JPS5942320A - 動物用成長促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、因子△、因子Ｂおにび因子りからなる抗生物
質Ａ−２８０８６複合体、またはその個々の因子あるい
はその因子の任意の配合物を必須成分として含有してな
る動物用成長促進９ｔびに飼料利用効率改善剤に関する
。

抗生物質Ａ−２８０８６複合体およびその構成因子は、
抗細菌、抗糸状菌、抗ビールス、抗牛胸膜肺炎菌（抗Ｐ
ＰＬＯ）　、抗コクシジウム、殺昆虫、および殺だに剤
として有用であり、かつ反射動物類の飼料利用能率を増
加させるために有効である。

本発明はス１へレプｌへマイシス・オーレオファシェン
ス（３ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｕｒｅｏｆａｃｉｅ
ｎｓ）　Ｎ　ＲＲｌ−５７５８またはス１〜レプトマイ
シス・オーレオファシェンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　　ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ　）　ＮＲＲＬ　８０
９２を、該菌株の利用可能な炭素源、窒素源および無機
塩類を含有する培養基中で培養し、該微生物によって培
地中に価値ある母の抗生物質活性が現われるまで攪拌通
気発酵条件下で培養することにＪ：り得られる構成因子
Ａ１因子Ｂおよび因子りを含む抗生物質Ａ−２８０８６
複合体、またはその個々の因子あるいはその因子の任意
の配合物を必須成分として含有してなる動物用成長促進
並びに飼料利用効率改善剤を提供せんとづ”るものであ
る。

抗生物質Ａ−２８０８６囚子Ａは白色の結晶状化合物（
アセトン−水から結晶化）であり、低級アルコール類、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エ
チル、クロロホルム、アセトンおよびベンゼンに可溶で
あるが、ヘキサジには僅かに溶解し、水には不溶である
。約９８〜１００℃で融解し、再凝固し、更に約１９５
〜２００°Ｃで再融解リ−る。この抗生物質は下記の押
止学的性状（（ａ）へ・（ｍ）］を持っている。

（ａ）分子量７６／ｌ　（スベク１〜ル測定法によって
測定）、 〈１〕）元素分析値（近似値）、Ｃ，６６，６９％　　
；　　ト１．　　９．　　８５　　％　　：０．　　　
２３．　　１０　　％　。

（Ｃ）実験式：　Ｃａｑ　Ｉ−（７，Ｏｎ　　（質昂ス
ペク１−ル分析法により測定）、 （ｄ）〔α）ｏ　ニー５７！Ｉ°　（Ｃ＝０．２．メタ
ノール）、 （ｅ）赤外線吸収スペク１〜ル（クロロボルム中で測定
）において下記の識別吸収帯のピークが現れる。２．８
５．３．３４．５．８３．６．ｆ１２．７．２２．７．
５３（弱＞、７．７８（弱）、８゜７５く強）、８．９
５　（強）、９．１５．９．５０（強）、９．５５（強
）、９．６０．９．８５．１０．１５．１（’）、４５
．１０．７０（弱）ミクロン。

（［）紫外部吸収スペク１〜ル（エタノール溶′ｆｊ、
）では２００シ以下に末端吸収を示すだけである。

（ＣＩ　＞核磁気共鳴スペク１〜ル（市水素化クロロボ
ルム中で測定）の特徴：δ６．０１．４．．２１．４、
．１１．３．９９．３．８９．３．８０．３゜６７．３
．６５．３．５７．３．５５．２．８３．２．７６．２
．７４．２．６８．２．６６．２゜５８．２．５６．２
．３０．２．２２．２．１７．２．１０，２．０５．１
．９６．１．９０，１゜８５．１．７０．１．６２．１
．６０，１．／１．７．１．３９．１．３１．１．２５
．１．１８．０゜９５．０．９３．０．９０．０．８８
．０．８５．０．７７．０．７５．０．７３．０．６８
．０゜６６　ｐｐｍ。

（１１）８０％のジメチルボルムアミド水中においてｐ
Ｋａ値７．９の滴定し得る基を有する。

（ｉ）以下のような格子間隔（単位：オングツ１〜ロー
ム）を持つ特徴あるＸ−線粉末回折のパターン（Ｃ１＋
十照用、１．５４０５λ照剣、ニッケルフィルター）を
示す。

（１相対強度 １２．００　　　　　　１００ １０．１０　　　　　　　５０ ９．２５　　　　　　　９０ ８．００　　　　　　　　／１０ ７．５０　　　　　　　１５ ６．９２　　　　　　　９０ ６．４０　　　　　　　４０ ５．９８　　　　　　　０５ ５．６８　　　　　　　１５ ５．２０　　　　　　　　／１０ ／１．９８　　　　　　　４０ ４．６２　　　　　　　　／ｌ。

４．２１　　　　　　　２０ ３、／１８　　　　　　　１０ （ｊ　）バチルス・ズブチリス（１３ａＱｉ　ｌ　１ｕ
ｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ６６３３株を検出
生物とし、シリカゲル上で、展開溶媒としてベンゼン−
酢酸エチル（３：２）の系で試みた薄層クロマトグラフ
法で０．２４のＲｆ値。

（１り）バチルス・ズブチリスＡＴＣ０６６３３株を検
出生物として用いた下表のペーパークロマトグラフ系に
おいて表に示すにうなＲｆ値。

Ｒｆ値　　　　　　　溶媒系 ０、１１　　　（メチル・イソブチル・ケ１〜ン（ＭＩ
ＢＫ）で飽和した水） ０、４．１　　　　（ＭＩＢＫで飽和した水に２％ｐ−
トルエンスルホン酸と１％ピペリ ジンを添加） ０、！Ｍ　　　（水：メタノール：アセ１〜ン（１２：
３：１）をＮＨ４０Ｈで ｐＨ１０．５　　と　し　ＩＣ　　後　、　　ト１３Ｐ
ＯａでｐＨ７．５に下げる。） ０、４８．（水に１％ＭＩＢＫ，０．５％ＮＨａＯＨ） ０、１５　　　（水１リットルに１７．４（］Ｋ２ＨＰ
Ｏａと３０戴エタノール添加） ０、２４　　　（水を飽和したベンゼン）０、２４　　
　（水だけ） ６一 ０．７５　　　（水：ＭＩＢに：酢酸エチル（”１８：
１：１）） （１）塩類およびエステル誘導体の形成可１ｉ１な酸基
が１つ存在する。

（ｍ　）エステル化の可能な水酸基が少くども１個存在
覆る。

水明ｗＩ円において、（抗生物質△−２８′０８６）因
子Δなる用語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記
の因子ΔおよびそのＣ２へ□　Ｃ６アシル・エステル誘
導体ならびにその生理学的に許容される塩類を包含する
ものとする。

抗生物質△−２８０８６因子Ｂは白色の結晶状化合物（
Ｊ’　ｔ　’ｒ−ンー水から結晶化）で、低級アルコー
ル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ：１：シ
ド、酢酸エチル、クロ１］ホルム、アレ１〜ンおよびベ
ンぜンに溶解するが、ベキ１Ｊ−ンには僅かしか溶解せ
ず、水には不溶である。そして重物質は、下記＜ａ　）
〜（１り）の理化学的＋１状を具えている。

（ａ　）約１５０〜１５３℃の副１点、（ｂ）分子量７
６２（高分解能の質賞分析器で測定）、 （ｃ　）実験式Ｃ、Ｈ−、、、Ｏｔ＋　　（高分解能の
質量スペクトル法にＪ：り測定）、 （ｄ）赤外線吸収スペクトル（クロロホルム中）におい
て次の識別吸収帯のピークが出る：２．８２．３．３０
．５．７７．５．８５．６．８０゜７．２０，７．５０
　（弱）、７．７２（弱）、７゜８０（弱）、８．５７
（強）、８．６８．８．９０〈強）９．１０．９．５０
，９．８３　＜強）、９．９０，１０．１０，１０．１
７　（強）、１０゜４３（弱）、１０．８０（弱）、１
１．２０（弱）、１１．３５（弱）、１１．７３（弱＞
、１２゜０３（弱）ミクロン。

＜ａ　＞紫外部吸収スペク１〜ル（エタノール溶液）で
は２２０ゲに最大吸収（Ｅ、い−１３７，５：ε＝１０
．／１．７７）を示ザ。

（［）核磁気共鳴スペクトル（重水素化クロロホルム中
）では次の特徴が見られる。

δ７．２０，７．０９．６．２６．６．１５．４゜１９
．４．１２．４．０５．３．９５．３．８９．３、７８
．３．６２．３．５９．３、５２．３゜４Ｂ、　２．８
１　、２．７３、２．６３、２．５４．２、５２、１　
、９９、１．９１、１、８４、１゜７１　、１．６７、
１　、６４、１　、５５、１．４３．１、３３．１．　
１　Ｂ、　　１．　　Ｉ　　Ｔ、０．　９６．０゜９４
．０．　９０，０．　８７．０．　８／Ｉ　、０．　７
７．０、　７４．０．　６８ｐｐｎ＋ （ａ　）バチルス・ズブチリスへＴＣＣ６６３３を検出
微生物として用い、ベンゼン−酢酸エチル（３：２）の
系で行ったシリカゲル上での薄層り［１７１〜グラフイ
ーのＲｒ値は０．４２である。

（ｈ）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を検出微
生物どして用いて行ったペーパクロマ１〜グラフ系にお
けるＲｆ値は次の如くである。

Ｒｒ値　　　　　　　溶媒系 ０．１６　　　（ＭＴＢＫを飽和した水に２％ｐ〜１〜
ルエンスルボン酸と１％ピペリ ジンを加えたもの。） ０．４６　　　（水；メタノール：アセトン（１９− ２：３：１）をＮＨ４０Ｈでｐｌ−１ １０，５にし、次いでＨ３ＰＯａ でｏｆ−１７，５に下げたもの。） ０．３６　　　（水に１％ＭＩＢＫ、０．５％ＮＨ４０
１−（を添加） ０．５１　　　（水を飽和したベンゼン）０．１１　　
　（水だけ） ０．６１　　　（水：　Ｍ　ｒ　ｆ３　Ｋ　：酢酸エチ
ル（９８：１：１））、。

（１）塩類およびエステル誘導体を形成しうる酸基が１
つ存在する。

（、ｉ）ケ１〜ン残基２個、 （ｋ）ヒドロキシル残基が少くとも１個存在する。

水明１書において、（抗生物質△−２８０８６）因子Ｂ
なる用語は、前後の文章から矛盾のない限り、上記の因
子Ｂおよびぞの生埋学的に許容される塩類を包含するも
のとする。

抗生物質Δ−２８０８６囚子りは白色の結晶状の化合物
（アセトン−水から結晶化〉である。こ１０− のものはメタノール、エタノール、ジメチルホルムアミ
ド、ジメヂルスル小キシド、酢酸エチル、クロロホルム
、アＬ７＋−ンおよびベンゼンに溶解するが、ヘキサン
には僅かしか溶解ｌず、水には不溶である。本物質は９
６〜９８℃で融解し、かつ次記の（ａ　）〜（川）の性
状を持っている。

（ａ　）分子１ｉ７７８（高分解能の質量スペクトル分
析法で測定） （ｂ）元素分析ＩＦＯ（近似ｆｉｌ’Ｔ）　、Ｃ，６７
、５９％；Ｈ，９，３８％；０．２２．７７％、（ｃ）
実験式〇　４４＋−１７４Ｏｎ　　（高分解能の質量ス
ペクｉ・ル法で測定）、 （ｄ）（α）ｏ　：　　−５６°　（Ｃ＝０．１、メタ
ノール）、 （０）赤外線吸収スペクＩ〜ル（クロロボルム中で測定
）では下記の吸収帯ピークが見られる：２．８９．３．
３９．３．４３．３．５０，５゜８８．６．９０．７．
２７．７．６０，７．８４．９．００．９．２６．９．
６２．１０．３１．１０．５８．１１．１０１１１．．
４９ミクロン。

（ｆ）９５％の含水エタノールで紫外部吸収は観察され
ない。

（ｇ）クロロホルム中での核磁気共鳴スペクトルは次の
特徴がある、δ６．００．４．２０．４゜１ｏ、４．ｏ
ｏ、３．９８．３．９２．３．８６．３．８３．３．７
９．３．６７．３．６４．３゜５７．３．５４．２．８
８．２．８１．２．７１．２．６２．２．５８．２．４
８．２，４３．２゜３７．２．２９．２．２１．２．１
５．２．１０゜２．０４．１，９７．１．８９．１．８
３．１゜７６．１．６８．１．６１．１．５８．１．５
５．１．４７．１．３９．１．３０，１．２５．１゜１
８．０．９５．０．９０．０．８８．０．８４．０．７
４．０．６８１）Ｉ）ｍ。

（ｈ）８０％のジメチルホルムアミド水の中で、８．６
７のｐＫａ値を持つ一個の滴定し得る基を右する。

（ｉ）以下のような（６子間隔（単位：オングストロー
ム）を有する特徴あるＸ−線粉末回折のパターン。（Ｃ
Ｕ＋十照射、１．５４０５λ、ニッケル・フィルター）
。

（相対強庶 １２、／ｌｏ　　　　　　１００ １０．２０　　　　　　７０ ８．８５　　　　　　９０ ７．８０　　　　　　３０ ６．８０　　　　　　１０ ６．３０　　　　　１００ ５．７０　　　　　　２０ ５．３５　　　　　　２０ ５、１０　　　　　　２０ ４．９０　　　　　　１０ ４．６５　　　　　　２０ ４、．４５　　　　　　４０ ４．２０　　　　　　３０ ３．３０　　　　　　１０ ３．１５　　　　　　１０ ２．９９　　　　　　０５ ２．７７　　　　　　０５ ２．２８　　　　　　０５ １３− （ｊ　）バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３を検出
生物として用い、下に示すＪ：うなシリカ・ゲル薄層ク
ロマトグラフ系に於て次の様なＲｆ値。

−色ＬＬ　　　　　　　　　　（ ０，２６ベンゼン−酢酸エチル（３：２）０．６６　　
酢酸エチル−ジエチルアミン（９５：５） （ｋ）バチルス・ズブチリスＡ　Ｔ　ＣＣ６６３３を検
出生物として用い、下に示すペーパークロマ１−グラフ
系で求められる次のようなＲｆ値。

Ｒｆ値　　　　　　　？ＷＩｓ系 ０．１０　　　メチル・イソブヂル・ケトン（ＭＩ　Ｂ
Ｋ）飽和水 ０．２６　　　ＭＩＢＫで飽和した水に２％のｐ−トル
エンスルホン酸と１％のピペ リジンを添加してもの。

０．３６　　水：メタノールニアセトン（１２：３：１
）をＮＨａＯＨでｌ１ｌ−（１０゜５に調節した後、８
３　ＰＯ４で ＤＨ７，５に下げる。

１４− ０．２９　　　１％ＭＴＢＫ、Ｑ、５％ＮＨ／１０１−
１を加えた水 ０．２５　　１Ｊｌ当りに２　ＨＰｏ、４．１７．４（
１とエタノール３０戴とを加えた水 ０．２６　　水を飽和Ｌ）だベンゼン ０．０９　　水だけ ０．６４　　水：ＭＩＢＫ：酢酸エチル（９８：１：１
） Ｉ！、）塩類およびエステル誘導体の形成可能な酸基が
１個 ｍ）、Ｔ１ステル化の可能な水Ｍ基が少くとも１個本明
りＩＩｌ出において、（抗生物質Ａ−２８０８６）因子
ｎなる用語は、前接の文章から矛盾のない限り、Ｆ記の
因子りおよびそのＣ２”□Ｃ６のアシルエステル、なら
びにその生理学的に許容される塩類を包含するものとす
る。

今日、抗細菌剤は多数知られているが、なお引続き新し
い進歩的な抗生物質が要求されている現状である。現今
の抗生物質療法上の一問題として、抗生物質の間で病原
生物に対する効力に差異があるという事実があげられる
。またいま一つ、基準抗生物質に抵抗性を持つ生物株の
発生が問題とされている。さらに今一つの問題となるの
は、罹病者が個別的に、特定の抗生物質から過敏症や毒
ｔｒＬなどに基づいて、しばしば危険な副作用を受ける
という事実である。現今の療法にはこうした問題がある
ので、新抗生物質が要求され続けるのである。

人間の病気治療に有用な新抗生物質の要求に加えて、家
畜病治療の分野においてもまた進歩した抗生物質が必要
となる。重要な局面の一つとして、家禽や家畜類の生育
を促進させるのにも進歩した抗生物質が必要とされる。

例えば、生育の促進は病気を減少させることによって、
かつ飼料利用効率を増加させることによって達成される
。

家畜病治療学士、さらに特に、家禽飼育産業上、経済的
に重要性を持つ疾患の一つが、原虫病コクシジウム症（
ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ　）であることは周知のところ
である。コクシジウム症はエイメリア（Ｅ　ｉｍｅｒｉ
ａ）またはイソスポラ（Ｉ　５ｏｓｐｏｒａ　）の一種
または多種による感染に起因する（概要は、米国アイオ
ア州、アメス、アイオア州立大学刊行、ビースターおよ
びシュワルテ編纂の“°デイジージズ・オア・ボウルト
リー”第５版中のルンドおＪ：びファーを参照）。

コクシジウム症に起因する莫大な経済的損失ならびに既
往の抗コクシジウム薬剤の不利益性という見地から、さ
らに優れた抗コクシジウム剤の探索が続けられている。

今一つ家畜業者に著しい経済的損失を与える疾患として
陽炎がある。腸炎は切部、豚、牛および羊に発生し、主
として嫌気性細菌、特にクロストリジウム◆ペルフリン
ゲンス（Ｃｏｌｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎ
ｓ　）とビールス類に起因する。反勇動物における腸内
中毒症、例えば羊の過食症はクロストリジウム・ベルフ
リンゲンスの感染で惹起される症状である。

次に、牛のような反部動物の生育を促進させることが獣
医学での今一つの経済上の目標とされている。飼料の利
用能率を高めることにより成育促１７− 進を達成することが特に関心の的となっている。

