JPS6070095A - アデノシン三リン酸の製造法 - Google Patents
アデノシン三リン酸の製造法Info
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- JPS6070095A JPS6070095A JP17639083A JP17639083A JPS6070095A JP S6070095 A JPS6070095 A JP S6070095A JP 17639083 A JP17639083 A JP 17639083A JP 17639083 A JP17639083 A JP 17639083A JP S6070095 A JPS6070095 A JP S6070095A
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアデノシンもしくはアデニンからアデノシンニ
リン酸（ＡＴＰ）を製造する新規な方法に関する。
リン酸（ＡＴＰ）を製造する新規な方法に関する。
従来、酵母を用いてアデノシンもしくはアデニンからＡ
ＴＰを生産する方法としては、糖なＰの生産方法が知ら
れていた。
ＴＰを生産する方法としては、糖なＰの生産方法が知ら
れていた。
メタノールをエネルギー源としてメタノールの共存下で
特定の酵母を用いて酸化的リン酸化により、アデノシン
−リン酸（ＡＭＰ）またはアデノシンニリン酸（ＡＤＰ
）を原料としてＡＴＰを生産する方法も既に報告されて
いる（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ、、１亙
（４）、１．０９７（１９８２））。
特定の酵母を用いて酸化的リン酸化により、アデノシン
−リン酸（ＡＭＰ）またはアデノシンニリン酸（ＡＤＰ
）を原料としてＡＴＰを生産する方法も既に報告されて
いる（Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ、、１亙
（４）、１．０９７（１９８２））。
しかしながら、ＡＭＰ−ｔ′＋ＡＤＰは原料として高価
でありかつ不安定な化合物であるため工業的に実用化す
る場合に不利である。
でありかつ不安定な化合物であるため工業的に実用化す
る場合に不利である。
そこで、本発明者らは、鋭意研究の結果、意外にもアデ
ニンもしくはアデノシンをＭ 料と１．、メタノールを
エネルギー源として、ＡＴＰが生産し得ることを見出し
た。
ニンもしくはアデノシンをＭ 料と１．、メタノールを
エネルギー源として、ＡＴＰが生産し得ることを見出し
た。
すなわち、本発明は、キャンディダ眉に属する酵母をメ
タノールを主炭素源とする培地に培養して得た菌体もし
くは培養物またはそれらの処理物を用いて、メタノール
の存在下アデノシンもしくはアデニンからアデノシン三
リン酸（ＡＴＰ）を生成蓄積せしめこれを採取すること
を特徴とするアデノシン三リン酸の製造法である。
タノールを主炭素源とする培地に培養して得た菌体もし
くは培養物またはそれらの処理物を用いて、メタノール
の存在下アデノシンもしくはアデニンからアデノシン三
リン酸（ＡＴＰ）を生成蓄積せしめこれを採取すること
を特徴とするアデノシン三リン酸の製造法である。
以下、本発明を具体的に説明する。
本発明で用いるキャンテイダ属の酵母としては、例えば
キャンディグ・ボイデニイ （Ｃａｎｄｉｄａｌｘ＋１
ｄｉｎｉｉ）Ａ Ｋ Ｕ ４７０５ （微工研菌寄第７
２１Ｓ月）、キャンディグ・メタノリカ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ＋ｎｅｔｈａ−ｎｏｌｉｃａ）（ＡＴＣＣ２６］
］処５’）等が挙げられる。このうち上記のキャンディ
ターボイデニイＡＫＵ４７０５は、はじめクロケラ・ヤ
ポニクム（Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ ｓｐ、）Ｎａ ２２０
１と同定さｔＩＩ：酵母であるが、ジャーナル・オブφ
ジェネラル・アンド・アプライドＱマイクロバイオロジ
ー（Ｊ。
