JPS6011424A - 繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示 - Google Patents

繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示

Info

Publication number
JPS6011424A
JPS6011424A JP59122967A JP12296784A JPS6011424A JP S6011424 A JPS6011424 A JP S6011424A JP 59122967 A JP59122967 A JP 59122967A JP 12296784 A JP12296784 A JP 12296784A JP S6011424 A JPS6011424 A JP S6011424A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ion exchange
fibroblast growth
growth factor
column
bovine brain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP59122967A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0430960B2 (ja
Inventor
ケネス・エ−・ト−マス・ジユニヤ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck and Co Inc
Original Assignee
Merck and Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck and Co Inc filed Critical Merck and Co Inc
Publication of JPS6011424A publication Critical patent/JPS6011424A/ja
Publication of JPH0430960B2 publication Critical patent/JPH0430960B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
    • C07K14/501—Fibroblast growth factor [FGF] acidic FGF [aFGF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/839—Nerves; brain

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 の促進に有効な成長因子に関する。酸性の牛の線維芽成
長因子は、はっきりと均質化されるまで示差塩沈澱（　
ｄｉｆｆｅｒｅｕＬｉａＪ　ｓａｌｔｐｒｅｃｉｐｉｌ
ａｔｉｏｎ　）、イオン交換、ゲル濾過、等電点焦点化
およびＣ４逆相Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃカラム上での疎水性クロ
マトグラフィーにより最低３５、　０００倍まで精製さ
れる。分子の２つの微小外生（　ｍｉｃｒｏｈｅｔｅｒ
ｏｇｅｎｏｕｓ　）の形態は、１６、　６００および１
６，　８００ドルトンの見掛けの分子重量で与えられる
。
繊維芽細胞のマイトジェン（　Ｍｉｔｏｇｅｎ　）　活
性は４０年以上前にトロウェル等（　Ｔｒｏｗｅｌｌｅ
ｔａｌ　）　＜　１９３９　）ジャーナル　オブザエク
スペリメンタルバイオロジー（　Ｊ．　ＥＸｐ．　Ｂｉ
ｏｌ　）１６、６０−７０およびホフ７　ン（　ＨＯ　
ｆ　ｆｍａｎ　）（１９４０）グロース（　Ｇｒｏｗｔ
ｈ　）　４　３　６　１　−３７６によって認められた
。脳から誘導される成長因子の均質化のための精製の最
初の要求は、ゴスボダローウイツ等（　Ｇｏｓｐｏｄａ
ｒｏｗｉｃｑｅｔａｌ　）によってなされた、成長ホル
モンおよび関連するレプチドの成長に関する第３回国際
シンポジウム９月１７ー２０日（１９７５）イタリー，
ミラノ；エクセアタメデイカ／エラセビール（　ＥＸＣ
ｅｐｔａ　Ｍｅｄｉｃａ／ＥＬａｓｅｖｉｅｒ）ニュー
ヨーク，ＩＩｐ１４１−１６５，お工びＪ。
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，　２５：３　、　３７３６−３７
４３、彼はマイトジェンの活性および目標細胞について
種々記載している。ルフト（　Ｌ＋ｒｆｔ　）　、　Ｒ
