JPS60363A - 新規な抗原定量法 - Google Patents
新規な抗原定量法Info
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- JPS60363A JPS60363A JP9665083A JP9665083A JPS60363A JP S60363 A JPS60363 A JP S60363A JP 9665083 A JP9665083 A JP 9665083A JP 9665083 A JP9665083 A JP 9665083A JP S60363 A JPS60363 A JP S60363A
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- complement
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- G—PHYSICS
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- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗原を定量する方法に関するものである
。
。
近年医掠分野においては病気の診断等のため抗原等を高
い信頼性をもって簡便迅速に定量することが極めて重要
な課題となっている。
い信頼性をもって簡便迅速に定量することが極めて重要
な課題となっている。
従来免疫化学的ｊｉｌｊ定法による抗原の定量法として
は、放射化免ｖ ′６＋＋＋定法（ラジオイムノアッセ
イ）（Ａ）、酵素免疫測定法（Ｂ）、逆受身赤血球凝集
反応法（Ｃ）、及び−元放射状免疫拡散法の）等によシ
行われているが、これらの定量方法は夫々次の如き欠点
を有するものであった。
は、放射化免ｖ ′６＋＋＋定法（ラジオイムノアッセ
イ）（Ａ）、酵素免疫測定法（Ｂ）、逆受身赤血球凝集
反応法（Ｃ）、及び−元放射状免疫拡散法の）等によシ
行われているが、これらの定量方法は夫々次の如き欠点
を有するものであった。
Ａ方法：洗浄操作を必要とし、またラジオアイソトープ
を使用するため特別の設 備を必要とする等莫大な設備費と繁 雑な手数を要する。
を使用するため特別の設 備を必要とする等莫大な設備費と繁 雑な手数を要する。
Ｂ方法ニ一般的に洗浄の操作を必要とし且つ判定までに
長時間を要する。
長時間を要する。
Ｃ方法：ダイリマータにて試料を２倍に階段希釈する操
作及びドロッパーにて希 釈液等を滴下する操作を必要とする ため繁雑な手数を要する。又判定ま でに長時間を要すると共に抗原量を ２倍階段希釈の終末値で判定するた め雑駁な測定になるおそれがある。
作及びドロッパーにて希 釈液等を滴下する操作を必要とする ため繁雑な手数を要する。又判定ま でに長時間を要すると共に抗原量を ２倍階段希釈の終末値で判定するた め雑駁な測定になるおそれがある。
Ｄ方法：判定までに多大な時間を要すると共に感度的に
不十分である。
不十分である。
本発明はかかる欠点を改善せんとして鋭意研究を行った
結果、感度よくしかも簡便迅速に抗原を定量する方法を
見出したものである。即ち本発明方法は釉を異にする２
種類の抗体の内、一方の抗体を結合させた赤血球浮遊液
に抗原を添加した後、更に他方の抗体と補体を添加して
反応せしめることにより赤血球の溶血現象が生じ、かか
る赤血球の溶血にょシヘモクロビン等の赤血球内成分が
遊離してくる。この遊１１７ｆ： したヘモクロビン等
の赤血球内成分を測定することによって間接的に抗原を
定量する方法である。
結果、感度よくしかも簡便迅速に抗原を定量する方法を
見出したものである。即ち本発明方法は釉を異にする２
種類の抗体の内、一方の抗体を結合させた赤血球浮遊液
に抗原を添加した後、更に他方の抗体と補体を添加して
反応せしめることにより赤血球の溶血現象が生じ、かか
る赤血球の溶血にょシヘモクロビン等の赤血球内成分が
遊離してくる。この遊１１７ｆ： したヘモクロビン等
の赤血球内成分を測定することによって間接的に抗原を
定量する方法である。
本発明方法は、一方の抗体を結合させた赤血球浮遊液に