キャンディグ・ボイデニイ （Ｃａｎｄｉｄａｌｘ＋１
ｄｉｎｉｉ）Ａ Ｋ Ｕ ４７０５ （微工研菌寄第７
２１Ｓ月）、キャンディグ・メタノリカ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ＋ｎｅｔｈａ−ｎｏｌｉｃａ）（ＡＴＣＣ２６］
］処５’）等が挙げられる。このうち上記のキャンディ
ターボイデニイＡＫＵ４７０５は、はじめクロケラ・ヤ
ポニクム（Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ ｓｐ、）Ｎａ ２２０
１と同定さｔＩＩ：酵母であるが、ジャーナル・オブφ
ジェネラル・アンド・アプライドＱマイクロバイオロジ
ー（Ｊ。
Ｇｅｎ、Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）２６ 、１
３３−１５８ （特に第１５２ページ）において示され
るように、キャンディグ・ボイデニイであると同定し直
された酵母である。
３３−１５８ （特に第１５２ページ）において示され
るように、キャンディグ・ボイデニイであると同定し直
された酵母である。
これらの酵母の性質についてはＪ、 Ｇｅｎ、Ａｐｐｌ
。
。
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ２６ 、１３３−１５８ （］
］処８０ ）、Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ
、４ ８ 、 ３ ８ ９−３ ９ ６ （１９７０）
に記載されている〔キャンテイダ争ボイテニイＡ Ｋ
Ｕ ４７０５ ニツイテＬｔ Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ ｓ
ｐ、 Ｎ１２２０１（ＡＫＵ４７０５）として記載され
ている〕。
］処８０ ）、Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｔｅｃｈｎｏｌ
、４ ８ 、 ３ ８ ９−３ ９ ６ （１９７０）
に記載されている〔キャンテイダ争ボイテニイＡ Ｋ
Ｕ ４７０５ ニツイテＬｔ Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ ｓ
ｐ、 Ｎ１２２０１（ＡＫＵ４７０５）として記載され
ている〕。
こわらの酵母はメタノール資化能力を持つものであり、
本発明においてはメタノールを主炭素源とする培地で培
養する。
本発明においてはメタノールを主炭素源とする培地で培
養する。
本発明で用いる酵母の培養条件としてはメタノール濃度
２〜１０容量％程度で生育させるのが適当である。培地
組成としては微量要素としてサイアミンの添加が必要で
ある。サイアミンとしてはビタミンＢｉをはじめ酵母エ
キス、米糖廃液、その他ビタミンＢ群に富む工業的生産
物も用いられる。その添加量は、酵母、の生育条件に応
じて適当な値が選ばれるが、通常０．０００１％０１１
後とするのが適当である。無機質としては、硫酸マグネ
シウムなどのマグネシウム源、リン酸２水素すＩ−リウ
ム、リン酸２水素カリ、リン酸］水素カリなどのリン酸
源、硫安、塩安、硝安、硝酸ソーダ、尿素、ペプトンな
どの窒素源３− が用いられる。一般に培養液のｐ Ｈは酵母の生育にし
たがって低下するが、窒素源として尿素を用いるとｐ
Ｈの低下をきたさない。またアンモニウム塩のばあいは
少量づつ適時または連続的に添加してｐ Ｈを調節する
ごとくしてもよい。
２〜１０容量％程度で生育させるのが適当である。培地
組成としては微量要素としてサイアミンの添加が必要で
ある。サイアミンとしてはビタミンＢｉをはじめ酵母エ
キス、米糖廃液、その他ビタミンＢ群に富む工業的生産
物も用いられる。その添加量は、酵母、の生育条件に応
じて適当な値が選ばれるが、通常０．０００１％０１１
後とするのが適当である。無機質としては、硫酸マグネ
シウムなどのマグネシウム源、リン酸２水素すＩ−リウ
ム、リン酸２水素カリ、リン酸］水素カリなどのリン酸
