JPS60218323A - 抗腫瘍性物質ｓｐｆ―１０００及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００及びそ
の製法に関するものである。

従来、溶連菌の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すでに制癌剤として使用されている。

また、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕抜
水または塩類浴液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性物質を沈澱として、回収する方法（特公昭
３８−１６４７）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、セ
ルラーゼまたは蛋白質分解酵素によ虱溶菌し、活性画分
を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１ｆ６５
８６５号）などが知られている。

このように、ストレプトコッカス属細繭そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られた、ものは、菌体もしくは
水可溶性もしくは不溶ｉ高分子細胞構成物質であるに過
ぎなかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離し
ようとすれば、菌体を溶菌したシ、機械的に破砕したシ
して全体を分画しなければならなかった。このような処
理によれば、精製は複雑となシ、有効成分の単離はきわ
めて困難であった。実際に分離し、有効成分として測定
された例では分子量１５０，０００の蛋白質が知られて
いる。（特公昭４８−４３８４１　）本発明者らは、よ
シすぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究し
た結果、全く新規な抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００を培
養液中に見出すに至ったのである。

本発明の抗腫瘍性組成物８ＰＦ−Ｉ　ＤＯは培養中菌体
外に排出され、培養液中に存在するようになるので、菌
体を濾過して除去し、培養ｐ液を精製すればよいので、
単離はかなり容易なものとなる。

本発明の抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００は培養液中に排
出されるとともに、分子量が約５００〜２５．０００で
あることによって特長づけられる。

従来、溶連菌関連の抗腫瘍性組成物で、培養液中に蓄積
されたものはなく、また分子量も数万以下のものは知ら
れておらず、本発明の抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００は
全く新規な物質と認められる。

また、本発明の抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００は、元素
分析、呈色反応等からペプチド性物質と認められるが、
紫外線吸収スにクトルで特異な吸収が１）、従来広く知
られた抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質で
あって、物質として新規なものと認められるものである
。

本発明は、ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性組成
物８ＰＦ−Ｉ　ＤＯ生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍
性物質５ＰＦ−１００を採取することを特徴とする抗腫
瘍性組成物８ＰＦ−１００の製法を包含するものである
。

本発明においては、ストレプトコツカス属に属する抗腫
瘍性組成物５ＰＦ−１００生産菌が広く使用されるが、
その−例としてストレプトコッカス０ピオゲネス（５ｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　）ＡＴＣ
Ｃ２１０６０があげられる。

培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、ブレイン・
ハート・インクニージョン培地（ＢＨＩ培地）等の天然
培地がよく用いられるが、ストレゾトコツカス属細菌が
有効に生育する培地であれば炭素源、窒素源等含んだ一
般培地も使用することができる。

培養はｐｔｉ　ｓ、　０〜８．０、好ましくは６．１〜
７．２で６０〜４０℃好ましくは６５〜３７℃であシ嫌
気的に静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他
撹拌培養等の変法も採用することができる。

本発明においては、培養中の適当な時期にペニシリン又
はその関連物質を添加することが、抗腫瘍性組成物５Ｐ
Ｆ−１００の取得に重要な役割をはたすことになる。

ペニシリン又はその関連物質の添加時期は３７℃の培養
で対数増殖期にかかつて後３〜２０時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間好まし
くは６〜１５時間そのまま培養を続けることによって、
培養液中に抗腫瘍性組成物８ＰＰ−１００を多量蓄積さ
せることができる。

ペニシリン又はその関連物質としてはすでに知られたペ
ニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかなる
ものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。添加
量はペニシリンＧで１００〜６０００単位／Ｉｌｌ、好
ましくは６００〜１．５００単位／ゴ培養液程度で十分
である。

得られた培養液は、遠心分離によって菌体を除去し、ｐ
液に硫安を添加し５０〜９０チ飽和度の画分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。

抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００含有液は凍結状態で又は
凍結乾燥して保存することができる。この物質は必要に
応じてイオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめて
さらに精製することができる。イオン交換体としてはイ
オン交換樹脂、イオン交換セルローズ、イオン交換セフ
ァデックス（ファルマシア社製）等が用いられ、ケ゛ル
ｐ過剤としては、トヨパールＨＷ５０ＦまたはＨＷ−５
０ＳＦ（東洋曹達（株）製）、セファデックス（ファル
マンア社Ｉｔり等が用いられる。またカルシウムホスフ
ェートゲルはそのままでも使用できるが、）１イドロキ
シルアパタイトの形で使用するのが便利である。前記の
ようにして得られた物質の水溶液をこれらのイオン交換
体又はゲル濾過剤を充填したカラムに、適当な速度で通
過せしめるか、あるいはイオン交換体又はゲル濾過剤を
入れた一定容器中に一度にその水溶液を加えて、これら
の処理剤と有効物質を接触させる。溶出は適当な塩濃度
と−の緩衝液を用いて行なう。イオン交換体、ゲルＦＡ
　剤又はカルシウムホスフェートゲルは２ｓ以上縄合わ
せて用いることもできる。たとえばＤＥＡＥセファデッ
クスと接触させ、溶出した液を更にトヨパールＨＷ５０
Ｆまたは５０８Ｆと接触させそして溶出を行なうと、更
に精製の効果を上げることができる。

