JPS6030689A - 生理活性物質ｓｐｆ−１及びその製法 - Google Patents
生理活性物質ｓｐｆ−１及びその製法Info
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- JPS6030689A JPS6030689A JP58139385A JP13938583A JPS6030689A JP S6030689 A JPS6030689 A JP S6030689A JP 58139385 A JP58139385 A JP 58139385A JP 13938583 A JP13938583 A JP 13938583A JP S6030689 A JPS6030689 A JP S6030689A
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規な生理活性物質５ＰＦ−１及びその製法
に関するものである。
に関するものである。
更に詳細にけ、本発明は、抗腫瘍性成分としてきわめて
有望な生理活性物質５ＰＦ−１及びその製法に関するも
のである。
有望な生理活性物質５ＰＦ−１及びその製法に関するも
のである。
従来、溶連菌の生菌体を弱毒化して製剤化したものは、
すでに制癌剤として使用されている。
すでに制癌剤として使用されている。
才た、ストレプトコッカス・ピオゲネスの菌体を破砕抜
水または塩類溶液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（特公昭
３Ｂ−１１７）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、セル
ラーゼオたは蛋白質分解酵素により、溶菌し、活性画分
を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１１６３
８６５号）などが知られている。
水または塩類溶液で有効成分を抽出し、有機溶媒を加え
て、抗腫瘍性成分を沈澱として、回収する方法（特公昭
３Ｂ−１１７）、溶連菌を溶菌酵素、リゾチーム、セル
ラーゼオたは蛋白質分解酵素により、溶菌し、活性画分
を水溶性区分として分画する方法（英国特許第１１６３
８６５号）などが知られている。
このように、ストレプトコツカス属細菌そのものもしく
はその菌体成分に抗腫瘍活性があるこさは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくは不宕性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければならなかった。このような処理
によれば、精製は複雑となり、有効成分の単離はきわめ
て困難であった。実際に分離し、有効成分として測定さ
れた例では分子量１５０，０００の蛋白質が知られてい
る。（０公昭４８−４３８４１ ）本発明者らは、より
すぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究した
結果１．全く新規な生理活性物質５ＰＦ−１を培養液中
ζこ見出すに至ったのである。
はその菌体成分に抗腫瘍活性があるこさは広く知られて
いるのであるが、従来知られたものは、菌体もしくは水
可溶性もしくは不宕性高分子細胞構成物質であるに過ぎ
なかった。菌体もしくは菌体内から有効成分を単離しよ
うとすれば、菌体を溶菌したり、機械的に破砕したりし
て全体を分画しなければならなかった。このような処理
によれば、精製は複雑となり、有効成分の単離はきわめ
て困難であった。実際に分離し、有効成分として測定さ
れた例では分子量１５０，０００の蛋白質が知られてい
る。（０公昭４８−４３８４１ ）本発明者らは、より
すぐれた抗腫瘍性有効成分を溶連菌にめて鋭意研究した
結果１．全く新規な生理活性物質５ＰＦ−１を培養液中
ζこ見出すに至ったのである。
本発明の生理活性物質８ＰＦ−１は培養生菌体外Ｅこ排
出され、培養液中に存在するようｌこなるので、菌体を
沖過して除去し、培養Ｐ液を精製すればよいので、単離
はかなり容易なものとなる。
出され、培養液中に存在するようｌこなるので、菌体を
沖過して除去し、培養Ｐ液を精製すればよいので、単離
はかなり容易なものとなる。
本発明の生理活性物質５ＰＦ−１は培養液中に排出され
るとともに、分子量が約５００〜７，０００といちじる
しく小さいこ（！：ζこよって特長づけられる。
るとともに、分子量が約５００〜７，０００といちじる
しく小さいこ（！：ζこよって特長づけられる。
従来、溶連菌関連の生理活性物質で、培養液中に蓄積さ
れたものはなく、また分子量も数万以下のものは知られ
ておらず１本発明の生理活性物質５ＰＦ−１は全く新規
な物質と認められる。
れたものはなく、また分子量も数万以下のものは知られ
ておらず１本発明の生理活性物質５ＰＦ−１は全く新規
な物質と認められる。
また、本発明の生理活性物質ＳＰＦ’−１は、元素分析
、呈色反応等からペプチド性物質と認められるが、紫外
線吸収スペクトルで特異な吸収があり、従来広く知られ
た抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質であっ
て、物質きして新規なものと認められるものである。
、呈色反応等からペプチド性物質と認められるが、紫外
線吸収スペクトルで特異な吸収があり、従来広く知られ
た抗腫瘍活性物質などとも明らかに相違する物質であっ
て、物質きして新規なものと認められるものである。