源、硫安、塩安、硝安、硝酸ソーダ、尿素、ペプトンな
どの窒素源３− が用いられる。一般に培養液のｐ Ｈは酵母の生育にし
たがって低下するが、窒素源として尿素を用いるとｐ
Ｈの低下をきたさない。またアンモニウム塩のばあいは
少量づつ適時または連続的に添加してｐ Ｈを調節する
ごとくしてもよい。
培養時間は多くとも４日程度であり、その間培養は断続
的に行なっても連続的に行なってもよい。培養後の培養
液より酵母を分離するには、公知の分離方法、たとえば
デラバル型分ｉｌ！、シャープレス型分離器などを用い
る方法が適宜採用されうる。しかして石油系炭化水素を
用いｔコ培地と異なり、本発明の方法においては水洗の
みで容易に洗浄できること、また石油系炭化水素の二オ
イもないという利点もある。
的に行なっても連続的に行なってもよい。培養後の培養
液より酵母を分離するには、公知の分離方法、たとえば
デラバル型分ｉｌ！、シャープレス型分離器などを用い
る方法が適宜採用されうる。しかして石油系炭化水素を
用いｔコ培地と異なり、本発明の方法においては水洗の
みで容易に洗浄できること、また石油系炭化水素の二オ
イもないという利点もある。
かくして得られた菌体もしくは培養物はメタノールをエ
ネルギー源とし高エネルギーリン酸化合物を生成する能
力を有するものであるが、生成物た゛るリン酸化合物（
例えばＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ）は菌体外に分泌されに
くい。そこで、細胞膜透過性を持ｔコせるため、通常は
次の４− ような処理を行なう。
ネルギー源とし高エネルギーリン酸化合物を生成する能
力を有するものであるが、生成物た゛るリン酸化合物（
例えばＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ）は菌体外に分泌されに
くい。そこで、細胞膜透過性を持ｔコせるため、通常は
次の４− ような処理を行なう。
（ａ） 乾燥菌体化（ドライ・イースト化する）（１〕
） 菌体壁および膜の破壊（例えば超音波処理、界面活
性剤処理） （Ｃ） プロトプラス１− 化（即ちサイモリアーゼ処
理） （ｄ） プラスモリシス化（細胞壁と細胞膜を分離する
原形質分離処理） これらの処理は通常、膜に透過性をもたせるための通常
の処理であり、公知の手法によってなされる。その中で
も、本発明では生産性向上の１コめできるだけ菌体を傷
つけないで分泌性をも１こせる上記（Ｃ）および（ｄ）
の処理が好ましく、特に（（］）の処理が簡便であり最
も生産性が高く好ましい。十記（ａ）、（Ｃ）および（
ｄｊの処理には、分離菌体が用いられ、（１〕）の処理
には、分離菌体、培養物のどちらも使用できる。（ｄｌ
の処理の一方法としては、例えば分離菌体を蒸留水に分
散せしめ、静止状態で放置する方法が挙げられる。
） 菌体壁および膜の破壊（例えば超音波処理、界面活
性剤処理） （Ｃ） プロトプラス１− 化（即ちサイモリアーゼ処
理） （ｄ） プラスモリシス化（細胞壁と細胞膜を分離する
原形質分離処理） これらの処理は通常、膜に透過性をもたせるための通常
の処理であり、公知の手法によってなされる。その中で
も、本発明では生産性向上の１コめできるだけ菌体を傷
つけないで分泌性をも１こせる上記（Ｃ）および（ｄ）
の処理が好ましく、特に（（］）の処理が簡便であり最
も生産性が高く好ましい。十記（ａ）、（Ｃ）および（
ｄｊの処理には、分離菌体が用いられ、（１〕）の処理
には、分離菌体、培養物のどちらも使用できる。（ｄｌ
の処理の一方法としては、例えば分離菌体を蒸留水に分
散せしめ、静止状態で放置する方法が挙げられる。
処理後の菌体もしくは培養物はＡＴＰ生産反応に供され
る。
る。
反応原料として用いるアデノシンまたはアデニンは、い
かなる方法で製造されたものも使用できる。
かなる方法で製造されたものも使用できる。
反応は、アデノシンまたはアデニンの他、メタノール、
モノリン酸塩および／まｔこはピロリン酸塩、ニコチン
アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）、還元型グ
ルタチオン（Ｇ Ｓ Ｈ’）、Ｄ−ソルビ１−−ル、マ
グネシウムの存在下で行なう。
モノリン酸塩および／まｔこはピロリン酸塩、ニコチン
アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）、還元型グ
ルタチオン（Ｇ Ｓ Ｈ’）、Ｄ−ソルビ１−−ル、マ
グネシウムの存在下で行なう。
反応に用いる各種基質および反応補助因子の最適濃度は
次のとおりである。
次のとおりである。
（１） アデノシンを基質とした場合
アデノシン ３０〜５０ｍｍ０１／４
メタノール ８００〜１２００ｍｍｏｌ／／＋に２ＨＰ
Ｏ４まｔコＬｔＮａｚＨＰｏ４２５〜１５０ ｍｍｏｌ
／（？Ｎａ ４Ｐ２０４ ＩＩ １０Ｉ（２０まタハに
４Ｐ２０４５０〜１１０ｍｍｏｌ／４ ＮＡＤ＋４〜１．５ｍｍｏｌ／ｅ ＧＳＨ４〜１５ｍｍｏｌ／ｇ Ｄ−ソルビＩ−−ル２００〜８００ ｍｍｏ＋／６Ｍｇ
５Ｏ＋ −７Ｈ２０３０〜９ ０ ｍｍｏｌ／＃（２）
アデニンを基質と１７だ場合 アデニン ５〜１０ｍｍ０１／ｌ メタノール １．５００〜２５００ｍｍｏｌ／６に、Ｔ
（ＰＯ，まｆ：ｊ、ｊＮａ２ＨＰ０４５０〜１５０ ｍ
ｍｏｌ／６Ｎａ２ＰｚＯ４＠ １０Ｈ２０ま１：＋、ｔ
Ｋ４Ｐ２０４５０〜１．１０ｍ ｍｏｌ ／ Ｉ ＮＡＤ” ２〜５ｍｍｏ１１５ ＧＳＨ２〜５ｍｍｏｌ／６ Ｄ−ソルビトール ２００〜６００ ｍｍｏｌ ／ｅＭ
ｇＳＯ＋ −７Ｈ２０１０〜２５ ｍｍｏｌ、Ｑ？本発
明においては、上記のように多量のマグネシウムの共存
下で反応を行なうことによって反応が促進される。また
、高濃度のモノリン酸は毒性が強い１こめ、上記のよう
に存在量を少量に抑え、その代りにピロリン酸を存在せ
しめることによって反応が促進される。
Ｏ４まｔコＬｔＮａｚＨＰｏ４２５〜１５０ ｍｍｏｌ
／（？Ｎａ ４Ｐ２０４ ＩＩ １０Ｉ（２０まタハに
４Ｐ２０４５０〜１１０ｍｍｏｌ／４ ＮＡＤ＋４〜１．５ｍｍｏｌ／ｅ ＧＳＨ４〜１５ｍｍｏｌ／ｇ Ｄ−ソルビＩ−−ル２００〜８００ ｍｍｏ＋／６Ｍｇ
５Ｏ＋ −７Ｈ２０３０〜９ ０ ｍｍｏｌ／＃（２）
アデニンを基質と１７だ場合 アデニン ５〜１０ｍｍ０１／ｌ メタノール １．５００〜２５００ｍｍｏｌ／６に、Ｔ
（ＰＯ，まｆ：ｊ、ｊＮａ２ＨＰ０４５０〜１５０ ｍ
ｍｏｌ／６Ｎａ２ＰｚＯ４＠ １０Ｈ２０ま１：＋、ｔ
Ｋ４Ｐ２０４５０〜１．１０ｍ ｍｏｌ ／ Ｉ ＮＡＤ” ２〜５ｍｍｏ１１５ ＧＳＨ２〜５ｍｍｏｌ／６ Ｄ−ソルビトール ２００〜６００ ｍｍｏｌ ／ｅＭ
ｇＳＯ＋ −７Ｈ２０１０〜２５ ｍｍｏｌ、Ｑ？本発
明においては、上記のように多量のマグネシウムの共存
下で反応を行なうことによって反応が促進される。また
、高濃度のモノリン酸は毒性が強い１こめ、上記のよう
に存在量を少量に抑え、その代りにピロリン酸を存在せ
しめることによって反応が促進される。
反応の最適温度は２０〜３０℃、好ましくは２５℃近傍
、最適ｐ Ｈは６〜８、好ましくは７近傍である。反応
時間は反応条件によるので特に限定されないが、あまり
長時間の場合生成し７− ｔ：、 Ａ Ｔ Ｐが分解されるため、１６〜２８時間
程度が好ましい。反応は不断の酸素供給が必要であり、
例えば振とう条件下で行なう。
、最適ｐ Ｈは６〜８、好ましくは７近傍である。反応
時間は反応条件によるので特に限定されないが、あまり
長時間の場合生成し７− ｔ：、 Ａ Ｔ Ｐが分解されるため、１６〜２８時間
程度が好ましい。反応は不断の酸素供給が必要であり、
例えば振とう条件下で行なう。
かくして、メタノールの酸化系、核酸のサルベージ経路
、酸化的リン酸化系の共同作用によるアデノシンもしく
はアデニンからのＡＴＰ生産が進行する。メタノールの
エネルギーがＡＴＰに蓄積されるまでの経路を具体的に
説明すれば、メタノールの酸化に伴なってＮＡＤのＮＡ
Ｔ）ｉ（、。
、酸化的リン酸化系の共同作用によるアデノシンもしく
はアデニンからのＡＴＰ生産が進行する。メタノールの
エネルギーがＡＴＰに蓄積されるまでの経路を具体的に
