、１０＋１１１蒸留水の超音
波″′ｌＬ化液戸）、ｉ、ｍｌに、（’）、２Ｍ ＩＩ
Ｈ７，２トリス−塩酸緩衝液０，１ｍｌ、０．ＩＭ Ｃ
ａＣｌ、水溶液０゜＋１５＋ｎｌ、蒸留水０．１５＋ｎ
ｌを混合し、これｔこ酵素液０ 、１ ＋ｎｌ ヲ加え
、３７°Ｃで２０分反応後、５０ｍＭ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ
−２Ｎ ａを含むＩ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８，０）０．２ｍｌを加え、直ちに５分間煮沸して反応
を完全に停止する。次にコリンエステラーゼ測定用試薬
〔日本商事（株）製造〕のキットに含まれるコリン呈色
剤を摺色溶解液に溶解した溶液４、 ＋１１１を加え、
３７°Ｃで２０分間反応させた後、３７− Ｓ （ｌ ｆｌ ｎｍの吸先度を測定する。
月照としては、あらかしめ熱失活した酵素液を用いて同
様に反応させたものの吸先度を測定する。
様に反応させたものの吸先度を測定する。
そして１分間に１μモルのコリンを遊離する酵素部１−
１を１．ｉ）′を位とする。
１を１．ｉ）′を位とする。
前述したメカルデイオブシス属Ｎ０７７９株及びアクチ
／マデューラ属ＮＯ３６２株の夫々を用い、後記９精製
力法に記載した方法により精製した酵素標品を用いた本
発明方法で利用できるホスホリパーゼＤＭの理化学的性
質について以下にのべる。
／マデューラ属ＮＯ３６２株の夫々を用い、後記９精製
力法に記載した方法により精製した酵素標品を用いた本
発明方法で利用できるホスホリパーゼＤＭの理化学的性
質について以下にのべる。
１作用
グリセロリン脂質のリン酸と含窒素塩基とのエステル結
合を分解してホスファチジ゛ン酸と塩基を遊離する。
合を分解してホスファチジ゛ン酸と塩基を遊離する。
Ｃ１１２０Ｃ（）Ｒ（二１１，０ＣＯＲ１
ＲＣＯＯＣｌ ｌ ＲＣ００ｃＨ十Ｎ
−塩Ｊ、ｔｊ０ １ ＩＩ Ｉ Ｉ
ＩＣＩ−（□０−Ｐ−０−（Ｎ−塩基）ＣＨ，０−Ｐ−
ＯＨ１ ０〇− ３８− ２ 基質特異性 基質としてレシチン、リゾレシチン、スフィンゴミエリ
ンのいづれか１つを０．５μモル含むエマルション（、
） 、１ ｍｌを用い、蒸留水の代１）に１％Ｔｒｉ１
．ｏｎ Ｘ−１（１（）を含む水溶液を用いる以外は、
−１−記力価測定法と同様にして反応させ遊離したコリ
ン量を測定し、各基質に対するホスホリパーゼ０Ｍ活性
を測定した。その結果、レシチンに対する活性を１０
（１）とした時の相対活性は、メカルデイオプシス属ホ
スホリパーゼＤＭニーリゾレシチン４．９；スフィンゴ
ミエリン０．３、アクチ７マデューラ属ホスホリパーゼ
ＤＭニーリゾレシチン３．６：スフインゴミエリン０．
３、であった。
−塩Ｊ、ｔｊ０ １ ＩＩ Ｉ Ｉ
ＩＣＩ−（□０−Ｐ−０−（Ｎ−塩基）ＣＨ，０−Ｐ−
ＯＨ１ ０〇− ３８− ２ 基質特異性 基質としてレシチン、リゾレシチン、スフィンゴミエリ
ンのいづれか１つを０．５μモル含むエマルション（、
） 、１ ｍｌを用い、蒸留水の代１）に１％Ｔｒｉ１
．ｏｎ Ｘ−１（１（）を含む水溶液を用いる以外は、
−１−記力価測定法と同様にして反応させ遊離したコリ
ン量を測定し、各基質に対するホスホリパーゼ０Ｍ活性
を測定した。その結果、レシチンに対する活性を１０
（１）とした時の相対活性は、メカルデイオプシス属ホ
スホリパーゼＤＭニーリゾレシチン４．９；スフィンゴ
ミエリン０．３、アクチ７マデューラ属ホスホリパーゼ
ＤＭニーリゾレシチン３．６：スフインゴミエリン０．
３、であった。
３ 至適ＩＴ Ｈ
力価測定法において用いる緩衝液の代りに［〕１１３．
０〜４．０では蟻酸・蟻酸ソーダ緩衝液、ｌ（Ｉ−（、
’１． 、 Ｏへ・５．５では酢酸・酢酸ソーダ緩衝液
、ｐＩ−■５．５〜８．５では）・リス・マレイン酸・
苛性ソーダＢ平！Ｔｌｊ液、ｆｌ＋１７．ｉ’ｌ〜９．
０ではトリス・塩酸緩衝液、１＋ｌ−１’、れ０〜Ｎ’
）、ｆ）ではグリシン・苛性ソーダ緩衝液を用いてホス
ホリパーゼ［）Ｍの活性を測定し、１ミ適１１ Ｎを求
めた。また同測定法で・用いる蒸溜水０．１５ｍ１の代
りに１％’「ｒｉｌ、ｏｎ Ｘ −１１１０（和尤純薬
）水溶液０．］５５ｍを用いた時の至適ｒ、Ｉ−１につ
いても求めた。
０〜４．０では蟻酸・蟻酸ソーダ緩衝液、ｌ（Ｉ−（、
’１． 、 Ｏへ・５．５では酢酸・酢酸ソーダ緩衝液
、ｐＩ−■５．５〜８．５では）・リス・マレイン酸・
苛性ソーダＢ平！Ｔｌｊ液、ｆｌ＋１７．ｉ’ｌ〜９．
０ではトリス・塩酸緩衝液、１＋ｌ−１’、れ０〜Ｎ’
）、ｆ）ではグリシン・苛性ソーダ緩衝液を用いてホス
ホリパーゼ［）Ｍの活性を測定し、１ミ適１１ Ｎを求
めた。また同測定法で・用いる蒸溜水０．１５ｍ１の代
りに１％’「ｒｉｌ、ｏｎ Ｘ −１１１０（和尤純薬
）水溶液０．］５５ｍを用いた時の至適ｒ、Ｉ−１につ
いても求めた。
その結果、蒸留水を用いた場合、
メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー至適（、
＋ ｌ−１７・［てｊ近（６，！１１〜７ 、０）、ア
クチ７マデューラ属ホスホリパーゼＤＭニー至適ｌ往■
フイ・ｊ近、 であり、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１０＋’）水溶液を
用イタ場合、 ／カルデ゛イオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー至適ｐ
Ｈ５付近、 マクチノマデューラ属ホスホラパーゼＤＭニー至適ｐＨ
５，５付近、 であった。
＋ ｌ−１７・［てｊ近（６，！１１〜７ 、０）、ア
クチ７マデューラ属ホスホリパーゼＤＭニー至適ｌ往■
フイ・ｊ近、 であり、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１０＋’）水溶液を
用イタ場合、 ／カルデ゛イオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー至適ｐ
Ｈ５付近、 マクチノマデューラ属ホスホラパーゼＤＭニー至適ｐＨ
５，５付近、 であった。
・１ 至適温度
力価測定法において、反応温度条件を１（）、２０．２
５．３７．４０．５０．５５．６０，７０．８ ｆ’ｌ
ｐ；よび９ （’ｌ ’Ｃで酵素活性を測定した。そ
の結果、 メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー至適温度
６０°Ｃ〜８０℃、とくには６０℃〜７ＩＣ１ アクチノマデューラ属ホスホリパーゼＤＭニー至適温度
５５°Ｃ〜８０°Ｃ１とくには６０℃〜７０ ℃、 と認められた。
５．３７．４０．５０．５５．６０，７０．８ ｆ’ｌ
ｐ；よび９ （’ｌ ’Ｃで酵素活性を測定した。そ
の結果、 メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー至適温度
６０°Ｃ〜８０℃、とくには６０℃〜７ＩＣ１ アクチノマデューラ属ホスホリパーゼＤＭニー至適温度
５５°Ｃ〜８０°Ｃ１とくには６０℃〜７０ ℃、 と認められた。
５ ｐＨ安定性
酵素溶液０．１ｍｌに、メカルデイオプシス属ホスホリ
パーゼＤＭの場合は（１，２ｍｌのアクチ７マデューラ
属ホスホリパーゼＤＭの場合にはＱ 、９ ｍｌのｒ３
１Ｍの各種緩衝液、すなわちｌ］Ｈ３，０〜３゜５では
グリシン・塩酸緩衝液、ｐ）（３，５〜７．０では酢酸
・酢酸ソーダ緩衝液、ｒ＋Ｉ−１５、０〜８．０４１− ではトリス・マレイン酸・苛性ソーダ緩衝液、ｐｌ（７
，０〜９．０ではトリス・塩酸緩衝液、１１８９ 。
パーゼＤＭの場合は（１，２ｍｌのアクチ７マデューラ
属ホスホリパーゼＤＭの場合にはＱ 、９ ｍｌのｒ３
１Ｍの各種緩衝液、すなわちｌ］Ｈ３，０〜３゜５では
グリシン・塩酸緩衝液、ｐ）（３，５〜７．０では酢酸
・酢酸ソーダ緩衝液、ｒ＋Ｉ−１５、０〜８．０４１− ではトリス・マレイン酸・苛性ソーダ緩衝液、ｐｌ（７
，０〜９．０ではトリス・塩酸緩衝液、１１８９ 。
０〜９．５ではグリシン・苛性ソーダ緩衝液を夫々加え
、２５°Ｃで２時間保った。その後、これら酵素緩衝溶
液に０．５Ｍ）’Ｊス・塩酸緩衝液（１１１１４７，２
）を、ノカルディオプシス属ホスホリパーゼＤＭの場合
には１．．２ｍｌ、マクチ７マデューラ属ホスホリパー
ゼＤＭの場合には９ 、０ ｍｌ加え、ｐ Ｉ−（を１
．Ｏ〜７．３とした。この溶液（’）、１ｍｌを用い、
力価測定法に従って力価を測定し、安定１往Ｉ範囲を調
べた結果、 ７力ルデ゛イオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー特に安
定なＩＴ ｉ（４，０へ７．０、アクチアマチ゛ユーラ
属ホ又ホリパーセ゛ＤＭ＞特に安定なｐ Ｉ−Ｔ ４．
、０〜８．０１と認められた。
、２５°Ｃで２時間保った。その後、これら酵素緩衝溶
液に０．５Ｍ）’Ｊス・塩酸緩衝液（１１１１４７，２
）を、ノカルディオプシス属ホスホリパーゼＤＭの場合
