JPS59203564A - 自己抗体、免疫複合体吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生体免疫機能に起因するｑ！ｒ種疾患と密接
な関係をもつと考えられている自己抗体および７または
免疫複合体などを選択的に吸着除去する体液汐化用吸着
材に関し、特に直接溢流法を適用する全血用に適した吸
着材に関する。

周知の如く体液、例えば血液中に発現する自己抗体２よ
び／または免疫複合体は、癌、逸疫増殖性症候群、およ
び慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己
免疫疾患、あるいはアＶＪレギー、臓器移植時の拒絶反
応等の生体免疫機能に関係した疾患および現象の原因あ
るいは進行と密接な関係をもっていると考えられている
。

そこで、血液、血漿等の体液成分から、上記自己抗体お
よび／または免疫様合体を４！ｊ異的に吸着除去するこ
とによって、上記の如き疾患の進行を防止し、症状を軽
減せしめ、さらには治癒を早めることが期待されていた
。

本発明者らは、自己抗体および／または免疫複合体など
を高い効率で選択的に吸着し、非選択的な吸着が少なく
、安全性があり、滅閑操咋も簡単に行なうことができ、
体液浄化あるいは再生に適した吸着材を提供することを
目的に鋭童研究した結果、担体に被吸着物質と化学的な
選択的相互作用ｔなす特別な化学構造を崩する物質を保
持させてなる種々の吸着材を見出し、先に特許出願した
（％願昭５６−７１５２、％願昭５６−１８９２３、特
願昭５６−７６７７６、特願昭５６−１５９４４４）。

不発明は、先の発明に関し、被吸着物質と選択的相互作
用をなす物質について、よシ詳細に検討した結果なさ才
またものであり、上記吸着材の改良に関する。

本発明の目的に対して用いられる吸着材の性質として望
−止れることは、 （１１自己抗体、免疫複合体全選択的ＶＣ，かつ茜い動
部で吸着すること、 （２１目的物質以外の物質を吸着し難いこと、（３１凝
固線溶系を活性化し万いこと、（４）滅菌できること、 （５）機械的強度〃・光分めること などである。

本弁明者らは、体液浄化用ｅＭ材として、高い効率で自
己抗体、免疫複合体全吸着できる吸着性能を維持した上
−Ｃ１非選択的吸着の少ない、すなわち＼自己抗体およ
び／または免疫複合体シ、外の生体成分を１吸着するこ
と力Ｓ少なく、凝固線溶系全活性化することが少ない吸
着材を提供することを目標にして、さらに鋭意研究を１
ねた。

各種担体に対し各種化合物を固定化して、自己抗体およ
び／またに免疫複合体に対する吸着特性、共存蛋白質の
非選析的吸着性晴を評価したところ、担体として負電荷
を有するものを用い、との珊１体に骨格構造の炭素数が
６以上の治機低分子化合物を固定化した吸着材が自己抗
体および／−１ｆｉ−は免疫複合体を良く吸着１７、ｔ
た、フイフリノーゲンのように生体にとって有用な蛋白
質ど吸着し難くなることを見出し、さらに、担体に固定
化された化合物の分子量が比較的小さい場合にＶユ、た
とえ、その化合物が担体から外れて生体に入ったとして
も抗原性を有しないことを４″怪認して、本発明を得る
に至った。

すなわち、本発明に、負電荷を有する不溶性有機物相体
に、骨格構造に少なくとも６個の炭素を持つ有機低分子
化合物が結合していることを％倖とする自己抗体および
／または免役複合体の吸着材でちシ、上記担体の蛋白排
除限界分子量は１５万から１０００万の範囲にあるのが
好丑しい、。

本発明で言う負電荷な有する不溶性有機物担体とは、カ
ルボキシルメチル−ポリアクリルアミド系担体、アミノ
ヘキシルスクシニル化セルロース、スルホエチル−セル
ロース、リン酸エステル−セルロース、カルボキシヘキ
シル−アガロース等ヤ、スチレンジビニルベンゼンのよ
うな高分子基体にスルホンｅ基やカルボキシル基のよう
な陽イオン交換基を結合きせたイオン交換樹脂等のよう
に、担体自身が血液、体液等の中性電解質液中で一負電
荷を示すものを言う。また、負電荷を持たない担体に負
電荷を持った被膜をコートし瓦ものでもよい。骨格構造
に少なくとも６個の炭素を持つ有機低分子化合物とは、
骨格構造の炭素数が６個以上のものであり、分子量が１
０４以下、好ましくは１０３以゛下の有機物を言う。中
でも、芳香族性を持ったｆｆｌ状化合物は良い結果を与
える。