，およびホール（）（ａｌｌ）、）（編「アドバンス　
メタポリツクディスオーダー」　（アカデミックプレス
，ニューヨーク）ｖｏｌｓ，ａｏｌ−ａ３５にゴスポダ
ロウイツ等（Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｑ　ｅｔ　ａｌ
）、なまの牛の脳の均質物から約１０００倍の精製した
後で、活性プロティン、線維芽細胞成長因子、（ＦＧＦ
）は　ミニリン　ベーシックプロティンの３つのプロテ
オリティック　フラグメンツの層になることが報告され
ている。
ウニストール等（ＷｅＳｔａｌｌ　ｅｔ　ａｌ　）　Ｎ
ａ１ｌＡＣａｄ　Ｘ５ｃｉ　、ＵＳＡ　７５　４６７５
−４６７８、マイセリン　シースの構成は、多くの脳と
周囲の神経細胞とに囲まれている。
ミニリン　ベーシック　プロティン　（ｍｙｅｌｉｎｂ
ａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　）の退化生、成物としての
マイトジェン類の識別は、その後討議され、トーマス等
（１９８０）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈ６ｍ、　２５５　
、５５１７−５５２０およびレモン等（Ｌｅｒｒｍｏｎ
　ｅｔ　ａｌ　）（１９８２）　Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉ
ｏｌ　、９５．１６２−１６９゜そしてミニリン塩基性
プロティンのフラグメンツはこれら標方の主プロティン
種として最終的に確認されたが、活性マイトジェン類で
はなかった。
いまや、本発明では、酸性線維芽細胞成長因子の３５’
、０００倍精製方法とプロティンの特性を与えるもので
ある。
また、同様に本発明は活性成分としての新規な成長因子
を含む医薬組成物と、処理が必要な患者に新規な成長因
子を投与することにより、人を含む哺乳動物の傷の治療
方法を提供するものである。
本発明の新規な成長因子は、実質上純粋な形態の酸性の
脳線維芽細胞成長因子で、その純粋な形態は、第１表に
示すようなアミノ酸組成物のついた１６．６００および
１６．８００ドルトンの量の微小外生の形態として存在
する。
第　■　表 スレオニン　９ セリン　１０ プロリン　７ グリシン　］４ アラニン　５ システイン　４ バリン　５ メチオニン　１ イソロイシン　６ ０イシン　１９ チロシン　７ フエニルアラニン　７ ヒスチジン　５ リシン　１３ アルギニン　６ トリプトフアン　１ ＢＡＬＢ／Ｃ３Ｔ３細胞に対するマイトジェン活性の１
単位、ＤＮＡの合成の１／２−最大刺戟に対し要求され
る純粋のプロティンの量は、成長因子の４ｏｐｇ／ｍｌ
に相当する。
本発明の酸性の脳線維芽細胞成長因子が牛の脳から単離
されることが記載されているけれども、同じかあるいは
実質上似ている成長因子は人間の脳を含む他の哺乳動物
から単離され得る。
上記の哺乳動物組織からの酸性の脳線維芽細胞成長因子
の単離の本発明の方法は、下記の一連の工程から成る： （１）原料組織からの抽出および示差塩沈澱；（２）イ
オン交換； （３）ゲルｐ過； （４）　イオン交換； （５）等電点焦点化； （６）疎水性逆相クロマトグラフィー。
抽出および示差塩沈降法はｐＨ４，５で０．１５Ｍ（７
）硫酸アンモニウム；ｐＨ０，７５Ｔ　１．５２　Ｍの
硫酸アンモニウム；およびｐＨ６，７５で３．４Ｍの硫
酸アンモニウムを用いた連続した処理およびその後の高
塩濃度沈澱物の透析および凍結真空乾燥によって達成さ
れる。
イオン交換ステップは、ｐＨ５でカルボキシメチル−セ
ファデックス（ファーマシア）樹脂上のバッチ吸着よシ
なシ、その後０．１５Ｍおよび０．６０　Ｍの塩化ナト
リウムを含む０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝剤による連
続した溶離その後の０．６　Ｍ塩化ナトリウム部分の透
析および凍結真空乾燥からなる。
ゲル濾過ステップは、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ　）　Ｇ　−７５（ファーマシア）カラム上でｐｉｉ
ｓ、ｓ、０．１　Ｍ重炭酸アンモニウムにょる溶離、引
続くプールされた最高活性フラクションの凍結真空乾燥
からなる。
第２のイオン交換ステップはｐＨ６，０，１Ｍギ酸アン
モニウム中に受填され、ｐＨ５，Ｑ、０．２Ｍおよび０
．６Ｍのギ酸アンモニウムで連続して溶離されたカルボ
キシメチルセルロース上で行われ、引続き活性プールを
凍結真空乾燥する。
