JPS608865B2 - 生体高分子、低分子物質を可逆的または不可逆的に固定し得る陽イオン性物質 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生物系高分子物質を可逆的に固定し得る新規
な陽イオン性物質、この物質の製造方法およびその利用
に関する。

この発明の目的は、生体高分子物質、各種蛋白質、核酸
、その他の物質を可逆的に固定することのできる新規な
陽イオン性物質を提供するにある。

分子タイプのイオン交換クロマトグラフィーにおいて、
一方では化学的性質にすぐれ且つ他方では機械的性質に
すぐれた担体は、現在までのところ完成されてはいない
。

事実、これまでに数多くのタイプの担体が提案されてき
たが、それらの中のある物は、化学的性質はすぐれてお
り、従って選択的分離を可能とするけれども、機械的性
質が中程度しかないという欠粘を有している。

これとは逆に、特に予備的又は工業的カラム処理におい
て使用するには、非常に良好な性質を有する担体（ｓｕ
ｐｐｏｒｔ）も同様に提案されているけれどもこの担体
は、その化学的性質が、特に生体高分子に対しては全く
不完全なものであって不可逆的な吸着サィトを有してい
ることが判明している。

生体高分子を分離するための最新の技術においては、一
方では化学的活性にすぐれていると同時に他方では機械
的抵抗性も大さし、担体を使用する必要性が生じてきた
ので、本出願人は、精力的に研究を行った結果、特別の
タイプの物質を使用すれば、上記の結果を得ることが出
来ることを確認したのである。

従って、本発明の目的は新規な工業生産物としての、生
体高分子および低分子物質を可逆的または不可逆的に固
定できる物質を提供することにあり、この物質は、表面
をァミノ化高分子ポリサッカラィドで直接被覆した多孔
質無機酸化物などの無機恒体からなることに特徴を有す
る。

本出願人が各種研究を行った結果、次のことが判明した
。

このタイプの物質は、生体高分子物質をクロマィトグラ
フィ…によって分離するのに特に適した新規な化学表面
を、多孔質の無機担体に対して付与せしめることによっ
て、機械的、物理的、化学的、生物的な各性質を享有し
得ることが判明したのである。本発明によれば、多孔質
の無機担体としては、シリカ、アルミナ、マグネシア、
酸化チタン、又は、ガラス、ケイ酸塩、カオリン等とい
った合成若しくは天然の上記物質の誘導体を使用するこ
とができる。

アミノ化した高分子ポリサッカラィド‘ま、糊着現象に
よって多孔質の無機恒体に固定これるのであるが、この
接着のメカニズムは、単に静電気によるものであるとは
いいきれないようである。

その理由は、多孔質担体の内でもアルミナのようにその
表面が負でないようなものもアミノ化した高分子ポリサ
ッカラィドによって被覆することができて、本発明に係
る高品質の物質を得ることができるからである。その結
果、アミノ化した高分子ポリサッカラィドから成る被覆
層は、実質上不可逆的に担体上に固定されてしまうこと
になる。

しかしながら、下記に示すようなある特定の条件の範囲
内であれば、一定時間使用の後、該多孔質無機担体を再
生Ｚすることが可能になったのである。そこでこの多孔
質無機担体は、アミノ化した高分子ポリサッカラィド‘
こよる含浸処理を再度施すべく、再使用することができ
るのである。この多孔質無機担体は、厳密に制御された
多孔度を有するものでなければならない。

この担体の内表面は、１００〆／タ以下でなければなら
ず、できれば５〜８０で／夕とするのが良い。孔の平均
直径は２５ｎｍ（ナノメートル）以上でなければならず
、できれば５０〜１００仇ｍとするのが良い。希望する
応用目的によっては、更に生確な数値範囲を探ることも
可能である。表面積が上記より大きいものであったり、
また孔径が上記の値よりも小さくなったりすると、この
ような担体内表面では、ァミノ化した高分子ポリサッカ
ラィドを受け付けることができず、従って後に分離する
高分子物質を受けることができなくなる。本発明の好ま
しい態様によれば、該多孔質無機担体としては、シリカ
またはアルミナが使用されるのであるが、特に好適なも
のは、例えばフランス特許第１４７３２３９号、同１４
７３２４び号、同第１４７５９２９号、同第１４８２８
６７号に記載されている方法によって製造した陰イオン
性の多孔質シリカである。例えば、このようなシリカと
しては、ローンプーランシミフィン社（ＲＨＯＮＥ−Ｐ
ＯＵＬＥＮＣＣＨＩＭＥＦＩＮＥ）が市販している商品
名スフェロジル（ＳＰＨＥＲＯＳＩＬＳ）ＸＯＢ０３０
，ＸＯＢＯ１５，ＸＯＣＯ０５という多孔質シリカを用
いるとよい。これらのシリカの表面積は、それぞれ５０
，２５及び１０力／夕である。無機の多孔質担体を含浸
処理して、その表面上を被覆するのに有効なアミノ化し
た高分子ポリサッカラィドは、明らかに陽イオン性でな
ければならないし、且つ良好な親水性を有するものでな
ければならない。

その分子量は、少なくとも１０４ダルトン（ｄａ他ｎｓ
）でなければならず、できればＩＱ〜ＩＱダルトンであ
るのが好ましい。該ポリサッカラィドとしては、いかな
る化学式の物も使用できるけれども、特に好ましいもの
としては、デキストラン、澱粉、セルローズ、アガロー
スのアミノ譲導体、又は既知のすべての糖類の天然もし
くは合成ポリマーを挙げることができる。勿論この場合
、これらのポリサッカラィドは、これを陰イオン交換体
として担体上で使用したときに、全体として負の電荷を
発生する量だけ、カルボン酸基やスルホン酸基といった
陰イオン基を有するものであってはならない。この高分
子ポリサッカラィドのアミノ官能基としては、第一級、
第二級、又は第三級のものが使用でき、場合によっては
第四級のものも使用することができる。

しかしながら好ましいものは、第二級、第三級、及び第
四級のものである。本発明の好ましい態様によれば、本
発明に係るアミノ化した高分子ポリサッカラィドは、次
式で示される：但し、式中：Ｒは、デキストラン、澱粉
、セルローズ、またはアガロース残基を示し、ｎは、１
〜１０の整数、好ましくは２〜５の整数を表わし、Ｒ，
及びＲ２は、同一又は異なっていても良いが以下の各基
を表わす：−ＣＨ３，一ＣＨ２−ＣＨ３，一ＣＨ２０日
，一Ｃ＆−ＣＨ２０日、又は一ＣＨ２一ＣＨＯＨ−ＣＨ
３。