実施例８で得られた本発明の抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１
００はペプチド性物質で、凍結乾燥すると淡黄色の粉末
となる。

次に、抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００の理化学的性質を
示す。

１、元素分析 Ｃ：４Ｓ、４２ｑ６〜４５．６９チ Ｈ：　５．９４チ〜　４．８５％ Ｎ　二　１１．４２％　〜　９．５０％２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約５００〜２５．０
００である。

３、分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
夛分解する。

４、比旋光度 〔α）１．０＝＋４５．０°（ｃ＝１．００）５、紫外
線吸収スＲクトル 本物質のａ１％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第１
図に示される。２５７　ｎｍ、２６５ｎｍ、２８０ｎｍ
、２８７　ｎｍおよび３２５　ｎｍに吸収がみられ、特
徴的である。

＆　赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。

ｌ　溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノールＫｕ一部溶
解し、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プロパツ
ール、ｎ−ヘキサン、りｐロホルム、アセトン、メチル
イソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には難溶又
は不溶である。

８、塩基性、酸性、中性の区別 本物型の１．０　％水溶液の虜は６．５である。

９　物質の色 淡黄色粉末状である。

１０、呈色反応 ニンヒドリン反応　十 ビュウレット反応　十 モーリッシュ反応　− デイシエ反応　− アンスロン反応　− システィン硫酸反応　− １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ
）、グリセ目−ル、アルブミン、グロブリン、α−およ
びβ−サイクロデキストリン、（ＮＨ，）、８０４、食
塩等の添加によって安定化される。

次に本発明の実施例を示す。

なお実施例における抗腫瘍性組成物５ｐｐ−ｉｏ。

の活性単位の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＡｎ
ｔ’１ｂｉｏｔｉｃｓ　ｖｏｌ　３５　４１０　１３１
９〜１３２５０ＣＴ　１９８２）によった。測定には高
分子透過性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥＲＭ−Ｐ　５４
３２）（Ａｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　４５
　３７１　（１９７９）を使用してＭＰ−２に対する抗
菌活性を指標としてバイオ・アッセイする。

すなわち、バクト・アンチパイオチックメディアム３（
ディ７コ社製品）１．７５％、寒天１．３１よシ成る培
地（Ｍ！培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し、２０１
１ｕずつシャーレに分注し、放冷してプレート培地を調
製する。

一方、ペプトン０．５チ、肉エキス０．５Ｔｏ、ＮａＣ
１αＳＳ、寒天α８’１６よシ成る培地を１２０’Ｃ１
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、培
地の温度が４２℃になったらあらかじめ３７℃で１７時
間培養したＭＰ−２菌を１ｄ中に１０番個の細胞が存在
する様に培地中に加える。ピにットによって２ｄを採取
し、あらかじめ作製して置いたＭ３培地表面上に加え、
すばやく均一にひろげ固化させる。抗腫瘍性組成物８Ｐ
Ｆ−１００を含む被験液を適当に希釈して、その溶液０
．０５１１Ｌｌをペーパー・ディスク（直径８ｎ）（東
洋Ｆ紙）にしみ込ませる。このベーノぞ−・ディスクを
前記作製プレート上に置き、３７℃で１７時間培養し、
抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００によってできる阻止円の
大きさを測定する。阻止円の直径１０冨厘を与える８Ｐ
Ｆ−Ｉ　ＤＯの濃度を１単位（１ｕ）と定義する。

実施例１゜ 次の組成の培地Ａ　９／を用いた。

肉エキス　１チ ポ“す４プトン　１％ 酵母エキス　０．２５％ カザミノ酸　０．２５チ ＮａＣ１Ｏ，１ｆｂ ｐ）１−４９ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
　ＣＣ２１０６０をＢＨＩ培地１００ｄに接種して３７
℃、８時間静置培養おこなった種培養液１００ＷＬｌを
培地Ａ１ノに接種し、種培養と同一条件で前培養する。

この培養液を培地Ａ８Ｊに接種し、１０ノのジャー７ア
ーメンターを用いて５７℃、１１．５　ｈｒ　３００ｔ
ｐｍで撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０
００単位／ゴを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。

培養Ｆ液には抗腫瘍性組成物８ＰＦ−Ｉ　ＤＯが２５６
単位／ゴ含有されていた。

実施例Ｚ 次の組成の培地Ｂ　９７を用いた。

肉エキス　１．０　チ ポリペプトン　１．０　％ 酵母エキス　０．２５チ ＮａＣ１０，１％ ｐＨ＝ＺＯ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅａ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
ノを培地Ｂ８ノに接種し、１０１ジヤー７アーメンター
を用いて５７℃、１１　ｈｒ　６００７ノｍで撹拌し表
から嫌気的に培養後、ペニシリン０８００単位／ゴを添
加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠
心分離し、菌体を除去した。