、抗原を添加するが、この段階で抗原抗体反応がおこり
、補体の添加によって補体結合反応による溶血現象が生
ずるものと考えられるが、溶血現象は生じなかった。し
かし、更に他方の抗体を反応せしめることにより初めて
補体結合反応による溶血現象が生ずることを見出したも
のである。
、抗原を添加するが、この段階で抗原抗体反応がおこり
、補体の添加によって補体結合反応による溶血現象が生
ずるものと考えられるが、溶血現象は生じなかった。し
かし、更に他方の抗体を反応せしめることにより初めて
補体結合反応による溶血現象が生ずることを見出したも
のである。
本発明方法において定量できる抗原の独類としては、例
えばα−フェトプロティン、Ｔ３゜Ｔ４ ｒ ＨＢｓ
、免疫グロブリンＧ、免疫グロブリンＭ、ミオグロビン
などをあげることができるが、しかしこれらの抗原に限
定されるもので杖なく抗原抗体反応に補体が１与するず
べての種類の抗原を定量しうるものである。
えばα−フェトプロティン、Ｔ３゜Ｔ４ ｒ ＨＢｓ
、免疫グロブリンＧ、免疫グロブリンＭ、ミオグロビン
などをあげることができるが、しかしこれらの抗原に限
定されるもので杖なく抗原抗体反応に補体が１与するず
べての種類の抗原を定量しうるものである。
又本発明方法において赤血球に抗体を結合させる場合赤
血球に化学的に吸着させるのが好ましい。赤血球にかか
る抗体を担持させる方法はすでに多くの方法が提案され
ている。例えばタンニンｒＬ塩化クロム、水溶性カルボ
ジイミド、等による方法である。
血球に化学的に吸着させるのが好ましい。赤血球にかか
る抗体を担持させる方法はすでに多くの方法が提案され
ている。例えばタンニンｒＬ塩化クロム、水溶性カルボ
ジイミド、等による方法である。
又本発明方法において使用する赤血球は限定されるもの
ではなく如何なる種類の赤血球でもよい。然し定量の感
度を高めるためには補体結合反応による溶血現象が生じ
やすい赤血球、例えば羊赤血球等が好ましい。
ではなく如何なる種類の赤血球でもよい。然し定量の感
度を高めるためには補体結合反応による溶血現象が生じ
やすい赤血球、例えば羊赤血球等が好ましい。
又本発明方法において補体の種類は、特に限定されるも
のではなく補体活性の高い補体が望ましい。例えばモル
モット補体等である。
のではなく補体活性の高い補体が望ましい。例えばモル
モット補体等である。
而して本発明方法と従来の補体結合反応試験とはどのよ
うに異るのかについて説明する。補体結合反応試験は抗
原定量法或いは抗体定量−法として従来から知られてい
る方法である。即ち抗原に抗体が結合すると抗体分子に
分子変容がおこｐ抗体に補体が結合し活性化消費される
。
うに異るのかについて説明する。補体結合反応試験は抗
原定量法或いは抗体定量−法として従来から知られてい
る方法である。即ち抗原に抗体が結合すると抗体分子に
分子変容がおこｐ抗体に補体が結合し活性化消費される
。
これを補体結合反応という。この反応を利用し消費され
た補体量から間接的に抗原抗体反応の強さを知ることが
できる。例えば抗原量を一定にしておけば抗体量を、抗
体：ｉｌ（を一定にしておけば抗原量を測定することが
できる。抗原抗体反応による補体の消費は羊赤血球に対
する抗体が結合した羊赤血球の溶血を指標とする。従来
の補体結合反応試験では、このような抗原抗体反応に消
費された残シの補体による羊赤血球に対する抗体が結合
した羊赤血球の溶血から抗原或は抗体を定員するもので
ある。然し本発明方法は直接赤血球の表面で定量せんと
する抗原と抗体を反応させ、補体結合反応による赤血球
の溶血現象から間接的に抗原を定量するものである。
た補体量から間接的に抗原抗体反応の強さを知ることが
できる。例えば抗原量を一定にしておけば抗体量を、抗
体：ｉｌ（を一定にしておけば抗原量を測定することが
できる。抗原抗体反応による補体の消費は羊赤血球に対
する抗体が結合した羊赤血球の溶血を指標とする。従来
の補体結合反応試験では、このような抗原抗体反応に消
費された残シの補体による羊赤血球に対する抗体が結合
した羊赤血球の溶血から抗原或は抗体を定員するもので
ある。然し本発明方法は直接赤血球の表面で定量せんと
する抗原と抗体を反応させ、補体結合反応による赤血球