本発明は、ストレプトコツカス属に属する生理活性物質
Ｓ Ｐ Ｆ−１生産菌を培養し、培養物から生理活性物
質５ＰＦ−１を採取することを特徴とする生理活性物質
５ｐＦ−１の製法を包含するものである。
Ｓ Ｐ Ｆ−１生産菌を培養し、培養物から生理活性物
質５ＰＦ−１を採取することを特徴とする生理活性物質
５ｐＦ−１の製法を包含するものである。
本発明においては、ストレプトコツカス属に属する生理
活性物質５ＰＦ−１生産菌が広く使用されるが、その−
列としてストレプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ） ＡＴ ＣＣ
２１０６０があげられる。
活性物質５ＰＦ−１生産菌が広く使用されるが、その−
列としてストレプトコッカス・ピオゲネス（５ｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ） ＡＴ ＣＣ
２１０６０があげられる。
培養液は、肉エキス培地、酵母エキス培地、プレイン・
ハート・インフュージョン培地（Ｂ■１工培地）等の天
然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカス属細菌
が有効をこ生育する培地であれば炭素源、窒素源等含ん
だ一般培地も使用するこ々ができる。
ハート・インフュージョン培地（Ｂ■１工培地）等の天
然培地がよく用いられるが、ストレプトコツカス属細菌
が有効をこ生育する培地であれば炭素源、窒素源等含ん
だ一般培地も使用するこ々ができる。
培養はｐＨ６，０〜８．０、好ましくは６．８〜Ｚ２で
６０〜４０℃奸才しくは３５〜′５７℃であり嫌気的ｌ
こ静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他撹拌
培養等の変法も採用することができる。
６０〜４０℃奸才しくは３５〜′５７℃であり嫌気的ｌ
こ静置培養をおこなうのが一般的であるが、その他撹拌
培養等の変法も採用することができる。
本発明ζこおいては、培養中の適当な時期にペニシリン
又はその関連物質を添加することが、生理活性物質５Ｐ
Ｆ−１の取得に重要な役割をはだすことになる。
又はその関連物質を添加することが、生理活性物質５Ｐ
Ｆ−１の取得に重要な役割をはだすことになる。
ペニシリン又はその関連物質の添加時期は６７℃の培養
で対数増殖期にかかつて後５〜１５時間の間、％に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間奸才し
くは５〜１５時間その才ま培養を続けることζこよって
、培養液中ｆこ生理活性物質８ＰＦ−１を多量蓄積させ
ることができる。
で対数増殖期にかかつて後５〜１５時間の間、％に５〜
１０時間が好ましい。その後１時間乃至２０時間奸才し
くは５〜１５時間その才ま培養を続けることζこよって
、培養液中ｆこ生理活性物質８ＰＦ−１を多量蓄積させ
ることができる。
ペニシリン又はその関連物質としてはすでζこ知られた
ペニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかな
るものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。添
加量はペニシリンＧで１００〜３０００単位／ｄ、好才
しくは１０００単位／ ｓ＋／培養液程度で十分である
。
ペニシリンと類似の作用をもつ関連物質であればいかな
るものでもよいが、ペニシリンＧが普通用いられる。添
加量はペニシリンＧで１００〜３０００単位／ｄ、好才
しくは１０００単位／ ｓ＋／培養液程度で十分である
。
得られた培養液は、遠心分離によって菌体を除去し、許
液に硫安を添加し５０〜８０％飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。
液に硫安を添加し５０〜８０％飽和度の両分を分取して
得られた沈澱物を安定剤を加えた緩衝液に溶解する。
生理活性物ＪＳＰＦ−１含有液は凍結状態で又は凍結乾
燥して保存することができる。この物質は必要に応じて
イオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめてさらに
精製することができる。イオン交換体としてはイオン交
換樹脂、イオン交換セルローズ、イオン交換セファデッ
クス（ファルマシア社製）等が用いられ、ゲル濾過剤と
しては、トヨバールＨＷ５０ＦｔたはＨＷ−５０ＳＦＣ
東洋１達（衛１１ ）、セファデックス（ファルマシア
社製）等が用いられる。才たカルシウムホスフェートゲ
ルはそのままでも使用できるが、ハイトロキシルアパタ
イトの形で使用するのが便利である。前記のようにして
得られた物質の水溶液をこれらのイオン交換体又はゲル
濾過剤を充填したカラムに。
燥して保存することができる。この物質は必要に応じて
イオン交換体あるいはゲル濾過剤と接触せしめてさらに
精製することができる。イオン交換体としてはイオン交
換樹脂、イオン交換セルローズ、イオン交換セファデッ
クス（ファルマシア社製）等が用いられ、ゲル濾過剤と
しては、トヨバールＨＷ５０ＦｔたはＨＷ−５０ＳＦＣ
東洋１達（衛１１ ）、セファデックス（ファルマシア
社製）等が用いられる。才たカルシウムホスフェートゲ
ルはそのままでも使用できるが、ハイトロキシルアパタ
イトの形で使用するのが便利である。前記のようにして
得られた物質の水溶液をこれらのイオン交換体又はゲル