この化合物は、ハロゲン化物、特にアルキルまたはヒド
ロキシアルキルのョウ化物、同臭化物、ジメチル硫酸、
その他・・・・・・といった古典的な第四級化剤によっ
て、四級化しても良い。これらのタイプの化合物の内、
好適なものとしては、分子量が５０００００のファルマ
シア社（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ）によって市販されている
ＤＥＡＥＤＥＸ−ＴＲＡＮ（ジエチルアミノエチルデキ
ストラン）及び同社によって市販されているＱＡＥＤＥ
ＸＴＲＡＮ（四級化したジェチルアミノェチルデキスト
ラン）を挙げることができ、また、ＤＥＡＥ澱粉（ジェ
チルアミノェチル澱粉）という名称を有する既知の化合
物も使用することができるし、同様に、ロケットナスィ
オナル社（ＲＯＱＵＥＴＴＥＮＡＴＩＯＮＡＬ）によっ
てＣＡＴ○という名称で市販されているような陽イオン
性の澱粉も使用することができる。

本発明の別の好ましい態様によれば、アミノ化した高分
子ポリサッカラィドは、架橋剤（ａ袋ｎｔｒｅｔｉｃｕ
ｌａｎｔ）によって絹状構造にすることも可能である。

該架橋剤としては、例えば、１−４ ブタンジオールジ
グリシジルエーナル、エピクロルヒドリン、エピプロム
ヒドリン、及び式：で示されるジェポキシドが挙げられ
る： 但し、上式中：Ｒ，は、炭素原子数１〜２０のアルキル
基、好ましくは炭素原子数１〜４の低級ァルキル基であ
り、Ｒ２及びびＲ３は、炭素数１〜１０の炭化水素鎖を
表わすが、特に好ましくは低級ァルキレン基であり、上
式で示されるジェポキシドの例としては、式：で示され
る化合物が挙げられる。

また、本発明の目的は、生体高分子物質を可逆的に固定
することのできる本発明に係る陽イオン性物質の製法も
提供するにある。

この方法は、異つた２つの方法、つまりカラム内での含
浸処理及び炉内での含浸処理という２つの方法によって
達成することができる。

第１番目の方法によれば、まず、クロマト用カラム内に
多孔質の無機酸化物を、乾燥し且つ均質化した粉末の形
態にして直接的に導入するのである。

続いて、例えば０．１Ｎ塩酸といった酸性溶液を通して
、洗液、均質化処理を行って、気泡を追い出す。そこで
、平衡に達するまで、ｐＨ３〜１２の緩衝液を（例えば
０．０９Ｍ，ｐＨ７のトリス緩衝液）を通してやる。続
いて、上記緩衝液又はこれと同じｐＨもこ調節した水中
に、アミノ化した高分子ポリサッカラィドを溶かし、得
られた溶液を冷時又は熱時にカラム内に導入する。

そして、その後で過剰の該ポリサッカライドを除去する
のであるが、そのためにはまず上記緩衝液を用いて熔離
処理を行い、次に例えばクエン酸三ナトリウムといった
塩類の溶液を用いて溶雛処理を行う必要がある；最後の
溶出液中にアミノ化した高分子ポリサッカラィドが存在
していないことを確かめるには、酢酸セルローズ電気泳
動、及びポンソー赤のプレートの着色、又はポリアクリ
ル酸存在下での沈澱といった方法が採られる。このよう
にして製造された物質は、担体１タ当に約２０〜５０の
９の蛋白質を可逆的に固定することができる。

この物質は、広いｐＨ領域内（約３〜１２）で非常に大
きな安定性を有する。炉内含浸という第２番目の方法に
よれば、多孔質の無機磁化物を、秤量した後、３〜１２
の各種ｐＨのもとで、冷時又は熱時に、アミノ化した高
分子ポリサッカラィド水溶液を用いて含浸処理する。

そして、これを乾燥器で、恒重量となるまで５０〜１２
０００好まし〈は８０００で乾燥させるのである。次に
、かくして得られた粉末を、場合により存在する塊状物
を除去するこが必要とされる場合には、均一化し、節別
する。炉内含浸処理によって製造された該物質は、カラ
ム内で使用することになるのであるが、その前に、０．
０９ＭｐＨ４又は０．０５ ＭｐＨ６．８の緩衝液又は
クエン酸溶液で予備洗液処理をしておく；この方法によ
って製造した物質は、担体１夕当り約４０〜２００ｍｇ
の蛋白質を可逆的に固定することができる。今、確認し
たように、この炉含浸法によれば、蛋白質固定能を相当
増大させることができるのである。

また、炉舎浸法によれば、アミ／化した高分子ポリサッ
カラィドを被覆層を実質上木可逆的に固定した物質を製
造することもできる。

実際、この物質は、これが有する陰イオン交換性に何の
影響も与えることなく、０．１Ｎ塩酸、ソーダ、又は０
．１Ｎアンモニアで洗液することができ、カラム舎浸法
の場合には、このような洗液法によって、もとの多孔質
無機酸化物に再生することができる。

炉舎浸法によって得られた物質の多孔質無機酸化物を再
生するに当っては、例えば発煙硝酸のようにより強力な
条件下で該物質を処理することが重要である。その結果
、炉舎浸法によれば、卓越した陰イオン交換体としての
性質を損うことなく、本発明に係る物質を数多〈の操作
に使用できるということになる。

本発明に係る方法の他の態様によれば、上記した２つの
方法の内の１つで含浸処理を施し、約５０〜８０００の
乾燥器内で乾燥させて均一な粉末にした後、例えばエチ
ルエーテルのような揮発性溶媒にＪ架橋剤を溶かした溶
液で処理することもできる。

架橋剤としては、前記したものの内のいづれか１つを使
用すれば良い。この場合、含猿が均一に行われるように
、溶媒が完全に蒸発するまで、処理すべき物質を損枠す
Ｚる必要がある。

