JPS5991879A - シユ−ドモナス属細菌の培養法 - Google Patents
シユ−ドモナス属細菌の培養法Info
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- JPS5991879A JPS5991879A JP57199750A JP19975082A JPS5991879A JP S5991879 A JPS5991879 A JP S5991879A JP 57199750 A JP57199750 A JP 57199750A JP 19975082 A JP19975082 A JP 19975082A JP S5991879 A JPS5991879 A JP S5991879A
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- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、ニトリルヒドラターゼ活性の高いシュードモ
ナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）属菌体を高収率で生
産する方法に関する。
ナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）属菌体を高収率で生
産する方法に関する。
近年、微生物、酵累またはそれらを固定化して神々の単
位化学反応や複合化学反応の触媒として利用しようとす
る動きが盛んになってきている。
位化学反応や複合化学反応の触媒として利用しようとす
る動きが盛んになってきている。
ニトリルヒドラターゼは、ニトリル類を水和して相当す
るアミド類を生成させる酵累として、本発明者の中の山
田らにより見出されており［Ａｇｒｉｃ。
るアミド類を生成させる酵累として、本発明者の中の山
田らにより見出されており［Ａｇｒｉｃ。
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、旦１１６５（１９８２）参照〕、
その具体的利用例としてニトリルヒドラターゼを有する
細菌を用いてアクリロニトリルからアクリルアミドを生
成させることが提案されている〔特願昭５６−１８４６
８８号、 Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４
６１１８３ （１９８２）参照〕。
その具体的利用例としてニトリルヒドラターゼを有する
細菌を用いてアクリロニトリルからアクリルアミドを生
成させることが提案されている〔特願昭５６−１８４６
８８号、 Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ４
６１１８３ （１９８２）参照〕。
このよ５な場合に、ニトリルヒドラターゼ活性の高いシ
ュードモナス属菌体が高収率で取得できれば、稗益する
ところは太きい。
ュードモナス属菌体が高収率で取得できれば、稗益する
ところは太きい。
発明の概要
要旨
本発明は上記の点に解決を与えることを目的とし、該細
菌の培養に際して培地中に特定の物質、スナワちプロピ
オニトリル、イソブチロニトリル。
菌の培養に際して培地中に特定の物質、スナワちプロピ
オニトリル、イソブチロニトリル。
プロピオンアミドおよびイソブチルアミドの少なくとも
１種を特定の態様ですなわち逐次的に添加することによ
って、この目的を達成しようとするものである。
１種を特定の態様ですなわち逐次的に添加することによ
って、この目的を達成しようとするものである。
従って、本発明によるニトリルヒドラターゼ活性の高い
シュードモナス属細菌の培養法に、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属してニトリルヒドラター
ぜを産生ずる能力を有する細菌を培養してニトリルヒド
ラターゼ酵素活性を有する細菌菌体を製造するに当り、
プロピオニトリル、インブチロニトリル、プロピオンア
ミドおよびインブチルアミドの中から選ばれた化合物の
少な（とも１種を逐次的に培地に添加すること、を特徴
とするものである。
シュードモナス属細菌の培養法に、シュードモナス（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属してニトリルヒドラター
ぜを産生ずる能力を有する細菌を培養してニトリルヒド
ラターゼ酵素活性を有する細菌菌体を製造するに当り、
