JPS6034191A - Ｌ−アミノ酸の製造法 - Google Patents
Ｌ−アミノ酸の製造法Info
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- JPS6034191A JPS6034191A JP14113983A JP14113983A JPS6034191A JP S6034191 A JPS6034191 A JP S6034191A JP 14113983 A JP14113983 A JP 14113983A JP 14113983 A JP14113983 A JP 14113983A JP S6034191 A JPS6034191 A JP S6034191A
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- amino acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一般式（１）
キル基、アルアルキル基または置換基を有するこれらの
基を示す） で表わされる化合物のＤＬ−またはＬ一体にシュードモ
ナス属の微生物の培養液、菌体または菌体処理物を作用
せしめることを特徴とする一般式（Ｈ） と同じ） で表わされるＬ−アミノ酸の製造法に関する。
基を示す） で表わされる化合物のＤＬ−またはＬ一体にシュードモ
ナス属の微生物の培養液、菌体または菌体処理物を作用
せしめることを特徴とする一般式（Ｈ） と同じ） で表わされるＬ−アミノ酸の製造法に関する。
Ｌ−アミノ酸は医薬品または医薬品中間体として重要な
化合物であり、また必須アミノ酸として生体維持に必須
の化合物である。
化合物であり、また必須アミノ酸として生体維持に必須
の化合物である。
一般式（ＩＩ）で示されるＬ−アミノ酸を得る方法とし
ては例えばＮ−カルバモイル誘導体からアミノ酸を得る
方法として特開昭５２−ＩＱ６１１１２号に記載されて
いる。しかしこの方法はＤ Ｉ、 −Ｎ−カルバモイル
メチオニンのＬ−カルバモイル基のみを不斉的に加水分
解する能力を有する微生物を利用しており、その他につ
いては全く記載がない。また種々のカルバモイル誘導体
に使用可能であることも示唆されていない。そこで本発
明者等は各種アミノ酸のカルバモイル誘導体に使用可能
な微生物を検索した結果、この条件を満たす菌株を新た
に見出し本発明を完成した。本発明に使用する微生物は
本発明者等により、土じようより新たに分離された菌株
であり。
ては例えばＮ−カルバモイル誘導体からアミノ酸を得る
方法として特開昭５２−ＩＱ６１１１２号に記載されて
いる。しかしこの方法はＤ Ｉ、 −Ｎ−カルバモイル
メチオニンのＬ−カルバモイル基のみを不斉的に加水分
解する能力を有する微生物を利用しており、その他につ
いては全く記載がない。また種々のカルバモイル誘導体
に使用可能であることも示唆されていない。そこで本発
明者等は各種アミノ酸のカルバモイル誘導体に使用可能
な微生物を検索した結果、この条件を満たす菌株を新た
に見出し本発明を完成した。本発明に使用する微生物は
本発明者等により、土じようより新たに分離された菌株
であり。
その菌学的性質は次の如くである。
ａ）形態
■）細胞の形及び大きさ：短稈〜桿菌
０．８〜０５μ×０５〜１．０μ
２）細胞の多形性の有無：な し
３）運動性の有無 ：あ り
鞭毛の着性状態：極鞭毛
４）胞子の有無 ：な し
５）ダラム染色性 ：陰 性
６）抗酸性 ：な し
ｂ）各培地における生育゛状態
■）肉汁寒天平板培養：適度の生育２円形。
凸円状、金縁均質、光
たくあり、半透明２円
滑、ストロ−色〜灰
白色
２）肉汁寒天斜面培養：適度の生育２台状可溶性色素を