続いて、約１球寺間、４０〜１２０ｏ○好ましくは約８
０℃なる温度に保つ。

必要あれば節別した後、該担体を乾燥状態でカラムに入
れ、ソーダ次いで塩化ナトリウム溶液で洗総し、そして
最後に、希望す２るクロマトグラフィー用緩衝液で平衡
化する。この架橋網状化処理によって、卓越した品質の
物質が得られ、そして、この物質は、その分離能及び蛋
白質を可逆的に固定する能力を変えることなく、０．１
Ｎアンモニアもしくはソーダ、又は０。ＩＮ塩酸で規則
的に洗うこともできるのである。このようにして得られ
た物質の能力は、迫体１のこ対して蛋白質４０〜２００
の９である。もとの多孔質恒体の表面積が１０〜８０で
／夕であれば、上記の能力はほとんど一定である。この
場合、カラムまたは炉含浸法によって得られた物質は、
これを濃硝酸で洗絶することにより担体として使用して
いる多孔質無機酸化物を再生することも可能である。

また、本発明の目的は、生体高分子物質、特に蛋白質を
精製又は分離するのに上述した新規物質を利用すること
にある。

一般的には、この利用は、本発明に係る該新規物質の腸
イオンとしての性質を利用することから成るものである
。

つまり、分離又は精製したいと思う生体高分子物質を選
択的に固定したり、また、望ましくない不純物もしくは
他の蛋白質を選択的に保持したりするのに、このカチオ
ンとしての性質を利用するのである。イオン交換体を使
用するうえで既に知られている方法に従ってｐＨ及びモ
ル濃度を調節することにより、蛋白質を容易に選択固定
することができる。

一般的には、この反応技術は次の特徴を有する。

つまり、本発明の目的物である該物質が、精製もしくは
分離しようと思う生体高分子物質を選択的に固定したり
（ｆｉｘｅｒ）又は、好ましくない不純物を選択的に固
定したりするように、分離又は精製しようとする生体高
分子物質を含有している溶液を、そのｐＨ及びモル濃度
を調節して、本発明の目的物である該物質の上に通して
やることを特徴とするものである。精製又は分離しよう
とする高分子物質を、本発明に係る該物質が固定する場
合には、続いて該物質は、適宜なｐＨ及びモル濃度を有
する溶液で総離してやることになる。

本発明に係る該物質が不純物を固定する場合には、生体
高分子物質を、直接、溶液として回収することになる。

そして次に、適宜なｐＨ及びモル濃度を有する溶液を用
いて、不純物を除去し、そして、また再度操作すること
ができるように、該物質を再生するのである。本発明に
係る応用技術をいくつか以下に記載するが、これは単に
本発明を説明するためだけの例にすぎない：ａ ヒトま
たは動物の血清又は血糠からのｙ−グロプリンの精製ｂ
胎盤血液に由来するアルブミンの精製法における、ヘ
モグロビンの除去、及び、その他の蛋白質の濃縮ｃ 蛋
白質の称薄アルコール溶液の濃縮、及びアルコールの除
去ｄ カプリル酸ナトリウム溶液中のアルブミン濃縮及
び精製ｅ 動物の脳の水抽出液に由来するガングリオシ
ドの濃縮及び精製。

本発明に係る物質のこれらの応用技術について０は、後
記する実施例において詳しく述べることにする。

また、本発明に係る該物質は、抗体又は抗原を精製する
という応用用途にも使用できることが判明した。

この場合、本発明に係る該物質上に抗体又は抗原を固定
させるのであるが、対応する抗体及び抗原を精製し濃縮
する様に改質した該物質を使用するのである。次のもの
を固定することができる： ｏ 人間又は動物のＱ，ッ，８−グロブリン、アレブミ
ンｏ ｐＨ６．８において負の電荷を有するものであれ
ば、すべての細菌抗原及びウイルス抗原。

これは、殆んどの場合、既知の蛋白質、多糖類、及び核
酸である。その例示として以下のものを挙げることがで
きるが、本発明はこれのみに限定されるものではない、
：細菌毒素、破傷風トキソィド、肝臓炎Ｂに係る抗原Ｈ
Ｂｓ、インフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス、庖疹
ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、アデノウイル
ス（ａｄ’ｅｎｏｖｉｒ順）、パポバウイルス（ｐａｐ
ｏｖａｖｌｒｕｓ｝、アルボウイルス（ａｒｂｏｖｉｒ
瓜）、リノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、ピコル
ナウイルス（ｐｉｃｏｍａｖｉｒ雌）、工ンテロウイル
ス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒ肌）、痘暦ウイルス（ｐｏｘｖ
ｉｒ順）、ミクソウイルス（ｍ松ｏｖｊｍｓ）、パラニ
クウイルス（ｐａｒａｎｙｘｏｖｉｒｕｓ）、レオウイ
ルス（ｒ ｅｏｖｉｒ瓜）、コロナウイルス（ｃｏｒｏ
ｎａｖｉｒ瓜）、またはこれらの各種抗原といったこれ
らウイルス類の分解生成物。

本発明に係る該物質が抗原又は抗体を固定できるのと同
様に、酵素活性を有する物質となる各種酵素も、本発明
に係る該物質は固定することができのである。

該各種酵素としては次のものが挙げられる：ペプシン、
トリプシン、キモトリフ。

シン、プラスミン、ラクチコデヒドロゲナーゼ、Ｌ−ア
ミノアシラーゼ、インベルターゼ、グルコースイソメラ
ーゼ、アミログルコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ
、カタラーゼ、ＩＪ／ゞーゼ、ウレアーゼ。特別な実施
態様によれば、既述したような架橋剤を用いて、後に架
橋した場合には、これらの固定された高分子物質を、不
可逆的なものにするこができる。一般には、この絹状化
処理は室温で行う。

最後に、本発明に係る該物質は、低分子物質を固定する
のにも使用することができる。

その低分子物質としては、例えばアミノ基、アルコール
、もしくはチオールを有するいくつかの配位子（ｌｊ餌
ｎｄ）、又はいくつかのアミノ酸があるが、これら低分
子物質は、グルタールアルデヒドまたは前述のジェポキ
シ化合物などのカップリング剤の存在下で固定すること
ができる。従って、例えばリジンを固定することができ
、こうして得られた物質は、リジン（ｌｙｓｊｎｅ）に
対する強いアフィニティーを有する血液蛋白質であるプ
ラスミノーゲンまたはプラスミンを除去又は精製するの
に使用できるのである。

０ 同じく、各種ステロイドを固定することができ、こ
うしてその性質を改質した物質は、そのトランスファー
蛋白質を精製するのに使うことができる。

最後に、例えば最も反応性に富むァミノ基を出現させる
べく予じめ脱アセチル化したガングタリオシドのような
細胞受容体を固定することもでき、そして、このように
して得られた物質を、それらの配位子を精製、中和、又
は除去するのに用いることができるのであある。以下、
本発明に係る物質の製造、及び該物質の応用技術につい
ての実施例をいくつか述べるが、これらの例は単に説明
のためだけのものであって本発明をこれらの例のみに限
定するものではない。