等電点焦点化は、ウルトロデックス（ｌＪＩｔｒ−ｏｄ
ｅｘ　）　（ＬＫＢ　、ガイザースバーグ、ＭＤ）中で
行われる。
酸性マイトジェン活性の疎水性逆相高性能液体クロマト
グラフ精製は、バイダック（ＶｙｄａＣ）Ｃ４シリカベ
ースＨＰ　Ｌ　Ｃカラム（セパレーショングループ、ヘ
スペリア、ＣＡ）Ｊ二で行われる。
実施例 牛の脳は、地方の畜殺場でめ氷に乗せて運搬した。目視
出来る血の固り、および構成血管のついた髄膜の外部膜
を取除いた。脳を一辺が約２ｃＩｒＬの立方体にスライ
スし、液体窒素中で急速冷凍し、−７０℃で貯蔵した。
蒸溜水を用いて全ての溶液を作り、ｐ１１値を使用温度
における標準品に対して調整した。全ステップは、特に
注意する場合以外は４℃で行つた。
４　ｋｇの組織（約１２個の成牛脳の全量）を０、１５
　Ｍ　（ＮＨ４）　２　ＳＯ４４を中で凍解し、ワーリ
ングブレンダーで均質化し、１５．２４センチ（６イン
チ）直径のプロペラ−攪拌機で激しく攪拌しつつ６　Ｎ
　ＨＣｔを用いてｐＨ４，５に調整した。１時間後均質
化物（ホモジネート）ｉ　１３．８００　Ｇで４０分間
遠心分離し、上澄液’Ｑ　Ｉ　Ｍ　ＮａＯＨテｐＨ６，
７５に調整し、２０（１９／　ｔ（Ｄ　（ＮＨ４）２　
ＳＯ４（１，５２Ｍ　）　ｆ攪拌しつツ静かに加えた。
１３．８００　Ｇで３０分間遠心分離した後、（ＮＨ４
）２’ＳＯ４２５０Ｓ’　を上澄液１を当り加えた（３
．４１Ｍ）、混合物を遠心分離し、得られたペレットを
２００　ｍｉの水に溶かし、６．０００−８．０００　
Ｍｒカット　オフハッゲ（スペクトラム　メディカル　
インダストリース、ロサンゼルス、カリフォルニア）で
１８時間、２回１４を容量の水に対し透析賦凍結真空乾
燥した。
ステップ２　カルボキシメチルーセファデッ１６ｋｇの
脳の塩沈澱物からの凍結真空乾燥した脳をｐＨ６，０、
０，０５Ｍリン酸ナトリウムの９００　ｍｌ中で溶解し
、混合物７１　Ｍ　ＮａｏｎテｐＨ６、Ｑ［再調整し、
２３．３００　Ｇ　テ３０分間遠心分離して精製した。
上澄液を０．１　Ｍリン酸塩緩衝剤で平衡させた水利カ
ルボキシメチル−セファデックスＣ−５０（ファーマシ
乙ビッカタウエイ、ニューシャーシー）ＳＯＯｍｌと１
５分間攪拌し、吸着されないプロティンを荒い焼結グラ
スフィルター上に搾取し、レジンを３ｔの０．１Ｍ緩衝
剤で洗浄し、８．３儂直径のカラムに充填した。プロテ
ィンを、０．１５Ｍおよび０．６０　Ｍ’　Ｎ２Ｃｔ　
ｆ含む０．１Ｍ緩衝剤で３Ｑｍｌ／分で連続して溶離し
た。
０．６　Ｍ　Ｎａｃｔ　テｆａ　離したプロティンピー
クツ約５００　ｍｌプールヲ、６．０００−　ｓ、　ｏ
ｏｏ　Ｍｒバッグで１８時間２回１４を容量の水に対し
て透析し、凍結真空乾燥した。
ステップ３Ｃ−５０カラムからの凍結真空乾燥したプロ
ティンの　１／４　をｐＨ８，５，０，１Ｍ　重炭ｍア
ンモニウムの２０１ｎｌ中に溶かし、２７、０００　Ｇ
で１５分間遠心分離で精製し、セファデックスＧ−７５
（ファーマシア）　（４０１２０μｍ粒径）カラム（５
Ｘ９０ｍ）上゛で７４ｍ１／ｈｒｔｙ）流速で分離し、
１７．５ｆｆｌフラクシヨンを集めｆ？、、ｏ最高活性
フラクション（溶離剤約８７５乃至１０５（１１１）を
プールし、凍結真空乾燥した。
セファデックスＧ−７５カラムからのプロティン（Ｈｐ
Ｈ６，０，１Ｍギ酸アンモニウム１０ｍ１中に溶解し、
ｐＨを０．１　Ｍギ酸でｐＨ６，０に再調整し、１５分
間２７．０００　Ｇで遠心分離し、上澄液ｉｃＭ５２カ
ルボキシメチルセルロース（ワットマン、クリフトン、
ニューシャシ−）のカラム（１，５ｘ　６．５ｃｍ）上
に充填した。
プロティンｉｏ、２Ｍのギ酸アンモニウムを用いて６０
ｍ１／■１ｒで、溶解し、引続きｐＨ６の０．６Ｍギ酸
アンモニウムで成長因子の溶離を行った。
ステップ５　等電点焦点化法 プロティンサンプルをウルトロデツクス（Ｕｌｔｒａｄ
ｅｘ　）　（ＬＫＢ、ガイザースバーグ。
マリランド）で小型化した焦点化通路のついた改良した
ＬＫＢマルチホー（Ｍｕｌｔｉｐｈｏｒ　）平担基板焦
点化板を用いて等電点焦点を行った。
等電点熱化は一般に０．５Ｘ１．０ｃＴＬの通路３本を
含む板上で行われた。その夫々の通路は、１２６μｔの
ｐＨ３−１０フアーマライト（ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ　
）　（’７７−７　’、ｔ　７　）と４７μＪｊ７）ｐ
Ｈ９−１１７Ｌｚフオ’Ｊ　ン（Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ　
）（ＬＫＢ）とを含む１．ｇｍｌの水中に７５Ｉｎ９の