芳香族性を持った化合物は、いずれも有用に用いること
ができるが、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン等
のベンゼン系芳香族環、ジベンゾフラン、フロメン、ベ
ンゾフラン等の含酸素芳香族環、チアナフテン、チテン
トレン等の含イオウ芳香族環、フェナントレン、キノ１
ノン、アク１ノジン等の含窒素６員環、インドール、カ
ルノくソ°−ル、等の含窒素５員環などの芳香族環力；
良クイ−な結果を与える。これらの中では、ベンゼン系
芳香族環が％に良好な結果を与える。

本発明で言う有機低分子化合物の骨格構造カニ有する炭
素数は、有機低分子化合物の含有する炭素のうち、カル
ボキシル基の炭素を除く全ての炭素を言う。ここで、カ
ルボキシル基の炭素全除いたのは、カルボキシル基が親
水的であり、王に負′小二荷の効果のみを示す力・らで
ある。カルボキシル以外の置換基の炭素数、すなわち、
アルコキシル基、アルデヒド基、アルコキシカルボニル
基などが含む炭素は数える。

有機低分子化合物の含有する炭素と自己拐、体および／
または免疫複合体との間に疎水性相互作用力（ファンデ
ルワールス力）が働く。

負電荷を有する不溶性有機物担体ｅ）クーロン力と、有
機低分子化合物の疎水性相互作用力と力（相乗的に働く
ことにより、自己抗体および／まπは免疫複合体の遇択
的吸着能力を維持した上で、フィブリノーゲンのような
生体にとって有用な成分の非選択的な吸着を抑制するこ
とが可能になる。

負電荷を有する不溶性有機物担体の負電荷を示す官能基
部位の数は、多いほど自己抗体および／または免疫複合
体の吸着能力が上り、また、フィブリノーゲンのような
生体にとって有用な蛋白の非選択的吸着が抑制さｊ−る
。負電荷を示す官能基部位は、単位表面積肖り　０．０
２μｍｏｌ／ｍ２以上あることが好ましく、より好まし
くは０．２μｍ　ｏ　１７ｍ”から２００　ｐｍｏｌ／
ｒｎ２、さらに好ましくは２μｍｏｌ／ｍ２から２００
　μｒｎ　ｏ　ｌ　７ｍ２である。

負電荷を冶する不溶性有機物担体に結合する有機低分子
化合物骨格構造中の炭素数は多いほど自己抗体および／
捷たけ免疫複合体の吸着能力は上るが、フィブリノーゲ
ンのような蛋白の非選択的な吸着も増える。これは、蛋
白と負電荷を有する不溶性有機物担体に結合された有機
低分子化合物との相互作用において、クーロン力が吸着
選択性の向上に１皆な役割を果してお９、本発明の目的
吸着物質である自己抗体および／址たは免疫複合体の吸
着能力を維持した上で、共存蛋白であるフィブリノーゲ
ンの吸着選択性を向上させるだめには負電荷が重要な役
割を果しているということを意味する。

本発明において、負電荷を有する不溶性有機物担体に結
合する有機低分子化合物骨格構造中の炭素数は６個以上
であるが、自己抗体および／且たは免疫複合体の吸着能
力を向上させるという意味で好ましいのは、不飽和結合
を有する炭素の場合６個以上、望ましくは１０個以上で
あり、寸だ、単結合だけの炭素のみの場合には１０個以
上が好ましく、１５個以上が望ましい。また、上限は分
子量により規定されるが、炭素数で５００個以下が好ま
しく、５０個以下が望捷しい。＋Ｉ俤化合物が塩素、沃
素等の疎水性置換基を持つ有様化合物の場合は、置換基
のないものに比べ目的吸着物質の吸着特性が向上する。