プロピオニトリル、インブチロニトリル、プロピオンア
ミドおよびインブチルアミドの中から選ばれた化合物の
少な（とも１種を逐次的に培地に添加すること、を特徴
とするものである。
効果
培地にプロピオニトリル等を逐次的に徐加してシュード
モナス属細菌の培養を行なうと、単位培養液当りのニト
リルヒドラターゼ活性が顕著に増大スル。たとえば、プ
ロピオニトリル等を途次添加すると、一段で添加した場
合に比較して単位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活
性の収量を約２倍近くまで向上させることができろ。
モナス属細菌の培養を行なうと、単位培養液当りのニト
リルヒドラターゼ活性が顕著に増大スル。たとえば、プ
ロピオニトリル等を途次添加すると、一段で添加した場
合に比較して単位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活
性の収量を約２倍近くまで向上させることができろ。
この単位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活性の増大
は、菌体の濃度（すなわち、菌体の収量）および菌体の
活性（すなわち、菌体内の二） ＩＪルヒドラターゼの
量）の増大に因るものと解される。
は、菌体の濃度（すなわち、菌体の収量）および菌体の
活性（すなわち、菌体内の二） ＩＪルヒドラターゼの
量）の増大に因るものと解される。
なお、本発明ではプロピオニトリル等を酵素誘導剤と呼
ぶことがあるが、これは上記の要因のうち特に後者に着
目したものということができる。
ぶことがあるが、これは上記の要因のうち特に後者に着
目したものということができる。
たｙし、プロピオニトリル等がこの点においてのみ有効
なものではないことは上記した通りである。
なものではないことは上記した通りである。
本発明において使用する細菌は、ニトリルヒト。
ラターぜ活性を有し、ニトリル、特にアクリロニトリル
、を水和して対応アミド、特にアクリルアミド、を生成
することができるシュードモナス属の細菌である。具体
的には、例えば、前記特願昭５６−１８４６８８号の明
細書に記載のシュードモナス・クロロラフイスＢ ２３
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉ
ｓ Ｂ２３）微工研争寄第１８７号およびシュードそナ
スｓｐ、 ＰＳｌ （Ｐ ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ
、 Ｐｓｌ ）微工研条寄第１８８号などに挙げること
ができる。これら両画の詳細は、前記特願昭５６−１８
４６８８号明ＩＩＢ書に記載されている。
、を水和して対応アミド、特にアクリルアミド、を生成
することができるシュードモナス属の細菌である。具体
的には、例えば、前記特願昭５６−１８４６８８号の明
細書に記載のシュードモナス・クロロラフイスＢ ２３
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉ
ｓ Ｂ２３）微工研争寄第１８７号およびシュードそナ
スｓｐ、 ＰＳｌ （Ｐ ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ
、 Ｐｓｌ ）微工研条寄第１８８号などに挙げること
ができる。これら両画の詳細は、前記特願昭５６−１８
４６８８号明ＩＩＢ書に記載されている。
酵素誘導剤
本発明においては、酵素誘導剤としてプロピオニトリル
、イソブチロニトリル、プロピオンアミドおよびイソブ
チルアミドを使用する。これらは。
、イソブチロニトリル、プロピオンアミドおよびイソブ
チルアミドを使用する。これらは。
それぞれ単独にまたは両者混合して、使用することがで
きる。
きる。
本発明によれば、これらを培地に逐次的に添加する。「
逐次的」とは、連続的または間歇的いずれをも意味する
ものである。
逐次的」とは、連続的または間歇的いずれをも意味する
ものである。
培養一本発明の実施
本発明の一般的実施態様は、次の通りである。
スナワち、ニトリルヒドラターゼ活性を有するシュード
モナス属の細菌を炭素源、例えばグルコース、フラクト
ース、シュークロース、デキストリン、グリセリン、エ
タノールおよびコノ為り酸など、窒素源、例えばアンモ
ニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウムおよび原木なと、有機栄養源、例えば、酵母エ