生成し ない ３）肉汁液体培地 ：中等の生育、均一に濁る ４）肉汁ゼラチン穿刺培養：液化しない５） リドマス
ミルク ：変化しない Ｃ）生理学的性質 １）硝酸塩の還元 二十 ２）脱窒反応 ニー ８） ＭＲ，テスト ニー ４）ＶＰテスト ニー ５）インドールの生成 ニー ６）硫化水素の生成 ニー ７）デンプンの加水分解ニー ８）クエン酸の利用 ： Ｋｏｓｅｒの培地 十０ｈｒ
ｉｓｔｅｎｓｅｎの培地＋ ９）無機窒素源の利用：硝酸塩 干 アンモニウム塩 ＋ １０）色素の生成 ニー １１） ウレアーゼ ニー １２）オキシダーゼ ：＋ １３）カタラーゼ ：微弱 １４）生育の範囲 ：温度８７℃で成育するが４１℃で
成育しない ｐＨ４〜９ １５）酸素に対する態度：好気性 １６） ＯＦテスト：０ １７）糖からの酸及びガスの生成 酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース −− Ｄ−キシロース − −− Ｄ−クルコース ＋微弱 − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース − − Ｄ−ガラクトース − − 麦芽糖 − ショ 糖 − 乳 糖 −− トレハロース −− Ｄ−ツルピッｉ・−− Ｄ−マンニット −− イノジット − − グリセリン ＋微弱 − デンプン −− ラフィノース −− アトニット − − ラムノース −− １８）グルコン酸の酸化ニー １９） マロン酸の利用 二十 ２０） フェニルアラニンのデアミナーゼ反応ニー２１
） デカルボキシラーゼ活性 リジン ニー オルニチンニー アルジニンニー ２２） アルギニンジヒドロラーゼ反応ニー２３）カゼ
インの分解性 ニー ２４）ＤＮＡの分解性 ニー ２５）アシルアミダーゼ ：＋ ２６） ｐｏｌｙ−β−ヒト和キシ酪酸蓄積の有無：有
２７）栄養要求性 ：な し ２８）耐塩性 ：ＮａＣｌ２％で生育するが５％で生育
しない ２９）炭素源の資化 Ｌ−アラビノース ニー １）−キシロース ニー Ｄ−グルコース ： ＋ Ｄ−フルクトース ニー Ｄ−ガラクトース ニー 麦芽糖 ：一 ショ 糖 ニー トレハロース ニー Ｄ−リボース ニー Ｌ−ラムノース ニー セロビオース ニー アトニット ニー エリスリット ニー ソルビトール ニー グリセロール ：＋ エタノール ニー β−アラニン ニー ＤＬ−アルギニン °− Ｌ−ヒスチジン ：＋ Ｌ−オルニチン ニー Ｌ−スレオニン ：＋ Ｌ−バリン ：十 ギ酸 ニー 酢酸 ：＋ 酪酸 ：＋ ＤＬ−乳酸 二十 プロピオン酸 二十 メン酒石酸 ：＋ Ｄ（＝）酒石酸 ：＋ ｍ−ヒドロキシ安息香酸 ：＋ ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ：＋ グリ５−ル酸 二十 マロン酸 ：＋ コハク酸 ：＋ クエン酸 ：＋ ＤＬ−β−ヒドロキシ酪酸：＋ パントテン酸 ニー レブリン酸 ニー シトラコン酸 ニー ピメリン酸 ニー アゼライン酸 ニー イタコン酸 ニー α−アミルアミン ニー ベタイン ニー プトレッシン ニー ８０）細菌のユビキノン ：Ｑ−８ 以上の菌学的性質をバージーズマニュアルオブデタミネ
ーテブバクテリオロギ−（ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｕａｌ
ｏｆ Ｄｅｔｅｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）（８ｔｈｅｄ）に基いて検索するとＰｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ属に属する。
生成し ない ３）肉汁液体培地 ：中等の生育、均一に濁る ４）肉汁ゼラチン穿刺培養：液化しない５） リドマス
