JPS597314B2 - 新規抗生物質の製法 - Google Patents
新規抗生物質の製法Info
- Publication number
- JPS597314B2 JPS597314B2 JP51080354A JP8035476A JPS597314B2 JP S597314 B2 JPS597314 B2 JP S597314B2 JP 51080354 A JP51080354 A JP 51080354A JP 8035476 A JP8035476 A JP 8035476A JP S597314 B2 JPS597314 B2 JP S597314B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substance
- days
- culture
- cells
- colony
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗生物質の製造法に関する。
本発明者らは優れた抗菌性物質を取得する目的で種々の
微生物を探索した際、本発明者らが堆肥中より新たに分
離した一不完全菌ＴＦ−２６（微工研菌寄第３６２６号
、ＡＴＣＣム２０４８７）が広帆な抗菌スペクトルを有
し、特に最近、嫌気性感染症の起因菌として注目されて
いるバクテロイデスフラギリスに対する強力な抗菌活性
を有する物質（本発明者はこれをＴＦ−２６物質と仮称
する）を生産することを見出し、更に検討を加えて本発
明を完成するに至つた。ＴＦ−２６物質を生産するＴＦ
−２６株は次のごとき菌学的性質を有する。
微生物を探索した際、本発明者らが堆肥中より新たに分
離した一不完全菌ＴＦ−２６（微工研菌寄第３６２６号
、ＡＴＣＣム２０４８７）が広帆な抗菌スペクトルを有
し、特に最近、嫌気性感染症の起因菌として注目されて
いるバクテロイデスフラギリスに対する強力な抗菌活性
を有する物質（本発明者はこれをＴＦ−２６物質と仮称
する）を生産することを見出し、更に検討を加えて本発
明を完成するに至つた。ＴＦ−２６物質を生産するＴＦ
−２６株は次のごとき菌学的性質を有する。
１、形態学的特徴
イースト、グルコーメ、寒天培地で４５〜５０℃で急速
に生育する。
に生育する。
菌糸は厚い隔壁を有し、しばしば数本が集合してシンネ
マータ（ Ｓｙｎｎｅｍａｔａ）状となる。
マータ（ Ｓｙｎｎｅｍａｔａ）状となる。
菌糸の巾は２〜５μで先端が放線菌に類似したループ状
を呈することが多い。また隔壁の部分が桿棒状にふ〈ら
んだ状態のものもみられる。胞子は半円筒状〜円筒状で
３〜４×６〜１３｜である。これらは菌糸の先端に連鎖
状に形成されるか、あるいは菌糸の任意の場所にまず厚
い細胞壁を有する細胞と、うすい細胞壁を有する細胞が
ほぼ交互に形成され、培養時間の経過とともに後者の細
胞が溶解し、厚い細胞壁の細胞がそのまま胞子として残
存する。したがつて胞子には溶解した細胞の断片がツバ
状に付着したものがよ＜観察される。
を呈することが多い。また隔壁の部分が桿棒状にふ〈ら
んだ状態のものもみられる。胞子は半円筒状〜円筒状で
３〜４×６〜１３｜である。これらは菌糸の先端に連鎖
状に形成されるか、あるいは菌糸の任意の場所にまず厚
い細胞壁を有する細胞と、うすい細胞壁を有する細胞が
ほぼ交互に形成され、培養時間の経過とともに後者の細
胞が溶解し、厚い細胞壁の細胞がそのまま胞子として残
存する。したがつて胞子には溶解した細胞の断片がツバ
状に付着したものがよ＜観察される。
また胞子に変化する細胞はラクトフエノールーコツトン
ブルー染色液に染まりやすい性質を有する。被子器、子
のう果等の有性器管を形成せず柄子殼、分生胞子層等を