には１．．２ｍｌ、マクチ７マデューラ属ホスホリパー
ゼＤＭの場合には９ 、０ ｍｌ加え、ｐ Ｉ−（を１
．Ｏ〜７．３とした。この溶液（’）、１ｍｌを用い、
力価測定法に従って力価を測定し、安定１往Ｉ範囲を調
べた結果、 ７力ルデ゛イオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー特に安
定なＩＴ ｉ（４，０へ７．０、アクチアマチ゛ユーラ
属ホ又ホリパーセ゛ＤＭ＞特に安定なｐ Ｉ−Ｔ ４．
、０〜８．０１と認められた。
また、力価測定法で用いる蒸溜水０．１５ｍｌの代りに
１％Ｔｒｉ１．ｏｎ Ｘ−］ （１０水溶液０．１５１
１１１を用いる池は、上記と同様に操作してｐトＩ安定
範囲４２− を調べたが、結果は１−記したところと殆んど変らなか
っＬユ。
１％Ｔｒｉ１．ｏｎ Ｘ−］ （１０水溶液０．１５１
１１１を用いる池は、上記と同様に操作してｐトＩ安定
範囲４２− を調べたが、結果は１−記したところと殆んど変らなか
っＬユ。
Ｇ 熱安定性
酸素溶液０．１＋ｎｌｆこ０ 、１ Ｍ ＋・リスー塩
酸緩Ｓ液（ｐｉ−１７、２）を、メカルデイオブシス属
ホスホリパーゼＤＭの場合１こは４ｍｌ、アクチ７マデ
ューラ属ホスホリパーゼＤ Ｍの場合には９．９ ｔｏ
Ｉ加え、２０．３（）、３７．４０．５０．６０およ
び６５℃に３０分間放置した後、残存する酵素活性を測
定した。
酸緩Ｓ液（ｐｉ−１７、２）を、メカルデイオブシス属
ホスホリパーゼＤＭの場合１こは４ｍｌ、アクチ７マデ
ューラ属ホスホリパーゼＤ Ｍの場合には９．９ ｔｏ
Ｉ加え、２０．３（）、３７．４０．５０．６０およ
び６５℃に３０分間放置した後、残存する酵素活性を測
定した。
その結果、
メカルデイオプシス属ホスホリパーゼＤＭニー：（ｎ’
Ｃで３０分の熱処理では殆んど失活せず、５０’Ｃで；
３０分の熱処理で８０％の活性か残存、アクチ７マデュ
ーラ属ホスホリパーゼＤＭニー３４’ｌ ’（’：で３
０分の熱処理では殆んど失活ぜず、５０ ”Ｃで３０分
の熱処理でＣ（０％の活性が残存、という結果であった
。
Ｃで３０分の熱処理では殆んど失活せず、５０’Ｃで；
３０分の熱処理で８０％の活性か残存、アクチ７マデュ
ーラ属ホスホリパーゼＤＭニー３４’ｌ ’（’：で３
０分の熱処理では殆んど失活ぜず、５０ ”Ｃで３０分
の熱処理でＣ（０％の活性が残存、という結果であった
。
７ 各種物質による影響
力価測定法においてＣａ Ｃｌ ２水溶液の代りに各種
物質の水溶ｉｌｌをＱ、０５ｍ１加え、酵素反応系中で
１ｍＭ濃度に成るようにして活・１−１を測定した。
物質の水溶ｉｌｌをＱ、０５ｍ１加え、酵素反応系中で
１ｍＭ濃度に成るようにして活・１−１を測定した。
その結果は水添加の時の活性を］ ００とし、相対活性
として賦活作用のあったものは、 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼ″Ｄ Ｍ ニー例
えば、ＡｌＣｌ、、Ｃｕ５ＯＡ、Ｚｎ５Ｏ，、Ｃｏ Ｃ
１７、ＣａＣ１７、ＦｅＣ１７、Ｆｅ５０．、Ｎ旬０１
１．５ｎＣ１２、デオキシコール酸ソーダ、エタノール
、イソプロパ７−ル、１−ブタ７−ル、Ｔｒｉｌ、ｏｎ
Ｘ−１００゜７クチ／マデユ一ラ属ホスホリパーゼＤ
Ｍニー例えば、ＡｌＣ１，、ＣａＣｌ２、ＦｅＣ１，、
Ｆ”ｅＣ１４、ＮりｇＣｌ、、Ｓ ｎ Ｃｌ ７、デオ
キシコール酸ソーダ、エタ／−ル、インプロパ７−ル、
１−ブタ／−ル、で、一方、１９目害作用のあったもの
は、／カルデイオプシス属ホスホリパーセＤＭニー例え
ば、ドデシル硫酸ソーダ、セチルピリンニウムクロライ
ド、 アクチ／マデューラホスホリパーゼｔ）Ｍ ニー例えば
、セチルピリンニウムクロライＩＮ’、であった。
として賦活作用のあったものは、 ノカルディオプシス属ホスホリパーゼ″Ｄ Ｍ ニー例
えば、ＡｌＣｌ、、Ｃｕ５ＯＡ、Ｚｎ５Ｏ，、Ｃｏ Ｃ
１７、ＣａＣ１７、ＦｅＣ１７、Ｆｅ５０．、Ｎ旬０１
１．５ｎＣ１２、デオキシコール酸ソーダ、エタノール
、イソプロパ７−ル、１−ブタ７−ル、Ｔｒｉｌ、ｏｎ
Ｘ−１００゜７クチ／マデユ一ラ属ホスホリパーゼＤ
Ｍニー例えば、ＡｌＣ１，、ＣａＣｌ２、ＦｅＣ１，、
Ｆ”ｅＣ１４、ＮりｇＣｌ、、Ｓ ｎ Ｃｌ ７、デオ
キシコール酸ソーダ、エタ／−ル、インプロパ７−ル、
１−ブタ／−ル、で、一方、１９目害作用のあったもの
は、／カルデイオプシス属ホスホリパーセＤＭニー例え
ば、ドデシル硫酸ソーダ、セチルピリンニウムクロライ
ド、 アクチ／マデューラホスホリパーゼｔ）Ｍ ニー例えば
、セチルピリンニウムクロライＩＮ’、であった。
２） 力価の測定法
前述したとおりである。
９ 精製方法
きな粉３ 、（ｌ Ｆ？、コーンスターチ−ブリカー１
６０％、ペプトン０ 、５ ｇ、粉末酵母エキス（）、
１％、グルコースｉ、ＯＢ、ＮＨ４Ｎ０，０．２５％、
Ｋ ２ＨｐＱ、０，１％、ＭｇＳＯ３・７Ｉ−１２００
，０１％、ソウイン（Ｔｕ＋ｅｅｎ）−８５０，１％か
ら成る培地（ｐｉ−１（’＋ 、（’ｌ ）約１５１を
３０１７ヤー７アーメンターに入れ、１２０℃で１５分
間滅菌後、シード培養ｆｊ、ｌ。
６０％、ペプトン０ 、５ ｇ、粉末酵母エキス（）、
１％、グルコースｉ、ＯＢ、ＮＨ４Ｎ０，０．２５％、
Ｋ ２ＨｐＱ、０，１％、ＭｇＳＯ３・７Ｉ−１２００
，０１％、ソウイン（Ｔｕ＋ｅｅｎ）−８５０，１％か
ら成る培地（ｐｉ−１（’＋ 、（’ｌ ）約１５１を
３０１７ヤー７アーメンターに入れ、１２０℃で１５分
間滅菌後、シード培養ｆｊ、ｌ。
５１を植菌し、２７゛Ｃで４０時間培養を行った。
尚、」−記シード培養液は、澱粉１％、（Ｎ １．−１
、 ） １．−１ 。
、 ） １．−１ 。
Ｐｏ、０．２５％、ペプトン０．２５％、Ｋ ２１−＋
Ｐ Ｏ。
Ｐ Ｏ。
（）、２％、Ｍｇ５０，０．０１％を含む水溶液培地（
１）Ｈ６，８）Ｉ ００Ｉｌｌｌを１３（肩）１１１＋
坂ロフラスコに入れ、蒸気殺菌後、ノカルディオプシス
属Ｎ０７７９株（ＶＥＲ’Ｍ−Ｐ Ｎｏ、６コ３３］又
はアクチ／マデューラ属ＮＯ３６２株［ＰＥＲＭ−Ｐ
Ｎｏ、６］ ３４５− ２１の胞子を一白金耳接種し、培養温度３（１’Ｃ１１
２（）回転７分の条件で２０間振盪培養して調製した。
１）Ｈ６，８）Ｉ ００Ｉｌｌｌを１３（肩）１１１＋
坂ロフラスコに入れ、蒸気殺菌後、ノカルディオプシス
属Ｎ０７７９株（ＶＥＲ’Ｍ−Ｐ Ｎｏ、６コ３３］又
はアクチ／マデューラ属ＮＯ３６２株［ＰＥＲＭ−Ｐ
Ｎｏ、６］ ３４５− ２１の胞子を一白金耳接種し、培養温度３（１’Ｃ１１
２（）回転７分の条件で２０間振盪培養して調製した。
培養後、菌体固形物を遠心分離１こよ；）除去し、遠心
上清１３１（メカルデイオプシス属Ｆ Ｅ ＲＭ −Ｐ
Ｎｏ、６ ’Ｊ ３３株を用いた場合は０．５４ｕ／
ｍｌ；アクチノマデューラ属ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ、６
１３１株を用いた場合は１，７ｕ／ｍｌであった。）を
イη−な。この遠心）−清を５°Ｃに冷却した後、−２
０℃のアセトンを加えてアセ）・ン濃度３０〜７０％画
分に相当するホスホリパーゼＤＭを含む沈澱物を遠心分
離により集めた。この沈澱物を、メカルディオプシス属
ＦＥ １２Ｍ−ＰＮｏ、６１．’（３株を用いた場合に
はｐ Ｉ−１６、（、）、アクチノマデューラ属ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ Ｎｏ、６１３１株を用いた場合はＩＴ ＋−１
６。
上清１３１（メカルデイオプシス属Ｆ Ｅ ＲＭ −Ｐ
Ｎｏ、６ ’Ｊ ３３株を用いた場合は０．５４ｕ／
ｍｌ；アクチノマデューラ属ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ、６
１３１株を用いた場合は１，７ｕ／ｍｌであった。）を
イη−な。この遠心）−清を５°Ｃに冷却した後、−２
０℃のアセトンを加えてアセ）・ン濃度３０〜７０％画
分に相当するホスホリパーゼＤＭを含む沈澱物を遠心分
離により集めた。この沈澱物を、メカルディオプシス属
ＦＥ １２Ｍ−ＰＮｏ、６１．’（３株を用いた場合に
はｐ Ｉ−１６、（、）、アクチノマデューラ属ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ Ｎｏ、６１３１株を用いた場合はＩＴ ＋−１
６。
５のトリス−マレイン酸に溶解しｆ）、（’１２Ｍの同
緩衝液に月して透析した後、同緩衝液で羽衝化したＤ
ＩＥ Ａ Ｅ−セルロースに通塔し、通過区分を集メタ
。次に川内等の方法Ｃ、Ｊ 、 ｒ３１ｏｃｌ＋ｅｍ、
３１、］４６一 ６３９（１９７°７）〕で調整したパルミトイルカ゛−
ゼをカラムに充」眞し、充分に水洗してから上記ＤＥ
Ａ ト〕−セルロース通過液を注入賦活性を吸着した。
緩衝液に月して透析した後、同緩衝液で羽衝化したＤ
ＩＥ Ａ Ｅ−セルロースに通塔し、通過区分を集メタ
。次に川内等の方法Ｃ、Ｊ 、 ｒ３１ｏｃｌ＋ｅｍ、
３１、］４６一 ６３９（１９７°７）〕で調整したパルミトイルカ゛−
