JPS5920302A - 低分子量へパリン画分の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、通常のへ７９リンを解重合することによって
、低分子量のへＩＱリンを製造するための新規にして改
善された方法に関する。本方法によって製造された低分
子量のへ７９９７画分は、通常のへノミリンが有する抗
血栓活性対抗凝血活性比よりも著しく優れた抗血栓活性
対抗凝血活性比を有する。

優れた薬理作用特性と治療特性を有する低分子量へ７９
リンの製造方法の一つが１へｓｇｉ博士の米国特軒第４
．２８１．１０８号に開示されている。この特詐に於て
をユ、通常のヘノ耐リンよりも優れた抗血栓活性対抗凝
血活性比即ち抗血栓活性対抗凝固活性比を有する低分子
量へＩＱ＋）ンは、 （ａ）　　へノ（リン酸を得るために、通常のヘパリン
を酸性化し、 （ｂ）　　低分子１へ／Ｒチラミン得るために、過酸化
物の存在下で加熱することによって前記ヘパリン酸を解
重合し、及び （ｃ）　　低分子針へ、Ｑ　リンを得るために、前記へ
／９ラミンを硫酸化するステップから成る方法によって
製造される。

開示された方法に従って製造されたヘパリン画分は、本
発明に使用され且つ１：１の比を有する通常のへノｑリ
ンと比較すると、１：１よりも相当大きな抗血栓活性対
抗凝血活性比を有する。この開示された方法は、このよ
うに優れた低分子量へ、ＱＩＪンを製造することに成功
したけれども、解重合段階は多少のＮ−硫酸塩基の切断
を生起させ、このＮ−硫酸塩基の切断は、失われた硫酸
塩基を再導入するために、硫酸化（ステップＣ）を必要
とした。更に、この硫酸化の際に、最終生成物中に多少
の不純物も導入される。

本発明の目的は、前述の抗血栓活性対抗凝血活性の優れ
た比を有する低分子量ヘパリンを従来通りに生成させな
がら、Ｎ−＃Ｌ酸塩基を切断せずに通常のへ、Ｑ　ＩＪ
ンを解重合し得る方法を開発することにある。

驚くべきことに、この目的は、約３〜約５のｐＨ範囲で
過酸化物の存在下で解重合を行うことによって達成され
た。このｐＨ範囲に於ては、解重合は、硫酸塩基に影響
を与えず、且つ思いがけなくも、解重合された両分につ
いて比較的よい収率を生じさせ、硫酸化段階を必要とせ
ず、及び比較的純粋な生成物を生成する。

へ、１７ンは周知でおって、これは不安定なヘノ９リン
酸の安定な一価の塩又は二価の塩である。ヘパリンは、
ヘキス−ン酸（Ｄ−グルクロン酸とＬ−イズロン酸）と
グルコサミンによって形成された二糖類単位、即ちα−
１，４グリコシド結合によって連結された〇−硫酸塩と
Ｎ−硫酸塩とからなる重合体である。

ヘパリンは多くの組織と細胞中に各棟の形態で存在し、
蛋白質部分に多少緩く結合されている。

皮膚中及び、部分的ではあるが各種の肺臓中では、ヘパ
リンは高分子の形態で存在する。この形態に於ては、ヘ
パリンはアスコルビン酸又は腸粘膜に存在すると考えら
れる各種の哨−素の作用に敏感である。アスコルビン酸
又は腸粘膜ホモジネートのいずれかで処理すると、皮膚
ヘパリン又は肺臓ヘパリン中のこれらの高分子形態は腸
粘膜から単離されたヘパリンと同じ大きさの分子に縮少
されうる。

１５．０００　ダルトンの平均分子ｉ（ＭＷ）を有する
腸粘膜から単離されたへノ耐リン、又は上述の如く、ア
スコルビン酸又は腸粘膜ホモジネートのいずれかで処理
した皮膚又は肺臓等の他のソースからのへＩＱ＋）ンは
、天然ヘノ９リンに関する最少限度の分子の大きさ、即
ち平均分子蓋として約１５，０００ダルトンを示す。本
発明に於ては、そのようなヘパリンを通常のへ７９リン
と指称する。

実際は、腸粘膜から得られたヘパリンを比較的低い分子
量の画分に分割し得るｔ！＃８は体内には存在しないし
、又生物学的活性を全く損失せずに通常のヘパリンを解
重合することに関して、米国特軒第４，２８１，１０８
号に開示された方法以外の化学的方法は全く見出されな
かった。然しなから、既に討犠したように、この方法は
欠点をもっている。

・へ／（リンは１９１７年に最初に発見されて、組織か
ら単離され、それ以来へ／９！リンの抗凝血（抗凝固）
能力については公知になった。最近、抗凝血能、即ち抗
凝血活性は、へ／ｅｌＪンの抗血栓活性に関連して評価
された。系理学上及び治療上の目的に対しては、抗血栓
活性対抗凝固（抗凝血）活性に関する生体外又は生体内
のいずれかに於ける変形された比率が最も重要な要因と
なる。これは下記の比率 抗Ｘａテスト ＡＰＴＴ 〔但し、抗Ｘａテストーインズテスト（Ｙｉｎｓ　ｔｅ
ａす、ＡＰＴＴ　＝活性部分トロンボプラスチン時間（
Ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐａｒｔｉａｌ　ｔｈｒｏｍｂｏ
ｐｌａｓｔｉｎ　ｔｉｍｅ）　）によって測定される。