説明すれば、メタノールの酸化に伴なってＮＡＤのＮＡ
Ｔ）ｉ（、。
化が進行する。
８−
国
○
生成したＮＡＤ）（２の還元力はミトコンドリア内膜に
ある電子伝達系へ移送され、酸化的リン酸化との共同反
応によりＡＴＰにエネルギーが蓄積サレる。一方、アデ
ノシンまｊこはアデニンはリン酸化されＡＴＰに変換さ
れる。
ある電子伝達系へ移送され、酸化的リン酸化との共同反
応によりＡＴＰにエネルギーが蓄積サレる。一方、アデ
ノシンまｊこはアデニンはリン酸化されＡＴＰに変換さ
れる。
１１−
例えばアデノシンを基質として用いた場合、一
１２−
（培養）
る。
アデノシン＋３リン酸＋３７４メタノール＋９／８０゜
−子Ａ Ｔ Ｐ ＋３／４ Ｃｏ２＋３／２ Ｈ２Ｏな
お、ＧＳＨはホルムアルデヒドの酸化の補助因子として
必要である。
−子Ａ Ｔ Ｐ ＋３／４ Ｃｏ２＋３／２ Ｈ２Ｏな
お、ＧＳＨはホルムアルデヒドの酸化の補助因子として
必要である。
反応終了後の反応混合物中にはＡＴＰが蓄積し、他に少
量のＡＭＰ、ＡＤＰおよび、反応時間が短い場合には未
反応基質のアデノシンもしくはアデニンが共存する。
量のＡＭＰ、ＡＤＰおよび、反応時間が短い場合には未
反応基質のアデノシンもしくはアデニンが共存する。
反応液中に蓄積したＡＴＰは、イオン交換樹脂、吸着樹
脂、活性炭等を用いる方法、高速液体クロマトグラフを
用いる方法等種々の方法ニよってＡＭＰｌＡＤＰ、ＡＴ
Ｐ１アデノシン、アデニンを分離し、ＡＴＰを単独で採
取することができる。
脂、活性炭等を用いる方法、高速液体クロマトグラフを
用いる方法等種々の方法ニよってＡＭＰｌＡＤＰ、ＡＴ
Ｐ１アデノシン、アデニンを分離し、ＡＴＰを単独で採
取することができる。
以下実施例によって本発明を具体的に説明する。
実施例１
ＮＨ，Ｃ６０，４％
に、Ｈ２ＰＯ４０，１％
に２ＨＰ０． ０．１ ％
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ｏ、 ０ ５％
酵母エキス ０．２％
（ｐ Ｈ６，０）
の培地を試験管に５ ｍｌ取り、これを殺菌し、メタノ
ールを２容量％になるように添加し、これにキャンテイ
ダ・ボイデニイｌ’！ｘ２２０１ ＡＫＵ４７０５ （
微工研菌寄第 ７２１５号）を−白金耳移植し、温度２
８℃にて４８時間往復振とう培養（種酵母培養）を行な
つｔこ。つぎに前記種酵母培養液と同じ組成の培養液を
内容２ｅの振とうフラスコに５００ ｄとり、殺菌し、
メタノールを２容量％になるように添加し、さらに種酵
母培養液ｌを添加し、温度２８℃で２４時間ロータリー
・シェーカーを用いて培養を行なった。培養後、培養液
を遠心分離し、酵母を分離した。
ールを２容量％になるように添加し、これにキャンテイ
ダ・ボイデニイｌ’！ｘ２２０１ ＡＫＵ４７０５ （
微工研菌寄第 ７２１５号）を−白金耳移植し、温度２
８℃にて４８時間往復振とう培養（種酵母培養）を行な
つｔこ。つぎに前記種酵母培養液と同じ組成の培養液を
内容２ｅの振とうフラスコに５００ ｄとり、殺菌し、
メタノールを２容量％になるように添加し、さらに種酵
母培養液ｌを添加し、温度２８℃で２４時間ロータリー
・シェーカーを用いて培養を行なった。培養後、培養液
を遠心分離し、酵母を分離した。
（プラスモリシス化処理）
分離酵母（乾燥菌体換算）８０μ１ｇ／Ｎｌを蒸留水に
分散せしめ、４５分間３７℃で静止状態で放置した。し
かる後に、４ｍｏｌ／ｇのＤ−ソルビトール水溶液を加
え、最終濃度１．５ ｍｏｌ／ｊ？のＤ−ソルビトール
とし、１０分間３７℃で静止状態で放置した。
分散せしめ、４５分間３７℃で静止状態で放置した。し
かる後に、４ｍｏｌ／ｇのＤ−ソルビトール水溶液を加
え、最終濃度１．５ ｍｏｌ／ｊ？のＤ−ソルビトール
とし、１０分間３７℃で静止状態で放置した。
（反応）
上記処理酵母液２００μ４（乾燥菌体換算重量１０ダ、
Ｄ−ソルビトール３００μモル含有）とアデノシン２０
μモル、Ｋ２ＨＰ０． ２５μモル、ＮＡＤ＋ ５μモ
ル、ＧＳＨ５μモル、メタノール５００μモル、Ｎａ４