ゼをカラムに充」眞し、充分に水洗してから上記ＤＥ
Ａ ト〕−セルロース通過液を注入賦活性を吸着した。
これを（１、０５Ｍ ）リス−塩酸緩衝液（ｐ）−１７
。
。
２）で洗浄後、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含
む同緩衝液を加え活性を溶出した。活性区分を集めてバ
イオエンンエアリング社製の限外濾過膜（Ｔｙ−ｐｅ
Ｇ−１０Ｔ）を用いて濃縮した後、ゲル濾過担体として
１ヨパールＨＷ−５５Ｆ Ｃ東洋曹達（株）製〕充」眞
カラムに注入し、蒸留水を用いて通塔し、活性区分を集
めて凍結乾燥を行った。
む同緩衝液を加え活性を溶出した。活性区分を集めてバ
イオエンンエアリング社製の限外濾過膜（Ｔｙ−ｐｅ
Ｇ−１０Ｔ）を用いて濃縮した後、ゲル濾過担体として
１ヨパールＨＷ−５５Ｆ Ｃ東洋曹達（株）製〕充」眞
カラムに注入し、蒸留水を用いて通塔し、活性区分を集
めて凍結乾燥を行った。
この乾燥粉末を、メカルデイオプシス属ホスボリパーセ
ｌ） Ｍの場合には０．０２５Ｍイミグゾールー塩酸（
ｐＨ’？、４．）に溶解後、アクチ／マデューラ属ホス
ホリパーゼＤ Ｍの場合には０．０２５ Ｍトリス−酢
酸（ＩＴ ｌ−Ｉ ８．３）に溶解後、ファルマシア・
ファインケミカルス社製のポリバッファ交換体ｒ）ＢＥ
９４（２（’１丁１１１）充填カラムに通塔して活
性を吸着後、同社製の溶出用ポリバッファ（＋） Ｉ−
１５。
ｌ） Ｍの場合には０．０２５Ｍイミグゾールー塩酸（
ｐＨ’？、４．）に溶解後、アクチ／マデューラ属ホス
ホリパーゼＤ Ｍの場合には０．０２５ Ｍトリス−酢
酸（ＩＴ ｌ−Ｉ ８．３）に溶解後、ファルマシア・
ファインケミカルス社製のポリバッファ交換体ｒ）ＢＥ
９４（２（’１丁１１１）充填カラムに通塔して活
性を吸着後、同社製の溶出用ポリバッファ（＋） Ｉ−
１５。
０）を用いて１１１１勾１１占こより溶出した３、溶出
したホスホリパーゼｌ） Ｍの活性区分を集めて限外濾
過膜にて濃縮し、セファデックスＧ −’７５光填カラ
ムに通塔し、ホスホリパーゼｌ）Ｍ活性区分を集めて凍
結乾燥した。
したホスホリパーゼｌ） Ｍの活性区分を集めて限外濾
過膜にて濃縮し、セファデックスＧ −’７５光填カラ
ムに通塔し、ホスホリパーゼｌ）Ｍ活性区分を集めて凍
結乾燥した。
斯くて、メカルデイオプシス属ホスホリパーゼｌ）Ｍの
場合には、約／ＩＯ％の活性回収率で、比活性１７８．
３ ｕ／ ＋ｎｇ蛋白質として、アクチノデューラ属ホ
スホリパーゼｌ） Ｍの場合には約４３％の活性回収率
で、比活性２１８．３ｕ／ｍＨ蛋白質として、ホスホリ
パーゼＤＭが回収された。
場合には、約／ＩＯ％の活性回収率で、比活性１７８．
３ ｕ／ ＋ｎｇ蛋白質として、アクチノデューラ属ホ
スホリパーゼｌ） Ｍの場合には約４３％の活性回収率
で、比活性２１８．３ｕ／ｍＨ蛋白質として、ホスホリ
パーゼＤＭが回収された。
６φ 等重点
ノカルディオプシス属ホスホリノクーゼＤＭニー４．８
５±０１（アンホライン電気泳動法によりン１（ｉｌ
定） アクチノマデューラバホスホリパーゼＤＭ： −６４±
０１（アノホライン電気泳動法により測定） σ）転移作用 従来公知のホスポリ・ぐ−ゼＤ（１、ｒｊＪ述のように
、レシチンからホスファチヅン酸全生成し、これを炭素
数１から５までの直鎖の１級アルコールに転移してエス
テルを形成するが、糖類たとえばフラクトースとの間Ｖ
こは形成しないことが知られている。ホスホリパーゼＤ
Ｍ Ｉｆ（ついても同様な転移作用を調べた結果、本
酵素でｉｔ躯に広範囲のアルコールＶＣ転移が起りエス
テルが形成するほかに、前記糖類もしくけそのフェノー
ル配糖体にも転移し− ４９− てエステル形成することが判明した。
５±０１（アンホライン電気泳動法によりン１（ｉｌ
定） アクチノマデューラバホスホリパーゼＤＭ： −６４±
０１（アノホライン電気泳動法により測定） σ）転移作用 従来公知のホスポリ・ぐ−ゼＤ（１、ｒｊＪ述のように
、レシチンからホスファチヅン酸全生成し、これを炭素
数１から５までの直鎖の１級アルコールに転移してエス
テルを形成するが、糖類たとえばフラクトースとの間Ｖ
こは形成しないことが知られている。ホスホリパーゼＤ
Ｍ Ｉｆ（ついても同様な転移作用を調べた結果、本
酵素でｉｔ躯に広範囲のアルコールＶＣ転移が起りエス
テルが形成するほかに、前記糖類もしくけそのフェノー
ル配糖体にも転移し− ４９− てエステル形成することが判明した。
本発明方法で利用するホスポリ・ぐ−ゼＤＭＶ：Ｊ、後
記転移作用の実験方法［ＴＬＣによる転移生成物の生成
確認方法］に従って反１．芯を行って、フラクトースと
リン脂質レシチンとの間しこおけるリン脂ｐｆ＠句誘導
体形成反応を触ＩＩｖ： ｔ、て、該リン脂質の該糖類
誘啓体を形成する。公知ホスホｌＪ ノｊ−ゼＤは、上
記誘導体を形成［７ない。
記転移作用の実験方法［ＴＬＣによる転移生成物の生成
確認方法］に従って反１．芯を行って、フラクトースと
リン脂質レシチンとの間しこおけるリン脂ｐｆ＠句誘導
体形成反応を触ＩＩｖ： ｔ、て、該リン脂質の該糖類
誘啓体を形成する。公知ホスホｌＪ ノｊ−ゼＤは、上
記誘導体を形成［７ない。
本発明方法ＶＣよれば、前記例示の如き弐（１）リン脂
質と前３己例示の如き蛸幀もしくはそのフェノール配糖
体とを、上記に詳しく述べたホスポリ・ぐ−ゼＤＭの存
在下に反応させることＶ（より、リン脂’ＩＪ糖類誘導
体を製造することができる。このＩＸり、ホスホリパー
ゼＤＭは精市υ品として使用する必要はなく粗製品であ
ってもよい。更に、適当な固定イヒ相体たとえばポリプ
ロピレン）１転セライト粒、ガラスピーズなどの如き各
種の重合体樹脂類−５０− や無様相料の粒状物やフィルム状物に相持固定化して利
用することもできる。
質と前３己例示の如き蛸幀もしくはそのフェノール配糖
体とを、上記に詳しく述べたホスポリ・ぐ−ゼＤＭの存
在下に反応させることＶ（より、リン脂’ＩＪ糖類誘導
体を製造することができる。このＩＸり、ホスホリパー
ゼＤＭは精市υ品として使用する必要はなく粗製品であ
ってもよい。更に、適当な固定イヒ相体たとえばポリプ
ロピレン）１転セライト粒、ガラスピーズなどの如き各
種の重合体樹脂類−５０− や無様相料の粒状物やフィルム状物に相持固定化して利
用することもできる。
反応は、ホスホリパーゼＤＭの存在下で、好１しくけ俗
礎の存在下に、式（１） ＩＪン脂質と前＾已糖類もし
くはその配糖体とを接触せしめることに」：り行うこと
ができる。利用する溶媒の例としては、水性溶媒及び水
性溶媒と有機溶媒との混合溶媒を例示することができる
。また、ホスホリパ−ゼＤＭの酵素学的触媒作用を阻害
しない任意の他の添加剤を倉む溶媒も利用でき、たとえ
ば該作用を促進したり、酵素の安定化に役立つφ当な添
加剤を含イイした溶媒であることができる。例オーば、
酢［ゼ２、クエン酸、リン酸などの緩衝剤を含有したり
、ｊＨしカルシウムその他の中性塩を含有したりした水
性溶媒であることができる。史ｌこ、有機溶媒の１列と
しては、汐１１えば、ｎ−ヘプタン、η、−ヘキザンな
どの如き脂肪族炭化水素順；シクロペンタン、シクロヘ
キサン、シクロブタンなどの如き脂ｉＭ ｋ Ｋ）化水
累類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの如き芳香族
炭化水素類；アセトン、メチルイソプロピルケトンなど
の如きケトン類；ツメチルエーテル、ジエチルエーテル
、ジイソプロピルエーテルなどの如きエーテル類；酢酸
メチル、酢酸エチルなどの如きエステル頚；四塩イヒＬ
で素、クロロホルム、塩化メチレンなどの如きハロダン
化炭化水素相；ヅメチルホルムアミドの如きアミド溶媒
類；ジメチルスルホキシドの如きスルホキシド溶媒類な
どを例示することができる。
礎の存在下に、式（１） ＩＪン脂質と前＾已糖類もし
くはその配糖体とを接触せしめることに」：り行うこと
ができる。利用する溶媒の例としては、水性溶媒及び水
性溶媒と有機溶媒との混合溶媒を例示することができる
。また、ホスホリパ−ゼＤＭの酵素学的触媒作用を阻害
しない任意の他の添加剤を倉む溶媒も利用でき、たとえ
ば該作用を促進したり、酵素の安定化に役立つφ当な添
加剤を含イイした溶媒であることができる。例オーば、
酢［ゼ２、クエン酸、リン酸などの緩衝剤を含有したり
、ｊＨしカルシウムその他の中性塩を含有したりした水
性溶媒であることができる。史ｌこ、有機溶媒の１列と
しては、汐１１えば、ｎ−ヘプタン、η、−ヘキザンな
どの如き脂肪族炭化水素順；シクロペンタン、シクロヘ
キサン、シクロブタンなどの如き脂ｉＭ ｋ Ｋ）化水
累類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの如き芳香族
炭化水素類；アセトン、メチルイソプロピルケトンなど
の如きケトン類；ツメチルエーテル、ジエチルエーテル
、ジイソプロピルエーテルなどの如きエーテル類；酢酸
メチル、酢酸エチルなどの如きエステル頚；四塩イヒＬ
で素、クロロホルム、塩化メチレンなどの如きハロダン