培養Ｆ液には抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００が６５１単
位／ｄ含有されていた。

実施例３゜ 次の組成の培地ｃ　９１を用いた。

肉エキス　１　チ ポリペプトン　１　チ 酵母エキス　０．２５チ カザミノ酸　０．２５チ ー＝６．２ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
ノを培地０８ノに接種し、１０！ジャーファーメンタ−
を用いて６７℃、１４ｈｒ　！＋００！ｐｍで撹拌しな
がら嫌気的に培養後、はニジリンＧ１０００単位／ｌ１
１１を添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培
養液を遠心分離し菌体を除去した。

培養ｐ液には抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００が２９８単
位／ｄ含有されていた。

実施例４゜ 次の組成の培地Ｄ　９１を用いた。

肉エキス　０．５　チ ポリペプトン　１．０　チ 酵母エキス　０．２５チ カザミノ酸　０．２５％ ＮａＣＡ！　ｏ、　５　％ −二６．５ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
　ＣＣ２１０６０を実施１例１と同様に前培養した培養
液１１を培地Ｄ８１に接種し、１０ノジヤーフアーメン
ターを用いて６７℃、１５．５ｈｒ３００７ノｍで撹拌
しながら嫌気的に培養後、ｏ　ニジリン０１２００単位
／ｄを　１′１１ 添加し、更に培養を５　ｈｒ継続する。得られた培養液
を遠心分離し、菌体を除去した。

培養ｐ液には抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００が２８５単
位／ｄ含有されていた。

実施例５゜ 次の組成の培地Ｅ　９１を用いた。

酵母エキス　３．０チ ｐ）Ｉ＝６．５ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
　ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養
液１１を培地Ｅ８１に接種し、１０ノジヤーフアーメン
ターを用いて６７℃、１５　ｈｒ　３００　ｒｐｍで撹
拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位
／ゴを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培
養液を遠心分離し、菌体を除去した。

培養Ｆ液には抗１ｊ１瘍性組成物５ＰＦ−１ＤＯが１８
２単位／Ｉｄ含有されていた。

実施例＆ 下記の培地Ｆ　９７を用いた。

マルトース　０．６　チ 肉エキス　ＺＯチ ポリペプトン　１．０％ 酵母エキス　０．２５％ 田＝　７．０ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　Ａ　
Ｔ　ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した
培養液１１を培地ＦＢＩに接種し、１０１ジヤー７アー
メンターを用いて、３７℃、１０．５　ｈｒ　３００　
’ｊ’ｐｍ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０
１０００単位／ｄを添加し、更に培養を５　ｈｒ継続す
る。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。

培養ｐ液には抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００が２５０単
位／ｄ含有されていた。

実施例１ ゛　下記の培地０９ノを用いた。

肉エキス　１．０％ ポリペプトン　１．０チ ＮａＣＡ！　０．５％ ｐｌ（＝ｚＱ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
−ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培
養液１１を培地Ｇ８Ｊに接種し、１０！ジャーファーメ
ンタ−を用いて３７℃、１５　ｈｒ　３００　？ｐｍ撹
拌しながら嫌気的に培養後、−！ニジリン０１０００単
位／ＩＩＬｌを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。

培養Ｆ液には抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１００が２００単
位／ｄ含有されていた。

実施例８゜ 実施例４の培養で得た培養涙液５１は抗腫瘍性物質５Ｐ
Ｆ−１００を１４３Ｘ１０’単位含有していた。

培養Ｐ液には硫安を添加し５０〜９０チ飽和度の画分を
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は抗腫瘍性物質８Ｐ
Ｆ−１００を１１８ｘ１０’単位含有していた。

この沈澱物全量を安定剤含有緩衝′ｗ！Ｌ３００ｍＩｌ
に溶解し、溶解液をＤＥＡＦ！−セルロースカラム（５
ｘ７Ｑｃｍ）に加え、抗腫瘍性組成物ＳＰＦ’−Ｉ　Ｄ
Ｏを吸着させた。これに０．３　Ｍ　ＮａＣ１溶液を用
いて段階的に溶出させ、活性部分を分取する。得られた
活性は１０２．２Ｘ１０’単位であった。

７活性部分をＤＥＡＲ−セファデックスＡ−２５のカラ
ム（２，６ｘ７ｏｃｒＩＬ）に加え、活性部分を吸着さ
せ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させ
つつ溶出を行い、活性部分を分取する。

得られた活性は７９．５　Ｘ　１０’単位であった。

更に、この溶出液を濃縮しゲル濾過材トヨパールＨＷ−
５０ＦのカラＡ（２，６Ｘ１００ｃｍ）に加えて吸着さ
せ、次いで１／１００Ｍ！ｊン酸緩衝液（ＫＩ（２ＰＯ
４−Ｎａ２ＨＰＯ４）で溶出し、活性画分を分取し、こ
れを８ＰＦ−Ｉ　ＤＯとした。得られた活性は７１．１
　ｘ　１０’単位であった。

ここに得られた溶出液を凍結乾燥し抗腫瘍性組成物８Ｐ
Ｆ−１００の淡黄色粉末１７８０ダを得た。

実施例日で得た抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００を被験系と
して、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｎ　
ｖｉｖｏ、　１ｎｖｉｖｏそれぞれの実験に供し、抗腫
瘍活性について効果を確認した。

試験例１ （ｉｎ　ｖＨｒｏ試験） ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける被験系の抗腫瘍活性測定試験
に細胞生長度測定法にもとづき実施した。

