JPS60233553A - フイブリノゲン・フイブリン分解産物の測定方法 - Google Patents
フイブリノゲン・フイブリン分解産物の測定方法Info
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- JPS60233553A JPS60233553A JP8849884A JP8849884A JPS60233553A JP S60233553 A JPS60233553 A JP S60233553A JP 8849884 A JP8849884 A JP 8849884A JP 8849884 A JP8849884 A JP 8849884A JP S60233553 A JPS60233553 A JP S60233553A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はモノクローナル抗体を用いたフィブリノゲン、
フィブリン分解産物の測定方法に関する。
フィブリン分解産物の測定方法に関する。
近年、血栓・塞栓により死亡したり基礎疾患つＳ増悪し
たりする例が増加してきている。またそれ故に積極的な
線溶療法がなされている。生木の防御機構として血液の
凝固・線溶系が存在する°が、それらの異常が汎発性血
管内凝固症候詳（ＤＩＯ）となって現われる。通常、臨
床的診析方法としてはフィブリノゲン・フィブリン分る
。従来ＦＤＰの測定は抗ヒトフィブリノゲン抗体を用い
た感作ラテツクスによる凝集反応が一般的になされてい
るが、この方法は抗体が抗ヒトフィブリノゲン抗体であ
るため、検体として常に血清あるいは脱フィブリンした
検体を使用しなければならなかった。
たりする例が増加してきている。またそれ故に積極的な
線溶療法がなされている。生木の防御機構として血液の
凝固・線溶系が存在する°が、それらの異常が汎発性血
管内凝固症候詳（ＤＩＯ）となって現われる。通常、臨
床的診析方法としてはフィブリノゲン・フィブリン分る
。従来ＦＤＰの測定は抗ヒトフィブリノゲン抗体を用い
た感作ラテツクスによる凝集反応が一般的になされてい
るが、この方法は抗体が抗ヒトフィブリノゲン抗体であ
るため、検体として常に血清あるいは脱フィブリンした
検体を使用しなければならなかった。
ところがＦＤＰを測定するような磨者検体はしばしば血
清にするに足るだけの凝固因子が不足していたり、フィ
ブリノゲンそのものが低下し十分な凝固が起こらなかっ
たりする。才た抗凝固療法を行っている患者血液では凝
固そのものが起こらないことがある。従って血清を検体
にすることは臨床診断上極めて危険なことである。これ
らの問題点を解決するため検討・研究されているが、未
だ実用に足るだけの成果には至っていない。
清にするに足るだけの凝固因子が不足していたり、フィ
ブリノゲンそのものが低下し十分な凝固が起こらなかっ
たりする。才た抗凝固療法を行っている患者血液では凝
固そのものが起こらないことがある。従って血清を検体
にすることは臨床診断上極めて危険なことである。これ
らの問題点を解決するため検討・研究されているが、未
だ実用に足るだけの成果には至っていない。
本発明者らは、血漿中のフィブリノゲンの量に関係なく
ＦＤＰを測定する方法を鋭意検討した結果１本発明を完
成した。
ＦＤＰを測定する方法を鋭意検討した結果１本発明を完
成した。
本発明は、近年各方面で行われているハイブリドーマに
よるモノクローナル抗体産生法で得たモノクローナル抗
体を用いたＦＤＰ測定法である。
よるモノクローナル抗体産生法で得たモノクローナル抗
体を用いたＦＤＰ測定法である。
本発明の原理は酵素標識抗体を用いる酵素免疫学的測定
法である。即ち、被検体中のＦＤＰと先に特許出願した
特願昭５９−２０８４２号に記載した０８２０２．０８
２０４の両モノクローナル抗体に酵素を標識した抗体（
以下標識抗体という）と抗原抗体反応を行わせた後残存
する標識抗体をＦＤＰで被覆した水不溶性担体により２
回目の抗原抗体反応を行わせた後、該担体を分離し担体
に結合した酵素量を測定するか被検体と該水不溶性担体