反椙動物の飼料の主栄養物（炭水化物類）が利用される
機構はよくしられている。該動物の第１胃内の微生物が
炭水化物類を分解して単糖類とし、更にこれらの単糖類
をピルビン酸関連化合物に変換するのである。ピルビン
酸塩は微生物学的作用により代謝されて酢酸、醋酸ある
いはプロピオン酸など、一括して揮発性脂肪酸（ＶＦＡ
）として知られるものを生成する。更に詳細な論説につ
いてはレンゲ（フィリップソンら著：フイジオロジー・
オア・ダイゼッション・アンド・メタボリズム・イン・
ザ・ルミナンド（英国ニューカッスル・アポン・タイン
オリエル出版社（１９７０年）刊の４０８〜４１０頁）
）の論文がある。

ＶＦＡ利用の相対的効果は、フィードスタフス１９７１
年６月１９日号１９頁においてマツ力ラフにより、また
、Ｊ、へ〇、ＳＯｉ、３３巻２８２頁（１９７１）にお
いてエスヶランド等により、また゛ダイゼスヂブ・フィ
ジオロジー・アンド・ニュートリジョン・オア・ルミナ
ンツ′”第２巻６２１８− ２〜６２５頁（１９７１）においてチャーチ等にＪ：つ
Ｃ議論されている。醋酸］ｎや醋酸１ｎも利用されるが
、プロピオン酸塩の利用に【、１、更に重要な意義があ
り、その利用能率が著るしく低下づると動物はケトン症
をひき起す。従って動物を刺激してｖＪ水粗化物ら高い
比率でプロピオン酸を牛成さμ、これが動物の峡水化物
利用効率を高めさけ、かつまたり１−一シス症の影響を
低減さけるのである。

抗生物質Δ−２８０８５因子へ　、ＢおよびＤはポリ丁
−テル型抗生物７１群の駈しいメンバーである。

このＪＡＹのメンバーの例どじでは、モネンシン（米国
特許第３，５０１，５６８号）、グイアネマイシン〔ハ
ミル、Ｒ，Ｌ、；ホエーン、Ｍ、Ｍ。

；ビッテンガー、Ｇ、Ｅ’、：チＡ７ンバリン、Ｊ、；
およびゴーマン、Ｍ、；ジ１７−ナル・Ａブ・アンティ
バイオティクス、２２巻１６１■題（１≦）６９）〕ニ
ゲリシン（Ｌ、に、スタインラウフ、マリ−・ビンカ−
１〜ンおＪ：びＪ、Ｗ、チャンバリン、ビオヒミ力・ビ
゛Ａフイジカ・す→Ｊ−−チ・］］ムニケーシ］ン、３
３巻２９頁１９６８））、およびザリノマイシン〔日本
特許公告４７−２５３９１゜１９７２年１０月２０日付
、出願番弓１９６２０／１９７１；　ｌ）ｅｒｗｅｎｔ
　　Ｎｏ、７（３９６０Ｔ、米国特許第３，８５７．９
４８号、およびｌ−１，＝１＝ナシ、Ｎ、オタケ、１」
、ヨネハラ、Ｓ、す１〜−およびＹ。

ザイト−、テ１〜ラヘドロン・レターズ、４９巻４９５
５〜４９５８頁（１９７３））が含まれる。

発酵学ならびに水明）１ｎ書に於て使用せられるような
゛抗生物質複合体（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｃｏｍｐｌ
ｅｘ）　”という用語は、化学でいう釦体を指すもので
はなく、相伴って生成される個々の抗生物質因子の混合
体を指すものである。抗生物質複合体中に生成される個
々の因子の比率が、発酵の条件によって変ることは、抗
生物質の発酵生産に精通ずる者なら是認できるであろう
。

Δ−２８０８６抗生物質複合体は、新規な菌株ストレプ
トマイシス・オーレオファシェンスＮＲＲＬ　５７５８
を抗生物質活性が程よく発生するまで攪１′１′−通気
発酵条件下で培養することによって生産される。／ｌ−
２８０８６抗生物質複合体は、また、ス１〜レーグＩ〜
マイシス・Δ−レオファシニ［ンスの今〜つの♀１１菌
株ＮＲＲＬ８０９２を培養することにＪ：っても年産さ
れる。ス１−レプトマイシス・オーレオファシェンスＮ
ＲＲＬ５７５８またはス１〜レプトマイシス・Ａ−レフ
ァシエンスＮ　ＲＲ＋−８０９２の何れによって生産さ
れた場合でも、△２８０８６抗生物質複合体は発酵ブロ
スならびに菌糸体から極性のある有機溶媒で抽出される
。

抽出された抗生物？１混合物は溶媒を濃縮Ｉ７て分１ｉ
ｉ１１され、濃縮物に過剰の石油エーテルを加えて不純
物を沈ｌｉイさせ、１Ｉｉｉ！過し、かつイの濾液を蒸
発さゼるど、Ａ−２８０８６抗生物質混合物が得られる
。

該抗生物質複合体中まカラム・り［］７トグラフ法によ
ってさらに精製され、かつ個々の因子に分離される。

Ａ−２８０８６化合物類は動植物体の病原となる生物の
生育を閉止する。この用土活性の一つの局面が、△−２
８０８６化合物類の抗］クシジウム作用である。このほ
か、Ａ−２８０８６化合物２１− 類は抗細菌−１抗ビールスー１抗牛胸膜肺炎菌（抗−Ｐ
ＰＬＯ）、殺昆虫−１殺だに一作用物質であり、かつ反
福動物類の飼料利用効率を増加させる作用がある。

クロロホルム中でとった赤外線吸収スペクトルを図で表
わすと次のようである。

第１図　　　抗生物質Δ−２８０８６囚子Ａ第２図　　
　　　　　　　　　〃　　因子Ｂ第３図　　　　　　　
　　　　　　　因子Δの酢酸エステル誘導体 第４図　　　抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオ
ン酸エステル誘導体 第５図　　　抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの醋酸エス
テル誘導体 第６図　　　抗生物質Δ−２８０８’６因子Δのきつそ
う酸Ｔステル誘導体 第７図　　　抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン
酸エステル誘導体 第８図　　　抗生物質Ａ、−２８０８６囚子ＤＡ　−，
２８０８６因子類は構造上互に関連性があ２２− る。発酵の期間中に、少くとも４種類の抗生物τ′１因
子ｈ＜−緒に／１産七＼れ、混合物どｌノ（’　（！７
られる。

因子類は相ｎに分離され、かつ因子△　、ＢおよびＤは
、以−■・に記載刀るよう４ｙ個々の化合！Ｉｌｌどし
て甲部（される。ヘー’；’Ｒ０８６固Ｔ−η泊（乃）
昆合ｌ１１７１（，１大ていの有１幾溶媒に可溶性であ
るが、水に【；１不溶である。

１ス下の項目にΔ−２８０８６囚了Δ　、［３おにぴＤ
の物理的ならびにスペク１〜ル的性質を記載する。

抗生物質Ａ−２８０８６囚了Δはデー１？１〜ンー水か
ら結晶する。△−２８０８６因子八は約９８〜１００℃
で融解し、再凝固して約１９５〜２００°Ｃで再び融解
する。因子Δの元素分析結果として、次のような５ｖ均
百分組成が得られている：Ｃ１６６，６９％；ｌ−１，
９，８５％；０，２３．１０％。

ｖ１子△には実験弐〇ａ：＋Ｈ７エＯｎが提案されてい
る。

買足分析法によって決定されＩＣ１兇かｔＪトの分子Ｂ
１は７６４で・ある。

クロロホルム中における因子△の赤外線吸収スペクトル
は付図（第１図）に示した。次のような吸収帯のピーク
が観察される。２，８５．３．３４．５．８３、Ｇ、８
２．７．２２．７．５３（弱）、７．７８（弱）、８．
７５（強）、８゜９５（強）、９．１５．９．５０（強
）、９．５５（強）、９．６０．９．８５．１０．１５
．１０．４５．１０．７０（弱）ミクロン。

因子△のエタノール中にｄ３ける紫外線吸収スペク１−
ルは２２０７１／／以下に末端吸収があられれるだ（プ
である。

小水素化クロロボルム中で測定したΔ−２８０８６因子
への核磁気共鳴スペクトルに次の特徴がある： ６６．０１　、ｉ　　２１．４．１　１．３．９９．３
゜８９．３．８０．３，６７．３．６５．３．５７．３
．５５．２．８３．２．７６．２．７４．２゜６８．２
．６６．２．５８．２．５６．２．３０．２、２２．２
．１７．２．１０．２．０５．１゜９６．１．９０．１
．８５．１．　７０，１．６２．１．６０，１．　／７
．１．３９．１．３１．１゜２５．１．１８．０．９５
．０．９３．０．９０．０．８８．０．８５．０，７７
．０．７５．０゜７３．０．６８．０．６６＋）Ｉ）Ｉ
Ｉ１０アセトン−水から結晶させた抗生物質△−２８０
８６囚子Ａは次のような特徴のＸ−線粉末回折パターン
を示す。（ＣＬＩ千十照射、１．５４０５λ、ニッケル
・フィルター、（１は格子間隔（単位：オングストロー
ム））。

ｄ　　　　　　　対２ｍ １２．００　　　　　１００ １０．１０　　　　　　５０ ９．２５　　　　　　９０ ８．００　　　　　　４．０ ７．５０　　　　　　１５ ６．９２　　　　　　９０ ６．４０　　　　　　４０ ５．９８　　　　　　０５ ５．６８　　　　　　１５ ５．２０　　　　　　４０゜ ４．９８　　　　　４０ ４、．６２　　　　　　４０ ２５− ／１．．２１　　　　　　　　　２０ ３．７１８　　　　　　　　　１０ 抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａの比旋光度は、湿度２５
℃で測定した時、−５’ｌ’　　（Ｃ＝０．２、メタノ
ール）で、この比旋光度は数回の測定に基づく平均値で
ある。

８０％ジメチルホルムアミド水中における因子Ａの電気
滴定法では、ｐＫａ　ｆａ　７　、９を持つ滴定し得る
基の存在を示した。

抗生物質Ａ、　−２８０８６囚子Ａは種々の有機溶媒（
メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、ジメ
ヂルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホルム、アセト
ンおよびベンゼン）に可溶性であるが、ヘキサジの様な
極性のない有機溶媒には難溶であり、かつ水には不溶で
ある。

抗生物質Δ−２８０８６因子Ａには、塩類およびエステ
ル誘導体の形成可能な一個の酸基が存在し、かつエステ
ル化の可能な水ｌ、１ｇが少くとも一つ存在する。以上
に列挙した物理学的性状に基づいて、抗生物質Δ−２８
０８６因子Δの構造が提２６− 案されつるのである。しかしながら、その構造決定は単
に推定されたものであり、ここに提出された構造が単に
一つの実験に基づく仮説にｉｉｔいて表現されたもので
あると理解されるべきである。Ａ−２８０８６因子Ａの
Ｊｆｇ定構造は式■に示されている。

抗生物質△−２８０８６因子Ｂは白色結晶状化合物（ア
セ］−ンー水より）で、約１５０〜１５３℃の融点を持
つ。

高分解能の質ｍ１分析法によって測定された様に、因子
Ｂは見かけ１７６２の分子Ｍを持ち、Ｃ４３）−１７ａ
　Ｏ、、なる実験式が提示されている。

クロロホルム中での因子Ｂの赤外線スペクトルは付図の
第２図に示されており、次のような吸収帯のピークが観
察さる：２．８２．３．３０．５゜７７．５．８５．６
．８０，７．２０．７．５０（弱）、７．７２（弱）、
７．８０（弱）、８゜５７（強）、８．６８．８．９０
　（強）、９．１０．９．５０，９．８３　（強＞、９
．９０．１０゜１０．１０．１７（強）、１０．４３（
弱）、１０．８０（弱）、１１．２０（弱）、１１．３
５（弱）、１１．７３（弱）、１２．０３（弱）ミクロ
ン。

因子Ｂのエタノール中での紫外部吸収スペクトルは２２
０ゲに最大吸収（Ｅ　　＝１３７．５：ε１シ鴫 ＝１０．４７７）を示す。

２９− △−２８０８６因子Ｂの核磁気共鳴スペクトル（重水素
化クロロホルム中）では次の特徴が現われる。

δ７．２０，７．０９．６．２６．６．１５．４．１９
．４．１２．４．０５．３．９５．３゜８９．３．７８
．３．６２．３．５９．３．５２．３．４８．２．８１
．２．７３．２．６３．２゜５４．２．５２．１．９９
．１．９１．１．８４．１．７１．１．６７．１．６４
．１．５５．１゜４３．１．３３．１．１８．１．１１
．０．９６．０．９４．０．９０Ｓ０．８７．０．８４
．０゜７７．０．７４．０．６８ｐｐｍ。

抗生物質Ａ−２８０８６因子Ｂは、例えばメタノール、
エタノール、ジメチルホルムアミド、ジメヂルスルホキ
サイド、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンおよびベ
ンゼンのような種々の有機溶媒に可溶性であるが、ヘキ
サンのような非極性有機溶媒には極めて僅かしか溶解せ
ず、また水には不溶である。

Ａ−２８０８６抗生物質因子Ｂの化学構造は明−３〇− らかにされていないが、これまでに１１７られた物理的
化学的データは、因子Ｂには唯一のカルボン酸残１（，
２個のケ１〜ン残基おＪ：び１個以七のヒドロキシル残
基のあることを示している。

抗生物質Ａ−２８０８６囚子りは、ス］〜レプトマイシ
ス・オーレオファシェンスＮＲＲＬ５７５８にＪ：つて
生成される時には微ｍ因子である。しかし、スｌ〜レプ
］〜マイシス・オー−オフ１シエンスＮＲＲ＋　８０９
２にＪ：って生成される場合には、Ａ−２８０８６因子
りは回収された抗生物質活性の１０％に達する。

抗生物質Δ−２８０８６因子りは約９６〜９８℃の融点
をもつ白色結晶状物質（水−アセトンから）である。高
分解能質量分析により測定されたようにその見かけの分
子量は７７８である。

Ａ−２８０８６因子りのす［〜リウム塩の質量スペクト
ル中のピークの分子量は８００．５０５０であると観察
された（　Ｃｕ　Ｈ７３０ｕ　Ｎ　ａ　＝　８００　。

５０５０が計算値）。Ａ−２８０８６囚子りの遊離酸の
買置スペクトル中、７７８に小さいピークが７６０　、
５１１７　（Ｃｕ　Ｈ７，Ｏｔｌ＝　７６０　、５１２
５がＷｉ算値）に大きいピークが観察された。

’ＦＦ１Ｗｎ酸の質量スペクトルに於けるｍ／ｅ７６０
は分子イオンから水を失った結果である。従って因子り
の遊ｆ！Ｊｉ酸の分子イオン組成はＣａａ　Ｆ（７４０
ｎである。

Ａ−２８０８６囚子りの実験式としテハ、ｃ４ＡＨ７４
０Ｉ＋が提示されている。因子りの元素分析の結果は次
の百分組成を示す：Ｃ，６７，５９％：Ｈ，９，３８％
；０．２２．７７％。

Ｃｔ、Ａ８７４０＋１としての理論的百分率組成は、Ｃ
１６７，８７％：Ｈ，９，５１％：０．２２．７７％で
ある。

Ａ−２８０８６囚子りの赤外線スペクトル（第８図）に
は次の観察される極大吸収が含まれている。：２．８９
．３．３９．３．４３．３．５０１５．８８．６．９０
．’７．２７．７．６０，７゜８４．９．００．９．２
６．９．６２．１ｏ、３１．１０．５８．１１．１０，
１１．４９ミクロン。

９５％含水エタノール中でＡ−２８０８６囚子りは全然
紫外部に吸収帯を示さない。

重水素化クロロボルム中での／ｌ−２８０８６因子りの
核磁気共鳴スベク１〜ルは次の特性を示した：６６．０
０１，４．２０，４．１０．４．００，３゜９８．３．
９２．３．８６．３．８３．３．７９．３．６７．３．
６４．３．５７．３，５４．２゜８８．２．８１．２．
７１．２．６２．２．５８．２．４８．２．４３．２．
３７．２．２９．２゜２１．２．１５．２．１０．２．
０４．１．９７．１．８９．１．８３．１．７６．１．
６８．１゜６１．１．５８．１．５５．１．４７．１．
３９．１．３０．１．２５．１．１８．０．９５．０゜
９０．０．８８．０．８’ｌ、０．７４．０．６８ｐｍ
　　０ アセトン−水から結晶させた抗生物質Ａ−２８０８６囚
子りは下記の特徴あるＸ−線粉末一回折のパターンをも
っている（Ｃｌ　４→照射、１．５４０５λ、ニッケル
・フィルター、ｄ＝格子間隔（オンゲス１−ローム））
。

３３− （ＭＬＭＵＪＬ １２．４０　　　　　　　　１００ １０、　２０　　　　　　　　　７０ ８．８５　　　　　　　　　９０ ７．８０　　　　　　　　　３０ ６．８０　　　　　　　　　１０ ６、　３０　　　　　　　　１００ ５、　７０　　　　　　　　　２０ ５．３５　　　　　　　　　２０ ５、　１０　　　　　　　　　２０ ４．９０　　　　　　　　　１０ ４．６５　　　　　　　　　２０ ４、　４５　　　　　　　　　４０ ４、　２０　　　　　　　　　３０ ３．３０　　　　　　　　　１０ ３．１５　　　　　　　　　１０ ２、　９９　　　　　　　　　　Ｃ）５２、　７７　　
　　　　　　　０５ ２、　２８　　　　　　　　　０５ 温度２５℃で測定した時、抗生物質Ａ−２８０３４− ８６囚了りの比旋光度は一５６°　（Ｃ＝０．１、メタ
ノール）である。

８０％の含水ジメブル小ルｌ＼アミド中におりるΔ−２
８０８６因子りの電気滴定の結果、ＩＩＫａ値８．（’
＋７を持つ滴定し１！する基の存Ｉ「を認めた。

抗牛物貿△−２８０８６囚了ＤＩま、メタノール、エタ
ノール、ジメチルホルムアミド、ジメヂルスルボキシド
、酢酸エチル、クロロホルム、アセトン＜１らびにベン
げンのような種々の有機溶媒に可溶である。Δ−２８０
８６因了りは、ヘキリーンの」：うなジ１極１）１の有
機溶媒には極めて微Ｇ１シか溶解せず、水には不溶であ
る。