実施例 １ カラム内への導入が容易に行われるように、スフェロジ
ル（Ｓｐｈｅｒｏｓｉｌ）ＸＯＣＯ０５を乾燥均一化し
た粉末状態にしておき、これを１０夕だけクロマトグラ
フィー用のカラムの中に直接注入する。

続いて、鯖勤ポンプを用いて５００机【／ｈの割合で、
０．１Ｎの塩酸Ｈｃそ溶液１００のとをカラム内に導入
するが、これは、カラムの洗樵、含浸及び気泡の除去（
溶離の方向は上方とするのが好ましい）のためである。
次に、平衡に達するまで、ｐＨ３〜１２の緩衝液（例え
ば０．０５Ｍ，ｐＨ７のトリス緩衝液）をカラム内に入
れるが、その平衡度は、カラムから流出してくる緩衝液
のｐＨ及びその抵抗率を測定することによって管理する
。予じめ緩衝液又はそれと同じ調節した水にＤＥＡＥデ
キストランを溶かしておき、この１％デキストラン溶液
を、約１５０Ｍ（５％溶液の場合には３０凧乙）だけ、
１００の夕／ｈの割合でカラム内に導入する。次に、カ
ラム上に固定されずにいる過剰のＤＥＡＥデキストラン
は、該緩衝液、次に０．０９の，ｐＨ４のクエン酸塩緩
衝液、そして０．０弧，ＰＨ８のクェン酸塩緩衝液を用
いて、流量ｌｏｏ０の‘／ｈの割合で順次溶雛する。最
後に、希望するクロマトグラフィー用緩衝液でカラムを
平衡に達せしめる。セルローズアセテート電気泳動及び
ポンソー赤プレートの着色、又はポリアクリル酸の存在
下での沈澱といった方法によつ夕て、最終溶出液中にＤ
ＥＡＥデキストランが存在しないことを確認する。この
ようにして含浸処理を受けた担体は、広いｐＨ領域（約
３〜１２）内で安定であって、陰イオン交換体として作
用し、特に蛋白質の濃縮又は精製に適している。適当な
緩衝液Ｚ系を使用すれば、含浸担体１夕当り２０〜５０
ｍｏの蛋白質を可逆的に固定させることができる。この
実施例において、ＤＥＡＥデキストランの代り‘こＱＡ
Ｅデキストランを用いても有利である。

実施例 ２ Ｚスフ
ェロジルＸＯＢＯ１５を１０９秤量し、アミノ化したポ
リサッカライド（例えばＤＥＡＥデキストラン）水溶液
２０の上を用いて含浸処理する。該多糖類溶液は、その
濃度が１〜１０％、好ましくは５〜８％であり、ｐＨは
３〜１２の各種のＰＨとする。この全２体を、恒量が得
られるように（水分の除去）、必要な時間だけ（例えば
１５時間）５０〜１２０００、好ましくは８０００で、
乾燥器内で乾燥させる。かくして粉末を得るが、場合に
より存在する塊状物を除去する必要がある場合には、均
一化し、節別した２後、該粉末をカラム内に導入する。
カラムに該粉末を充填した後、予じめ、０．１ＮのＨｃ
夕緩衝液、ｐＨ４の０．０９Ｍクエン酸緩衝液、ｐＨ６
．８の０．０８ Ｍのクエン酸緩衝液、又は０．１Ｎの
ＮａＯＨで洗総し、所望クロマトグラフィーのタイプに
合３つた適宜な緩衝液で、該カラムを平衡化せしめる。

本実施例における蛋白質固定能は、実施例１よりも更に
上昇して、クロマトグラフィーの条件にもよろけれども
、約４０〜２００の９／ターこなった。本実施例におい
て、ＤＥＡＥデキストランの代りにＤＥＡＥ澱粉といっ
た別のアミノ化した高分子ポリサッカラィドを用いても
有利である。実施例 ３ ｐＨ８〜１３好ましくはｐＨｉｌ．５のアミノ化したボ
リサッカラィド溶液を用いて上述した２つの方法の内の
１つにより、１０夕のスフエロジルＸＯＢＯ．３０を含
浸処理し、次いで乾燥器中でこれを乾燥させて均質な粉
末となし、これに、エチルエーテルに１，４ーブタンジ
オーンレジヴリシジルェーテルを溶かした０．０２〜２
％溶液、好ましくは０．１５％溶液を２０の【だけ加え
る。

そして、この全体を４０００で連続的に濃伴するのであ
るが、この操作は、エチルエーテルが完全に蒸発してし
まうまで継続し、そして、架橋剤として作用する上記ジ
ェポキシ化合物を均一に含浸せしめる。続いて、この全
体を、４０〜１２０００の温度好ましくは約８０００に
およそ１即時間保持する。

必要あれば最終的に筋別した後、この担体を、乾燥状態
のままカラム内に充填し、１その０．１Ｎソーダ、次い
で１そのＩＭのＮａｃとを用いて洗修し、最後にクロマ
ト用緩衝液で平衡化する。蛋白質固定能は、クロマトグ
ラフィーの条件にもよるが、担体１夕当り４０〜２００
の９であった。

この多孔質担体の表面積は、当初１０〜８０で／夕であ
ったが、この値はほぼ一定であった。実施例 ４ 人間又は動物の血清又は皿環に由来するｙ−グロブリン
の直接精製〔上記実施例１，２又は３によって製造した
担体５０外こついてのサイクルの大要〕｛ィー （０．
０１〜０．０２ＭのＰ０４緩衝液、または０．０８Ｍの
トリスーＨｃ夕緩衝液、またはＮａｃ〆１〜３夕／そ）
を２００の乙／地／ｈの割合でカラムに通し夕 て、カ
ラムを例えばｐＨ６．８（ｐＨ６．３〜８）に平衡化す
る。

｛口｝ 血清又は血凝を５０机上だけ導入する。

この際これらの血清又は皿鰍は、クロマト用緩衝液で予
じめ透析しておき、更に、カラムが詰ることの０ ない
ように炉過しておく。（血清又は血糠の平均添加量は、
５０〜１００肌／ｃ透／ｈとする。）実施例１の方法に
よって製造した担体については、このサイクルに使用す
る血清又は血※の量は、２５の‘に落さねばならない。
５日 クロマト用緩衝液を用いてカラムを洗修する。