の混合液に標識抗体を添加し一定時間後水不溶性担体を
分離し担体に結合した酵素量を測定するかのいずれかの
方法を用いて測定することができる。なお、酵素量の測
定は通常の方法を利用することができ、いずれの場合も
予め作成しておいた検量線から゛被検体中のＦＤＰ量を
算出することができる。
法である。即ち、被検体中のＦＤＰと先に特許出願した
特願昭５９−２０８４２号に記載した０８２０２．０８
２０４の両モノクローナル抗体に酵素を標識した抗体（
以下標識抗体という）と抗原抗体反応を行わせた後残存
する標識抗体をＦＤＰで被覆した水不溶性担体により２
回目の抗原抗体反応を行わせた後、該担体を分離し担体
に結合した酵素量を測定するか被検体と該水不溶性担体
の混合液に標識抗体を添加し一定時間後水不溶性担体を
分離し担体に結合した酵素量を測定するかのいずれかの
方法を用いて測定することができる。なお、酵素量の測
定は通常の方法を利用することができ、いずれの場合も
予め作成しておいた検量線から゛被検体中のＦＤＰ量を
算出することができる。
また、抗体に標識する酵素としてはβ−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ、パーオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ
、グルコースオキシダーゼ等が使用でき、標識方法とし
ては酵素免疫測定法（第二板９石用栄治、医学書院、１
９８２年）に記載されている如く自体公知の方法で標識
抗体を得ることができる。
ダーゼ、パーオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ
、グルコースオキシダーゼ等が使用でき、標識方法とし
ては酵素免疫測定法（第二板９石用栄治、医学書院、１
９８２年）に記載されている如く自体公知の方法で標識
抗体を得ることができる。
一方、水不溶性担体としてはシリコン、ナイロン、プラ
スチック、ガラスからなる切片１粒子、小球、多孔平板
もしくは試験管等が利用でき、これらの担体をＤ画分も
しくはＤＤ画分で被覆する方法は例えばＯｆ １ｎｉｃ
ａ、 Ｏｈｉｍｉｃａ。
スチック、ガラスからなる切片１粒子、小球、多孔平板
もしくは試験管等が利用でき、これらの担体をＤ画分も
しくはＤＤ画分で被覆する方法は例えばＯｆ １ｎｉｃ
ａ、 Ｏｈｉｍｉｃａ。
Ａｃｔａ、、 １３１巻、１０１頁、１９８８年、同１
８５巻。
８５巻。
２６１頁、 １９８３年に記載の如く自体公知の方法で
調製すればよい。なお２本発明に使用可能な被検体とし
ては血液、血漿、血清、尿等が使用説明する。
調製すればよい。なお２本発明に使用可能な被検体とし
ては血液、血漿、血清、尿等が使用説明する。
試薬調製の方法
１、抗ＦＤＰモノクローナル抗体の純化及びＦ（ａｂ’
）２の調製 酵素で標識するためマウス腹水より粗抗体を得た。５０
ｍ／の腹水は室温に８時間放置後遠心し不溶物を除いた
。ＩｇＧ量は２５０■であった。
）２の調製 酵素で標識するためマウス腹水より粗抗体を得た。５０
ｍ／の腹水は室温に８時間放置後遠心し不溶物を除いた
。ＩｇＧ量は２５０■であった。
遠心上清を同量の飽和硫安液を加え塩析した。
沈殿物はｐＨ８，０の１０ｍＭトリス緩衝液に溶解し同
液に一夜透析した。同液で緩衝化されたＤＥＡＥ−セフ
ァセル（ファルマシアースウェーデン）のカラム（Ｉ
ｇＧ ｚｏｏｌｖに対し１００ ｍｌの樹脂量）に透析
内液をアプライし同液でカラムを洗浄後塩化すｌ−ＩＪ
ウムの０モル／ｌから、０．２モル／ｌまでの直線濃度
勾配（液量はカラム樹脂量の４倍量をそれぞれ用いる）
により蛋白質を溶出した。抗マウスＩｇＧ抗血清を用い
るオフタロニー法によりマウスＩｇＧを同定しＩｇＧ画
分はプールして再度塩析した。φ４．６Ｘ１００ｃｍの
セファクリルｓ −ａｏｏ （ファルマシア・スウェー
デン）のカラムを用ｌ／Ｘゲルｐ過した。
液に一夜透析した。同液で緩衝化されたＤＥＡＥ−セフ
ァセル（ファルマシアースウェーデン）のカラム（Ｉ
ｇＧ ｚｏｏｌｖに対し１００ ｍｌの樹脂量）に透析
内液をアプライし同液でカラムを洗浄後塩化すｌ−ＩＪ