抗生物質△−２８０８６因子Ｄ（，１塩類おｊ；びエス
テル誘導体類を形成しうる一個の酸基を有し、かつエス
テル化のできる水ｇ　３４ｔを少くども一個有する。

以上に列挙した物理学的ｆ（１状に阜いて、抗生物質Ａ
−２８０８６因子りの構造が促案されている。

しかしイ丁がら、イの構造決定は甲にｉｆｆ定されｔｃ
ものであるから、ここに提示された構造が単に一つの実
験に基づく仮説を表したものであることを理解されるべ
ぎである。Δ−２８０８６囚子りの相定構造ば式■に示
される。

検出生物としてバスルス・ズブチリスΔＴＣ０６６３３
を用いた時の神々の系の濾紙クロマトグラフィーにおけ
る抗生物質Δ−２８０８６因子Δ。

ＢおよびＤのＲｒ値を第１表に掲げる。

０．１１　　０．０９　　０．１０　　メチル・イソブ
ヂル・ケトン（ＭＩＢＫ）で ６．・目した ０、４１　　０，１６　　０．２６　　Ｍ　Ｔ　Ｂ　Ｋ
で飽和した水に２％Ｄ−トルエンスル ボン酸と１％ごペリジ ンを添加 ０．５４　　０．４６　　０．３６　　水：メタノール
：アセトン（１２：３：１）。

ＮＨａＯＨでＩＩＨｌｌ どしたあとＨ３ＰＯａ でｐｌ−１７，５に調節。

０、／１８　　０，３ｆ３　　０．２９　　水に１％Ｍ
ＩＢＫ、Ｏ。

５％ＮＨ４，０Ｈ添加 ０．１５　　０，３３　　０．２５　　水１ｊ２に１７
．４ｇＫ　２１−ｌ　Ｐ　０４と３０鱈 ０．７５　　０，６１　　０．０４　　水：　Ｍ　Ｉ　
Ｂ　Ｋ　：酢酸エチル 第２表に、再び、バチルス・ズブチリスΔＴＣＣ６６３
３を検出生物として用い、シリカゲル（層の厚さ０．２
５ｍｍに予め塗布された平板、Ｆ−２５４，Ｅ、メルク
社製品）上で行った２種類の薄層クロマトグラフ系にお
ける抗生物質Δ−２８０８６因子Ａ　、Ｆ３およびＤの
Ｒｒ値を掲げる。

６．２４　　０，４２　　０．２６　　ベンゼン−作酸
エチル（３：２＞ ０．５４　　０．３４　　０．（ｉ６　　酢酸エチル−
ジエチルアミン（９５：５） Ａ−２８０８６−Ｉと仮称した今一つの物質が抗生物質
へ−２８０８６複合体に伴って副生ずる。

この△−２８０８６−１には微生物学的に活性はないが
構造的にＡ−２８０８６抗生物質５Ｒと関連性がある。

△−２８０８６−Ｉは白色結晶性化合物（アセ１〜ン・
水より結晶化）であり、約１６０〜１６２℃ノＦＪ！点
をもッテイル。Ａ−２８０８６−■と合成により調製し
たΔ−２８０８６因子ΔのメチルエステルのＮＭＲスペ
ク１−ルや他の性質の比較研究の結果、Ａ−２８０８６
−、ＩはＡ−２８０８６因子Ａのメチルエステルないし
は立体異性体のＪ：うな近縁化合物である証拠が得られ
た。

Ａ−２８０８６−Ｉは活性のＡ−２８０８６抗生物質因
子類に混ざって最初に沈澱してくるが、シリカゲル・ク
ロマトグラフ法によって他から容易に分目ｉＩされる。

溶出溶媒に酢酸エチルを用い、検出にバニリン＠霧試葵
（３％のバニリンのメタノール溶液に、木′ａ１００．
ｖｕ、一つきｆ１３Ｈ２ｓＯ４０，５ｙβを添加したも
の）を用いるシリカゲル薄層り０７１へグラフ法での概
略のＲｆ値は０．５３である。バニリンを噴霧して加熱
ザると、Δ〜２８０８６−Ｉは青色のスポットを与える
が、一方Ａ−２８０８６抗生物質類は明るい桃色のスポ
ットを与え、このものはすみやかに暗褐色味を帯びた青
色に変る。

抗生物質へ−２８０８６因子Ａ、Ｂｉ）３．及びＤｌな
らびに本明細調記載の因子ＡおよびＤのアシル・エステ
ル誘導体は塩類を形成しつるものである。

生理学的に許容される塩（ま、薬理学的にも許容される
塩、１なわち、温血動物に対す″る全体としての毒性が
、塩でない状態と比較して増加しない塩を意味する。Ａ
−２８（’）８６囚子ΔおｊζびＢの代表的な、かつ適
切なアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩にはすトリウ
ム、カリウム、リチウム、セシウム、ルビジウム、バリ
ウム、カルシウム、およびマグネシウム塩等がある。ま
た△−２８０８６因子ＡおよびＢの適切なアミン塩とし
てはアンモニウム」ｎならびに第四級のＣ１〜Ｃ７１−
アルキルアンモニウム塩およびヒドロキシ−〇２〜４ｌ
− Ｃ４−アルキルアンモニウム塩等がある。アミン塩の具
体的な例どしては、Δ−２８０８６囚子ΔおよびＢが水
酸化アンモニウム、メチルアミン、第２級ブチルアミン
、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピ
ルアミン、エタノールアミン、トリエチルアミン、３−
アミノ−１−プロパツール等と反応して生成する塩があ
る。

△−２８０８６因子Δ　、ＢおＪ：びＤｌならびに因子
ＡおよびＢのアシル・エステル誘導体のアルカリ金属お
よびアルカリ土類金属のカチオン性塩類は通常のカチオ
ン性の塩類の公知の調製法によって造られる。例えば、
ｌ離酸の状態の抗生物質因子ないしはエステル誘導体を
加湿したメタノールまたはエタノールのような適当な溶
媒に溶解し、この溶液に、希望する無機塩基の厳密な計
算烙をメタノール水に含ませた溶液を加えればよい。こ
うしてできた塩は、溶媒の濾過や蒸発のような常套の方
法によって単離できる。

有機アミン類との反応で形成される塩も同様の方法で調
製することができる。例えば、アセ１〜ン４２− のような適当な溶液中で、ガス状ないしは液状のアミン
を抗生物質因子の溶液に加え、溶媒と過剰のアミンを蒸
発除去づればにい。

家畜病治療薬剤学の技術でよく知られているＪ：うに、
抗生物別で家畜を治療Ｊる場合、抗生物質の形状はあま
り重要Ｃ゛はない。

大抵の場合には、動物の体内の状態によって、薬物は服
用さけられた状態以外の開状態に変化する。

従って、塩の形で８１１用ざＶることは、治療法自体に
は意義がない。しかし経済上、便宜上、ならびに青竹の
理由から塩の形が選ばれることがある。

Ａ、−２８０８６囚子Ａはアシル・エステル誘導体を形
成する。エステル化は任意のＣ２〜Ｃ６−酸無水物ない
しは酸クロライドで処理した時に、Ａ、−２８０８６因
子Ａの水酸基群の一個所で起る。

例えば、このようなエステル類の典型的な調製法として
は△−２８０８６因子八を、相手の酸の無水物と室温で
反応させる方法がある。これらのエステル誘導体はまた
抗生物質として有効であり、かつ飼料利用効率を増加さ
せる薬剤としても有用である。

以下の各項に、これらのＡ−２８０８６因子Ａのアシル
・エステル誘導体類の特性を記述する。

Ａ−２８０８６因子Δのアセデル・エステル誘導体は融
点約１００〜１０３℃の白色結晶性（アセ１ヘン−水よ
り）の物質である。Δ−２８０８６因子Ａアセチル・エ
ステル誘導体の実験式はＣ４５８７４０ｔ２で、分子量
は約８０７であるが、何れもＡ−２８０８６因子Ａに提
案された実験式を基際にしたものである。因子Ａのアセ
チル・エステル誘導体の元素分析値を示す。

計算値、Ｃ４６）’１７４０柁として、Ｃ，６６，９７
％：Ｈ，９，２４％：０，２３．７９％、実測値、Ｃ，
６７，６７％：Ｈ，８，７１％：０，２３゜１３％。

Ａ−２８０８６因子Ａのアセチル・エステル誘導体のク
ロロホルム中でとった赤外線吸収スペクトルを第３図に
示した。下記の極大吸収帯が観察される。２．８５．３
．３６．３．３８　（強）、５．８０．６．８３．７．
２５．７．５２（強）、７．６０（弱＞、７．８０（強
）、８．７１５（強）、８．８０　（強）、８．９５（
強）、９．１０（強）　、９．２０，９．６３．９．８
０（強）、１０．１２（弱）、、１０．２５（弱）、１
０．５０ミクロン。

エタノール中でのΔ−２８０８６囚子Ａアセチルエステ
ルの紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だ【プが観察さ
れた。

８０％の含水ジメチルボルムアミド中におけるＡ−２８
０８６因子ΔアセチルニスデルＭ１体の電気滴定の結果
８．５のｐＫａ値を持つ滴定し得る基の存在が示された
。

Ａ−２８０８６因子Ａのプロピオニルエステル誘導体は
、融貞約９６〜９８℃の白色結晶性（アセ１−ンー水か
ら）の化合物である。Ａ−，２８０８６因子のプロピオ
ン酸エステル誘導体は、Ａ−２８０８６因子八について
提案された実験式に基くと、その実験式は（／　ｓ　Ｈ
７ｃ　Ｏｔ２で、分子量は約８２１である。因子Ａのプ
ロピオン酸エステル誘導４５一 体の元素分析値の結果から下記の百分率組成の値が得ら
れた。

計算値、Ｃｓ　Ｈ７Ａ　Ｏ１２トＬ／　Ｔ、Ｃ，６’７
．２９％：Ｈ，９，３３％；０．２３．３８％、実測値
。

Ｃ，６６，０６％：ｌ−１，９，１７％：０．２３゜４
１％。

Δ−２８０８６因子へのプロピオン酸エステル誘導体の
クロロホルム中における赤外線吸収スペクトルを第４図
に示した。下記の極大吸収が観察された。２．８５．３
．３３．３．３８　（強）、３．４５（強）、５．７５
（強）、５．８２．６゜８１．７．２２．７．３０（強
）、７．５０（弱）、７．６０　（弱）、７．８０．８
．４３．８．７５（強）、８．９０，９．０５．９．１
５（強）、９．５０（強）、９．６３．９．８３　（弱
）、１０．０５（強）、１０．１３．１０．２０（強）
、１０．４５．１０．６８ミクロン。

エタノール中でのＡ−２８０８６因子Ａのプロピオン酸
エステル誘導体の紫外線吸収スペクトルでは末端吸収だ
けが観察された。

４６一 抗生物質Ａ−２８０８６因子への酪酸エステル誘導体は
、融点約９６〜９８℃の白色結晶性（アセトン−水から
）の化合物で必る。Δ−２８０８６因子Ａの酪酸エステ
ル誘導体は、Δ−２８０８６因子八について提案された
実験式から推察されルＪ：　ウニ、ソノ実験式ハｃ４ｚ
　Ｈ，２０１２Ｆ、分子（ｆｌは約８３５であり、Ｃ，
６７，６０％；ト１，９゜４１％：０，２２．９９％の
近似的組成を持っている。

Ａ−２８０８６因子△の酪酸エステル誘導体のクロロホ
ルム中における赤外線吸収スペクトルを第５図に示した
。下記の極大吸収が観察された。

２．８９．３．４０．３．４５．３．５１．５゜８５．
５．９２（強）、５．９７（強）、６．９０．７．３０
．７．８４（弱）、８．５５．８゜８５（弱）、９．０
１　（強）、９．２６．９．７６．９，９５．１０．３
１．１０．６４ミクロン。

抗生物ＭＡ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘
導体は、約１７３〜１７５℃の融点を持つ白色結晶性化
合物（アセトン−水より）である。

Δ−２８０８６因子へのきつそう酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａの実験式から推察した実験式は、
Ｃ４１１ＨｍＯ１２、分子ｍ’ｌｌＪ　８４９　Ｔ：　
Ｃ。

６７．８９％；）−１，９，５０％：０．２２．６１％
なる近似元素組成を持っている。

Δ−２８０８６因子Ａのきつそう酸エステル誘導体のク
ロロホルム中における赤外線吸収スペクトルを第６図に
示した。下記の極大吸収が観察された。２．９０．３．
４０，３．４５．３．５１．５．８７．５．９２（強）
、５．９９（強）、６゜９１．７．３０，７．６９（弱
）、７．８７（弱）、８．１６．８．５８．８．８５＜
弱）、９．２６．９．７６．１０．００（弱）、１０．
３１．１０．６４ミクロン。

抗生物質Δ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘
導体は、約１６３〜１６７℃の融点を持つ白色結晶性化
合物（アセトン−水より）である。

Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘導体は、
Ａ−２８０８６因子Ａとして提示された実験式から推定
した実験式〇ａＨ２０２、分子量約８６３およびＣ，６
８，１８％：）−１，９，５８％；０．２２．２４％な
る近似元素組成を持っている。

Ａ−２８０８６因子Ａのカプロン酸エステル誘導体のク
ロロホルム中における赤外株吸収スペクトルを第７図に
示した。下記の極大吸収が観察された。２．９０．３．
４０，３．４５．３．５１．５．８７．５．９２（強）
、５．９７（強）、６゜９０１７．３０，７．６６　（
弱）、７．８４（弱）、　８．１６　　、８　、　５８
　、８．８５＜　　弱　）　　、　９．０５（強）、９
．１７．９．７２．９．９５．１０゜２９．１０．６２
ミクロン。

Ａ−２８０８６因子Δをアシル化すると、１Ｆ−１核磁
気共鳴スペクトルにおいて次のような変化の起ることが
分った３、カルビニル共鳴が約４　ｐｐｍにおいて起り
、約５．３ｐｐｍだけ（正確な位置は種々のアシル誘導
体で僅かに変る）下の領域に移行（シフト）する。その
結果ビニル・プロトン・シグナルも移行する。このシフ
トは、下に示した部分構造中に現わされている変化に特
徴的である。

４９− で （この図λまＲはＣ１〜Ｃ５−アルキルを現わす。）こ
の部分構造は、ＩＨ−同一核内共役解除（ホモヌクレア
・デカップリング）実験結果ならびに、酢酸およびプロ
ピオン酸・エステル誘導体からの１３ｃ−核磁気共鳴実
験結果と完全に一致する。

Ａ−２８０８６因子ＡのＣ２〜Ｃ６−アシル・エステル
誘導体類はメタノール、エタノール、ジメチルホルムア
ミド、ジメチル・スルホキシド、酢酸エチル、クロロホ
ルム、アセトン、およびベンゼンのような種々の有機溶
媒に溶解する。しかしヘキサジのような非極性有機溶媒
には僅かしか溶解せず、かつ水には不溶である。

Ａ−２８０８６のＣ２〜Ｃ６−アシル・エステ５０− ル誘導体はどれも塩やエステル誘導体を形成しうるＭ基
を１個有ηる。

本発明にお（＋る新規抗生物質は、スＩ〜・リプ１へマ
イシス・Ａ−レΔファシェンスの△−２８０８６生産竹
を有する菌株を、実質的に抗生物活性が産出されるＪ：
で、りｒ気的攪拌条イ！１の下で適ｌ、０な培養基中で
１８養づることによって生産される。生成した抗生物質
類は公知の種々の分１ｉ１１１精製法にｊ：って回収さ
れる。

△−２８０８６抗生物７１の製造に石川な新型微生物の
一つは、１〜ルー）のアララ１へ山上で採集された土壊
試わ１から分離された。この生物は、シャーリング（Ｅ
、Ｂ、）およびボッ１〜リブ（Ｄ、）にｊ：つて゛コΔ
ペラブブ・デスクリプジョン・オア・タイプ・カルチュ
アー・オア・ストレプトマイシス、■、アディショナル
・スペシーズ・デスクリプジョンズ・フロム・ファース
１〜・アンド・セコンド・スタデイズ″インターナシ三
１プル・ビラレチン・オア・システマテイツク・バクテ
リオロジー、１８巻、２７９〜３９２頁（１９’６８）
に記述されている如く、ストリプ１へマイシス・オーレ
オファシェンス・ダツガー（３ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ａｕｒｅｓｆａｃｉｅｎｓ　　ｌ）ｕｇｇａｒ　）の−
菌株として分類されている。この分煩法は若干の付加的
ＩＩＥ！準を添えてインターナショナル・ストレプトマ
イシス・プロジェクト〔シャーリング（Ｅ、Ｂ、）およ
びゴツトリーブ（Ｄ）、メソツズ・フォア・キャラクタ
リゼーション・オア・ストレプトマイシス・スペーシー
ズ・インターナショナル・ビュレチン・オア・システマ
テイク・バクテリオロジー、１６巻３１３〜３４０　（
１９６６））で１１１挙されている方法に躯づくもので
ある。色彩名はｌ５ＣＣ−ＮＢＳ法に従って選定した〔
ケリー（Ｋ、Ｉ−、）およびシャット（Ｄ、Ｂ、）の′
ザ・ｌ５ＣＣ−ＮＢＳ・メソッド・オア・デジグネーチ
ング・カラー・アンド・ア・ディクショナリー・オア・
カラー・ネームズ”　Ｕ、　Ｓ、　Ｄｅｐｔ、ｏｆ　　
Ｃｏｎｖｅｒｃｃ。

Ｃ１ｒｃ、５５３．１９５５．　ＷａＳｈｉｎｇｔｏｎ
、Ｄ、　Ｃ。

〕。

括弧内の数字や記号はトレスナーおよびバッカス式の（
ｔ２２系列を参照した〔１〜レスナー（＋−１，Ｄ。

）・アンド・バッカス（Ｓ、Ｊ、）、”システム・Ａブ
・カラー・ホイールズ・フォア・ストレプトマイシス・
タクソノミー°′アプライド・ミクロバイオロジー・１
１巻、３３５〜３３８　（１９６６））。色命名表には
下に線を引いた。メルフおよびボウルのカラーブロック
は括弧内に入れた〔メルフ（△）アンド・ボウル（Ｍ、
Ｒ，）、″ディクショナリー・Δブ・カラー′′マツク
グロウニヒル・ブック・コンパニー、インコーポレーシ
ョン、ニコー］−り、Ｎ、Ｙ、、）。