キス、肉エキス、麦芽エキス、カゼイ／分解物およびペ
プトンなど、無機塩１例えばリン酸塩、マグネシウム、
カリウム、鉄、その他微量金属、その他、を適宜含有す
る培地、特に液体培地、に接種し、これに酵素誘導剤と
してゾロビオニトリル、イソゾチロニトリル、！ロピオ
ンアミドおよびイソブチルアミドの中の少なくとも１種
を逐次的に添加しながら好気的条件下に培養を行なう。
モナス属の細菌を炭素源、例えばグルコース、フラクト
ース、シュークロース、デキストリン、グリセリン、エ
タノールおよびコノ為り酸など、窒素源、例えばアンモ
ニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アン
モニウムおよび原木なと、有機栄養源、例えば、酵母エ
キス、肉エキス、麦芽エキス、カゼイ／分解物およびペ
プトンなど、無機塩１例えばリン酸塩、マグネシウム、
カリウム、鉄、その他微量金属、その他、を適宜含有す
る培地、特に液体培地、に接種し、これに酵素誘導剤と
してゾロビオニトリル、イソゾチロニトリル、！ロピオ
ンアミドおよびイソブチルアミドの中の少なくとも１種
を逐次的に添加しながら好気的条件下に培養を行なう。
これらの酵素誘導剤の逐次添加は、ニトリルヒドラター
ぜ活性の高い菌体を高収率で得るために必須である（後
記実験例参照）。その際、培地中の該酵素誘導剤の濃度
は培養時間、培養温度などにもよるが、通常好ましくは
１５ ｇｅｔ （併用の場合は合計量）未満、より好ま
しくは１０ ｖｔ以下、となるように調整する。この濃
度が１５ｇ／を以上となると、ニトリルヒドラターゼ活
性の低下が認められる。培地のｐ）Ｉは６〜９程度、好
ましくは７〜８程度、培養温度は２０〜３７℃程度、好
ましくはδ〜Ｉ″Ｃ程度、培養時間はＩＳ３日程度で充
分である。
ぜ活性の高い菌体を高収率で得るために必須である（後
記実験例参照）。その際、培地中の該酵素誘導剤の濃度
は培養時間、培養温度などにもよるが、通常好ましくは
１５ ｇｅｔ （併用の場合は合計量）未満、より好ま
しくは１０ ｖｔ以下、となるように調整する。この濃
度が１５ｇ／を以上となると、ニトリルヒドラターゼ活
性の低下が認められる。培地のｐ）Ｉは６〜９程度、好
ましくは７〜８程度、培養温度は２０〜３７℃程度、好
ましくはδ〜Ｉ″Ｃ程度、培養時間はＩＳ３日程度で充
分である。
培養終了後の菌体の回収ないし利用、あるいはニトリル
ヒドラターゼの回収ないし利用は、前記特願昭５６−１
８４６８８号明細曹に記載されたところ、あるいは後記
実験例の記載、Ｋ従って行なうことができる。
ヒドラターゼの回収ないし利用は、前記特願昭５６−１
８４６８８号明細曹に記載されたところ、あるいは後記
実験例の記載、Ｋ従って行なうことができる。
実施例
下記の実験例中、アクリロニトリル水和のヒドラターゼ
活性は、培養液１ｍｌをアクリロニトリルを２．８重世
％含むリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５） ９ ｍｌに加え
て１０℃で１０〜（イ）分間反応させ、この時生成した
アクリルアミドをガスクロマトグラフィーにより定量し
、このデータを基に培養液１ｍｌ当り。
活性は、培養液１ｍｌをアクリロニトリルを２．８重世
％含むリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５） ９ ｍｌに加え
て１０℃で１０〜（イ）分間反応させ、この時生成した
アクリルアミドをガスクロマトグラフィーにより定量し
、このデータを基に培養液１ｍｌ当り。
１分間に１μモルのアクリルアミドを生成する能力を１
単位として算出したものである。
単位として算出したものである。
実施例１
グルコース１０ ｇｅｔ 、ペプトン５ ｇｅｔ 、酵
母エキス３ ｇｅｔおよび麦芽エキス３ ｇｅｔからな
る前培養培地（ｐＨ７，２） １００ｍ１を５００ ｍ
ｌ容三角フラスコに入れて滅菌し、これとシュードモナ
ス・クロロラフイスＢ２３ （＠工研条寄第１８７号）
菌株を接種し、５℃で別時間振と５培養を行なった。
母エキス３ ｇｅｔおよび麦芽エキス３ ｇｅｔからな
る前培養培地（ｐＨ７，２） １００ｍ１を５００ ｍ
ｌ容三角フラスコに入れて滅菌し、これとシュードモナ
ス・クロロラフイスＢ２３ （＠工研条寄第１８７号）
菌株を接種し、５℃で別時間振と５培養を行なった。
一方、シニークロース１０ ｇｅｔ、 ＫＨ２ＰＯ４０
，５ｇ／ｌ、 Ｋ２ＨＰ０．０．５ ｇ／１１Ｍｇ５０
