JPS6062986A - 新規物質ｃ−１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規物質ｃ−ｉに関する。Ｃ−１物質は、スト
レプトミセス属放線菌、例えばストレゾグ トミセス・ヂリゼオイン力ルナタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｎ
ｙｃａｓｇｒｌｓｅｏｉｎｃａｒｎａｔｕｓ）　ＡＪ９
４２４（ＦＥＲＭ−Ｐ２Ｏ３２）等の培養液中に存在し
、制癌活性を有し、動物医薬等に使用できる。

Ｃ−１物質を製造する方法はストレプトミセス・グリゼ
オインカルナタス等のストレプトミセス属のＣ−１物質
を生産する能力を有する微生物を培養し生成蓄積された
Ｃ−１物質を培養液よシ採取すれば良い。

これら微生物を用いてＣ−１物質を培養液中に生成蓄積
せしめるには炭素源、窒素源、無機イオン等を含有する
通常の培地を用い、常法によシ培養すれば良い。炭素源
としてはグルコース、フラクトース、マルトース、ラム
ノース、グリセロール、キシロース、ラクトース、シュ
ークロース、スターチ等の糖類、エタノール、ソルビト
ール等のアルコール類、酢酸等の有機酸が使用できる。

窒素源としてはアンモニウムイオンのほか、アミノ酸、
蛋白質及びこれらを含有する酵母エキス、カゼイン加水
分解物等が使用できる。培地には必要によルカリイオン
、リン酸イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオ
ン、銅イオン、亜鉛イオン、マンガンイオン、鉄イオン
等の無機イオンを添加する。

培養は好気的条件下で行うのが良＜　ｐＨ４から９の範
囲の適当なｐＨＫ調節しつつ培養すればよシ好ましい結
果が得られる。培養温度は２５℃から３８℃の範囲が好
ましい。

培養液よシＣ−１物質を分離精製する方法は酸性下培養
液よシ水に混和しないシタノール、酢酸エチル等の有機
溶媒による溶媒抽出法、シリカグア ル、ヱンパーライトＸＡＤ等の吸着クロマトグラフィー
、セファデックスＬＨ−２０クロマトグラフィー、マイ
クロボンタハックＣ４８、リクロソルブＲＰ　−８等の
逆相分配クロマトグラフィー等の通常の抗生物質の分離
、精製に使用できる方法が適用できる。

捷た、Ｃ−１物質は精製されたＡＮ−７Ｄ　（特開昭５
６−８９３１６）’ｆ−穏やかな条件で分解しても得る
ことができる。すなわち、ＡＮ−７Ｄ粉末を非極性有機
溶媒例えばメタノール、エタノール、プロパツール、ブ
タノール等に懸濁し、攪拌すると、有機溶媒に溶解され
てくる。さらにこの有機溶媒に含まれるＣ−１物質は前
述と同様の方法によシ精製される。

かくして得られたＣ−１物質は、クロロホルムとメタノ
ール（１：１）の混液を展開溶媒としてシリカダル薄層
クロマトグラフィーを行うとＲｆ値０．２６に単一の紫
外部吸収を有するスポッｌｆ与える。そして以下に示す
性質を示す。

（イ）形状：淡赤色粉末 （ロ）　分子量：　４１０　（ＦＤ−ＭＳ法）；第片図
に示す通シ（ハ）　’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第四図
に示す通シに）　Ｃ−ＮＭＲ−Ｘ、ベクトル：第斂図に
示す通シ（へ）溶解性：水に離溶、メタノール、エタノ
ール、ブタノール、酢酸エチルに可溶 （へ）　ＵＶスペクトル：第四図に示した通シ（））　
バチルス・ズブチリスＡＴＣＣ６６３３、サルシナ・ル
テアＡＴＣＣ９３４１，スタヒロコッカス・アウレウス
ＦＤＡ２０９Ｐに抗菌活性を有するが、エシェリヒア・
コリＡＴＣＣ１０７９８，シュードモナス・エルギノザ
ＡＴＣＣＩ　Ｏ１４５に対する抗菌活性は微弱である。

に）セミアンビールス４０で癌化したマウス線維芽細胞
３Ｔ３の増殖を強く抑制する。

本物質は１Ｈ’−ＮＭＲのスペクトル（第２図）の３、
５５　ｐｐｍで（、）のシグナルよジメトキシ基を有し
、７．５ｐｐｍ付近のシグナルよシ芳香項ヲ有している
。

制癌物質としては、ネオカルチノスタチンから得られた
ＮＣ３−Ｃ物質（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　３３　
。

３４７〜３５１（１９８０））、及びカルチノフイリン
よシ得られた物質（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ｒ　
２２　ｒ４２〜４４．（１９６９））が知られているが
、本発明のＣ−１物質は前記物質と分子量が異なシ新規
物質である。

実施例 （１）Ｃ−１物質の製造例 第１表に示した培地Ａの２０ｍ１１５００ｍノ容肩付フ
ラスコに入れ殺菌した。ストレプトミセス・グリゼオイ
ンカルナタスＡＪ９４２４を接種し、３０℃で２４時間
培養し、−次種母培養液を得た。一方第１表に培地Ａの
２０ｔを５０を容発酵槽に入れ殺菌した。これに−次種
母培養液２ｔを接種して３０℃で２４時間好気的条件で
培養し二次種母培養液２０１を得た。次いで第１表に示
した培地Ｂの２８０１’ｚ３００を容発酵槽に入れ殺菌
した。