培養菌は特に註を加えておらぬ限り３０℃で１４０間生
育させた。

△−２８０８６生産菌Ｉ□Ｒ１５７５８の１Ｌ性配）４
１０ 形　　　態 胞子形成気菌糸は鉤状、輪状、および螺旋状のものから
成る。典型的な屈曲直腸型の形態も観察される。胞子は
り１口＜かつ円筒形で、１０〜５０個の胞子が鎖状につ
ながっている。胞子は１．３μ５３− Ｘｌ、７５μの大きさである（１．３μ〜１．９５Ｘ１
．３μの範囲）。電子顕微鏡によって観察したところ、
胞子の表面構造は平滑である。

各種の培地上にお（プるＮＲＲＬ５７５８の培養的特徴 ・ＩＳＰ　Ｃ２（酵母エキスー麦芽エキス）培地：発育
旺盛、裏面は中位の黄色（１１に３）、気菌糸の発生は
中位ないし良好、胞子形成、白色（Ｗ）１３ｈａおよび
暗灰色（ＧＶ　）　３　ｉｈ、溶解性色素なし。

・ＩＳＰ　　Ｃ３（オートミール）培地：発育良好、裏
面は灰黄色（１１Ｂ２）、気菌糸の生成は十分、暗灰色
（Ｇｙ）３ｉｈ、褐色溶解性色素少々。

・ＩＳＰ　　Ｃ４（無ｉ塩類−澱粉寒天）培地：発育旺
盛、裏面は淡黄褐色（１２Ｅ５）　、気菌糸および胞子
（Ｗ）紫がかった白色１３ｂａないしくＧｙ　）明るい
灰色ｄ、溶解性色素なし。

・ＩＳＰ　　Ｃ５（グリセリン−アスパラギン寒天）培
地： ５４− 発育良好、裏面は青味がかった黄緑色（１０Ｂ１）気菌
糸発〈ｉ−良ｔｉ’ｒ、胞子（ＧＶ）黄灰色２（１ｃ、
ないし明るい法界褐（’、５ｆｅ、溶解性色素なし。

・ｉ・７１〜・ペース１〜Ａ−トミール寒天培地二発育
旺盛、裏面は淡ｆ３７褐色（１３１−１７）　、気菌糸
Ａ３よび胞子生成中位ないし良りＩ’（Ｗ＞白色ａない
しくＧＶ　）培地は灰色０　：極微１五の褐色溶解性色
素。

・グリセリン−グリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は暗灰黄色（１２＋６）、気菌糸および
胞子形成良好（Ｙ）青味〈ｂる黄色２（Ｉｂ。

溶解性色素なし。

・葡萄糖−アハスパラギン寒天培地： 発育旺盛、裏面は法線黄色（１２Ｅ２）　、気菌糸おＪ
：び胞子多しくＧＶ）苗灰色２　ｄｃ、極微ｆｆ３の褐
色溶解性色素。

・普通寒天培地： 発育良好、裏面は灰黄色（１２Ｂ２）、気菌糸および胞
子あるも、生成貧弱のため色の指定なし、溶解性色素１
．”Ｋ　Ｌ／。

・ベネットの寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰黄色（１２に３）　、気菌糸および
胞子生成貧弱（ＧＶ　）黄灰色２ｄｃ、溶解性色素なし
。

・リンゴ酸カルシウム寒天培地： 発育良好、裏面は灰褐色（１５Ｃ８〕、気菌糸および胞
子形成なし、褐色溶解性色素あり、接種位置透明。

・ツアペックの寒天培地： 発育貧弱、生育貧弱のため色の指定なし。

・エマーツンの寒天培地： 発育旺盛、裏面法黄色（１１Ｊ　５　）　、気菌糸およ
び胞子なし、溶解性色素なし。

・ヂロシン寒天： 生育旺盛、裏面淡いオリーブ褐色（１４Ｃ４）、気菌糸
および胞子多し、＜Ｗ）ｂ（中央部）ないしくＧＶ　）
淡褐灰色３　ｆｅ　（周辺部）、僅かな褐色溶解性色素
。

・ｊ〜リプトン−醇ｆ’４）寒天培地：生育貧弱、色の
指定なし。

次に、標準処方に従って、ＮＲＲ１５７５８閑の生理学
的４！１質を調べた。観察された１４１状と知り１ｑた
特徴は次の如くである。

観察されたｆ１人　　　　　特　　　徴牛乳に対づる作
用　　ミルクをペプｌ−ン化し、白色の生育輪を生じる
、透明 部位は黄褐色、Ｉ］１−１５．７ 硝酸塩の）７元　　　　陽　　性 肉汁げラヂン　　　　１４［１で３０％液化メラニン色
素生産性： ヂロシン塞天斜面　　弱陽ｆｌ：（４日後色素生成）ト
リプトン−酵母　　陰　　１ノ１ エキス 生育温度（ＩＳＰ　　　２６〜３０℃生育良りＴ：３培
地β２′Ｍ母エキス、０〜３７℃生育旺盛かつ胞麦芽エ
キス斜面）　　予形成：４５℃菌糸のみ僅５７− かに生育、赤色溶解付色素 生成 ざらに、Ｎ　ＲＲＬ　５７５８菌について行った炭素源
利用能をしらべた結果は下に示す如くで、菌の生育の度
合を示すのに用いた記号は、＋　　生育良好、炭素利用
陽性 （＋）　　貧弱ないしまずまずの生育 （−）　　生育微弱、炭素利用多分なし〜　　生育せず
、炭素利用せず、 炭素源　　　　　　　　利用能 り一葡荷載　　　　　　　　　十 １−−アラビノース　　　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　　　　＋ Ｄ−グルタ１〜−ス　　　　　　＋ 蔗　　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｄ−
マンニラ１−　　　　　　− １−イノジット　　　　　　　＋ ラムノース　　　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　− −Ｃ７１ントロール　　　　　　一 ５８− （炭水化物無添加） 今一つの新規のΔ−２Ｂ　（１８６牛産微生物は、化学
的な変界処理を施した後、一連の自然淘汰法によってス
トシブ１〜マイシス・Ａ−レオファシェンスＮ　ＲＲＬ
　５７５８から誘導したものである。

Ｎ　ＲＲ＋−８０９２としてｊ４−秤と同定された本機
生物はまたス］〜リプトマイシス・オーレオファシェン
ス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｕｒｅｏｆａｃｉ
ｃｎｓ）ダガーの一菌株として分類した。この分類は以
前に記述されたストレプトマイシス分類法ならびに類似
の培養条件を使用したＮＲＲＬ８０９２１ｉ１！ｉの研
究に基づく。これらの研究に於て観察されたＮＲＲＬ８
０９２閑の特徴を以下の諸項目に総括記述した。

Ａ−２８０８６生産菌朱Ｎ　ＲＲ＋−８０９２のし性記
述 形　　　態 ＴＳＰ　　β７培地（ヂロシン寒天）」ニで、本培養菌
は往々鉤秋気菌糸（ｈｏｏｋ）を形成するが、主として
短い直立した胞子柄（５ｐｏｒｅｐｈｏｒｅ　）を形成
する。

胞子鎖は一連あたり１０胞子以下で、通常は一連につぎ
４〜７胞子である。短い、直立した胞子鎖が次の培地で
観察された：　ＩＳＰ　　β３．ツアペック溶液寒天お
よびＩＳＰ　β５゜またエマーツンの寒天上では多数の
集束菌糸が観察された。

ヂロシン寒天（ＩＳＰ　　β７）と葡萄糖−アスパラギ
ン寒天上で電子顕微鏡観察を行った。胞子は平滑で、長
さ１．２μ〜２．０μ、幅約１．０μの大きさの範囲で
分布している。平均的な胞子の大きさは１．６μ×１．
０μ。

各種培地におけるＮ　ＲＲ１８０９２の培養的特徴： ・ＴＳＰ　　β２（Ｍｌ母エキス−麦芽エキス）培地二
発育十分、裏面は淡黄褐色（１２＋−１８Ｌ気菌糸十分
、胞子形成貧弱、気菌糸は淡灰色〔１１Ａ１〕、溶解性
色素なし。

・ＩＳＰ　β３（オートミール）培地：生育まばら、裏
面透明、気菌糸なし。溶解性色素なし。

・ＩＳＰ　　β４（無機塩−澱粉寒天）培地：発育中位
、裏面法黄色（１１Ｂ２）、気菌糸に乏しくて、胞子形
成す、気菌糸は青味ある黄灰色（１０Ａ１）、溶解性色
素なし。

・ＩＳＰ　　β５（グリセリン−アスパラギン寒天）培
地： 発育中位、裏面は青味ある黄色（１０Ｆ２）、気菌糸十
分、胞子形成貧弱、気菌糸は白色（１０△１〕、溶解性
色素なし。

・トマト・ベースト−オートミール寒天培地：発育中位
、裏面は灰色がかった緑黄色、気菌糸十分、胞子形成中
位で淡青灰色（５３Ａ２）、溶解性色素なし。

・グリセリン−グリシン寒天培地： 発育旺盛、裏面は灰黄色（１１ＥＡ）、気菌糸中位で白
色（１０Ａ１）、胞子形成せず、溶解性色素なし。

・葡萄糖−アスパラギン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄色（１０Ｆ２）、気菌糸胞子形成
とも中位、白色〔１０△１〕、溶解性色素なし。

６１− ・普通寒天培地： 生育まばら（ｓｐａｒｓｅ）　、ｍ面は青味ある黄色（
’１ＯＢ２）、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ベネットの寒天培地： 発育十分、裏面の培地黄桃色（１１Ａ７）、気菌糸極め
て貧弱、胞子形成なし、溶解性色素なし。

・リンゴ酸カルシウム寒天培地： 発育極めて不良、透明、気菌糸なし、溶解性色素なし。

・ツアペック液寒天培地： 生育極めて不良、裏面透明、気菌糸なし、溶解性色素な
し。

・エマーツンの寒天培地： 発育中位、裏面法黄色（１１１５）、気菌糸点在す、胞
子形成なし、溶解性色素なし。

・ヂロシン寒天培地： 発育中位、裏面は淡黄褐色（１２Ｈ６）、気菌糸中位、
周辺は淡青灰色Ｃ５３Ａ２）　、中心部は白色に近い、
胞子形成は中程度、溶解性色素なし。

・トリプトン−Ｍ母寒天培地： ６２− 生育極めＣ不良、透明、気ｒｉｉｉ糸ｒｔ　シ、、溶Ｍ
　ｆ！色素なし。

ＮＲＲ＋　８０９２菌はまた、標準処方に従って、特定
の生理学的性質を調べた。観察した性状と、知り得た特
徴は次の如くである。

観察した性１人−特　　　　徴 牛乳に対する作用　　ペプトン化（９０％）、青味を帯
びた黄色の生育環を 生じ、透明部位ｔｉｔ淡黄色、 ｐｌ−１４，６ 硝酸塩の還元　　　　陽　　性 肉汁ゼラチン　　　　１４日で５０％液化メラニン色素
の生産性： ヂロシン寒天斜面　極めて弱い陽性 トリプトン−陰　　性 酵母エキス汁 人　参　片　　　　発育Ｉｌｌ’盛、淡黄色、気菌糸な
し 馬　鈴　薯　片　　発育旺盛、灰白色、気菌糸なし。プ
ラグも変化せず。

生育温度（ＩＳＰ培地β２酵母エキス麦芽エキス斜面）
＝２５℃で旺盛に生育、十分くまずまず）な気菌糸生成
、ｗ面淡褐色、溶解性色素なし、３０℃で生育旺盛、気
菌糸十分、裏面淡褐色、溶解性色素なし、３７℃で生育
旺盛、気菌糸十分、裏面は褐色、溶解性色素褐色、４０
℃、生育旺盛、気菌糸はまばら、衷面は赤褐色、溶解性
色素褐色褐色あり、４５℃、生育十分、気菌糸なし、裏
面は赤褐色、中程度の赤褐色色素。

次に、ＮＲＲＬ８０９２閑について行った炭素源利用能
を吟味した結果は下に示す如くであり、用いた記号は生
育の度合を示す。

＋　　生育良好、利用能陽性 （＋）　　生育弱ないし−１−分（まずまず）（−）　
　生育微弱、利用能なしと推定−生育せず、利用能なし 炭素源　　　　　　　　利用能 り一葡荷載　　　　　　　　　十 Ｌ−アラビノース　　　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　　　　＋ Ｄ−フルク１〜−ス　　　　　　」− 蔗　　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｄ−マ
ンニット　　　　　　　− ｉ−イノジット　　　　　　　＋ ラムノース　　　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　− −Ｃコントロール　　　　　　− （炭水化物無添加） Ａ−２８０８６生産性のストレプトマイシス・オーレオ
ファシェンス株の若干の性質は、シレーリングおよびゴ
ッ］〜リーブにより記述されている生物の性質と異って
いる。これらの差異を第３表に総括表示した。

６５− ６６　− Ｎ　ＲＲｌ−５７５８菌とＮ　ＲＲ＋、−８０９２菌ど
の特異性の差異を第４表に総括した。

生長物の　数種の培地上で　　数種の培地上で色　　　
　黄色　　　　　　　クリームないし黄色 胞子形成　１−７１〜・ペース１〜．往々鉤状どなるが
オーミーミル及び　　直立した胞子柄 無機虚１−澱粉培地　あり。

」二で゛螺胚（状１抱γ柄 のちの（１りり リンゴ酸　生育十分で出色　　生育まばら、周辺カルシ
ラ　周辺透明化　　　　透明でない。

ム培地上 の生− 無Ｉｆｆ　ＪＸ２−　胞子形成中程度　　殆んど１１１
す了形成澱粉培地　気菌糸は紫白色　　なし、気菌糸は
上の生育　４１いし灰色　　　　淡黄法（Δベネッ１〜
　裏面は古黄Ｃへ　　　裏面は桃色の寒天上 のくに育 Δ−２８０８６抗生物質類の生産に有用なストレプトマ
イシス・オーレオファシェンスの培養物は、寄託されて
、米国イリノイ州ペオリア６１６０１にある米国農務省
の農業研究サービスの北方市場取引ならびに栄養研究部
（Ｔ　ｌｅｅ　　Ｎ　ｏｒｔｈｅｒｎＭ　ａｒｋｃｔｉ
ｎａ　ａｎｄ　　Ｎ　ｕｊｒ！［！Ｏｎ　　Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ　Ｄ　１ｖｉ−ｓｉｏｎ、（Ｊ　、　Ｓ　、　Ｄ
　ｅｐｔ、ｏｆ　　Δｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ、　Ａ　ｇ
ｒｉ−ｃｕｌｔｕｒａｌ　　５ｅｒｖｉｃｅ、　Ｐｅｏ
ｒｉａ、　Ｉ　１ｌｉｎｏｉｓ、６１６０／Ｉ）の保管
収集物の一部となっており、そこからＮＲＲＬ５７５８
およびＮＲＲＬ８０９２なる寄託Ｍ’ｒ号で入手できる
。

また、ス１へリプトマイシス・オーレオファシェンスＮ
　ＲＲＬ　５７５８およびストレプトマイシス・オーレ
オファシェンスＮＲＲＬ８０９２は千葉市稲毛東５丁目
８番１号に住所を右する工業技術院微生物工業技術研究
所にそれぞれＦＥＲＭ−ＰＮｏ、３０９８号おＪ：びＦ
ＥＲＭ−Ｐ　　Ｎｏ、３０９９号どして寄託されている
。

ス１〜リプ］へマイシス・オー−オフ１シエンスＮＲＲ
Ｉ　５７５８あるいはストレプトマイシス・オーレオフ
ァシェンスＮ　ＲＲＬ　８０９２の生育は、多くの培Ｍ
’ｌのうちの任意のものが用いられる。しかしながら生
産上の経演性、即ち収宰の善し悪し、ならびに生成物分
離の￥１１易をいう点で好適な培養基というものがある
。大規模な発酵で好ましい炭水化物源は、例えばタビメ
カのデキス１−リンど蔗糖であるが、その他葡荷載、と
うもろこし澱粉、宋糖、マンノース、麦芽糖、乳糖等々
もまた用いることができる。

他にもコーン油、ピーナツ１〜油、大豆油および魚油が
右利な炭素源となる。Ｑγましい窒素源は酵素で分解さ
れた力１！インであるが、ペア１−ン大豆粉、綿実粉、
グルタミン酸のようなアミノ酸等々もまた用いられる。

培養１課に加えられる無機栄養塩類としては、ナ１〜リ
ウムー、マグネシウム−、カルシウム−、アンモニウム
−９虐酸−９ｍ酸−１硫酎−９硝酸−イオンの様なイオ
ンを作るような従来の可溶性塩類がある。

６９− 微生物の生育と増殖に必要な微母要素もまた培地に含有
させるべぎであり、かかる微量要素は通常、微生物の生
育要求に見合うだりの格は培地中の仙の成分の夾雑物と
して混入している。

大規模な発酵培養基において、泡立ちが問題となるなら
、ポリプロピレン・グリコールのような消泡剤を生伍（
例えば０．２ｆｆ６／ｌ添加することも必要であろう。

その他、絶対に必要ではないけれども、Ａ−２８０８６
生産性のストレプトマイシス・オーレオファシェンス株
の該抗生物質生産は、大豆油のような油の少量の添加に
より増強される事を付記して（１シく。

次に、Δ−２８０８６抗生物質の実質上有意義な■だり
生産するためには、タンク内で通気度拌発酵するのが好
ましいが、少量のΔ−２８０８６抗生物質なら振盪フラ
スコ培養によって得られるであろう。微生物を胞子の形
態のままで大型タンクに接種することに伴なう抗生物質
産生の時間的なずれ（Ｉａｏ）のため、生育力のある種
菌を接種７０− ηることが好；１ニジい。イ（−合力のある種菌とｌ；
１．、微生物の新訂で、活発に増殖している１１１養物
のことで、これは、少８１の培地に胞子形；１：たは菌
糸片を接種して調製される。この生育力のある種培養物
を、更に大型タンクに移植−りる。生育力ある種培養物
の増殖に使用する培地は大型タンクに用いるものと同一
であっＵ　ｌ）Ｊ：いが、′Ａ：たそれ以外の培地も用
いられる。