癌細胞としてはＰ−３８８およびＬ−１２１０Ｌｙｍｐ
ｈｏｍａ　（リンパ腫）（ＤＢＡ／２系マウス同系移植
腫瘍をｉｎ　ｖｉｔｒｏで継代培養）を用い、これをそ
れぞれ１０％ＦＣ８添加ＲＰＭＩ　１６４０培地（５Ｘ
１０−ａＭ２−メ）ｖカプトエル　／　−ル、５０ｒｒ
Ｑ／ｌカナマイシン含有）に懸濁する。この培養ｅ１ｔ
ｎｔをファルコン６０４７プレートに注入し、癌細胞が
５Ｘ１０番ｃｅｌ　Ｉｓ　／　ｗｅｌ　１になるように
する。次いでこの培養液に所定量の被験系（０，１ｄの
培養液に溶解又は懸濁）を注入して、６７℃で５　’％
　ＣＯｔ存在下に培養する。被験系注入後４８時間経過
してから生体染色にグロシンＢを使用）を行ない、次式
によ）細胞生長度を算出した。

この結果を第１表に示す。

第　１　表　細胞生長度（働 試験例２ （ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｎ　ｖｉｖｏ試験）ｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏ　ｉｎ　ｖｉｖｏにおける被験系の抗腫瘍活性試
験はｄｄｙ系雌性、４又は５週齢マウスを使用して実施
した。

癌細胞としてはエーリツヒ腹水癌細胞を用い、これをに
几Ｐ緩衝液に懸濁し、次いで被験系の所定量を混合して
６７℃で６０分又は８０分インキュベートする。この液
０．２７ｄ（癌細胞４ｘ１ｏ’ｃｅｌｌｇ又は８　Ｘ　
１０’　ｃｅｌｌｓ　）をマウス１個体当シ１日１回７
日間連続して腹腔内に接種して、これらマウスの生存数
を観察した。この結果を第２表及び第３表に示す。

試験例６ （ｉｎ　ｖｉｖｏ試験） ｉｎ　ｖｉｖｏにおける被験薬の抗腫瘍活性試験はＣＲ
Ｊ−ＣＤ−１（ＮＣＲ）系、雄性、７過動マウスを使用
して実施した。

癌細胞としては８ａｒｃｏｍｓ　−１８０腹水癌細胞を
用い、これをＨａｎｋ溶液に浮遊させ、マウスの腹腔内
にＱ、１ｍ／（癌細胞２’Ｘ　１０’　ｃｅｌｌｓ　）
接種した。