４・７Ｈ２００，５ｇｅｔおよびＦｅ５ｏ４ａ ７ Ｈ
２Ｏ１０ｒｎｇ／ｌ からなる培地（ｐＨ７，２）
１００ｍ１を５００ ｍｌ容三角フラスコニ入れて滅菌
した。
，５ｇ／ｌ、 Ｋ２ＨＰ０．０．５ ｇ／１１Ｍｇ５０
４・７Ｈ２００，５ｇｅｔおよびＦｅ５ｏ４ａ ７ Ｈ
２Ｏ１０ｒｎｇ／ｌ からなる培地（ｐＨ７，２）
１００ｍ１を５００ ｍｌ容三角フラスコニ入れて滅菌
した。
この培地に、上記種培養液を１ｍｌ接種し、酵素誘導剤
としてイソゾチロエトリルまたはイソブチルアミドを逐
次添加しながら、２５℃にて好気的に振と５培養を行な
った。
としてイソゾチロエトリルまたはイソブチルアミドを逐
次添加しながら、２５℃にて好気的に振と５培養を行な
った。
なお、比較のため酵素誘導剤を一段で添加した場合につ
いて同様に培養を行なった。
いて同様に培養を行なった。
以上のそれぞれについて、所定の時間経過後の培養液を
サンプリングし、その培養液のアクリロニトリル水和の
ニトリルヒドラターゼ活性を測定した。
サンプリングし、その培養液のアクリロニトリル水和の
ニトリルヒドラターゼ活性を測定した。
酵素誘導剤の添加条件と培養液のニトリルヒドラターゼ
活性との関係を第１表に示した。
活性との関係を第１表に示した。
第１表から明らかなように、インブチロニトリルないし
インブチルアミド添加のいずれにおいても、逐次添加は
ほぼ同量の酵素誘導剤を一段で添加した場合に比べて培
養液の酵素活性が約２倍返（増大している。しかしなが
ら、逐次添加においても培養途中（培養開始後Ｉ時間）
で酵素誘導剤の濃度ｉ １５ ｇ／を以上とした場合に
は以後の酵素活性に低下が認められる。
インブチルアミド添加のいずれにおいても、逐次添加は
ほぼ同量の酵素誘導剤を一段で添加した場合に比べて培
養液の酵素活性が約２倍返（増大している。しかしなが
ら、逐次添加においても培養途中（培養開始後Ｉ時間）
で酵素誘導剤の濃度ｉ １５ ｇ／を以上とした場合に
は以後の酵素活性に低下が認められる。
培養開始時に一段で１５ ｇ／を以上の濃度で酵素誘導
剤を姫加した場合には、酵素活性の発現がほとんど抑制
されている。
剤を姫加した場合には、酵素活性の発現がほとんど抑制
されている。
実施例２
グルコース１０ｇ／ｌ、ペプトン５ ｇ／ｌ、酵母エキ
ス３ｇ／ｌおよび麦芽エキス３ ｇ／ｌからなる前培養
培地（ｐＨ７，２） １００ ｍｌを５００ ｍｌ容三
角フラスコに入れて滅菌し、これにシュードモナスｓｐ
、ｐｓ−１（微工研条寄第１８８号）菌株を接稚し、５
℃で別時間振と５培養を行なった。
ス３ｇ／ｌおよび麦芽エキス３ ｇ／ｌからなる前培養
培地（ｐＨ７，２） １００ ｍｌを５００ ｍｌ容三
角フラスコに入れて滅菌し、これにシュードモナスｓｐ
、ｐｓ−１（微工研条寄第１８８号）菌株を接稚し、５
℃で別時間振と５培養を行なった。
一方、グリセロール１０ ｇ／ｌ 、ＫＨ２ＰＯ４０，
５ｇ／ｌ。
５ｇ／ｌ。
Ｋ２ＨＰＯ４０−５ｇ７’ｔ、 Ｍｇ８０４・７Ｈ２０
０，５ｇ／ｌおよびＦｅＳＯ４” ７Ｈ２０１０ｍｇ／
ｌからなる培地（ｐＨ７，２）Ｚｏｏ ｍｌを５００
ｍｌ容三角フラスコに入れて滅菌した。
０，５ｇ／ｌおよびＦｅＳＯ４” ７Ｈ２０１０ｍｇ／
ｌからなる培地（ｐＨ７，２）Ｚｏｏ ｍｌを５００
ｍｌ容三角フラスコに入れて滅菌した。
この培地に、上記種培養液を１ｍｌ 接種し、酵素誘導
剤としてゾロビオニトリルまたはプロピオンアミドを逐
次添加しながら、２５℃にて好気的に振と５培養を行な
った。
剤としてゾロビオニトリルまたはプロピオンアミドを逐
次添加しながら、２５℃にて好気的に振と５培養を行な
った。
なお、比較のため酵素誘導剤を一段で添加した場合につ
いて、同様に培養を行なった。
いて、同様に培養を行なった。
以上のそれぞれＫついて、所定の時間経過後の培養液の
アクリロニトリル水和のニトリルヒドラターゼ活性を測
定した。
アクリロニトリル水和のニトリルヒドラターゼ活性を測
定した。
酵素誘導剤の添加条件と培養液のニトリルヒドラターゼ
活性との関係を第２表に示した。
活性との関係を第２表に示した。
第２表から明らかなように、プロピオニトリルないしプ
ロピオンアミド添加のいずれにおいても、逐次添加をす
ることにより、はぼ同量の酵素誘導剤を一段で添加した
場合の培養液の酵素活性の約２倍に活性が増大した。
ロピオンアミド添加のいずれにおいても、逐次添加をす
ることにより、はぼ同量の酵素誘導剤を一段で添加した
場合の培養液の酵素活性の約２倍に活性が増大した。
実施例３