次に、木へ一２８０８６生産微生物は約２０〜４０℃の
湿度で増殖しうるが、約２７〜３０℃の淘ｔＵに於”Ｃ
Δ−２８０８６の最も好ましい生産が起るＪ：うである
。

好気的）城拌］Ｆ１養では１０例として滅菌空気が培地
に吹き込まれる。微生物を十分に増殖させるために、タ
ンク生産で用いられる空気量は、通常毎分、培養液１１
の０．１容吊以」−であることが好ましいとされている
。この△−２８０８６抗生物質を効果的に生産さ往るた
めの、タンク生産に使用する空気量は、タンク中の培養
ブロスの０２２５容吊以」二であることが殊に好ましい
。高度の溶解酸素のだめに該抗生物質の生産が抑制され
、低下するようなことはない。

抗生物質生産は、発酵期間中、培養ブロスない］ノは培
養菌苔固形物抽出物を試わ１として、目的とする抗生物
質類に感受性のあることが知られている微生物を対象と
した抗生物質活性試験によって追跡することができる。

本発明の抗生物質類の試験に有用な検定用生物の一つは
バチルス・ズブチリス△ＴＣＣ６６３３である。この生
物学的検定法は寒天平板上でペーパー・ディスク（ｐａ
ｐｅｒ−ｄｉｓｃ：濾紙平円板）を用いることにＪ：り
好適に遂行される。

培養物無接種口、１の培地の当初のｐＨは、使用する培
地により多様である。一般にそのＯＨは６゜０へ・７．
５の範囲にあればよく、発酵の終末期（生産物の収穫期
）のＤＨはやや高まり、６．５〜８．０の範囲となるの
が＠通である。

一般に、抗生物質活性が検出されてくるのは発酵の二日
目からであり、通常約６〜１０日の間に最大の成果が現
われてくる。

前記のＡ−２８０８６抗生物質は、通気１り拌発酵条イ
′１下での産〈トに続き、発酵技術士公知の方法によっ
て、発酵液から回収することが出来る。Ａ２８０８６産
牛微生物の発酵中に出来る抗生物質活性は菌糸塊および
培養濾液の何れにも見出される。従って、濾過、抽出な
らびに吸着クロマ１〜グラフ法を含む諸方法を相合せる
ことによって、Ａ−２８０８６抗生物７１類の最大限麿
の回収が達成されるのである。発酵ブロスの全部ないし
はその濾液から△−２８０８６抗牛物貿類を弁部（する
のに好ましい溶媒は酢酸エチルであるが、その他、通常
用いられている溶媒類でも十分である。

Ａ　−２Ｂ　Ｏ８６因子Ａ、ＢおよびＤを分離するのに
特にイｉ利な方法の一つは全発酵ブロスのｐＨを約３．
０１ｉ７に下げることである。このｐＨ３。

０１−は、△−２８０８６囚子Δ、ＢならびにＤ　ハ菌
糸塊から都合Ｊ：　＜　濾別できる。Ａ−２８０８６因
子類を分離りる今一つの有利な方法は、例えば、重炭酸
すｌ・リウムの、」；うな小炭酸塩をブロス１リツトル
当りほぼ１グラムの計算で全発酵ブロスに７３− 添加することである。それによって、Δ−２８０８６因
子類は塩の形で菌糸塊と都合よく分離されるのである。

該抗生物質類を菌糸塊から分離するためにメタノールは
好ましい溶媒であるが、その伯の低級アルコール類やケ
トン類もまた用いられる。

次に共湘蒸溜法もまた△−２８０８６抗生物質類の回収
に使用すると右利である。この方法では、発酵ブロスに
、水と適当な共沸混合物を形成する有機溶媒が加えられ
る。この溶媒−ブロス混合液を共沸蒸溜してブロスから
少くとも半和の水を除すると、Ａ−２８０８６抗生物質
類が有機溶媒中に溶存している水−溶媒混合物が得られ
る。不溶性の副生物は濾過または遠心分離法のような適
当な方法で分離し、Ａ−２８０８６抗生物質類は溶媒の
蒸発、非溶媒の添加による沈降あるいは抽出法のような
公知の方法によって有機溶媒から回収される。

かかる回収方法を行うために水と適当な共沸混合物を形
成する有機溶媒には、例えば、ブチルア７４− ルコール、アミルアルコール、ヘキシルアルコール、ベ
ンジルアルコール、酢酸エチル、ｉｔ　ｌアミル、１，
２−ジクロロエタン、３−ペンクノン、２−へキリ゛ノ
ン、ベンゼン、シクロへ４−リ“ノン、トルエン、その
他キシレン類等がある。

大規模な発酵製造工程では」（沸熱溜払による回収が特
に右利である。共沸蒸溜液として確保された水ど溶媒の
両液は既知の技法で分Ｉｌｌ　ｌ、、史に双肩の使用に
ｊ：わすことができる。またこのようにして除かれた水
には汚染物が含まれていないし、廃液処理操作を必要と
しない。また、このようにして分離された溶媒は同じ■
稈に１１利用できる。

次に、抽出や吸着の操作を追加してΔ−２８０８６抗生
物質の純化が進められるのである。シリカ・ゲル、炭素
、フロリジル（硅酸マグネシウムの商標、〕［１リヂン
社製品（米国フロリダ州タラハシー私書函第９８９在）
）その他が右利に用いられる。

あるいは、培養固形物に培養液の８１１成分や菌糸が含
まれているので、抽出や分離を行わず、出来れば水分だ
け除いてＡ−２８０８６抗生物質供給源として用いられ
る。すなわちΔ−２８０８６の抗生物活性が出た復、培
養ブロスを凍結乾燥して直接に飼料のプレミックスに混
合することができるのである。

今一つの着眼として、培地中にΔ−２８０８６活性が生
じた后に、菌体を分離乾燥したものは直接に飼料プレミ
ックスに使用できる製品となる。

こうした用途のための菌体を分離する場合に、炭酸石灰
（約１０ａ／β）を加えると、濾過し易く、改良乾燥産
品となる。

このように永年用いられて来た条件下で、前記のＮ　Ｒ
ＲＬ　５７５８およびＮ　ＲＲ＋−８０９２と命名され
たス１〜リプトマイシス・オーｌノＡファシェンス株は
、抗生物因子Ａ−２８０８６を主産物として産生するの
である。その時々の発酵条件によって生成因子の比率は
変ってくるが、一般的には因子ＡはＮ　ＲＲＬ　５７５
８株からの全回収抗生物質活性の９９％以上を占め、Ｎ
ＲＲ１８０９２株からの全回収抗生物質活性の９０％以
上を占めている。

△−２８０８６囚子ＢはＮ　ＲＲｌ−５７５８株からの
残りの抗生物活性部の大部を占め、因子Ｄ　ｔｊ、微量
因子である。これに反しＣ１Δ−２８０８６因子りはＮ
ＲＲＬ８０９２株からの全回収抗生物活↑１の約８〜１
０％に上り、この■、旨ま因子Ｂが微量因子である。

抗生物質Ａ−２８０８６因子△、ＢおよびＤは、カラム
クロマトグラフ法、薄層クロマ１ヘゲラフ法、その伯の
公知の方法を用いて個々の化合物として相互に分離され
る。例えば、シリカ・ゲル上でのカラムクロマトグラフ
法を用い、ベンゼン−酢酸エチルのような、種々の溶媒
混合物でカラムを溶１ｆｆ−することによって、因子Δ
、ＢおよびＤが分離される。シリカゲルカラムにベンゼ
ン−酢酸エチル溶媒混合物を用いると、初めに因子Ｂが
溶出し、因子へとＤはおくれで溶出される。これ迄に記
述した様に、薄層クロマトグラフ法は溶出過程を探知す
るのに手軽な方法である。

Ａ−２８０８６化合物類は動植物体に病原性の７７− ある細菌や糸状菌の生育を阻止する作用がある。

下記の第５表にＡ−２８０８６の因子Ａと８の微生物活
性を比較表示した。

試験方法は通常のディスク拡散法（ｄｉｓｃ−ｄｉＨ−
ｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ）　、　　（６ｍｍの吸取紙
を生産物１ｍａ／溶液１πβの溶液に浸し、被検生物を
接種した寒天平板上にこの吸取紙を置く方法〕である。

７８− 第　　　５　　　表 −７９− 次に重要なことは、Ａ−２８０８６化合物類が嫌気＋！
１細菌の生育を明止することである。

１−２８０８６因子Ａが種々の嫌気性細菌を用止する最
少明止淵度（ＭＩＣ）を、標準の寒天稀釈法で測定した
結果を第６表に総括記載した。終末魚は２４時間培養後
に判定したものである。

−８〇− 第　　　６　　　表 ８１− Ａ−２８０８６因子ＡのＣ２〜Ｃ６工ステル誘導体類は
また抗細菌ならびに抗糸状菌活性を持つものである。ま
た、ある観点からすると、これらの誘導体は、ダラム陽
性閑に対する活性が因子Ａよりも増強されたという面も
見られた。そこで、これらのＭ　ｐ、９体の若干のもの
の相対的なグラム陽性菌活性を、因子Ａの持つ活性と比
較した。対照となる化合物類をＮ、Ｒ，クゼルおよび「
、Ｗ。

カバナラが、ジャーナル・オア・ファルマシューヂカル
・サイエンス６０巻（５）、７６４〜７６７頁（１９７
１年）に記載する半自動化されたシステム（エランコ社
のオートタープの式の微生物試験システム）上で濁度測
定試験法によって検査した。このＡ−２８０８６抗生物
質類の検定においては、次のようなテスト・パラメータ
ーを用いた。

検定用のｍ箇スタフィロコッカス・アウレウス〈Ｈ−ピ
ー１〜レー）ＮＲＲＬＢ−３１’４を栄養培地（ｐｌ−
（７）中で３７℃で４時間培養したものを使用した。被
検試料および標、Ａ品をメタノールー水（１０：９０）
に溶解した。標ｔ１Ｌ品の△−２８０８６因子Δを２．
３，４．おＪ：び５　ｍｃｇ／飯の潤度でＪ−１−ター
プ０・カラーゼル（△ｕ　ｔ　ｏ　ｔ　ｕ　ｒ　ｂ■ｃ
ａｒｏｕｓｅｌ）にかりた。検体化合物類は希釈して１
πβ当り約３〜４　ｍｃｇの活性物質が含まれるように
してからカラービルにかｔプだ。４！Ａ１１１−晶の活
ナノ１と対比して求められた検体化合物の相対的活性度
を次に示す。

化　　合　　物　　　　　　　　　　　　相対同士、ｉ
ｉ！！ｆｆ：　１１１１；− Ａ−２８０８６囚子Δ （標　準　品）　　　　　　１ △−２８０８６−Ａ酢酸 エステル誘導体　　　　　　　　２．５Δ−２８０８６
−Ａプロ ピオン酸］−ステル誘導体　　　　７ △−２８０８６−Δ・「１− 酪ハヒ［スカ体誘聯体　　　　　　８ Ａ−２８０８６−Δ−ｎ　− きつそう酸二［ステル誘導体　　１／ＩＡ−２８０８６
−へ−ｎ　　− カプロン酸エステル誘導体　　２０ Ａ−２８０８６化合物類の抗微生物活ｆ１の今一つの有
用な面はミコプラズマあるいはマイコプラズマ（へ４　
ｙｃｏｐｌａｓｍａ　）に対する活性である。ブロイロ
ブロイモニア様（ＰＰＬ○）どしてもまた知られている
ミコプラズマの種は人間や種々の動物に病原性がある。

このＰ　Ｐ　Ｌ○生物に対して効果のある桑剤は特に家
畜生産業者から要望されている。生体外でのブロス希釈
研究法で測定した種々のミコプラズマに対ザる抗牛物１
’ｆＡ−２８０８６の最低阻止温度（ＭＩＣ）を下の第
７表にまとめ１こ　。

マイコプラズマ ・ガリセプヂクム　　　　１２．５ マイコプラズマ ・ヒオルヒニス　　　　　１２．５ マイコプラズマ ・シノビアエ　　　　　　　　６．２５マイ］プラズマ ・ヒボブニコーモニア　　　６．２５ マイコプラズマ ・ヒＡシノビ゛アニＵ　　　　　　６．２５その１７Ｉ
βあたりに１０ｍｃｇ程度の微量の抗生物質Ａ−２８０
８６を含んだ溶液でも動物をミコプラズマ種からイ＾訛
づる外用消ｍ剤として有効である。

次にΔ−２８０８６化合物類はまた、抗ビールス剤でも
ある。△−２８０８６因子八は■型の小児麻痺ビールス
（ｔＶｌ）ｅ　　ｍ　　ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）　、生
痘ビールス（ｖａｃｃｉｎｉａ　ｖｉｒｕｓ）　、　庖
疹ビールス（ｈｅｒｐｅｓ　ｖｉｒｕｓ）およびセムリ
トフＡレスト・ビールス（３ｅｍｌｉｋｉ　　Ｆｏｒｅ
ｓｔ　ｖｉｒｕｓ　）　ニ対シテ活性的であり、これら
はシミノフによって記載された〔アプライド・ミクロバ
イオロジー９巻（１）、６６〜７２頁（１９６１））試
験法と類似の生体外プラーク抑制試験（ｉｎ　ｖ：ｔｒ
ｏ　ｐｌａ（ｌｌＩｅ　５ｔｌｐｐ−ｒｅｓｓｉｏｎ　
ＬＯｓｔｓ　）により確証を得たものである。

８５− △−２８０８６囚子Δはまた、伝染性胃賜炎ビールス、
ニューカッスル病ビールスおよび感染性牛属Ｉ／；孔性
気管支炎ビールスに対しても活性を示すが、これらも類
似の組織磨管試験で確めたものである。

従って、ある面に於ては、Ａ−２８０８６化合物はどれ
も皆、ビールスの抑制を目的として、経口的にも、局所
的にも、あるいは注射によっても１１ｉ乳動物に投与す
ることができるのである。

ビールス病の予防または治療上有効な投薬量は対照とな
るビールスならびに薬物使用の目的が予防的か治療的か
に基き、吐乳動物の体ｆｆ１１ｋｇに対し約１〜５ｍｇ
と変動し、一定しないのが普通である。

以上のほか、Δ−２８０８６化合物を含有する液剤は、
できれば界面活性剤と共に、小児麻痺あるいは庖疹のに
うな諸ビールスの存在している生体外棲息地の）肖府に
も用いることができる。かかる場合には約１〜１５００
　ｍｃｇ／ｘｘの△−２８０８６化合物を含有させた液
剤がビールス類の抑制８６− に効果的である。

抗生物質へ−２８０８６囚了Δの急１４声１１１は、マ
ウスの腹腔内性用による１Ω与法でそのｌＤ’ａ＋は７
　、１５　＋ｎｇ／　ｋｇＴ”ある。

次にＡ−２８０８６化合物類はまた殺虫剤でありかつ殺
だに剤でもｄｒ）る。八−２８０８６化合物類は昆虫類
、例えばメキシコのビーン・ビー１〜ル、ミルクライー
ド・バッグならびに家’ｌ１ｌｉに対して効力があるし
、ツー・スボッテド・スパイダー・マイト（ｔｓｙｏ−
ｓｐｏｔｔｅｄ　５ｐｉｄｅｒ　＋ｎ１ｔＯ）のＪ：う
なグ二類にも有効であり、使用し５００　ｐｌａｍ程度
の生絹で足りる。さらにＪ：だ、△−２８０８６化合物
ｆ、、１１ぼうふら（ｍｏｓｑｕｉｔｅ　１ａｒｖａｅ
　）にも有効で、使用ｍは１０）■の少（ｎでｊ：い。

このＡ−２８０８６化合物の重要な一性質は、その抗コ
クシジウム活１１［である。例えば、飼育実験の結果、
このＡ−２８０８６のどの化合物でも、０．００３％と
いう少量をひよこ（ｕ１１鶏）の餌に入れてやると体重
増加が改善され、さらに０．００５％という小出では、
コクシジウム症原体に犯されたひよこの死亡を防ぎかつ
ＩＬ１害数が減少する。

各種のエイメリア属の病原体を与えたひよこ群（こおけ
る因子Δの効力試験の諸結果を第８表から第１０表に示
した。

８９− 一９〇− 家禽のコクシジウム症の予防ないし治療のためには、Ａ
−２８０８６化合物のどれかを、毎日経口的に、無毒で
而もコクシジウム原虫に有効な聞を毎日経口的に鳥に投
与するのが好ましい。鳥にＡ−２８０８６化合物を与え
る方法は多くあるが、最も簡便なのは生理学的に許容で
きるような担体と共に与えること、特に好ましいのは烏
の接柱する飼料と共に与える方法である。また、Ａ−２
８０８６化合物の適ｍを決定する上で種々の因子が考慮
されねばならないが、投与の割合は通常薬物無添加飼料
の０．００３ないし０．０４％の範囲、好ましくは０．
００５〜０．０２％の範囲にあるであろう。

△−２８０８６−２８０８６化つの重要な性質は、動物
の飼料利用効率を改善するという性能である。

例えば、Ａ−２８０８６化合物類は発達１ノた反為機能
をもつ反部動物類の飼料利用能率を改良するのである。

これまでにも論じて来た様に、反部動物類にお１′Ｊる
飲水化物利用効率は、その動物のルーメン（反都胃）内
の分布生物相を刺激してアセテートまたはブヂレートよ
りもむしろプロピオネ−１−を生成させるＪ：うに操作
づることによって高められる。飼料の利用効率は、ルー
メン中のプロピオネ−１〜化合物の生成と濃度とを次の
方法を用いて観察することにより探知される。

先ず、ルーメン分泌物は、横管（ｒｉｓｔｕｌａ　）を
外科的にルーメン内に拡げて設■した雄の子牛から得ら
れる。この子牛に穀類に富んだ飼料を与えて保育づる。

ルーメン流動液の試オ′３１は四枚重ねのチーズクロス
（ｃｈｅｅｓｅｃｌｏｔｈ　）を透して浸み出させ、こ
の濾液を収集する。チーズクロスに残留した粒状物質は
、初めのルーメン液伍にもどすのに十分な生理的ｔｆＡ
ｍ液に浮遊させ、再度浸出させる。