化炭化水素相；ヅメチルホルムアミドの如きアミド溶媒
類；ジメチルスルホキシドの如きスルホキシド溶媒類な
どを例示することができる。
水性溶媒と有機溶媒との混合溶媒の形で利用する場合の
両者の混合比は適当Ｖ（選択できるが、例えば水性溶媒
：有機溶聾：（ＶｌＶ比）の比で５０＝１〜１：１０の
如き混合比を例示することができる。
両者の混合比は適当Ｖ（選択できるが、例えば水性溶媒
：有機溶聾：（ＶｌＶ比）の比で５０＝１〜１：１０の
如き混合比を例示することができる。
反応モル化、ホスポリ・ぐ−ゼＤＭの使用量、溶媒の使
用１１などは、適宜１０選択できるが、例えば、式（１
）リン脂質１モルに対して式（ＩＴ）−級アルコール約
１：１０〜約１＝１００モルの反応モル比を例示するこ
とができるっまた、ホスポリ／ぐ一ゼＤＡ４の使用−と
しては、例えば、弐Ｎ）リン脂質１？当り約１００〜約
１０００単位８度の使用偵を例示することができる。さ
らＶＣ１溶媒の使用↑■と（〜ては、例えば、式（■）
リン脂質に対して約１０〜約５００容量倍程度の使用量
を例示できる。
用１１などは、適宜１０選択できるが、例えば、式（１
）リン脂質１モルに対して式（ＩＴ）−級アルコール約
１：１０〜約１＝１００モルの反応モル比を例示するこ
とができるっまた、ホスポリ／ぐ一ゼＤＡ４の使用−と
しては、例えば、弐Ｎ）リン脂質１？当り約１００〜約
１０００単位８度の使用偵を例示することができる。さ
らＶＣ１溶媒の使用↑■と（〜ては、例えば、式（■）
リン脂質に対して約１０〜約５００容量倍程度の使用量
を例示できる。
反応に１、室温で進行するので、とくに冷却或いは加熱
の必要はないが、所望ＶＣより適宜に冷却４１しくけ加
温条件を採用することができる。例えば、約２０〜約６
０℃の如き反応温度を例示することができる。才だ反応
時間も適宜に選択できるが、例えば約１時間〜約２４時
間の如き反応時間を例示することができる。所望により
、たとえばＴＬＣ−５３− （薄層クロマトグラフィー）などの手法を利用して反応
経過を追跡し、所ヤの目的物の形成を確ｈ３することに
より反応時間を適宜に変更することができろう ホスホリパーゼＤＭの存在下で式（Ｎリン脂質と前り己
糖伯もしくけそのフェノール妃糖体とを接触せしめる態
様は適宜に選択できるが、攪拌もしくけ振盪条件下で行
うのが普通である。Ｖ、前記のように適当な粉状物やフ
ィルム状物相体に担持固定イヒした固定イヒ酵素の形で
ホスポリ・ぐ−ゼＤＭを利用する場合ｒ（は、例えば、
同定化啼素嘩もしくは国定化酵未粒子層を介して反応組
成液を循環ポンプを用いて通過させる態様で行うことが
できる。
の必要はないが、所望ＶＣより適宜に冷却４１しくけ加
温条件を採用することができる。例えば、約２０〜約６
０℃の如き反応温度を例示することができる。才だ反応
時間も適宜に選択できるが、例えば約１時間〜約２４時
間の如き反応時間を例示することができる。所望により
、たとえばＴＬＣ−５３− （薄層クロマトグラフィー）などの手法を利用して反応
経過を追跡し、所ヤの目的物の形成を確ｈ３することに
より反応時間を適宜に変更することができろう ホスホリパーゼＤＭの存在下で式（Ｎリン脂質と前り己
糖伯もしくけそのフェノール妃糖体とを接触せしめる態
様は適宜に選択できるが、攪拌もしくけ振盪条件下で行
うのが普通である。Ｖ、前記のように適当な粉状物やフ
ィルム状物相体に担持固定イヒした固定イヒ酵素の形で
ホスポリ・ぐ−ゼＤＭを利用する場合ｒ（は、例えば、
同定化啼素嘩もしくは国定化酵未粒子層を介して反応組
成液を循環ポンプを用いて通過させる態様で行うことが
できる。
上述の」二うＩＣ（、て反応を行った後、形成されたリ
ン脂質糖類誘導体は、その育＼又に塩の形で分離して利
用することができる。中に、ケイ酸カラー ５４ − ムクロマト、アルミナカラムクロマト、高速液体クロマ
ト、向流分配、ケ゛ル濾過、吸着クロマト等の適当な公
知の方法を利用して分離精製することができる。
ン脂質糖類誘導体は、その育＼又に塩の形で分離して利
用することができる。中に、ケイ酸カラー ５４ − ムクロマト、アルミナカラムクロマト、高速液体クロマ
ト、向流分配、ケ゛ル濾過、吸着クロマト等の適当な公
知の方法を利用して分離精製することができる。
ホスホリンぐ−セ：ＤＩｙｌｖｃ疋るリン０旨質のオ店
への転移は、たとえばグルコース、がラクトース、マン
ノースなどの如く一層アルコール基を有する糖類につい
ては生起するが、たとえばフコース、ラムノースなどの
如く６−位がデオキシイ１ニされ、−級アルコール基を
持たない糖類ではゆらない事、グルコース、ガラクトー
ス乃びマノノースのリン脂質糖類４導不はいずれも７“
ＬＣで分離した時に生成物のスポットが一つである事、
さらＶＣｌ グルコースをピリヅン溶液中でトリフェ
ニルクロルメタ７１／Ｃ，１： リ処理して、該グルコ
ースの一層アルコール基をトリフェニルメタンで時孕し
ておくと転移が生じないこと等の薇からみて、ホスホリ
パーゼＤＭによるリン脂質の糖への転移は糖の一層アル
コール基の位置へ生ずるものと１・ＩＦ定さね５る。
への転移は、たとえばグルコース、がラクトース、マン
ノースなどの如く一層アルコール基を有する糖類につい
ては生起するが、たとえばフコース、ラムノースなどの
如く６−位がデオキシイ１ニされ、−級アルコール基を
持たない糖類ではゆらない事、グルコース、ガラクトー
ス乃びマノノースのリン脂質糖類４導不はいずれも７“
ＬＣで分離した時に生成物のスポットが一つである事、
さらＶＣｌ グルコースをピリヅン溶液中でトリフェ
ニルクロルメタ７１／Ｃ，１： リ処理して、該グルコ
ースの一層アルコール基をトリフェニルメタンで時孕し
ておくと転移が生じないこと等の薇からみて、ホスホリ
パーゼＤＭによるリン脂質の糖への転移は糖の一層アル
コール基の位置へ生ずるものと１・ＩＦ定さね５る。
本番１明方法ｖ（、Ｊ：れげ、−ヒ述した。ｍ ｆ）［
１，て、式＋１）リン１ｊ旨質と前１忙其ｑ頚も１．く
けそのフェノール醍壁体とを、ホスポリ・ぐ−ゼＤＭの
存在下に反応さ忙てリン脂質軸車１１誘導体を亀“」侍
することができる。＋Ｓられるリンｌ旨質看計ｒ自誘Ｊ
専［本は、すぐれ／ζ界面活性作用を４１シ細胞１ｉ版
の透過性ＶＣ大きな影響を持つ。この意味から、本発明
リン脂質糖類誘導体けり７］？ソーム形成基Ｈとして、
父、ｆヒ粧品たとえばクリーム、η、液に配合にて皮膚
生Ｊ：！ｌ！ ｖζ役立つ乳ｆヒ剤として、μ７ｖｃ脂
肪系薬剤の乳イに剤、般用ａ＋１、除曜剤の乳イヒ庁１
などの広い乳化間用途に有用である。
１，て、式＋１）リン１ｊ旨質と前１忙其ｑ頚も１．く
けそのフェノール醍壁体とを、ホスポリ・ぐ−ゼＤＭの
存在下に反応さ忙てリン脂質軸車１１誘導体を亀“」侍
することができる。＋Ｓられるリンｌ旨質看計ｒ自誘Ｊ
専［本は、すぐれ／ζ界面活性作用を４１シ細胞１ｉ版
の透過性ＶＣ大きな影響を持つ。この意味から、本発明
リン脂質糖類誘導体けり７］？ソーム形成基Ｈとして、
父、ｆヒ粧品たとえばクリーム、η、液に配合にて皮膚
生Ｊ：！ｌ！ ｖζ役立つ乳ｆヒ剤として、μ７ｖｃ脂
肪系薬剤の乳イに剤、般用ａ＋１、除曜剤の乳イヒ庁１
などの広い乳化間用途に有用である。
炉νこ、多くの）４１合、リン脂質ｒ１それそｆ′＋特
界斤生工４Ｐ活件を有す２．ことブ〕く知られているが
、本発明方法で得られる誘導体の多くは、その近ｆｌＪ
的構造を南するところから、各種の生理活性が期待でき
るっ又、各種医薬品を（・まじめとするイヒ学合成の中
間体として有用であり、史に又三重水素や１４Ｇでラベ
ルした糖類を転移することによってラベルされたリン脂
質訪→体が得られ、リン脂質の代謝経路の解明に利用す
る事も用来る。
界斤生工４Ｐ活件を有す２．ことブ〕く知られているが
、本発明方法で得られる誘導体の多くは、その近ｆｌＪ
的構造を南するところから、各種の生理活性が期待でき
るっ又、各種医薬品を（・まじめとするイヒ学合成の中
間体として有用であり、史に又三重水素や１４Ｇでラベ
ルした糖類を転移することによってラベルされたリン脂
質訪→体が得られ、リン脂質の代謝経路の解明に利用す
る事も用来る。
以ド、実施例により本発明方法実施の数態様しこついて
、四に詳しく例示する。
、四に詳しく例示する。
参考例１ ホスポリ・ぐ−ゼＤＭの調ル２゜前記（Ｑ′
）精製方法の項に従って、ノカルディオプシス属Ｎ０Ｔ
Ｔ９株［ＦＥＲＭ−ＰＡ６１３３ ］及びアクチノマデ
ューラ属Ｎｏ ３６２株〔ＦＥＲＭ−、ｌ’Ａ６１３２
］の夫々を用いて、該珀に記載したとおりの活性回収率
及び比活性でホスホリンぐ−ゼＤｌｌｌを得た。
）精製方法の項に従って、ノカルディオプシス属Ｎ０Ｔ
Ｔ９株［ＦＥＲＭ−ＰＡ６１３３ ］及びアクチノマデ
ューラ属Ｎｏ ３６２株〔ＦＥＲＭ−、ｌ’Ａ６１３２
］の夫々を用いて、該珀に記載したとおりの活性回収率
及び比活性でホスホリンぐ−ゼＤｌｌｌを得た。
ＷＪ、 施１ｆｌＪ １ （Ｒｕｍ＆ １〜Ａ ２０
）後掲第４表に示した下記式（１） ！］ン脂質−５