ミルク ：変化しない Ｃ）生理学的性質 １）硝酸塩の還元 二十 ２）脱窒反応 ニー ８） ＭＲ，テスト ニー ４）ＶＰテスト ニー ５）インドールの生成 ニー ６）硫化水素の生成 ニー ７）デンプンの加水分解ニー ８）クエン酸の利用 ： Ｋｏｓｅｒの培地 十０ｈｒ
ｉｓｔｅｎｓｅｎの培地＋ ９）無機窒素源の利用：硝酸塩 干 アンモニウム塩 ＋ １０）色素の生成 ニー １１） ウレアーゼ ニー １２）オキシダーゼ ：＋ １３）カタラーゼ ：微弱 １４）生育の範囲 ：温度８７℃で成育するが４１℃で
成育しない ｐＨ４〜９ １５）酸素に対する態度：好気性 １６） ＯＦテスト：０ １７）糖からの酸及びガスの生成 酸の生成 ガスの生成 Ｌ−アラビノース −− Ｄ−キシロース − −− Ｄ−クルコース ＋微弱 − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース − − Ｄ−ガラクトース − − 麦芽糖 − ショ 糖 − 乳 糖 −− トレハロース −− Ｄ−ツルピッｉ・−− Ｄ−マンニット −− イノジット − − グリセリン ＋微弱 − デンプン −− ラフィノース −− アトニット − − ラムノース −− １８）グルコン酸の酸化ニー １９） マロン酸の利用 二十 ２０） フェニルアラニンのデアミナーゼ反応ニー２１
） デカルボキシラーゼ活性 リジン ニー オルニチンニー アルジニンニー ２２） アルギニンジヒドロラーゼ反応ニー２３）カゼ
インの分解性 ニー ２４）ＤＮＡの分解性 ニー ２５）アシルアミダーゼ ：＋ ２６） ｐｏｌｙ−β−ヒト和キシ酪酸蓄積の有無：有
２７）栄養要求性 ：な し ２８）耐塩性 ：ＮａＣｌ２％で生育するが５％で生育
しない ２９）炭素源の資化 Ｌ−アラビノース ニー １）−キシロース ニー Ｄ−グルコース ： ＋ Ｄ−フルクトース ニー Ｄ−ガラクトース ニー 麦芽糖 ：一 ショ 糖 ニー トレハロース ニー Ｄ−リボース ニー Ｌ−ラムノース ニー セロビオース ニー アトニット ニー エリスリット ニー ソルビトール ニー グリセロール ：＋ エタノール ニー β−アラニン ニー ＤＬ−アルギニン °− Ｌ−ヒスチジン ：＋ Ｌ−オルニチン ニー Ｌ−スレオニン ：＋ Ｌ−バリン ：十 ギ酸 ニー 酢酸 ：＋ 酪酸 ：＋ ＤＬ−乳酸 二十 プロピオン酸 二十 メン酒石酸 ：＋ Ｄ（＝）酒石酸 ：＋ ｍ−ヒドロキシ安息香酸 ：＋ ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ：＋ グリ５−ル酸 二十 マロン酸 ：＋ コハク酸 ：＋ クエン酸 ：＋ ＤＬ−β−ヒドロキシ酪酸：＋ パントテン酸 ニー レブリン酸 ニー シトラコン酸 ニー ピメリン酸 ニー アゼライン酸 ニー イタコン酸 ニー α−アミルアミン ニー ベタイン ニー プトレッシン ニー ８０）細菌のユビキノン ：Ｑ−８ 以上の菌学的性質をバージーズマニュアルオブデタミネ
ーテブバクテリオロギ−（ＢｅｒｇｅｙｓＭａｎｕａｌ
ｏｆ Ｄｅｔｅｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ）（８ｔｈｅｄ）に基いて検索するとＰｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ属に属する。
種について検索すると既知菌種と本菌とでは。
炭素源の資化性において一致しない部分がある。
従って本菌をＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ｓｐ、 ＤＰ−
Ｂ−１０００とした。
Ｂ−１０００とした。