この癌細胞接種前１日１回５日間又は前後に１日１回、
前に５日間、後に５日間連続して被験薬の所定量を腹腔
内に投与して、その生存数を観察した。その結果を第４
表および第５表に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗腫瘍性組成物８ＰＦ−１０００，１チ水溶液
の紫外線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく赤外線
吸収スペクトルを示す。 代理人　弁理士　戸　１）親　男 手続補正書 昭和５９年９月よ１日 特許庁長官殿 １、事件の表示 特願昭５９−７２８６５ ２、発明の名称 抗腫瘍性組成物５ＰＦ−１００及びその製法６、補正を
する者 事件との関係　特許出願人 住　所　名古屋市名東区ｆｉ−町１丁目２４番６号氏名
　鵜高重三（ほか２名） ４、代理人 住　所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目１９番１、発
明の名称及び明細書 Ｚ補正の内容 （１、発明の名称を 「抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００及びその製法」と補正す
る。 （２）明細書全文を別紙のとおシ補正する。−明　細　
書 １、発明の名称 抗腫瘍性物質ｓｐｉ；’−１ｏｏ及びその製法２、特許
請求の範囲 （１）　下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性物質５Ｐ
Ｆ−１００゜ １、元素分析 Ｃ：４６．４２％〜４３．６９％、 Ｈ：５．９４％〜　４．８５％、 Ｎ：１１．４２％〜　９５０チ ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ５００〜２５，０００である。 ３、分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
９分解する。 ４、比旋光度 〔α）ｐ＝＋４５．０°（ｃ＝１．００）５、紫外線吸
収スペクトル 本物質の０．１％の水溶液の紫外線吸収スはクトルは第
１図に示される。いずれも、２５７ｎｍ、２６５ｎｍ、
２８０　ｎｍ、２８７訓および５２５　ｎｍに吸収がみ
られ、特徴的である。 ６、赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ｌ　溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノール、には一部
溶解し、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プロパ
ツール、ｎ　−ヘキサン、クロロホルム、アセトン、メ
チルイソプチルクトン、エチルエーテル等の溶剤には難
溶又は不溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の１．０チ水溶液のＰＲは６．５である。 ９　物質の色 淡黄色粉末状である。 ｉｏ、呈色反応 ニンヒドリン反応　十 ビュウレット反応　十 モーリッシュ反応　− デイシエ反応　− アンスロン反応　− システィン硫酸反応　− １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＤＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−１お
よびβ−サイクロデキストリン、（Ｎ）Ｌ＊）！８０４
、食塩等の添加によって安定化される。 （２）ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性物質５Ｐ
Ｆ−１００生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性物質８
ＰＦ−Ｉ　ＤＯを採取することを特徴とする抗腫瘍性物
質８ＰＦ−１００の製法。 （３）　ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性物質８
ＰＦ−１００生産菌を培養するに際し、培養中の適当な
時期にペニシリン又はその関連物質を添加して培養する
ことを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍
性物質８ＰＦ−Ｉ　ＤＯの製法。 ３、発明の詳細な説明 本発明は、新規な抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００及びその
製法に関するものである。 従来、溶連菌の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すてに制癌剤として使用されている。 また、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕抜
水または塩類溶液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法Ｃ特公昭
３８−１６４７　）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、
セルラーゼまたは蛋白質分解酵素によシ、溶菌し、活性
画分を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１１
６３８６５号）などが知られている。 このように、ストレプトコツカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があることは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくは不溶性烏分　１子細胞構成物質であるに
過ぎなかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離
しよ、うとすれば、菌体を溶菌したシ、機械的に破砕し
たシして全体を分画しなければならなかった。このよう
な処理によれば、精製は複雑とな）、有効成分の単離は
きわめて困難であった。実際に分離し、有効成分として
測定された例では分子量１５０．０００の蛋白質が知ら
れている。（特公昭４Ｂ−４３８４１）本発明者らは、
よシすぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究
した結果、全く新規な抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００を培
養液中に見出すに至ったのである。 本発明の抗腫瘍性物質５ｐＦ−ｉ　ｏｏは培養中菌体外
に排出され、培養液中に存在するようになるので、菌体
を濾過して除去し、培養ｐ液を精製すればよいので、単
離はかなル容易なものとなる。 本発明の抗腫瘍性成分８ＰＦ−１００は培養液中に排出
されるとともに、分子量が約５００〜２５．０００であ
ることによって特長づけられる。 従来、溶連菌関連の抗腫瘍性物質で、培養液中に蓄積さ
れたものはなく、また分子量も致方以下のものは知られ
ておらず、本発明の抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００は全く
新規な物質と認められる。 また、本発明の抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００は、９元素
分析、呈色反応等からにプチド性物質と認められるが、
紫外線吸収スはクトルで特異な吸収があシ、従来広く知
られた抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質で
あって、物質として新規なものと認められるものである
。 本発明は、ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性物質
８ＰＦ−１００生産直を培養し、培養物から抗腫瘍性物
質５ＰＦ−１ｏＯを採取することを特徴とする抗腫瘍性
物質５ＰＦ−１００の製法を包含するものである。 本発明においては、ストレプトコツカス属に属する抗腫
瘍性物質５ＰＦ−１００生産菌が広く使用されるが、そ
の二側としてストレプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　）　ＡＴ　
ＣＣ２１０６０があげられる。 培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、プレイン・
ハート・インクニージョン培地（ＢＨＩ培地）等の天然
培地がよく用いられるが、ストレブトコツカス属細菌が
有効に生育する培地であれば炭素源、窒素源等含んだ一
般培地も使用することができる。 培養はｐＨ５゜０〜８．０、好ましくは６．１〜Ｚ２で
６０〜４０℃好ましくは３５〜６７℃であル嫌気的に静
置培養をおこなうのが一般的であるが、その′他撹拌培