シュークローｘ ２０ ｇ／ｌ 、 Ｋ２ＨＯ４１ｇ／
ｌ−。
ｌ−。
Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ／１１Ｍｇ５Ｏ，・７Ｉ（２０１ｇ／
ｌおよびＦｅＳＯ４＠７Ｈ２０２０ｍｇ／ｌ を水道
水に溶かした培地（ｐ）１７．２ ） １．３リツトル
を２リツトル容小型ジャーファーメンタ−に仕込み殺菌
した。
ｌおよびＦｅＳＯ４＠７Ｈ２０２０ｍｇ／ｌ を水道
水に溶かした培地（ｐ）１７．２ ） １．３リツトル
を２リツトル容小型ジャーファーメンタ−に仕込み殺菌
した。
この培地に、実施例１の前培養と同様にして培養したシ
ュードモナス・クロロラフイスＢ２３ （微工研条寄第
１８７号）菌株の種培養液５０ｍ１ を接種し、５℃に
て、通気量２ｔ／ｍＩｎ、攪拌速度５００ｒｐｍで４５
時間培養を行なった。イソブチロニトリルは、培養４５
時間の間に総量で２０．８１ｉ、’１．３１を培養液中
の濃度を１０ ｇ／を以下に調整しつつ間歇的に添加し
た。また、培養−は７〜８となるように硫酸または苛性
ソーダ水溶液にて調整した。
ュードモナス・クロロラフイスＢ２３ （微工研条寄第
１８７号）菌株の種培養液５０ｍ１ を接種し、５℃に
て、通気量２ｔ／ｍＩｎ、攪拌速度５００ｒｐｍで４５
時間培養を行なった。イソブチロニトリルは、培養４５
時間の間に総量で２０．８１ｉ、’１．３１を培養液中
の濃度を１０ ｇ／を以下に調整しつつ間歇的に添加し
た。また、培養−は７〜８となるように硫酸または苛性
ソーダ水溶液にて調整した。
なお、比較のため、イソブチロニトリルを培養開始時に
５．２ｇ／ｌ、３ｔを一段で添加して同様に培養を行な
った。
５．２ｇ／ｌ、３ｔを一段で添加して同様に培養を行な
った。
結果として、イソブチロニトリルを逐次添加した場合に
は４５時間の培養でニトリルヒドラターゼ活性が１６６
拳位（菌体濃度７．８ｇ／ｌ）となったのに対し、一段
添加の場合には培養開始後１２時間でニトリルヒドラタ
ーゼ活性が最大（１４単位）となってから以後低下が認
められ、培養４５時間ではニトリルヒドラターぜ活性が
１２単位（菌体濃度４．２ｇ／ｌ ）であった。
は４５時間の培養でニトリルヒドラターゼ活性が１６６
拳位（菌体濃度７．８ｇ／ｌ）となったのに対し、一段
添加の場合には培養開始後１２時間でニトリルヒドラタ
ーゼ活性が最大（１４単位）となってから以後低下が認
められ、培養４５時間ではニトリルヒドラターぜ活性が
１２単位（菌体濃度４．２ｇ／ｌ ）であった。
実施例４
イソブチロニトリル２４．７ ｇ／ｌ、３ ｔを培養開
始から４０時間かけてポンプにて連続的に培養液中のイ
ソブチロニトリルの濃度を１０ ｇ／を以下に調整しつ
つ添加した以外は実施例２と同様に培養を行なった。
始から４０時間かけてポンプにて連続的に培養液中のイ
ソブチロニトリルの濃度を１０ ｇ／を以下に調整しつ
つ添加した以外は実施例２と同様に培養を行なった。
その結果、４４時間の培養で１７ｉ単位（菌体濃度７．
４ｇ／ｌ）のニトリルヒドラターゼ活性を得た。
４ｇ／ｌ）のニトリルヒドラターゼ活性を得た。
実施例５
グルコース２５ｇ／ｌ、硫酸アンモニウム２νｔ。
ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／ｌ、 Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ／ｌ、Ｍｇ
ＳＯ４・７Ｈ２０１ｇ／ｌおよびＦｅＳＯ４” ７Ｈ２
０２０ｍｇ／ｌを水道水に溶かした培地（ｐＨ７，２）
１．３リツトルを２リツトル容小型ジャーファーメン
タ−に仕込んで、殺菌した。これに１実施例１の前培養
と同様にして培養したシュードモナス・クロロラフイス
Ｂ２３（微工研条寄第１８７号）菌株の種培養液５９
ｍ Ｉ を接種し、５℃にて、通気量２１／分、攪拌速
度５００ｒｐｍで培養を行なった。なお、培養−は７〜
８となるように硫酸または苛性ソーダ水溶液によって調
整した。培養を開始してから８時間後より培養終了まで
の間に総量で２０．８ ｇ／ｌ、３ ｔのイソブチロニ
トリルな培養液中の該濃度を１０ ｇ／を以下に調整し
つつ間歇的に添加した。
ＳＯ４・７Ｈ２０１ｇ／ｌおよびＦｅＳＯ４” ７Ｈ２
０２０ｍｇ／ｌを水道水に溶かした培地（ｐＨ７，２）
１．３リツトルを２リツトル容小型ジャーファーメン
タ−に仕込んで、殺菌した。これに１実施例１の前培養
と同様にして培養したシュードモナス・クロロラフイス