なお、このＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、 Ｓｐ、 ＤＰ−
Ｂ−１０００は微工研菌寄第７１２１号（ＦＥＢＭ Ｐ
−７１２１）として微生物工業技術研究所へ寄託した。
Ｂ−１０００は微工研菌寄第７１２１号（ＦＥＢＭ Ｐ
−７１２１）として微生物工業技術研究所へ寄託した。
本発明に使用する微生物は通常の方法で培養することが
できる。即ち、培地は実施例に示す如く通常液体培地で
行なわれる。培地には１通常微生物が資化しうる炭素源
、窒素源の他無機イオン又はビタミン、アミノ酸等の有
機微量栄養素を添加すると望ましい結果が得られる場合
が多い。
できる。即ち、培地は実施例に示す如く通常液体培地で
行なわれる。培地には１通常微生物が資化しうる炭素源
、窒素源の他無機イオン又はビタミン、アミノ酸等の有
機微量栄養素を添加すると望ましい結果が得られる場合
が多い。
炭素源としてはグルコース等の炭水化物、酢酸等の有機
酸アルコール類、その他が適宜使用される。
酸アルコール類、その他が適宜使用される。
窒素源としては一般的天然窒素源の他、各種の無機酸又
は有機酸のアンモニウム塩等が用いられる。
は有機酸のアンモニウム塩等が用いられる。
無機イオンとしてはＫＨ２ＰＯ４，に２ＨＰＯ，、Ｎａ
Ｈ２ＨＰＯ，、Ｎａ１ｌ、ＫＣＩ、ＭｇＳＯ４及びＦｅ
、 Ｍｎ、 Ｃ。
Ｈ２ＨＰＯ，、Ｎａ１ｌ、ＫＣＩ、ＭｇＳＯ４及びＦｅ
、 Ｍｎ、 Ｃ。
等の重金属イオンが必要に応じ適宜使用される。
培養は好気的条件下にｐＨ４〜９．温度２０−４０℃、
好ましくは３０〜３７℃の範囲に制御しつつ行なえば、
高活性を持つ菌培養物が得られる。
好ましくは３０〜３７℃の範囲に制御しつつ行なえば、
高活性を持つ菌培養物が得られる。
このようにして得た微生物の培養液はそのまま使用する
ことができる。
ことができる。
菌体を培養液から分離しそのまま使用するかあるいは凍
結乾燥し、乾燥菌体としたものを使用してもよい。また
菌体処理物としては固定化菌体、菌体抽出物または菌体
破砕し酵素を取り出し作用させてもよい。
結乾燥し、乾燥菌体としたものを使用してもよい。また
菌体処理物としては固定化菌体、菌体抽出物または菌体
破砕し酵素を取り出し作用させてもよい。
作用方法としては、菌体を使用する場合は、菌体を生理
食塩水に懸濁し、この懸濁液と緩衝液に溶解したカルバ
モイル誘導体とを接触させればよい。また菌体処理物を
使用する場合は例えば、陰イオン交換樹脂で処理して得
た活性画分とカルバモイル誘導体と接触させる。
食塩水に懸濁し、この懸濁液と緩衝液に溶解したカルバ
モイル誘導体とを接触させればよい。また菌体処理物を
使用する場合は例えば、陰イオン交換樹脂で処理して得
た活性画分とカルバモイル誘導体と接触させる。
緩衝液はｐＨ６〜１０の範囲のものであればよいが、ｐ
Ｈ７〜９の緩衝液を使用するのが好ましい。
Ｈ７〜９の緩衝液を使用するのが好ましい。
また９反応温度は２５〜４０℃がよく好ましくは３７℃
である。
である。
反応時間は８〜４８時間の範囲で作用させるのがよい。
本発明に使用可能なカルバモイル誘導体は一般式（１）
で示されるＲがアルキル基、アルアルキル基または置換
基を有するこれらの基によって置換された化合物である
。なお、置換基としてはメルカプト基、ヒドロキシ基、
アミノ基、アシル化アミノ基、カルボキシ基またはイン
ドリル基、ピリジル基、イミダゾリル基のような複素環
等がある。上記の置換基は異なる２つ以上の基が組合さ
れたものでもよい。これらのカルバモイル誘導体は市販
されているものを使用すればよい。
で示されるＲがアルキル基、アルアルキル基または置換
基を有するこれらの基によって置換された化合物である
。なお、置換基としてはメルカプト基、ヒドロキシ基、
アミノ基、アシル化アミノ基、カルボキシ基またはイン