７−１ 基質■：Ｌ−α−レシチン、β、γ−ジミストイゾ（シ
グマ社） （１，２−ジテトラデカノイルー８ｎ−クリセロ−ルー
３−ホスホリルコリン）基質ｎ：Ｌ−α−レシチン、β
、ｒ−ジヘキサデシル（カルビオケムーベーリング社） （１，２−ジヘキサデシルー８ｎ−グリセロール−３−
ホスホリルコリン） 基質１１１ ： Ｌ−α−レシチンβ、γ−ヘキサデシ
リソン（（用土） ＋１．２−シクロヘキサデシリデンーＳ ｎ。
）後掲第４表に示した下記式（１） ！］ン脂質−５
７−１ 基質■：Ｌ−α−レシチン、β、γ−ジミストイゾ（シ
グマ社） （１，２−ジテトラデカノイルー８ｎ−クリセロ−ルー
３−ホスホリルコリン）基質ｎ：Ｌ−α−レシチン、β
、ｒ−ジヘキサデシル（カルビオケムーベーリング社） （１，２−ジヘキサデシルー８ｎ−グリセロール−３−
ホスホリルコリン） 基質１１１ ： Ｌ−α−レシチンβ、γ−ヘキサデシ
リソン（（用土） ＋１．２−シクロヘキサデシリデンーＳ ｎ。
−グリセロール−３−ホスホリルコリン）と、優掲第４
表に示（〜た多数種の糖類とを、後掲ＴＬＣｖこよる転
移生成物（リン脂〕ｕ糖類誘導体）ノ生成確認方法に従
って、ホスホリパーゼＤＭの存在下で反応させて、転移
生成物の形成を確認した。そのＲｆ値を後掲第４表に示
１７た。
表に示（〜た多数種の糖類とを、後掲ＴＬＣｖこよる転
移生成物（リン脂〕ｕ糖類誘導体）ノ生成確認方法に従
って、ホスホリパーゼＤＭの存在下で反応させて、転移
生成物の形成を確認した。そのＲｆ値を後掲第４表に示
１７た。
−５８−
Ｔ Ｌ Ｃｌｆｃよる転移生成物の生成確認方法ニー下
ｉ［暑ぐ１成 １％リン脂質乳化液 ０．１ ｍｅｏ、
４ Ａ４酢酸緩衝液（７）／１’５，７１
０．１ ｍ１０１Ａ４扁イにカルシウム水浴液
０．０５ ｍｌ蒸留水 ０．１ ｍｌ １０％糖類水溶液 ０．１Ｈの反応液Ｖ
Ｃ，ホスホリポリーゼＤＡｆ７ｋｌ容液０．１ ｄ（０
，２〜１．２ ｕ ／ ０．１ ｍｌ ）を加え、３７
°Ｃで１〜５時間尋１１う゛した１、 冑、−上記１％リン脂質乳化液は、リン脂′ａ１００ｍ
ｙ Ｖこジエチルニーデル１ゴ及び蒸留水１０ｍ６を加
え、水冷条件下に、６００１１し、２０ＫＩｉｚの条件
で５分間超音波処１・ｌ＋ Ｌ、て彫或する。
ｉ［暑ぐ１成 １％リン脂質乳化液 ０．１ ｍｅｏ、
４ Ａ４酢酸緩衝液（７）／１’５，７１
０．１ ｍ１０１Ａ４扁イにカルシウム水浴液
０．０５ ｍｌ蒸留水 ０．１ ｍｌ １０％糖類水溶液 ０．１Ｈの反応液Ｖ
Ｃ，ホスホリポリーゼＤＡｆ７ｋｌ容液０．１ ｄ（０
，２〜１．２ ｕ ／ ０．１ ｍｌ ）を加え、３７
°Ｃで１〜５時間尋１１う゛した１、 冑、−上記１％リン脂質乳化液は、リン脂′ａ１００ｍ
ｙ Ｖこジエチルニーデル１ゴ及び蒸留水１０ｍ６を加
え、水冷条件下に、６００１１し、２０ＫＩｉｚの条件
で５分間超音波処１・ｌ＋ Ｌ、て彫或する。
上記静間ｆ＆、５０ｍ、Ａ／のＥ ＤＴ Ａ−（エチレ
ンソアミン四酢酸）水溶液０．２ ｍｌｔを加え、唄に
クロロホルム−メタノール混液（２： ｌ Ｖ ／ Ｖ
） ５ ｒｄを加えて激しく攪拌し、脂質（生成物）
を抽出した。
ンソアミン四酢酸）水溶液０．２ ｍｌｔを加え、唄に
クロロホルム−メタノール混液（２： ｌ Ｖ ／ Ｖ
） ５ ｒｄを加えて激しく攪拌し、脂質（生成物）
を抽出した。
この懸ｒ３ｉｉ液を２０００Ｘｒの条件で１ｏ分間遠心
処〕・＋８シ、下１−のクロロホルム層を分取し、タロ
ロホルムーメタノール混液（１：ＩＶ／Ｖ）７５μｔに
溶解して１’ Ｌ Ｃの試料とした。このうち１０μｔ
をシリア’７ ’ｙ”＃４１＠ （フナ’ｒ”ル６０Ａ
、２０Ｘ２０鋸、フナコシ薬品）ＶＣスポット［７、ソ
イツブチルケトン−酢酸−水（４０：２５二５）を展開
溶媒として展開した。スポットの検ｆｉｌには下記の試
薬を用いた。検出されたスポットで未分解の基質及びそ
の加水分解吻（ホスファチジン酸及びその類縁体）以外
のリンｌＩＦ＋質のスポットが検出された場合、これを
転移生成物と認めた。
処〕・＋８シ、下１−のクロロホルム層を分取し、タロ
ロホルムーメタノール混液（１：ＩＶ／Ｖ）７５μｔに
溶解して１’ Ｌ Ｃの試料とした。このうち１０μｔ
をシリア’７ ’ｙ”＃４１＠ （フナ’ｒ”ル６０Ａ
、２０Ｘ２０鋸、フナコシ薬品）ＶＣスポット［７、ソ
イツブチルケトン−酢酸−水（４０：２５二５）を展開
溶媒として展開した。スポットの検ｆｉｌには下記の試
薬を用いた。検出されたスポットで未分解の基質及びそ
の加水分解吻（ホスファチジン酸及びその類縁体）以外
のリンｌＩＦ＋質のスポットが検出された場合、これを
転移生成物と認めた。
検出試薬
リンｅＶ （７）呈色： Ｚｉｎｚａｄｅの試薬（Ｂｅ
ｉｓｓＵ。
ｉｓｓＵ。
Ｊ、 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ １３．１０４．１９６４）
萌の呈−：ナフトレゾルシノールーリン酸試薬（ｆＩａ
ｇ Ｇ、Ｗ、 らＪ Ｃｈｒｏｒｎａｔｏ、ｇ １
．１．４７９．１９６３） アミノ糖の呈色ニアセチルアセトン−ニー・レリッヒＫ
ｍ（エルソンーモルガン反応、 Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ Ｓ０Ｍ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ、
４２．２３８．１９４８） 比較例１ 実施例Ｉ Ｖｃ於て、ホスホリパーゼＤＡ４の代りＶこ
、ギヤペラ由来の公知ホスホリパーゼＤ（Ｐ−ＬＢｉｏ
ｃｈ、ｅｍｉｃａ、ｌｓ Ｉｎｃ、 ）を用いるほかは
、実施例１と同様に行った。その結果、後掲第４表に示
したすべての糖類しこついて転移生成物の生成は望めら
れなかった。
萌の呈−：ナフトレゾルシノールーリン酸試薬（ｆＩａ
ｇ Ｇ、Ｗ、 らＪ Ｃｈｒｏｒｎａｔｏ、ｇ １
．１．４７９．１９６３） アミノ糖の呈色ニアセチルアセトン−ニー・レリッヒＫ
ｍ（エルソンーモルガン反応、 Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ Ｓ０Ｍ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ、
４２．２３８．１９４８） 比較例１ 実施例Ｉ Ｖｃ於て、ホスホリパーゼＤＡ４の代りＶこ
、ギヤペラ由来の公知ホスホリパーゼＤ（Ｐ−ＬＢｉｏ
ｃｈ、ｅｍｉｃａ、ｌｓ Ｉｎｃ、 ）を用いるほかは
、実施例１と同様に行った。その結果、後掲第４表に示
したすべての糖類しこついて転移生成物の生成は望めら
れなかった。
６１−
実施例２ （ｆｈｂｍ ＆ １〜Ａ ６ ）Ｌ−α−
１／シチン、β、ｒ−ソミリストイル（シグマケミカル
カンノぐニー１１１！９８係）４００肩？、ヅエチルエ
ーテル１ｍｅ、蒸憎水１０ｍｅをＭ 音波用セル１１こ
入れ、水冷しなから６００Ｗ、 ２ ｏＫＨｚで５分
間＋１召音Ｃ皮処理を１７、乳白％の乳化液を得た。
１／シチン、β、ｒ−ソミリストイル（シグマケミカル
カンノぐニー１１１！９８係）４００肩？、ヅエチルエ
ーテル１ｍｅ、蒸憎水１０ｍｅをＭ 音波用セル１１こ
入れ、水冷しなから６００Ｗ、 ２ ｏＫＨｚで５分
間＋１召音Ｃ皮処理を１７、乳白％の乳化液を得た。
このレシチン乳化液２が（レシチン８ｏ ｍ９）、０、
４Ａｉ＋昨ｒ＝Ｒｘ＆ イ１Ｊｔｉ？（１（ｐｆＪ５．
Ｔ ） ２ｍｅ 、 ｏ、 ｔ Ｍ ｆａ 化カ
ルシウム水溶液Ｌｍｌ、及び１０チロ−グルコサミン塩
酸塩水溶液２ ｍｌを共栓付試・暎菅中Ｖこ入れ、ホス
ホリ／４’−２０Ｍ水溶液（３ｇ／ｍ／り２ｍｌを加え
て疋〈混合した後、３７℃で４時＋１ＪＩ Ｔ作置した
。
４Ａｉ＋昨ｒ＝Ｒｘ＆ イ１Ｊｔｉ？（１（ｐｆＪ５．
Ｔ ） ２ｍｅ 、 ｏ、 ｔ Ｍ ｆａ 化カ
ルシウム水溶液Ｌｍｌ、及び１０チロ−グルコサミン塩
酸塩水溶液２ ｍｌを共栓付試・暎菅中Ｖこ入れ、ホス
ホリ／４’−２０Ｍ水溶液（３ｇ／ｍ／り２ｍｌを加え
て疋〈混合した後、３７℃で４時＋１ＪＩ Ｔ作置した
。
そのでハ この反応液１／Ｃ０，５Ｎ塩酸を０．５ ｍ
ｌ加えて反応ヲ停止ト、（７、クロロホルム−メタノー
ル（２：１）混液１５ゴを加えて激しく振ってリン脂質
を抽出した。この混、合液を２００ ｆ） Ｘ ？、１
０分間遠ノｂし、下＋Ｊのクロロホルム層を分取した。
ｌ加えて反応ヲ停止ト、（７、クロロホルム−メタノー
ル（２：１）混液１５ゴを加えて激しく振ってリン脂質
を抽出した。この混、合液を２００ ｆ） Ｘ ？、１
０分間遠ノｂし、下＋Ｊのクロロホルム層を分取した。
−ヒ層−６３−
の水ＶＣｉｄ 、Ｅ＜ ｖＣクロロホルム１０ゴを加え
て同様の抽出操作を行ない、クロロホルムトメ）を合わ
せ、次いでこれに１０ｍ１．の０１０２Ｎ塩酸を加えて
洗浄した。この況合液から遠心によって再びクロロホル
ム層を分取し、減圧１〃固した後、１ ｍｌのｎ−ヘキ
サン−２−ｆロバノール−水（６０：８０ニア）混液ン
Ｃ溶解した。
て同様の抽出操作を行ない、クロロホルムトメ）を合わ
せ、次いでこれに１０ｍ１．の０１０２Ｎ塩酸を加えて