濾過剤を充填したカラムに。
適当な速度で通過せしめるか、あるいはイオン交換体又
は）ｆ７過剤を入れた一定容器中に一度にその水溶液を
加えて、これらの処理剤と有効物質を接触させる。溶出
は適当な塩濃度とｐＨの緩衝液を用いて行なう。イオン
交換体、ゲル濾過剤又はカルシウムホスフェートゲルは
２種以上組合わせて用いることもできる。たとえばＤＦ
３ＡＤセファデックスと接触させ、溶出した液を更ｌこ
トヨバールＨＷ５０Ｆまたは５０８Ｆと接触させそして
溶出を行なうと、更に精製の効果を上げることができる
。
は）ｆ７過剤を入れた一定容器中に一度にその水溶液を
加えて、これらの処理剤と有効物質を接触させる。溶出
は適当な塩濃度とｐＨの緩衝液を用いて行なう。イオン
交換体、ゲル濾過剤又はカルシウムホスフェートゲルは
２種以上組合わせて用いることもできる。たとえばＤＦ
３ＡＤセファデックスと接触させ、溶出した液を更ｌこ
トヨバールＨＷ５０Ｆまたは５０８Ｆと接触させそして
溶出を行なうと、更に精製の効果を上げることができる
。
ここに得られた物質はペプチド性物質で、凍結乾燥する
と白色の粉末となる。
と白色の粉末となる。
次に、生理活性物質８ＰＦ−１の理化学的性質を示す。
１、 元素分析
２、分子量
ゲル濾過法による測定では１分子量約５００〜７．（Ｉ
ＱＯである。
ＱＯである。
３ 分解点
本物質は１７０℃で褐変し、２００℃になると黒色とな
り分解する。
り分解する。
４、 比旋光度
〔α）、＝＋６５．５〜６４．３°（ｃ＝１．０４）５
、紫外線吸収スペクトル 本物質の３．′５％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは
第１Ｆ９Ｈこ示され、３，１％の水溶液の紫外線吸収ス
ペクトルは第２図に示される。
、紫外線吸収スペクトル 本物質の３．′５％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは
第１Ｆ９Ｈこ示され、３，１％の水溶液の紫外線吸収ス
ペクトルは第２図に示される。
いずれも、２５７ｎｍ、２６５ｎｍ 、２８０ｎｍ。
２８７ｎｍに吸収がみられ、特徴的である。
６、 赤外線吸収スペクトル
第３図に示される。
７ ｍ剤ζこ対する溶解性
水に可溶であるが、メタノール、エタノール、ｎ−ブタ
ノール、インブタノール、ｎ−プロパツール、ｎ−ヘキ
サン、クロロホルム。
ノール、インブタノール、ｎ−プロパツール、ｎ−ヘキ
サン、クロロホルム。
アセトン、メチルイソブチルケトン、エチルエーテル等
の溶剤には不溶である。
の溶剤には不溶である。
８゜塩基性、酸性、中性の区別
本物質の０，８５％水溶液のｐＨは６．５である。
９ 物質の色
白色粉末状である。
１０、呈色反応
ニンヒドリン反応 十
ピュウレット反応 十
モーリッシュ反応 −
デイシエ反応 −
アンスロン反応 −
システィン硫酸反応 −
１１、安定化
本物質はＬ−システィン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、（ＮＨ＊
）ｔ８０い 食塩等の添加ｌこよって安定化される。
）、グリセロール、アルブミン、グロブリン、（ＮＨ＊
）ｔ８０い 食塩等の添加ｌこよって安定化される。
次に本発明の実施例を示す。
なお実施例における生理活性物質５ＰＦ−１の活性単位
の測定は鵜高法（、Ｔｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｈ
ｉｏｔｉｃｓｖｏｌ ５５ Ｎｏ、 １０１３１９〜１
３２５０ＣＴ １９Ｂ２ ）によった。測定ｌこは高分
子透過性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥＲＭ−Ｐ ５４３
２ ） （Ａ＋ｚｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍ。
の測定は鵜高法（、Ｔｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｈ
ｉｏｔｉｃｓｖｏｌ ５５ Ｎｏ、 １０１３１９〜１
３２５０ＣＴ １９Ｂ２ ）によった。測定ｌこは高分
子透過性大腸菌変異株ＭＰ−２（ＦＥＲＭ−Ｐ ５４３
２ ） （Ａ＋ｚｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍ。
４３３７１（１９７９）を使用してＭＰ −２ｔこ対す
る抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイする。
る抗菌活性を指標としてバイオ・アッセイする。
すなわち、バクト・アンチバイオチックメディアムロ（
ディフコ社製品） １．７５％、寒天１．６％より成る
培地（Ｍ、培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し％ ２
０−ずつシャーレに分注し、放ン今してプレート培地を
調製する。
ディフコ社製品） １．７５％、寒天１．６％より成る
培地（Ｍ、培地）を１２０℃、１５分加熱殺菌し％ ２
０−ずつシャーレに分注し、放ン今してプレート培地を
調製する。
一方、ペブト７０．５％、肉エキス０．５％、ＮａＣノ
０．３％、寒天０．８％より成る培地を１２０℃。
０．３％、寒天０．８％より成る培地を１２０℃。
１５分加熱殺菌する。その後４２℃の恒温槽ｆこ保ち、
培地の温度が４２℃になったらあらかじめ３７℃で１７