０ 免疫電気泳動法的にみて純粋なガンマーグロプリン
からなる出口ピークを集める。

その回収率は、使用する緩衝液によっても異なるが、５
００ 〜１００％の範囲内である。ｐＨ６．８よりも
低くなれば、又イオン強度が強くなれば、それだけ収率
は増加するけれども、純度がその分だけ低下する危険性
がある。このようにして得られたｙーグロブリン調製品
は、発熱性物質が除去されており、また、時として出発
原料中に存在する肝臓炎（ｈもｐａｔｉに）Ｂに関係す
る抗原（ＡｇＨ段）も除去されている。

的 ｐＨ４の適宜な緩衝液もしくはクロマト用緩衝液に
１０−６０夕／そのＮａｃ夕を添加した液を用いるか、
又は、最後にｐＨ４〜８の０．０９Ｍグェン酸緩衝液を
用いて、カラム上に保持されている他の蛋白質を溶離す
る。

このサイクルの継続時間は、約２時間であり、その次の
サイクルもすぐに実施することができる。しかし、どん
なに自動化がうまく行っても、１日に実施できるサイク
ルは１０サイクル程度であり、これを量に直すと１日当
り、多孔質の無機酸化物ｌｋ９について血清又は血衆の
処理量は、およそ１０〆ということになる。実施例 ５ 胎盤血液に由来するアルブミンの精製におけるヘモグロ
ビンの除去とその他の蛋白質の濃縮コーン（Ｃｏｈｎ）
法に従ってアルコールにより胎盤血液を分別する際には
、ｐＨ６．８で２０〜２５％エタノールを用いてグロブ
リンのブロックを沈澱させる工程を経なければならない
。

このような条件下では、基本的には、アルブミン、ある
種のＱ−１，Ｑ−２グロブリン、及びヘモグロビンが、
上燈液中に残留している。これらは、冷時速心分離によ
って集め、同量の蒸留水で稀釈し（アルコール濃度を低
下させるため）、そのｐＨを６〜７に調節し、そしてセ
ル。ーズェステル膜を用いて炉遇し清澄化せしめる。担
体５０夕を用いる精製サイクルの大要 ３（実
施例１により得られた担体の場合には、これを１００タ
使用する必要がある。）ｔィ）０．０１ＭのＰ０４緩衝
液、またはｐＨ６〜７（ｐＨ６．５が好適）の０．０５
のトリス一日ｃ夕緩衝液を２００の‘／ｃボ／ｈの割合
で使用して、カラムを平衡化３せしめる。

（〇｝ 上記した精製すべき溶液１０００の‘を、平均
１００の‘／ｃ膚／ｈの割合で加える。

し一 前記と同じ割合でクロマト用緩衝液を用い、カラ
ムを洗族する。

殆ど無視し得る稀釈率で、４精製されたヘモグロビンが
カラムから排出されてくる。これに反して、他の蛋白質
、特にアルブミンは、カラム上に固定保持されている。
｛ニー 実施例４と同じ条件で、カラム上に固定されて
いる蛋白質を溶離する。得られたピ−ク（Ｐｉｃ）には
、濃縮され、且つ実質的にヘモグロビンを含んでいない
蛋白質が含有されていた。‘村 このサイクルの継続時
間は約４時間であり次のサイクルは、直ちに実施するこ
とが可能である。実施例 ６ 蛋白質の稀釈アルコール溶液の濃縮、及びアルコールの
除去コーン法に従って蛋白質を分別する場合、色々の段
階において、アルコール沈澱物を再溶解することは不可
避の工程である。

このためには、該沈澱物を高度に稀釈して、発生するア
ルコール残澄の濃度を低下せしめることが望ましい。従
って、ついで一方ではアルコールを除去する必要があり
、また他方では存在する蛋白質を濃縮せねばならない。
この操作は、通常の場合、真空濃縮、凍結乾燥、又は透
析によって実施されているが、後の２つの操作は、非常
に厄介であったり、また発熱の原因ともなる。そこで、
以下に記載するような、極めて容易、迅速、且つ経済的
な方法を提案するに到ったのである。例としては、アル
コールを１０％含有した２％のアルブミン溶液を用いた
。

担体ｌｋｇを用いる精製及び濃縮サイクルの大要（上記
担体は、実施例２又は３の方法に従って調製したもので
あって、実施例１によって得られた担体については、こ
れの倍の量の担体が必要である。

）１サイクルの継続時間は約４時間である。Ｉ ＰＨ７
の０．０１Ｍリン酸緩衝液で該担体を平衡化する。

緩衝液の供給量は２００の‘／ｃが／ｈをする。２ 最
初のｐＨ‘こ従って、ＨＣそ又はＮａＯＨを加えること
によりｐＨを７に調節したアルブミンのアルコール溶液
を導入する。このときの平均供給率は、１００の‘／ｃ
虎／ｈとする。

このようにして、２００夕のアルブミンがこのカラム上
に固定されることになる（つまり、１サイクル当り１０
その溶液が固定されることになる）。

ァルブミンが該カラム上にうまく固定されないときには
、当初のアルコール溶液を蒸留水で稀釈して煤質のイオ
ン強度を低下せしめるだけで充分うまくいくのである。
３ 蒸留水で洗液するが、その供給割合は２００机／ｃ
椎／ｈとし、アルブミンが流出しないことを確かめるの
ではなく、これとは逆にアルコールの流出が終了したこ
とを確認する。

４ ｐＨ６．８の０．０Ｍクエン酸緩衝液または０．１
ＭＮａＣク緩衝液内に、アルブミンを溶離する。

このようにして、一般的には、約１０〜２０％の最終ア
ルブミン濃度が得られる。アルコールはすべて除去され
ていて、この操作の収率はほぼ１００Ｚ％である。この
方法は、その等露点が６．５よりも低いものであれば、
どのような蛋白質にも使用することができる。等竜点が
それよりも高い蛋白質については、クロマト用緩衝液の
ｐＨを高くした条件下で操作すれば、本方法を適用する
Ｚことができる。最後に、次のことは明瞭である。つま
り、蛋白質溶液中に存在する不純物は、それが電気的に
中性であったり（炭水化物及び多糖類）又は担体と同様
にプラスの電荷を有するのであったりした場合には（陽
ィオ２ン）、この方法によって除去することができる。
不純物がマイナスの電荷を有している場合には、担体上
において、固定させようとしている負の蛋白質との間で
、競合が生じる。このような場合、担体に対する不純物
の親和力が蛋白質のそれよりも弱く、そして該溶液を水
で充分に稀釈することができてその結果、担体上での蛋
白質の固定と両立しうるイオン強度が得られるときには
、このような陰イオンを除去することができる。次の応
用実施例は、このような陰イオンの分離について述べた
ものである。実施例 ７ カプリル酸ナトリウム溶液中のアルブミンの濃縮及び精
製極めて興味のある分別方法は、カプリル酸ナトリウム
を使用する方法である。