の溶血現象から間接的に抗原を定量するものである。
従来の補体結合反応試験では抗原抗体反応に消費された
残シの補体による羊赤血球に対する抗体が結合した羊赤
血球の溶血を指標とするため補体量が一定でなければな
らず、被検血清中の既存の補体の影響をなくすために５
６℃、３０分間非動化を行わなければならない。そのた
め熱に不安定な抗原の定量には使用することができなか
った。然し本発明方法においでは補体は一定以上であれ
ばよく被検血清中の既存の補体の影響がなく非動化を要
せず熱に不安定な抗原でも定量することができる。更に
従来の補体結合反応試験では被検血清を２倍階股省）釈
するなどの繁雑な操作を心太とし且つ判定までに長時間
を要するが、本発明方法においでは２倍階段希釈などの
操作を心安とせず簡便迅速に抗原を定量することができ
る。
残シの補体による羊赤血球に対する抗体が結合した羊赤
血球の溶血を指標とするため補体量が一定でなければな
らず、被検血清中の既存の補体の影響をなくすために５
６℃、３０分間非動化を行わなければならない。そのた
め熱に不安定な抗原の定量には使用することができなか
った。然し本発明方法においでは補体は一定以上であれ
ばよく被検血清中の既存の補体の影響がなく非動化を要
せず熱に不安定な抗原でも定量することができる。更に
従来の補体結合反応試験では被検血清を２倍階股省）釈
するなどの繁雑な操作を心太とし且つ判定までに長時間
を要するが、本発明方法においでは２倍階段希釈などの
操作を心安とせず簡便迅速に抗原を定量することができ
る。
次に本発明の実施例について説明する。
実施例（１）
ヒトα−フェトプロティンの定量において、生理食塩液
で洗浄した羊赤血球沈査１容に、塩化りｏ ム（０，４
ｍ９／’ｎ’ ） ２容と抗ヒトα−７エトグロテイン
ヤギ抗体（タン／ｆり１４００μｇ／ｒｎｌ ）２容と
を混合し室温で３０分間反応させた後、生理食塩液で洗
浄し８％の浮遊液とした。この抗体感作羊赤血球浮遊液
５０μｔに種々の濃度のヒトα−フェトプロティンを含
む試料５０μを及び抗ヒトα−フェトプロティンウサギ
抗体５０μｔを添加し、更にペロナール緩衝液にて１０
０倍に希釈したモルモット補体３．Ｑｍｒを加え３７℃
にて３０分間反応させた後、低速遠心を行って上澄のヘ
モクロビンの吸光度（４１６ｎｍ ）を測定した。
で洗浄した羊赤血球沈査１容に、塩化りｏ ム（０，４
ｍ９／’ｎ’ ） ２容と抗ヒトα−７エトグロテイン
ヤギ抗体（タン／ｆり１４００μｇ／ｒｎｌ ）２容と
を混合し室温で３０分間反応させた後、生理食塩液で洗
浄し８％の浮遊液とした。この抗体感作羊赤血球浮遊液
５０μｔに種々の濃度のヒトα−フェトプロティンを含
む試料５０μを及び抗ヒトα−フェトプロティンウサギ
抗体５０μｔを添加し、更にペロナール緩衝液にて１０
０倍に希釈したモルモット補体３．Ｑｍｒを加え３７℃
にて３０分間反応させた後、低速遠心を行って上澄のヘ
モクロビンの吸光度（４１６ｎｍ ）を測定した。
その結果は第１図に示す通９であシ、ヒトα−フェトプ
ロティンの嬌度と吸光度との直線関係ニよってヒトα−
フェトプロティンを定量することができる。
ロティンの嬌度と吸光度との直線関係ニよってヒトα−
フェトプロティンを定量することができる。
実施例（２）
ヒト免疫グロブリンＧの定量において、生理食塩液で洗
浄した羊赤血球沈査１容に、塩化クロム（０，４ｍ９／
ｍｌ ） ２容と抗ヒト免疫グロブリンＧ（γ−鎖特
異性）羊抗体（タンＩ？り量４００μｇ ／ｍｌ ）
２容を混合し、室温で３０分間反応させた後、生理食塩
液で洗浄して８チの浮遊液とした。この抗体感作羊赤血
球浮遊液５０μｔに、種種の濃度のヒト免疫グロブリン
Ｇを含む試料５０μを及び抗ヒト免疫グロブリンＧ（γ
−鎖ｔ１￥異性）ウサギ抗体５０μｔを添加し、更にペ
ロナール緩衝液にて１００倍に希釈したモルモット補体
３．Ｏｍｌを加えた後、低速遠心を＜ｊっで上７１子の
ヘモクロビンの吸光度（４１６ｎｍ ）を測定した。
浄した羊赤血球沈査１容に、塩化クロム（０，４ｍ９／
ｍｌ ） ２容と抗ヒト免疫グロブリンＧ（γ−鎖特
異性）羊抗体（タンＩ？り量４００μｇ ／ｍｌ ）