通常のヘパリン、即ち約１５，０００ダルトンのＩＶＩ
Ｗを有するヘパリンは、１５０ＩＵ／＋η以上の全抗凝
固第４，２８１，１０８号の方法と本発明方法に従って
製造されたベノ（リンは１５０ＩＵ／７１ｖ未満の全抗
凝固活性面白いことに、米し！！１％軒第４．２８１．
１０８号の化合物Ｉ■は殆んど２の比率を示す。このこ
とは、抗凝固活性が同一の場合、そのようなへ、ｅｌＪ
ンが、通常のへ、ｅ１７７の抗血栓活性の２倍の抗血栓
活性を示し、換言すれば、抗凝固活性の点から観ると、
通常のへ／９リンの全投与量によって発生されると同じ
抗血栓作用を生じさせるためには、そのような化合物の
ｉの用量が必要になることを意味する。

驚くべきことに、本発明は、同じ有利な比率を有しなが
ら硫酸化段階を必要としない低分子量へ）（リンを提供
する。又、篤くべきことに、本発明方法の収率は、米国
特許第４．２８１．１０８号によって得られる収率に優
り、得られる生成物は比較的純粋であって、更に精製す
る必要がない。

本発明方法は、 体）　へ、ｅリン酸を得るために、約３〜約５の範囲の
ｐＨによって通常のへＩＱリンを酸性化し、及び （ｂ）　　ヘパリンの低分子量画分を形成させるために
、過酸化物の存在下でヘパリン酸を解重合する段階を有
するものである。

そのようにして製造され次へ７３リンは、約４，０００
〜１２，０００ダルトンの範囲のＭＷを有し、且つ米国
特許＠　４．２８１．１０８号の方法に従って製造され
た低分子量ヘパリン画分の比率と同じ優れた比率を示す
。更に、比較的純粋な生成物を生ずることは勿論、その
ような低分子量画分の収率も改善される。

本発明方法は、約４，０００〜１２，０００ダルトンの
範囲に亘る低分子量ヘパリン画分を生成するという利点
をも有する。このようにして、各種の治療上及び系理学
上の用途のために、各種の抗血栓活性対抗凝固活性比を
有する画分を選択することが可能になる。

これは、多くの利点を提供する。例えば、極めて短縮さ
れた凝固時間を伴う血栓形成状態の患者は、可成り高い
抗凝固活性を有する抗血栓活性剤を使用し得る。他方、
出血の危険と術後の血栓症“との双方を伴う外科手術後
に起る障害にかかつている患者は、低い抗凝固活性を有
する抗血栓剤を使用し得る。

本発明の酸性化段階は、公知の酸により、又は好ましく
は、陽イオン交換樹脂を用いる処理によって通常のヘパ
リンを単純に酸性化することによって達成することがで
きる。この段階での重要な要因は、約３〜約５の範囲の
ｐＩＩによってへ、ｅ＋７７酸を生成させることである
。

次に、ヘパリン酸を酸化剤の存在下で解重合する。解重
合は、例えば、過酸化水素の存在するオートクレーブ中
で行われ得る。そのような場合、好ましくは約１〜約２
気圧の圧力下でオートクレーブを加熱する。各棟のＭＷ
を有する低分子量ヘパリン両分を得るために、オー１ク
レープ反応は、１５．３０．６０．１２０及び２４０分
等の予め選択された間隔で停止させることができる。比
較的小さな画分を生ずる比較的長い期間の場合、オート
クレーブ反応時間に応じてＭＷは約４，０００　ＭＷダ
ルトンから１２，０００　ＭＷ　ダルトンまで変化する
。

米１１特軒第４，２８１．１０８号の方法は、重合され
た両分として約６５−の収率であるけれども、本発明の
収率は比較的良好である。更に、比較的純粋な最終生成
物が製造され、遊離ピリジン、トリメチルアミン及び未
反応のスルホトリオキシド等の異柚物買を含まない。こ
れらの異種物質は、必要な硫酸化段階の結果として、米
国特許第４，２８１，１０８号の生成物中に導入される
。このようにして、精製段階は必要でなくなる。

本発明方法を下記の実施例によって更に説明するけれど
も、この実施例は決して限定的なものと考えてはならな
い。

実施例 市販のヘノ１７１Ｊン７（ｌｉ蒸留水３５０ｍ１中に溶
解し、５〜ｌＯ℃に冷却した。ｐｆ（が３．θ〜３．５
まで低下するまで、適切な強陽イオン性樹脂を添加し、
１過によってａ１脂を除去した。過敏化水累１４ｍｊを
加え、この溶液を直ちにオートクレーブに入れて、１２
５℃、２１ｐｓｉで１０分間反応させた。溶液を冷却し
７た後、水酸化す）　ＩＪウムでｐｉ　＠　６．８に調
節し１、約５０俤の濃度に達するまでエチルアルコール
を加えた。沈殿物を捕集して、Ａ空下で乾燥した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｆｌｌ　（ａ）ヘパリン酸を得るために、約３〜約５の
   範囲のｐＨによって通常のヘパリンを酸性化し、及び （ｂ）約４，０００ダルトン〜約１２，０００ダルトン
   の範Ｈの低分子量へ、ｐＱリン画分を得るために、酸化
   剤の存在下で加熱することによって、前記ヘパリン酸を
   解重合する 段階を有する優れた薬理特性を有する低分子量ヘパリン
   画分の製造方法。 （２）段階（ａｌの前記ｐＨが、約３．０〜約３．５の
   範囲内にあることを特徴とする特許請求の範囲第１項に
   記載の方法。 （３）前記解重合がオートクレーブ中で行われることを
   特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 （４）前記酸性化が陽イオン交換樹脂によって行われる
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 （５）前記酸化剤が、少くとも１種類の過酸化物から成
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法
   。