このカプリル酸ナトリウムは、アルブミンのみを除いて
他の蛋白質すべてを凝固させ、従って、アルブミンのみ
が、カプリル酸塩の存在下で溶液のまま残るものである
。本実施例は、アルブミソを１５夕／そ含み、カプリル
酸塩を３夕／そ含有する溶液について行なったものであ
る。

恒体ｌｋ９を用いる１サイクルの大要 （この担体は「実施例２又は３の方法に従って調製した
ものであって、実施例１の場合にはこの倍の量の担体が
必要である。

）Ｉ ＰＨ６の０．０１Ｍリン酸塩緩衝液で該担体を平
衡化する。

緩衝液の供給量は２００机【／地／ｈとする。２ アル
ブミン及びカプリル酸塩溶液を、そのｐＨを６に調節し
た後、導入する（イオン強度が過度に高い場合には、水
で稀釈する）。この導入割合は、平均１００の‘／地／
ｈとする。このカラム上には、該溶液をおよそ８と導入
することができる。

固定を確認し、連続的にカプリル酸ソーダが出てくるの
を観察するのは、容易なことである（山羊様の非常に独
特な臭気が発生する）。３ カラムから何も出てこない
ようになるまで、クロマト用緩衝液を用いてカラムを洗
総する。

４ 実施例６と同じ方法を用いて、アルブミンを溶雛す
る。

このようにして、１０〜２０％のアルブミンを含有する
溶液を得るのであるが、この溶液中では、カブリル酸ナ
トリウムの含有量が２０％低下して、最終的には２．５
夕／夕よりも低くなった。このサイクルの全継続時間は
、約４時間である。次のことは明白である。

つまり、本方法は、特定のｐＨのもとで負に帯電する各
種生体分子（核酸、蛋白質、陰イオン性多糖類、陰イオ
ン性糖脂質）を精製、濃縮するために一般化することが
できる。このような一般化が可能であり、かっこのよう
なカラムが極めて多種の極性液体の通過に、支障なく耐
え得ることを示すために、以下のような応用実験を行っ
た。実施例 ８ 動物脳の水抽出物に由来するガングリオシドの濃縮及び
精製ガングリオシドは糠脂質であって、それが有する極
めて重要な生理的又は病理的役割については、実際のと
ころ、生化学者達が研究しており、細胞膜レベルにおい
て、受容体及び効果器としての役割果すものである。

ガングリオシドは、多かれ少なかれ、シアリン酸を含有
しており 従って、ＰＨが約３以下の場合には負の電荷
を有するものである。仔牛の脳策ｌｋ９から、約７その
水抽出物を得ることができる。

（この方法については、瓜ＶＥＮＮＥＲＨＯＬＭが書い
た次の刊行物に記述されている：１９７２手アカデミー
プレス、ニューヨーク発行、Ｒ，Ｌ，Ｗｈｉｓｔｅｒ
及びＪ，Ｎ，ＢＥＭＩＬＬＥＲ版、炭水化物化学におけ
る方法、第６巻中の″ガングリオシド、分離″。

）このようにして得た水抽出物を、担体５０夕をつめた
カラム上を直接通過させる。

この担体は、実施例３の方法によって製造したものであ
るが、ｐＨ６．８の０．０８ Ｍトリス−Ｈｃ〆緩衝液
で予じめ平衡にしておく。供給率は２００の【／仇／ｈ
とする。この条件下で、すべてのガングリオシドはカラ
ム上に付着してしまう。次に記載する溶液を記載した順
に使用することによって、予備洗液を行う：ｐＨ６．８
の０．０９のトリス一日ｃ夕０．１ＮのＮａＯＨ日２０ クロロホルムーメタノール−水（容積比で３０−６０−
２５）によれば、数多〈の不純物を除去することができ
る。

同様な供給量のクロロホルムーメタノール−０．１Ｎの
Ｈｃク混合物（容積比で３０−６０−２５）によって、
ガングリオシドを、濃縮し精製した形で熔雛する。

溶雛後直ちに、回収したピークに０．１ＮのＮａＯＨを
加えて中和し、蒸発させ、そして、分析するために、再
度適宜クロマトグラフィーシステムに掛ける。

収率は、１００％である。何ら有害な結果を生ずること
なく、このカラムでは、有機溶媒から水溶液に移行した
りその逆を行ったりすることができることが確認された
。このような処理は、必要がある場合、カラム内を無菌
状態に維持したり、又、特にこれを洗修するときに実施
することができる。実施例 ９ 抗破傷風抗体の精製及び濃縮を目的として、本発明に係
る物質を破傷風トキソィド損体として使用する例前応用
実施例からもわかるように、蛋白質の固定能が高いこと
によって、多孔質の無機担体力ラム上に破傷風トキソィ
ドを固定するのに、上記の性質を有利に利用することが
できる。

例えば１０夕のスフェロジル ＸＯＣ Ｏ０５（比表面
積、１０の／夕）を、実施例１に従ってＤＥＡＥデキス
トランで含浸させる。そして、ｐＨ６．８の０．０１Ｍ
フオスフェート緩衝液で平衡化せしめる。２５の‘の破
傷風トキソィド（生物力価として、約１５００Ｌｆ則ち
、架出量）を、上記緩衝液により２５０の‘稀釈し、そ
してこれを連続的にカラムに導入する。

通過開始時においては、破傷風トキソィドの固定が定量
的に行われ、溶出液が、約２００泌になるまでは、適宜
な免疫学的方法によって検査をしても、カラムの出口か
らは痕跡量のトキソィドも発見できなかった。破傷風ト
キソィドによる均一、且つ完全な被覆をまったく確かな
ものとするために、残りの５０の‘を導入する。次に、
カラムをクロマト用緩衝液で洗う。このようにして、充
分に広いＰＨ領域（ｐＨ２〜１２）において破傷風トキ
ソィドが溶出してこないように、これを網状架橋化して
、破傷風トキソィドを強固に固定することができるので
ある。この網状架橋処理は、ｐＨ６．８の０．０１Ｍホ
スフェート緩衝液にグルタールアルデヒドを溶かした０
．５％溶液１００地を、連続的に循環せしめてこれを実
施する。この場合、循環割合は約４０机（／ｃ虎／ｈで
あり、循環時間は２時間とし、この操作は室温で実施す
る。続いて、以下の緩衝液を記載した順に順次使用して
、カラムを洗縦する。