ウルトラデッキスを有している。溶液を３２重歇％蒸発
した。ＦＧＦサンプルか、シトクローム（Ｃｙｔｏｃｈ
ｒｏｍｅ　）　Ｃとヘモグロビン（シグマ、セントルイ
ス、ミズーリー）の各１ｍｇの何れかを１μｔの上記の
稀両性電界質溶液に充填した。ｐＨ勾配は、電流の安定
、シトクロームＣおよびヘモグロビンスタンダードの位
置および最終ｐＨｊ直によってモニターされるように平
衡に達した。ゲル全１ｃｒｒＬのスライス１０個に分割
し、各セグメントを３３３μｔの０．６ＭＮａＣ１と共
に、１μｍ細孔に調整したセルロースＲＣ−６０フイル
ター（バイオアナリティック　システム　■ｎｃ、ウェ
スト　ラファイット、インデアナ）の入ったＭＦ−１微
小濾過チユーブ中で２００Ｇで５分間遠心分離を３回連
続して行うことにより溶離した。各１ｍｌ溶出液のｐＨ
’５０−５℃の標準に対し測定した。
ステップ６　逆相　ＨＰＬＣクロマトグラフィー最終精
製をバイダック（ｙｙｄａｃ　）　Ｃ４シリカベースＨ
ＰＬＣカラム（４，６Ｘ　５０咽）（セパレーション　
グループ、ヘスペリア、カリフォルニア）上で行っＡｏ
そのカラムは、あらかじめ調整用逆相Ｉ（ＰＬＣカラム
を通し紫外線吸収不純物を除去した１０ｍＭトリフルオ
ロ酢酸溶液中で平衡化した。
焦点化レジンから溶離したマイトジェン活性酸薗）１１
　＝　５〜７）フラクションをカラム上に直接射出した
。カラムを０−・６７％アセトニトリル勾配で展開した
。活性プロティンは約３０−３５％アセトニトリルのと
ころで溶離された。
マイトジェン定置 ＢＡ、ＬＢ／Ｃ３Ｔ３　Ａ　３１線維芽細胞（アメリカ
ンタイプカルチャーコレクション、ロックビル、マリラ
ンド）ｆｆ：、トーマス等（１９８０）によりＪ、　Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５５　、５５１７−５５２０゜
に記載されたように３５＋＋＋ｍ直径容器当り２Ｘ１０
４細胞で定植し、７％Ｃｏ２（ｐＨ７，３５＋０．０５
）１養した。細胞は、０．５％熱不活性化されたカルフ
セラム６（ｃａｌｆ　ｓｅｒｕｍ　）でメディアを置換
し、更に２４時間後に再度置換することによって完全に
無活動となった。定植後５５時間後、１゜１μｍのテス
トサンプルおよびデクサメタゾンを加え、７０時間後に
各容器に２μＣ１の〔メチル−８Ｈ］−チミジン（２０
Ｃ１／ミリモル、ニューイングランド　ニュクレアー、
ボストンマサチューセッツ）と３μ２のラベルのついて
ないチミジン（シグマ）を補充し、９５時間後に細胞を
、示された通りに合体された放射ラベル決定を行った。
（トーマス等　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、２５５．
５５１７−５５７０）、各投薬量一応答点は、三回の値
の平均とした。各クロマトグラフィープール中のマイト
ジェン活性は、プロティンサンプル濃度の１０倍成分で
４回以上の測定により決定した投薬量一応答曲線からめ
た。これが一般に用いられている単独の濃度定量法よシ
も、実質上より正確１つ再現性のちるマイトジェン活性
の決定を与えた。マイトジェン活性の１単位はプール当
りの活性単位の全数から計算された活性の１／２最太上
昇が得られるに必要なプロティンの量として定められる
。
分子の量の決定 変性剤（ドデシル硫酸ナトリウム）存在下で、還元剤（
β−メルカプトエタノール）の存在あるいは不存在下に
おける純粋な成長因子のポリアクリルアミドゲル電気泳
動け、１’６，６００および１６．８００ダルトンの１
対の非常に近いバンドを示した。アミノ酸分析は、これ
らが同じプロティンの微小外生形態であることを示した
。
アミノ酸分析 ＨＰＬＣカラムから溶離したプロティンサンプルを蒸返
して乾燥し、２％フェノールを含む６　ＮＨＣｌ　（ウ
ルトレツクス　、ペイカーケミカルＣＯ，フィリップス
バーグ、ニューシャーシー）中で２４．４８および７２
時間加水分解した。システィン量を過ギ酸酸化、モアー
（ＭＯＯｒｅ、　＜１９６３）、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ　Ｃ
ｈｅｍ。
２３８、’２３５”−２３７）の後システィン酸として
決定した。トリプトファンｆ４ＮＮ−メタンスルフォン
酸（ピアス、ロックフォード、イリノイス）中で２４時
間加水分解した後測定した。〔シンプ７　ン（ｓｉｍｐ
ｓｏｎ　）等、（１９７６）Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、
、２５１．１９３６−１９４０　）全ての分析はベック
マン１２１　ＭＢ　アミノ酸分析機で行った。