洗浄した。この況合液から遠心によって再びクロロホル
ム層を分取し、減圧１〃固した後、１ ｍｌのｎ−ヘキ
サン−２−ｆロバノール−水（６０：８０ニア）混液ン
Ｃ溶解した。
この７式別２０μｔをシリカゲル４；６９層（フナダル
、フナコシ薬品）ＶＣスポット（７、ジイソブチルケト
ン−１で「酸−水（４０： ２５ ： ｓ ）のＵ媒系
で展開したところ、３手＠づ頂のリン１１旨ノＩＩがオ
灸出された。イこのうちの二つはホスファチヅ／［俊及
びレシチンとＲｆ値が一致し、残りの一つはニンヒドリ
ン試薬及びアセチルアセトン−ゴー−ルリツヒ試薬で呈
色した。
、フナコシ薬品）ＶＣスポット（７、ジイソブチルケト
ン−１で「酸−水（４０： ２５ ： ｓ ）のＵ媒系
で展開したところ、３手＠づ頂のリン１１旨ノＩＩがオ
灸出された。イこのうちの二つはホスファチヅ／［俊及
びレシチンとＲｆ値が一致し、残りの一つはニンヒドリ
ン試薬及びアセチルアセトン−ゴー−ルリツヒ試薬で呈
色した。
そこでこのリン脂″質混合−勿を楯速液体クロマトグラ
フィーによるｔ前車すに供した。カラムはラソアル−６
４− ノぐツタカートリッジシリカ８ｒｒｍＸ１０ｃｒｎ（ウ
ォーター、ｅ 社製）、溶離液し↑ｎ−ヘキサンーコー
プローぐノール−水（６ｏ：ｓｏニア）、ピークの検出
ＶこＶｉ４４１型紫外線型出外線検出器ターズ社）によ
る２１４門の吸収、及びＲ４０１型示差屈折計（同）を
用いた。試料は４回に分け、０．２５ｍｇづつ注入した
。この操作ＶＣよってホスファチジン酸と、ホスファチ
ノン酸のグルコサミンエステルの２種類のリン脂質を分
画し、次いで溶離液をｎ−ヘキサン−２−プロノぞノー
ル−水（６０：８０：１４）に変えて、カラムに吸着し
ているレシチンを溶出した。得られた３Ｎ類のリン脂質
に薄層クロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフ
ィーｒζよっていずれも単一であることが確−沼された
。
フィーによるｔ前車すに供した。カラムはラソアル−６
４− ノぐツタカートリッジシリカ８ｒｒｍＸ１０ｃｒｎ（ウ
ォーター、ｅ 社製）、溶離液し↑ｎ−ヘキサンーコー
プローぐノール−水（６ｏ：ｓｏニア）、ピークの検出
ＶこＶｉ４４１型紫外線型出外線検出器ターズ社）によ
る２１４門の吸収、及びＲ４０１型示差屈折計（同）を
用いた。試料は４回に分け、０．２５ｍｇづつ注入した
。この操作ＶＣよってホスファチジン酸と、ホスファチ
ノン酸のグルコサミンエステルの２種類のリン脂質を分
画し、次いで溶離液をｎ−ヘキサン−２−プロノぞノー
ル−水（６０：８０：１４）に変えて、カラムに吸着し
ているレシチンを溶出した。得られた３Ｎ類のリン脂質
に薄層クロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフ
ィーｒζよっていずれも単一であることが確−沼された
。
その３祠α自の］利率（モル比）はホスファチヅン酸約
４０弼、転移生成′吻約２０％、レシチン約４０％で、
イ元）す、約１２ｎ夕のホスファチジンｍ−ダルコザミ
ンエステルが得られた。この化合へ勿のＩＲスペクトル
ｔま、日本分光Ａ２０２型亦外分光光度計を用い、薄膜
法で測定した。
４０弼、転移生成′吻約２０％、レシチン約４０％で、
イ元）す、約１２ｎ夕のホスファチジンｍ−ダルコザミ
ンエステルが得られた。この化合へ勿のＩＲスペクトル
ｔま、日本分光Ａ２０２型亦外分光光度計を用い、薄膜
法で測定した。
その結果を第５表に示した（ｌｌｕｍ扁３）。
第５表に示した他の糖類を用いて、上記と同様に行った
。その結果を第５表に示した（Ｒｕｍｌｉ１〜２及び４
〜６）。
。その結果を第５表に示した（Ｒｕｍｌｉ１〜２及び４
〜６）。
実施例３（ＲｗｍｙＫ、１〜扁６）
Ｌ−α−レシチン、β、γ−ヅヘキサデシル（カルビオ
ケムーベーリング社製）４００ヤシエチルエーテル１ゴ
及び蒸留水１０ｒｎ！、の混合物を実施例２と同様の方
法で乳化させ、この乳化液２ｒｎｌを用いて、以下、実
施例２と同様の寸法で反応を行なった。ただし１．糖類
として、リボースの１０チ水溶液を用いた。
ケムーベーリング社製）４００ヤシエチルエーテル１ゴ
及び蒸留水１０ｒｎ！、の混合物を実施例２と同様の方
法で乳化させ、この乳化液２ｒｎｌを用いて、以下、実
施例２と同様の寸法で反応を行なった。ただし１．糖類
として、リボースの１０チ水溶液を用いた。
この反応液を実施例２と同様に処理して、転移生成物１
０〜を得た。
０〜を得た。
この化合物のＩｎスペクトルを第６表に示した（ Ｒｔ
ｔｒｒＬＡｌ ）。また、第６表に示した他の糖類を用
いて、上記と同様に行なった。その結果を第６表に示し
た（ Ｒｕｍ Ａ ２〜６ ）。
ｔｒｒＬＡｌ ）。また、第６表に示した他の糖類を用
いて、上記と同様に行なった。その結果を第６表に示し
た（ Ｒｕｍ Ａ ２〜６ ）。
−６８−
′ｊ！ ノイ＋ｊ（９１１４（Ｒｒｂｍ＆ １〜＆、
６）Ｌ−α−レシチンβ、γ−ヘキサデシリジン（カル
ビオケムーベーリング社Ｗ ） ４００ ｍ９ｆ実ｊ（
Ｑ汐１１２と同ドｆ、＋の方法で乳イヒし、ｆ３ Ｑ
＃Ｉ１７相当の乳化液を用い、転移反応の受容体として
フラクトースをツノ１］え以下、実画例２と同様の方法
で反応、抽出、精製を行なった。その結果転移生成物Ｌ
２７ｎｇを得た。そのＪＲスペクトルを第７表に示し
た（ｉｌｕｒｎ、五２）。第７表に示した他の糖類を用
いて上り己ど同様ＶＣ行なった。ぞの結果を第７表に示
した（Ｒｕｍ、ｉｌ及びＡ ３〜６ ）。
６）Ｌ−α−レシチンβ、γ−ヘキサデシリジン（カル
ビオケムーベーリング社Ｗ ） ４００ ｍ９ｆ実ｊ（
Ｑ汐１１２と同ドｆ、＋の方法で乳イヒし、ｆ３ Ｑ
＃Ｉ１７相当の乳化液を用い、転移反応の受容体として
フラクトースをツノ１］え以下、実画例２と同様の方法
で反応、抽出、精製を行なった。その結果転移生成物Ｌ
２７ｎｇを得た。そのＪＲスペクトルを第７表に示し
た（ｉｌｕｒｎ、五２）。第７表に示した他の糖類を用
いて上り己ど同様ＶＣ行なった。ぞの結果を第７表に示
した（Ｒｕｍ、ｉｌ及びＡ ３〜６ ）。
り’ −７０−実施例
５ （Ｒ？Ｌｍ＆ １ ｍＡ ５ ）Ｌ−α−ホスフ
ァチヅルエタノールアミン、β、γ−ノミリストイル（
■）、Ｌ−α−ホスファチツルＮ−メチルエタノールア
ミン、β、ｒ−シミリストイル（Ｔｌ）、Ｌ−α〜ホス
ファチツルーＤＬ−グリセロールβ、ｒ−ノミリストイ
ル（■）Ｃ以上、いずれもカルビオケムーベーリング社
）Ｌ−α−ホスファチヅルセリン（ＩＶ）１７７７社）
及び３． Ｆ、 Ｙａｎｇら（Ｊ、 Ｂｉｏｌ Ｃｈｇ
ｍ、 ２４２．４７７．１９６７）の方法で調整したＬ
−α−ホスファチソエタノールβ、ｒ−ノミリストイル
（Ｖ）を実施例２と同様の方法で乳化した。各リン脂質
５０■を含む乳化液１．５ ｍｅをそれぞれ別の共栓付
試験管に入れ、アルコールとしてリボースの１０チ水溶
液１ｍｌ、０．４Ｍ酢酸緩衝液１ば、蒸留水１ｍ７！、
ｏ、 ＯＩ Ｍ塩イヒカルシウム水溶液０．５ ｍＡを
加、（テ、更ｒＣ、コノ反応液を６００Ｗ、２ｏＫｌｌ
ｚ、１分間超音波処理した。次いで各反応液Ｖ（ホスホ
ＩＪ ／−１’−ゼＤＭ水溶液（８ｕ／ゴ）１ノ艷づつ
力日え、３７°Ｇで６時間静置した。以下、リン脂質の
抽出及び精製は実姉例２と同様に処理し、共通の転移生
成物でめるホスファチジン醒−リボースエステルを沓た
。収晴け■しく対して９ｍｙ、Ｈに対して６■、１ｆｆ
Ｖｃ附して９ Ｔｎｑ、■ＶＣ対して４〜、Ｖｒ（対し
て６７７２であった。そのＩｎスペクトルを第８表Ｖこ
示した。
５ （Ｒ？Ｌｍ＆ １ ｍＡ ５ ）Ｌ−α−ホスフ
ァチヅルエタノールアミン、β、γ−ノミリストイル（
■）、Ｌ−α−ホスファチツルＮ−メチルエタノールア
ミン、β、ｒ−シミリストイル（Ｔｌ）、Ｌ−α〜ホス
ファチツルーＤＬ−グリセロールβ、ｒ−ノミリストイ
ル（■）Ｃ以上、いずれもカルビオケムーベーリング社
）Ｌ−α−ホスファチヅルセリン（ＩＶ）１７７７社）
及び３． Ｆ、 Ｙａｎｇら（Ｊ、 Ｂｉｏｌ Ｃｈｇ
ｍ、 ２４２．４７７．１９６７）の方法で調整したＬ
−α−ホスファチソエタノールβ、ｒ−ノミリストイル
（Ｖ）を実施例２と同様の方法で乳化した。各リン脂質
５０■を含む乳化液１．５ ｍｅをそれぞれ別の共栓付
試験管に入れ、アルコールとしてリボースの１０チ水溶
液１ｍｌ、０．４Ｍ酢酸緩衝液１ば、蒸留水１ｍ７！、
ｏ、 ＯＩ Ｍ塩イヒカルシウム水溶液０．５ ｍＡを
加、（テ、更ｒＣ、コノ反応液を６００Ｗ、２ｏＫｌｌ
ｚ、１分間超音波処理した。次いで各反応液Ｖ（ホスホ
ＩＪ ／−１’−ゼＤＭ水溶液（８ｕ／ゴ）１ノ艷づつ
力日え、３７°Ｇで６時間静置した。以下、リン脂質の
抽出及び精製は実姉例２と同様に処理し、共通の転移生
成物でめるホスファチジン醒−リボースエステルを沓た
。収晴け■しく対して９ｍｙ、Ｈに対して６■、１ｆｆ
Ｖｃ附して９ Ｔｎｑ、■ＶＣ対して４〜、Ｖｒ（対し
て６７７２であった。そのＩｎスペクトルを第８表Ｖこ
示した。
手続補正書
昭和５９年 ７月１１日