ジャーナル・オア・プーリー・サイエンス、３８巻１２
２５〜１２３０頁（１９５５）中のチェノ等の記載によ
れば、この際用いられる緩衝液は次の様な組成を持って
いる。

一腹一一１ｑ／Ｉ！。

９３− ＮａｚＨＰＯａ　　　　　　　　　　　　　　０．３１
６ＫＨ２ＰＯ４０，１５２ Ｎａ　　ＨＣＯ３２，２６０ Ｋ（４０，３７５ Ｎａ　　Ｃ１０，３７５ Ｍ０　　ＳＯ４，０，１１２ Ｃａ　　ＣｊＺ２　・　２Ｈ２００，０５０Ｆｅ　　Ｓ
Ｏａ　　・　７Ｈ２００，００８Ｍｎ　　ＳＯａ　　・
Ｈ２００，００４７ｎ　　ＳＯａ　　・　７Ｈ２００，
００４Ｃｕ　ＳＯ４・　５Ｈ２００，００２ ＣＯＣβ２　・６１−１２０　　　　　　　０．００１
この２つの濾液を混合して放置し、浮遊物質を表面に浮
遊分離させる。透明層を分離し、同一緩衝液（１：１）
で希釈し、しかる後ｐＨ６，８〜７．０の間に調節する
。希釈されたルーメン液（１０厭）を、上記の飼料４０
ｎ＋ｏ、大豆蛋白質追加分１　ｍａ、ならびに被検化合
物を入れた２５戴フラスコに加える。−回の処理ごとに
四個の反復フラスコを用いる。また、２組の４個のフラ
スコが９４− コントロールに用いられ、またＯ時間目のコント・ロー
ルと培養１６時間目のコントロールが使用される。試験
フラスコは何れも３８°Ｃで１６時間培養する。ＩＨｙ
２が終ると、各フラス］の０１−１を測定し、２５％の
メタ燐酸（２πｊ１）を各フラスコに加える。各試料は
数置して沈澱さゼた後、上澄液をガスクロマトグラフィ
で分析してプロビオネート、アセテート、およびブチレ
ート化合物類を測定する。コントロール以上にプロピオ
ネ−１〜生成の増加の認められたものが活性化合物とし
ての意義がある。

被験化合物の結果はＩｆ計学的にコン１〜ロールの結果
と比較する。第１１表に処理フラスコ中の揮発性脂肪酸
（ＶＦＡ）の濃度とコン１〜ロール・フラスコ中の濃度
との比を示す。

炭水化物利用効率は、ルーメン（反批冑）の内容物の標
品を抜きさることが出来るにうにルーメン中に接着（ｆ
ｉｓｌｕｌａｓ）を装置した動物で行われた生体＜　ｉ
ｎ　ｖｉｖｏ　）試験にＪ：り更に解明される。

第１２表に表示する試験結果は、それぞれ目方が約１０
０Ｃ）ｅｈｓ、の接着を取り付０た成熟した黒牛で行っ
たものである。２頭の黒牛は正常食で飼育し、各処理群
における４頭はこれと同じ飼ＩＩにＡ−２８０８６因子
Ａをｈｎえたもので飼育した。

とり出した各１００ｆｆｆｉづつのルーメン流動液に１
０％のメタ燐酸（１００戴）を添加し、試ｒ１を静置し
、しかる後透明液をガスクロマ１〜グラフ法で分析して
プロピオ２８９度を測定した。　第１２表の結果は１４
日間の処理期間中における５回以上の平均をとったルー
メン中のプロピオンｆｌｔ［の平均増率（パーセント）
である。この際のコントロールには大略２０モル・パー
セントのプロピオン酸があった。

なおそのうえに、羊の場合にもＡ−２８０８６因子Ａが
飼料利用効率を増進させる事を証拠づけ９７− ることが、ｉｎ　ｖｉｖｏ試験で証明された。これらは
５６日間以上の期間をか（）て実行し、その結果を第１
３表に総括した。

・ｆｆ１２　−２ Δ−２８０８６囚子Ａ　コントロール以上に（１日当り
のｍｃ＋）　　　　　ふえた　％２５　　　　　　　　
１７．４ １００　　　　　、　　　　５４．０ ９８− 第　　　１３　　表 △−２８０８６−因了−り一化合物類は抗ビールス剤で
ある。Ａ−２８０８６囚了りはメリーランドＢ型ビール
ス、■型小児麻痺ビールス、Ｃ○Ｅビールス、庖疹ビー
ルス（ｈｅｒｐｅｓ　ｖｉｒｕｓ）　、おにびセミリキ
・フォμス１〜・ビールスに対して有効である、これは
シミノフの記載〔アプライド・ミクロビオロジー、９巻
（１）６６〜７２頁（１９６１））と類似の生体外プラ
ーク抑制試験によって確認された。Ａ−２８０８６囚子
りはまた、伝染性胃腸炎ビールス、ニューカッスル病ビ
ールス、ならびに感染性牛轟孔気管支炎ビールスに有効
であるが、これも同様の組織培養試験にＪ：り確認した
ものである。

かくの如＜Ａ−２８ＯＢ６−因子−Ｄ化合物類がビール
スならびに嫌気性細菌の両名に対して抑制活性を右する
事実は、該化合物類を部用、豚、牛、ならびに羊の腸炎
の治療ないし予防用として右利ならしめるものである。

該Ａ−２８０８６−因子−〇化合物類はまた反部動物類
の腸内中毒症の治療にも有効である。

次に本発明にがかる△−２８０８６−因子−り化合物類
の！■要なｆ４　ｉ’ｉｒの一つとして抗コクシジウム
症活性があげられる。ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　　での実験の
結果、△−２８０８６因子りは］−イメリア・テネラに
効く抗コクシジウム活性のあることが証明された。以下
にその使用法を記載りる〔詳細に関ｌ）では、エクスペ
リメンタル・パラシトロジー、３４巻１８９・〜・１９
６頁（１９７３）のり、Ｒ，マクダガルドおよびＲ，Ｂ
、ガロウェイの報告参照のこと〕。

宿主細胞の培養物はレイトン管（Ｌ　ｃｉｇｈｔｏｎｔ
ｕｂｅ）　、プラスチック製の開ないしその他の適当４
ＴＩ８養容器類を用いる簡易法によつ−Ｃ調製する。

任意の適当な培地（イーグルの最少必要培地、アーμま
たはバンクの調和食塩水中ラクトアルブミン加水分解物
を加えたもの、培地１９９等）で２〜３０間生長させる
と、通常、適当なｔｌｉ層がくに成して感染処理や薬物
処理が容易になる。これらの研究にはひＪ：この腎臓細
胞の一次培養物を用いた。

生活力を有するエイメリア・テネラ（Ｅ　ｉｍｅｒｉａ
１０１− ｔｅｎｅｌｌａ　）に感染したひな鳥の便からその接合
子嚢を採取し、使用に先立って清浄にして殺菌する。

この接合子嚢を懸濁し、懸濁液に通気発泡させるかまた
は羽根付シェーカーもしくはその仙の適当な装置でおだ
やかに浸透しながら室温に保持して発芽させる。発芽処
理の間、細菌やかびの発育を防止するため、ニクロム酸
カリウム、硫酸または他の薬品を使用することができる
。

接合子嚢の外壁を機械的に破り、子嚢から出た挿出を活
動させるために１〜リプシンおよび胆汁酸塩で処理する
ことにより、子嚢から感染力を有する挿出を完全にはい
出させる。

容器中の細胞培養物に生活力のある挿出を導入すること
により、細胞培養物を感染させる。次いでこれに試験化
合物を導入することができる。試験化合物は好ましくは
生理的食ｊｎ水中、１０％ジメヂルホルムアミドを使用
して導入する。試験の終了時点における抑制は無性生殖
段階に対する抑制である。感染９６時間後、培養物を固
定、染色し、顕微鏡で観察することにＪ：りその終了時
点を１０２− 測定覆る。第２世代としてのシゾン１〜（ｓｃｌｌｉｚ
ｏｎｔ）が存在するか否か、単一細胞層に対づる毒性が
明らかであるか否かにより、ぞの結果を活１４１（△）
、不活性（Ｎ）またはＩＩＩ胞毒性（Ｃ）として記録す
る。

一１ｘ記試験によりＷｌ［明されるΔ−２８０８６囚子
りの抗コクシジウム活性を要約して第１４表に示す。

第１４表　抗生物質Δ−２８０８６囚子Ｄ５　　　　　
　ＣＯ，０３Ａ Ｉ　　　　　　Ｃ０，０２Ａ Ｏ，２ＣＯ，０１±Ａ −α−コ＋Ａ工■じ＊０．００１−　　Ｎ−注（１）：
Δ−２８０８６囚子１つの濃度（ｍＣｇ／π２）。

※印：２回の試験結果。

Ａ−２８０８６因子り化合物の有する上記以外の特色は
反部動物の第−胃の機能を高めて飼料の利用効率を増大
せしめ得ることにある。反猥動物飼料中の主栄養成分（
炭水化物）の利用機構はよく知られている。動物の第一
胃中の微生物が炭水化物を単糖類に分解し、この単糖類
をピルビン酸化合物に変１免する。ピルビン酸化合物は
微生物にＪ：る代謝作用により、揮発性の脂肪酸（ＶＦ
Ａ）として知られたアセテ−１〜、ブヂレート２にたは
プロピオネートを形成する（より詳細には、フィリプソ
ンら著：フィジオロジー・オア・グイジエスチョン・ア
ンド・メタボリズム・イン・ザ・ルミナンド（英国ニュ
ーカースル・アポン・タイン在オーリエル・プレス（１
９アＯ年＞■１）４０８〜４１０頁レンゲの記載参照）
。

ＶＦＡ利用の相対的効零については、マツククローフ（
フードスタフス＜１９７１年６月１９日）１９頁）、ニ
スクランドら（Ｊ、　Ａｎ、Ｓｃｉ、第３３巻２８２頁
（１９７１年））、およびヂャーチら〈デジエステイブ
・フィジオロジー・アンド・ニュー１〜リシヨン・オア
・ルミナンツ第２巻（１９７１年）６２２および６２５
頁の報告がある。

アセテ−１〜およびブチレート化合物も利用されるが、
プロピオネート化合物の効率がより人である。

加つるに、プロピオネ−１〜化合物が非常に少ないとぎ
には動物がケ１−ン症に擢忠する可能性がある。

それ故、有用な化合物は動物体内の炭水化物からより高
い母のプロピオネートを産生ずるように刺激を与え、炭
水化、物の利用効率を増大せしめ、またケトン症の罹患
率を減少させる。

有用な化合物の第１胃中におけるプロピオネート化合物
の生成おＪ：び濃度に対重る影響を因子Δの場合と同様
の操作でＩＮ察することにより、その有用な化合物の活
性を測定することができる。

試験化合物の結果を対照化合物の結果と統計学的に比較
する。第１５表はＡ−２８０８６因子りで処理したフラ
スコ中の揮発性脂肪Ｍ　ＦＪ度と対照フラスコ中の揮発
ｆ／ｌ脂肪酸濃度の比を示寸ものである。

１０５− 第　　１５　　表 １０６− 本発明の化合物はプロピオネ−１〜化合物を増加させる
ことにおいて典型的効果を右し、それ故にこの化合物を
約０．０５〜５．０ｍｑ／Ｉｔａ／日の割合で反８動物
に軽口的に投与するとき、飼料利用効率を高めることが
できる。本発明の化合物を約０．１〜２．５ｎ＋ａ／ｋ
ｏ／日の割合で投与することにより最もよい結宋が得ら
れる。本発明目的化合物の好ｊニジい投与方法は、これ
を動物飼料と混合１°る方法ぐあるが、これをイ１！！
の方法、たとえば錠剤、トレンチ剤、大丸薬、カプセル
剤の剤型で投！ｉ　７７ることができる。これら種々の
投与剤型は獣医薬理学的ににり知られた方法によりシ１
剤化することができる。個々の投与単位剤型は本発明化
合物を処置すべき動物の１日当たりの投与量に直接関連
する焔で含有さ−ぼたものとづべきである。

家畜飼料とその１−ン当りＡ−２８０８６の３００から
成る飼料組成物を肥育用家畜に与えることにより本発明
に係る化合物を利用することができる。

この分野で知られ−（゛いるＪ：うに、牛の飼ｎ１ｉｔ
他の飼料たとえば家出の飼料とは異なる。牛の飼！−１
は粗飼料たとえば綿実穀、トウモロコシサイレージなど
を含む。加うるに、牛の飼料はより高率（しばしば１５
〜２５％）の非蛋白質性窒素源を含有する。通常、この
非蛋白質性窒素源は尿素である。

前記のごとく、本発明のΔ−２８０８６化合物は抗ビー
ルス剤であり、また嫌気性菌、特にクロスｊ・リジウム
・ベルフリンゲンス（ＣＩｏｓｔｒｉｄｉｕｍρｅｒｆ
ｒｉｎｇｅｎｓ　）に対して活性を有する。それ故、に
わとり、豚、牛、羊などの腸炎を処置し、予防するため
有用である。またＡ−２８０８６化合物は反勇動物の腸
性中毒症を処置するために有用である。

次に実施例を挙げて本発明の具体的実施態様を説明する
。

実施例１ （Δ）ストレプトマイシス・オーレオファシエン７、　
（３，ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ　）　ＮＲＲＬ５７５
８を使用するＡ−２８０８６の振盪フラスコ発酵ニー下
記操作に従ってス１〜レブ１へマイシス・オーレオファ
シェンスＮＲＲＩ−５７５８の培養物を作成し　Ｉこ　
。

灰−−−−ｊと　　　　　　　　　１ 寒天　　　　　　　　　　　　　２０（］デキス１へリ
ン　　　　　　　　１０ｇ酊累で加水分解した力Ｕイン
　　２Ｑ 牛肉エキス　　　　　　　　　　２ｇ 酵酵母ニーキス　　　　　　　　　２ｇ蒸溜水を加えて
１１！、にする。

１′なわち、−に記組成を右する寒天斜面培地にストレ
プトマイシス・オーレオファシェンスＮＲＲし５７５８
を接種し、接種したｊΔ地を３０℃で６〜１０日間培養
した。菌体の生育した斜面培養物を牛面清で保護しなが
ら滅菌した白金耳てこずって胞子を散乱させた。こうし
て得られた胞子と菌糸片の生血清浮遊液を凍結乾燥して
６個のペレッ］・を造った。

ｊｑられ１ＣＣ凍結乾燥ペッツ１〜１を下記組成の生育
用培地５０誠に接種した。

１０９− 灰一一一二ｒ　　　　　　　　型缶（ａ　　）葡　　萄
　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　２０大　　
豆　　粉　　　　　　　　　　　　　　　　　１５コー
ンスチーブリ力−１０ Ｃａ　ＣＯ３２ 水道水を加えて１℃にする。

２５’Ｏ戴容のエルレンマイエルフラスコに収められた
上記の接種済みの生育培地を、直径２インチの円弧運動
をする振盪機上で２５　Ｏｒｐｍの速度で旋回振盪しな
がら３０℃で２４時間培養した。

（Ｂ）ストレプトマイシス・オーレオファシェンスＮＲ
ＲＬ５７５８を使用するＡ−２８０８６のタンク発酊ニ
ー 多聞の接種菌を造るため、上記のようにして培養した生
育培養液１０τβを前記の生育用培地と同じ組成をもつ
次の段階の生育培地４００戴に接種し、この二度目の接
種培地を２℃容のフラスコに入れ、直径２インチの円弧
運動式旋回振盪機上で２５０　ｒｐ川で２４時間３０℃
で培養した。

この二度目の生育培養液１℃を下記組成の滅菌１１０− された生産用培地１００／！に接種するために用いた。

成　　　　　分　　　　　　　　　　　　串　（ｏ／１
タピオカ・デキストリン　　　６０．０酵素で加水分解
したカゼイン　　８．０糖　　　蜜　　　　　　　　　
　　　　　　　１５．　ＯＭ（ｌ　ＳＯａ　・７Ｈ２０
０，５ Ｃａ　ＣＯ３２，０ 精製大豆油　　　　　　　　　　５．０１８２イＡン水
で１２にする。。

この培地は、１５〜２０ボンドの圧力で１２０℃に３０
分間加圧殺菌した後のＩ）ｌ−１が６．７であった。

このにうに調整して菌を植えた生産用培地を１６５乏の
発酵タンク内で２９℃の温度で１０日間発酵させた。こ
の間発酵液には、毎分培養液量の０．４容最の割合で無
菌空気を通気した。また培養液は２５　Ｏｒｐｍの割合
で普通の攪拌器で攪拌した。

実施例２ 下記組成のフラスコ培養基を用いること以外は実施例１
の方法に従い、Δ−２８０８６抗生物質を生産した。

慮−ｍ−」［ｌユ」し籐Ｌｍ 葡　　萄　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　１
０食用糖蜜　　　　　　　　　　　　２０ペプ１〜ン　
　　　　　　　　　　　５Ｃａ　ＣＯ３２ 水道水を加えて１Ｊ！、にする。

実施例３ スｌ−１ノプトマイシス・オーレオファシェンスＮＲＲ
Ｌ５７５Ｂによって生産されたＡ−２８０８６抗生物質
複合体の分離ニー 実施例１に記載した方法によって得られた発酵液１３２
乏全部を濾過助剤（ハイフロ・スーパーセル、珪藻土の
一種で、ジョンズーマンビル製造会社製品）で濾過し、
濾液９７Ａが得られた。

この濾過液はほぼ同量の酢酸エチルで抽出を試みた。水
層から酢酸エチル抽出液を分離し、５００７βぐらいの
箔に濃縮した。この濃縮酢酸エチル抽出物に過剰の石油
エーテル（Ｓ　ｋｅｌ　ｌｙ　３　ｏｌｖｅＦ：約１０
１！、）を加え、その結果できる不用物質を沈澱させて
分離した。分ｌ１ｉｌｔ後の濾液を減圧下で蒸発し、Ａ
−２８０８６抗生物質複合体６．９ｇを得た。