前に記載した生物化学的方法および分析技術を用い、第
■表にまとめた段階的精製を達成する。全体に、精製フ
ァクターは３５．０００あった。
９　コム！ １）　Ｊ５　Ｕ　℃　の　−−

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 ■　実質的に純粋な形で１６．０００または１６、８０
    ０ドルトンの分子大きさと下記アミノ酸組成を有する酸
    性の線維芽細胞成長因子： スレオニン　９ セリン　１０ プロリン　７ グリシン　１４ アラニン　５ システイン　４ バリン　５ メチオニン　Ｉ イソロイシン　６ ０イシン　１９ チロシン　７ フエニルアラニン　７ ヒスチジン　５ リシン　１３ アルギン　６ トリプトフアン　１ ２　牛の脳から単離した特許請求の範囲第１項の酸性の
    線維芽細胞成長因子。 ３　下記の一連のステップから成る実質的に純粋な形の
    酸性の線維芽細胞成長因子の単離方法： （１）原料生理組織からの抽出および示差塩沈澱、 （２）イオン交換 （３）ゲル濾過 （４）イオン交換 （５）等電点焦点化 （６）疎水性逆相クロマトグラフィー ４　牛の脳から単離する特許請求の範囲第３項の方法。 ５（１）抽出および示差塩沈澱がｐＨ４，５における０
    、１５Ｍの硫酸アンモニウム；　ｐＨ６，７５における
    １、５２Ｍの硫酸アンモニウム；およびｐｉｌ　６．７
    ５における３、４１　Ｍの硫酸アンモニウムによる連続
    処理およびそれに続く高塩沈澱物の透析および凍結真空
    乾燥で達成され； （２）　イオン交換がｐｉｌ６におけるカルボキシメチ
    ル−セファデックス（ファーマシ−？）上のバッチ式吸
    着と引続（０，１５Ｍおよび０．６０　Ｍ塩化ナトリウ
    ムを含んだ０．１Ｍリン酸ナトリウムを用いた一連の隼
    離と、引続く透析、および０．６　Ｍ塩化ナトリウムフ
    ラクションの凍結真空乾燥からなり、（３）セファデッ
    クスＧ−７５（ファーマシア）カラム上でのｐＨ８，５
    ０，１Ｍ重炭酸アンモニウムを用いた溶離による濾過と
    、引続くプールされた高活性フラクションの凍結真空乾
    燥、 （４）　ｐｉｌ　６．０．１　Ｍギ酸アンモニウム中に
    充填され、ｐＨ６，０，２Ｍおよび０．６Ｍギ酸アンモ
    ニウムで連続して溶融されたカルボキシメチルセルロー
    スカラム上でのイオン交換と引続く活性プールの凍結真
    空乾燥； （５）等電点焦点化がウルトラデロクス（ＬＫＢ、ガイ
    ザーバーグ、メリランド）内であシ；そして （６）酸性マイトジョン疎水性逆相高性能液体グロマト
    グラフイー精製がバイダックＣ４シリカベースのＨＰＬ
    Ｃカラム（セノテレーショングループ、ヘスペリア、力
    ■ノフオルニア）である、 特許請求の範囲第３項の牛の脳からの単離方法。 ６　牛の脳からの分離の特許請求の範囲第５項の方法。 ７　薬学的担体および特許請求の範囲第１項の繊維芽細
    胞成長の有効な成長促進量を含む薬学的成長促進組成物
    。 ８　特許請求の範囲第１項の線維芽成長因子の有効な成
    長促進量の処理が必要な７色者に投与することからなる
    傷の治療促進方法。
JP59122967A 1983-06-17 1984-06-16 繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示 Granted JPS6011424A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/505,553 US4444760A (en) 1983-06-17 1983-06-17 Purification and characterization of a protein fibroblast growth factor
US505553 1983-06-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6011424A true JPS6011424A (ja) 1985-01-21
JPH0430960B2 JPH0430960B2 (ja) 1992-05-25

Family

ID=24010776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59122967A Granted JPS6011424A (ja) 1983-06-17 1984-06-16 繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4444760A (ja)