ドリル基、ピリジル基、イミダゾリル基のような複素環
等がある。上記の置換基は異なる２つ以上の基が組合さ
れたものでもよい。これらのカルバモイル誘導体は市販
されているものを使用すればよい。
以上のように本発明は、原料がＤＬ体あるいはＬ体であ
ってもＬ体のアミノ酸を得ることができる。従って分割
操作を必要とせずしかも培養液、菌体または菌体処理物
と原料を接触させる簡単な操作で効率よく目的物が得ら
れ、且つ経済的にも有利な工業的に優れたＬ−アミノ酸
の製造方法である。
ってもＬ体のアミノ酸を得ることができる。従って分割
操作を必要とせずしかも培養液、菌体または菌体処理物
と原料を接触させる簡単な操作で効率よく目的物が得ら
れ、且つ経済的にも有利な工業的に優れたＬ−アミノ酸
の製造方法である。
次に実施例で本発明を説明する。
実施例１）
グルコース２０ ｆ／乙酵母エキスＦＶＩｔ、ペグ１−
ン５Ｐ／１．肉エキス２ｆｔ／ｌ、硫酸第一鉄（Ｆｅ８
０４、 ？Ｈ，，Ｏ） ８ｍｇ）／７１及び硫酸−７７
が７（ＭｍＳｏ４．５Ｈ，、Ｏ） １０ｍｇ／ｌを含む
培地（ｐＨ７，０）を５００ ｍｌ容フラスコに１００
ｍｌ入れ、１２１℃に１５分間滅菌した。
ン５Ｐ／１．肉エキス２ｆｔ／ｌ、硫酸第一鉄（Ｆｅ８
０４、 ？Ｈ，，Ｏ） ８ｍｇ）／７１及び硫酸−７７
が７（ＭｍＳｏ４．５Ｈ，、Ｏ） １０ｍｇ／ｌを含む
培地（ｐＨ７，０）を５００ ｍｌ容フラスコに１００
ｍｌ入れ、１２１℃に１５分間滅菌した。
これにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、 Ｓｐ、 ＤＰ−Ｂ
−１０００を接種し、３０℃で４８時間振盪培養した。
−１０００を接種し、３０℃で４８時間振盪培養した。
この培養液 ぞより菌体を遠心分離により採取し、培養
液と同量の生理食塩水で２回洗浄後再び生理食塩水に湿
重量で２００ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁した。この菌
体懸濁液に２０ｍｇ／ｍｌのＤＬ−Ｎ−カルバモイルト
リプトファンを含む０．４Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，０）
を等量加え、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルトリプトファン１
０ ｍ９７ｍ１ 、！：なるよう調整し、３７℃にて４
８時間保温し反応させた。生成したＬ−トリプトファン
をバイオアッセイ法にて定量したところ３５ｍｙ／ｍｌ
（収率４２８％）であった。
液と同量の生理食塩水で２回洗浄後再び生理食塩水に湿
重量で２００ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁した。この菌
体懸濁液に２０ｍｇ／ｍｌのＤＬ−Ｎ−カルバモイルト
リプトファンを含む０．４Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９，０）
を等量加え、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルトリプトファン１
０ ｍ９７ｍ１ 、！：なるよう調整し、３７℃にて４
８時間保温し反応させた。生成したＬ−トリプトファン
をバイオアッセイ法にて定量したところ３５ｍｙ／ｍｌ
（収率４２８％）であった。
実施例２）
実施例１）と同一の菌体懸濁液に２０ｍｇ／ｍｌのＬ
Ｎ ｆ）ルハモイルトｌ）ブトファンを含む０４Ｍ炭酸
緩衝液（ｐＨ９，０）を等量加えて、Ｌ−Ｎ−カルバモ
イルトリプトファンが１０ ｍ９７ｍ１となるように調
整し、８７℃にて４８時間保温し反応させた。生成した