ウムの０モル／ｌから、０．２モル／ｌまでの直線濃度
勾配（液量はカラム樹脂量の４倍量をそれぞれ用いる）
により蛋白質を溶出した。抗マウスＩｇＧ抗血清を用い
るオフタロニー法によりマウスＩｇＧを同定しＩｇＧ画
分はプールして再度塩析した。φ４．６Ｘ１００ｃｍの
セファクリルｓ −ａｏｏ （ファルマシア・スウェー
デン）のカラムを用ｌ／Ｘゲルｐ過した。
オフタロニー法によりＩｇＧを同定し更にＳ 、Ｄ Ｓ
−ゲル電気泳動法により純度を検定し９０％純度のＩｇ
Ｇ１１２００■を得た。ＩｇＧはプールしＦ（ａ ｂ’
）２の原料とした。
−ゲル電気泳動法により純度を検定し９０％純度のＩｇ
Ｇ１１２００■を得た。ＩｇＧはプールしＦ（ａ ｂ’
）２の原料とした。
Ｆ（ａｂ’）２はペプシンの加水分解により作成した。
即ち、ｐＨを４．２に調製した２００１ｖＩｇＧに対し
重量％で２ないし４％のペプシンを加え８７℃で８時間
放置した後、ｐＨを８．０として消化を停止した。１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８，０に透析しＩｇＧを得た方法
によりＤＥＡＥ−セファセルクロマトグラフィーを行っ
た。Ｆ （ａｂ’）２は抗マウスＦ （ａ ｂ’ ）、
及び抗Ｐｃ特異抗血清を用いるオフタロニー法及び５Ｄ
８−ゲル電気泳動法により同定した。微量に混在する未
消化ＩｇＧはゲル濾過法により除去した。ゲル濾過によ
るＦ（ａｂ’）２画分は集めて４℃で保存した。Ｆ（ａ
ｂ’）、として８０■であった。
重量％で２ないし４％のペプシンを加え８７℃で８時間
放置した後、ｐＨを８．０として消化を停止した。１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８，０に透析しＩｇＧを得た方法
によりＤＥＡＥ−セファセルクロマトグラフィーを行っ
た。Ｆ （ａｂ’）２は抗マウスＦ （ａ ｂ’ ）、
及び抗Ｐｃ特異抗血清を用いるオフタロニー法及び５Ｄ
８−ゲル電気泳動法により同定した。微量に混在する未
消化ＩｇＧはゲル濾過法により除去した。ゲル濾過によ
るＦ（ａｂ’）２画分は集めて４℃で保存した。Ｆ（ａ
ｂ’）、として８０■であった。
２、酵素による標識方法
酵素免疫測定法第２版１９８２年（石川栄治ら。
医学書院）によったが詳細に述べると次のとおりである
。
。
■ β−怪勢ラうトシダーゼーＦａｂ’の場合Ｆ（ａｂ
’）、を８ｍｐ／ｍＡ’としその２ｍｌを０．１ Ｍリ
ン酸緩衝液ｐＨ６−１ｍＭ ＥＤＴＡに一夜透析し０．
２Ｍメルカプトエチルアミン２００μノを透析内液に添
加した。８７℃で２時間還元反応しセファデクスＧ２５
のカラム（φ１４Ｘ８０ｃＲ）でゲル濾過しＦ ａｂ’
を得た。濃縮して２ｒｎｌとし５０ ｍｙ ７／ｕｌの
Ｎ 、 Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイミドのＤＭＦ溶
液２０μ４を加えａ ｏ ’ｃ ａ ｏ分反応させＦ
ａｂ’−マレイミドとした。Ｇ２５でゲル濾過し未反応
試薬を除きＦａｂ’−マレイミド液のｐＨを６．８とし
た。１０１Ｒｇ１０１Ｒβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベ
ーリンガー社製）を加えてから２ｄに液量を調整し４℃
で４０時間反応させた。１０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ６，
５（０，１Ｍ塩化ナトリウム１ｍＭ塩化マグネシウム−
０，１％牛血清アルブミン−０，１％窒化ソーダ）で平
衡化したセファクリル５＝４００のカラム（φ１．５Ｘ
１００儂）によりβ＄７ラクトシダーゼーＦ ａｂ’結
合物を未反応Ｆａｂ’から分離した。
’）、を８ｍｐ／ｍＡ’としその２ｍｌを０．１ Ｍリ
ン酸緩衝液ｐＨ６−１ｍＭ ＥＤＴＡに一夜透析し０．
２Ｍメルカプトエチルアミン２００μノを透析内液に添
加した。８７℃で２時間還元反応しセファデクスＧ２５
のカラム（φ１４Ｘ８０ｃＲ）でゲル濾過しＦ ａｂ’
を得た。濃縮して２ｒｎｌとし５０ ｍｙ ７／ｕｌの