Ｐ２Ｏ７・１０Ｈ２０５０／７ モＪｌ／、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２０４０μモル、を総量５００ Ｉｔ ｌとし、
１０ｍ１三角フラスコ中で２５℃にて２２時間往復振と
うした。その結果、反応液中には２４、０ ｍモル／ｌ
のＡＴＰが蓄積しく対アデノシン収率６０％、１２．２
ｆ／ｎ）、同時に６．５ｍモル／ｌのＡＤＰ、２ｍモ＃
／６のＡＭＰがグラフにより分析した）。
Ｄ−ソルビトール３００μモル含有）とアデノシン２０
μモル、Ｋ２ＨＰ０． ２５μモル、ＮＡＤ＋ ５μモ
ル、ＧＳＨ５μモル、メタノール５００μモル、Ｎａ４
Ｐ２Ｏ７・１０Ｈ２０５０／７ モＪｌ／、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２０４０μモル、を総量５００ Ｉｔ ｌとし、
１０ｍ１三角フラスコ中で２５℃にて２２時間往復振と
うした。その結果、反応液中には２４、０ ｍモル／ｌ
のＡＴＰが蓄積しく対アデノシン収率６０％、１２．２
ｆ／ｎ）、同時に６．５ｍモル／ｌのＡＤＰ、２ｍモ＃
／６のＡＭＰがグラフにより分析した）。
実施例２
実施例１と全く同様にしてキャンデイダ・メタノリカ（
ＡＴＣＣ２６１７５）を用いて、培養、プラスモリシス
化処理、および反応を行なった。その結果、反応液中に
は９．０ｍモル／ｌのＡＴＰが蓄積し、同時に３．５ｍ
モル／ｌのＡＤＰ１２．１ｍモル／１０）ＡＭＰが蓄積
していｔこ。
ＡＴＣＣ２６１７５）を用いて、培養、プラスモリシス
化処理、および反応を行なった。その結果、反応液中に
は９．０ｍモル／ｌのＡＴＰが蓄積し、同時に３．５ｍ
モル／ｌのＡＤＰ１２．１ｍモル／１０）ＡＭＰが蓄積
していｔこ。
実施例３
実施例１と全く同様にして同様の菌株を用いて、培養、
プラスモリシス化処理を行なった。
プラスモリシス化処理を行なった。
処理酵母液２００μｌとアデニン５μモル、Ｋ２ＨＰＯ
４５０ｐモル、ＮＡＤ＋１７１モル、ＧＳＨ５Ｉｔモル
、メタノール１０００μモＪｌ／ 、Ｎａ４ＰｚＯ７”
１０Ｈ２０５０μモル、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０８μモル
を総量５００μｌとし、１ＯＮｌ三角フラスコ中で２５
℃にて２０時間往復振とうしｔこ。その結果、反応液中
には６．８ ｍモル／ｌのＡＴＰが蓄積し、１５− 同時ニ１．０ ｍモ＃／６（ＤＡＤＰ、’０．９ｍモル
／４のＡＭＰが蓄積していた。
４５０ｐモル、ＮＡＤ＋１７１モル、ＧＳＨ５Ｉｔモル
、メタノール１０００μモＪｌ／ 、Ｎａ４ＰｚＯ７”
１０Ｈ２０５０μモル、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０８μモル
を総量５００μｌとし、１ＯＮｌ三角フラスコ中で２５
℃にて２０時間往復振とうしｔこ。その結果、反応液中
には６．８ ｍモル／ｌのＡＴＰが蓄積し、１５− 同時ニ１．０ ｍモ＃／６（ＤＡＤＰ、’０．９ｍモル
／４のＡＭＰが蓄積していた。
特許出願人 東 し 株 式 会 社
１６−
手 続 補 正 書
１、事件の表示
昭ｆＤ５８年特許願第 １７６３９０号２、発明の名称
アデノシン三リン酸の製造法
３補正をする者
事件との関係 特許出願人
住 所 東京都中央区日本橋室町２丁目２番地自 発
５ 補正により増加する発明の数 ０
６補正の対象
（１）願書第１ページを別紙のとおり補Ｎ“ｐ（２）
明細書第３ページ下から第９行目１Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ
Ｊを「Ｋｌｏｅｃｌ（ｅｒａ Ｊと補正する。
明細書第３ページ下から第９行目１Ｋｌｏｅｃｈｅｒａ
Ｊを「Ｋｌｏｅｃｌ（ｅｒａ Ｊと補正する。
（３） 同第６ページ下から第３行目
「蒸留水に」を「高張液に」と補正する。
（４）同第７ページ下から第５行目および第８ページ第
６行目 「Ｎａ４Ｐ２０４・１０Ｈ２０またはに４Ｐ２０４ Ｊ
をｒ Ｎａ４Ｐ２Ｏ７・１０ Ｈ２Ｏまたハに４Ｐ２０