Ｌ−トリプトファンをバイオアッセイ法にて定量したと
ころ８．８ｍｇ／ｍｌ（収率９゜％）であった。
Ｎ ｆ）ルハモイルトｌ）ブトファンを含む０４Ｍ炭酸
緩衝液（ｐＨ９，０）を等量加えて、Ｌ−Ｎ−カルバモ
イルトリプトファンが１０ ｍ９７ｍ１となるように調
整し、８７℃にて４８時間保温し反応させた。生成した
Ｌ−トリプトファンをバイオアッセイ法にて定量したと
ころ８．８ｍｇ／ｍｌ（収率９゜％）であった。
邸施例８）
実施例１）と同一の菌体懸濁液に２０ｍｇ／ｍｌのＤＬ
−Ｎ−カルバモイルフェニルアラニンを含む０．４Ｍ炭
酸緩衝液を等惜別えＤＬ−Ｎ−カルバモイルフェニルア
ラニンが１０ ｍｇ／ｍｌとなるように調整し３７℃に
て４８時間保温反応した。生成したＬ−フェニルアラニ
ンをバイオアッセイ法にて定量したところ８．３ｍｇ／
ｍｅ（収率４１．６％）であった。
−Ｎ−カルバモイルフェニルアラニンを含む０．４Ｍ炭
酸緩衝液を等惜別えＤＬ−Ｎ−カルバモイルフェニルア
ラニンが１０ ｍｇ／ｍｌとなるように調整し３７℃に
て４８時間保温反応した。生成したＬ−フェニルアラニ
ンをバイオアッセイ法にて定量したところ８．３ｍｇ／
ｍｅ（収率４１．６％）であった。
実施例４）
実施例１）と同一の菌体懸濁液に２０ｍｇ／ｍｌのＤＬ
−Ｎ−ツノルバモイルバリンヲ含ｔＪ” ４Ｍ炭酸緩衝
液を等惜別え、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルバリンが１０ｍ
ｇ／ｍｌとなるよう調整し、３７℃にて４８時間保温反
応した。生成したＬ−バリンをノ〈イオアノセイ法にて
走部したところ２．１． ｍｇ／ｍｌ （収率２８７％
）であった。
−Ｎ−ツノルバモイルバリンヲ含ｔＪ” ４Ｍ炭酸緩衝
液を等惜別え、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルバリンが１０ｍ
ｇ／ｍｌとなるよう調整し、３７℃にて４８時間保温反
応した。生成したＬ−バリンをノ〈イオアノセイ法にて
走部したところ２．１． ｍｇ／ｍｌ （収率２８７％
）であった。
実施例５）
実施例１）と同一の菌体懸濁液に２ｏｍｇ／ｍｌのＤＬ
−Ｎ−カルバモイルロイシンを含む０４Ｍ炭酸緩衝液を
等惜別えＤ Ｌ −Ｎ−カルバモイルロイシンが１０ｍ
ｇ／ｍｌとなるよう調整し、８７℃にて４８時間保温反
応した。生成したＩ、−ロイシンをバイオアッセイ法に
て定量したところ２〜／ｍｌ （収率２６６％）であっ
た。
−Ｎ−カルバモイルロイシンを含む０４Ｍ炭酸緩衝液を
等惜別えＤ Ｌ −Ｎ−カルバモイルロイシンが１０ｍ
ｇ／ｍｌとなるよう調整し、８７℃にて４８時間保温反
応した。生成したＩ、−ロイシンをバイオアッセイ法に
て定量したところ２〜／ｍｌ （収率２６６％）であっ
た。
実施例６）
グリセリン４１／ｌ、パフ０トン１０ｆｉ’／Ａ’、肉
エキス１１−／Ｃ食塩２ｆｉ−／ｌを含む培地（ｐＨ７
０）を５００ｍ１のマイヤーフラスコ４４本に夫々１０
０ｍ１づつ入れ１２１．’Ｃ，１５分間滅菌した。
エキス１１−／Ｃ食塩２ｆｉ−／ｌを含む培地（ｐＨ７
０）を５００ｍ１のマイヤーフラスコ４４本に夫々１０
０ｍ１づつ入れ１２１．’Ｃ，１５分間滅菌した。
これにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 ＤＰ−Ｂ−１
０００を接種し３０℃で４８時間振盪培養した。
０００を接種し３０℃で４８時間振盪培養した。
この培養液より菌体を遠心分離により採取し。
培養液上同量の生理食塩水にて２回洗浄後、再び生理食
塩水に湿重量で２００ｍｙ／ｍｌとなるように懸濁した
。この懸濁液に２（Ｊｙ−／ｌのＤ Ｌ−Ｎ−カルバモ