次に、菌体部に含まれるＡ−２８０８６抗生物質複合体
は、濾過した菌体を約半量のメタノールで２回抽出（６
２℃と５９℃）して得られた。これらの２回のメタノー
ルｈｂ出液を合した後、減圧下でメタノールを濃縮除去
した。この濃縮後に約１０１！、の水層が残った。この
水層を稀薄な水酸化ナトリウム溶液でｌ」約７．５に調
節した。かくして得られた溶液をほぼ同量の酢酸エチル
で２回（９℃と１０℃）抽出した。該酢酸エチル抽出液
を合した後、約４００鱈の串に濃縮した。この濃縮酢酸
エチル抽出物を大過剰の石油エーテル中に加えて不要物
質を除去したが、その方法としては、濾過培養液の濃縮
抽出物について上に記載した方法を用いた。濾液中の菌
体部から得たＡ−２８０８６抗生物質複含休の目方は２
０．６ＣＩであった。

１１３一 実施例４ Ａ−２８０８６中の個々の因子ＡおよびＢの単離ニー Ａ−２８０８６抗生物質複合体（実施例３に記載したよ
うにｗＪ製したもの）２３５ＣＩを約８０鱈のベンゼン
に溶解した。このベンゼン溶液にシリカゲルカラムクロ
マトグラフ法を応用した（９×１３００Ｉ１１，８／、
Ｍａｔｈｅｓｏｎ　ｇｒａｄｅ　６２シリカゲル）。カ
ラムは種々の割合のベンゼン−酢酸エチル混合液で溶出
した。、溶出挙動は薄層クロマトグラフ法で追跡した。

溶媒系としてベンゼン−酢酸エチル（９０：　１０）を
用いると、因子Ｂが最初に溶出し、個々の因子の一つと
して単離された。

因子１３（４３ｍｃ＋）はアセトン−水から結晶させた
。

ｍｐ１５０〜１５３℃。

酢酸エチルの割合を徐々に増加しながらベンゼン−酢酸
エチル混合液で溶出を継続すると、因子へが溶出して来
た。因子Δを含む種々の分画を合わせて減圧下でｖ：Ｊ
縮し、あとに残った残留物をアセトン約１５０鍼に溶解
し、このアセトン溶液に−１１４− 本釣１５０かをｈｎンだ。こうして得られた溶液に１Ｎ
塩酸を加えてＩＩＨ３に調節した。酸１７１にした該混
合液を約１１１ｈ間攪拌？するど、イーの間に沈澱が出
来る。この沈澱を濾別してアレ１−ン約１５０　ｙｘＥ
に溶かし、本釣６０πβを加えて再結晶した。イ１．成
した結晶は一夜真空乾燥し、因子Ａ約６，６Ｑを１９だ
。結晶の濾液から７Ｌ７１〜ンを部分的に蒸発したとこ
ろ、因子Ａの二次的ＩＩ！１″１物約１．２ｑが１ワら
れた。

実施例５ Ａ−２８０８６因子△のアｌ？デル・ニスデル誘導体の
製造ニー 抗生物質△−２８０８６因子Ａ７．４（Ｉをピリジン１
５０緘に溶解、この溶液に無水酢酸５０τβを添加した
。この溶液を十分に）ｌ１ｌ和し、ついで室温で一夜放
置した。水２００鱈を加えて十分に混和し、この混合液
を室温で４時間放置した。白色の固形物が沈澱Ｊるので
、これを濾別し、水洗して風乾した。こうして１９だ固
形物をアｌ＝　ｌ〜ン１００τβに溶解し、次いでこの
アｔ　１−ン溶液を真空下に蒸発乾燥した（この操作を
３回くりかえした。）。こうして１ｑられＩＣ残渣はア
セトン１００露−水５０戴から結晶させ、Δ−２８０８
６因子Ａのアレデルエステル誘導体６．１４．（Ｉを１
！？た。融点１００〜１０３℃。

実施例６〜９ 実施例５の方法により、ピリジンの存在の下で無水プロ
ピオン酸を因子へに反応させ、抗生物質Δ−２８０８６
因子Δのプロピオニル・エステル誘導体を杓だ。ＦＡｄ
ｊ点９６〜９８℃。

実施例５の方法に従い、ピリジンの存在の下で因子Ａを
無水ｎ−酪酸と反応さぜ、抗生物質Ａ−２８０８６因子
への叶ブヂリル・ニスデル誘導体を得た。融点７９〜８
１°Ｃ０ 実施例５の方法により、ピリジンの存在の下で因子Ａを
無水カプロン酸と反応させ、抗生物質△−２８０８６因
子Δの叶カプロイル・エステル誘導体を製造した。融点
１６３〜１６７℃。

実施例５の方法に従い、ピリジンの存在の下に因子Ａを
無水吉草酸と反応さぜ、抗生物質Δ−２８０８６因子Ａ
のｎ−バレリル・エステル誘導体を製造した。融点１７
３〜１７５℃０ 実施例１０ Δ−２８０８６因子Δのす１〜リウｌ＼塩の製造：抗生
物ｙ１Δ−２８０８６囚子Δ５００　ｍ（Ｉをアセミー
ン５０７１βに溶解しＩＣ６この溶液に水５０πβを加
え、さらに５Ｎの水酸化ナトリウム溶液を加えて液のｌ
１ｌ−１を１０．５〜１１にした。こうして得られた溶
液を１時間攪拌し、次いで酢酸エチルで抽出した。酢酸
エチル抽出部を真空下に蒸発乾固した。残渣をアレ１〜
ンー水の溶液から沈澱させ、Δ−２８０８６囚子△のす
１〜リウム塩３７８１１１ｇを得た。融点１２０〜１２
３°Ｃ６ 実施例１１〜１５ 実施例１０の方法を用い−Ｃ１抗生物質Δ−２８０８６
因子Ａ（５００ｍｇ）と飽和水酸化バリウム溶液とから
、抗イ１］物７りＡ−２８０８６因子Δのバリウム塩３
６９ｍ（Ｉを製造した。融点１８８〜１９０℃。

−１１７− 実施例１０の方法を用いて、抗生物質Ａ−２８０８６因
子へ（５００ｍｇ）と５Ｎの水酸化カリウム溶液とから
３６３ｍｇのΔ−２８０８６因子ＡのカリウムＪ富を製
″Ｊ告した。融点１６５〜１６７℃。

実施例１０の方法を用い、抗生物質Ａ−２８０８６囚子
△５００ｍｇどゴＮ水酸化セシウムとから５４０ｍｇの
Ａ−２８０８６因子Ａセシウム塩を得た。融点１９０〜
２１０℃。

実施例１０の方法により、抗生物質Ａ−２８０８６因子
Ｂと５Ｎ水酸化すトリウムとから抗生物質Ａ−２８０８
６因子Ｂのナトリウム塩を製造した。

実施例１６ ストレプトマイシス・オーレオファシェンス（３、ａｕ
ｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ　）　Ｎ　ＲＲＬ　８０９２を用
いるΔ−２８０８６の振盪フラスコ発酵ニー下記の組成
の寒天斜面培地でストレプトマイシス・オーレオファシ
ェンスＮＲＲＬ８０９２の培養物を製造した。

戊−一一一尤一　　　　　　　ｉ工１ｍ１１８− に２１−］ＰＯ４，２ ＭＣｌ　　ＳＯ４・　７１−１２　０　　　　　　　０
．２５ＮＨａＮＯ３２ Ｃａ　　ＣＯａ　　　　　　　　　　　　　　　２．５
Ｆｅ　ＳＯａ　　・　７１−１２０　　　　　　　０．
００１Ｍｎ　　Ｃ／！２　・　７１−１２０　　　　　
　　０．００１Ｚｎ　　ＳＯａ　　・７　ｌ−１２００
，００１葡　　萄　　糖　　　　　　　　　　　　　　
　１０寒　　天　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２０脱イオンを加えＵ１２にりる。

ｐｌ−１（調節ゼず）７．７ ？Ｊ’　Ａねｌう、この斜面Ｊｔ’？　Ｊｌ！Ｉにスト
レプトマイシス・オーレオファシェンスＮＲＲＩＪ’１
０９２を接種し、接柱培地を３０℃で約７［−１間培養
した。菌の生育した斜面培養物を無菌の牛面消で保護し
ながら殺菌した白金■でこすって斜面培養物から胞子と
菌糸の浮遊液を調製した。こうして出来た浮遊液を凍結
乾燥し６個のペレッ１〜を調製した。

こうして作った凍結乾燥ペレットの１個を下記組成の生
育用培地５０７１１βに接種するのに用いた。

八−一一一力一　　　　　　　　范」」」−葡　　萄　
　糖　　　　　　　　　　　　　　　　２０大　　豆　
　粉　　　　　　　　　　　　　　　　　１５コーン・
スヂーブ・リカー　　　１０ ＣａＣ○３２ 水道水を加えて１忍とする。

ｐｌ−（を稀薄な１−１ａ○１」で６．５に調節した。

２５０πβのエルレンマイエル・フラスコ中の菌を接種
した生育培地を、２インチの円弧運動する旋回式振盪機
上で２５　Ｏｒｐｍの速度で、４８時間３０℃で培養し
た。

次に、下記組成の発酵用培地５０πｇに、上記の菌体の
生育した培地（０，５ｙｎ１．、ｉパーセント）を接種
使用した。

成　　　　　分　　　　　　　　　　　　　ｐ−タピオ
カ・デニ１−ストリン※　　６０．Ｏａ酵素で加水分解
したカゼイン※※６．Ｏｆ＋酵素によるカゼイン水解物
※※※２．０ａＣａ　ＣＯ３２，Ｏ（Ｉ Ｍ！ＩＩ　ＳＯ７＋　・７Ｈ２００，５（］廃　　糖　
　蜜　　　　　　　　　　　　　　　１５．０ｇ精製大
豆油　　　　　　　　　　５．０戴水道水を加えて１！
とした ｐＨ（未調整のまま）６．６ ※５ｔａｌｅｙ　１）ｅｘｌｒｉｎ＃　１１　（Ａ、　
Ｅ　、　５ｔａｌｅｙＣｏ、（米国イリノイ州デカツー
ル在）製）。※※Ａ＋ｎｔ）ｃｒ　　Ｅｌ−ＩＣ（Ａｍ
ｌ＋ｅｒ　　ｌａＬ＋ｏｒａｔｏｒｉｅｓ　（米１３ｉ
１ウィスコンシン州ジュニコウ在）製）。※※※ＮＺ　
　Ａｍ１ｎｅ　　Ａ（ＳＩ＋ｅＮｉｅｌｄ　　Ｃｌｌ０
ＩＩＩＩＣａｌ　Ｃｏ　。

（米国ニューヨーク州ノーウイヂ在）製）。

実施例１７ ストレプトマイシス・Ａ−レオファシェンスＮＲＲＬ８
０９２を用いた△−２８０８６のタンク発Ｎニー Ａ−２８０８６の振盪フラスコ発酵法として実施例１６
の冒頭に記載した方法をタンク発酵の場合にも適用した
。多量の接種菌を作るために、菌を培養した生育培地１
０ｆｆβを最初の生育培地と同じ組成の次の段階の生育
培地４００τβに植えつりるのに使用した。２！容のエ
ルレンマイエル・フ１２１− ラスコに入れたこの第二段階の培養液を、２インチの円
弧で旋回する振Ｉｌｌに載せ２５　Ｏｒｐｍで２４時間
３０℃で培養した。この菌を培養した二次的生育培地８
００π℃を下記の組成をもつ無菌の発酵用培地１００℃
に接種するのに用いた。

匡−−−一一力一　　　　　　叱 タピオカ・デキストリン※　　６０．　ＯＯ／ｆｆｉ酵
素で加水分解したカゼイン※※６．０（１／λ酵素によ
るカゼイン水解物※※※２．Ｏｇ／ＡＣａＣ○３　　　
　　　　　　　　２．０（１／ｊＺＭｇＳＯ４・７１−
１２０　　　　　０．’　５　　ｇ／Ａ廃　　糖　　蜜
　　　　　　　　　　　　　　　１５．００／６精製し
た大豆油　　　　　　　　５．０ｍｇ／、＋２水道水を
加えて１℃とする。

※５ｔａｌｅｙ　Ｄｅｘｔｒｉｎ　　＃ｌ　１　（Ａ、
　Ｅ、　５ｔａ−ｌｃｙ　Ｃｏ　　（米国イリノイ州デ
カツール在）製）。

※※ＡｍｂｅｒＥＩ−ＩＣ（Ａｍｂｅｒ　　（−ａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ　　（米国ウィスコンシン州ジュニュ
ウ在）製）。※※※ＮＺ　　Ａｍ１ｎｅ　　Ａ　（Ｓｈ
ｅｆｆｉｅｌｄ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ。

（米国ニューヨーク州ノーウイチ在）製）。

１２２− １５〜２０ボンドの圧力で３０分間１２１℃で加圧殺菌
した後のこの培地のｐＨは６．８±０゜１であった。

菌の接種された生産用培地は、要領１６５℃の発酵タン
ク中で１０〜１２日間２８±１℃で発酵させた。また該
発酵培地には毎分培養液の０．／１容賂の割合で無菌空
気を通気した。またこの培養液は３００　ｐｐｍの割合
で曹通の攪拌器でかぎまぜた。

実施例１８ 下記組成の振盪フラスコあるいはタンクによる生産培地
を使うこと以外は実施例１７の方法に従ってＡ−２８０
８６抗生物質を生産した。

成　　　　　分　　　　　　　　　　　　量　（（］／
１タピオカ・デキストリン※　　３０．０葡　　萄　　
糖　　　　　　　　　　　　　　　１５．０酵素加水分
解カゼイン※※　　　３．０酵素的カゼイン氷解物※※
※　　１．０酵母エキス　　　　　　　　　　２．５Ｃ
ａ　ＣＯ３２，０ Ｍ（］　　ＳＯＬ　・　７Ｈ２０１，０廃　　糖　　蜜
　　　　　　　　　　　　　　１５．０精製大豆油　　
　　　　　　　　５．０が／Ｉ！。

水道水を加えて１１１とした。

※５ｔａｌｅｙ　Ｄｅｘｔｒｉｎ　　Ｎｏ、１１　（Ａ
、　Ｅ。

Ｓ　ｔａｌｅｙ　Ｃｏ、　（米国イリノイ州デカツール
在）製）。※※Ａ　ｍｂｅｒＥ＠　Ｃ（Ａ　ｍｂｅｒ　
　ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（米国ライスコンシン州
ジュニュウ在）製）。※※※ＮＺ　　Δｍ１ｎｅ　　△
（Ｓ　ｈｃｆｆｉｅｌｄ　　ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ、（
米国ニューヨーク州ノーウイチ在）￥Ｊ）６実施例１７
に記載した如く、加圧法により殺菌した後の培地のＭは
６゜４であった。

実施例１９ ストレプトマイシス・オーレオファシェンスＮＲＲＬ８
０９２によって生成されたＡ−，２８０８６抗生物質複
合体の分離ニー 実施例１７に記載した方法によって得られた全発酵液６
０リッ１−ルに希ＨＣＩを加えてＩ）ｌ−（３に調節し
た。こうして出来た溶液を濾過助剤（Ｈｖ−ｆｌｏ　３
ｕｐｅｒ−ｃｅｌ、珪藻土の一種、Ｊ　ｏｈｎｓ−Ｍ　
ａｎ−ｖｉｌｌｅＢｏｄｕｃｔｓ　　Ｃｏｒｐ、）を用
いて個過した。分離した菌糸塊を３０１！、のメタノー
ルで抽出し、抽出液には１．５６ｋｇのＮａ　ＨＣＯａ
を攪拌しながら加えて行った。この抽出液を分離した後
、菌糸膓を更に３０℃のメタノールで再度抽出した。両
メタノール抽出液を合わせ、メタノールを除去するため
に真空濃縮した。残留水溶液約７１！、を希ＨＣ１でｐ
Ｈ７，５に調節した。こうして得られた溶液を酢酸エチ
ルγλづつで２回抽出した。この酢酸エチル抽出液を合
わせ、真空濃縮して油状の残渣を得た。この油状残留物
をアレトン１５００戴に溶解し、このアセトン溶液に水
１５００鱈を添加した。こうして出来た溶液を＠＋　Ｈ
ＣｌでＩ）ｌ−１３に調節して１時間攪拌した。生成し
て出来た沈澱を濾別し、次いでアレトン１５００鱈に溶
解し、この溶液に水４００　ｙｘｅを加えた。

こうして出来た溶液を結晶を析出ざ口るために１６時間
放置した。生成した結晶を濾別し真空乾燥したところ、
Ａ−２８０８６囚子ＡおよびＤならびにその他の結晶状
の不純物を含んだ粗結晶状１２５− の生成物７４（］を得た。

この粗結晶状生成物４０（＋を約２５０１βのベンゼン
に溶解した。次いでこのベンゼン溶液にシリカゲルカラ
ムクロマトグラフ法を適用した（９−Ｘ１２０−ｃｍカ
ラム：　Ｇｒａｃｅ−ｏ　ａｖｉｄｓｏｎ等級６２のシ
リカゲル使用）。カラムは下記の各溶媒４ＯＩｌづつで
順次溶出した。

１）　ベンゼン ２）　ベンゼン：酢酸エチル　（９：　１　）３）　　
　　　　　　　　　　　　（４：１）４）　　　　　　
　　　　　　　　（７：３）５）　　　　　　　　　　
　　　　（１：１）６）　酢酸エチル ７）　メタノール これらから１℃づつの分画を収集した。各部分毎に溶出
化合物を同定する１こめに、バチルス・ズブチリスの生
育阻止試験法と薄層クロマトグラフ法とにより検査を行
った。Ａ−２８０８６１はベンゼン：酢酸エチル（４：
　１　）で溶出された。Ａ−２８０８６囚子Ｂはベンゼ
ン：酢酸エチル（７：１２６− ３）で溶出された。Δ−２８０８６因子ＡとＤどはベン
ゼン：酢酸エチル（７：３および１；１）で１９られた
部分（１１９〜１５６までの部分）に溶出された。これ
らの部分を合わせ、真空下で蒸発乾燥した。こうして１
ワられた残渣をアセトン５００緘に溶解した。このアセ
１〜ン溶液に水５００鱈を加え、［１つ、この溶液を希
１」Ｃ１でｐｌ−１３に調節し、１時間攪拌した。生成
した沈澱を濾別し、ざらにアセトン５００πβ−水１　
ＲＯｍｘから結晶させた。