Ｎ 、 Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイミドのＤＭＦ溶
液２０μ４を加えａ ｏ ’ｃ ａ ｏ分反応させＦ
ａｂ’−マレイミドとした。Ｇ２５でゲル濾過し未反応
試薬を除きＦａｂ’−マレイミド液のｐＨを６．８とし
た。１０１Ｒｇ１０１Ｒβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベ
ーリンガー社製）を加えてから２ｄに液量を調整し４℃
で４０時間反応させた。１０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ６，
５（０，１Ｍ塩化ナトリウム１ｍＭ塩化マグネシウム−
０，１％牛血清アルブミン−０，１％窒化ソーダ）で平
衡化したセファクリル５＝４００のカラム（φ１．５Ｘ
１００儂）によりβ＄７ラクトシダーゼーＦ ａｂ’結
合物を未反応Ｆａｂ’から分離した。
■ 西洋ワサ喝・パーオキシダーゼ−Ｆａｂ・の場合Ｆ
（ａｂ’）２を４．２ ｍｙ ／ｌｎｌとし、その０．
６１ｎｌに０．４Ｍのメルカプトエチルアミン６０μｌ
を加え８？℃で９０分還元反応させたパーオキシダーゼ
（東洋紡社製）のｌθダ／１．５ｍ／溶液８００μｌに
Ｎ−サクシニジジル−８−１（２−ピリジルジチオ）プ
ロピオネート（ファルマシア）のエタノール溶液１３＃
／ａｔの６０μｊを加え２５℃でａＯ分反応させた。Ｆ
（ａｂ’）２の還元溶液及びパーオキシダーゼのピリジ
ルジスルフィド液を共にセファデクスＧ２５のカラムに
より未反応試薬を除き、それぞれＦ ａｂ’ 及びピリ
ジルジチオパーオキシダーゼとした。
（ａｂ’）２を４．２ ｍｙ ／ｌｎｌとし、その０．
６１ｎｌに０．４Ｍのメルカプトエチルアミン６０μｌ
を加え８？℃で９０分還元反応させたパーオキシダーゼ
（東洋紡社製）のｌθダ／１．５ｍ／溶液８００μｌに
Ｎ−サクシニジジル−８−１（２−ピリジルジチオ）プ
ロピオネート（ファルマシア）のエタノール溶液１３＃
／ａｔの６０μｊを加え２５℃でａＯ分反応させた。Ｆ
（ａｂ’）２の還元溶液及びパーオキシダーゼのピリジ
ルジスルフィド液を共にセファデクスＧ２５のカラムに
より未反応試薬を除き、それぞれＦ ａｂ’ 及びピリ
ジルジチオパーオキシダーゼとした。
Ｆａｂ’を２ ｍｙ ／ ０．２ ｍｌ、ピリジルジチ
オパーオキシダーゼを１．８り１０．２＋１！Ａ’に調
製し２両者を混ぜあわせ透析しながら２８℃で２０時間
反応させた。透析内液をセファクリル５２００のカラム
（φ２Ｘ１００ＣＩＮ）にアプライしＦａｂ’−バーナ
上Ｓノ々ゝ−七１古楡Ｉｈｌ、ｌ喰創し？−へ８、ＦＤ
Ｐの水不溶性担体への吸着方法ＦＤＰ−Ｄ、ＦＤＰ−Ｄ
Ｄは特願昭５９−２０８４２号に記載の方法で得たもの
を使用した。
オパーオキシダーゼを１．８り１０．２＋１！Ａ’に調
製し２両者を混ぜあわせ透析しながら２８℃で２０時間
反応させた。透析内液をセファクリル５２００のカラム
（φ２Ｘ１００ＣＩＮ）にアプライしＦａｂ’−バーナ
上Ｓノ々ゝ−七１古楡Ｉｈｌ、ｌ喰創し？−へ８、ＦＤ
Ｐの水不溶性担体への吸着方法ＦＤＰ−Ｄ、ＦＤＰ−Ｄ
Ｄは特願昭５９−２０８４２号に記載の方法で得たもの
を使用した。
■ ポリスチレンボールへの吸着
径６１！１１のポリスチレンボール（積木化学）を脱イ
オン水中で８回超音波処理し微粉末を除いた。ＦＤＰ−
Ｄを４μ！ｖ！／ｍｌとなるように１０ｍＭトリス緩衝
液ｐ）（ｓ、ｏ−１５０ｍＭ塩化ナトリウム−５ｒｆｉ
Ｍ塩化カルシウム（以下トリス緩衝液）で稀釈し、ボー
ル１個当り０．５ ｍｌの割合で４℃で２４時間ゆるや
かに混和し吸着させた。未吸着蛋白はトリス緩衝液でよ
く洗浄し、ボールの未反応表回廿１％牛血清アルブミン
−〇、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むトリス緩衝液で吸
着させた。８日間低温保存し未反応の牛血清アルブミン
−Ｔｗｅｅｎ ２０はトリス緩衝液により洗浄し同液中
に保存した。
オン水中で８回超音波処理し微粉末を除いた。ＦＤＰ−
Ｄを４μ！ｖ！／ｍｌとなるように１０ｍＭトリス緩衝