時間培養したＭＰ−２菌を１−中に１０′個の細胞が存
在する様に培地中に加える。
培地の温度が４２℃になったらあらかじめ３７℃で１７
時間培養したＭＰ−２菌を１−中に１０′個の細胞が存
在する様に培地中に加える。
ピペツ２こよって２−を採取し、あらかじめ作製して置
いたＭ、培地表面上に加え、すばやく均一にひろげ固化
させる。生理活性物質５ＰＦ−１を含む被験液を適当に
希釈して、その溶液０．０５ ｍｌをペーパー・ディス
ク（直径８１ｉ１＋＋）（東洋濾紙）にしみ適才せる。
いたＭ、培地表面上に加え、すばやく均一にひろげ固化
させる。生理活性物質５ＰＦ−１を含む被験液を適当に
希釈して、その溶液０．０５ ｍｌをペーパー・ディス
ク（直径８１ｉ１＋＋）（東洋濾紙）にしみ適才せる。
このペーパー・ディスクを前記作製プレート上に置き、
３７℃で１７時間培養し。
３７℃で１７時間培養し。
生理活性物質５ＰＦ−１によってできる阻止円の大きさ
を測定する。阻止円の直径１０間を与える５ＰＦ−１の
濃度を１単位（１ｕ）と定義する。
を測定する。阻止円の直径１０間を与える５ＰＦ−１の
濃度を１単位（１ｕ）と定義する。
実施例１゜
次の組成の培地Ａ２ノに。
肉エキス １％
ポリペプトン １％
ＮａＣ！ ０．５％
ｐＨ＝ ＺＩ
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｃｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を（ＢＨＩ培地培地１００屹＃種して３
７℃、８時間静置培養により前培蓋をおこなった培養液
１００＠／を接種し、６７℃、１５ｈｒ撹拌しながら嫌
気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／ ＃Ｉｔを
添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を（ＢＨＩ培地培地１００屹＃種して３
７℃、８時間静置培養により前培蓋をおこなった培養液
１００＠／を接種し、６７℃、１５ｈｒ撹拌しながら嫌
気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／ ＃Ｉｔを
添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
培養戸液には生理活性物質５ＰＦ−１が１２０単位／
ｖｒｌ含有されていた。
ｖｒｌ含有されていた。
実施例２゜
次の組成の培地Ｂｅ１ｔに、
酵母エキス ３．０％
Ｂ ＨＩ １．０％
ポリペプトン １．０％
マルトース ０．３％
ＫＨ，Ｐｏ、 ０．１％
Ｍｇ８０．・７ Ｈ，ＯＣ１，０２％
州＝ ７．２
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００＊／を接種し。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００＊／を接種し。
３７℃、１５ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシ
リンＧ１０００単位／−を添加し、更に培養を５ｈｒ継
続する。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した
。
リンＧ１０００単位／−を添加し、更に培養を５ｈｒ継
続する。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した
。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１５２単位／ｄ
含有されていた。
含有されていた。
実施例３゜
次の組成の培地Ｃ２Ｊに。
肉エキス １％
ポリペプトン １％
ＮａＣノ ０．５％
マルトース ０．６％
ＫＨ，Ｐｏ、 ０．１％
Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ，ＯＯ，０２％
ｐｌ（＝７．１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｄを接種し、３７℃、１５ｈ「撹拌しながら嫌気的
ｌこ培養後、ペニシリンＧ１０００単位／−を添加し、
更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分離
し菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｄを接種し、３７℃、１５ｈ「撹拌しながら嫌気的
ｌこ培養後、ペニシリンＧ１０００単位／−を添加し、
更に培養を５ｈｒ継続する。得られた培養液を遠心分離
し菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質８ＰＦ−１が２４０単位／ｗ
１１含有されていた。
１１含有されていた。
実施例４゜
次の組成の培地Ｄ２）に、
肉エキス １．５％
ポリペプトン １．０％
ＮａＣノ ０５％
カザミノ酸 ０５％
酵母エキス ０２％
ｐＨ＝ ＺＩ
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｎｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｍＪの一２０℃保存物を接種し、３７℃、１５ｈ「
撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単