ＰＨ６．８の０．０１Ｍフオスフェート緩衝液ＰＨ８．
２の０．２Ｍグリココル緩衝液ＰＨ７．２の０．２Ｍグ
リココル緩衝液 （６０夕／そ ＮａＣそ添加又は無添加）ＰＨ２．８の
０．０８Ｍクエン酸塩緩衝液最後にｐＨ７．２の０．２
Ｍグリココル中で保存する。

このようにして調整されたカラムは、いつでも使用する
ことができて、同等な多数の精製サイクルを行うことが
できる。同一カラムを用いて数十回のサイクルを連続的
に実施したが、すべての性質がそのまま維持されていた
。このカラム１０夕を用いた精製サイクルの大要ｙ−グ
ロブリン、血清、又な血糠溶液を、次のような濃度に調
節しておき：グリココル １５夕／ク
ＮａＣ夕 ＰＨ７．２ そしてその抗破傷風抗体の活性値は５ＵＩ／机上にして
おく。

このような溶液１．５とを実験室温度で４０の上／仇／
ｈの割合でカラム内に導入する。適宜な免疫学的方法に
よって、抗破傷風抗体の５％以下を、カラム出口で発見
することができるが、これに反して、その他の蛋白質は
すべてカラムを通過してしまう。続いてカラムを、Ｎａ
ｃそを６Ｍ／そ含むｐＨ７．２５の０．２Ｍグリココル
緩衝液、次いでＮａｃＺを含まない同グリココル緩衝液
で洗液するのであるが、この洗縦処理は、カラムからの
溶出液がもはや２８０側の紫外線をはっきりと吸収しな
くなるまで続ける。

各緩衝液は、流量２００の‘／地／ｈで約１流ご間Ｊだ
け適用する。そして、トキソィドカラム上に固定された
抗破傷風抗体の溶離は、２０００で、０．０８ Ｍ，Ｐ
Ｈ２．８のクエン酸三ナトリウムークェン酸緩衝液を流
量４０の‘／地／ｈで適用して実施する。
Ｚカラムからの溶出液は、冷却受器内に集め、ただち
にＩＮソーダを連続的に加えて、ＰＨ記録メーターで鑑
視しながら該溶出液のｐＨを７に中和調節する。溶離ピ
ークが溶離してくるや（２８仇ｍの吸収でこれを読み取
る）、カラムを、最初に用いた２グリココル緩衝液で再
度平衡化し、そして直ちに、新しいサイクルを再開する
ことができる。このようにして、精製された抗破傷風抗
体溶液は古典的な方法（限外炉過、ポリエチレングリコ
−ル、アルコール、もしくは硫酸アンモニウムによ２る
沈澱処理）によって濃縮することができる。このように
して精製処理された抗破傷風抗体溶液の平均活性は、蛋
白質１雌当り３０〜１００Ｕ，１である。抗破傷風抗体
の収率は、２０〜１００％の範囲内である。実施例９に
記載した方法を厳密に実施すれば、本明細書において既
に述べたような各種の抗原又は、抗体を固定することが
できる。

等霞点がｐＨ６よりも高い抗原のうちのあるものについ
ては、カラム上での固定段階において、０．０１Ｍフオ
スフェート緩衝液のｐＨを、６．８とする代りに８にす
るのが望ましい。

また、これと同じＰＨ８で、０．０１〜０．０９Ｍの塩
化ナトリウムを用いて、リン酸イオンの代りに塩素イオ
ンを使用するのも好ましいことである。同じく、一つの
解決法としては、本発明に係る第四級交換体をｐＨ８に
おいて、高度にイオン化して用いる方法があろう。これ
は、特にＢ−２，ｙ−１、又はｙ−２タイプの抗体活性
を有する蛋白質の場合に使用すると良い方法である。こ
れらの蛋白質は、「通常の動物（山羊、羊、兎、馬、モ
ルモット等・・・・・・）又は人間に由来するものであ
る。実施例 １０ 実施例１，２又は３のいずれかに従って、１Ｍのスフエ
ロジル ＸＯＢＯ１５をＤＥＡＥデキストランで含浸処
理し、これに０．１％のブタンージオールージグリシジ
ルェーテル溶液３０机‘を加え、続いて、８０００で３
０分間溶媒を蒸発させ、そして最後にｐＨｉｌ．５の水
にリジンを溶かした溶液（１％溶液を３０の‘）を加え
る。

そこで、この全体を８０００に１印時間保持する。この
ようにして得た物質をカラムに詰め、ＰＨ６．８，０．
０９Ｍのクエン酸緩衝液で洗族する。対照担体（結合剤
を有せず）に〈らべて、ＤＥＡＥデキストラン舎浸担体
上に、リジンが、高率ではっきりと結合していることを
確認することは、容易なことである。（このような評価
については、ニンヒドリンによる着色反応が有用である
。）リジンで被覆した該物質から成るカラムを使用する
ことによって、卓越した条件のもとで、リジンに対して
強い親和力を有する血液蛋白質、プラスミン、またはプ
ラスミノーゲンを、精製したり、除去したりすることが
できる。

以下、本発明において使用する多孔性無機担体が、その
細孔径範囲において臨界的であることを示すために以下
の如き参考実験を行った。

参考実験 実施例１に従って、孔蓬約１８〜２仇ｍ（商品名スフエ
ロジル ＸＯＢ２００として市販されている）および孔
径約２５〜３仇ｍ（商品名 ＸＯＢ０７５として市販さ
れている）の２種の多孔性無機担体を使用してイオン交
換クロマトグラフ用担体を製造した。