養等の変法も採用することができる。 本発明においては、培養中の適当な時期にはニジリン又
はその関連物質を添加することが、抗腫瘍性物質８ＰＦ
−１００の取得に重要な役割をはたすことになる。 ペニシリン又はその関連物質の添加時期は３７℃の培養
で対数増殖期にかかつて後６〜２０時間の間、特に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間好まし
くは６〜１５時間そのまま培養を続けることによって、
培養液中に抗腫瘍性物質５ｐｉｔ’−ｉ　ｏｏを多量蓄
積させることができる。 ペニシリン又はその関連物質としてはすでに知られたペ
ニシリンと類似の作用をもつ関連物質であれぽいかなる
ものでもよいが、はニジリンＧが普通用いられる。添加
量はハニシリンＧで１００〜３０００単位／ｄ、好まし
くは６００〜１，５００単位／ｄ培養液程度で十分であ
る。 得られた培養液は、遠心分離によって菌体を除去し、Ｐ
液に硫安を添加し５０〜９０％飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。 抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００含有液は凍結状態で又は凍
結乾燥して保存することができるにの物質は必要に応じ
てイオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめてさら
に精製することができる。 イオン交換体としてはイオン交換樹脂、イオン交換セル
ローズ、イオン交換セファデックス（ファルマシア社製
）等が用いられ、ゲル濾過剤としては、トヨパールＨＷ
５０ＦまたはＨＷ−５０ＳＦ（東洋曹達（株）製）、セ
ファデックス（ファルマシア社製）等が用いられる。ま
たカルシウムホスフェートダルはそのままでも使用でき
るが、ハイトロキシルアパタイトの形で使用するのが便
利である。前記のようにして得られた物質の水溶液をこ
れらのイオン交換体又はゲル濾過剤を充填したカラムに
、適当な速度で通過せしめるか、あるいはイオン交換体
又はゲル濾過剤を入れた一定容器中に一度にその水溶液
を加えて、これらの処理剤と有効物質を接触させる。溶
出は適当な塩濃度と−の緩衝液を用いて行なう。イオン
交換体、ゲル濾過剤又はカルシウムホス７エートゲルは
２種以上組合わせて用いることもできる。たとえばＤＥ
ＡＦｔセファデックスと接触させ、溶出した液を更にト
ヨパールＨＷ５０Ｆまたは５０８Ｆと接触させそして溶
出を行なうと、更に精製の効果を上げることができる。 実施例８で得られた本発明の抗腫瘍性物質８ＰＦ−１０
０はベゾチド性物質で、凍結乾燥すると淡黄色の粉末と
なる。 次に、抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００の理化学的性質を示
す。 １、元素分析 ｃ：４ｓ、４２％　〜４３．６９％ Ｈ：　５．９４％　〜　４．８５ｔｓ Ｎ：１１．４２％−９，５０％ ２　分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約５００〜２５，０
００である。 五　分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００’Ｃになると黒色と
な）分解する。 ４、比旋光度 〔α〕甘甘子＋４５．０°（ｃ＝１．００）５、紫外線
吸収スペクトル 本物質のａ、１Ｓの水溶液の紫外線吸収スぼクトルは第
１図に示される。２５７　ｎｍ、２６５ｎｍ、２８０　
ｎｍ　、　２８７　ｎｍおよび３２５　ｎｍに吸収がみ
られ、特徴的である。 ＆　赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ｌ　溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノールには一部溶
解し、ｎ−ブタノール、イソプタノール、ｎ−プロパツ
ール、ｎ−ヘキサン、。 クロロホルム、アセトン、メチルイソブチルケトン、エ
チルエーテル等の溶剤には離溶又は不溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の１．０　％水溶液のｐＨは６．５である。 ２　物質の色 淡黄色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応　十 ビュウレット反応　十 モーリッシュ反応　− デイシエ反応　− アンスロン反応　− システィン硫酸反応　− １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−およ
びβ−サイクロデキストリン、（ＮＨ４）ｔ　８０４、
食塩等の添加によって次に本発明の実施例を示す。 なお実施例における抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００の活性
単位の測定は鵜高法（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＡｎｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓ　ｖｏｌ　３５．＃６１０　１３１９〜１
３２５ＯＣＴ１９８２）によった。測定には高分子透過
性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥ几Ｍ−Ｐ５４３２）（Ａ
ｇｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　４３５７１（１
９７９））を使用してＭ　Ｐ　−２に対する抗菌活性を
指標としてバイオ・アッセイスル。 すなわち、バクト・アンチバイオチックメディアムロ（
ディフコ社製品）　１．７５　％、摩天１．３チよ）成
る培地（Ｍ３培地）を１２０’Ｃ１１５分加熱殺菌し、
２０ｗＬｌ！ずつシャーレに分注し、放冷してプレート
培地を調製する。 一方、ペプトン０．５優、肉エキス０．５チ、ＮａＣ１
１０，６％、寒天０，８チよシ成る培地を１２０℃、１
５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽に保ち、　１
培地の温度が４２℃になったらあらかじめ３７℃で１７
時間培養したＭＰ−２＠を１ｄ中に１０’個の細胞が存
在する様に培地中に加える。ピペットによって２ゴを採
堰し、あらかじめ作製して置いたＭ３３培地面上に加え
、すばやく均一にひろげ固化させる。抗腫瘍性物質８Ｐ
Ｆ−１００を含む被験液を適当に希釈して、その溶液Ｑ
、Ｑ５ｍをに−パー・ディスク（直径８１１１１）（東
洋Ｆ紙）にしみ込ませる。このペーパー・ディスクを前
記作製プレート上に置き、３７℃で１７時間培養し、抗
腫瘍性物質８ＰＦ−１００によってできる阻止円の大き
さを測定する。阻止円の直径１０顛を与える８ＰＦ−１
００の濃度を１単位（１ｕ）と定義する。 実施例１゜ 次の組成の培地人　９ノを用いた。 肉エキス　１チ ポリペプトン　１％ 酵母エキス　０．２５　％ カザミノ酸　０．２５　％ ＮａＣ１０，１％ 声＝６．９ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０をＢＨ工培地１００ゴに接種して６７℃
、８時間静置培養おこなった種培養液１００ゴを培地Ａ
ｌｎに接種し、種培養と同一条件で前培養する。この培
養液を培地Ａ８１に接種し、１０１のジャーファーメン
タ−を用いて６７℃、１１．５ｈｒ５００ｒｐｍで撹拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０１０００単位／
ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。 培養Ｆ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−Ｉ　ＤＯが２５６単
位／Ｉｄ含有されていた。 実施例Ｚ 次の組成の培地Ｂ　９Ａ’を用いた。 肉エキス　ｉ、　ｏ　ｓ ポリはプトン　１，０チ 酵母エキス　０．２５チ ＮａＣ１Ｏ，１％ 田＝７．０ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
１を培地ＢＢＩＫｉｆｆＩＬ、１０１ジヤー７アーメン
ターを用いて６７℃、１１　ｈｒ　６００ｒｐｍで撹拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリン０８００単位／ゴ
を添加し、更に培養を５　ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。 培養ｐ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００が５５１単位