特許庁侵１゛（志 賀 学 殿
１、事件の表示
！′ｇ願昭５８−６３３０６号
２、発明の名称
酵素法リン脂質糖類誘導体の製法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
住 所 愛知県名古屋南西１乞蛍：塚町２−４１名 称
基軸産業（朱式会社 （氏 名） ４、代 理 人〒１０７ （肯か１名） 別紙のとおり （別紙） （］） 明細書第５頁下から５行に、「３ケの」とあ
ろを、 「３ケ以」―のＪ と訂正する。
基軸産業（朱式会社 （氏 名） ４、代 理 人〒１０７ （肯か１名） 別紙のとおり （別紙） （］） 明細書第５頁下から５行に、「３ケの」とあ
ろを、 「３ケ以」―のＪ と訂正する。
（２） 明細書第６頁６行に、「１３ｉｏｃｈａｍ」
とあろを、１’ Ｂ １ｏｃｈ、ｅｍ ｊ と訂正する。
とあろを、１’ Ｂ １ｏｃｈ、ｅｍ ｊ と訂正する。
（３）明細書第６頁下から４〜３行に、［Ｄａｕｓｓｏ
ｎ ；Ｂｉｏｃｈ、ｅｔｎ、、Ｔ、、 １０２．２０
５ ［１９６５）ｊとあるを、 「Ｄａｗｓｏｎ ； ｉノｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 １
０２．２０５ （１９６７）ｊ と訂正する。
ｎ ；Ｂｉｏｃｈ、ｅｔｎ、、Ｔ、、 １０２．２０
５ ［１９６５）ｊとあるを、 「Ｄａｗｓｏｎ ； ｉノｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 １
０２．２０５ （１９６７）ｊ と訂正する。
（４） 明細書第１３頁下から３行に、「ローリボー
ス」と必ろを、 「Ｄ−リボース」 −】− と訂正する。
ス」と必ろを、 「Ｄ−リボース」 −】− と訂正する。
（５）明細書第１３頁下行に、ｆ−Ｌ−キシルロース」
とある後に、 「、α又はβ−メチルキシロサイド、２−０−メチルキ
シロース、β−メチル−Ｄ又ｎＬ−アラビノサイド」 と加入する。
とある後に、 「、α又はβ−メチルキシロサイド、２−０−メチルキ
シロース、β−メチル−Ｄ又ｎＬ−アラビノサイド」 と加入する。
（６）明細書第１４頁３〜４行に、「Ｄ−フラクトース
」とある後に、 「、α又けβ−メチルガラクトサイド、α又けβ−メチ
ルグルコサイド、α又はβ−メチルマンノサイド、３−
０−メチルグルコース、１−チオ−β−ガラクトース、
β−チオグルコース、５−チオグルコース、メチル−β
−チオガラクトサイド、エチル−β−チオグルコザイド
、ハイドロキシエチル−１−チオ−ガラクトサイド、２
−デオキシガラクトース、α−クロラロースｊ ２− と加入する。
」とある後に、 「、α又けβ−メチルガラクトサイド、α又けβ−メチ
ルグルコサイド、α又はβ−メチルマンノサイド、３−
０−メチルグルコース、１−チオ−β−ガラクトース、
β−チオグルコース、５−チオグルコース、メチル−β
−チオガラクトサイド、エチル−β−チオグルコザイド
、ハイドロキシエチル−１−チオ−ガラクトサイド、２
−デオキシガラクトース、α−クロラロースｊ ２− と加入する。
（力 明細書第１４頁５行に、「セドヘプツロース」と
ある後に、 「、Ｄ−グルコヘプツロース、Ｄ−マンノヘプツロース
」 と加入する。
ある後に、 「、Ｄ−グルコヘプツロース、Ｄ−マンノヘプツロース
」 と加入する。
（８）明細書第１４頁９〜１０行に、「Ｎ−アセチル−
Ｄ−マンノサミン」とある後に、 「、メチル−３−アミノ−３−デオキシ−β−グルコサ
イド、メチル−３−アミノ−３−デオキシ−β−マンノ
サイド、ストレプトシトシン」と加入する。
Ｄ−マンノサミン」とある後に、 「、メチル−３−アミノ−３−デオキシ−β−グルコサ
イド、メチル−３−アミノ−３−デオキシ−β−マンノ
サイド、ストレプトシトシン」と加入する。
（９） 明細書第１４頁１１行に、「アルブチン」と
ある後に、 ｌｒ、ｔ−０−フェニルα又けβ−グルコサイド、１−
０−フェニルα又けβ−ガラクトサイド、Ｏ−ニトロフ
ェニルα又はβ−ガラクトサイ３− ｍ −＝ トロフェニルα又は汐−ガラクトザイド、 ｐ−ニトロフェニルα又はβ−ガラクトザイド、 ｐ−二トロフェニルα又ハβ−グルコサイト、Ｏ−ニト
ロフェニルα又ｄβ−グルコサイト、ｐ−二トロフェニ
ルα又はβ−マンノサイド、ｐ−ニトロフェニル−１−
チオーβ−カラクトサイド、 Ｏ−ニトロフェニル−１−チオ−メーカラクトサイ ド
、 ｐ−ニトロフェニル−１−ｆオーβ−グルコサイ ド、 Ｏ−ニトロフェニル−β−キシ０ ＠ｊ４ ）’、ｐ−
ニトロフェニル−β−キシロサイト、フェニル−α又は
β−チオガラクトサイド、マンデルニトリルグルコザイ
ド」 と加入する。
ある後に、 ｌｒ、ｔ−０−フェニルα又けβ−グルコサイド、１−
０−フェニルα又けβ−ガラクトサイド、Ｏ−ニトロフ
ェニルα又はβ−ガラクトサイ３− ｍ −＝ トロフェニルα又は汐−ガラクトザイド、 ｐ−ニトロフェニルα又はβ−ガラクトザイド、 ｐ−二トロフェニルα又ハβ−グルコサイト、Ｏ−ニト
ロフェニルα又ｄβ−グルコサイト、ｐ−二トロフェニ
ルα又はβ−マンノサイド、ｐ−ニトロフェニル−１−
チオーβ−カラクトサイド、 Ｏ−ニトロフェニル−１−チオ−メーカラクトサイ ド
、 ｐ−ニトロフェニル−１−ｆオーβ−グルコサイ ド、 Ｏ−ニトロフェニル−β−キシ０ ＠ｊ４ ）’、ｐ−
ニトロフェニル−β−キシロサイト、フェニル−α又は
β−チオガラクトサイド、マンデルニトリルグルコザイ
ド」 と加入する。
００ 明細」、第１４頁下から５行に、「ラクトース
、」とあろ後に、 「メリヒオース、インマルト−ス、」 と加入する。
、」とあろ後に、 「メリヒオース、インマルト−ス、」 と加入する。
０１） 明細書第１８頁の第１表中、［アクヂノマデ
ューラ属ホスホリパーゼｌ） Ｊｌ（Ｊの欄の「ホスフ
ァチジン酸転移活性」の項の４行目に「転移し、」とあ
る後に、 「ペントース、ヘキソースなどの糖ａ及び」と加入する
。
ューラ属ホスホリパーゼｌ） Ｊｌ（Ｊの欄の「ホスフ
ァチジン酸転移活性」の項の４行目に「転移し、」とあ
る後に、 「ペントース、ヘキソースなどの糖ａ及び」と加入する
。
Ｏ２明細書第２５貞７行及び第３２頁５行に、それぞれ
、［Ｂｅｃｔｅｒｉｏｌｏｇｈ Ｊとあろを、Ｆ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 」 と訂正する。
、［Ｂｅｃｔｅｒｉｏｌｏｇｈ Ｊとあろを、Ｆ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 」 と訂正する。
０３）明細書第２７頁２〜３行に、「全て利できろ。」
とあるを、 「全て利用できる。」 と訂正する。
とあるを、 「全て利用できる。」 と訂正する。
０４１ 明細書箱２７頁末行に、「螺線状」とあるを
、「螺旋状」 と訂正する。
、「螺旋状」 と訂正する。
０５）明細書第２８頁９〜１０行に、「胞子のり」とあ
るを、 「胞子のう」 と訂正する。
るを、 「胞子のう」 と訂正する。
ａＯ明細書記３０＠の表中、下から４行に、「Ｙ−ｔ−
１９Ｊとあるを、 「ヒ）’−１−１９」 と訂正する。
１９Ｊとあるを、 「ヒ）’−１−１９」 と訂正する。
（ｌＴＩ 明細書第３５頁下から２行に、「ホスポリ
・ぐ−ゼＤ」とあろを、 「ホスホリパーゼＤＭ」 ６− と訂正する。
・ぐ−ゼＤ」とあろを、 「ホスホリパーゼＤＭ」 ６− と訂正する。
（川 明細書第１８頁末行の式を、以下のとおり訂正す
乙。
乙。
（ｌ″ ＣＤ２０ＣＯＲ
凄
ＲＣ００Ｃ／／ Ｏ□
１１
Ｃ１ｆ２０−Ｐ−０−Ｆ Ｎ−塩基）
Ｃ１１２０ＣＯＲ
一
」
０ヒ・ 明細書第４３頁４行に、「酸素溶液」とめる
を、 「酵素溶液」 と訂正する。
を、 「酵素溶液」 と訂正する。
Ｉ２ａ 明細書第４４員７行に、［ＦｅＣｌ２十とあ
ろをＦＦｅＣ１３」 ７− と訂ｒＥする。
ろをＦＦｅＣ１３」 ７− と訂ｒＥする。
シ１１ 明細書第４４自１１行に、「ＦｅＣｌ、、
、Ｆ ｅＣ１４Ｊとあろを、 ’ｆＦｅｓｏ４、ＦｅＣｌ２、ｊ と訂正する１゜ 欅 明細書第４５頁下から５行に、［Ｍ ｇＳ Ｏ４Ｊ
とあ石を、 「１１１ｇＳＯ４・７１１２０」 と訂正する。
、Ｆ ｅＣ１４Ｊとあろを、 ’ｆＦｅｓｏ４、ＦｅＣｌ２、ｊ と訂正する１゜ 欅 明細書第４５頁下から５行に、［Ｍ ｇＳ Ｏ４Ｊ
とあ石を、 「１１１ｇＳＯ４・７１１２０」 と訂正する。
ｗ’ｎ 明細書第４７０下から２行に、「ＰＪ３Ｅ９
４ｊとあるを ＴＰＢＩ’： ”Ｎ９４ｊ と訂正す７−）。
４ｊとあるを ＴＰＢＩ’： ”Ｎ９４ｊ と訂正す７−）。
Ｃ４）明細１第４９貞下から５〜４行に、「形成［７な
いことが知らハている。−１とあろを、「形成すること
は知られていない。！ と訂正す１３゜ ＯＳ 四組１１゛第５３頁２〜３行に「−級アルコー
ル」とある後に、 「約１：１〜約１：１０００、好ましくは」と加入する
。
いことが知らハている。−１とあろを、「形成すること
は知られていない。！ と訂正す１３゜ ＯＳ 四組１１゛第５３頁２〜３行に「−級アルコー