液ｐ）（ｓ、ｏ−１５０ｍＭ塩化ナトリウム−５ｒｆｉ
Ｍ塩化カルシウム（以下トリス緩衝液）で稀釈し、ボー
ル１個当り０．５ ｍｌの割合で４℃で２４時間ゆるや
かに混和し吸着させた。未吸着蛋白はトリス緩衝液でよ
く洗浄し、ボールの未反応表回廿１％牛血清アルブミン
−〇、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むトリス緩衝液で吸
着させた。８日間低温保存し未反応の牛血清アルブミン
−Ｔｗｅｅｎ ２０はトリス緩衝液により洗浄し同液中
に保存した。
■ ポリ塩化ビニルマイクロブーレートへの吸着ＦＤＰ
−ＤＤを１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水、（以下ＰＢ
Ｓ）で稀釈し０．５μｔ／Ｉｌｌとした。
−ＤＤを１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水、（以下ＰＢ
Ｓ）で稀釈し０．５μｔ／Ｉｌｌとした。
この５０μｌを各ウェルに分注し４℃で一夜放置した未
反応液を吸引除去し、各ウェルをｚ５ｏμ＃づつ８回５
％馬血清−０，０５％’［’ｗｅｅｎ２０を含むＰＢ８
で洗浄した。 洗浄後は水分を振り切り表面が乾燥しな
いように覆い低温室に保存した。
反応液を吸引除去し、各ウェルをｚ５ｏμ＃づつ８回５
％馬血清−０，０５％’［’ｗｅｅｎ２０を含むＰＢ８
で洗浄した。 洗浄後は水分を振り切り表面が乾燥しな
いように覆い低温室に保存した。
次に従来法と比較し本発明の利点を列挙する。
■ 従来法はラテックス凝集法が主であるが。
その中でもスライド板上での凝集の有無を調べる方法が
一般的である。その測定値は凝集能を示す最大稀釈塵で
表現されるため概して定量性に欠ける。また最大稀釈塵
を得るため通常何回かの稀釈操作を必要とし煩雑である
。
一般的である。その測定値は凝集能を示す最大稀釈塵で
表現されるため概して定量性に欠ける。また最大稀釈塵
を得るため通常何回かの稀釈操作を必要とし煩雑である
。
本発明は予め広範囲の検量線を作成できるので定量性に
優れまた検体稀釈も不要である。
優れまた検体稀釈も不要である。
■ 従来の抗体は全てヒトフィブリノゲンと交差反応を
示す。従って検体に少量のフィブリノゲンでも残存ある
いは混在すればそれが測定値に大きく影響し、臨床診断
上極めて危険である。本発明は抗ヒｌ−’ＦＤＰ−Ｄ／
ＤＤに特異的なモノクローナル抗体であり、フィブリノ
ゲンとは全く反応しない抗体であるため、血清は勿論血
漿も使用できまた適当な条件下では全血も使うことが可
能である。
示す。従って検体に少量のフィブリノゲンでも残存ある
いは混在すればそれが測定値に大きく影響し、臨床診断
上極めて危険である。本発明は抗ヒｌ−’ＦＤＰ−Ｄ／
ＤＤに特異的なモノクローナル抗体であり、フィブリノ
ゲンとは全く反応しない抗体であるため、血清は勿論血
漿も使用できまた適当な条件下では全血も使うことが可
能である。
■ ラテックス凝集を特殊機器を用いて比濁法で定量す
る試みがなされているが、高価であり普及型とはいえな
い。本発明は比色法であるため分光々度計で定量が行え
極めて一般に使用できる方法である。
る試みがなされているが、高価であり普及型とはいえな
い。本発明は比色法であるため分光々度計で定量が行え
極めて一般に使用できる方法である。
以下実施例で本発明を説明する。
実施例１
Ｆａｂ’−β−カ七゛ラクトシダーゼ吉ポリスチレンボ
ール（以下ボール）を用いる測定例。
ール（以下ボール）を用いる測定例。
試験管に被検体として血漿もしくは標準品さして精製し
たＦＤＰ−Ｄを１００μ４ Ｆａｂ’−β’−Ｈクトシ
ダーゼを２００μｌ加え８７℃でｚＯ分反応させた。次
に同じ試験管にボールを１個入れ更に３７℃で２０分間
反応させた。アスピレータ−で反応液を吸引除去しボー
ルは生理食塩水２ｍｌで２回洗浄した。ボールは水をぬ
ぐってから予め３７℃に保温されている５００μｌの基
質液（ｌｏ ｍＭＯ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラク
トシドと１００ ｍＭβ−メルカプトエタノールを含む
ｐＨ７，２の５０ ｍＭのリン酸緩衝液）の入った試験
管に移し３７℃で８０分間反応させ、２ｒｎｌの０．１
Ｍ炭酸ナトリウム液を加え反応を停止した。＋ｏ５ｉｚ
の吸光度を測定し縦軸に、ＦＤＰ−Ｄの濃度を横軸に標
準曲線値 なお、同様に同一患者の血清も測定した。
たＦＤＰ−Ｄを１００μ４ Ｆａｂ’−β’−Ｈクトシ
ダーゼを２００μｌ加え８７℃でｚＯ分反応させた。次
に同じ試験管にボールを１個入れ更に３７℃で２０分間
反応させた。アスピレータ−で反応液を吸引除去しボー
ルは生理食塩水２ｍｌで２回洗浄した。ボールは水をぬ
ぐってから予め３７℃に保温されている５００μｌの基
質液（ｌｏ ｍＭＯ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラク
トシドと１００ ｍＭβ−メルカプトエタノールを含む
ｐＨ７，２の５０ ｍＭのリン酸緩衝液）の入った試験
管に移し３７℃で８０分間反応させ、２ｒｎｌの０．１
Ｍ炭酸ナトリウム液を加え反応を停止した。＋ｏ５ｉｚ
の吸光度を測定し縦軸に、ＦＤＰ−Ｄの濃度を横軸に標
準曲線値 なお、同様に同一患者の血清も測定した。
（ｚ−ＡｌＦ 壜 旧λトフ
本発明法： ＦＤＰ−Ｄ換算値
相関関係
本発明法における血漿、血清間γ＝＝ｏ、９ｏｓ血漿、
血清ともよく相関し血漿を検体としてもフィブリノゲン
の影響を受けないことを示している。
血清ともよく相関し血漿を検体としてもフィブリノゲン
の影響を受けないことを示している。
実施例２゜
Ｆａｂ’−パーオキシダーゼとＦＤＰ−ＤＤコートマイ
クロプレートを用いる測定例。
クロプレートを用いる測定例。
マイクロプレートのウェルに血漿もしくは標準ＦＤＰ−
ＤＤを５ｏｔｔｌｌづつ加えてからＦａｂ’−パーオキ
シダーゼを５０μノ加え、８７℃で３０分反応後アスピ
レーターで反応液を吸引除去した。各ウェルは１００μ
ｌづつ２回の生理食塩水で洗浄した。洗浄後基質液（ｐ
Ｈ５，９の５０ｍＭのクエン酸緩衝液１ｍＪ中に２１ｎ
９のオルトフェニレンジアミンと０．８４μ）の過酸化
水素水を含む）を５０μｌ加え室温で８０分反応させた
。０．５Ｍの硫酸５０μｌを加え反応を停止した。６０
０ ｎ ｍ ｔを対照に５００ｎｍの吸光度を測定した
。実施例１．と同様に縦軸に吸光度、横軸にＦＤＰ−Ｄ
Ｄ濃度をとる片対数グラフにより標準曲線を得た。測定
範囲は０．２から８０μｊｊ−／ｍｌであった。実施例
１．の検体の測定値との相関はγ−０９と良好であった
。
ＤＤを５ｏｔｔｌｌづつ加えてからＦａｂ’−パーオキ
シダーゼを５０μノ加え、８７℃で３０分反応後アスピ
レーターで反応液を吸引除去した。各ウェルは１００μ
ｌづつ２回の生理食塩水で洗浄した。洗浄後基質液（ｐ
Ｈ５，９の５０ｍＭのクエン酸緩衝液１ｍＪ中に２１ｎ
９のオルトフェニレンジアミンと０．８４μ）の過酸化
水素水を含む）を５０μｌ加え室温で８０分反応させた
。０．５Ｍの硫酸５０μｌを加え反応を停止した。６０
０ ｎ ｍ ｔを対照に５００ｎｍの吸光度を測定した
。実施例１．と同様に縦軸に吸光度、横軸にＦＤＰ−Ｄ
Ｄ濃度をとる片対数グラフにより標準曲線を得た。測定
範囲は０．２から８０μｊｊ−／ｍｌであった。実施例
１．の検体の測定値との相関はγ−０９と良好であった
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｌ）ヒトフィブリノゲンまたはフィブリンのプラスミン
分解物中り画分もしくはＤＤ画分あるいはＤ画分もしく
はＤＤ画分を保持する画 ８゜分とは反応するが、フィ
ブリノゲンとは反応しない性質を有し且つ互いに認識す
る抗原決定基の異なる抗体に酵素標識を行った抗体（以
下標識抗体という）とＤ画分またはＤＤ特徴とするフィ
ブリノゲン・フィブリン分解産物（以下ＦＤＰと略す）
の測定方法。 ２）被検体中のＦＤＰと標識抗体を免疫反応させ２次い
で残存する標識抗体と吸着担体とを １標識抗体結合吸
着担体中の酵素量を測定することを特徴とする特許請求
の範囲第１）項記載の測定方法。 ８）被検体と吸着担体との混合液に標識抗体を添加した