これに対し、水酸基、チオール基、アミド基等の非解離
性゛親水性置換基を多く持つ有機化合物の場合には、置
換基のないものに比べ目的吸着物質に対する吸着性が落
ちてくるので好ましくない。非解離性親水性置換基の数
は、有機化合物の骨格構造炭素２個に対し１個未満が好
ましく、望ましくは炭素５個に対し１個未満である。こ
れらのことは、炭素の結合様式の違い＼置換基の種類等
によって目的吸着物質に及はす疎水性相互ｒｈ用力が異
なるためと考えられる。

負電荷を有する不溶性有機物担体に結合する有機化合物
の分子量は、たとえ、結合が外れて生体中に入ったとし
ても、抗原性の点で１０４以下が好ましい。より好まし
くは１０３以下である。

本発明で用いられる負電荷を有する不溶性有機物担体は
、親水性担体、疎水性担体いずれも使用できるが、疎水
性担体を用いる場合には、時に担体へのアルブミンの非
特異的吸着が生じるため、親水性１１体の方が好ましい
結果を与える。

負電荷を有する不溶性有機物担体の形状は、粒子状、繊
維状、中空糸状、膜状等いずれの公知の形状も用いうる
が、骨格構造に少なくとも６個の炭素を持つ有機低分子
化合物の保持量、吸着材としての取扱い性よりみて、粒
子状、繊維状のものが好ましい。

球状または粒子状担体の平均粒径は２５〜２５００μｍ
のものを利用できるが、その比表面積（吸着材としての
吸着能力）と体液の流３ｒ！ｉ面より、５０〜１５００
μｍのものが特に好プしい。

担体の比表面積は５ｍ２／ｆ以上が好ましく、５５　ｉ
ｎ２／　７以上が望ましい。

粒子状担体としては、多孔性粒子、特に多孔性重合体を
用いることもできる。本発明で用いられる多孔性重合体
粒子は、その表ｍ１に負電荷を有する有能基を多く持ち
、かつ、骨格構造に少なくとも６個の炭素を持つ有機低
分子化合物を固定化し得るものでちシ、排除限界分子量
（タン−くり質）としては、本発明の目的吸着物質の分
子量が１５万（ＩｇＧ　）より免疫複合体特にＩｇＭ免
疫複合体の場合には１０００万に達するので、１５〜１
０００万が好ましい。本発明の目的に最も汎用的な排除
限界分子量は１００〜５００万である。

繊維状担体を用いる場合には、その柘維径が０．０２テ
ニールないし１０デニール、よシ好ましくけ０．１テニ
ールないし５デニールの範囲にあるものがよい。齢維径
が太きすぎる場合には、グロブリン系化合物の吸着量お
よび吸着速度が低下するし、小さすぎる場合には、凝固
糸の活性化、血球粘着、目づまりをおこしやすい。

骨格構造に少なくとも６個の炭素を持つ有機低分子化合
物を負革荷金有する不溶性有機物お１体に結合する方法
は、共有結合、イオン結合、物理吸着、包埋あるいは亜
合体表面への沈殿不溶化等あらゆる公知の方法を用いる
ことができるが、結合物の溶出性よりみて、共有結合に
より固定、不溶化して用いることが最も好ましい。その
ため通常固定化幹素、アフイニケイクロマトグラフイで
用いられるリガンドの結合方法を用いることができる。

また、負電荷を有する有能基の一部を利用して有機化合
物を共有結合させてもかまわない。

本発明の１＆着材は、体液の導出入口を備えた容器内に
充填保持して使用することができる。

図面において、１は本発明に係る自己抗体および／また
は免疫複合体の吸着材を使用したｌ＆着装置の一例を示
すものであり、円筒２の一端開口ＢＩＳに、内側にフィ
ルター６を張ったバッキング４を介して体液導入口５を
有するキャップ６をネジ嵌合し、円筒２の他端開口部に
内ｔ（；１にフィルター６′ケ張ったバッキング４′を
介して体液導出ロアを杢）るキャップ８をネジ嵌合して
容器全形成し、フィルター３２よび６′の間隙に吸着材
を充填保持妊せて吸着材層９を形成して々るものである
。