位／ ｍｌを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得ら
れた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した培養液１
００ｍＪの一２０℃保存物を接種し、３７℃、１５ｈ「
撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１０００単
位／ ｍｌを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。得ら
れた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養炉液ｌこは生理活性物質５ＰＦ−１が１００単位／
−含有されていた。
−含有されていた。
実施例５゜
次の組成の培地Ｅ２ノに。
肉エキス １．５％
ポリペプトン １．０％
ＮａＣノ ０．５％
カザミノ酸 ０．２５％
酵母エキス ０．２５％
…＝ ７．１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｇ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養液
１００ｍ／を添加接種し、６７℃、１５ｈｒ撹拌しなが
ら嫌気曲に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／ｄを添
加し、更に培養を５ｈｒ 継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培養した種培養液
１００ｍ／を添加接種し、６７℃、１５ｈｒ撹拌しなが
ら嫌気曲に培養後、ペニシリンＧ１０００単位／ｄを添
加し、更に培養を５ｈｒ 継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１８０単位／−
含有されていた。
含有されていた。
実施例６
前記培地Ｅ２ノに５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏ
ｇｅｎｅｓＡＴＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培
養した培養液１００ｍ１の一２０℃保存物を接種し、′
５７℃。
ｇｅｎｅｓＡＴＣＣ２１０６０を実施例１と同様に前培
養した培養液１００ｍ１の一２０℃保存物を接種し、′
５７℃。
１５ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１
００Ｏ単位／ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。
００Ｏ単位／ｄを添加し、更に培養を５ｈｒ継続する。
得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が・１００単位／
ｍｌ含有されていた。
ｍｌ含有されていた。
実施例Ｚ
下記の培地Ｆ２ノに、
肉エキス ６．０％
ポリペプトン １．０％
ＮａＣノ ０．５％
カザミノ酸 ０．５％
…＝Ｚ１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１ｏｏｖの一２０℃保存物を接種し、３７℃、５．５
ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１００
０単位／−を添加し、更に培養を１５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１ｏｏｖの一２０℃保存物を接種し、３７℃、５．５
ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１００
０単位／−を添加し、更に培養を１５ｈｒ継続する。得
られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養Ｐ液には生理活性物質５ＰＦ−１が１２０単位／−
含有されていた。
含有されていた。
実施例８゜
下記の培地Ｇ２Ｊに、
Ｂ ＨＩ ５．７％
ポリペプトン ０．５％
マルトース ０．６％
ＫＨ２Ｐ０． ０．１％
Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，０２％
ｐＨ＝ ７．１
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ ＡＴ
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ／を接種し、３７℃、１５ｈｒ撹拌しながら
嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１００Ｏ単位／−を添加
し、更ζこ培養を５ｈｒ 継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
ＣＣ２１０６０を実施例１と同様にして前培養した培養
液１００ｍ／を接種し、３７℃、１５ｈｒ撹拌しながら
嫌気的に培養後、ペニシリンＧ１００Ｏ単位／−を添加
し、更ζこ培養を５ｈｒ 継続する。得られた培養液を
遠心分離し、菌体を除去した。
培養ｐ液をこけ生理活性物質５ＰＦ−１が３００単位／
ｍｅ金含有れていた。
ｍｅ金含有れていた。
実施例９