後肢吸着担体を分離し、該吸着担体に結合された酵素量
を測定することを特徴とする特許請求の範囲第１）項記
載の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8849884A JPS60233553A (ja) | 1984-05-04 | 1984-05-04 | フイブリノゲン・フイブリン分解産物の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8849884A JPS60233553A (ja) | 1984-05-04 | 1984-05-04 | フイブリノゲン・フイブリン分解産物の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60233553A true JPS60233553A (ja) | 1985-11-20 |
Family
ID=13944480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8849884A Pending JPS60233553A (ja) | 1984-05-04 | 1984-05-04 | フイブリノゲン・フイブリン分解産物の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60233553A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01147367A (ja) * | 1987-12-03 | 1989-06-09 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 凝血因子の測定方法及び測定用試薬 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5811856A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-22 | Mihama Hisaharu | 抗フラグメントＤγ−２量体血清の製造方法 |
| JPS5880558A (ja) * | 1981-11-09 | 1983-05-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫化学的測定試薬 |
| JPS60185800A (ja) * | 1983-11-14 | 1985-09-21 | ニユ−ヨ−ク ブラツド センタ−，インコ−ポレイテイド | モノクロナ−ル抗体 |
-
1984
- 1984-05-04 JP JP8849884A patent/JPS60233553A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5811856A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-22 | Mihama Hisaharu | 抗フラグメントＤγ−２量体血清の製造方法 |
| JPS5880558A (ja) * | 1981-11-09 | 1983-05-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫化学的測定試薬 |
| JPS60185800A (ja) * | 1983-11-14 | 1985-09-21 | ニユ−ヨ−ク ブラツド センタ−，インコ−ポレイテイド | モノクロナ−ル抗体 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01147367A (ja) * | 1987-12-03 | 1989-06-09 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 凝血因子の測定方法及び測定用試薬 |
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