吸着材層９には、本発明の該吸着材を単独で充填しても
よく、他の吸着材と混合もしくＦｉｆｔ層してもよい。

他の吸着量としては、例えはＤＮＡ等の他の悪性物質（
抗原）の吸着４フや、幅広い吸着能を有する活性炭等を
用いることができる。これにより吸着材の相乗効果によ
るより広範な臨床か来が期待できる。吸着材層９の容積
は、体外循環に用いる場合、５０〜４０〇−程ルーが増
当である。

本発明の装置を体外循環で用いる臀８合Ｖこは、大路次
の二通りの方法がある。一つには、体内から取り出した
血液を遠心分離機もしくは模型血漿分＠器を使用して、
血漿成分と血球成分とに分離した後、血漿成分を該装置
に通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にも
どす方法であり、他の一つは体内から取り出した血液を
回接該装置に通溝させ、浄化する方法である。

筐た、血液もしくは血漿の通過速度については、該吸着
材の吸着能率が非常に高いため、吸着材の粒度を粗くす
ることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層
の形状の如何にか＼わりなく、高い通過速度を与えるこ
とができる。そのため多量の体畝処理をすることができ
る。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、また断続的に通液使用してもよい。

本・発明の吸着材は、以上述べてきたように、体液中の
自己抗体および／または免疫複合体を高率かつ選択的に
吸着除去し、非常にコンパクトな吸着装置が組めると共
に、非選択的吸着が少ないので、簡便かつ安全に用いら
れる。

本発明の９Ｂ１．蓋材は、自己血漿、自己血液等の体液
全浄化、再生する一般的な用法に適用可能であシ、癌、
免疫増殖性症候群、慢性関節リウマチ、全身性エリテマ
トーデス等の膠原病、重症筋無力症等の自己免疫疾患、
アレルギー、臓器移植時の拒絶反応等の生体免疫機能に
関係した疾患および現象、あるいは腎炎等の腎臓病、肝
炎等の肝臓病などの体外循環治療に有効に利用できる。

また、負電荷を有する不溶性有機物狽体を用いているた
め、血小板の粘着、凝集が抑制さすＬる。

したがって、全血用の体外循環治療器としても有効に利
用できる。

以下実施例によシ、本発明の実施の態様を詳細に説明す
る。。

実施例１ 負電荷金有する不溶性１１体としてカルボキシヘキシル
−セファロース４Ｂ（スウェーデン・ファルマシア社製
）を用い、この担体にカルボジイミドを作用させる通常
の方法で骨格構造に６個以上の炭素を持つ有機化合物を
固定化しに０このとき、カルボジイミドによる活性化率
を低くおさえ、負電荷を有する官能基を約半分残すよう
にした。過剰の活性基はエタノールアミンでブロッキン
グした。谷ね有機化合物の保持量は、残余有機化合物の
１級アミノ基を４−フェニルスピロ〔フラン−２（３Ｈ
）、１’−フタラン：］　−］３．３’−ジオン″フル
ラム■″ロシュ社製）と反応結合させ算出したが、同定
嵐は２　ｌｎ９／　ｍｌ　（押体）に合わせた。

吸着実験は、Ａ、　ＣＤ加すウマチ想者崩漿３容とｇ＆
光材１０容と全混合し、５７Ｃ，３時間インキュベート
した後、上澄の血漿を評価した。

評価は、リウマチ因子、１免疫複合体、フィブリノーゲ
ン、免疫グロブリンＧについて行なった。

リウマチ因子の測定は、ラテックス凝集テスト、受身感
作血球凝集テストにて行った。

ラテックス酵集テストは、ポリスチレンラテックス粒子
にヒトーγ−グロブリンを吸着させたものに、リウマチ
因子を含む恵者血漿を作用させると、ラテックス粒子が
凝集する性質を検出法として測定するものであり、通常
血漿の希釈系列を作成して、ラテックス粒子が凝集しな
くなる血漿希釈倍率でリウマチ因子濃度を評価するもの
でそる。