前記培地Ｅ３）に、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙ
ｏｇｅｎｅｓＡＴＣＣ２１０６０を６７゛ｃで８ｈｒ静
置培養して得た種培養液３００ ｍｌを添加接種し、３
７℃、１５ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリ
ンＧ１００Ｏ単位／−を添加し、更に培養を５ｈｒ継続
する。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
ｏｇｅｎｅｓＡＴＣＣ２１０６０を６７゛ｃで８ｈｒ静
置培養して得た種培養液３００ ｍｌを添加接種し、３
７℃、１５ｈｒ撹拌しながら嫌気的に培養後、ペニシリ
ンＧ１００Ｏ単位／−を添加し、更に培養を５ｈｒ継続
する。得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去した。
培養炉液３ノには生理活性物質５ＰＦ−１を５６Ｘ１０
’単位含有していた。
’単位含有していた。
培養Ｐ液には硫安を添加し５０〜８０％飽和度の画分を
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は生理活性物質Ｓ
Ｐ ｌｉ’ −１を５０×１吋単位含有していた。
分取して沈澱物を得た。この沈澱物は生理活性物質Ｓ
Ｐ ｌｉ’ −１を５０×１吋単位含有していた。
この沈澱物全腋を安定剤含有緩衝液５ＧＯｍｌＧこ溶解
し、＠解液をＤＥＡＥ−セルロースカラム（５）＜７３
ｃｍ）に加え、生理活性物質ＳＰＦを吸着させた。これ
ζこ０．３ＭＮａＣノ溶液を用いて段階的に溶出させ５
活性部分を分取する。得ら才また活性は３０Ｘ１０’単
位であった。
し、＠解液をＤＥＡＥ−セルロースカラム（５）＜７３
ｃｍ）に加え、生理活性物質ＳＰＦを吸着させた。これ
ζこ０．３ＭＮａＣノ溶液を用いて段階的に溶出させ５
活性部分を分取する。得ら才また活性は３０Ｘ１０’単
位であった。
活性部分を緩衝液に対して透析し１次にＤＥＡＥ−セフ
ァデックスＡ−２５のカラム（２，６×５０σ）に加え
、活性部分を吸着させ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度
を直線的に上昇させつつ溶出を行い、活性部分を分取す
る。得られた活性は１０６Ｘ１０’単位であった。
ァデックスＡ−２５のカラム（２，６×５０σ）に加え
、活性部分を吸着させ、これに燐酸緩衝液中の食塩濃度
を直線的に上昇させつつ溶出を行い、活性部分を分取す
る。得られた活性は１０６Ｘ１０’単位であった。
更に、この溶出液を濃縮しゲル濾過材トヨパールＨＷ−
５０Ｆのカラム（２Ｘ１００ｃｍＨこ加え。
５０Ｆのカラム（２Ｘ１００ｃｍＨこ加え。
活性画分を分取する。得られた活性は２．２Ｘ１０’単
位であった。
位であった。
ここｌこ得られた溶出液を凍結乾燥し生理活性物質５Ｐ
Ｆ−１の白色粉末ろ５Ｄｖｇを得た。
Ｆ−１の白色粉末ろ５Ｄｖｇを得た。
第１図は生理活性物質５ＰＦ−１３，３％水溶液の紫外
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく３．１％水溶
液の紫外線吸収スペクトルを示し、第３図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第１ 圀 ２５０ ２７５ ３００ ｍ 第２ 図 ｍ
線吸収スペクトルを示し、第２図は同じく３．１％水溶
液の紫外線吸収スペクトルを示し、第３図は同じく赤外
線吸収スペクトルを示す。 代理人 弁理士 戸 １）親 男 第１ 圀 ２５０ ２７５ ３００ ｍ 第２ 図 ｍ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｔｉｔ 下記の理化学的性質を有する生理活性物質８Ｐ
Ｆ−１゜ １、 元素分析 ２、分子量 ゲル濾過法による測定では、分子量約 ５００〜７，０００である。 ３、分解点 本物質は１７０℃で褐変し、２００℃ になると黒色となり分解する。 ４、 比旋光度 〔α）、 ＝ ＋６３．！１〜６４．３＠（ｃ＝ １．
０４ ）５、紫外線吸収スペクトル 本物質の３．３％の水溶液の紫外線吸収スペクトルは第
１図に示され、３．１％の水溶液の紫外線吸収スペクト
ルは第２図に示される。いずれも、２５７ｎｍ、２６５
ｎｍ、２８０ｎｍ、２８７ｎｍに吸収がみられ、特徴的
である。 ６、 赤外線吸収スペクトル 第３図に示される。 Ｚ 溶剤に対する溶解性 水に可溶であるが、メタノール、エタ ノール、ｎ−ブタノール、インブタノール、ｎ−プロパ
ツール、ｎ−へキサン、クロロホルム、アセトン、メチ
ルイソブチルケトン、エチルエーテル等の溶剤には不醇
であるう ８、塩基性、酸性、中性の区別 本物質の０．８５％水溶液のｐＨは６．５である。 ９ 物質の色 白色粉末状である。 １０、呈色反応 ニンヒドリン反応 → ビュウレット反応 十 モーリッシュ反応 − デイシエ反応 − アンスロン反応 − システィン硫酸反応 − １１、安定化 本物質はＬ−システィン、ジチオスレ イトール（ＤＴＴ）、グリセロール、アルブミン、グロ
ブリン、（ＮＨ４）２ ｓ ｏい 食塩等の添加によっ
て安定化される。 （２）ストレプトコツカス属に属する生理活性物質５Ｐ
Ｆ−１生産菌を培養し、培養物から生理活性物質５ＰＦ
−１を採取することを特徴吉する生理活性物質５ＰＦ−
１の製法。 （３）ストレプトコッカス属に属する生理活性物質８Ｐ