イルトリプトファンを含む、０．２５Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，６）を１．６５１を加え３７℃にて７時間反応
を行なった。反応終了後バイオアッセイにて４．１ｇ−
／ＶのＬ−トリプトファン認めた（収率４９６％）。
塩水に湿重量で２００ｍｙ／ｍｌとなるように懸濁した
。この懸濁液に２（Ｊｙ−／ｌのＤ Ｌ−Ｎ−カルバモ
イルトリプトファンを含む、０．２５Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７，６）を１．６５１を加え３７℃にて７時間反応
を行なった。反応終了後バイオアッセイにて４．１ｇ−
／ＶのＬ−トリプトファン認めた（収率４９６％）。
反応液を５０％トリクロル酢酸にてｐＨ８．０とし遠心
分離して菌体を除き，上清を陽イオン交換樹脂（アンバ
ーライトＩＲ１２０Ｈ型）に吸着。
分離して菌体を除き，上清を陽イオン交換樹脂（アンバ
ーライトＩＲ１２０Ｈ型）に吸着。
水洗後者アンモニア水にて溶出して得られるＬ−トリプ
トファン溶液を濃縮結晶させた。Ｌ−トリプトファンの
結晶６．８ｇ−（単純収率７２％）を得， Ｔ Ｌ Ｏ
ニＴ １ 、２．ボ， ト（α）：０− ２９．１ （
０−ｌ，）（□０）であった。
トファン溶液を濃縮結晶させた。Ｌ−トリプトファンの
結晶６．８ｇ−（単純収率７２％）を得， Ｔ Ｌ Ｏ
ニＴ １ 、２．ボ， ト（α）：０− ２９．１ （
０−ｌ，）（□０）であった。
実施例７）
グルコース２ ０ ｆ／ｌ，酵母エキス５ｆｔ／ｌ，ペ
プトン５ Ｖ／１．肉エキス２ｆｌ／ｌ，ＦｅＳＯ４−
７Ｈ２０ Ｂｍｑ／ｌ！， Ｍｎ ８０， ５Ｈ２０
’ＬＯｍｇ／ｌを含む培地（ｐＨ７．０）を５１容ジ
ャーファーメンタ−に３１入れ，１２１°Ｃ１５分間滅
菌した。これにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ． ｓｐ． Ｄ
Ｐ−Ｂ−１０００を接種し，３０℃で２０時間通気かく
はん培養した。
プトン５ Ｖ／１．肉エキス２ｆｌ／ｌ，ＦｅＳＯ４−
７Ｈ２０ Ｂｍｑ／ｌ！， Ｍｎ ８０， ５Ｈ２０
’ＬＯｍｇ／ｌを含む培地（ｐＨ７．０）を５１容ジ
ャーファーメンタ−に３１入れ，１２１°Ｃ１５分間滅
菌した。これにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ． ｓｐ． Ｄ
Ｐ−Ｂ−１０００を接種し，３０℃で２０時間通気かく
はん培養した。
この培養液より菌体を遠心分離により採取し。
培養液と同量の生理食塩水で１回洗浄した後。
Ｌ６ｒｒｔ．／ｌβメルロプトエタノール５０ｍ９／ｌ
。
。
フェニルメチルスルホニルフルオライド、１８０ｍ９／
Ｉｔソジウムアザイドを含む，１０ｍＭｌ−リス緩衝液
（ｐＨ７．４）に湿重量にて５００ｍ９７ｍｌとなるよ
うに懸濁した。
Ｉｔソジウムアザイドを含む，１０ｍＭｌ−リス緩衝液
（ｐＨ７．４）に湿重量にて５００ｍ９７ｍｌとなるよ
うに懸濁した。
この菌体懸濁液にリゾチームを加えた後，超音波処理を
行ない菌体破砕液を得た。この菌体破砕液を１００ＯＯ
ＸＧで１０分間遠心し上清を得た。この上清を２０ｍＭ
トリス緩衝液（ｐＨ７．４）にて平衡化した。
行ない菌体破砕液を得た。この菌体破砕液を１００ＯＯ
ＸＧで１０分間遠心し上清を得た。この上清を２０ｍＭ
トリス緩衝液（ｐＨ７．４）にて平衡化した。
陰イオン交換樹脂ＱＡＥセファデックスＡ−５０に吸着
させ，緩衝液中のイオン濃度を上昇させることにより活
性画分を回収した。
させ，緩衝液中のイオン濃度を上昇させることにより活
性画分を回収した。
コノ活性画分ｚｍｌに２ ０ ｍｙ／ｍｌのＬ − Ｎ
カルバモイルトリプトファン溶液を２ｍｌ加え， ３７
℃２０時間反応させた。
カルバモイルトリプトファン溶液を２ｍｌ加え， ３７