EP (1) EP0131150B1 (ja)
JP (1) JPS6011424A (ja)
CA (1) CA1241639A (ja)
CY (1) CY1780A (ja)
DE (1) DE3485001D1 (ja)
HK (1) HK42694A (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6028999A (ja) * 1983-06-30 1985-02-14 Maruho Kk 細胞増殖促進作用を有するたんぱく質、その組成物と製造方法
JPS6354328A (ja) * 1986-04-23 1988-03-08 セルトリックス　ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 創傷治癒組成物およびそれを用いた創傷包帯
JPH03175994A (ja) * 1989-07-13 1991-07-31 Merck & Co Inc 治療上活性のある組換え体酸性繊維芽細胞成長因子の精製方法
JPH0789936B2 (ja) * 1985-09-12 1995-10-04 サイオス ノバ インコーポレイテッド 組換え繊維芽細胞成長因子

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5885899A (ja) * 1981-11-16 1983-05-23 Fujirebio Inc アミラ−ゼインヒビタ−およびその製造法
US4785079A (en) * 1984-11-09 1988-11-15 The Salk Institute For Biological Studies Isolation of fibroblast growth factor
US5464774A (en) * 1984-03-05 1995-11-07 The Salk Institute For Biological Studies Bovine basic fibroblast growth factor
EP0202298B1 (en) * 1984-11-29 1992-07-15 Regents Of The University Of Minnesota Wound healing agents
US5165938A (en) * 1984-11-29 1992-11-24 Regents Of The University Of Minnesota Wound healing agents derived from platelets
DE3584005D1 (de) * 1984-12-24 1991-10-10 Merck & Co Inc Im gehirn entstehender wachstumsfaktor.
US5401832A (en) * 1984-12-24 1995-03-28 Merck & Co., Inc. Brain derived and recombinant acidic fibroblast growth factor
US5439818A (en) * 1985-09-12 1995-08-08 Scios Nova Inc. DNA encoding human recombinant basic fibroblast growth factor
US5859208A (en) * 1988-07-06 1999-01-12 Fiddes; John C. Human basic fibroblast growth factor analog
US5827826A (en) 1986-03-03 1998-10-27 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Compositions of human endothelial cell growth factor
US5552528A (en) 1986-03-03 1996-09-03 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Bovine b-endothelial cell growth factor
ATE108459T1 (de) * 1986-04-22 1994-07-15 Salk Inst For Biological Studi Antagonisten des fibroblasten-wachstumsfaktors.