Ｆ−１生産菌を培養するに際し、培養中の適当な時期に
ペニシリン又はその関連物質を添加して培養することを
特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の生理活性物質
８ＰＦ−１の製法。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58139385A JPS6030689A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 生理活性物質ｓｐｆ−１及びその製法 |
| CA000459394A CA1237085A (en) | 1983-08-01 | 1984-07-20 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| GB08418745A GB2146028B (en) | 1983-08-01 | 1984-07-23 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| AU31000/84A AU572529B2 (en) | 1983-08-01 | 1984-07-24 | Spf-100 and process for the preparation thereof |
| CH3684/84A CH663033A5 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Substance-melange dite ''spf-100'' et procede pour sa preparation. |
| DE19843428017 DE3428017A1 (de) | 1983-08-01 | 1984-07-30 | Spf-100 und verfahren zu seiner herstellung |
| FR8412119A FR2550223B1 (fr) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100 et procede de preparation |
| SE8403914A SE461532B (sv) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Cancermotverkande och immunaktiverande aemne (spf-100) |
| KR1019840004559A KR850002276A (ko) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Spf-100의 제조방법 |
| NL8402388A NL8402388A (nl) | 1983-08-01 | 1984-07-31 | Geneesmiddel spf-100 en werkwijze voor de bereiding hiervan. |
| US06/746,514 US4656037A (en) | 1983-08-01 | 1985-06-19 | SPF-100 and process for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58139385A JPS6030689A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 生理活性物質ｓｐｆ−１及びその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6030689A true JPS6030689A (ja) | 1985-02-16 |
| JPS6250475B2 JPS6250475B2 (ja) | 1987-10-24 |
Family
ID=15244077
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58139385A Granted JPS6030689A (ja) | 1983-08-01 | 1983-08-01 | 生理活性物質ｓｐｆ−１及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6030689A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03502674A (ja) * | 1987-12-21 | 1991-06-20 | デイビッド ジー．エバンス アンド アソシエーツ プロプライエタリー リミテッド | 密封容器 |
-
1983
- 1983-08-01 JP JP58139385A patent/JPS6030689A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03502674A (ja) * | 1987-12-21 | 1991-06-20 | デイビッド ジー．エバンス アンド アソシエーツ プロプライエタリー リミテッド | 密封容器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6250475B2 (ja) | 1987-10-24 |
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