℃２０時間反応させた。
生成したＬ − １− ＩＪブトファン溶液をＴＬＣ及
びバイオアッセイ法にて測定したところ，２８ｍｇ（収
率８５％）のほとんど純粋なＴ， − １− ＩＪブト
ファンが含まれていた。
びバイオアッセイ法にて測定したところ，２８ｍｇ（収
率８５％）のほとんど純粋なＴ， − １− ＩＪブト
ファンが含まれていた。
実施例８）
実施例１）と同様の方法で調製したＰｓｅｕｄｏ−ｍｏ
ｎａｓ． ｓｐ． ＤＰ−Ｂ−１０００洗浄菌体８ｇ−
を０２Ｍトリス緩衝液（ ｐＨ８．９ ） １０ ｍｉ
に懸濁させ。
ｎａｓ． ｓｐ． ＤＰ−Ｂ−１０００洗浄菌体８ｇ−
を０２Ｍトリス緩衝液（ ｐＨ８．９ ） １０ ｍｉ
に懸濁させ。
これにアクリルアミドモノマー？、２７． ＮＮ’−メ
チレンビスアクリルアミド０．８７．１０％ＮＮＮ’Ｎ
′テトラメチルエチレンジアミン溶液０１ｍ１゜０１４
％過硫酸アンモニウム溶液１５ｍ１を加えて混合した後
、室温に一時間放置し２ケル化を行なわせた。
チレンビスアクリルアミド０．８７．１０％ＮＮＮ’Ｎ
′テトラメチルエチレンジアミン溶液０１ｍ１゜０１４
％過硫酸アンモニウム溶液１５ｍ１を加えて混合した後
、室温に一時間放置し２ケル化を行なわせた。
得られたゲルを破砕し、カラム（３×３０ｃＩｎ）に充
填した後、Ｌ−Ｎカルバミルトリプトファンを５％（Ｗ
／Ｖ）含む水溶液をカラム上端より２００ｍ１／ｄａｙ
の流速：温度８７℃で流した。
填した後、Ｌ−Ｎカルバミルトリプトファンを５％（Ｗ
／Ｖ）含む水溶液をカラム上端より２００ｍ１／ｄａｙ
の流速：温度８７℃で流した。
この連続反応で反応時間５時間以上でＬ −１−ＩＪブ
トファンの収率は８０％以上に保たれた。
トファンの収率は８０％以上に保たれた。
Claims (2)
- （１）一般式（＋） （但し、Ｒはアルキル基、アルアルキル基または置換基
を有するこれらの基を示す）で表わされる化合物のＤ
Ｌ−またはＬ一体にシュードモナス属の微生物の培養液
、菌体または菌体処理物を作用せしめることを特徴とす
る一般式（Ｉｔ） ＩＪ２ （但し１式中Ｒは前記と同じ） で表わされるＬ−アミノ酸の製造法 - （２）Ｒがベンジル基、インドリルメチル基、イソブチ
ル基またはイソプロピル基である特許請求の範囲第（１
）項記載のＬ−アミノ酸の製造法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14113983A JPS6034191A (ja) | 1983-08-03 | 1983-08-03 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14113983A JPS6034191A (ja) | 1983-08-03 | 1983-08-03 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6034191A true JPS6034191A (ja) | 1985-02-21 |
Family
ID=15285072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14113983A Pending JPS6034191A (ja) | 1983-08-03 | 1983-08-03 | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6034191A (ja) |
-
1983
- 1983-08-03 JP JP14113983A patent/JPS6034191A/ja active Pending
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