タＡ ２０夕のスフェロジル ＸＯＢ２００を直接クロ
マトグラフ用カラムに乾燥均一粉末の形で装入した。

次いで、０．１ＮＨＣＩ溶液 ２皿ｈｌを、流量５００
ｈｌ／時でゼン動ポンプを用いてカラムに導入して、カ
ラムを洗浄かつ含浸し、しかもすべ０ ての気泡を排除
した。上方に溶出させることが望ましい。カラムがｐＨ
の測定により調節される平衡となるまで、かつカラムを
流出するバッファーの固有抵抗が達成されるまで、ＰＨ
６．８の０．０１モルリン酸塩バッファーをカラムに導
入する。次いで、前記ｐ則こ調節され、１％のＤＥＡＥ
デキストランを含む前記バッファー１００の夕を１０血
１／時の流量で導入する。最後に力ラム上に固定されて
いない過剰のＤＥＡＥデキストランを、まず前記バッフ
ァーにより、次いで１０夕／そのＮａＣＩ溶液で熔出す
る。最終的な港出液中にＤＥＡＥデキストランが存在し
ないことは酢酸セルロース中での露気泳動、板状培地の
深紅色発色、またはポリアクリル酸の存在下における沈
澱により決定される。

Ｂ 前記Ａの手続きに従って、同量のスフェロジル Ｘ
ＯＢ０７５を使用してイオン交換クロマトグラフ用担体
を製造した。Ｃ このようにして製造した２種のカラム
を前記の０．０１モルリン酸バッファー（ｐＨ６．８）
で再度平衡化し、次に２％のアルブミンを含有する前記
バッファーを、前記２つのカラムに飽和するまで注入し
た。

更に、これらカラムをクロマト用バッファーでカラム出
口における全アルブミンが除去されるまで洗修した。

次に、各カラム上に可逆的に固定されたアルブミンを１
０夕／夕濃度のＮａＣＩの生理塩溶液で熔出した。

所定の工程の終了後、カラムから回収されたアルブミン
の量を公知法に従って決定し、以下の結果を得た。

多孔性無機担体 回収された固定化ァルブミンの量（ァ
ルブミンの９／タ担体） ＸＯＢ ２００ （平均孔径１８〜２仇ｍ） く５の９／夕×Ｏ
Ｂ ０７５（平均孔雀２５〜３仇ｍ） ≧２０
の９／タこの結果から、生物学的巨大分子（本例ではア
ルブミン）の優れた可逆的固定を達成する上で担体孔雀
が型めて重要な因子であることがわかる。

また、約２５ｎｍよりも大きな孔径を有する担体のみが
かなり多くの量の巨大分子を固定することができ、孔雀
がより小さい場合、即ち「約１８〜２仇ｍの範囲では多
量の巨大分子を可逆的に固定し得ないことがわかる。事
実、ＸＯＢ０７５多孔性無機担体により回収されるアル
ブミンの量は多孔性無機坦体ＸＯＢ ２００によって回
収される量の４倍以上である。このような結果から、本
発明の意図する目的に対して、担体の孔径は２仇ｍ〜３
仇ｍの間に臨界値を有し、本明細書においてはこれを約
２５ｎｍとした。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 陽イオン性で、かつ上部に生体高分子並びに低分子
   量物質を可逆的もしくは不可逆的に固定することのでき
   る物質であって、平均孔径が２５ｍμ以上であり、生体
   高分子並びに低分子量物質を可逆的もしくは不可逆的に
   固定することを可能とするのに十分な量のアミノ化高分
   子ポリサツカライドで表面を直接被覆した粉末形状の多
   孔性無機担体から本質的になる、上記物質。 ２ 該多孔質無機担体がシリカ、アルミナ、マグネシア
   、酸化チタンもしくはこれらの合成または天然誘導体で
   あることを特徴とする、特許請求の範囲第１項記載の物
   質。 ３ 該多孔質無機担体の内部表面が１００ｍ＾２／ｇ以
   下、好ましくは５〜８０ｍ＾２／ｇなる範囲内、である
   ことを特徴とする、特許請求の範囲第１または第２項記
   載の物質。 ４ 該担体の孔径が５０〜１０００ｎｍなる範囲内であ
   ることを特徴とする、特許請求の範囲第１〜３項のいず
   れかに記載の物質。 ５ 該多孔質無機担体が１０，２５または５０ｍ＾２／
   ｇなる内部表面積を有する多孔質シリカであることを特
   徴とする、特許請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載
   の物質。 ６ 該アミノ化高分子ポリサツカライドが水溶性であり
   、かつ１０＾４ダルトン以上、好ましくは１０＾５〜１
   ０＾６ダルトンなる範囲内の分子量を有することを特徴
   とする、特許請求の範囲第１項記載の物質。 ７ 該高分子ポリサツカライドのアミノ基が１級、２級
   、３級または４級、好ましくは２級、３級または４級で
   あることを特徴とする、特許請求の範囲第１または６項
   記載の物質。 ８ 該アミノ化高分子ポリサツカライドがデキストラン
   、セルロース、アガロースまたは殿粉の合成または天然
   アミノ化誘導体である、特許請求の範囲第１，６または
   ７項記載の物質。 ９ 該アミノ化高分子ポリサツカライドが、好ましくは
   一般式；▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、Ｒはデキストラン、殿粉、セルロースまた
   はアガロースの残基であり、ｎは１〜１０、好ましくは
   ２〜５なる範囲の整数であに、Ｒ＿１およびＲ＿２は同
   一または異なっており、−ＣＨ＿３，−ＣＨ＿２−ＣＨ
   ＿３，−ＣＨ＿２ＯＨ，−ＣＨ＿２−ＣＨ＿２ＯＨまた
   は−ＣＨ＿２−ＣＨＯＨ−ＣＨ＿３を表す）を有し、該
   化合物をハロゲン化アルキルもしくはヒドロキシアルキ
   ルまたはジメチル硫酸などの４級化剤により４級化する
   ことができることを特徴とする、特許請求の範囲第１、
   および６〜８項のいずれかに記載の物質。 １０ 該アミノ化高分子ポリサツカライド誘導体がジエ
   チルアミノエチルデキストラン、４級化ジエチルアミノ
   エチルデキストラン、ジエチルアミノエチル殿粉である
   、特許請求の範囲第９項記載の物質。 １１ 該アミノ化高分子ポリサツカライドが１．４−ブ
   タンジオールジグリシジルエーテル、エピクロルヒドリ
   ン、エピブロモヒドリンまたは一般式；▲数式、化学式
   、表等があります▼ （ただし、Ｒ＿１は炭素原子数１〜２０のアルキル基
   、好ましくは炭素原子数１〜４の低級アルキル基であり
   、Ｒ＿２およびＲ＿３は炭素原子数１〜１０の炭化水素
   鎖、好ましくは低級アルキレン基である）を有するジエ
   ポキシドなどの架橋剤により架橋されている、特許請求
   の範囲第１〜１０項のいずれかに記載の物質。