ル」とある後に、 「約１：１〜約１：１０００、好ましくは」と加入する
。
（ハ）明細書第５３頁６行に、「脂質１１当り」とある
後に、 ｆ約１０〜約１００，０００、好才［７ぐは」と加入す
る。
後に、 ｆ約１０〜約１００，０００、好才［７ぐは」と加入す
る。
（５）明細書第５３頁下から４行に、「約２０℃」とあ
る前、 「約０°Ｃ〜約９０°Ｃ１好ましくは」と加入する。
る前、 「約０°Ｃ〜約９０°Ｃ１好ましくは」と加入する。
（２８）明細書第５３頁下から２行に、「約１時間」と
あろ前に、 「約１分〜約１０口、好才１． ＜ ｌｄ約０．１時間
〜約７２時間、更に好１しくは約１時間〜約７２時間、
とくに好ましくけ」 と加入する。
あろ前に、 「約１分〜約１０口、好才１． ＜ ｌｄ約０．１時間
〜約７２時間、更に好１しくは約１時間〜約７２時間、
とくに好ましくけ」 と加入する。
磯 明細書第５６白下から５行に、「除草剤の乳化剤な
ど」とあるを、 「除草剤などの如き農薬の乳化剤など」と訂正する。
ど」とあるを、 「除草剤などの如き農薬の乳化剤など」と訂正する。
（至）明細書＠５８頁１〜２行に、「ジミストイゾ」と
あろを、 「シミリストイル」 と訂正する。
あろを、 「シミリストイル」 と訂正する。
Ｇυ 明細書第６０画３行に、「分取［２、」とある後
に、 「３０℃で減圧乾固［７た後、」 と加入する１、 ２０釧」とあろを、 「６０ Ａ、 ２０ａｎ×２０ｚｊ と訂正する。
に、 「３０℃で減圧乾固［７た後、」 と加入する１、 ２０釧」とあろを、 「６０ Ａ、 ２０ａｎ×２０ｚｊ と訂正する。
１０−
（３′怜 明細書第６２頁の第４表中、第１欄左端に
１−Ｒｕ包２通」とあるを、 「Ｒｕガ、Ａ」 と訂正する。
１−Ｒｕ包２通」とあるを、 「Ｒｕガ、Ａ」 と訂正する。
（３４＋ 明細書第６３頁１行に、「ＲｕｍＡＩＪと
あろを、 ［「Ｒｕｍ Ａ １ 、Ｑ と訂正する。
あろを、 ［「Ｒｕｍ Ａ １ 、Ｑ と訂正する。
３つ 明細書第６３頁９〜１０行に、「ローグルコサミ
ン」とあるを、 ’ＦＤ−グルコサミン」 と訂正する。
ン」とあるを、 ’ＦＤ−グルコサミン」 と訂正する。
（３ｔｉｌ 明細１第６５頁２〜３行に、 「コーク
０ロノゼノール」とあ乙を、 「２−ｆロバノール」 と訂正する。
０ロノゼノール」とあ乙を、 「２−ｆロバノール」 と訂正する。
！３７１ 明細書第６６頁２行に、「赤外」とあろを
、−１１− 正赤外、！ｌ と訂正する。
、−１１− 正赤外、！ｌ と訂正する。
Ｃ弱 明細書第６６頁３行に、「薄膜法］とあろを、「
液膜法」 と訂正する。
液膜法」 と訂正する。
（（！ｌ 明細書第６６頁４行に、「Ｒｕ ｍ Ａ ３
Ｊとｆｉ−）乙を、 「ＲｒＬｎ 扁３」 と訂正する。
Ｊとｆｉ−）乙を、 「ＲｒＬｎ 扁３」 と訂正する。
顛 明細書第６６頁６行に、１Ｒｕｔｎ、ＡＪとあろを
、「Ｒｕｎ 漸」 と訂正する。
、「Ｒｕｎ 漸」 と訂正する。
（４１）明細書第６７頁の第５表中、第１欄左端に「Ｒ
ｕｍ 屋」とめろを、 「Ｒｕｒｔ Ａ」 と訂正する。
ｕｍ 屋」とめろを、 「Ｒｕｒｔ Ａ」 と訂正する。
（穏 明細書第６７頁の第５表中、ＲｕｎＡ１の欄に、
「ローリボース」とあろを、 「Ｄ−リｙｌｒ−スＪ と訂正する。
「ローリボース」とあろを、 「Ｄ−リｙｌｒ−スＪ と訂正する。
（４漕 四面１書第６８頁１行に、「Ｒｕｔｎ Ａ
Ｉ Ｊとあろを、 「Ｒ７ａｎＡ１ｊ と訂正する。
Ｉ Ｊとあろを、 「Ｒ７ａｎＡ１ｊ と訂正する。
（伺 明細書第６８頁６行に、「寸法」とろろを、Ｗ方
法」 と訂正する。
法」 と訂正する。
（４５１明細書第６８頁１２行及び末行に、それぞれ「
Ｒ？ｔ ？７Ｚ Ａ 、Ｊ とあろを、「Ｒｕｎ 篇」 と訂正する。
Ｒ？ｔ ？７Ｚ Ａ 、Ｊ とあろを、「Ｒｕｎ 篇」 と訂正する。
（４θ 明細書第６９頁の第６衣中、第１欄左端に、「
Ｒｕｍ扁」とあろを、 「Ｒ？Ｚｎ 通」 と訂正する。
Ｒｕｍ扁」とあろを、 「Ｒ？Ｚｎ 通」 と訂正する。
（４７）明細書第７０頁１行、８行及び末行に、それぞ
れ、「Ｒｒｔｍ」とあろを、 （ｆＲｒｂｎ」 と訂正する。
れ、「Ｒｒｔｍ」とあろを、 （ｆＲｒｂｎ」 と訂正する。
（４８）明細書第７１頁の第７表中、第１欄左端に、「
Ｒ１Ｌ淋扁」とあろを、 「Ｒｕ７＋ 属」 と訂正する。
Ｒ１Ｌ淋扁」とあろを、 「Ｒｕ７＋ 属」 と訂正する。
（４９）明細書第７１負の第７表中、ＲｕｎＡ６のＩ
Ｒｕつａ工の４番目の数値「２４６５Ｊを、「１４６５
」 と訂正する。
Ｒｕつａ工の４番目の数値「２４６５Ｊを、「１４６５
」 と訂正する。
６０）明細書第７２頁１行に、ＦＲｕｍＡＪとあるを、
ＩｒＲｑｂｎ 遥」 と訂正する。
ＩｒＲｑｂｎ 遥」 と訂正する。
５１） 明細書第７４負の第８表中、第１欄左端に、
−１４− 「Ｒｕｍ Ａ」とあろを、 ７Ｒｕｎ Ａｊ と訂正する。
−１４− 「Ｒｕｍ Ａ」とあろを、 ７Ｒｕｎ Ａｊ と訂正する。
（５鎧 明細書第６２頁の第４表の末尾に、以下のと
おり加入する。
おり加入する。
＼
１５−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、下記式（１） ％式％（） 但し式中、 Ａ ）：ｊ： ＣＨ２−Ｒ，。 ＣＨ−Ｒ２（１） ＯＨ２− を示し、ここで、Ｒ１及びＲ２け共に −−ｏ−ｃ ＯＲ＋ １であるか、もしくは共に一〇−
Ｒ。 であるか、もしくけ式（１）においてＲ１とこで、ｎｌ
（ま１１〜１９の数を示す〕を表わし上記に於て、Ｒ１
，及び”＋２は同一でも異っていてもよく、夫々、Ｃ７
〜Ｃ２１の飽和もしくは不飽和の脂肪族炭化水素基を示
し、 Ｂは＝（ＣＨ２）２ＮＩＣＨｓ）ｓ 、（ＣＨ２）２Ｎ
Ｈ２、−ＣＨ，ＣＤ （ＮＨ２） Ｃ０ＯＨ，−ＣＨ，
ＣＨ２ＮＨ（ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ，）、
、−ＣＨ２ＣＩｉＯＨＣＨ３ＯＨもしく ｎ −（Ｃ
Ｈ，） ｒｎＨＣコこで、ｍは１〜５の数を示す〕を示
す、 で表わされるリン脂質と、 少なくとも１ケの一級アルコール基を含み、且つ全体で
（−級アルコール基のＯＨを包含して）ノ基もしくはア
セチルアミノ基で置換されていてもよい、又はこれら糖
類のフェノール配糖体とを、ホスホリ）Ｒ−ゼＤＭの存
在下に反応させることを特徴とするリン脂質糖＠誘導体
の製法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58063306A JPS59187792A (ja) | 1983-04-11 | 1983-04-11 | 酵素法リン脂質糖類誘導体の製法 |
| DE8484302445T DE3476771D1 (en) | 1983-04-11 | 1984-04-10 | Enzymatic production of phospholipid-saccharide derivatives |
| US06/598,699 US4624919A (en) | 1983-04-11 | 1984-04-10 | Enzymatic production of phospholipid-saccharide derivatives |
| EP84302445A EP0125039B1 (en) | 1983-04-11 | 1984-04-10 | Enzymatic production of phospholipid-saccharide derivatives |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58063306A JPS59187792A (ja) | 1983-04-11 | 1983-04-11 | 酵素法リン脂質糖類誘導体の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59187792A true JPS59187792A (ja) | 1984-10-24 |
| JPH0378115B2 JPH0378115B2 (ja) | 1991-12-12 |
Family
ID=13225470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58063306A Granted JPS59187792A (ja) | 1983-04-11 | 1983-04-11 | 酵素法リン脂質糖類誘導体の製法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4624919A (ja) |
| EP (1) | EP0125039B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59187792A (ja) |
| DE (1) | DE3476771D1 (ja) |
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