Ｂ２３（微工研条寄第１８７号）菌株の種培養液５９
ｍ Ｉ を接種し、５℃にて、通気量２１／分、攪拌速
度５００ｒｐｍで培養を行なった。なお、培養−は７〜
８となるように硫酸または苛性ソーダ水溶液によって調
整した。培養を開始してから８時間後より培養終了まで
の間に総量で２０．８ ｇ／ｌ、３ ｔのイソブチロニ
トリルな培養液中の該濃度を１０ ｇ／を以下に調整し
つつ間歇的に添加した。
なお、比較のためイソブチロニトリル１０．４ｇ／ｌ、
３ｔを培養開始後８時間で一段添加して、同様に培養を
行なった。
３ｔを培養開始後８時間で一段添加して、同様に培養を
行なった。
結果として、イソブチロニトリルを逐次添加した場合に
は４２時間の培養で１７０単位（菌体濃度９．ｏｇ／ｌ
）のニトリルヒドラターゼ活性を得たのに対し、一段添
加の場合にはニトリルヒドラターゼ活性は培養開始後ｎ
時間で４２単位となってから以後低下が認められ、培養
４２時間では加単位（菌体濃度６．７ｇ／Ｌ）であった
。
は４２時間の培養で１７０単位（菌体濃度９．ｏｇ／ｌ
）のニトリルヒドラターゼ活性を得たのに対し、一段添
加の場合にはニトリルヒドラターゼ活性は培養開始後ｎ
時間で４２単位となってから以後低下が認められ、培養
４２時間では加単位（菌体濃度６．７ｇ／Ｌ）であった
。
出願人代理人 猪 股 清手続補正書
昭和め年２月３ 日
特許庁長官 着 杉 和 夫 殿
１、事件の表示
昭和５７年 特許層 第１９９７５０号２、発明の名称
シェードそナス属細菌の培養法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
山 １） 秀 明
（はか１名）
６、補正の対象
明細書の「発明の詳細な説明」の欄。
Ｌ補正の内容
明細書第１６頁第１１行の「培養」の前Ｋ「４２時間」
を加入する。
を加入する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、シュードモナス（Ｐ ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）属
に属してニトリルヒドラターゼを産生ずる能力を有する
細菌を培養してニトリルヒドラターゼ酵素活性を有する
細菌函体を製造するに当り、プロピオニトリル、イソブ
チロニトリル、プロピオンアミドおよびイソブチルアミ
ドの中から選ばれた化合物の少なくとも１種を逐次的忙
培地に添加することを特徴とする、シュードモナス属細
菌の培養法。 ２、培地中のプロピオニトリル、イソブチｏ−トリル、
プロピオンアミドおよびイソブチルアミドの濃度を１５
ｇ／を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の培養法
。 ３、シュードモナス属に、鳴してニトリルヒドラターゼ
を産生ずる能力を有する細菌がシュードモナス・クロロ
ラフイスＢ Ｚｌｌ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｈ
ｌｏ−ｒｏｒａｐｈｉｓ Ｂ ２３） 做工研東寄第１
８７号またはシュードモナスｓｐ、 ＰＳ １ （Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 ＰＳｌ ）微工研条寄第
１８８号である、特許請求の範囲第１′ 項または第２
項記載の培養法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57199750A JPS5991879A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
| DE8383111380T DE3366131D1 (en) | 1982-11-16 | 1983-11-14 | Method for cultivation of pseudomonas bacteria |
| EP83111380A EP0109083B1 (en) | 1982-11-16 | 1983-11-14 | Method for cultivation of pseudomonas bacteria |
| US07/104,566 US4880739A (en) | 1982-11-16 | 1987-10-02 | Method of cultivation of pseudomonas bacteria |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57199750A JPS5991879A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5991879A true JPS5991879A (ja) | 1984-05-26 |