NZ220917A (en) * 1986-07-11 1991-05-28 Merck & Co Inc Human and bovine acidic fibroblast growth factor vectors, hosts and compositions
US4902782A (en) * 1986-12-10 1990-02-20 The Salk Institute For Biological Studies Isolation of fibroblast growth factor
FR2613936B1 (fr) * 1987-04-17 1990-03-30 Centre Nat Rech Scient Application des resines constituees par des polymeres fonctionnels comme phase stationnaire en chromatographie d'affinite pour la purification des facteurs de croissance et procede de purification correspondant
US5459250A (en) 1987-06-16 1995-10-17 New York University Truncated mammalian growth factor DNA sequence
US5750659A (en) * 1987-06-16 1998-05-12 New York University Mammalian growth factor
WO1988010269A1 (en) * 1987-06-18 1988-12-29 Monash University Growth factors
NZ226170A (en) * 1987-09-18 1990-07-26 Ethicon Inc Stable freeze-dried pharmaceutical composition containing epidermal growth factor
NZ226171A (en) * 1987-09-18 1990-06-26 Ethicon Inc Gel formulation containing polypeptide growth factor
US5312911A (en) * 1987-10-22 1994-05-17 Merck & Co., Inc. Cysteine-modified acidic fibroblast growth factor
EP0422104A4 (en) * 1988-06-22 1991-11-21 Synergen, Inc. Angiogenic potentiating peptides which potentiate angiogenic factors
US5250414A (en) * 1988-11-04 1993-10-05 Erziehungsdirektion Of The Canton Zurich Diagnostic methods using neurite growth regulatory factors
DE68923362T2 (de) * 1988-11-04 1996-03-28 Zuerich Erziehungsdirektion Wachstumsregelfaktoren für neuriten.
CA1341050C (en) * 1988-11-04 2000-07-11 Martin E. Schwab Neurite growth regulatory factors
DE3900198A1 (de) * 1989-01-05 1990-07-12 Merck Patent Gmbh Topisch anwendbare pharmazeutische zubereitung
US7026291B1 (en) * 1989-01-31 2006-04-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Epithelial cell specific growth factor, keratinocyte growth factor (KGF)
ES2153816T3 (es) 1989-01-31 2001-03-16 Jeffrey S Rubin Adn que codifica un factor de crecimiento especifico contra celulas epiteliales.
JP2814529B2 (ja) * 1989-03-16 1998-10-22 味の素株式会社 虚血性脳障害治療薬
US5332671A (en) * 1989-05-12 1994-07-26 Genetech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
US7300791B2 (en) * 1989-05-12 2007-11-27 Genentech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
US20030114374A1 (en) * 1989-05-12 2003-06-19 Genentech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
US5043431A (en) * 1989-09-11 1991-08-27 Codon Method and apparatus for the production of TGF-β
US5169837A (en) * 1991-03-28 1992-12-08 Allelix Biopharmaceuticals Inc. Isolated osteogenic factor
US5591709A (en) * 1991-08-30 1997-01-07 Life Medical Sciences, Inc. Compositions and methods for treating wounds
HUT67319A (en) * 1991-08-30 1995-03-28 Life Medical Sciences Inc Compositions for treating wounds
JPH08501203A (ja) * 1992-06-03 1996-02-13 ケイス・ウエスタン・リザーブ・ユニバーシティー 生理活性物質を連続的に適用するための包帯
US5331095A (en) * 1993-04-12 1994-07-19 Scios Nova Inc. Process for purification of basic fibroblast growth factor
IL113812A (en) 1994-05-24 2000-06-29 Yeda Res & Dev Copolymer-1 pharmaceutical compositions containing it and its use
US5733884A (en) * 1995-11-07 1998-03-31 Nestec Ltd. Enteral formulation designed for optimized wound healing
US6979307B2 (en) * 1997-06-24 2005-12-27 Cascade Medical Enterprises Llc Systems and methods for preparing autologous fibrin glue
US7745106B2 (en) * 1997-06-24 2010-06-29 Cascade Medical Enterprises, Llc Methods and devices for separating liquid components
US20080199513A1 (en) * 1997-06-24 2008-08-21 Cascade Medical Enterprises, Llc Systems and methods for preparing autologous fibrin glue
WO1999066797A1 (en) 1998-06-22 1999-12-29 Worden Charles E Enriched platelet wound healant
US7252818B2 (en) * 1998-07-24 2007-08-07 Cardiovascular Biotherapeutics, Inc. Method of producing biologically active human acidic fibroblast growth factor and its use in promoting angiogenesis