２容を混合し、室温で３０分間反応させた後、生理食塩
液で洗浄して８チの浮遊液とした。この抗体感作羊赤血
球浮遊液５０μｔに、種種の濃度のヒト免疫グロブリン
Ｇを含む試料５０μを及び抗ヒト免疫グロブリンＧ（γ
−鎖ｔ１￥異性）ウサギ抗体５０μｔを添加し、更にペ
ロナール緩衝液にて１００倍に希釈したモルモット補体
３．Ｏｍｌを加えた後、低速遠心を＜ｊっで上７１子の
ヘモクロビンの吸光度（４１６ｎｍ ）を測定した。
その結果は第２図に示す通りであシ、ヒト免疫グロブリ
ンＧの濃度と吸光度との白線関係によってヒト免疫グロ
ブリンＧを定量することができる。
ンＧの濃度と吸光度との白線関係によってヒト免疫グロ
ブリンＧを定量することができる。
以上詳述した如く本発明方法によれば優れた感度を有し
且つ簡便迅速に抗原を定量しうる等顕著な効果を有する
。
且つ簡便迅速に抗原を定量しうる等顕著な効果を有する
。
ヒトα−フェトプロティンの濃度と吸光度との関係説明
図、第２図は本発明新規な抗原の定ｈ（。
図、第２図は本発明新規な抗原の定ｈ（。
法においてヒト免疫グロブリンＧの両度と吸光度との関
イ（、説明図である。
イ（、説明図である。
Claims (1)
- 種を異にする２種類の抗体の内、一方の抗体を結合させ
た赤血球浮遊液に、抗原ヲ除加した後、更に他方の抗体
と補体を添加して反応せしめることによシ赤血球を溶血
させ、該溶血現象から間接的に抗原を定量することを特
徴とする新規な抗原定量法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9665083A JPH0230664B2 (ja) | 1983-05-31 | 1983-05-31 | Shinkinakogenteiryoho |
| EP84106070A EP0132537A1 (en) | 1983-05-31 | 1984-05-28 | Immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9665083A JPH0230664B2 (ja) | 1983-05-31 | 1983-05-31 | Shinkinakogenteiryoho |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60363A true JPS60363A (ja) | 1985-01-05 |
| JPH0230664B2 JPH0230664B2 (ja) | 1990-07-09 |
Family
ID=14170702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9665083A Expired - Lifetime JPH0230664B2 (ja) | 1983-05-31 | 1983-05-31 | Shinkinakogenteiryoho |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0230664B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03100466A (ja) * | 1989-09-13 | 1991-04-25 | Agency Of Ind Science & Technol | 化学増幅型化学発光免疫測定法 |
-
1983
- 1983-05-31 JP JP9665083A patent/JPH0230664B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03100466A (ja) * | 1989-09-13 | 1991-04-25 | Agency Of Ind Science & Technol | 化学増幅型化学発光免疫測定法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0230664B2 (ja) | 1990-07-09 |
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