リウマチ因子を高濃度に含む血漿は、陰性になる希釈倍
高が高くなり、低濃度の血漿は逆に低くなる。

受身感作血球凝集テストは、ヒツジ赤廂球にウサギ−γ
−グロブリンを吸着させたものであり、他はラテックス
凝集テストと同じである。一般に、受身感ｆ／Ｆ＝崩球
凝集テストの方がラテックス凝集テストよりリウマチ因
子爵異性が高いとされている。

グリシン食塩緩衝液で希釈系列を作成して、ラテックス
凝集テストにてリウマチ因子の陰性になる希釈倍高を求
めた。ラテックス＠集テストは、日本凍結乾燥研究所の
キットを用いて行った。同様に受身感作血球凝集テス）
（ＲＡＨＡテスト、富士臓器装薬■製〕にて評価した。

免疫複合体は、ポリエチレングリコール沈降法にて行な
った。この方法は、ポリエチレングリコールにより沈降
分取した免疫複合体をシングル・ラジアル・イムノ・デ
ィフュージョン法にて、免疫グロブリン量を定量するこ
とにより、免疫複合体量を定量するものである。この方
法の操作方法、φ件は、以下のとおりである。

（１１検体１．Ｏｄｉ試験管に入れ、８％ＰＥＧ（ポリ
エチレングリコール、平均分子量６０００〜７５００）
を１．０ゴ加え、攪拌し、４Ｃで６０分放置する。

＋２＋４　ｔｌ’、　　１ｏ　ｏｏり、６０分間遠心し
、上澄？除去後、得らｎ、た沈殿をＰ　Ｂ　Ｓ　（！Ｊ
ン酸緩衝生理食塩水）に再溶解し、１゜０１ｎｌとする
。

（３１１１１、（２＋をさらに２回繰り返し、混入する
モノメリックな免疫グロブリンを洗浄する。

（４）＠終的に得らｔた免疫複合体のＰＢＳ浮遊液をシ
ングル・ラジアル・イムノ・ディフュージョン法にて、
免疫グロブリンＧを定量する。

フィブリノーゲン、免疫グロブリンＧの定、量は、シン
グル・ラジアル旬イムノ・デフニージョン法にて定量し
た。

使用したりウマチ患者血漿の値は、リウマチ因子のラテ
ックスが１６０、ＲＡＨＡが６４０、免疫複合体（免疫
グロブリンＧを測定）が４５ｍ：２／ｄｉ、フィブリノ
ーゲンが２８０１１１９７　ｄｔ％免疫グロブリンＧが
１２８０ｍ９／ｄ７であった。

吸着実験の結果を表１に示した。表１より、負電荷を有
する不溶性有機押体に、骨格構造に少なくとも６個の炭
素を持つ有機低分子化合物が結合している吸着材がリウ
マチ因子、免役複合体＋ｂｓ択的に吸着し、フィブリノ
ーゲン、免疫グロブリンＧの非選択的な吸着が少ないこ
とがわかる。

表　　　１ 比較例１ ＊　’ｉＱ、荷乞持たない相体としてセファロース４Ｂ
（スウェーデン、ファルマシア社製）を用い、通常の方
法によりＣＮＢｒで活性化した後、β−フェニルーエチ
ラミ／を固定化した。β−フェニルーエテラミンの炭素
数は８、固定化量は２．１〜／ｍｌ（ｑ’、目体）であ
った。

吸着実験は実７ｊ（ｉ例１と同じ血漿を用い、同様に実
験した。

結果は、ＲＡ　ＦＩ　Ａタイターは６４０が３２０に、
ラテックス・タイターは１６０が８０に、免疫複合体は
４５が２８■／ｄｔに下ったが、フィブリノーゲンは２
８０が１７５　ｒｎ９／　ｄ７に下ってしまった。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明の吸着材を容器に充填した吸着装置の一例
を示す模式図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）負電荷を有する不溶性有機物担体に、骨格構造に
   少なくとも６個の炭素を持つ有機低分子化合物が結合し
   ていることを特徴とする自己抗体および／または免疫複
   合体の吸着材。 （２１負′小７荷を有する不溶性有機物担体の蛋白質排
   除限界分子量が１５万から１０００万の範囲にある特許
   請求の範囲第１項記載の自己抗体および／または免役複
   合体の吸着材。