有さない。これらの性質からＴＦ−２６株は不完全菌中
のモニリア目、モニリア科に属するものと判定される。
ブルー染色液に染まりやすい性質を有する。被子器、子
のう果等の有性器管を形成せず柄子殼、分生胞子層等を
有さない。これらの性質からＴＦ−２６株は不完全菌中
のモニリア目、モニリア科に属するものと判定される。
■、各種培地上の性状
ＴＦ−２６株が高温性のカビであることが予備実験で判
明したので、次の２種類の培地を用いて４７℃、３７℃
、２８℃の各温度における生育状況を観察した。
明したので、次の２種類の培地を用いて４７℃、３７℃
、２８℃の各温度における生育状況を観察した。
色調は日本色彩研究所「色の標準」を参照して判定した
。Ａイースト、グルコース・寒天培地 （Ｉ）４７℃培養 °生育：コロニーの直径は培養７日後４６〜４８一、９
日後７０−、１４日後９０一゜コロニーの性状：気生菌
糸は最初綿毛状で、培養後期には粉状を呈する。
。Ａイースト、グルコース・寒天培地 （Ｉ）４７℃培養 °生育：コロニーの直径は培養７日後４６〜４８一、９
日後７０−、１４日後９０一゜コロニーの性状：気生菌
糸は最初綿毛状で、培養後期には粉状を呈する。
色調は最初白色を呈するが培養経過とともにう
すオリーブ色〜黄茶色となる。
コロニーの裏面はにぶ赤紫色から淡褐色、灰
味茶へと変化する。
コロニーの中心より放射状の溝が形成される。
培養後期には茶系統の可溶性色素が生産される。
１１） ３７℃培養
０生育：コロニ一の直径は培養７日後３０ＷｒｒｆＬ、
９日後４５〜４８７ｍ１１４日後７０ｗｍ０コロニーの
性状：最初白色からうすオリーブ色の綿毛状の気生菌糸
を着生する。
９日後４５〜４８７ｍ１１４日後７０ｗｍ０コロニーの
性状：最初白色からうすオリーブ色の綿毛状の気生菌糸
を着生する。
胞子形成とともにうす茶黄〜茶黄色とな
り粉状を呈する。
中心より周辺に向つて放射状の溝が形成される。
コロニーの裏面はうす黄色からにぶ赤紫で１０
日以後は茶色、暗茶色を呈する。
茶系統の可溶性色素が１０日以後に生成さ
れる。
培養物はかなり強いアミン臭を有する。
（ＭＴ）２８℃培養
生育きわめて訃そく、１４日後に卦いてもコロニーの直
径は５？程度である。
径は５？程度である。
Ｂツアペツク寒天培地
（１） ４７℃培養
無色の菌糸がうす〈葡伏状に生育し、色素等の着生なし
。
。
コロニーの直径は７日後２７〜３０ｍ、９日後４５ｗｎ
である。（［Ｉ３７℃培養 コロニーの直径は７日後２７Ｔｍ、９日後４０能で性状
はＩの場合とほぼ同じであるが、若干生育良好である。
である。（［Ｉ３７℃培養 コロニーの直径は７日後２７Ｔｍ、９日後４０能で性状
はＩの場合とほぼ同じであるが、若干生育良好である。
（１１） ２８℃培養
胞子からの発芽は非常に卦そく、１０日似後になつてわ
ずかにみとめられる程度である。
ずかにみとめられる程度である。
これらの菌学的性質についてＣＯＯｎｅｙ，Ｅｍｅｒｓ
Ｏｎ著ＴｈｅｒｍＯｐｈｌｌｌｃＦｕｎｇｉ（１９６４
）を参照した結果、ＴＦ−２６株は色調、胞子の形成状
況等から不完全菌のモニリア目モニリア科に属し、マル
ブランチア●ブルチエラ・バル・スルフレア（Ｍａｌｂ
ｒａｎｃｈｅａｐｕｌｃｈｅｌｌａｖａｒ−Ｓｕｌｆｕ
−Ｒｅａ）ＶＣ近縁であると認められる。
Ｏｎ著ＴｈｅｒｍＯｐｈｌｌｌｃＦｕｎｇｉ（１９６４
）を参照した結果、ＴＦ−２６株は色調、胞子の形成状
況等から不完全菌のモニリア目モニリア科に属し、マル
ブランチア●ブルチエラ・バル・スルフレア（Ｍａｌｂ
ｒａｎｃｈｅａｐｕｌｃｈｅｌｌａｖａｒ−Ｓｕｌｆｕ
−Ｒｅａ）ＶＣ近縁であると認められる。
しかしながらＴＦ−２６株はツアベツク寒天培地上の生