／ｄ含有されていた。 実施例３゜ 次の組成の培地Ｃ９１を用いた。 肉エキス　１％ ポリペプトン　１％ 酵母エキス　０．２５チ カザミノ酸　０．２５チ 声＝６．２ ８ｔｒｅｐｔＯｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
１を培地Ｃａｌに接種し、１０ノジヤーフアーメンター
を用いて６７℃、１４　ｈｒ　３００　ｒｐｍで撹拌し
ながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／ｄ
を添加し、更に培養を５　ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し菌体を除去した。 培養ｐ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−Ｉ　ＤＯが２９８単
位／ゴ含有されていた。 実施例４゜ 次の組成の培地Ｄ　９１を用いた。 肉エキス　０．５　チ ポリペプトン　１．０　チ 酵母エキス　０．２５％ カザミノ酸　０．２５チ ＮａＣＡ１　０．５　％ 向＝６．５ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
１を培地Ｄ８７に接種し、１０１ジヤー７アーメンター
を用いて６７℃、１５．５ｈｒ　５００　ｒｐｍで撹拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１２００単位／
―を添加し、更に培養を５　ｈｒ継続する。得られた培
゛養液を遠心分離し、菌体を除去した。 培養Ｆ液には抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００が２８５単位
／ｄ含有されていた。 実施例５゜ 次の組成の培地Ｅ　９１を用いた。 酵母エキス　５．０チ Ｈ−４５ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ’　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　Ａ
ＴＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養
液１ノを培地Ｂ８ノに接種し、１０１：）ヤー７アーメ
ンターを用いて３７℃、１５　ｈｒ　３００　ｒｐｍで
撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単
位／畔を添加し、更に培養を５　ｈｒ継続する。得られ
た培養液を遠心分離し、菌体を除去した。 培養Ｆ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−Ｉ　Ｄｏが１８２単
位７ｍｌ含有されていた。 実施例＆ 下記の培地Ｆ　９１を用いた。 マルトース　０．６　％ 肉エキス　２．０　チ ポリペプトン　１．０　チ 酵母エキス　０．２５チ ｐｉ（＝７．０ ８ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１１を培地Ｆ８４に接種し、１０１ジャーファーメン
タ−を用いて、６７℃、１０．５ｈｒ３００ｒｐｍ撹拌
しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／
ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養
液を遠心分離し、菌体を除去した。 培養Ｆ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００が２５０単位
／ゴ含有されていた。 実施例Ｚ 下記の培地０９）を用いた。 肉エキス　ｉ、ｏチ ポリペプトン　１．０％ ＮａＣ１Ｏ，５’１６ −二７．０ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１ノを培地０８１　Ｋ接種し、１０１ジャーファーメ
ンタ−を用いて３７℃、１５　ｈｒ　３００　ｒｐｍ撹
拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単位
／ｗＬｌを添加し、更に培養ｔ−５ｈｒ継続する。得ら
れた培養液を遠心分離し％菌体を除去した。 培養Ｆ液には抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００が２００単位
／ｄ含有されていた。 実施例８゜ 実施例４の培養で得た培養涙液５７は抗腫瘍性物質５Ｐ
Ｆ−１００を１４３ｘ１０’単位含有していた。 培養Ｆ液には硫安を添加し５０〜９０チ飽和度の両分を
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は抗腫瘍性物質８Ｐ
Ｆ−Ｉ　Ｄｏを１１８Ｘ１０’単位含有していた。 この沈澱物全量を安定剤含有緩衝液３００ｄに溶解し、
溶解液をＤＲＡＢ−セルロースカラム（５ｘ７０ｃＩＬ
）に加え、抗腫瘍性物質８ＰＦ−１００を吸着させた。 これに０．３　Ｍ　ＮａＣ１溶液を用いて段階的に溶出
させ、活性部分を分取する。得られた活性は１０２．２
ｘ１０’単位であった。 活性部分をＤＢＡＥ−セファデックス人−２５のカラム
（２，６ｘ　７０ｃＩｒＬ）に加え、活性部分を吸着さ
せ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度を直線的に上昇させ
つつ溶出を行い、活性部分を分取する。 得られた活性は７９．３Ｘ１０’単位であった°。 更に、この溶出液を濃縮しケ゛ル濾過材トヨノξ−ルＨ
Ｗ−５０Ｆのカラム（２，６ｘ　１００ｃＩＩＬ）に加
えて吸着させ、次いで１７１００Ｍリン酸緩衝液（ＫＨ
２ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４）で溶出し、活性画分を分取
し、これを８ＰＦ−１００とした。得られた活性は７１
．１　ｘ　１０’単位であった。 ここに得られた溶出液を凍結乾燥し抗腫瘍性物質８ＰＦ
−１００の淡黄色粉末１７８Ｃ１９を得た。 実施例８で得た抗腫瘍性物質５ＰＦ−１００を被験薬と
して、Ｉｎ　ＶＩｉｒＯ＋　Ｉｎ　ＶｌｉｒＯｉｎ　Ｖ
ＩＶＯ＋　Ｉｎｖｉｖｏそれぞれの実験に供し、抗腫瘍
活性について効果を確認した。 試験例１ （ｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験）　） ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける被験薬の抗腫瘍活性測定試験
に細胞生長度測定法にもとづき実施した。 癌細胞としてはＰ−３８８およびＬ−１２１０Ｌｙｍｐ
ｈｏｍａ　（リンパ腫）（ＤＢＡ／２系マウス同系移植
腫瘍をｉｎ　ｖｉｔｒｏで継代培養）を用い、これをそ
れぞれ１０チＦＣ８添加ＲＰＭＩ　１６４０培地（５Ｘ
１０−’Ｍ２−メルカゾトエタノール、５０ｍ９／ｌカ
ナマイシン含有）に懸濁する。この培養液１ｄをファル
コン６０４７プレートに注入し、癌細胞が５　Ｘ　１０
’　ｃｅｌｌｓ　／　ｗｅｌｌになるようＫする。次い
でこの培養液に所定量の被験薬（Ｑ、１ゴの培養液に溶
解又は懸濁）を注入して、６７℃で５　％　ｃｏ、存在
下に培養する。被験薬注人後４８時間経過してから生体
染色にグロシンＢを使用）を行ない、次式によシ細胞生
長度を算出した。 この結果を第１表に示す。 第　１　表　細胞生長度（イ） 試験例２ （ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｉｎ　ｖｉｖｏ試験）ｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏ　ｉｎ　ｖｉｖｏにおける被験薬の抗腫瘍性物質
はａａｙ系雌性、４又は５週給マウスを使用して実施し
た。 癌細胞としてはエーリツヒ腹水癌細胞を用い、これをに
几Ｐ緩衝液に懸濁し１次いで被験薬の所定量を混合して
３７℃で６０分又は８０分インキユベートする。この液
０．２　ＷＬｌ！（癌細胞４Ｘ１０’ｃｅｌ１ｇ又は８
　Ｘ　１０Ｉｌｃｅｌｌｓ　）をマウス１個体当９１日
１回７日間連続して腹腔内に接種して、これらのマウス
の生存数を観察した。この結果を第２表及び第６表に示
す。 試験例６ （ｉｎ　ｖｉｖｏ試験） ｉｎ　ｖｉｖｏにおける被験薬の抗腫瘍活性試験はＣ凡
Ｊ−ＣＤ−１（ＩＣＲ）系、雄性、７過動マウスを使用
して実施した。 癌細胞としてはＳａｒｃｏｍａ　−１８０腹水癌細廁を
用い、これをＨａｎｋ溶液に浮遊させ、マウスの腹腔内
に０．１１Ｌｌ！（癌細胞２　Ｘ　１０’　ｃｅｌｌｓ
　）接種した。 この癌細胞接種前１日１回５日間又は前後に１日１回、
前に５日間、後に５日間連続して被験薬９の所定量を腹
腔内に投与して、その生存数を観察した。その結果を第
４表および第５表に示す。 ４、図面の簡単な説明 第１図は抗腫瘍性物質８ＰＦ−１０００，１％水溶液の
紫外線吸収スにクトルを示し、第２図は同じく赤外線吸
収スにクトルを示す。 代理人　弁理士　戸　１）親　男