７ Ｊと補正する。
６行目 「Ｎａ４Ｐ２０４・１０Ｈ２０またはに４Ｐ２０４ Ｊ
をｒ Ｎａ４Ｐ２Ｏ７・１０ Ｈ２Ｏまたハに４Ｐ２０
７ Ｊと補正する。
（５） 同第１０ページを次のとおり補正する。
２−
（６）同第１４ページ下から第７行目および下刃・ら第
６行目 １種酵母」を「種母」と補正する。
６行目 １種酵母」を「種母」と補正する。
（７） 同第１４ページ下から第３行目「種酵母液」を
「種母培養液」と補正する。
「種母培養液」と補正する。
（８） 同第１４ページ下から第２行目１’−ｏ−タ’
）−拳シェーカー］をｒ往復振どう機」と補正する。
）−拳シェーカー］をｒ往復振どう機」と補正する。
嵜−一呵←−昏へ弁壜
１ ’
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （］） キャンデイダ属に属する酵母をメタノールを主
炭素源とする培地に培養して得た菌体もしくは培養物ま
たはそれらの処理物を用いて、メタノールの存在下アデ
ノシンもしくはアデニンからアデノシンニリン酸（ＡＴ
Ｐ）を生成蓄積せしめることを特徴とするアデノシンニ
リン酸の製造法。 （２）処理物がプラスモリシス化処理された物である特
許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17639083A JPS6070095A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | アデノシン三リン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17639083A JPS6070095A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | アデノシン三リン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6070095A true JPS6070095A (ja) | 1985-04-20 |
| JPH0322159B2 JPH0322159B2 (ja) | 1991-03-26 |
Family
ID=16012813
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17639083A Granted JPS6070095A (ja) | 1983-09-26 | 1983-09-26 | アデノシン三リン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6070095A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004510667A (ja) * | 2000-09-05 | 2004-04-08 | ウルトラ バイオテック リミテッド | 酵母に基づく生物学的肥料 |
| CN103614308A (zh) * | 2013-08-16 | 2014-03-05 | 新乡拓新生化股份有限公司 | 用于atp合成的酿酒酵母菌及其应用 |
-
1983
- 1983-09-26 JP JP17639083A patent/JPS6070095A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004510667A (ja) * | 2000-09-05 | 2004-04-08 | ウルトラ バイオテック リミテッド | 酵母に基づく生物学的肥料 |
| CN103614308A (zh) * | 2013-08-16 | 2014-03-05 | 新乡拓新生化股份有限公司 | 用于atp合成的酿酒酵母菌及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0322159B2 (ja) | 1991-03-26 |
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