育力遜（、ほとんど着色しないこと卦よびかなシ厚い菌
糸の隔壁がみられ、この部分は位相差顕微鏡下で屈折性
を示し、胞子形成の過程で細胞壁のうすい細胞が溶解し
た後もそのまま残存することがある点からみてＭ，ｐｕ
ｌｃｈｅｌｌａｖａｒ．ｓｕｌｆｕｒｅａとは栄養要求
性｝よび菌糸隔壁の性状に卦いて相違する菌株である。
従つて、結局ＴＦ−２６株はモニリア科マルブランチエ
ア属の新種もしくはマルブランチエア・ブルチエラの新
変種と同定される。このようなマルブランチエアＴＦ−
２６株を好気的に培養することによりＴＦ−２６物質は
菌体内にに蓄積されるので、これを常法により処理する
ことによりＴＦ−２６物質を製造することができる。
育力遜（、ほとんど着色しないこと卦よびかなシ厚い菌
糸の隔壁がみられ、この部分は位相差顕微鏡下で屈折性
を示し、胞子形成の過程で細胞壁のうすい細胞が溶解し
た後もそのまま残存することがある点からみてＭ，ｐｕ
ｌｃｈｅｌｌａｖａｒ．ｓｕｌｆｕｒｅａとは栄養要求
性｝よび菌糸隔壁の性状に卦いて相違する菌株である。
従つて、結局ＴＦ−２６株はモニリア科マルブランチエ
ア属の新種もしくはマルブランチエア・ブルチエラの新
変種と同定される。このようなマルブランチエアＴＦ−
２６株を好気的に培養することによりＴＦ−２６物質は
菌体内にに蓄積されるので、これを常法により処理する
ことによりＴＦ−２６物質を製造することができる。
本発明の実施に当り培養基としては、ＴＦ−２６物質生
産菌が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源ならびに無
機塩類を含有せしめ、必要に応じて微量の栄養素、発育
促進物質等を添加せしめてもよい。一般に用いられる炭
素源としては、グルコース澱粉、グリセリン、デキスト
リン、シェークロース、マルトース、糖密等が、窒素源
としては酵母工キズ、麦芽工キズ、肉工キズ、コーンス
テイープリカ一、フアーマメデイア（Ｐｈａｒｍａｍｅ
ｄｉａ（ＣＯｔ−１０ｎｓｅｅｄｎｕｔｒｉｅｎｔｓ）
、大豆粉、ペプトン、硫酸アンモン、硝酸アンモン等の
有機窒素化合物卦よび硝酸塩類、アンモニウム塩類等の
無機窒素化合物等が、無機塩類としては塩化ナトリウム
、硝酸ナトリウム、塩化カリウム、燐酸第一カリウム、
燐酸第二カリウム、硫酸鉄、炭酸カルシウム等が挙げら
れる。
産菌が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源ならびに無
機塩類を含有せしめ、必要に応じて微量の栄養素、発育
促進物質等を添加せしめてもよい。一般に用いられる炭
素源としては、グルコース澱粉、グリセリン、デキスト
リン、シェークロース、マルトース、糖密等が、窒素源
としては酵母工キズ、麦芽工キズ、肉工キズ、コーンス
テイープリカ一、フアーマメデイア（Ｐｈａｒｍａｍｅ
ｄｉａ（ＣＯｔ−１０ｎｓｅｅｄｎｕｔｒｉｅｎｔｓ）
、大豆粉、ペプトン、硫酸アンモン、硝酸アンモン等の
有機窒素化合物卦よび硝酸塩類、アンモニウム塩類等の
無機窒素化合物等が、無機塩類としては塩化ナトリウム
、硝酸ナトリウム、塩化カリウム、燐酸第一カリウム、
燐酸第二カリウム、硫酸鉄、炭酸カルシウム等が挙げら
れる。
このような培地資料によつて調製？れた弱酸性〜中性の
培地ＶＣ．ＴＦ−２６物質生産菌を接種し３７〜５０℃
で好気的に培養することによりＴＦ−２６物質は菌体内
に蓄積される。
培地ＶＣ．ＴＦ−２６物質生産菌を接種し３７〜５０℃
で好気的に培養することによりＴＦ−２６物質は菌体内
に蓄積される。
このようにして菌体内に蓄積されたＴＦ−２６物質は常
法により抽出分離精製される。
法により抽出分離精製される。