これに二次種母培養液２０ｔ’ｚ接種して３０℃で５０
時間好気的条件下で培養した。得られた培養液３００ｔ
を遠心分離して除菌後、減圧下濃縮して６０ｔとした。

これに硫酸アンモニウムを加えて８０％飽和にした。５
℃に３０分間静置後遠心分離処理して沈澱画分を得た。

第　１　表 沈澱画分に１６の水を加えて攪拌後遠心分離して上澄液
９５０ｍ１を得た。これを室温で２４時間透析した。透
析内液を８００　Ｏｒｐｍ　１０分間遠心処理して上澄
液を得た。これを２Ｎ　ＨＣｌでＰＨを４．０に調節し
１．ａのブタノールを加え３０分間振盪した。

次いで５℃で２４時間静置後、ブタノール層を取シ減圧
下濃縮した。濃縮液５Ｍをあらかじめクロロホルムで平
衡化したシリカゲル３００１に充填シタカラムに吸着さ
せ、メタノール　クロロホルム（１：１）で活性画分を
溶出した。溶出液４０ｍ１を濃縮乾固し５　ｍｌのメタ
ノールに溶解した。遠心分離して不溶性画分を除去後、
予めＩＮＨＣｔ：メタノール（１：９）で平衡化したセ
ファデックスＬＨ−２０１００Ｍを充填したカラムに通
しＩ　ＮＨＣ２：　ＭｅＯＨ（１：　９）を溶出液とし
てクロマトグラフィーを行ない淡赤色の活性画分３０ｄ
を得た。これを減圧下濃縮乾固して５■のＣ−１物質を
得た。

Ｃ−１物質はクロロホルム：メタノール（１：１）を展
開溶媒としてシリカダル薄層クロマトグラフ４−を行う
とＲｆ値０．２６に単一の紫外部吸収を有するスポット
を与えた。

（２）Ｃ−１物質の性質 ｃ−ｉ物質は淡赤色無定形粉末で分子量はＦＤ−ＭＳ法
によって測定した結果４１０（第険図に示した）であっ
た。

１Ｈ−幅化スベクトル、Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第２図
、第３図に示した。

この物質の溶剤に対する溶解性は次のようであったＯ Ｏ水に難溶性である ０メタノール、エタノール、ブタノール、酢酸エチルに
可溶性である。

メタノールにＣ−１物質を溶解して測定した紫外部吸収
スペクトルは第４図に示した通シである。

（３）Ｃ−１物質の生理活性 （１）活性物質ＡＮ−７Ｄの抗菌活性は次のようにして
測定した。予め各種菌株をペプトン０．５チ、肉エキス
０．５　ｑｌｒ、Ｎｔｈｃｔ、、　０．３　％　（ｐＨ
７、Ｏ）ｉｌ　２０℃、１５分加熱殺菌した培地に接続
し、これを３７℃で２０時間培養した。活性物質Ｃ−１
を一定濃度添加した前記培地２　ｍＫ　Ｏ，０５ｒｕｇ
ずつ予め培養した各種菌株の培養液を接種し、３７℃で
２０時間培養した。６６０　ｎｍの吸光度を測定して菌
株の生育度を測定し、最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）をめ
第２表に示した。

第２表 菌株　ＭＩＣ（μｇ昨ｌ） エシェリヒア・コリに−１２）１００ ＡＴＣＣ１０７９Ｂ シュードモナス・エルギツプ　＞ｉｏ。

ＡＴＣＣ１０１４５ バチルス・ズブチリス　１３ ＡＴＣＣ６６３３ ザルシナ・ルテア　５０ ＡＴＣＣ９３４１ スタフィロコッカス・アウレウス　２１ＦＤＡ　２０９
　Ｆ （ｉｉ）　ＭＥＭダルベツコ粉末培地（大日本製薬■製
品）１３．４５．！ｉ’を１ｔの蒸留水に溶解し７．５
％ＮａＨＣＯ３水溶液２　ｍｌ金加え、ミリ１？アフイ
ルター（０，２２μ）で濾過殺菌した培地をミクロテス
トプレート（ファルコン社製品）に０．１５ｍＪづつ無
菌的に分注した。一方、別ｐグレートであらかじめ培養
したマウス線維芽細胞３Ｔ３をセミアンビールス５Ｖ−
４０を用いてトランスフオームした５Ｕ３Ｔ３細胞を０
．０５　ｍｌずつ接種して３７℃、２４時間炭酸ガスイ
ンキュベーター（ＣＯ２濃度７％）で培養した。これに
ｃ−１物質を１μ、９，４ｔ、３μｓβ、血球針で正常
細胞数を計測した。結果を第３表べ示す。

第３表 薬剤濃度μ９Ｓ　正常細胞数（イ） ０　１００ １　９０ ３　５０ ０ １０　０

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｃ−１物質のＦＤ−ＭＳスペクトルである。 第２図、第３図は本物質のＨ−ＮＭＲ、Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルである。第４図はＣ−１物質をメタノールに溶解
して測定した紫外部吸収スペクトルである。 出願人味の素株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 以下の物性を有する新規物質Ｃ−１ ０）形状　淡赤色粉末 ←）分子量　４１０　（ＦＤ−ＭＳ法によりた。）第１
   図に示す。 （ハ）　’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル　（第２図に示す。 ）に）　”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル　（第３図に示す。 ）に）溶解性：水に難溶、メタノール、エタノール、ツ
   タノール、酢酸エチルに可溶 （へ）　ＵＶ吸収スペクトル　（第４図に示す。）