| JPS6143996B2 JPS6143996B2 (ja) | 1986-09-30 |
Family
ID=16413004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57199750A Granted JPS5991879A (ja) | 1982-11-16 | 1982-11-16 | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4880739A (ja) |
| EP (1) | EP0109083B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5991879A (ja) |
| DE (1) | DE3366131D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62257386A (ja) * | 1986-05-02 | 1987-11-09 | Nitto Chem Ind Co Ltd | ニトリル水和活性の保持方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5937951B2 (ja) * | 1981-11-18 | 1984-09-12 | 秀明 山田 | アミドの生物学的製造法 |
| AT384238B (de) * | 1985-01-14 | 1987-10-12 | Immuno Ag | Verfahren zur submersen zuechtung von pseudomonas aeruginosa-bakterienstaemmen |
| JPH0822221B2 (ja) * | 1988-12-28 | 1996-03-06 | 日東化学工業株式会社 | シュードモナス属細菌の培養法 |
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| WO2014159628A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Preventing or delaying chill injury response in plants |
| US10004237B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-06-26 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Inhibiting or reducing fungal growth |
-
1982
- 1982-11-16 JP JP57199750A patent/JPS5991879A/ja active Granted
-
1983
- 1983-11-14 DE DE8383111380T patent/DE3366131D1/de not_active Expired
- 1983-11-14 EP EP83111380A patent/EP0109083B1/en not_active Expired
-
1987
- 1987-10-02 US US07/104,566 patent/US4880739A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62257386A (ja) * | 1986-05-02 | 1987-11-09 | Nitto Chem Ind Co Ltd | ニトリル水和活性の保持方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3366131D1 (en) | 1986-10-16 |
| JPS6143996B2 (ja) | 1986-09-30 |
| EP0109083B1 (en) | 1986-09-10 |
| EP0109083A1 (en) | 1984-05-23 |
| US4880739A (en) | 1989-11-14 |
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