例えば、培養物よりＰ過または遠心分離等の方法により
菌体のみを取り出し、これにアセトン等の有機溶媒を加
えて抽出し、抽出液から酸性、アルカリ性による溶解度
の差を利用して不純物を除き、場合により更にシリカゲ
ル、アルミナその他の慣用される担体を用いるクロマト
グラフイ一により精製してＴＦ−２６物質を得ることが
できる。
菌体のみを取り出し、これにアセトン等の有機溶媒を加
えて抽出し、抽出液から酸性、アルカリ性による溶解度
の差を利用して不純物を除き、場合により更にシリカゲ
ル、アルミナその他の慣用される担体を用いるクロマト
グラフイ一により精製してＴＦ−２６物質を得ることが
できる。
か（して得られるＴＦ−２６物質は次のごとき理化学的
性質を有する。次にＴＦ−２６物質の生物学的性質を示
す。
性質を有する。次にＴＦ−２６物質の生物学的性質を示
す。
最小阻止濃度の測定法：嫌気性グラム陰性菌はＧＡＭ液
体培地で前培６コ養した菌液（１０／ｍｌ）を、ＴＦ−
２６物質含有ＧＡＭ寒天板上に接種し、嫌気培養操置に
卦いて３７℃、４８時間培養後生育を判定する（第１表
）。
体培地で前培６コ養した菌液（１０／ｍｌ）を、ＴＦ−
２６物質含有ＧＡＭ寒天板上に接種し、嫌気培養操置に
卦いて３７℃、４８時間培養後生育を判定する（第１表
）。
好気性、通性嫌気性菌に対するＭＩＣ値の測定は常法に
従い、ハード、インフユージヨン寒天を用い、タイピン
グ、アバラツツスにより菌を接種後３７℃、一夜培養し
て判定する（第２表）。
従い、ハード、インフユージヨン寒天を用い、タイピン
グ、アバラツツスにより菌を接種後３７℃、一夜培養し
て判定する（第２表）。
実施例
マルブランチエアＴＦ−２６の一白金耳を、グルコース
３％、酵母工キズ０．５％、麦芽工キズ０．５％、硝酸
ナトリウム０．３０１）、塩化カリウム０．０５％、硫
酸第二鉄０．００１（ｆ）、リン酸水素カリウム０．１
％、硫酸マグネシウム０．０５（Ｉ）なる粗成の培地７
５ｍ１！！に接種し４５℃で４８時間振とう培養する。
３％、酵母工キズ０．５％、麦芽工キズ０．５％、硝酸
ナトリウム０．３０１）、塩化カリウム０．０５％、硫
酸第二鉄０．００１（ｆ）、リン酸水素カリウム０．１
％、硫酸マグネシウム０．０５（Ｉ）なる粗成の培地７
５ｍ１！！に接種し４５℃で４８時間振とう培養する。
この培養物を上記組成の培地７０ｔＶＣ添加し４５℃で
４０時間通気（３０ｔ／Ｍｉｎ）攪拌（２００ｒ．ｐ．
ｍ．）する。培養終了後、培養物から菌体を戸取し、水
洗後８０％アセトン２０ｔで２回抽出し、抽出液を約８
ｔ．になるまで濃縮し、塩酸を加えてＰＨ３．Ｏに調整
してから酢酸エチルエステル３０ｔで抽出し、酢酸エチ
ルエステル層を分取し、約１５ｔに濃縮して、これを２
Ｎ一水酸化ナトリウム２０ｔで抽出し、水層を採りＰＨ
３．Ｏに調整後再び酢酸エチルエステル１５ｔで抽出し
、抽出液の溶媒を留去して得られる残さを少量のクロロ
ホルムに溶解しシリカゲルを充填したカラム（ワコーゲ
ルＣ一１００，１ｋｆ、カラムリ７。
４０時間通気（３０ｔ／Ｍｉｎ）攪拌（２００ｒ．ｐ．
ｍ．）する。培養終了後、培養物から菌体を戸取し、水
洗後８０％アセトン２０ｔで２回抽出し、抽出液を約８
ｔ．になるまで濃縮し、塩酸を加えてＰＨ３．Ｏに調整
してから酢酸エチルエステル３０ｔで抽出し、酢酸エチ
ルエステル層を分取し、約１５ｔに濃縮して、これを２
Ｎ一水酸化ナトリウム２０ｔで抽出し、水層を採りＰＨ
３．Ｏに調整後再び酢酸エチルエステル１５ｔで抽出し
、抽出液の溶媒を留去して得られる残さを少量のクロロ
ホルムに溶解しシリカゲルを充填したカラム（ワコーゲ
ルＣ一１００，１ｋｆ、カラムリ７。
５×６０ｃｍ）に通じ、クロロホルムにて溶出する。