こうして出来た結晶は濾別して真空乾燥したところＡ−
２８０８６の因子ＡおよびＤの混合物２０．１ｇが得ら
れた。

実施例２０ 因子Δａ３よびＤの単体の分離と精胃ニー実施例１８で
得られたＡ−２８０８６の因子ＡとＤの結晶状混合物１
８．８０をベンゼン５０戴に溶解した。このベンじン溶
液にシリカゲルカラムクロマ１へグラフ法（７−Ｘ１０
０−ａｗｌカラム：Ｅ、Ｍｅｒｃｋ等級６０のシリカゲ
ル、２３０メツシユ（ＡＳＴＭ）より細かい）を適用し
た。カラムは次の溶媒で毎時９０戯の流速で順次に溶出
した。

１）ベンゼン１２Ｌ ２）ベンゼン：酢酸エチル（９：１）混合物１２℃ ３）ベンゼン：酢酸エチル（’ｌ：１）１合物１２℃ ／１）ベンゼン：酢酸エチル（７：３）Ｕ合物１２℃ ５）メタノール１（１ 溶出の進行を監視するためにバヂルス・ズブチリスによ
るバイオオートグラフ法をＨＥセルロースクＯ？トゲラ
フ法（Ｍ　ｅｒｃｋ　　［）　ａｒｍｓｔａｃｌｔセル
ロース、アルミニウム支持板上）と共に行った。用いた
溶媒系は次のものである。水：メタノール：アトン（１
２：３：１）、初めにＮ　Ｈａ　ＯＩ−１でこの溶液を
ｐＨ１０，５にしその後、ＨＣＩでｒ１Ｈ７，５に調節
する。

活性が検出される迄の１〜２℃分を集め、以後２００戴
づつ収集した。Ａ−２８０８６因子りだけを含んだ部分
を合し、真空蒸溜して残渣を得た。

この残留物はアセトン−水（１：１）から結晶した。結
晶を分離して真空乾燥し、結晶状のΔ−２８０８６−２
８０８６因子全１４０ 僅かにＡ−２８０８６因子Ａの混ったＡ−２８０８６因
子りを含む部分を同じやり方で処理すると、ざらに少量
のＡ　−２８０８６因子Ａを含む結晶状のＡ−２８０８
６因子りが１５０ＩＩ１ｇ得られた。

同様の方法でＡ−２８０８６囚子△だけを含む部分を処
理し結晶状のＡ−２８０８６因子４．７ｇを得た。

実施例２１ 下記組成の斜面培地を使用すること以外は、実施例１６
の方法に従って、Ａ−２８０８６抗生物質類を生成した
。

【−一−Ｌ１ｆｉｔ±Ｌｌ 牛肉抽出物　　　　　　　　　２．００デキストリン　
　　　　　　２０．００酵母エキス　　　　　　　　　
２．００酵素によるカゼイン氷解物　　４．００１２９
− Ｃｏ　　Ｃ１２・　６Ｈ２００，０２ 塞天　　　　　　　　　　　２０．○Ｏ脱イオン水で１
℃とする。

ｐ）−１はＫ　ＯＨで７．０に調節。

またこの場合は菌を植えた斜面を約７日間２８℃で培養
した。

実施例２２ フラスコ培地にも生産用培地にも下記組成のものを使用
すること以外は、実施例１７の方法に従ってＡ−２８０
８６抗生物質類を生産した。

成　　　　　分　　　　　　　　　　　　　且　（ａ／
ｊｌｌタピオカ・デキストリン※　　　８０ 酵素加水分解カゼイン※※　　　１５．０廃　　糖　　
密　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０炭酸カル
シウム　　　　　　　　　２．０硫酸アンモニウム　　
　　　　　　１．０硫酸マグネシウム　　　　　　　　
０．５精製した大豆油　　　　　　　　　４．６※３ｔ
ａｌｅｙ　［）ｅｘｔｒｉｎ＃　１１　（Ａ、　Ｅ　、
　５ｔａｌｅｙＣＯ０（米国イリノイ州デカツール在）
製）。※※１３０− △ｍｂｅｒ　　Ｅ　ｌ−Ｉ　Ｃ＜　Ａ　ｍｂｅｒ　　ｌ
　ａｂｏｒａｔｏｒ　！０Ｓ　　（米国ウィスコンシン
州ジュニコウ在）製）。

実施例２３ 下記組成の培地を中間の第三段階の生育培地に用いるこ
と以外は実施例２１の方法に従って、△−２８０８６系
抗生物質を生産した。

感　　　　　分　　　　　　　　　　　　　　量　（ｑ
／ｆｆ１）−セレロース　　　　　　　　　　２０．０
］−ンスヂープ・リカー　　　　１０．０ひき割り大豆
　　　　　　　　　１５．Ｏｃａ　Ｃ０１３２，０ 酵　　　　母　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２．０に１１菜糖蜜　　　　５．０ 実施例２４ コクシジウム症抑制を目的としたΔ−２８０８６で改良
されたひな烏飼Ｎ”Ｉの製造；一体■が速く増加ザるよ
うにひなｊコを飼育するのに適したバランスのとれた高
性能な飼料を次のにう４１配合処方で作成づる。

配　　合　　成　　分　　　　　　％ユ　　　　ポンド
・ひぎわゆ黄色１〜ウモロコシ　５０　　　１　、００
０・大豆粉（大豆のさやを除 いて細かく砕き、溶Ａ：で抽 出したもの、蛋白質５０％ 含有）　　　　　　　　　　　３１．０９　　　　Ｇ２
１．８・動物付脂肪（牛脂）　　　　　　６．５　　　
１３０・乾燥魚粉（可溶物を含有、 蛋白含１６０％）　　　　　　　５．０　　　１００・
トつモロコシ製ウィスキー の蒸溜残渣中の可溶物　　　　４，０　　　　８０・第
二リン酸力ルシウｌ＼ （飼料用）　　　　　　　　　　１．８　　　　３１３
・炭酸カルシウム　　　　　　　０．８　　　　１Ｇ・
ビタミンプレミックス（ビ タミン△、Ｄ、Ｅ、におよび Ｂ１０、コリン、ナイアシン、 パントテン酸、リボフラビン、 ビオチン、増量剤として葡 分轄より成るもの）。　　　　０．５　　　　１０・無
（幾塩類プレミックス（ Ｍｎ　　ＳＯ４、Ｚｎ　　○、Ｋｌ　　、「ｅ　ＳＯａ
　　、Ｃａ　　ＣＯ３ より成るもの）。　　　　　　０．２４・２−アミノ−
４−ヒドロキ シ酪酸（メヂオニンの水酸 化類似体）　　　　　　　　　　０．１　　　　２・Ａ
−２８０８６因子Ａ　　　　　Ｏ，０１０，２これらの
物質は標準飼Ｊ′１１配合技法に従って混合づる。投与
する水には制限を加えない。こうした餌で飼育したびな
Ｊ４は］クシジウム症感染から保護され、体中増加しコ
クシジウム症のない該薬剤無添加の類似の餌で飼育され
たひなに四敵する。

実施例２５ Ａ−２８０８６で改善した肉牛の飼料の製造：バランス
のとれた高性能の肉牛の飼料は次のように調製される。

配　　合　　成　　分　　　　　　　％−ポンド・細か
く挽いたト・ウモロ］シ　６７．８　　１３５（ｉ・１
〜ウモロコシ穂軸の挽き粉　１０　　　２００１３３− ・ムラサキウマゴヤシの乾燥 粗粉末（７５白質含吊１７％＞　　５１００・脱皮大豆
の粗粉末（溶媒で 抽出され、蛋白含量５０％＞　　９．９９５６　１９９
．９１２・　甘　　蔗　　糖　　蜜　　　　　　　　　
　　５　　　　　１００，０・尿　　素　　　　　　　
　　　０．６　　　１２．０−Ａ−２８０８６因子Ａ　
　　　　Ｏ，００４４０，０１１８・第ニリン酸石灰（
飼料用）　　　０，５　　　１０．０・炭　　酸　　石
　　灰　　　　　　　　　　　０．５　　　　　１０．
０・塩化ナトリウム　　　　　　０．３　　　６．０・
微量の無機塩を含むプレミ ックス　　　　　　　　　　　０．０３　　　０．６・
ビタミンＡ（１３よびＤ２プレ ミックス※　　　　　　　　　０．０７　　　１．４・
ビタミンプレミックス※※０，０５　　　１．０・プロ
ピオン酸石灰　　　　　０．１５　　　３．０※１ポン
ド当りの含量：２．○ｏｏ、ｏｏｏ国際単位のビタミン
Δ、２２７，２００国際単位のビタミンＤ２ならびに１
％の油を付加した大豆飼料３８５．７り　。

１３４− ※※１−ウモロコシ製ウィスキーを作る時に、穀粒１ポ
ンドにつき２０，０００国際単位のｄ−α−トコフ■リ
ルーアセテー１〜を含む可溶物を添１１０して穀粒を乾
燥−づる。

該混合飼石（」、圧縮して小１卑にする。動物１頭あた
り１５ボンドの飼料を［１々の平均１′！）取の割合と
すると、この飼料は１日に動物１す０あたり約３０Ｑｍ
ｇのΔ−２８０８６因子Δを（Ｂ給しく　イることにイ
ｒる。

実施例２６ Δ−２８０８６囚子りのア［？デル・丁スプル誘導体の
製造ニー 抗生物質Ａ−２８０８６囚子りをピリジンに溶解する。

この溶液に無水酢酸の８１算但を添加する。

この溶液を十分に混和してから−（；２室温に放置Ｊ−
る。ついで、水を過剰に加えて混合物を室温に故旧間放
置する。生成りる沈澱を濾別し、水洗乾燥する。こうし
て得られた固形物をアセ１〜ンに溶解し真空下で蒸発乾
固して、Ａ　　２８０８６因子りのアセチルエステル誘
導体が得られた。

実施例２７〜３０ 実施例２６の方法に従い、ピリジンの存在下で△−２，
８０Ｆ３６因子りを無水プロピオン酸と反応させること
により、抗生物質Δ−２８０８６囚子りのプロピオニル
・エステル誘導体を製造した。

実施例２６の方法に従い、ピリジンの存在下でＡ−２８
０８６囚子りを無水ｎ−酪酸と反応さぜることにより、
抗生物質Ａ−２８０８６囚子りのｎ−醋酸エステル誘導
体を製造した。

実施例２６の方法により、ピリジンの存在下で△−２８
０８６因子りを無水カプロン酸と反応させ、抗生物質Δ
−２８０８６囚子りのｎ−カプロイル・エステル誘導体
を製造した。

実施例２６の方法に従って、ピリジンの存在下でＡ−２
８０８６囚子りを無水吉草酸と反応させ、抗生物質Δ〜
２８０８６因子りの叶バレリル・エステル誘導体を製造
した。

実施例３１ △−２８０８６囚子りのす）・リウム塩の製造：抗生物
質Ａ−２８０８６因子りをアセトンに溶解する。この溶
液に等間の水を加えこの溶液のｒｌＨが約１１になるの
に十分な５Ｎ水酸化ナトリウムを加える１、得られた溶
液を約１時間攪拌し、次いで酢酸エチルで抽出する。真
空下で酢酸エチルを蒸発さＬるどΔ−２８０８６因子り
のすトリウム塩が得られる。

実施例３２〜３４ 実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子りど５Ｎ
水酸化カリウムとから抗生物質Ａ−２８０８６因子りの
カリウム塩を製）告した。

実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子りと飽和
水酸化バリウムとから抗生物質Ａ−２８０８６因子りの
バリウム塩を製造した。

実施例３１の方法を用いてＡ−２８０８６因子りと１Ｎ
水酸化１？シウムとから抗生物質Δ−２８０８６因子り
のセシウム塩を製造した。

実施例３５ コクシジウム症抑制を１］的としたＡ−２８０８６因子
を含有させたひな馬飼料の製造−一１３７一 体重が速く増加するようにひＪ：こを飼育するのに適し
たバランスのとれた高性能な飼料は次の様な配合処方で
調製される。

し−色−Ｌ−Ｌ　　　　Ｌ　　　Ｌ乙丘粉にした黄色ト
ウモロコシ　５０　　　１　、０００ひきねり大豆（溶
媒抽出し て皮を除き、細かく挽いたも の、蛋白質含量５０％）　　　　３１．０９　　　　Ｂ
２１．８動物性脂肪（牛脂）　　　　　　６．５　　　
１３０乾燥魚粉末（可溶物含有、 蛋白質含量６０％）　　　　　　　５．０　　　１００
トウモロコシ製ウイスキー の蒸溜残渣中の可溶物　　　　／１．０　　　　８０第
ニリン酸カルシウム （飼料用）　　　　　　　　　　１．８　　　　３６炭
酸カルシウム　　　　　　０．８　　　　１６ビタミン
ー類プレミツクス（ ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、におよ びＢｔ２、コリン、ナイアシン、 パントテン酸、リボフラビン、 １３８− ピ副チンが表示されている。

増ｍ剤は葡萄糖）。　　　　　　０．５１０微借の無機
塩類（Ｍｎ　Ｓｏ、１、 Ｚｎ　ｏ、Ｋ　１１Ｆｃ　ＳＯ，＋、 ＣａＣ０３）　　　　　　　　　　０．２　　　　４２
−アミノ−４−ヒドロキ シ酪酸（メチオニンの水酸化 類似体）　　　　　　　　　　　　０．１　　　　２Ａ
−２８０８６因子［）　　　　０，０１　　　　０，２
これらの物質を標ｆ１）、飼料配合技法に従つ−Ｃ混合
する。投与する水には制限を加えない。こうした餌で飼
育１ノだひな鳥は］クシジウｌ＼症感染からイイ：護さ
れ、体重の増加はコクシジウム症にかかつていない該薬
剤無添加の類似飼料で飼育されたひなに匹敵づる。

実施例３６ Ａ−２８０８６囚子りを含有する肉牛の飼！ｆｌの製造
ニー バランスのとれた高穀物の肉牛用の飼料は次のように製
造される。

Ｕえ一十−％−ポンド 細かく挽いたトウモロコシ　６７．８　　１３５６トウ
モロコシ穂軸の挽き粉　１０　　　２００ムラサキウマ
ゴヤシの乾燥 粗粉末（蛋白質含量１７％）　　　５　　　１００脱皮
大豆の粗粉末（溶媒抽 出されたもの、蛋白５０％）　　　９，９９５６　１９
９．９１２甘　　蔗　　糖　　蜜　　　　　　　　　　
　５　　　　　１００尿　　　　素　　　　　　　　　
　　　　　　　０，６　　　　　１２△−２８０８６因
子［）　　　　０，００４４　　０．０８８第ニリン酸
カルシウム （飼料用）　　　　　　　　　　０．５　　　１０．０
炭酸カルシウム　　　　　　　０．５　　　１０．０塩
化ナトリウム　　　　　　０，３　　　６．０微量無機
塩　　　　　　　　０．０３　　　０．６ビタミンＡお
よびＤ２※　　０，０７　　　１．４ビタミンＥ※※　
　　　　　０．０５　　　１．０プロピオン酸石灰　　
　　　０，１５　　　３，０※１ボンド当りの含ｆｆｉ
：２．０００．０００国際単位のビタミンＡ、２２７．
２００国際甲位のビタミンＤ２おＪ：び１％の油を加え
た大豆飼料３Ｂ５．７０゜ ※※トウモロコシ製ウィスキー製造時に穀類１ボンドに
対して２０，０００国際単位のｄ−α−トコフエリルア
セｊ−！・を含む可溶物質を添加して穀粒を乾燥づる。

該混合飼料は圧縮して小塊とする。動物１頭につき１５
ポンドの飼料を日々の平均摂取の割合と一す″るど、こ
の飼料は１頭につき約３００１１１（］の］Ａ−２８０
８６因りを供給していることになる。

【図面の簡単な説明】

図面はすべて本発明の抗生物質Ａ−２８０８６の赤外吸
収スペクトルを承り図面であって、第１図は抗生物質△
−２８０８６因子Ａ１第２図は抗生物質Ａ−２８０８６
因子Ｂ、第３図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのアセ
チルエステル誘導体、第４図は抗生物質Δ−２８０８６
因子ＡのプロピオニルエステルＭ導体、第５図は抗生物
質Ａ−２８０８６因子Ａのブヂルリエスデル誘導体、第
６図は抗生物質Ａ−２８０８６因子Ａのバレリルニー１
／１１− ステル誘導体、第７図は抗生物質Δ−２８０８６因子八
カプロイルエステル誘導体、第８図は抗生物質Ａ−２８
０８６因子りのそれである。 特　許　出　願　人　イーライ・リリー・アンド・カン
パニー 代　理　人　弁理士　青白　　葆　　はか１名１４２− 糊智ｉ 蚊Ｖ訃　２ 第１頁の続き 優先権主張　０１９７５年４月２１日■米国（ＵＳ）■
５６９７４０ ■１９７５年４月２１日■米国（ＵＳ）■５６９７１９ （ｌ　　明　者　マルビン・マルチン・ヘーンアメリカ
合衆国インディアナ・ インディアナポリス・イースト ７９ス・ストリート４９７５番 ０発　明　者　ウオルター・ミツオ・ナカツカサ アメリカ合衆国インディアナ・ インディアナポリス・クロスマ ン・ドライブ２１１８番 手続補正書、ヵお。 ■、事件の表示 昭和５８年特許願第　　　０６７６７３　　”５２発明
の名称 動物用成長促進剤 ３補正をする者 事件との関係　特許出願人 名称　　イーライ・リリー・アンド・カンパニー４代理
人 刻　燭　＠−？ 愕　四　訃　〆 附冑を２ ！Ｆｊｌ　　署　井　？

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 、１．因子Δ、因子Ｂおよび因子りからなる抗生物質Ａ
   −２８０８６複合体、該因子Ａ、該因子Ｂ１該囚子りま
   たはこれらの因子の任意の配合物を必須成分とする、と
   １・を除く動物用成長促進並びに飼料利用効率改善剤。