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）　下記の理化学的性質を有する抗腫瘍性組成物８
   ＰＰ−１００゜ １、元累分析 Ｃ：４６．４２％　〜４３．６９％、 Ｈ：５．９４チ〜　４．８５チ、 Ｎ：１１．４２チ〜　９．５０チ ２　分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ５００〜２５，０００である。 五　分解点 本物質は１６０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
   り分解する。 ４、比旋光度 〔α鱈＝＋４５．０°（ｃ＝１．００）５、紫外線吸収
   スペクトル 本物質の１１チの水溶−液の紫外線吸収スペクトルは第
   １図に示される。いずれも、２５７ｎｍ、２６５ｎｍ、
   ２８０ｎｍ、２８７ｎｍおよび３２５ｎｍに吸収がみら
   れ、特徴的である。 ６　赤外線吸収スペクトル 第２図に示される。 ｌ　溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタノール、には一部
   溶解し、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プロパ
   ツール、ｎ−ヘキサン、クロルホルム、アセトン、メチ
   ルイソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には難溶
   又は不溶である。 ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質のｉ、　ｏ　ｅｓ水溶液の−は６，５である。 ９　物質の色 淡黄色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応　十 ビュウレット反応　十 モーリッシュ反応　− デイシエ反応　− アンスロン反応 システィン硫酸反応　− １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジテオスレイトール（ＤＤＴ
   ）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、α−１お
   よびβ−サイクロデキストリン、（ＮＨ４）２８０４、
   食塩等の添加によって安定化される。
2. （２）ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性組成物５
   ＰＦ−１００生産菌を培養し、培養物から抗腫瘍性組成
   物８ＰＦ−Ｉ　ＤＯを採取することを特徴とする抗腫瘍
   性組成物８ＰＦ−１００の製法。
3. （３）ストレプトコツカス属に属する抗腫瘍性組成物８
   ＰＦ−１００生産菌を培養するに際し、培養中の適当な
   時期はペニシリン又はその関連物質を添加して培養する
   ことを特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の抗腫瘍
   性組成物８ＰＦ１００の製法。