流出液のバチルスズプチリスに抗菌力を示す画分を採り
、濃縮乾固してＴＦ−２６物質の粗成物約４ｙを得る。
このものをメタノールで洗滌後再びクロロホルムを展開
溶媒とするカラムクロマトグラフイ一に付しバチルスズ
ブチリスに対する抗菌力を示し、薄層クロマトグラフイ
一により単一スポツトを示す画分を採り溶媒を減圧留去
してＴＦ−２６物質の精製物２５ηを得た。
、濃縮乾固してＴＦ−２６物質の粗成物約４ｙを得る。
このものをメタノールで洗滌後再びクロロホルムを展開
溶媒とするカラムクロマトグラフイ一に付しバチルスズ
ブチリスに対する抗菌力を示し、薄層クロマトグラフイ
一により単一スポツトを示す画分を採り溶媒を減圧留去
してＴＦ−２６物質の精製物２５ηを得た。
第１図はＴＦ−２６物質の紫外部吸収スペクトル図、第
２図はＴＦ−２６物質の赤外部吸収スペクトル図である
。
２図はＴＦ−２６物質の赤外部吸収スペクトル図である
。
Claims (1)
- １ マルブランチア（Ｍａｌｂｒａｎｃｈｅａ）属に属
するＴ＿Ｆ−２６物質生産菌を培養し、蓄積せしめたＴ
＿Ｆ−２６物質を分離採取することを特徴とするＴ＿Ｆ
−２６物質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51080354A JPS597314B2 (ja) | 1976-07-08 | 1976-07-08 | 新規抗生物質の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP51080354A JPS597314B2 (ja) | 1976-07-08 | 1976-07-08 | 新規抗生物質の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS536493A JPS536493A (en) | 1978-01-20 |
| JPS597314B2 true JPS597314B2 (ja) | 1984-02-17 |
Family
ID=13715909
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51080354A Expired JPS597314B2 (ja) | 1976-07-08 | 1976-07-08 | 新規抗生物質の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS597314B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6441805U (ja) * | 1987-09-07 | 1989-03-13 | ||
| JPH0664011U (ja) * | 1993-02-19 | 1994-09-09 | サンウエーブ工業株式会社 | 五 徳 |
-
1976
- 1976-07-08 JP JP51080354A patent/JPS597314B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6441805U (ja) * | 1987-09-07 | 1989-03-13 | ||
| JPH0664011U (ja) * | 1993-02-19 | 1994-09-09 | サンウエーブ工業株式会社 | 五 徳 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS536493A (en) | 1978-01-20 |
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