CN100341895C (zh) * 1998-10-08 2007-10-10 张建军 哺乳动物心肌中提取酸性成纤维细胞生长因子样物质的方法
US6897061B1 (en) * 2000-06-16 2005-05-24 Spinal Cord Society Transdifferentiation of glial cells
US7306919B1 (en) 2001-10-31 2007-12-11 Thornthwaite Jerry T Antigen-antibody cancer recognition system
KR20040081749A (ko) * 2002-01-14 2004-09-22 헨리 포드 헬쓰 시스템 혈관을 형성하고 혈관신생 및 영양 인자를 생성시키는데사용하기 위한 골수 기질 세포로부터의 물질
EP1890820A4 (en) * 2005-03-22 2012-04-11 Cascade Medical Entpr Llc SYSTEMS AND METHOD FOR PRODUCING MEMBRANES
WO2008031020A2 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Wyeth Arginine wash in protein purification using affinity chromatography
KR101021197B1 (ko) 2008-04-11 2011-03-11 (주)케어젠 성장인자―미미킹 펩타이드 및 그의 용도

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4195017A (en) * 1975-02-25 1980-03-25 Samuel Bogoch Malignin, derived from brain tumor cells, complexes and polypeptides thereof

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6028999A (ja) * 1983-06-30 1985-02-14 Maruho Kk 細胞増殖促進作用を有するたんぱく質、その組成物と製造方法
JPH0789936B2 (ja) * 1985-09-12 1995-10-04 サイオス ノバ インコーポレイテッド 組換え繊維芽細胞成長因子
JPS6354328A (ja) * 1986-04-23 1988-03-08 セルトリックス　ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 創傷治癒組成物およびそれを用いた創傷包帯
JPH03175994A (ja) * 1989-07-13 1991-07-31 Merck & Co Inc 治療上活性のある組換え体酸性繊維芽細胞成長因子の精製方法

Also Published As

Publication number Publication date
HK42694A (en) 1994-05-13
EP0131150B1 (en) 1991-09-04
CY1780A (en) 1995-10-20
JPH0430960B2 (ja) 1992-05-25
DE3485001D1 (de) 1991-10-10
EP0131150A2 (en) 1985-01-16
US4444760A (en) 1984-04-24
CA1241639A (en) 1988-09-06
EP0131150A3 (en) 1987-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS6011424A (ja) 繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示
Chow et al. Bovine pepsinogen and pepsin: I. Isolation, purification, and some properties of the pepsinogen
CA1188244A (en) Angiotropins of leukocytes and inflamed tissue and process for their preparation
JPS6030291B2 (ja) 人顆粒球の分化増殖を促進するｈｇｉ糖蛋白質、ｈｇｉ糖蛋白質の製造法及びｈｇｉ糖蛋白質を含有する白血球減少症治療剤
US3948875A (en) Process for the preparation of epidermal growth factor and new derivative using cross-linked polyacrylamide gel at a pH of 1-3
JPH09512536A (ja) 修飾乳成長因子
US4526717A (en) Polypeptide having an action on the immunological system, processes for its isolation and purification, its use, agents containing this compound, and its cleavage products, their use and agents containing these products
JP2003524015A (ja) ｈＣＧの精製方法及び本法により精製した組換えｈＣＧ
JPH02138226A (ja) ヒトの線維芽細胞インタフェロン含有医薬組成物
JP3030312B2 (ja) 成熟肝実質細胞増殖因子（ｉ）
JPH06135996A (ja) アンジオジェニンの単離方法
RU2123009C1 (ru) Способ получения препарата альфа-фетопротеина
EP0358463A1 (en) Purification of erythropoietin
EP0200090A2 (en) Tissue-derived tumor growth inhibitors, methods of preparation and uses thereof
US4371462A (en) Method for purification of anterior pituitary hormones
CN114478699B (zh) 一种改善认知功能障碍的牡蛎活性肽及其制备方法与应用
Trygstad et al. Preparation of purified human growth hormone and a crude human pituitary gonadotrophin
CN108410936A (zh) 一种水牛乳抗氧化肽及其分离制备方法
RU2799637C1 (ru) Способ получения биологически активного пептидно-аминокислотного препарата на основе плазмы крови человека
JPWO1992014832A1 (ja) ヒトｂｃｄｆの精製法
EP0675135A2 (en) Protein PHBP-70, having heparin binding and fibroblast proliferating properties
US5484767A (en) Substantially pure steroidogenesis inducing protein and uses thereof
Gelman et al. Cyanogen bromide fragments of bovine cervical mucus glycoprotein
EP1002803A1 (en) Method for the isolation of legume lectins and their use as a medicament
Kosciarz et al. Fractionation at pilot‐plant scale of an haemoglobin hydrolysate by strong anionic exchange chromatography Application to the preparation of an amphiphilic peptide

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Cancellation because of no payment of annual fees